Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Larissa Daiane Willrich de Melo.pdf: 1466861 bytes, checksum: 3695d65f6aa448f284f69ac1afd4510f (MD5) Larissa Daiane Willrich de Melo.pdf.jpg: 3370 bytes, checksum: 20955982b01b119bb6af06d3b4896dcc (MD5) Previous issue date: 2013-03-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Efforts to develop an effective vaccine against Herpes Simplex Virus-1 (HSV-1) has been intense enough, however, there is no effective vaccine yet. The using of nanocapsules (Ncs) for production of viral vaccines may contribute to the enhancement and effectiveness of the already developed vaccines models. The main properties of the nanostructured system, which may contribute to the improvement of the immune response generated by vaccine is the slow and gradual release of the encapsulated content, protection of the encapsulated molecule or protein and adjuvanticity, inherent in every Ncs. The objective of this study was to produce and characterize nanocapsules with aqueous core to encapsulate the SSIEFARL peptide from HSV-1. This peptide has hydrophilic characteristics which impossibility the encapsulation in conventional nanocapsules with oil core. For the standardization of the tunnel several adaptations where modified in the system previously developed by Lambert et al. Among these, the stirring of the suspension, temperature, amount of surfactant, amount of peptide and settling time were adapted. All protocols two aqueous suspensions were tested, one with the organic solvent ethanol in the aqueous phase or only water. The results showed that the production with magnetic stirring in the presence of ethanol in the aqueous phase lead to Ncs with better physicochemical characteristics. Empty Ncs presented an average of particle size of 285 nm (+ 19,4) and zeta potential of -40.1 mV (+ 1,7) and the Ncs containing SSIEFARL peptide presented the size of 315 nm (+ 20,7) and zeta potential of -35,5 mV (+ 2,4). Other condition of production tested was the water temperature added during the production. When water was used at 40 °C the physico-chemical parameters were better than when room temperature water was used. Additionally, we tested the stability of the suspensions after storage at room temperature or 4 °C. The Ncs were stable for longer periods of time under refrigeration. For the characterization of morphostructure, Ncs were analyzed by transmission electron microscopy (TEM). This analysis revealed that Ncs present as spherical structures, homogeneous and uniform as standards in nanostructure for biological application. The analysis of Ncs by confocal microscopy was applied to investigate the encapsulation. Three amounts of SSIEFARL-6 FAM peptide were used (20, 30 or 50 μL), and the 20 μL showed better encapsulation. The analysis of the release profile of the peptide from Ncs showed that of the suspension produced with 20 μL was more linear, demonstrating slow release for at least 24 h. These data indicate that the method of production under magnetic stirring with ethanol and 20 μL of peptide in the aqueous phase is more suitable for production of aqueous core Ncs. Furthermore, empty Ncs at low concentrations showed no cytotoxicity to lymphoid cells from BALB-c in cell culture. Thus, we suggest that this approach has promising potential for developing a vaccine against HSV-1. / Os esforços para o desenvolvimento de uma vacina eficaz contra o Herpes Simplex Vírus-1 (HSV-1) tem sido bastante intensos, entretanto, ainda não existe uma vacina eficaz. A utilização de nanocápsulas (Ncs) para a produção de vacinas anti-virais pode contribuir para o aprimoramento e eficácia dos modelos vacinas já desenvolvidos. As principais propriedades desse sistema nanoestruturado, que podem contribuir para a melhora da resposta imune gerada por uma vacina são liberação lenta e gradual do conteúdo encapsulado, a proteção da molécula ou proteína encapsulada e a adjuvanticidade, inerente a cada Ncs. Assim, o objetivo deste estudo foi produzir e caracterizar nanocápsulas de núcleo aquoso, capazes de encapsular o peptídeo SSIEFARL do HSV-1. Este peptídeo possui características hidrofílicas sendo impossível a encapsulação em nanocápsulas convencionais de núcleo oleoso. Para a padronização do encapsulamento, foram combinadas diversas adaptações ao sistema previamente desenvolvido por Lambert e colaboradores. Dentre essas, foram adaptados o modo de agitação das suspensões, temperatura, quantidade de tensoativo, quantidade de peptídeo e tempo de sedimentação. Em todos os métodos foram testados duas alterações na fase aquosa das suspensões, foram produzidas Ncs com solvente etanol, na fase aquosa e/ou sem. Como resultados foram observados que a produção com agitação magnética em presença de etanol na fase aquosa foi a que produziu NCs com melhores características físico-químicas. Foram obtidas Ncs brancas com tamanho de partícula médio de 285 nm (+ 19,4) e potencial zeta de -40,1 mV (+ 1,7) e Ncs contendo o peptídeo SSIEFARL com tamanho de 315 nm (+ 20,7) e potencial zeta de -35,5 mV (+2,4). Outra condição alterada foi a temperatura da água adicionada durante os processos de produção. Quando foi utilizada água na temperatura de 40 oC os parâmetros físico-químicos foram melhores do que quando foi utilizada água na temperatura ambiente (T.A). Além disso, foi testada a estabilidade das suspensões após armazenamento em temperatura ambiente e geladeira (4oC). As nanocápsulas se mantiveram estáveis por mais tempo em sob refrigeração. Para a caracterização morfoestrutural das Ncs produzidas, foi utilizada a microscopia eletrônica de transmissão (MET). Essa análise revelou que as Ncs apresentam-se como estruturas esféricas, homogêneas e uniformes, conforme padrões estabelecidos para esse tipo de nanoestrutura. A análise das Ncs por microscopia confocal foi utilizada para comprovação do encapsulamento do peptídeo SSIEFARL-6-Fam, assim como a melhor quantidade. Foram utilizadas três quantidades de peptídeo (20, 30 ou 50 L), sendo que a quantidade de 20 L foi a que apresentou melhores resultados. O gráfico do perfil de liberação da suspensão produzida com 20 μL mostrou-se mais linear, demonstrando liberação lenta por pelo menos 24 h. Estes dados apontam que a metodologia de produção sob agitação magnética com etanol e 20 μL de peptídeo na fase aquosa apresentaram os melhores resultados para produção de nanocápsulas de núcleo aquoso. Além disso, as nanocápsulas brancas em baixas concentrações não apresentaram citotoxicidade para células de órgãos linfóides de camundongos BALB-c em cultura de células. Com isso, podemos sugerir que esta metodologia possui potencial promissor para desenvolvimento de vacina contra o HSV-1.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T17:48:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_LarissaDaianeWillrichDeMelo.pdf: 1512214 bytes, checksum: b264a462161b24ec3ce2aacf05afea14 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T17:48:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_LarissaDaianeWillrichDeMelo.pdf: 1512214 bytes, checksum: b264a462161b24ec3ce2aacf05afea14 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-03-25 / Efforts to develop an effective vaccine against Herpes Simplex Virus-1 (HSV-1) has been intense enough, however, there is no effective vaccine yet. The using of nanocapsules (Ncs) for production of viral vaccines may contribute to the enhancement and effectiveness of the already developed vaccines models. The main properties of the nanostructured system, which may contribute to the improvement of the immune response generated by vaccine is the slow and gradual release of the encapsulated content, protection of the encapsulated molecule or protein and adjuvanticity, inherent in every Ncs. The objective of this study was to produce and characterize nanocapsules with aqueous core to encapsulate the SSIEFARL peptide from HSV-1. This peptide has hydrophilic characteristics which impossibility the encapsulation in conventional nanocapsules with oil core. For the standardization of the tunnel several adaptations where modified in the system previously developed by Lambert et al. Among these, the stirring of the suspension, temperature, amount of surfactant, amount of peptide and settling time were adapted. All protocols two aqueous suspensions were tested, one with the organic solvent ethanol in the aqueous phase or only water. The results showed that the production with magnetic stirring in the presence of ethanol in the aqueous phase lead to Ncs with better physicochemical characteristics. Empty Ncs presented an average of particle size of 285 nm (+ 19,4) and zeta potential of -40.1 mV (+ 1,7) and the Ncs containing SSIEFARL peptide presented the size of 315 nm (+ 20,7) and zeta potential of -35,5 mV (+ 2,4). Other condition of production tested was the water temperature added during the production. When water was used at 40 °C the physico-chemical parameters were better than when room temperature water was used. Additionally, we tested the stability of the suspensions after storage at room temperature or 4 °C. The Ncs were stable for longer periods of time under refrigeration. For the characterization of morphostructure, Ncs were analyzed by transmission electron microscopy (TEM). This analysis revealed that Ncs present as spherical structures, homogeneous and uniform as standards in nanostructure for biological application. The analysis of Ncs by confocal microscopy was applied to investigate the encapsulation. Three amounts of SSIEFARL-6 FAM peptide were used (20, 30 or 50 μL), and the 20 μL showed better encapsulation. The analysis of the release profile of the peptide from Ncs showed that of the suspension produced with 20 μL was more linear, demonstrating slow release for at least 24 h. These data indicate that the method of production under magnetic stirring with ethanol and 20 μL of peptide in the aqueous phase is more suitable for production of aqueous core Ncs. Furthermore, empty Ncs at low concentrations showed no cytotoxicity to lymphoid cells from BALB-c in cell culture. Thus, we suggest that this approach has promising potential for developing a vaccine against HSV-1. / Os esforços para o desenvolvimento de uma vacina eficaz contra o Herpes Simplex Vírus-1 (HSV-1) tem sido bastante intensos, entretanto, ainda não existe uma vacina eficaz. A utilização de nanocápsulas (Ncs) para a produção de vacinas anti-virais pode contribuir para o aprimoramento e eficácia dos modelos vacinas já desenvolvidos. As principais propriedades desse sistema nanoestruturado, que podem contribuir para a melhora da resposta imune gerada por uma vacina são liberação lenta e gradual do conteúdo encapsulado, a proteção da molécula ou proteína encapsulada e a adjuvanticidade, inerente a cada Ncs. Assim, o objetivo deste estudo foi produzir e caracterizar nanocápsulas de núcleo aquoso, capazes de encapsular o peptídeo SSIEFARL do HSV-1. Este peptídeo possui características hidrofílicas sendo impossível a encapsulação em nanocápsulas convencionais de núcleo oleoso. Para a padronização do encapsulamento, foram combinadas diversas adaptações ao sistema previamente desenvolvido por Lambert e colaboradores. Dentre essas, foram adaptados o modo de agitação das suspensões, temperatura, quantidade de tensoativo, quantidade de peptídeo e tempo de sedimentação. Em todos os métodos foram testados duas alterações na fase aquosa das suspensões, foram produzidas Ncs com solvente etanol, na fase aquosa e/ou sem. Como resultados foram observados que a produção com agitação magnética em presença de etanol na fase aquosa foi a que produziu NCs com melhores características físico-químicas. Foram obtidas Ncs brancas com tamanho de partícula médio de 285 nm (+ 19,4) e potencial zeta de -40,1 mV (+ 1,7) e Ncs contendo o peptídeo SSIEFARL com tamanho de 315 nm (+ 20,7) e potencial zeta de -35,5 mV (+2,4). Outra condição alterada foi a temperatura da água adicionada durante os processos de produção. Quando foi utilizada água na temperatura de 40 oC os parâmetros físico-químicos foram melhores do que quando foi utilizada água na temperatura ambiente (T.A). Além disso, foi testada a estabilidade das suspensões após armazenamento em temperatura ambiente e geladeira (4oC). As nanocápsulas se mantiveram estáveis por mais tempo em sob refrigeração. Para a caracterização morfoestrutural das Ncs produzidas, foi utilizada a microscopia eletrônica de transmissão (MET). Essa análise revelou que as Ncs apresentam-se como estruturas esféricas, homogêneas e uniformes, conforme padrões estabelecidos para esse tipo de nanoestrutura. A análise das Ncs por microscopia confocal foi utilizada para comprovação do encapsulamento do peptídeo SSIEFARL-6-Fam, assim como a melhor quantidade. Foram utilizadas três quantidades de peptídeo (20, 30 ou 50 L), sendo que a quantidade de 20 L foi a que apresentou melhores resultados. O gráfico do perfil de liberação da suspensão produzida com 20 μL mostrou-se mais linear, demonstrando liberação lenta por pelo menos 24 h. Estes dados apontam que a metodologia de produção sob agitação magnética com etanol e 20 μL de peptídeo na fase aquosa apresentaram os melhores resultados para produção de nanocápsulas de núcleo aquoso. Além disso, as nanocápsulas brancas em baixas concentrações não apresentaram citotoxicidade para células de órgãos linfóides de camundongos BALB-c em cultura de células. Com isso, podemos sugerir que esta metodologia possui potencial promissor para desenvolvimento de vacina contra o HSV-1.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T20:02:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_LilianeMedianeiraMayerPossani.pdf: 1773175 bytes, checksum: 0fea418092d5f10f54b9e5790226b20b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T20:02:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_LilianeMedianeiraMayerPossani.pdf: 1773175 bytes, checksum: 0fea418092d5f10f54b9e5790226b20b (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Herpes is a condition caused by Herpes Simplex Virus types 1 (HSV-1) and 2 (HSV-2) which largely affects the global population. Both species can be transmitted through direct contact with infected lesions or biological fluids such as saliva and genital fluids. However, asymptomatic carriers can also transmit and excrete virus. Control of herpes is accomplished through the use of antiviral drugs, however, its extensive use has led to the emergence of resistant virus strains, particularly in immunocompromised patients. Because of that the development of an effective vaccine will not only control the disease, but also its etiologic agent. HSV-1 is an enveloped DNA viruses, and in this envelope there are viral glycoproteins that are responsible for the process of entering into the host cell. The mainly glycoproteins are B (gB) glycoprotein D (gD), glycoprotein H (gH) and glycoprotein L (gL). Glycoprotein B is the most studied protein and the reason for that is because its sequence is conserved among all herpesviruses and also is essential for the cell infection process. In this glycoprotein there is a fragment of 8 amino acid residues referred SSIEFARL. It is an immunodominant peptide responsible for inducing a strong T cell response upon infection process. This peptide is poorly immunogenic when adminstered without protection and or adjuvant. Thus, the nanobiotechnology can help for the development of a potent adjuvant to protect SSIEFARL and increase its immunogenicity. For this propouse, the production of previous developed polymeric nanocapsules (NCPs) with aqueous core was otimized and its physical and chemical parameters determined. After otimization, the encapsulation efficiency of SSIEFARL was evaluated and the interaction/compatibility of unloaded NCPs with cell in vitro were also determined. The NCPs presented unimodal distribution, low PDI (0.23±0.03), mean diameter of 267.5±51.6 and zeta potential -29.6±2.2, pH 7.2±0.3. The analyzes showed that 98% (97.7±1.5) of the particles in the sample were in the nanoscale and the a concentration of NCPs 6,07x1010/cm3. In vitro tests showed no cytotoxicity, and unload NCPs and in vivo tested suggest a cell migration to the site of injection and draning to the reagional lymph nodes, suggesting some adjuvant propertie. Taken together, the data suggest that the NCPs can be used in the development of an adjuvant system for the protection of SSIEFARL and development of a vaccine against HSV-1. / A herpes é uma patologia causada pelo Herpes Simplex Vírus dos tipos 1 (HSV-1) e 2 (HSV-2) que afeta grande parte da população mundial. Ambas as espécies podem ser transmitidas através de contato direto com lesões ou fluidos biológicos infectados, como saliva e fluidos genitais. No entanto, portadores assintomáticos também podem excretar e transmitir os vírus. O controle da herpes é realizado através do uso de medicamentos antivirais, porém seu uso extensivo, levou ao aparecimento de linhagens de vírus resistentes, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Esse fato torna imprescindível o desenvolvimento de uma vacina que seja eficaz não só no controle da doença, mas também de seu agente etiológico. O HSV-1 é um vírus de DNA envelopado e, nesse envelope estão ancoradas glicoproteínas virais que são responsáveis pelo processo de entrada na célula hospedeira, sendo as principais glicoproteína B (gB), glicoproteína D (gD), glicoproteína H (gH) e glicoproteína L (gL). A gB é um dos principais alvos nas pesquisas por ser uma sequência conservada em todos os herpesvírus e essencial no processo de infecção da célula alvo. Nessa glicoproteína, há um fragmento constituído por 8 resíduos de aminoácidos denominado SSIEFARL. Trata-se de um peptídeo imunodominante responsável por induzir forte resposta de células T no processo de infecção. Porém, esse peptídeo, quando administrado livre, é fracamente imunogênico. Sendo assim, busca-se na nanobiotecnologia, o desenvolvimento de um adjuvante potente para proteger o peptídeo e aumentar sua imunogenicidade. Para isso, nanocápsulas poliméricas (NCPs) de núcleo aquoso previamente desenvolvidas, tiveram sua produção otimizada e seus parâmetros físico-químicos avaliados. Após o estabelecimento das condições ótimas de produção, foram analisados o encapsulamento do SSIEFARL e testes para verificar a interação das NCPs brancas com cultura celular. As NCPs apresentaram distribuição unimodal, baixo PDI (0,23 ± 0,03), diâmetro médio de 267,5±51,6 e potencial zeta -29,6±2,2, com pH 7,2±0,3. As análises mostraram que aproximadamente 98% (97,7±1,5) das partículas presentes na amostra estão na escala nanométrica em uma concentração de 6,07x1010 NCPs/cm3. Os testes in vitro não evidenciaram citotoxicidade, e as NCPs brancas apresentaram capacidade de induzir migração celular ao local da injeção com tendência à drenagem dessas células aos linfonodos, sugerindo bom efeito adjuvante. A partir desses resultados pode-se sugerir que as NCPs podem ser utilizadas no desenvolvimento de um sistema adjuvante para a proteção do SSIEFARL e desenvolvimento de uma vacina contra o HSV-1.

A neuralgia pós-herpética é uma complicação da infecção pelo vírus da varicela zoster (VVZ). O nervo trigêmeo é acometido em cerca de 20-25% dos casos. Este estudo transversal teve como objetivo avaliar a sensibilidade orofacial de doentes com NPH trigeminal e identificar as características odontológicas da amostra. Foram utilizados os seguintes instrumentos de avaliação: exame sensitivo padronizado da face (algiometria, testes de sensibilidade térmica e táctil), questionário RDC/TMD, eixo I e II, (critérios de diagnóstico em pesquisa) para o diagnóstico de disfunção mandibular (DTM), protocolo para avaliação de dor orofacial (EDOF-HC), questionário McGill para avaliação de dor, exame periodontal (índice de placa - IP, índice de sangramento - IS, índice de profundidade clínica de sondagem - PCS e índice de profundidade clínica de inserção - PCI), e o índice CPO-D (somatória do número de dentes cariados, perdidos em razão de cárie dentária e restaurados). Houve diferença significativa entre o lado ipsolateral e o contralateral aos testes de sensibilidade no V1 com frio (p=0,038), vonFrey (p=0,008), alfinete (p=0,022) e algiometria (p=0,001); no V2 com frio (p=0,034), calor (p=0,019) e alfinete (p=0,037) e no V3 com frio (p= 0,042) e calor (p= 0,036); e na região intra-oral com alfinete (p=0,021). Dos 19 pacientes avaliados, 63,2% eram desdentados totais, a média do CPO-D foi de 28,3, a média do índice de placa foi de 48,0 e a média do índice de sangramento foi de 31,6. Neste estudo, 21% dos doentes relataram lesão na cavidade oral como sinal inicial do Herpes zoster. Com relação à condição músculo-esquelética da face (RDC/TMD), 78,9% tinha dor miofascial à palpação. Como conclusão destaca-se alteração de sensibilidade ipsolateral, mesmo nos ramos onde não houve erupção do VVZ, hipoalgesia em V1 e na mucosa oral ipsolateral; saúde oral comprometida, dor miofascial mastigatória e anormalidade da ATM na maioria dos doentes. / Postherpetic neuralgia is a complication after a varicella-zoster virus infection (VZV), affecting the trigeminal nerve in about 15-25% of the cases. This transversal study had the objective to evaluate the orofacial sensitivity and odontological characteristics of patients with trigeminal postherpetic neuralgia. The instruments used were: mechanical, thermal and pain sensory test, RDC/TMD questionnaire axis I and II (research diagnostic criteria for temporomandibular disorders), EDOF-HC protocol (for orofacial pain), McGill´s questionnaire, periodontal form (plaque index, blending index, clinical insertion and clinical deep level measures, to evaluate the periodontal disease as well the activity of disease) and DMFT index (Add of the number of teeth decayed, lost because caries and restored). There was significant difference compared the affected and the opposite side for tests of sensitivity at V1 with cold (p=0.038), vonFrey (p=0.008), pinpricks (p=0.022) and algiometric (p=0.001); at V2 with cold (p=0.034), heat (p=0.019) and pinpricks (p=0.037) and at V3 with cold (p = 0.042) and heat (p = 0.036) and in the intra-oral region with pinpricks (p=0.021). 63.2 % was edentulous, the average of the DMFT was 28.3, the average of the plaque\'s index was 48 and the average of the blending index was 31.6. In this study, 21 % of the patients reported lesion in the oral cavity like initial sign of the Herpes zoster. 78.9 % had myofascial pain with palpation (RDC/TMD). The main conclusions were alteration of sensitivity in the ipsolateral, even in the branches wherethere were no eruptions of the VVZ, hypoalgesia at V1 and oral mucosa ipsolateral; poor oral heath, masticatory myofascial pain and abnormality of the TMJ in the majority of the patients.

Herpes simplex virus (HSV) genes are expressed as at least three coordinately regulated gene classes during lytic infection. The delayed-early (DE) and late (L) genes require previous expression of one or more immediate-early (IE) genes for their own expression. The DE genes achieve maximal expression prior to viral DNA synthesis, while the L genes are maximally expressed after DNA replication (Honess and Roizman, 1974). A recombinant strain of HSV-1, X1N17, was used in this study to examine the effect of the gene promoter on the temporal expression of HSV genes. This virus carries a late viral promoter upstream from the coding sequences of a DE gene (thymidine kinase; TK). S1-mapping studies showed that X1N17-TK transcripts initiated under the control of the late promoter and accumulated with L class kinetics. However, the TK activity levels in X1N17-infected cells were not consistent with HSV late gene expression. Western blot analysis of infected cell proteins revealed that despite the high levels of X1N17-TK mRNA present in the cytoplasm late after infection, little TK polypeptide was being synthesized. This suggested that HSV genes are subject to post-transcriptional control mechanisms that modulate the efficiency of translation of viral transcripts. More specifically, it appears as though HSV-TK transcripts are not efficiently translated at late times in infected cells. / Thesis / Master of Science (MS)

Submitted by Biblioteca da Faculdade de Farmácia (bff@ndc.uff.br) on 2018-01-11T13:56:55Z No. of bitstreams: 1 FIORELLA ZIBETTI.pdf: 1848554 bytes, checksum: a4058071f9ee8b5dc5ab5c3abb07a729 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-11T13:56:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FIORELLA ZIBETTI.pdf: 1848554 bytes, checksum: a4058071f9ee8b5dc5ab5c3abb07a729 (MD5) / O óleo essencial de Rosmarinus officinalis (OERo) possui atividade anti- herpética in vitro. Entretanto, os constituintes químicos estão sujeitos à degradação por oxidação ou volatilização. Desta forma, surge a necessidade de desenvolvimento de sistemas carreadores para este ativo vegetal. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver nanoemulsões contendo OERo, comparando dois métodos de baixo aporte energético, titulação à frio e inversão de fases, quanto à estabilidade, teor do marcador químico, perfil de liberação in vitro, permeação e retenção cutânea in vitro e atividade anti-herpética in vitro. O OERo, utilizado nesse estudo, apresentou como constituinte majoritário o eucaliptol (27,9%), descrito na literatura por inibir o vírus Herpes simplex. As nanoemulsões e seus respectivos hidrogéis foram desenvolvidos e conservados em temperatura ambiente por 60 dias. Todas as formulações mantiveram-se estáveis durante o período estudado, apresentando tamanho de gotícula inferior a 200nm. Nenhum dos parâmetros avaliados apresentou diferença significativa entre os métodos utilizados, com exceção do teor, que foi menor em T0 nas nanoemulsões produzidas com aquecimento. Aas formulações apresentaram cerca de 60% de liberação do óleo em 150 minutos em ensaio in vitro. No estudo de permeação/retenção cutânea in vitro foi possível detectar o eucaliptol, por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, no meio de lavagem (~32%), estrato córneo (~12%) e meio receptor (~56%), não sendo observado na epiderme e derme. Para avaliação da atividade anti-herpética, as nanoemulsões apresentaram índice de inibição viral superior a 98,2% (HSV-1) e 99,5% (HSV- 2), apresentando maior especificidade pelo sorotipo 2. As diferentes metodologias não impactaram significativamente na atividade anti-herpética. Dessa forma, conclui-se que ambos os métodos são capazes de preparar nanoemulsões com características semelhantes e estudos in vivo serão necessários para melhor entendimento da atividade do óleo / The essential oil of Rosmarinus officinalis (OERo) has anti-herpetic activity in vitro. However, the chemical constituents are subject to degradation by oxidation or volatilization. Thus, indicating a need to develop carriers systems for this plant active.The aim of the present work was to develop nanoemulsions containing OERo, comparing two low energy methods, cold titration and phase inversion, in terms of stability, chemical marker content, in vitro release profile, in vitro skin permeation and retention, and anti-herpetic activity in vitro. The OERo used in this study presented as main constituent eucalyptol (27.9%), which was described in the literature for inhibiting the Herpes simplex virus. Nanoemulsions and their respective hydrogels were developed by two different methodologies and stored at room temperature for 60 days. All formulations remained stable during the study period, with particle size smaller than 200nm. None of the parameters evaluated showed a significant difference between the methods used, except for the chemical marker content, which was lower in T0 for the nanoemulsions prepared with heating. The in vitro release profile of the formulations showed 60% oil release in 150 minutes. In the in vitro skin permeation / retention study, it was possible to detect eucalyptol, by High Performance Liquid Chromatography, in washing liquid (~32%), stratum corneum (~12%) and receiving liquid (~56%), but none was detected in epidermis and dermis. In order to evaluate the anti-herpetic activity, the nanoemulsions showed a viral inhibition index higher than 98.2% (HSV-1) and 99.5% (HSV-2), presenting a better specificity for serotype 2. Despite the loss of volatile constituents of the oil by heating, the different methodologies did not significantly impact the antiherpetic activity. Thus, it could be concluded that both low-energy methods are able to prepare nanoemulsions with similar characteristics and it is necessary further studies to better understand the oil activity

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Previous healthcare-based studies have reported increasing herpes zoster (HZ) incidence over time; however, this could be an artifact of increased healthcare utilization. This study is a cross-sectional analysis of 15,103 respondents in the 2008 wave of the Health and Retirement Study (HRS) to evaluate changes in HZ incidence from 1940 to 2008. Negative binomial regression is used to model the effect of calendar year, age of onset of HZ, gender and race/ethnicity on HZ incidence. A nonparametric method based on B-spline basis expansion is used to model the effect of calendar year to avoid imposing a predetermined functional form and produce flexible and accurate estimates. This study demonstrates increasing HZ incidence from 1940 to 2008 using self-reported HZ. Although the reason for this increase remains unknown, this study supports the assertion that this trend is real and not an artifact of increasing healthcare utilization for HZ over time.

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Les plaques amyloïdes sont l’une des principales caractéristiques pathologiques de la maladie d’Alzheimer (MA). Elles sont composées de peptides amyloïdes-β (Aβ) 1-40 et 1-42 fibrillaires et ont été décrites comme responsable de la réponse inflammatoire et de la neurodégénérescence. L’Herpès simplex virus 1 (HSV-1) a été impliqué comme facteur de risque de la MA et retrouvé à l’intérieur des plaques amyloïdes. Des données récentes suggèrent que les peptides Aβ possèdent une activité antimicrobienne et antivirale in vitro. La première partie des travaux décrits dans cette thèse concerne l’étude du rôle antiviral des peptides Aβ contre les virus HSV-1. Pour cela, des cellules fibroblastiques, épithéliales et neuronales ont été exposées aux peptides Aβ40 et Aβ42 et infectées avec le virus HSV-1. L’analyse quantitative par PCR a montré que les peptides Aβ40 et Aβ42 inhibent la réplication des virus HSV-1, qui possèdent une enveloppe mais n’inhibent pas l’infection par les adénovirus-5 qui n’en possèdent pas. Nos résultats ont aussi montré que les peptides interagissent directement avec les virus HSV-1 dans un modèle acellulaire et inhibent leur entrée dans les cellules. Dans une deuxième partie de l’étude, nous avons utilisé un modèle de cocultures de lignées cellulaires de neuroblastomes (H4) et microgliales (U118-MG) en tant que modèle minimal in vitro afin de déterminer si les cellules H4 produisent des peptides Aβ et si cette production induit une protection antivirale contre le virus HSV-1. Les résultats ont montré que les cellules H4 sécrètent Aβ42 en réponse à une infection par les virus HSV-1 et que les cellules U118-MG internalisent le peptide Aβ42. De plus, le peptide Aβ42 exogène induit une forte production de cytokines pro-inflammatoires mais l’infection des cellules par les virus HSV-1 n’augmente pas significativement cette production. Par ailleurs, la protection antivirale du peptide Aβ42 a été confirmée lors d’expériences de transferts impliquant des milieux de cultures conditionnés provenant de cellules H4 infectées par le virus HSV-1. Ces milieux confèrent une protection Aβ-dépendante, contre les infections par les virus HSV-1 dans des essais de nouvelles cultures de cellules H4. Dans le but de mettre en évidence le mécanisme responsable de l’effet antiviral des peptides Aβ, nous avons proposé que l’homologie de séquence entre les peptides Aβ et la région proximale transmembranaire de la glycoprotéine de fusion B (gB) du virus HSV-1 pourrait être responsable de l’interférence des peptides Aβ avec la réplication des virus HSV-1 en s’insérant dans l’enveloppe externe des virus. Cette explication a été appuyée par des expériences de FRET. Les résultats ont montré que l’interaction peptide Aβ42 et gB-GFP implique une distance de 10 nm ou moins, suggérant que le peptide Aβ42 peut s’insérer dans l’enveloppe virale. L’ensemble de nos données suggère qu’une production de peptides Aβ par les neurones pourrait les protéger lors d’une infection par les virus HSV-1 latents et, contre d’autres pathogènes. Par contre, une surproduction pourrait contribuer à la formation des plaques amyloïdes, expliquant ainsi pourquoi les infections ont un rôle dans la pathogénicité de la forme sporadique de la MA.