Orientador: Yoko Bomura Rosato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T09:03:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moscoso_IrmadeLourdes_M.pdf: 4592907 bytes, checksum: 7da4f18d51329da239213f41b89bdef9 (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: Linhagens haplóides, bem como heterocários e diplóides do fungo Aspergillus nidulans foram analisados quanto à produção das enzimas extracelulares lipase, amilase, protease, fosfatase e urease. Foram utilizados três linhagens normais e oito mutantes morfológicos, além de diferentes combinações entre ambos. Os ensaios foram efetuados em meios de cultura sólidos, contendo cada qual, um substrato especifico. As linhagens morfológicas do tipo compacto foram também analisadas microscopicamente, e comparadas às demais, previamente descritas. Pelos resultados obtidos, foi constatado que as colônias de crescimento reduzido em um ou mais meios de cultura foram sempre as mais alteradas também no aspecto enzimático, bem corno no microscópico. As compactas B-VIII e B-6, bem corno os heterocários pp+M-32 e pp+M-35, destacaram-se por apresentar a maior produção de lipase, amilase, protease, enquanto que outras linhagens e heterocários mostraram maior produção em relação a apenas uma ou outra dessas enzimas. A linhagem compacta pp-6 constituiu uma exceção, já que não apresentou produção de protease, embora o heterocário MSE + pp-6 tenha produzido o mais alto nível de atividade dessa mesma enzima. Para fosfatase e urease ocorreu o inverso, isto é, as colônias de menores dimensões apresentaram evidências de menor atividade enzimática. Quanto aos diplóides, houve restauração do fenótipo enzimático original bm ou pp em todos os casos. As alterações aqui descritas foram discutidas, considerando-se a possibilidade de problemas de permeabilidade nos mutantes morfológicos utilizados / Abstract: The production of extracellular enzynes such as lipase, amylase, protease, phosphatase and urease by haploids, heterocaryons and diploids of A. nidulans were analysed. Three normal strains, eight morphological mutants and differents combinations among them were utilized. The enzymatic test were carried out using solid culture medium containing specific substrate for each enzyme under assay. The results shwed that slow growing colonies in one or more culture medium showed also more alterations in the enzyme production. In general compact colonies (B-VIII and B-6) and some heterocaryons (pp+M-32 and pp+M-35) showed higher production of lipase, amylase and protease. For specific enzymes there are others strains and heterocaryons that must be considered. The strain pp-6 was a special compact strain showing no activity of protease at all; however in the heterocaryon MSE + pp-6 there was a strong interaction producing the highest level of protease activity. For phosphatase and urease the results were quite different, the smaller colonies having lower enzymatic activity. There were no differences in the diploids and the level of enzymes production returned to the respective original strain bm ou pp. All the alterations described, specially in haploids and heterocaryons were discussed considering permeability problems in the morphological mutants / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

O trigo é um alimento básico da humanidade cuja demanda cresce proporcionalmente ao aumento populacional. Existe carência de pesquisas sobre o efeito da nutrição da planta doadora na resposta androgenética. Este trabalho teve por objetivo avaliar a influência de cinco concentrações de nitrogênio e de boro (25%, 50%, 100%, 150% e 200%) a partir da solução de Sarruge modificada, no cultivo de plantas de trigo doadoras de anteras visando à obtenção de estruturas embriogênicas androgenéticas. Para tanto, foram avaliados os componentes do rendimento (número de colmos, diâmetro e comprimento do colmo principal; comprimento, largura e área da folha bandeira; teor de clorofila da folha bandeira, distância entre a folha bandeira e o último nó e comprimento da espiga); o acúmulo de graus dias e duração do ciclo da semeadura até a coleta das espigas para a cultura de anteras; a formação de estruturas embriogênicas androgenéticas e o desenvolvimento dos micrósporos (tétrade, mononucleado central, mononucleado periférico, binucleado e pólen P). Constatou-se que as concentrações de nitrogênio afetaram significativamente os componentes do rendimento, a formação de estruturas embriogênicas androgenéticas e o desenvolvimento dos micrósporos. A duração do ciclo das plantas cultivadas na concentração de 25% de nitrogênio foi menor que nas demais doses, apresentando diferença de até 3,3 dias quando comparada às plantas submetidas a doses mais elevadas. Houve aumento linear na produção de estruturas embriogênicas androgenéticas em função das doses crescentes de nitrogênio utilizadas no cultivo das plantas doadoras das anteras. As doses de nitrogênio interferiram também no estádio de desenvolvimento dos micrósporos, para todas as variáveis estudadas. Essa influência no desenvolvimento dos micrósporos foi efetiva enquanto a folha bandeira menos um encontrava-se no primeiro terço de deslocamento em relação à distância total entre a folha bandeira e o último nó do colmo. As concentrações de boro utilizadas nas soluções de cultivo das plantas de trigo doadoras de anteras não influenciaram nos componentes do rendimento, na formação de estruturas embriogênicas, na duração do ciclo da planta e na maioria das variáveis estudadas com relação ao desenvolvimento dos micrósporos. O desenvolvimento dos micrósporos na espiga seguiu o padrão normal descrito para a espécie, independentemente dos nutrientes estudados. Concluiuse que as concentrações de nitrogênio influenciaram positivamente nos componentes do rendimento (exceto no comprimento da espiga), na formação de estruturas embriogênicas e na distância entre a folha bandeira e o último nó do colmo (marcador morfológico da coleta das espigas para cultura de anteras), enquanto que as concentrações de boro utilizadas no cultivo das plantas doadoras de anteras não apresentaram esse efeito. / Wheat is the staple food of humanity whose demand grows in proportion to the population growth. There is lack of research about the effect of the nutrition of the donor plant in the androgenetic response. This work aim for evaluate the influence of five concentrations of nitrogen and boron (25%, 50%, 100%, 150% and 200%) from the solution of Sarruge modified, in the cultivation of wheat plants donors of anthers aiming the obtainment of androgenetics embryogenic structures. Both for, were evaluated the yield components (number stalks, diameter and length of the main stem; length, width and area of flag leaf; chlorophyll content of flag leaf, distance between flag leaf and the last node and ear length); the accumulation of degree-days and cycle duration of sowing until collection of ears to the anther´s culture; the formation of androgenetics embryogenic structures and the development of microporous (determination of the number of cells in stages: tetrad, central mononucleate, peripheral mononucleate and binucleated and occurrence of pollen P). It was found that the concentrations of nitrogen significantly affected the yield components, the formation of androgenetics embryogenic structures and the development of microspores. The duration of the cycle of the cultivated plants in the concentration of 25% of nitrogen was lower than in other doses, presenting difference of up to 3.3 days when compared to plants subjected to higher doses. There was a linear increase in the production of androgenetics embryogenic structures in function of increasing doses of nitrogen used in cultivation of donor plants of the anthers. The doses of nitrogen interfered also at the stage of development of microspores, for all variables studied. This influence on the development of microspores was effective while the flag leaf less one was in the first third of displacement in relation to the total distance between the flag leaf and the last node of the culm. The concentrations of boron used in solutions of cultivation of wheat donors plants of anthers did not affect the income components, in the formation of embryogenic structures, on the duration of the cycle of the plant and in the majority of the variables studied in relation to the development of the microspores. The development of microspores in spike followed the normal pattern described for the species, regardless of the nutrients studied. It was concluded that the concentrations of nitrogen positively influenced in yield components (except the length of the ear), the formation of embryogenic structures on and the distance between the flag leaf and the last node of the culm (morphological marker of collection of ears to anther culture), while the concentrations of boron used for the cultivation of plants donated anthers did not have this effect.

O trigo é um alimento básico da humanidade cuja demanda cresce proporcionalmente ao aumento populacional. Existe carência de pesquisas sobre o efeito da nutrição da planta doadora na resposta androgenética. Este trabalho teve por objetivo avaliar a influência de cinco concentrações de nitrogênio e de boro (25%, 50%, 100%, 150% e 200%) a partir da solução de Sarruge modificada, no cultivo de plantas de trigo doadoras de anteras visando à obtenção de estruturas embriogênicas androgenéticas. Para tanto, foram avaliados os componentes do rendimento (número de colmos, diâmetro e comprimento do colmo principal; comprimento, largura e área da folha bandeira; teor de clorofila da folha bandeira, distância entre a folha bandeira e o último nó e comprimento da espiga); o acúmulo de graus dias e duração do ciclo da semeadura até a coleta das espigas para a cultura de anteras; a formação de estruturas embriogênicas androgenéticas e o desenvolvimento dos micrósporos (tétrade, mononucleado central, mononucleado periférico, binucleado e pólen P). Constatou-se que as concentrações de nitrogênio afetaram significativamente os componentes do rendimento, a formação de estruturas embriogênicas androgenéticas e o desenvolvimento dos micrósporos. A duração do ciclo das plantas cultivadas na concentração de 25% de nitrogênio foi menor que nas demais doses, apresentando diferença de até 3,3 dias quando comparada às plantas submetidas a doses mais elevadas. Houve aumento linear na produção de estruturas embriogênicas androgenéticas em função das doses crescentes de nitrogênio utilizadas no cultivo das plantas doadoras das anteras. As doses de nitrogênio interferiram também no estádio de desenvolvimento dos micrósporos, para todas as variáveis estudadas. Essa influência no desenvolvimento dos micrósporos foi efetiva enquanto a folha bandeira menos um encontrava-se no primeiro terço de deslocamento em relação à distância total entre a folha bandeira e o último nó do colmo. As concentrações de boro utilizadas nas soluções de cultivo das plantas de trigo doadoras de anteras não influenciaram nos componentes do rendimento, na formação de estruturas embriogênicas, na duração do ciclo da planta e na maioria das variáveis estudadas com relação ao desenvolvimento dos micrósporos. O desenvolvimento dos micrósporos na espiga seguiu o padrão normal descrito para a espécie, independentemente dos nutrientes estudados. Concluiuse que as concentrações de nitrogênio influenciaram positivamente nos componentes do rendimento (exceto no comprimento da espiga), na formação de estruturas embriogênicas e na distância entre a folha bandeira e o último nó do colmo (marcador morfológico da coleta das espigas para cultura de anteras), enquanto que as concentrações de boro utilizadas no cultivo das plantas doadoras de anteras não apresentaram esse efeito. / Wheat is the staple food of humanity whose demand grows in proportion to the population growth. There is lack of research about the effect of the nutrition of the donor plant in the androgenetic response. This work aim for evaluate the influence of five concentrations of nitrogen and boron (25%, 50%, 100%, 150% and 200%) from the solution of Sarruge modified, in the cultivation of wheat plants donors of anthers aiming the obtainment of androgenetics embryogenic structures. Both for, were evaluated the yield components (number stalks, diameter and length of the main stem; length, width and area of flag leaf; chlorophyll content of flag leaf, distance between flag leaf and the last node and ear length); the accumulation of degree-days and cycle duration of sowing until collection of ears to the anther´s culture; the formation of androgenetics embryogenic structures and the development of microporous (determination of the number of cells in stages: tetrad, central mononucleate, peripheral mononucleate and binucleated and occurrence of pollen P). It was found that the concentrations of nitrogen significantly affected the yield components, the formation of androgenetics embryogenic structures and the development of microspores. The duration of the cycle of the cultivated plants in the concentration of 25% of nitrogen was lower than in other doses, presenting difference of up to 3.3 days when compared to plants subjected to higher doses. There was a linear increase in the production of androgenetics embryogenic structures in function of increasing doses of nitrogen used in cultivation of donor plants of the anthers. The doses of nitrogen interfered also at the stage of development of microspores, for all variables studied. This influence on the development of microspores was effective while the flag leaf less one was in the first third of displacement in relation to the total distance between the flag leaf and the last node of the culm. The concentrations of boron used in solutions of cultivation of wheat donors plants of anthers did not affect the income components, in the formation of embryogenic structures, on the duration of the cycle of the plant and in the majority of the variables studied in relation to the development of the microspores. The development of microspores in spike followed the normal pattern described for the species, regardless of the nutrients studied. It was concluded that the concentrations of nitrogen positively influenced in yield components (except the length of the ear), the formation of embryogenic structures on and the distance between the flag leaf and the last node of the culm (morphological marker of collection of ears to anther culture), while the concentrations of boron used for the cultivation of plants donated anthers did not have this effect.

Le genre Ectocarpus Lyngbye (Ectocarpales, Phaeophyceae) regroupe des algues marines filamenteuses caractérisées par un cycle haploïde-diploïde. L'objectif de la thèse était de délimiter les espèces et d'étudier la spéciation dans ce genre. Nous avons commencé par clarifier le nombre d'espèces cryptiques en utilisant deux loci indépendants et une approche intégrative associant une analyse de détection de " barcode gap " avec des reconstructions phylogénétiques. Nos résultats montrent l'existence d'au moins 15 espèces qui se répartissent en un groupe monophylétique composé d'E. crouaniorum (Ecro) et de deux espèces proches ainsi que d'un mélange paraphylétique composé des 12 autres espèces incluant E. siliculosus (Esil). Deuxièmement, les analyses de séquençage Rad et de phylogénomique ont permis de résoudre les relations au sein du groupe paraphylétique. Les espèces se regroupent maintenant en deux clades divergents (Ecro and Esil). Des niveaux de divergence variables entre espèces sont révélés au sein du clade Esil. Des phénomènes d'hybridation entre les espèces les plus apparentées, et trouvées en sympatrie, sont suspectés. Finalement, l'importance de l'isolement reproducteur a été étudié entre les espèces Esil et Ecro, les plus communes, mais les plus divergentes, en utilisant des marqueurs spécifiques de chacune des espèces. Nos résultats indiquent que la méiose agit comme une forte barrière reproductive entre ces espèces et démontrent que les espèces du genre Ectocarpus sont d'excellents systèmes pour étudier les conséquences évolutives de l'hybridation et de l'introgression pour le maintien ou la divergence des espèces grâce à leur cycle haploïde-diploïde. / The genus Ectocarpus Lyngbye (Ectocarpales, Phaeophyceae) comprises marine filamentous algae characterized by an alternation between two independent multicellular organisms of different ploidy. The general objective of the thesis was to study species delineation and speciation within this genus. We started clarifying the number of cryptic species using two unlinked loci (COI-5P and ITS1) and an integrative approach associating barcode gap detection analyses with phylogenetic reconstructions. We showed the presence of at least 15 species partitioned within a monophyletic group composed of E. crouaniorum (Ecro) and two closely related species and a paraphyletic assemblage composed of the remaining 12 other species including E. siliculosus (Esil). Second, Rad sequencing and phylogenomics analyses allowed to resolve the relationships within the paraphyletic assemblage. The different species becomes well separated into two divergent clades (Ecro and Esil). A diversity of taxa with various levels of divergence was revealed within the clade Esil and hybridization between the closest and sympatric species was suggested. Finally, the importance of reproductive isolation among the two commonest but most divergent species Esil and Ecro was studied using species-specific nuclear and cytoplasmic markers jointly with 9 microsatellites. We showed that meiosis acts as a strong reproductive barrier among these two species and demonstrates that the species of the genus Ectocarpus are excellent systems to study evolutionary consequences of hybridization and introgression for the maintenance or breakdown of species because of their haploid diploid life cycle.

La embriogénesis derivada de microsporas es la ruta androgénica más empleada para la obtención de individuos dobles haploides (DHs), 100% homocigotos, que pueden ser utilizados como líneas puras. Este proceso es una alternativa biotecnológica a los programas clásicos de mejora que permite reducir el tiempo y los recursos necesarios para la obtención de híbridos comerciales. Gracias a los avances realizados en los últimos 30 años, hay determinadas especies que pueden ser consideradas modelo debido a la elevada eficiencia que presentan en la obtención de individuos DHs. Sin embargo, aun existen muchas especies, interesantes desde un punto de vista agrícola y comercial, que permanecen recalcitrantes a la embriogénesis de microsporas. Debido al elevado potencial biotecnológico de esta técnica es fundamental mejorar el proceso en este tipo de especies en las que la androgénesis no está puesta a punto. Para ello es esencial realizar estudios en los que se combine un enfoque más aplicado, tratando de conseguir las condiciones experimentales más adecuadas, y en paralelo, un enfoque más básico, orientado a investigar las bases de la reprogramación de las microsporas y de este modo, tener una mayor posibilidad de influir en el proceso. En esta Tesis se han empleado ambos enfoques, empleando la colza como especie modelo y el pimiento como especie recalcitrante a la androgénesis. En pimiento, el estudio de factores clave para la inducción de la androgénesis nos ha permitido optimizar un protocolo de cultivo de anteras aplicable a diferentes genotipos. Proponemos el uso combinado de la relación sépalo/yema (80-90% de la yema cubierta por los sépalos) junto con la pigmentación de las anteras (extremo apical morado) como marcadores morfológicos fiables y fáciles de medir para determinar qué yemas y anteras contienen las microsporas en su estadio idóneo para la inducción. También se ha demostrado que la presencia de callos de origen somático es más dependiente de las condiciones de cultivo que del genotipo, lo cual nos ha permitido obtener un protocolo que reduzca la presencia de estos callos e incremente el número de embriones obtenidos. En los estudios de investigación básica realizados con colza, el uso de la fijación por alta presión combinada con la criosustitución ha permitido observar cambios ultraestructurales en las microsporas inducidas nunca antes descritos. Se ha estudiado la arquitectura y composición de las paredes celulares que se forman de novo en las microsporas embriogénicas y se han observado paredes celulares incompletas y deformes que podrían estar favoreciendo fenómenos de fusión nuclear, que a su vez da lugar a la duplicación cromosómica típica de los DHs. Se ha comprobado que estas paredes presentan elevados niveles de calosa y ausencia de celulosa. También se ha estudiado la arquitectura de diferentes orgánulos presentes en las microsporas recién inducidas y se ha demostrado que los plastidios presentes en las microsporas embriogénicas actúan como plastolisomas. Estos estudios ultraestructurales han servido para extraer dos nuevos marcadores de embriogénesis: la presencia de calosa en las nuevas paredes y en las placas celulares en formación y plastolisomas que posiblemente actúen como parte de un mecanismo más general de limpieza del citoplasma, en paralelo a la reprogramación. / Parra Vega, V. (2015). Aspectos básicos y aplicados de la inducción de embriogénesis en microsporas de pimiento y colza [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/48518 / TESIS

[ES] Los dobles haploides son una gran herramienta para la mejora genética de híbridos debido a que se puede alcanzar la homocigosis completa en una sola generación. Entre las técnicas usadas para obtener estas plantas, la inducción de la embriogénesis de microsporas, mediante el cultivo de anteras o de microsporas, es la más eficiente y la más usada. La embriogénesis de microsporas es también un ejemplo de totipotencia de las células vegetales gracias a su habilidad de reprogramar su desarrollo gametofítico hacia una ruta esporofítica, donde las células proliferan de forma organizada para crear un nuevo organismo. Como en muchos otros procesos in vitro, las condiciones de cultivo deben ser optimizadas para incrementar la eficiencia. En la presente Tesis Doctoral, hemos usado dos especies como sistemas experimentales para estudiar y optimizar el cultivo de microsporas. Por un lado, usamos berenjena (Solanum melongena) como un ejemplo de cultivo de importancia económica en el que los protocolos todavía tienen mucho margen de mejora. La optimización de la densidad celular y los reguladores de crecimiento han demostrado ser útiles para modificar la eficiencia del cultivo de microsporas de berenjena. Por otra parte, hemos utilizado el cultivo de microsporas de Brassica napus para estudios básicos puesto que ha sido ampliamente usado como modelo para entender procesos celulares que ocurren durante este cambio en el desarrollo. Se detalla un protocolo estandarizado para el cultivo de microsporas de B. napus, el cual ha sido utilizado en todos los cultivos en esta Tesis para explorar una serie de procesos y estructuras celulares potencialmente implicados en el cambio de desarrollo hacia embriogénesis. Estos procesos incluyen estrés del retículo endoplásmico, muerte celular programada, autofagia y estructura y composición de la pared celular. Estudiamos en paralelo el cultivo de microsporas de dos genotipos de B. napus con diferente respuesta androgénica en condiciones estándar y añadiendo Tricostatina A, un modulador epigenético que ha mostrado ser beneficioso para la respuesta androgénica en algunos casos. En conjunto, esta Tesis representa un avance en la optimización del cultivo de microsporas en estas especies y arroja luz sobre el papel de algunos procesos en el contexto de embriogénesis de microsporas. / [CA] Els dobles haploides són una gran eina en millora vegetal per a la producció d'híbrids, a causa de la seua total homozigosi, que es pot aconseguir en només una generació in vitro. Entre les diverses tècniques que s'utilitzen per tal d'obtenir aquestes plantes, la inducció de l'embriogènesi de microspores, mitjançant cultiu d'anteres o microspores, és la més comuna i eficient. L'embriogènesi de microspores també és un exemple de la totipotència de les cèl·lules vegetals, capaços de reprogramar-se d'una via gametofítica a una via esporofítica, on proliferen de manera organitzada per crear un nou organisme. Com en moltes altres tecniques in vitro, s'han d'optimitzar les condicions del cultiu per tal d'augmentar l'eficiència. En la present Tesi Doctoral, hem utilitzat dues espècies de plantes com a sistemes experimentals per estudiar i optimitzar el cultiu de microspores. Per una banda, hem utilitzat l'albergínia (Solanum melongena) com a exemple de cultiu d'importància econòmica on els protocols encara tenen marge per a l'optimització. La optimització de la densitat de cèl·lules en cultiu i la concentració de reguladors de creixement van demostrar ser útils per modificar l'eficiència de la resposta dels cultius de microspores d'albergínia. D'altra banda, hem utilitzat cultius de microspores de Brassica napus principalment per a estudis bàsics, ja que s'utilitza àmpliament com a model per entendre els processos cel·lulars que es produeixen durant aquest canvi de desenvolupament. Es detalla un protocol estandarditzat per al cultiu de microspores de B. napus, que s'ha utilitzat en tots els cultius inclosos en aquesta Tesi per explorar una sèrie de processos i estructures cel·lulars potencialment implicades en el canvi de desenvolupament cap a l'embriogènesi. Aquests inclouen l'estrès del reticle endoplasmàtic, la mort cel·lular programada, l'autofàgia i l'estructura i composició de la paret cel·lular. Vam estudiar en paral·lel cultius de microspores de dos genotips de B. napus amb diferent resposta androgènica, cultivats en condicions estàndard i afegint-hi Tricostatina A, un modulador epigenètic que s¿ha demostrat beneficiós per a la resposta androgènica en alguns casos. En conjunt, aquesta Tesi representa un avanç en l'optimització dels cultius de microsporas en aquestes espècies i aporta llum sobre el paper d'alguns processos en el context de l'embriogènesi de microspores. / [EN] Doubled haploids are a great tool for hybrid breeding due to their complete homozygosity achievable in only one in vitro generation. Among the several techniques used to obtain these plants, induction of microspore embryogenesis, via anther or microspore culture, is the most common and efficient approach. Microspore embryogenesis is also an example of totipotency of plant cells due to their ability to reprogram themselves from a gametophytic to a sporophytic pathway, where cells proliferate in an organized way to create a new organism. As in many other in vitro procedures, culture conditions must be optimized in order to increase efficiency. In the present Doctoral Thesis, we used two plant species as experimental systems to study and optimize microspore culture. On one hand, we used eggplant (Solanum melongena) as an example of economically important crop where protocols have still room for optimization. Optimization of cell density and growth regulators demonstrated to be useful to modify the efficiency of eggplant microspore cultures. On the other hand, we used B. napus microspore cultures principally for basic studies since it is widely used as a model to understand cellular processes occurring during this developmental switch. A standardized protocol for Brassica napus microspore culture is detailed, which was used in all the cultures included in this Thesis to explore a series of processes and cellular structures potentially involved in the developmental switch towards embryogenesis. These included endoplasmic reticulum stress, programmed cell death, autophagy, and cell wall structure and composition. We studied in parallel microspore cultures from two B. napus genotypes with different androgenic response cultured in standard conditions and adding Trichostatin A, a epigenetic modulator shown to be beneficial for the androgenic response in some cases. Together, this Thesis represents an advance in the optimization of microspore cultures in these species, and sheds light on the role of some processes within the context of microspore embryogenesis. / Thanks are due to the Electron Microscopy Service of Universitat Politècnica de València, Marisol Gascón (IBMCP Microscopy Service). This work was supported by grant AGL2017-88135-R to JMSS from MICINN jointly funded by FEDER and by a Marie Skłodowska-Curie Individual Fellowship (656579) to PC-M This work was supported by grant AGL2017-88135-R to JMSS from MINECO jointly funded by FEDER. / Camacho Fernández, C. (2021). Microspore embryogenesis: cell wall dynamics and reprogramming of cell fate [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/163698 / TESIS