Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-08-30T20:27:31Z No. of bitstreams: 1 Taise Lima de Oliveira Caracterização clínica e molecular de pacientes com hipertireodismo....pdf: 583769 bytes, checksum: 1d1d8e16ece954c3ead88d0648b4eeea (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-30T20:27:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taise Lima de Oliveira Caracterização clínica e molecular de pacientes com hipertireodismo....pdf: 583769 bytes, checksum: 1d1d8e16ece954c3ead88d0648b4eeea (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O hipotireoidismo congênito (HC) é uma das doenças metabólicas mais comuns na infância, com incidência de HC é de 1:3.000 a 1:5.000 nascidos-vivos. Quando primário, o HC caracteriza-se por altos níveis de TSH podendo ser originado por disormonogênese, deficiente produção hormonal ou decorre de disgenesia tireoidiana, defeito embriológico que leva a agenesia, hemiagenesia ou ectopia. Na ausência do tratamento hormonal, o HC leva a grave retardo mental, além de outras alterações clínicas. A interação do hormônio TSH com o seu receptor (TSHR) tem importante função biológica estimulando o crescimento, diferenciação e função tireoidiana. Mutações no gene do TSHR têm sido identificadas como causa de HC hereditário ou congênito, mas parecem ser raras. Objetivos: 1) Obter genealogia das famílias afetadas para determinação do padrão de herança, identificação de afetados e possíveis portadores; 2) Descrever as características clínica-demográficas dos pacientes com HC; 3) Determinar a distribuição mutacional no gene do receptor do hormônio estimulante da tireoide (TSHR) nos afetados; 4) Sugerir ações de saúde pública e de otimização do aconselhamento genético. Material e Métodos: Foram estudados 12 pacientes provenientes de Monte Santo-BA, sendo oito diagnosticados pela triagem neonatal e quatro diagnosticados tardiamente durante expedição à cidade. Estes últimos foram identificados durante a coleta dos dados genealógicos das famílias dos afetados. Todos foram investigados para mutações no gene do TSHR. Toda a região codificadora do gene foi amplificada através do DNA genômico, seguido de SSCP e sequenciamento. Resultados: À época da primeira avaliação, os pacientes apresentaram níveis elevados de TSH, confirmando o caráter primário da doença, associados a sinais e sintomas do HC. Observou-se grande heterogeneidade clínica entre os pacientes mesmo aqueles com grau de parentesco muito próximo. Nenhuma mutação patogênica foi encontrada no gene TSHR. Conclusão: a análise das genealogias permitiu observar a heterogeneidade clínica e genética da doença. Não foi encontrada nenhuma mutação no gene TSHR. O estudo de outros genes poderá ajudar no esclarecimento do HC na região. / Congenital hypothyroidism (CH) is one of the most common metabolic disease in childhood, with an incidence of HC is 1:3,000 to 1:5,000 live births. When primary, CH is characterized by high levels of TSH and may be caused by dyshormonogenesis deficient hormone production, or due to thyroid dysgenesis, embryological defect that leads to agenesis, ectopic or hypoplastic. In the absence of hormonal treatment leads to the CH severe mental retardation and other clinical manifestations. The interaction of stimulanting thyroid growth, differentiation and function. Mutations in the TSHR gene have been identified as a cause of hereditary or congenital CH, but appear to be rare. Objectives: 1) Get genealogy of the affected families to detemine the pattern of inheritance, and possible identification of affected patients; 2) Describe the clinical and demographic characteristics of patients witc CH; 3) Determine the mutational distribution in the TSHR gene in the affected individuals; 4) Suggest public health actions and for genetic counseling optimization. Methods: We studied 12 patients from Monte Santo-Bahia, eight were diagnosed by newborn screening and four diagnosed late during an expedition to the city. The latter were identified during the collection of genealogical data of families those affected. All were investigated for mutations in the TSHR. The entire coding region of the gene was amplified using genomic DNA followed by SSCP and sequencing. Results: At first evaluation, all patients had elevated TSH levels, confirming the primary nature of the disease, associated with signs and/or symptoms of CH. As there was a familial recurrence of the disease, we noticed a large clinical heterogeneity among patients, even those with close family relationship. No pathogenic mutation was found in the TSHR gene. Conclusion: The analysis of pedigrees allowed to observe the clinical and genetic heterogeneity of the disease. We not found mutation in the TSHR. The study of other genes may help in clarifying the CH i the region.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-07-13T11:47:34Z No. of bitstreams: 1 Taíse Lima de Oliveira Cerqueira Estudo... 2016.pdf: 4519247 bytes, checksum: 571b6a53cf6e9f3fb58c96cdf62cacb8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-07-13T11:55:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Taíse Lima de Oliveira Cerqueira Estudo... 2016.pdf: 4519247 bytes, checksum: 571b6a53cf6e9f3fb58c96cdf62cacb8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T11:55:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Taíse Lima de Oliveira Cerqueira Estudo... 2016.pdf: 4519247 bytes, checksum: 571b6a53cf6e9f3fb58c96cdf62cacb8 (MD5) Previous issue date: 2016 / CNPq / FAPESB / Fundação Gonçalo Moniz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: Hipotireoidismo Congênito (HC), é uma das doenças metabólicas mais comuns na infância com incidência de 1:3.000 a 1:4.000 recém-nascidos. Um grupo de doenças relacionadas às alterações no desenvolvimento da tireoide, denominadas disgenesias tireoidianas (DT), responsabiliza-se por aproximadamente 85% de todos os casos de HC, sendo sua patogênese pouco conhecida. OBJETIVOS: Geral: Caracterização clínica e genética de pacientes com HC diagnosticados com disgenesia tireoidiana. Específicos: 1. Caracterizar clínica dos indivíduos com HC em acompanhamento na APAE/Salvador (Associação de Pais e Amigos dos Excepcionais); 2. Avaliar a existência de associação entre malformações tireoidianas e malformações cardiacos; 3. Pesquisar polimorfismos e mutações nos genes candidatos: PAX8, TSH-R, NKX2.5 e HES1, em pacientes diagnosticados com disgenesia tireoidiana; 4. Pesquisar o gene TSH-R numa coorte de pacientes com HC diagnosticados no programa de triagem neonatal da França. METODOLOGIA: Até o ano de 2016, 1.188 crianças foram diagnosticadas com HC e 773 estão em acompanhamento. Duzentos e dezoito crianças confirmadas com HC foram caracterizadas clinicamente através de testes de função da tireoide (TT4 e TSH), ultrassonografia e cintilografia, seguidas de dosagem de tireoglobulina. Toda a região codificantes dos genes PAX8, TSH-R, NKX2.5 e HES1 incluindo íntrons e éxons foram amplificados a partir do DNA genômico através da PCR (Reação em cadeia da Polimerase) utilizando-se técnicas padrão seguida de Sequenciamento direto. RESULTADOS: Sessenta e três pacientes foram diagnosticados com DT e 155 com glândula tópica normal. Hipoplasia representou 33,4% dos casos de DT, agenesia 19%, ectopia 27% e hemiagenesia 20,6%. Altos concentrações de TSH no teste do pezinho foram detectados no grupo das agenesias seguido das hipoplasias. Na análise genética/molecular, 31 (49,2%) dos pacientes foram identificados com o polimorfismo p.D727E em heterozigose e 4 (6,4%) em homozigose, no gene TSH-R; 4/63 pacientes tiveram o polimorfismo p.P52T em heterozigose; 14/63 apresentaram a variante polimórfica p.N181N e 2/63 apresentaram a substituição sinônima conhecida p.L645L, todos no gene TSH-R. o polimorfismo p.Glu21 foi encontrado em 54% dos pacientes e p.Gln181 encontrado em 1 paciente no gene NKX2.5. Nenhuma alteração foi encontrada no gene HES1, bem como em PAX8. CONCLUSÕES: Este é o primeiro estudo realizado na população de HC no Estado da Bahia. Análises clínicas revelaram um padrão distinto entre os subgrupos da DT quando comparados com glândula normal; 6 polimorfismos já descritos foram encontrados em dois genes candidatos. Nenhuma mutação patogênica foi encontrada. A descrição fenotípica é essencial para a correta avaliação genética e os mecanismos nela implicados, além de utilizados para predição da gravidade do HC. A identificação de novos genes ou eventos moleculares que controlam a função tireoidiana pós-natal seria de grande utilidade no esclarecimento das DT. Palavras-chave: / INTRODUCTION: Congenital hypothyroidism (CH), is the most common metabolic diseases in childhood with incidence of 1: 3000-1: 4000 newborns. A group of diseases related to alterations in the development of the thyroid, called thyroid dysgenesis (TD), is responsible for approximated 85% of all HC cases, and the majority has unknown pathogenesis. OBJECTIVES: General: clinical and genetic characterization of CH patients diagnosed with TD. Specific: 1. CH clinical characterization in individuals followed at APAE/Salvador; 2. evaluating the association between thyroid abnormalities and other abnormalities or syndromes; 3. search polymorphisms and mutations in known candidate genes for TD: PAX8, TSH-R, NKX2.5 and HES1; 4. XX METHODS: Until the year 2016, 1.188 children were diagnosed for CH and 773 were actually follow in APAE-Salvador. A continuous series of 218 children with confirmed HC were characterized clinically through thyroid function tests (TT4 and TSH), thyroid ultrasound and scintigraphy, followed by serum thyroglobulin measurement. The entire coding region of the candidate genes (PAX8, TSH-R, NKX2.5 and HES1), including exon/intron boundaries, was amplified from genomic DNA by polymerase chain reaction (PCR) using standard techniques, followed by direct sequencing. Results: Sixty-three patients were diagnosed with DT and 155 with in situ thyroid gland (ISTG). Hypoplasia represented 33,4% of all cases of DT, agenesis (19%), ectopy (27%) and hemiagenesis (20,6%). The higher screening TSH levels was in the agenetic group followed by hypoplasia. In the genetic/molecular analysis, 31 (49,2%) patients were identified with a polymorphism of TSH-R gene (p.D727E); 4/63 patients had a heterozygous p.P52T; 14/63 patients showed p.N187N polymorphic variants of the gene; and 2/63 patients presented a known p.L645L synonimous substitution. The polymorphism p.Glu21was found in 54% of patients, and p.Gln181 found in only one patient in the NKX2.5 gene. None alteration was detected in HES1 gene. CONCLUSIONS: This is the first CH population-based study in State of Bahia, Brazil. Clinical analysis revealed distinct hormonal patterns in DT subgroup when compared with ISTG, with only 6 known polymorphisms identified in few cases of TD in TSH-R, PAX8, NKX2.5 and HES1 genes. No mutation was found in a candidate genes studied. A detailed description of phenotype might be essential to target the correct genetic and mechanism implicated, and useful to predict CH severity. The identification of additional genes or molecular events controlling early postnatal thyroid function would be helpful.

Introdução: Os inibidores tirosino-quinase (ITQs) constituem uma nova terapia molecular para o carcinoma medular da tireoide (CMT). O vandetanibe, um ITQ que atua contra os receptores VEGFR, EGFR e RET, inibe a transformação e o crescimento do tumor no CMT. No entanto, os ITQs têm importantes efeitos adversos, incluindo o hipotireoidismo. O aumento da expressão da iodotironina desiodase do tipo 3 (D3/DIO3), uma enzima chave na inativação dos hormônios da tireoide, pode ser um possível mecanismo de indução do hipotireoidismo por estas drogas. Objetivo: Investigar os efeitos dos inibidores tirosino-quinase na expressão da D3 em células derivadas do CMT. Métodos: Estudo experimental in vitro, utilizando linhagem de células humanas oriundas de CMT (células TT). As células foram cultivadas em meio específico e tratadas com diferentes doses do ITQ vandetanibe (0,25; 0,5 e 1μM) ou com DMSO. A proliferação celular foi determinada por contagem em câmara de Neubauer. A expressão do mRNA foi avaliada por meio de PCR em tempo real, a expressão proteica por meio de Western Blot e a atividade da D3 foi avaliada por meio da técnica de cromatografia em colunas de Sephadex LH-20. Resultados: A adição do vandetanibe ao meio de cultura causou diminuição do número de células e seu efeito foi tempo e dose dependente, apresentando uma redução máxima (77%) após 6 dias de tratamento na dose de 1μM. Como esperado, o tratamento com vandetanibe inibiu a fosforilação do ERK. Não foram observadas alterações significativas dos níveis de mRNA da DIO3 após 3 (0,02 vs. 0,02 vs. 0,01 vs. 0,01; P = 0,34) ou 6 dias (0,02 vs. 0,02 vs. 0,03 vs. 0,02; P = 0,33) de tratamento. Consequentemente, a expressão proteica da D3 não aumentou nos grupos tratados. No entanto, observou-se um aumento de 2 a 5 vezes na atividade da D3 após 3 dias de tratamento e um aumento de 1,5 a 2,15 vezes em 6 dias de tratamento. Conclusões: O tratamento com vandetanibe não foi associado com níveis aumentados de expressão do mRNA e da proteína da D3 em células derivadas de CMT, embora tenha sido observado um aumento na sua atividade enzimática. / Background: Tyrosine kinase inhibitors (TKIs) constitute a novel molecular therapy for medullary thyroid carcinoma (MTC). Vandetanib, a TKI that acts against the VEGFR, EGFR and RET receptors, inhibits tumor transformation and growth in MTC. However, TKIs have important adverse effects, including hypothyroidism. Increases in the expression of type 3 iodothyronine deiodinase (D3/DIO3), a key enzyme in the inactivation of thyroid hormones, may be a possible mechanism of induction of hypothyroidism by these drugs. Objective: To investigate the effects of vandetanib on D3 expression in MTC-derived cells. Methods: In vitro experimental study using human MTC cell line (TT cells). Cells were cultured in specific medium and treated with different doses of vandetanib (0.25, 0.5 and 1μM) or DMSO. Cell proliferation was determined by counting in Neubauer's chamber. Expression of mRNA was evaluated by real-time PCR, protein expression by Western Blot and D3 activity was evaluated by Sephadex LH-20 column chromatography. Results: The addition of vandetanib to the culture medium caused a time and dose-dependent decrease in the number of cells, with a maximum reduction (77%) after 6 days of treatment at 1μM dose. As expected, vandetanib treatment inhibited ERK phosphorylation. No significant changes in DIO3 mRNA levels were observed after 3 (0.02 vs. 0.02 vs. 0.01 vs. 0.01; P = 0.34) or 6 days (0.02 vs. 0.02 vs. 0.03 vs. 0.02; P = 0.33) of treatment. Accordingly, D3 protein expression did not increase in treated groups. However, we observed a 2 to 5-fold increase in D3 activity after 3 days of treatment and a 1.5 to 2.15-fold increase in 6 days of treatment. Conclusions: Treatment with vandetanib was not associated with increased DIO3 mRNA and D3 protein expression levels in MTC-derived cells, although an increase in enzyme activity has been observed.

A normal pregnancy is associated with anatomical and physiological adjustments that cause marked changes in the mother, including the composition of humoral and formed elements of the blood circulating. Probably at no other stage of the life cycle exists biggest change in the functioning of the human body and form in such a short space of time. Thus, the objective of this study was to evaluate the prevalence of anemia and hypothyroidism in pregnant women who attended antenatal care at the hospital of Santa Maria University (HUSM) in the period from July to December 2011. Were performed by the Laboratory of Clinical Analyses of HUSM, the TSH and T4L serum of pregnant women, along with analysis of test results of blood count blood. The results of hematological parameters revealed that the rate of hemoglobin, among 124 pregnant women evaluated, was altered in 16.2%. Another variable was significant hematologic evaluation of the Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC), which showed changes in 16.4% of 122 pregnant women tested. Hematocrit a total of 61 patients, we observed that 34.4% of them were changed. These results, when assessed on a whole, showed a strong correlation with the presence of anemia. As to possible malfunctions thyroid gland, TSH levels ranged between 0.6 and 1.13 ng / dL, while the fluctuations of FT4 were 0.377 to 6.36 mIU / L. When framed in the classification of clinical hypothyroidism (declared) and subclinical analysis revealed 4 cases of subclinical hypothyroidism, with a prevalence of about 3%, and no cases of clinical hypothyroidism in 116 pregnant women analyzed. The age of the patients ranged from 16 to 44 years and gestational age between 7-38 weeks. Based on finding of a 4% prevalence of elevated TSH during pregnancy, the authors consider important the inclusion of thyroid function laboratory evaluation in the routine prenatal examination. Further studies appear necessary to establish at what gestational age thyroid function evaluation should be started in pregnant women and how frequently it should be repeated during the course of gestation. / A gestação normal está associada a ajustes fisiológicos e anatômicos que acarretam acentuadas mudanças no organismo materno, incluindo a composição dos elementos figurados e humorais do sangue circulante. Provavelmente, em nenhuma outra fase do ciclo vital exista maior mudança no funcionamento e forma do corpo humano em tão curto espaço de tempo. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a prevalência de anemia e hipotireoidismo em gestantes atendidas no pré-natal do hospital Universitário de santa Maria - RS (HUSM), no período de julho a dezembro de 2011. Foram realizadas, pelo Laboratório de Análises Clínicas do HUSM, as dosagens de TSH e T4L no soro das gestantes, juntamente com análise de resultados de exames de hemograma sanguíneos. Os resultados dos parâmetros hematológicos revelaram que o índice de hemoglobina, dentre 124 gestantes avaliadas, estava alterado em 16,2%. Outra variável hematológica significativa foi na avaliação da Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média (CHCM), que revelou alteração em 16,4%, das 122 gestantes analisadas. No hematócrito de um total de 61 gestantes, observou-se que 34,4% delas encontravam-se alteradas. Esses resultados, quando avaliados em um todo, mostraram forte correlação com a presença de anemia. Quanto às possíveis disfunções glandulares tireoidianas, os níveis de TSH variaram entre 0,6 e 1,13 ng/dL, enquanto que as flutuações de T4L foram de 0,377 a 6,36 mUI/L. Quando enquadradas na classificação de hipotireoidismo clínico (declarado) e subclínico, foram observados 4 casos de hipotireoidismo subclínico, com prevalência em torno de 3%, e nenhum caso de hipotireoidismo clínico em 116 gestantes analisadas. A idade das gestantes variou entre 16 a 44 anos e o tempo gestacional entre 7 a 38 semanas. Com base nos resultados obtidos, considera-se de grande importância o contínuo monitoramento da presença de anemia em gestantes e torna-se cada vez mais imprescindível a inclusão da avaliação tireoidiana na rotina no exame pré-natal. Estudos ulteriores se fazem necessários para estabelecer em que momento a avaliação tireoidiana de mulheres grávidas deve ser iniciada e com que frequência deve ser repetida durante o curso da gestação.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Hypothyroidism is a pathology that can cause manifestations in several systems and tissues, including, changes in markers of endothelial functions, contribute to increase in incidence of cardiovascular disease. Furthermore, hypothyroidism has relation with the formation of reactive oxygen species (ROS), which has the ability to generate damage to the body. The extracellular adenine nucleotides ATP, ADP and the nucleoside adenosine regulating many physiological processes in the vascular system, including platelet aggregation, vascular tone and cardiac function. The flavonoids compounds such as quercetin exert multiple functions therapeutic highlighting its antioxidant, antiplatelet and anti-inflammatory capacity. In this context, the objective of this study was to investigate the effect of quercetin on the activity of enzymes that hydrolyze adenine nucleotides and nucleosides, on platelet aggregation and oxidative profile in platelet of adult male rats with hypothyroidism induced by methimazole 0.02 mg/mL. The animals received only methimazole 0.02 mg/ml for 30 days, and then began to receive also quercetin 10 and 25mg/kg for 60 days. The results showed that the activity of NTPDase with ATP as substrate was increased in hypothyroid group and treatment with quercetin 25mg/kg reversed this increase. No significant changes were observed in the hydrolysis of ADP. The activity of 5'-nucleotidase was reduced in the group of animals with hypothyroidism. No difference was observed in ADA activity in the group with hypothyroidism, but treatment with quercetin 25 mg/kg significantly reduced its activity. The results also indicated an increase in platelet aggregation in the hypothyroid group. The administration of quercetin 25 mg/kg reversed this increase. Furthermore, there was an increase in the levels of lipid peroxidation in hypothyroid rats and the treatment with quercetin reversed the increase. The activity of catalase (CAT) was decreased in rats with hypothyroidism, but treatment with quercetin reversed this decrease. These results suggested that quercetin is able of modulate the activity of ectoenzymes and decrease platelet aggregation in rats with hypothyroidism, which can contribute to the prevention of platelet changes, and consequently, vascular complications as well as providing protection against oxidative stress presented in hypothyroid state. / O hipotireoidismo é uma patologia que pode causar manifestações em diversos sistemas e tecidos, entre eles, alterações nos marcadores de funções endoteliais, contribuindo para uma maior incidência de doenças cardiovasculares. Além disso, o hipotireoidismo tem relação com a formação de espécies reativas de oxigênio (EROs), as quais tem a capacidade de gerar danos ao organismo. Os nucleotídeos extracelulares ATP, ADP e o nucleosídeo adenosina regulam processos fisiológicos no sistema vascular, entre eles, a agregação plaquetária, o tônus vascular e as funções cardíacas. Os compostos flavonoides como a quercetina exercem várias funções terapêuticas destacando-se a sua capacidade antioxidante, antiagregante e anti-inflamatória. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi verificar o efeito da quercetina na atividade das enzimas que hidrolisam nucleotídeos e nucleosídeos de adenina, na agregação plaquetária e no perfil oxidativo em plaquetas de ratos machos adultos com hipotireoidismo induzido por metimazol 0,02mg/mL. Os animais receberam somente metimazol 0,02 mg/mL durante 30 dias e em seguida passaram a receber também quercetina 10 e 25 mg/kg durante 60 dias. Os resultados obtidos demonstraram que a atividade da NTPDase com ATP como substrato foi aumentada no grupo hipotireoideo e o tratamento com quercetina 25 mg/kg reverteu esse aumento. Não foram observadas alterações significativas na hidrólise do ADP. Já a atividade da 5'-nucleotidase foi reduzida no grupo de animais com hipotireoidismo. Não foram observadas diferenças na atividade ADA no grupo com hipotireoidismo, mas o tratamento com quercetina 25 mg/kg reduziu significativamente sua atividade. Os resultados obtidos indicaram também um aumento na agregação plaquetária no grupo hipotireóideo. A administração de quercetina 25 mg/kg reverteu esse aumento. Além disso, houve um aumento nos níveis de peroxidação lipídica em ratos hipotireóideos e o tratamento com quercetina reverteu este aumento. A atividade da catalase (CAT) encontrou-se diminuída nos animais com hipotireoidismo, mas o tratamento com quercetina reverteu esse decréscimo. Estes resultados sugerem que a quercetina é capaz de modular a atividade das ectoenzimas e diminuir a agregação plaquetária em ratos com hipotireoidismo, o que pode contribuir para a prevenção de alterações plaquetárias, e consequentemente complicações vasculares, bem como proporcionar proteção contra o estresse oxidativo apresentado no estado hipotireoideo.

Several studies have associated subclinical hypothyroidism with risk factors for atherosclerotic disease, but its correlation with a decreased tolerance to the physical effort has been little studied. In this context, the hormonal replacement with L-thyroxine for the treatment of these patients remains controversial. The present study aimed to analyze the effect of sodium L-thyroxine on the tolerance to the physical effort and the lipidic profile of patients with subclinical hypothyroidism. Seven female volunteers aged between 40 and 60 years, without clinical signs of hypothyroidism and with TSH > 4.4 mU/dL, total T3 and free T4 in the plasma were selected. The plasmatic lipidic profile was evaluated before and after treatment of all patients. For the evaluation of tolerance to the physical effort, all patients were submitted to a progressive effort test. Levels of blood lactate before and after treatment were analyzed as parameters of effort. There was a significant improvement in tolerance to the lactate and consequently, in tolerance to the effort after treatment with thyroxine. The results demonstrated a significant decrease of LDL-c and triglycerides after the normalization of TSH levels with the hormonal replacement. Significant differences were not observed in the levels of HDL, VLDL and total cholesterol. / Vários estudos associam o hipotireoidismo subclínico a fatores de risco para doença aterosclerótica, mas poucos correlacionam este distúrbio à diminuição da tolerância ao esforço físico. Neste contexto, a reposição hormonal com o emprego da L-tiroxina no tratamento destes pacientes permanece controvertida. O presente estudo teve como objetivo analisar o efeito da Ltiroxina sódica na tolerância ao esforço físico e no perfil lipídico de pacientes com hipotireoidismo subclínico. Foram selecionados sete voluntárias, com idade entre 40 e 60 anos, TSH acima de 4,4mU/dl, T3 total e T4 livre no plasma, sem sinais clínicos de hipotireoidismo. Avaliou-se o perfil lipídico plasmático no pré e pós tratamento de todas as pacientes. Para avaliação da tolerância ao esforço, todas as pacientes foram submetidas a um teste de esforço progressivo. Como parâmetro de esforço foram analisados os níveis de lactato sangüíneo no pré e no pós tratamento. Houve melhora significativa na tolerância ao lactato e consequentemente, na tolerância ao esforço após tratamento com tiroxina. Os resultados demonstraram diminuição significativa do LDL-c e dos triglicérides após normalização dos níveis de TSH com a reposição hormonal. Não foi observada diferença significativa nos níveis de HDL, VLDL e colesterol total. / Mestre em Ciências da Saúde

Introdução: Os inibidores tirosino-quinase (ITQs) constituem uma nova terapia molecular para o carcinoma medular da tireoide (CMT). O vandetanibe, um ITQ que atua contra os receptores VEGFR, EGFR e RET, inibe a transformação e o crescimento do tumor no CMT. No entanto, os ITQs têm importantes efeitos adversos, incluindo o hipotireoidismo. O aumento da expressão da iodotironina desiodase do tipo 3 (D3/DIO3), uma enzima chave na inativação dos hormônios da tireoide, pode ser um possível mecanismo de indução do hipotireoidismo por estas drogas. Objetivo: Investigar os efeitos dos inibidores tirosino-quinase na expressão da D3 em células derivadas do CMT. Métodos: Estudo experimental in vitro, utilizando linhagem de células humanas oriundas de CMT (células TT). As células foram cultivadas em meio específico e tratadas com diferentes doses do ITQ vandetanibe (0,25; 0,5 e 1μM) ou com DMSO. A proliferação celular foi determinada por contagem em câmara de Neubauer. A expressão do mRNA foi avaliada por meio de PCR em tempo real, a expressão proteica por meio de Western Blot e a atividade da D3 foi avaliada por meio da técnica de cromatografia em colunas de Sephadex LH-20. Resultados: A adição do vandetanibe ao meio de cultura causou diminuição do número de células e seu efeito foi tempo e dose dependente, apresentando uma redução máxima (77%) após 6 dias de tratamento na dose de 1μM. Como esperado, o tratamento com vandetanibe inibiu a fosforilação do ERK. Não foram observadas alterações significativas dos níveis de mRNA da DIO3 após 3 (0,02 vs. 0,02 vs. 0,01 vs. 0,01; P = 0,34) ou 6 dias (0,02 vs. 0,02 vs. 0,03 vs. 0,02; P = 0,33) de tratamento. Consequentemente, a expressão proteica da D3 não aumentou nos grupos tratados. No entanto, observou-se um aumento de 2 a 5 vezes na atividade da D3 após 3 dias de tratamento e um aumento de 1,5 a 2,15 vezes em 6 dias de tratamento. Conclusões: O tratamento com vandetanibe não foi associado com níveis aumentados de expressão do mRNA e da proteína da D3 em células derivadas de CMT, embora tenha sido observado um aumento na sua atividade enzimática. / Background: Tyrosine kinase inhibitors (TKIs) constitute a novel molecular therapy for medullary thyroid carcinoma (MTC). Vandetanib, a TKI that acts against the VEGFR, EGFR and RET receptors, inhibits tumor transformation and growth in MTC. However, TKIs have important adverse effects, including hypothyroidism. Increases in the expression of type 3 iodothyronine deiodinase (D3/DIO3), a key enzyme in the inactivation of thyroid hormones, may be a possible mechanism of induction of hypothyroidism by these drugs. Objective: To investigate the effects of vandetanib on D3 expression in MTC-derived cells. Methods: In vitro experimental study using human MTC cell line (TT cells). Cells were cultured in specific medium and treated with different doses of vandetanib (0.25, 0.5 and 1μM) or DMSO. Cell proliferation was determined by counting in Neubauer's chamber. Expression of mRNA was evaluated by real-time PCR, protein expression by Western Blot and D3 activity was evaluated by Sephadex LH-20 column chromatography. Results: The addition of vandetanib to the culture medium caused a time and dose-dependent decrease in the number of cells, with a maximum reduction (77%) after 6 days of treatment at 1μM dose. As expected, vandetanib treatment inhibited ERK phosphorylation. No significant changes in DIO3 mRNA levels were observed after 3 (0.02 vs. 0.02 vs. 0.01 vs. 0.01; P = 0.34) or 6 days (0.02 vs. 0.02 vs. 0.03 vs. 0.02; P = 0.33) of treatment. Accordingly, D3 protein expression did not increase in treated groups. However, we observed a 2 to 5-fold increase in D3 activity after 3 days of treatment and a 1.5 to 2.15-fold increase in 6 days of treatment. Conclusions: Treatment with vandetanib was not associated with increased DIO3 mRNA and D3 protein expression levels in MTC-derived cells, although an increase in enzyme activity has been observed.

INTRODUÇÃO: O hipotireoidismo congênito (HC) é uma doença, de acometimento neonatal, caracterizada por diminuição nos níveis de hormônios tireoidianos. As causas mais comuns de HC primário permanente são as alterações no desenvolvimento da glândula tireóide (disgenesia) e os defeitos de síntese dos hormônios tireóideos (disormonogênese). A determinação da etiologia do HC tem papel importante na determinação da gravidade da doença, evolução e tratamento. Essa investigação é feita através de exames como ultrassonografia e cintilografia (CINT) da tireóide. Além disso, com o conhecimento do genoma humano, diversas mutações foram descritas, sendo a investigação molecular importante para a determinação da etiologia da doença. OBJETIVOS: 1. Determinar o diagnóstico etiológico dos pacientes com HC a partir de dosagens hormonais, tireoglobulina e exames de imagem; 2. Estabelecer a importância do uso da ultrassonografia com Doppler colorido (USDC) no diagnóstico etiológico; 3. Estabelecer a importância do uso do teste do perclorato de sódio intravenoso (PSIV) no diagnóstico diferencial de HC por disormonogênese; 4. Estudar os genes PAX8 e receptor do TSH (TSHR) em pacientes com HC causado por disgenesia tireoidiana MÉTODOS: Avaliamos 40 pacientes acompanhados na APAE - São Caetano com diagnóstico de HC primário e permanente acima de 3 anos de idade. Os pacientes realizaram dosagens de T3, T4, T4 livre, TSH, tireoglobulina (TG) e anticorpo anti-TG pelo método imunofluorimétrico, além de USDC e CINT. Os pacientes com suspeita de disormonogênese foram submetidos ao teste PSIV e avaliação com otorrinolaringologista e audiometria tonal, se necessário. Os pacientes que apresentavam disgenesia tireoidiana tiveram o DNA extraído a partir de leucócitos periféricos para o estudo dos genes PAX8 e TSHR através de PCR e sequenciamento automático. RESULTADOS: Avaliamos 28 pacientes do sexo feminino e 12 do sexo masculino, após suspensão do tratamento com levotiroxina por 4 semanas. A idade média foi de 6,5 anos. O TSH médio foi 129,9 UI/mL (normal: 0,7-6,0). Os valores de T3, T4 e T4 livre variaram de 14 217 ng/dL (normal: 105-269), <1,6 15,8 g/dL (normal: 1,5-15) e < 0,3 2,7 ng/dL (normal: 0,7-1,5), respectivamente. A TG variou de <1 287 ng/dL (normal: 1,7-35). A USDC mostrou 21 pacientes com tireóide tópica (53%), 8 pacientes com tireóide ectópica (20%) e 11 pacientes com atireose (27%). Na CINT, o mapeamento identificou tireóide tópica em 20 pacientes (51%), tireóide ectópica em 13 pacientes (32%), e atireose em 7 pacientes (17%). A captação mostrou-se aumentada em 2 horas em 10 pacientes. O teste PSIV foi realizado em 9 pacientes com bócio ou glândula de tamanho normal ao USDC, cuja captação foi aumentada. Apenas um paciente apresentou vômito ao início do teste. Seis pacientes apresentaram teste positivo, considerando uma queda maior que 20%. Nenhum desses pacientes apresentava surdez neurossensorial. Encontramos discrepância entre USDC e CINT em 9 pacientes, principalmente nos casos de ectopia. A dosagem de TG auxiliou na confirmação de atireose. Os níveis mais altos de TG encontrados foram nos casos de disormonogênese causados por defeito na organificação. Assim, determinamos o diagnóstico de ectopia em 32,5% dos pacientes, hipoplasia em 20%, defeito na organificação (defeito de TPO ou THOX2) em 17,5%, atireose em 15%, defeito na TG em 7,5% e 3 casos a esclarecer (7,5%). Vinte e sete pacientes foram diagnosticados como portadores de disgenesia tireoidiana e não apresentaram mutações nos genes PAX8 e TSHR. CONCLUSÃO: Estabelecemos o diagnóstico etiológico em 37 dos 40 pacientes estudados. A USDC mostrou-se importante no diagnóstico etiológico do HC, especialmente associada à dosagem de TG. O teste PSIV mostrou-se seguro no diagnóstico diferencial do HC por disormonogênese. Não identificamos nenhuma mutação nos genes PAX8 e TSHR nos casos estudados de disgenesia / INTRODUCTION: Congenital hypothyroidism (CH) is a disease at neonatal period characterized by low thyroid hormones levels. Most common causes of primary CH are alterations at thyroid gland development (dysgenesis) and thyroid hormone synthesis defects (dyshormonogenesis). The establishment of CH etiology has important role to define the severity, evolution and treatment of the disease. This investigation is based on thyroid ultrasound and radiouptake and radionuclide imaging (RAIU). With human genome knowledge, several mutations were described, becoming molecular investigation so important to etiology definition. OBJECTIVES: 1. Establish the etiologic diagnosis of CH patients using hormonal measurements, thyroglobulin and imaging exams. 2. Establish the importance of color Doppler ultrasound (CDUS) in etiologic diagnosis. 3. Establish the importance of intravenous perchlorate sodium test in differential diagnosis of CH due to dyshormonogenesis. 4. Study PAX8 and TSH receptor (TSHR) genes in patients with CH due to thyroid dysgenesis. METHODS: We evaluated forty patients followed-up at APAE - São Caetano with primary and permanent CH diagnosis above 3 years-old. Patients performed T3, T4, free T4, TSH, thyroglobulin (TG) and anti-TG antibody using immunofluorimetric assays, besides thyroid CDUS and RAIU. Patients with thyroid dysgenesis had their DNA extracted from peripheral leukocytes to study PAX8 and TSHR genes using PCR and automatic sequencing. Patients with dyshormonogenesis suspected were submitted to intravenous perchlorate sodium test and otorhinolaryngologist and tonal audiometric evaluation, if necessary. RESULTS: We evaluated 28 female and 12 male after levothyroxine treatment off for 4 weeks. Mean age of studied patients was 6.5 years-old. Mean TSH was 129.9 UI/mL (normal: 0.7-6.0). T3, T4 and freeT4 ranged from 14 217 ng/dL (normal 105-269) , <1.6 15.8 g/dL (normal: 1.5- 15) and < 0.3 2.7 ng/dL (normal: 0.7-1.5) respectively. TG level ranged from < 1 287 ng/dL (normal 1.7-35). CDUS showed normally located thyroid in 21 patients (53%), ectopy in 8 patients (20%), and athyrosis in 11 patients (27%). At RAIU, thyroid scan identified normal located gland in 20 patients (51%), ectopy in 13 patients (32%) e athyrosis in 7 patients (17%). Two-hours uptake was elevated in ten patients. Intravenous perchlorate sodium test was performed in 9 patients with goiter or normal volume at CDUS, with normal or elevated uptake. Only one patient presented vomit. Six patients had positive test, considering more than 20% of decline. None from these patients had neurosensorial deafness. We found discrepancy between CDUS and RAIU in 9 patients, especially in ectopic cases. Thyroglobulin measurement helped to confirm athyrosis. Highest TG levels were found in dyshormonogenesis patients due to organification defects. Therefore we determined etiologic diagnosis of ectopic gland in 32,5% of patients, hypoplasia in 20%, organification defect (TPO or THOX2 defects) in 17,5%, athyrosis in 15%, thyroglobulin defect in 7,5% and three cases were undefined (7,5%). Twenty seven patients were diagnosed with thyroid dysgenesis and had no mutation in PAX8 and TSHR genes. CONCLUSION: We established the etiologic diagnosis in 37 from 40 patients here studied. CDUS was useful on etiologic diagnosis of CH, especially associated to thyroglobulin level. Intravenous perchlorate sodium test was safe and efficient in CH differential diagnosis of dyshormonogenesis. We identified no mutation in PAX8 and TSHR genes in dysgenesis cases

Introdução: O hipotireoidismo congênito é a causa mais comum de retardo mental evitável em crianças, sua incidência varia de 1:2000 a 1:3000 nascidos vivos. É estimado que 15-20% dos casos de HC são conseqüentes de falhas na síntese dos hormônios tireoidianos. Entre as alterações genéticas mais freqüentes destaca-se o defeito na atividade da tireoperoxidase. Objetivos: rastrear mutações em duas pacientes com HC, com defeito parcial de incorporação de iodeto e verificar o efeito funcional de alterações do gene da tireperoxidase. Casuística e métodos: duas pacientes com HC, bócio e diagnóstico molecular não conhecido. Amostras de sangue periférico e de tecido tireoidiano das pacientes e amostras de DNA de indivíduos controles. Sequenciamento dos genes TPO, DUOX2 e DUOXA2. Análise da expressão gênica de TPO, TG, NKX2.1, PDS, PAX8, NIS e rTSH por PCR bem tempo real. Avaliação da expressão de luciferase sob controle do promotor da TPO e avaliação da atividaede da TPO do tecido as pacientes. Resultados: Nas pacientes foi identificada a alteração -95G>T, em homozigose, na região promotora da TPO. Verificamos diminuição da atividade enzimática da TPO no tecido tireoideano das pacientes e diminuição da expressão do RNAm desse gene. Também se encontrou diminuída a expressão dos genes NKX2.1 e PAX8. Já os genes TG, rTSH, PDS, NIS, a expressão do RNAm apresentou-se aumentada. A análise funcional da alteração -95G>C não mostrou diminuição da expressão do gene repórter. Conclusão: O HC das pacientes deve-se a diminuição da atividade enzimática da TPO, contudo alterações de sequência não foram encontradas no gene da TPO que expliquem a diminuição da atividade. Alterações epigenéticas ou nos introns no gene da TPO poderiam explicar o HC das pacientes. / Introduction: Congenital hypothyroidism is the most common cause of preventable mental retardation in children, its incidence varies from 1:2000 to 1:3000 live births. It is estimated that 15-20% of cases of CH are consistent failures in the synthesis of thyroid hormones. Among the most frequent genetic changes highlight the defect in the activity of thyroid peroxidase. Objectives: Identify mutations in two patients with CH and partial defect in iodide incorporation and verify the functional effect of changes in gene tireperoxidase. Methods: Two patients with CH, goiter and molecular diagnosis unknown. Samples of peripheral blood and thyroid tissue of patients and DNA samples from control subjects. Sequencing of the TPO gene, DUOX2 and DUOXA2. Analysis of gene expression of TPO, TG, NKX2.1, PDS, PAX8, NIS and TSHr by real time. Evaluation of the expression of luciferase under control of the promoter of TPO and TPO activity evaluation of the patients tissue. Results: The patients were identified change-95G> T homozygous, in the promoter region of TPO. We observed decrease in enzymatic activity of TPO in thyroid tissues of patients and decreased RNAm expression of this gene. Also found decreased expression of genes NKX2.1 and PAX8. Since the genes TG, TSHr, PDS, NIS mRNA expression presented increased. Functional analysis of the change -95G>T showed no descrease in reporter gene expression. Conclusion: The CH of patients due to decreased enzymatic activity of TPO, but changes were not found in the sequence of TPO gene to explain the decrease in activity. Epigenetic alterations in introns or in the TPO gene could explain the HC patients

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:28:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:56:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia) / IPEN/D-MPLO / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de Sao Paulo, Sao Paulo