Universiẗat, Diss., 2000--Bonn.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000407730-Texto+Completo-0.pdf: 978627 bytes, checksum: 207551daea7acbf96e0c911484083687 (MD5) Previous issue date: 2008 / Herpes Simplex Vírus-1 (HSV-1) is a member of Herpesrviridae family and alphaherpesvirinea subfamily widely spread among human beings. This virus begins the infection through epithelial cells from skin and mucosal surface reaching the peripheral nervous system. HSV-1 infects the oral mucosa and establishes latency in trigeminal ganglia. Sometimes by action of endogenous or exogenous factors these viruses returns to active form leading to viral reactivation. During this process the virus can relocalizes on oral mucosal (hepetial genvivostomatites), optical nerve (ocular keratites) and central nervous system (encephalitis). In case of pregnancy, the reactivation could be asymptomatic; it could be dangerous because the virus can infect the baby during the childbirth, leading to neurological conditions and sometimes death. The process of latency is governed by latency associated transcripts (LAT genes) an immunological response as T cells. The cells that block the viruses from reactivation from the nerve are the memory CD8+ T cells. These lymphocytes stay adsorbed to neuron membrane interacting with the epitope SSIEFARL from a gB glycoprotein of HSV-1 envelop. SSIEFARL CD8+ T lymphocytes produces cytokines as IFN-у that penetrates into neuron and blocks the expression of genes involved in virion assembly and formation. When the number of CD8+ T cells reduces the viruses returns to active form. The proliferation and function of CD8+ T cells is controlled by cytokines, mainly IL-15 and IL-21. Several studies have shown that this cytokines have crucial a role in homeostatic proliferation of CD8+ T cells. In this study plasmid coding to IL-15 and IL-21 were elaborated to investigate the role of these cytokine on HSV-1 memory CD8+ T cell proliferation. In vitro, pIL-21 increased the frequency of CD8+ T cells in presence or absence of TCR stimulation. When administered during effector phase of HSV-1 infection pIL-15 and pIL-21 increased the numbers of antigen specific CD8+ T cells that produce IFN-у. For memory studies an adoptive transfer system was applied. SSIEFARL transgenic cells from CD90. 2+ donor mice were transferred to CD90. 1+ holster mice. The CD90. 1+ holster was infected with HSV-1 intraperitoneally and tread with each cytokine plasmid or combination, gB coding plasmid was used as antigen source. The resulted showed the pIL-15 or pIL-21 alone can induce proliferation of HSV-1 memory CD8+ T cells and that antigen did not have significant influence when provide together with the cytokines plasmids. However, the combination of pIL-15, pIL-21 and pgB together was more efficient to cell numbers and IFN-у production. / Herpes Simplex Vírus-1 (HSV-1) é um membro da família Herpesviridae e subfamília alfaherpesvirinea bastante disseminado entre os seres humanos. Esse vírus inicia seu processo de infecção a partir das células epiteliais da superfície da pele e mucosas, atingindo o sistema nervoso periférico. O HSV-1 inicia a infecção através da mucosa oral e fica localizado na forma latente no nervo trigêmio da face, algumas vezes, pela ação de fatores endógenos ou exógenos, esse vírus volta a sua forma ativa, ocasionando a reincidiva. Nesse processo de reativação do vírus ele pode se localizar, na mucosa oral (gengivoestomatite herpética), no nervo óptico (queratite herpética) e no sistema nervoso central (encefalite). No caso da gestante, a reativação herpética pode ser assintomática, o que pode infectar o filho no momento do parto, levando a danos neurológicos irreversíveis ou a morte. O processo de latência é coordenado por dois mecanismos principais, a expressão dos genes LAT e a resposta imunológica. As células da resposta imune que bloqueiam a reativação viral a partir do nervo são os linfócitos T CD8+ de memória. Esses linfócitos ficam justapostos à membrana do corpo celular do neurônio, interagindo com o epítopo SSIEFARL de uma glicopoteína gB do envelope viral. Os linfócitos T CD8+ SSIEFARL específicos produzem citocinas, como IFN-у, que penetram no neurônio e impedem a expressão de genes que estão envolvidos na construção do capsídeo, determinantes para formação de novos vírions. Quando o número dessas células diminui, o vírus volta a sua forma ativa. A proliferação e função das células T CD8+ é controlada por citocinas, principalmente a IL-15 e a IL-21. Muitos estudos indicam que elas têm um papel na proliferação homeostática de células T CD8+.Nesse trabalho, foram elaboradas construções gênicas com o DNA da IL-15 e da IL-21 para avaliar o potencial dessas citocinas na otimização da resposta T CD8+ de memória ao HSV-1. In vitro, a IL-21 aumentou a freqüência de células T CD8+, com ou sem estimulação de TCR. Na fase efetora, a IL-15 e IL-21 aumentaram os números de células T CD8+ antígenoespecíficas produtoras de IFN-у. Para os estudos de memória foi utilizado um sistema de transferência de células SSIEFARL transgênicas de camundongos CD90. 2 doadores para camundongos CD90. 1 receptores. Os camundongos receptores foram infectados com HSV-1 pela rota intraperitoneal e tratados com o plasmídeo contendo de cada citocina ou a combinação deles, um plasmídeo que codificava a glicoproteína gB do HSV-1 foi utilizado com fonte de antígeno Os resultados mostraram que cada pIL-15 ou pIL-21 isoladamente induz a proliferação de células T CD8+ de memória ao herpes e que a administração do antígeno não teve grande influência. Por outro lado, a combinação de pIL-15, pIL-21 e pgB foi mais eficiente, tanto no aumento dos números de células T CD8+, quanto na expressão de IFN-у.

Patients with inflammatory bowel disease, particularly those on systemic immunosuppression, have been shown to be at increased risk of herpes zoster infection. Herpes zoster (also known as shingles) is a condition resulting from reactivation of varicella zoster virus (VZV), which causes chickenpox. VZV reactivation is thought to be due to impairment of cell-mediated immunity. Some immunosuppressive agents have been shown to be associated with higher risk for herpes zoster reactivation than others. Until recently, the only vaccine for herpes zoster was a live-attenuated vaccine, which is contraindicated in most immunosuppressed IBD patients due to their immunosuppressive therapy. Recently, an inactivated subunit vaccine has been developed and investigated for use in immunocompetent adults, as well as select groups of immunocompromised individuals. This novel vaccine has not yet been studied in IBD patients but holds promise for use in this population. The proposed study is a single-center prospective pilot study comparing immunogenicity and safety of the inactivated herpes zoster vaccine in patients with IBD (ulcerative colitis or Crohn’s disease) treated with high-level combination immunosuppression (both anti-TNF biologics and immunomodulators) to those not on systemic immunosuppressive therapy (5-aminosalicylates or no treatment). Investigators will compare cell-mediated responses between groups using an intracellular cytokine staining assay with flow cytometry assessed prior to vaccination and at four time points up to 12 months after completion of the immunization sequence. Adverse effects will also be monitored. This study will help to identify whether the novel herpes zoster vaccine is immunogenic and safe for use in IBD patients and whether these parameters are significantly impacted by intensity of immunosuppressive treatment. An additional goal is to provide preliminary data with which to develop future studies of vaccine immunogenicity and efficacy in this target population.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T16:44:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 285381.pdf: 3069803 bytes, checksum: 27509fdda22d1b53966b6cfe0bc50f43 (MD5) / As propriedades fitoquímicas e farmacológicas da Achyrocline satureioides, marcela, espécie nativa da América do Sul, vêm sendo estudadas há mais de duas décadas. Devido aos resultados interessantes obtidos, diversos estudos visando o desenvolvimento galênico de produtos fitoterápicos aproveitando o potencial terapêutico demonstrado por esta planta vêm sendo conduzidos. Neste sentido, um extrato seco nebulizado da planta foi desenvolvido e otimizado, possibilitando o desenvolvimento de formas farmacêuticas sólidas. Este extrato foi recentemente avaliado quanto à atividade frente ao HSV-1 e apresentou-se promissor para o tratamento do Herpes simples. Considerando o exposto, este trabalho teve por objetivo o desenvolvimento e a avaliação de comprimidos mucoadesivos contendo o extrato seco previamente desenvolvido visando ao tratamento bucal do Herpes simples. Para isso, o ESN foi caracterizado quanto aos teores de umidade e de quercetina (marcador químico), apresentando valores de 2,47% ± 0,06 e 18,80 mg/g ± 0,07, respectivamente. Os excipientes, Carbopol®, quitosana e hidroxipropilmetilcelulose, polímeros hidrofílicos com características distintas (iônico, catiônico e não-iônico) e o estearato de magnésio (lubrificante), foram caracterizados quanto ao teor de umidade e identificados por espectroscopia de infravermelho. Após isso, foi realizado um delineamento experimental para avaliar as formulações obtidas a partir de misturas de ESN com os polímeros ou suas blendas, sendo estudadas suas características tecnológicas visando à obtenção de comprimidos por compressão direta. No entanto, as misturas apresentaram fluxo e compactabilidade inadequadas. Assim, um segundo delineamento experimental foi traçado, e o método de granulação por via seca foi estabelecido, produzindo comprimidos com propriedades físicas adequadas. As formulações elaboradas foram avaliadas quanto às propriedades físicas, químicas e físico-químicas, sendo todas consideradas aprovadas segundo os critérios da Farmacopéia Brasileira (1988). Uma metodologia por CLAE foi desenvolvida e validada a fim de estabelecer com segurança o teor do marcador químico nos comprimidos. Em seguida, foram avaliados o intumescimento e erosão in vitro das matrizes. A partir desses resultados, inseridos no software, uma formulação otimizada foi proposta, a qual foi também caracterizada. A formulação otimizada apresentou propriedades físicas, químicas e físico-químicas adequadas, e valores de intumescimento (76,16 % em 8h) e erosão (5,42 % em 8 h) satisfatórios, conforme previsto pelo delineamento. A seguir, tanto a formulação otimizada quanto as demais foram avaliadas quanto ao tempo de mucoadesão, que foi considerado satisfatório e depende das características estruturais dos diferentes polímeros. Por fim, todas as formulações foram avaliadas quanto ao perfil e cinética de liberação in vitro de quercetina, empregando-se o método de cubas com agitação de cesta. A maioria das formulações apresentou uma liberação bastante prolongada do marcador, cuja cinética foi caracterizada como de primeira ordem, ou seja, dependente da quantidade de flavonóide remanescente na matriz. A liberação da quercetina a partir da formulação otimizada também foi prolongada (cerca de 50,19 % em 24 h) e obedeceu a uma cinética de ordem zero, ou seja, independente da quantidade remanescente na matriz.

Herpes simplex virus-1 (HSV-1) has a large double-stranded DNA genome encased within an icosahedral capsid. The capsid is surrounded by a protein-rich layer, termed tegument, and a membranous envelope containing viral glycoproteins. HSV-1 genome replication and encapsidation occurs in the nucleus, after which, DNA-loaded capsids enter the cytoplasm where they undergo tegumentation and assembly. This thesis presents a structural and functional investigation of two HSV-1 tegument proteins, UL7 and UL51 that are conserved across all herpesviruses. Deletion of UL7 or UL51 results in impaired viral replication, a small plaque phenotype and an accumulation of unenveloped capsids in the cytoplasm, the latter of which is indicative of a defect in tegumentation and/or secondary envelopment. Similar phenotypes have been observed upon deletion of homologous proteins in pseudorabies virus and human cytomegalovirus, suggesting a conserved role for these proteins. This thesis presents evidence for the formation of a UL7-UL51 complex in transfected and infected cells. Pull-down experiments using recombinant UL7 and UL51 protein purified from E. coli demonstrated that the interaction is direct, and mapped the UL7-binding region within UL51. The interaction was shown to be conserved between UL7 and UL51 homologues from murid herpesvirus, ORF42 and ORF55, respectively. The UL7-UL51 complex was purified from E.coli and, after optimisation of the purification protocol and the UL51 construct, a pure protein sample was obtained that was suitable for crystallisation trials. Two conditions were identified that produced reproducible crystals. These crystals proved to be thin and fragile, preventing their analysis by X-ray diffraction. Optimisation of the crystallisation conditions to produce more robust crystals and/or in situ diffraction measurements may yet yield X-ray diffraction data for the complex. Host-cell binding partners for UL7 and UL51 were identified by yeast-two-hybrid screen and quantitative proteomics (SILAC). An interaction between UL51 and the G-Box domain of the centriole protein CPAP was identified by Y2H screen, and validated by immunoprecipitation from transfected cells and in pull-down experiments using recombinant proteins purified from E. coli. The CPAP-binding region within UL51 was mapped and shown to resemble a motif present in the cellular protein STIL that mediates an interaction between STIL and CPAP. Two UL51 point-mutations within the putative CPAP-binding motif blocked the interaction between UL51 and the CPAP G-box domain. A mutant HSV-1 virus carrying these UL51 mutations was generated, but no difference was evident between single-step growth curves of wild-type HSV-1 and the UL51 mutant. Host-cell proteins pontin and reptin were identified as putative UL7/UL51 interaction partners in two SILAC screens. Purified GST-tagged UL7-UL51 complex was able to interact with pontin and reptin. However, it is likely that the interaction is non-specific since pontin and reptin were also found to bind a misfolded protein in a similar manner.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:01:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 223442.pdf: 486908 bytes, checksum: 416277d8611ae8789a29052571a0b516 (MD5) / Os produtos naturais constituem uma fonte inesgotável de compostos com atividades farmacológicas promissoras, incluindo ação antiviral. Os materiais protéicos são encontrados em abundância na natureza e têm atividades biológicas como antibacteriana, antifúngica, antitumoral e antiviral comprovadas. Neste trabalho, a citotoxicidade (CC50) e a atividade antiviral (CE50) de peptídeos antimicrobianos (PAM) e hemolinfa de ostras (Crassostrea gigas e C. rhizophorae), foram avaliadas, em células VERO, HEp-2 e MA104 e contra os vírus herpes simplex tipo 1(HSV-1/KOS), adenovírus sorotipo 5 (AdV-5), rotavírus símio SA-11 (RV-SA11), pelo ensaio colorimétrico do MTT, utilizando diferentes estratégias. Para a hemolinfa das ostras também foi realizado o estudo da ação virucida. Dentre os PAM testados, a peneidina apresentou o maior índice de seletividade (IS= CC50/ CE50) para o HSV-1/KOS (IS = 64). A hemolinfa de ostras apresentou ação virucida contra os três vírus avaliados neste estudo, também apresentando atividade anti-herpértica (IS = 19,76/C. rhizophorae) e antiadenovírus (IS = 5,33/C. gigas), sem, no entanto, exibir ação antiviral contra o rotavírus. Foram observados, em alguns casos, baixos IS, associados a altas porcentagens de inibição da replicação viral, mais evidente no grupo dos PAM. Estudos adicionais devem ser realizados a fim de se confirmar a atividade antiviral e prováveis mecanismos ação.

A atividade antiviral de compostos flavonoídicos tem sido amplamente investigada nos últimos anos. Nesse contexto, a primeira etapa da presente tese teve por objetivo avaliar a atividade anti-herpética in vitro dos principais isoflavonóides de Glycine max (soja): genisteína, daidzeína, gliciteína e cumestrol. Dentre os isoflavonóides investigados, a genisteína e o cumestrol mostraram uma interessante atividade frente aos vírus HSV-1 (cepa KOS e 29R, sensível e resistente ao aciclovir, respectivamente) e HSV-2 (cepa 333), interferindo em diferentes etapas do ciclo de replicação dos vírus. Devido à reduzida hidrossolubilidade desses isoflavonóides, foi proposta a sua incorporação em nanoemulsões de uso tópico. As formulações foram otimizadas através de um experimento fatorial completo do tipo 23 . O efeito dos fatores tipo de óleo (óleo de rícino ou miristato de isopropila), co-tensoativo iônico (oleilamina ou ácido olêico) e fosfolipídeo (DSPC ou DOPC) sobre as propriedades das nanoemulsões e a retenção da genisteína na pele de orelha suína foi investigado. Nanoemulsões compostas de miristato de isopropila/ oleilamina/DOPC apresentaram um menor diâmetro de gotícula e uma maior retenção de genisteína na pele de orelha suína enquanto que a combinação miristato de isopropila/oleilamina/DSPC mostrou o menor índice de polidispersão. A viscosidade das formulações selecionadas foi ajustada através do uso de hidroxietilcelulose visando à obtenção de produtos de uso tópico, obtendo-se hidrogéis de comportamento pseudoplástico. Na sequência, um conjunto de resultados obtidos demonstrou que a composição das formulações (especialmente o fosfolipídeo DOPC e o agente espessante hidroxietil celulose) pode influenciar a liberação e a retenção dos isoflavonóides em mucosa esofágica suína. A integridade da mucosa também desempenha um papel no aumento da permeação/retenção do cumestrol, conforme ilustrado nas imagens de microscopia confocal, utilizando vermelho do Nilo como marcador fluorescente. De maneira geral, a incorporação dos isoflavonóides nas nanoemulsões aumenta a atividade anti-herpética desses compostos in vitro. O conjunto dos resultados demonstra que as formulações desenvolvidas são potenciais carreadores de uso tópico para genisteína e cumestrol no tratamento das infecções herpéticas. / The antiviral activity of flavonoid compounds has been extensively investigated in recent years. In this context, the first step of this study was to evaluate the antiherpes activity in vitro of the main isoflavonoids of Glycine max (soybean): genistein, daidzein, glycitein and coumestrol. Among the investigated isoflavonoids, genistein and coumestrol showed interesting activity against HSV-1 (KOS and 29R strains, which are acyclovir-sensitive and acyclovir–resistant strains, respectively) and HSV-2 (333 strain), interfering at different stages of the virus replication cycle. Due to the low hydrosolubility of these isoflavonoids, their incorporation into topical nanoemulsions was proposed in this study. The formulations were optimized through a 23 full factorial design. The factors effect of oil type (castor oil or isopropyl myristate), ionic co-surfactant (oleylamine or oleic acid) and phospholipid type (DSPC or DOPC) on physicochemical properties and genistein retention into porcine ear skin was investigated. Nanoemulsions composed of isopropyl myristate/ DOPC/oleylamine showed the smaller particle size and higher genistein retention into skin, whereas the formulation composed of isopropyl myristate/DSPC/oleylamine exhibited the lower polydispersity index. The viscosity of selected formulations was adjusted with hydroxyethyl cellulose to obtain topical products, which showed nonNewtonian behavior. In sequence, a set of results showed that formulations composition (especially the phospholipid DOPC and the thickening agent hydroxyethyl cellulose) could influence the release and retention of isoflavonoids in porcine esophagus mucosa. The integrity of mucosa plays a role on the increase of coumestrol permeation/retention, according to confocal microscopy images, using Red Nile as fluorescent label. In general terms, the incorporation of isoflavonoids into nanoemulsions increases the antiherpes activity of these compounds in vitro. The overall results show that the formulations developed in this study are potential topical carriers for genistein and coumestrol in the treatment of herpes infections.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-04-18T04:09:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 344471.pdf: 3380541 bytes, checksum: 48076199efee9bced9529cf086a86370 (MD5) Previous issue date: 2016 / Estudos utilizando folhas de Cecropia glaziovii Snethl evidenciaram grande potencial anti-herpético relacionado, principalmente, aos compostos fenólicos presentes nesta espécie. Sendo assim, o objetivo do trabalho foi aliar o potencial terapêutico desta planta associado a novas estratégicas tecnológicas, tal qual desenvolvimento de nanopartículas (NPs) a serem empregadas na elaboração de um medicamento fitoterápico. Neste trabalho, o preparo de fração enriquecida em flavonoides (FEF-Cg) a partir desta planta foi padronizado. A avaliação da atividade antiviral contra o vírus HSV-1 da FEF-Cg evidenciou um índice de seletividade > 106,33. NPs de PLGA contendo a FEF-Cg, preparadas por dupla emulsão seguida da evaporação do solvente, apresentaram diâmetro médio de 205,2 ± 1,2 nm, PDI 0,15 ± 5,44, potencial zeta de -35,59 ± 5,33 mV e valores de EE de 64,65 ± 3,09%, com um teor de 0,65 ± 3,14% em fração. Um estudo de estabilidade, realizado em temperatura ambiente (25oC) por 60 dias, demonstrou maior estabilidade para o sistema contendo os surfactantes monooleato de sorbitano e poloxamer 188 nas fases orgânica e aquosa, respectivamente. Estudos do perfil de liberação e da degradação do polímero demonstraram uma liberação controlada da FEF-Cg através da matriz polimérica e uma redução significante na massa molar do polímero durante 21 dias. Estas NPs não exibiram citotoxicidade em células Vero nas concentrações testadas e apresentaram um potencial efeito anti-herpético contra o vírus HSV-1. Filmes e hidrogéis termossensíveis de quitosana foram preparados com quatro concentrações de NPs de PLGA (1, 3, 5 e 10%, m/m) e caracterizados quanto a sua morfologia, propriedades químicas e mecânicas e citotoxicidade. Diferentes concentrações de NaHCO3 foram utilizadas na preparação de hidrogel de quitosana visando obter um hidrogel termossensível homogêneo. A caracterização das formulações mostrou que todos os hidrogéis exibiram propriedades termossensíveis alterando de um comportamento líquido à 25oC para um comportamento de gel à 37oC. Em resumo, os filmes e hidrogéis nanocompósitos demonstraram ser promissores como sistemas de liberação no tratamento de infecções por herpes.<br> / Abstract : Studies employing Cecropia glaziovii Snethl leaves have shown great potential regarding its antiherpes activity, mainly related to the phenolic compounds present in this species. Thus, the main goal of this work was to combine the therapeutic potential of this species to new technological strategies targeting at the development of an herbal nanoparticulate system (NPs) to be used in the preparation of a phytotherapeutic formulation. In this work the preparation procedures for the EFF-Cg were standardized. The antiviral activity was tested against HSV-1, the results for selectivity index values was > 106.33. PLGA NPs containing the EFF-Cg were prepared using the double-emulsion evaporation method and it presented a mean diameter of 205.2 ± 1.2 nm, PDI of 0.15 ± 5.44, zeta potential of -35.59 ± 5.33 mV, EE value of 64.65 ± 3.09% and EFF-Cg load of 0.65 ± 3.14%. A stability study of the formulations performed in room temperature (25oC) for 60 days, demonstrated highest colloidal stability using the sorbitan monooleate and the poloxamer 188 surfactant in the organic and aqueous phases, respectively. Drug delivery study and polymer degradation demonstrated a controlled release of the drug through the polymer matrix and a significant reduction of molecular weight of the polymer at 21-day period. These NPs not exhibit cytotoxicity over Vero cells and presented a potential antiherpes effect against HSV-1 virus. The chitosan films and chitosan thermosensitive hydrogels were prepared with four different concentrations of PLGA NPs (1, 3, 5 and 10%, w/w) and were characterized in term of morphology, chemical, mechanical properties and cytotoxicity. Chitosan thermosensitive hydrogel was prepared with different NaHCO3 concentrations to choice the optimal condition to obtain homogeneous thermosensitive hydrogel. The formulations were characterized and the results showed that all hydrogels exhibited thermosensitive property, changing from liquid-like behavior at 25°C to gel-like behavior at 37°C. In summary, films and hydrogels nanocomposites demonstrated a promising system for the effective drug delivery in the treatment of herpes infections.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-16Bitstream added on 2014-06-13T20:44:07Z : No. of bitstreams: 1 alexandrino_b_dr_jabo.pdf: 403623 bytes, checksum: a596d9d91434dd37dd44458b1b70eb74 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A presente pesquisa teve como objetivo avaliar a utilização de cobaias e caprinos para teste de vacinas contra o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e os vírus da diarreia viral bovina tipos 1 (BVDV-1) e 2 (BVDV-2). Inicialmente foi realizada a infecção experimental em cobaias e bovinos, com esses três vírus, para verificar a máxima resposta imunogênica em ambas as espécies. As médias geométricas dos títulos de anticorpos (GMT) dos bovinos foram altas para todos os agentes virais; em cobaias foi possível observar que o BoHV-1 induziu elevadas GMT, para o BVDV-1 a indução foi moderada, enquanto para o BVDV-2 foi baixa, podendo comprometer a viabilidade dos testes antigênicos. Após essa etapa, foram vacinados bovinos, cobaias e caprinos, com seis vacinas comerciais de antígenos inativados, para verificar a indução de anticorpos por estímulo vacinal. Nos bovinos, as GMT obtidas para o BoHV-1 mostraram que as vacinas utilizadas promoveram a indução moderada na resposta imunológica, e apenas três delas foram consideradas satisfatórias. Para o BVDV-1, apenas uma vacina pode ser considerada eficiente, e em relação ao BVDV-2 nenhuma delas poderia ser assim classificada. Os resultados da vacinação com os caprinos mostraram que, apesar de os animais serem reagentes ao BoHV-1 no início do experimento, as formulações foram capazes de induzir a produção de anticorpos com títulos elevados contra os três vírus estudados. As cobaias, por sua vez, receberam doses fracionadas de uma vacina comercial nacional e, das frações testadas, 3,2mL foi a que apresentou melhores resultados, sendo esta estabelecida para testar as demais vacinas nesta espécie. Depois da imunização, os resultados mostram que para o BoHV-1 as GMT foram altas; em relação ao BVDV-1, apenas duas vacinas foram capazes de induzir... / The present research had as objective to evaluate the use of guinea pigs and goats in test of vaccines against the bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) and the bovine viral diarrhea viruses types 1 (BVDV-1) and 2 (BVDV-2). First, an experimental infection was realized in guinea pigs and bovines, using these three viruses, to verify the maximum immune response in both species. The geometric means of antibodies titres (GMT) for bovines were high for the viral agents; in guinea pigs was possible to observe that the GMT induced by BoHV-1 was high, by BVDV-1 was moderate and by BVDV-2 was weak and could compromise the viability of antigenic tests. After this stage, the bovines, guinea pigs and goats were vaccinated using six commercial vaccines with inactivated antigens to verify the induction of antibodies production by vaccinal stimulus. In bovines, the GMT obtained for BoHV-1 showed the vaccines induced a moderate immune response, being only three of them considered satisfactory. For BVDV-1 only one and for BVDV-2 none of them can have the same classification. The results obtained with the goats, despite they were positive to BoHV-1 in the sorting, showed the formulations were able to induce high antibody production against the three virus studied. The guinea pigs, on the other hand, received fractional doses of a commercial vaccine well-established in the domestic trade and, from the fractions tested, 3.2 mL showed the best results, being established to test the other vaccines. After immunization, the results of GMT for BoHV-1 was high; relating to BVDV-1, only two vaccines were capable to induce antibodies production, but their GMT were weak; and there was no immune response against BVDV-2. Thus, goats can be ... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-30Bitstream added on 2014-06-13T19:44:12Z : No. of bitstreams: 1 pedrazaordonez_fj_dr_jabo.pdf: 707975 bytes, checksum: 9868dbb427049fb448644457810a5e65 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O BoHV-5 é um alfa herpesvírus neurovirulento, que causa meningoencefalite fatal em bezerros. A morbidade é baixa contrastando com uma alta mortalidade, embora alguns animais possam-se recuperar. Varias pesquisas tem sido desenvolvidas para determinar a patogênese deste tipo de doença. No presente trabalho coelhos experimentalmente infectados com o Herpesvírus Bovino 5 (BoHV-5) foram submetidos a análise imuno-histoquímica e molecular, mediante a real time PCR, para descrever a resposta inflamatória em seis diferentes regiões do seu encéfalo. Todos os animais mostraram sinais neurológicos severos e foram eutanasiados vinte dias após a infecção inicial. Microscopicamente foi descrita uma meningoencefalite não supurativa, caracterizada por meningite, manguitos perivasculares mononucleares e malacia, mas não foram observados corpúsculos de inclusão viral. Os linfócitos T constituíram uma alta percentagem das células mononucleares envolvidas na neuroinflamação. Não foram encontradas diferenças significativas na resposta astrocitária quando comparados o grupo experimental e o grupo controle (p > 0,05). A quantificação viral pela qPCR permitiu achar partículas virais em todas as regiões encefálicas, de todos os animais do grupo experimental, sendo diretamente proporcional a quantidade de vírus e a visualização de lesões histológicas no encéfalo dos coelhos, assim como a imunodetecção do BoHV-5 pela imunohistoquímica. É possível suspeitar de um forte envolvimento do sistema imunitário do hospedeiro que fez a maioria dos animais reagir de maneira diferente ante a mesma quantidade do inóculo viral ministrado / The BoHV-5 is a neurovirulent alpha herpesvirus, which causes fatal meningoencephalitis in calves. The morbidity is low in contrast with a high mortality, although some animals can heal. Several surveys have been developed trying to better understand the pathogenesis of this type of disease. In this study rabbits experimentally infected with bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) were subjected to immunohistochemical and molecular analysis by real time PCR, to describe the inflammatory response in six different regions of his brain. All animals showed severe neurological signs and were euthanized twenty days after the initial infection. Microscopically was described a meningoencephalitis characterized by nonsuppurative meningitis, mononuclear perivascular cuffs and malacia, but were not observed viral inclusion corpuscles. T lymphocytes constituted a high percentage of mononuclear cells involved in neuroinflammation and there were no significant differences in astrocyte response when comparing the experimental and control groups (p> 0.05). The viral quantification by qPCR allowed found viral particles in all brain regions of all experimental animals, being directly proportional to the amount of virus and the visualization of lesions in the brain of rabbits, as well as immunodetection of BoHV-5 by immunohistochemistry. It is possible to suspect a strong engagement of the host immune system that made the majority of animals respond differently compared to the same administered amount of viral inoculum