O controle da fertilidade é obtido principalmente pela inibição da ovulação por meio da atividade combinada de dois componentes principais: estrogênio e progestina. Desta forma, novas formulações vêm sendo desenvolvidas com baixa dose de etinilestradiol associado a um novo agente progestógeno, a drospirenona, com o objetivo de garantir equilíbrio entre eficácia, segurança e controle de ciclo menstrual. Este trabalho tem como objetivo desenvolver, validar e comparar métodos analíticos para a identificação e quantificação de etinilestardiol e drospirenona presentes em uma mesma formulação por cromatografia em fase líquida de alta eficiência (CLAE) e a eletroforese capilar (EC). O método por CLAE, foi realizado empregando-se uma coluna LiChoCART® 100RP - C18, (125 x 4 mm) 5 µm, fase móvel constituída por MeCN/H2O 50:50 (v/v) e vazão de 1.0 mL min. Utilizou-se um detector UV 200 nm para drospirenona e um de fluorescência λex = 280 nm e λem = 310 nm, para o etinilestradiol. O método por EC foi validado utilizando-se como eletrólito, tampão de tetraborato de sódio 30 mM, dodecil sulfato de sódio 20 mM e acetonitrila 30% a pH 9,2, capilar de sílica fundida de 31,2 cm sendo 21 cm efetivos, com 75 µm de diâmetro interno. O método por CLAE apresentou um coeficiente de correlação (r2) de 0,9989 para o etinilestradiol e 0,999 para a drospirenona. No método por EC, o coeficiente de correlação (r2) encontrado foi de 0,9988 para o etinilestradiol e 0,998 para a drospirenona. Os métodos podem ser considerados eficientes e confiáveis para serem empregados em análise de rotina para controle de qualidade destes produtos farmacêuticos. / The fertility control is achieved mainly by inhibiting ovulation through the combined activity of two main components: estrogen and progestin. Thus, new formulations have been developed associating appropriately low dose of ethinylestradiol to a new drug, the drospirenone, in order to ensure the balance between efficacy, safety and cycle control. The objective of this research was to develop, to validate and to compare two analytical method for separation and quantification of ethinylestardiol and drospirenone using high performance liquid chromatography and capillary electrophoresis (CE). The HPLC method, was performed using a LiChoCART® 100RP - C18, (125 x 4 mm) 5 µm column, a mobile phase constituted of acetonitrile:water (50:50 v/v) and flow rate of 1.0 mL min. UV detection was made for drospirenone at 200 nm coupled with a fluorescence detector at λex= 280 nm and λem = 310 nm for ethinylestradiol. The CE method was validated using a solution of sodium tetraborate buffer 30 mM, sodium dodecil sulphate 20 mM and acetonitrile 30%, pH 9.2 and a fused silica capillary of 31,2 cm with 21 cm effective and 75 µm of diameter. The HPLC method showed a correlation coefficient (r2) of 0.9989 for ethinylestradiol and 0,999 for drospirenone. For CE method, the correlation coefficient was (r2) 0,9988 for ethinylestradiol and 0,9989 for drospirenone. The methods showed to be efficient and reliable, and can be used in routine analysis for quality control of these pharmaceutical preparations.

O objetivo desta pesquisa foi desenvolver, validar e comparar métodos analíticos para separação e quantificação de citrato de colina e acetilmetionina em formulações injetáveis por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC). O método por CLAE, com o qual foi possível quantificar e separar simultaneamente, o citrato de colina e a acetilmetionina, foi realizado empregando-se uma coluna cromatográfica C18, 250 x 4,6 mm, 5µm, Shim-Pack® VP-ODS e fase móvel constituída por tampão fosfato de potássio 25 mM pH 5,7: acetonitrila: metanol (88:10:2 v/v/v). O método por EC foi validado utilizando-se como eletrólito, tampão de tetraborato de sódio 20 mM a pH 9,2 e capilar de sílica fundida de 40,2 cm, sendo 30 cm efetivos, com 75 µm de diâmetro interno. O método por CLAE apresentou um coeficiente de correlação (r) de 0,9996 para o citrato de colina e 0,9998 para a acetilmetionina. No método por EC, o coeficiente de correlação (r) encontrado foi de 0,9996 para a acetilmetionina. Os métodos podem ser considerados eficientes e confiáveis para serem empregados em análises de rotina de controle de qualidade de soluções injetáveis contendo a associação dos dois fármacos selecionados para o estudo. / The objective of this research was to develop, to validate and to compare two analytical methods for separation and quantification of choline citrate and acetylmethionine in injectable formulations by high performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE). The HPLC method which enables the separation and simultaneous quantitative determination of choline citrate and acetylmethionine was performed using a C18, 250 x 4.6 mm, 5µm-Shim-Pack®VP-ODS column and a mobile phase constituted of buffer 25 mM potassium phosphate, pH 5.7: acetonitrile: methanol (88:10:2 v/v/v). The CE method was validated using a solution of 20 mM sodium tetraborate buffer pH 9.2 as the electrolyte and a fused silica capillary of 40.2 cm, with 30 cm effective, and 75 mm of diameter. The HPLC method showed a correlation coefficient (r) of 0.9996 for choline citrate and 0.9998 for acetylmethionine. For CE method the correlation coefficient (r) was found to be 0.9996 for acetylmethionine. The methods showed to be efficient and reliable methods, and can be used in routine analysis for quality control of injectable solutions containing the association of the two compounds selected to be studied in this research.

Loratadina, desloratadina, rupatadina e ebastina são anti-histamínicos H1 de segunda geração, pertencentes ao grupo piperidínico, utilizados em casos clínicos de afecções alérgicas devido a sua ação sobre a histamina, que é o principal mediador da alergia e, também, pela sua ação anti-inflamatória ocorrida pelo bloqueio do fator de ativação plaquetária (PAF). Esses fármacos são denominados agonistas inversos dos receptores H1 não-sedativos. No presente estudo, foram desenvolvidos e validados métodos para a quantificação de loratadina, desloratadina, rupatadina e da ebastina em produtos farmacêuticos utilizando as técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (CE). As análises por CLAE foram realizadas utilizando coluna LiChroCART® 100 RP- CN, 5 µm, (125 x 4 mm), fase móvel constituída MEOH:Tampão Fosfato de Sódio 20 mmol/L pH 3,0, (65:35 v/v), vazão de 1,0 mL/min; volume de injeção 20 µL, temperatura de 25°C ± 1ºC, detecção CLAE-UV λmáx: 254 nm. Paralelamente, foram desenvolvidos e validados métodos por CE, utilizando modo de separação por CZE com capilar de sílica fundida de 40,5 cm efetivos e 50 cm totais, 75 µm de diâmetro interno e 375 µm de diâmetro externo, eletrólito: ácido bórico 35 mmol/L, pH 2,5, tensão aplicada de 20 kV para, loratadina, desloratadina e rupatadina, e de 24 kV para ebastina, injeção hidrodinâmica de 0,5 psi por 3 segundos, temperatura de 25ºC ± 1ºC. Detecção CE-UV λmáx:205 nm. Os procedimentos foram validados, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção e quantificação e robustez, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados pela RE nº 899 da ANVISA. Os métodos propostos foram aplicados na análise de produtos farmacêuticos. Deste modo, os procedimentos estabelecidos podem ser aplicados para o aprimoramento do controle de qualidade de medicamentos, bem como garantir a segurança e a eficácia do uso terapêutico. / Loratadine, desloratadine, rupatadine and ebastine are second generation H1 antihistamines belonging to the group piperidine. They are often used in the clinical cases of allergic diseases due to their action on histamine, which is the main mediator of allergy and also by their anti-inflammatory action mediated through platelet activating factor (PAF) blocking activity. These drugs are called inverse agonists of non-sedating H1 receptor. In present study a high performance liquid chromatographic (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) methods were developed and validated for quantitative determination of loratadine, desloratadine, ebastine rupatadine in pharmaceutical drug products. The HPLC method was developed using LiChroCART ® RP-100 CN 5 microns (125 x 4 mm) column, mobile phase composed of MeOH: sodium phosphate buffer 20 mmol/L, pH 3.0 (65:35 v/v ) at a flow rate 1.0 mL/min, injection volume 20µL. The temperature was maintained at 25 ± 1 °C and UV detection was made at 254 nm. In parallel, a CE method was developed and validated using CZE mode using a fused silica capillary of 40.5 cm effective length and 50 cm total length with inner and outer diameter of 75 µm and 375µm, respectively. The background electrolyte was composed of 35 mmol/L boric acid, pH 2.5, applied voltage of 20 kV for loratadine, desloratadine and rupatadine and 24 kV for ebastine, hydrodynamic injection at 0.5 psi for 3 seconds. All analyses were made at 25 ± 1 °C and UV detection was made at 205 nm. The CE method was validated and following parameters were evaluated; specificity, linearity, precision, accuracy, limit of detection and quantification and robustness. The results met the requirements recommended by RE No. 899 of ANVISA. The proposed methods were applied in the analysis of referred pharmaceuticals. Thus, the proposed methods can be applied to improve the quality control of pharmaceuticals and consequently ensure the safety and efficacy of these products in therapeutic use.

A maioria dos medicamentos normalmente prescritos são comercializados sob a forma racêmica, apesar de se ter conhecimento que a presença de diferentes enantiômeros em uma formulação farmacêutica pode levar a diferentes atividades farmacológicas, farmacocinéticas e perfis toxicológicos. O uso de enantiômeros puros em formulações farmacêuticas pode resultar em melhor ajuste de dose e diminuição dos efeitos adversos, fato que torna estudos a respeito de quiralidade de moléculas fundamental na área farmacêutica. Atualmente, os métodos analíticos mais empregados para a separação e determinação da pureza enantiomérica de compostos são a CLAE-FEQ e eletroforese capilar com seletores quirais. Os enantiômeros de esmolol foram separados através de CLAE-FEQ em fase reversa utilizando coluna Chiralcel-OD-RH (250 x 4,6 mm d.i.), 5 µm. A fase móvel foi composta por perclorato de potássio 100 mM, pH 2,08 : acetonitrila : dietilamina (80:20:0,2) com vazão de 0,5 mL.min-1 e detecção a 220 nm. Os enantiômeros de esmolol também foram separados através de CLAE-FEQ em fase normal utilizando coluna Chiralcel-OD (250 x 4,6 mm d.i.), 10 µm. A fase móvel foi composta por hexano : etanol : dietilamina (75:25:0,2) com vazão de 1,0 mL.min-1 e detecção a 220 nm. Ambos os métodos foram validados, sendo possível considerá-los precisos, seletivos, específicos, exatos e lineares para quantificar os enantiômeros de esmolol em medicamentos. Os testes realizados com cloridrato de sotalol por CLAE não indicaram separação enantiomérica ao serem utilizadas coluna Chiralcel OD®, Chiralcel OD-RH®, Burke e Whelk®. Os ensaios realizados por eletroforese capilar apresentaram separação parcial dos enantiômeros de sotalol e de esmolol, porém houve ausência de reprodutibilidade do método. / Most commonly prescribed drugs are marketed as racemic mixtures, even though it is well known that the presence of different enantiomers in a pharmaceutical formulation can lead to different pharmacological, pharmacokinetic and toxicological profiles. The use of pure enantiomers in pharmaceutical formulations can result in better dose adjustment and reduction of side effects, fact which makes studies on molecular chirality important to the pharmaceutical area. Currently, high performance liquid chromatography using chiral stationary phases (CSPs) and capillary electrophoresis with chiral selectors are the most commonly methods employed for the separation and determination of enantiomeric purity of compounds. The enantiomers of esmolol were separated through HPLC using a reversed phase CSP column Chiralcel-OD-RH (250 x 4,6 mm i.d.) 5 µm. The mobile phase was composed of 100 mM potassium perchlorate, pH 2,08 : acetonitrile: diethylamine (80:20:0,2) at a flow rate of 0,5 mL.min-1 and detection at 220 nm. The enantiomers of esmolol were also separated using HPLC-CSP using normal phase column Chiralcel OD (250 x 4,6 mm i.d.), 10 µm. The mobile phase consisted of hexane : ethanol : diethylamine (75:25:0,2) with a flow rate of 1,0 mL.min-1 and detection at 220 nm. Both methods were validated, and it was possible to consider them precise, selective, specific, exact and linear to quantify the enantiomers of esmolol on drugs. HPLC tests conducted with sotalol indicated no enantiomeric separation when Chiralcel OD, Chiralcel OD-RH, Burke and Whelk columns were used. Capillary electrophoresis tests showed partial separation of the enantiomers of sotalol and esmolol, but there was lack of reproducibility.

A leucemia mielóide crônica (LMC) é uma doença cujo marcador molecular é o rearranjo gênico BCR/ABL, original da translocação t(9;22), conhecida como cromossomo Philadelphia. Recentemente, os inibidores da enzima tirosina-quinase têm sido estudados e utilizados para o tratamento da LMC. Nesta classe, está o Mesilato de Imatinibe, uma pequena molécula que inibe competitivamente a BCR/ABL tirosina quinase, impedindo sua atividade. Por não possuir monografia publicada em compêndios oficiais, o objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil in vitro de dissolução de comprimidos de mesilato em diferentes condições. A quantificação do fármaco foi feita utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (CLAE-FR) e as análises foram realizadas em uma coluna C18 Gemini Phenomenex®, utilizando como fase móvel tampão acetato de sódio 10,7 mmol/L, pH 3,0:metanol (40:60 v/v). O método foi validado e apresentou-se linear no intervalo de concentração de 10-150 µg/mL (r=0,9993). Os coeficientes de variação obtidos foram inferiores a 2,0 % e a exatidão próxima de 100 %. Também foram avaliados os parâmetros seletividade, robustez, estabilidade e limite de quantificação (10 µg/mL). A avaliação do perfil in vitro de dissolução foi realizada em três diferentes meios de dissolução (HCl 0,1 N, tampão acetato de sódio pH 4,5 e tampão fosfato de potássio monobásico pH 6,8), três velocidades de agitação (50, 75 e 100 rpm) e dois tipos de aparatos (pá e cesta). Os resultados obtidos neste teste indicaram que a forma farmacêutica em estudo é de liberação imediata, uma vez que foi verificada liberação de grande quantidade do fármaco em um curto período de tempo. A comparação dos perfis de dissolução, realizada através do cálculo da eficiência de dissolução, apresentou diferenças em relação à porcentagem do fármaco liberado. a condição mais adequada para avaliar o perfil in vitro de dissolução é o meio de dissolução HCl 0,1 N, aparato da pá e velocidade de agitação de 75 ou 100 rpm. / Chronic myeloid leukemia (CML) is a disease whose molecular marker is the BCR/ABL, original of the translocation t (9; 22), known as the Philadelphia chromosome. Recently, inhibitors of the enzyme tyrosine kinase have been studied and used for the treatment of CML. In this class, is the Imatinib mesylate, a small molecule that competitively inhibits BCR/ABL tyrosine kinase, preventing its activity. To do not have a monograph published in official compendia, the objective of this study was to evaluate the in vitro dissolution of tablets mesylate in different conditions. The quantification of the drug was made using high performance liquid chromatography on reversed phase (RP-HPLC) and analysis was performed on a Phenomenex® Gemini C18 column using a mobile phase of sodium acetate buffer 10.7 mmol/L pH 3.0:methanol (40:60 v/v). The method was validated and presented in a linear concentration range of 10-150 µg/mL (r=0.9993). The coefficients of variation obtained were below 2.0% and accuracy near 100%. We also evaluated the parameters selectivity, robustness, stability and limit of quantification (10 µg/mL). The evaluation of in vitro dissolution was conducted in three different dissolution media (0.1 N HCl, sodium acetate buffer pH 4.5 and potassium phosphate monobasic buffer pH 6.8), three agitation speeds (50, 75 and 100 rpm) and two types of devices (paddle and basket). The results of this tests indicated that the pharmaceutical form in question is immediate release, since it was observed release of large amounts of the drug in a short period of time. The comparison of dissolution profiles, conducted by calculating the dissolution efficiency, showed differences compared to the percentage of drug released. The best conditions to evaluate the in vitro profile of dissolution is the dissolution medium 0.1 N HCl, paddle apparatus and stirring speed of 75 or 100 rpm.

As intoxicações decorrentes do uso de drogas de abuso representam atualmente um grave problema para a saúde pública. Dentre os principais agentes envolvidos, destaca-se a cocaína. Ela se tornou uma das drogas mais consumidas ao redor do mundo, sendo um dos principais motivos de atendimentos em pronto-socorro (PS) devido ao uso de substâncias ilícitas. Seu uso ocorre principalmente em associação com bebida alcóolica. Existem poucos estudos realizados que relacionem a concentração sanguínea de cocaína e a gravidade das manifestações clínicas em populações que a utilizam como droga de abuso, e que envolvam pacientes atendidos em PS. O objetivo do presente estudo foi verificar a possível relação entre concentração sanguínea de cocaína e cocaetileno (produto da interação de cocaína com etanol) com a gravidade das manifestações clínicas apresentadas por pacientes com hipótese diagnóstica de intoxicação por cocaína. As concentrações sanguíneas foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e a gravidade das manifestações clínicas foi avaliada através do Stimulant Intoxication Score (SIS). Dos 81 pacientes incluídos no estudo 77,8% são homens com idade média de 32,5 anos ± 8,5 e SIS médio de 3,4 ± 2,5. Do total de pacientes incluídos no estudo 20 (24,7%) tiveram resultados positivos em sangue para os analitos de interesse, sendo a concentração sanguínea média de cocaína igual a 0,34 µg/mL ± 0,45 e de cocaetileno igual a 0,38 µg/mL ± 0,34. A concentração sanguínea de cocaína e cocaetileno não se mostrou informação útil para tratamento e prognóstico dos pacientes, porém a detecção no sangue destas substâncias no momento do atendimento, independentemente de sua concentração, pode ser um indicador de gravidade, mostrando que quaisquer concentrações destas substâncias devem ser consideradas potencialmente tóxicas. A aplicação do score SIS revelou-se como importante alternativa capaz de predizer a gravidade dos pacientes atendidos devido a intoxicação por cocaína de maneira rápida e simplificada. / Currently, poisoning resulting from the abuse of drug represents a serious problem for public health. Among the main agents involved, cocaine stands out. It became one of the most abused drugs around the world, being one of the main reasons for visits to the emergency room due to the use of illicit substances. The use of cocaine is primarily in combination with alcoholic beverages. There are few studies that relate cocaine blood concentration and the severity of its clinical manifestations in patients attended in the Emergency Room. The aim of the present study was to verify the possible relationship between the blood concentration of cocaine and cocaethylene (product of the interaction of cocaine with ethanol) with the severity of the clinical manifestations presented by patients with cocaine intoxication. Blood levels were measured by high-performance liquid chromatography (HPLC) and the severity of clinical manifestations was assessed using the Stimulant Intoxication Score (SIS). Of the 81 patients included in the study, 77.8% were men with a mean age of 32.5 years ± 8.5 and mean of SIS 3.4 ± 2.5. From the total of patients included in the study 20 (24.7%) had positive blood results for the analytes of interest, being the mean blood concentration of cocaine equal to 0,34 µg/mL ± 0,45 and of cocaethylene equal to 0,38 µg/mL ± 0,34. The blood concentration of cocaine and cocaethylene has not been shown to be useful information for the treatment and prognosis of patients, but blood levels of these substances at the time of treatment, regardless of their concentration, may be an indicator of severity, showing that any concentrations of these substances should be considered as potentially toxic. The application of the SIS score proved to be an important alternative capable of predicting the severity of the patients attended due to cocaine intoxication in a fast and simplified way.

O cloridrato de tizanidina é um relaxante muscular esquelético de ação central, utilizado no tratamento de espasticidade. Esse fármaco é comercializado apenas sob a forma de comprimidos, o que evidencia a necessidade do desenvolvimento de formulações líquidas orais. No ambiente hospitalar, este aspecto é contornado com a preparação de suspensões derivadas, de modo a permitir a administração em crianças e em adultos com deglutição prejudicada, mas não há dados sobre sua estabilidade. O objetivo deste trabalho foi avaliar a estabilidade físico-química e microbiológica de formas farmacêuticas líquidas preparadas em ambiente hospitalar a partir da derivação de comprimidos de cloridrato de tizanidina, empregando como metodologia a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e análise microbiológica. Um método simples e indicativo de estabilidade foi desenvolvido e validado por CLAE quanto a especificidade, linearidade, limite de detecção e quantificação, precisão, exatidão e robustez. As formulações líquidas foram preparadas em triplicata e acondicionadas em frasco de polietileno tereftalato (PET) âmbar e de vidro âmbar, que foram armazenados sob três diferentes condições: em temperatura ambiente, sob refrigeração e à 40 °C. Foram coletadas amostras a cada 7 dias por um período de 56 dias para a estabilidade físico-química. As formulações líquidas foram analisadas e demonstraram ser quimicamente estáveis durante 56 dias, permitindo um período de utilização prolongado. Entretanto, a determinação da estabilidade microbiológica mostrou que estas formulações estão propensas à contaminação microbiana, o que reduziu drasticamente a sua estabilidade para 7 dias, em ambos os frascos e em todas as temperaturas avaliadas. A qualidade microbiológica foi uma questão crítica, uma vez que as formulações foram produzidas apenas em água para injetáveis e não havia conservantes presentes na formulação. Os resultados deste estudo podem servir de referência para preparar derivações de cloridrato de tizanidina em uso hospitalar, uma vez que se demonstrou a confiabilidade do intervalo de tempo de armazenamento e as condições adequadas para o uso. De acordo com os resultados deste estudo de estabilidade, este fármaco pode ser incorporado na rotina de preparo das derivações dos hospitais, atendendo a uma demanda já há tempos sinalizada. / Tizanidine hydrochloride is a centrally acting skeletal muscle relaxant, used in the manegement of spasticity. This drug is sold only as tablets, which highlights the need to develop oral liquid formulations. In the hospital environment, this aspect is circumvented by the preparation of derived suspensions, to allow administration to children and adults with impaired swallowing, but there is no data regarding their stability. The objective of this work was to evaluate the physicochemical and microbiological stability of liquid dosage forms prepared in hospital environment from tizanidine hydrochloride tablets, applying high performance liquid chromatography (HPLC) and microbiological analysis. A simple and stability-indicating HPLC method was developed and validated for specificity, linearity, limits of detection and quantification, precision, accuracy and robustness. The liquid formulations were prepared in triplicate and placed in amber PET and glass bottles, which were stored under three different conditions: at room temperature, under refrigeration and at 40 °C. Samples were collected every 7 days along 56 days for physicochemical stability. The liquid formulations were analyzed and demonstrated chemical stability for 56 days, allowing the use for long period. However, the determination of microbiological stability showed that these formulations are prone to microbial contamination, which has dramatically reduced its stability to 7 days, in both bottles and all evaluated temperatures. Microbiological quality was a critical issue, since formulations were produced only in water for injectables and there was no preservatives present in the formulation. Results of this study could be applied as a reference for tizanidine hydrochloride derived preparation in hospital, once it was demonstrated the reliability of storage time interval and proper conditions for use. According to the results of this stability study, this drug could be incorporated into the routine of hospital derivations preparation, meeting a demand already indicated.

Antocianinas são pigmentos solúveis em água, pertencente à classe dos flavonoides. Podem ser encontradas nas formas glicosiladas e não-glicosiladas. A diversidade destas ocorre devido ao número e à posição de hidroxilas, metoxilas e açúcares na cadeia carbônica. São altamente instáveis e suscetíveis de degradação. O interesse no estudo é decorrente dos possíveis efeitos anticarcinogênico, antimicrobiano, antimutagênico e anti-oxidante. A atividade anti-oxidante está associada à capacidade que possuem em doar hidrogênios e elétrons a radicais livres. A CLAE tem sido a técnica mais indicada para análise destes pigmentos e, acoplada ao detector de arranjo de diodos, obtêm-se espectros dos compostos separados, conseguindo-se alta seletividade. Este trabalho tem como objetivos: otimizar a separação de oito antocianinas por CLAE-FR, otimizar a extração e estudar a hidrólise desses compostos em morango e medir a atividade anti-oxidante por derivatização pós-coluna, para estudo da relação retenção-propriedade anti-oxidante. A separação foi otimizada avaliando-se a composição e vazão da fase móvel, tempo de retenção das antocianinas e temperatura da coluna. O ótimo foi obtido com gradiente de eluição (25-55 %B) por 30 minutos, sendo: A - água e B - metanol ambos com HCl 0,1 % (v/v), coluna C18 mantida à 30ºC, vazão da fase móvel de 1,0 mL min-1 e identificação dos pigmentos a 522 nm. Extrações sólido-líquido, líquido-líquido e SPE foram testadas em amostras de morango. O processo também envolveu a seleção de solvente e ácido. A extração sólido-líquido apresentou maior eficiência. Polpas de morangos foram misturadas com solução de MeOH:HCl 5,5 % (v/v) e levadas ao ultrassom (20 ºC) por 10 minutos, procedimento repetido cinco vezes. A estabilidade do extrato foi avaliada por submissão do mesmo a altas temperaturas (80, 90 e 100 ºC) durante longo tempo e estocagem em freezer, geladeira e temperatura ambiente, mostrando que a degradação das antocianinas segue cinética de reação de primeira ordem. Para obtenção das agliconas foram executados ensaios de hidrólise ácida. O mecanismo da hidrólise da pelargonidina-3-glicosídeo foi avaliado e chegou-se a ótima condição de: extrato/HCl 8 mol L-1 (1:1, v/v) por 60 minutos a 100 ºC. No método desenvolvido, avaliou-se: linearidade, LD, LQ, exatidão, precisão e robustez. Por fim, desenvolveram-se estudos de medida da atividade anti-oxidante, por método de detecção online, acoplando um sistema de injeção em fluxo ao de separação, misturando uma solução de ABTS&#8226+ (100 µmol L-1) sob vazão de 1,27 mL min-1 aos compostos eluídos pela coluna cromatográfica. O resultado de curvas de calibração das antocianinas comparado ao padrão de referência (Trolox) indicou que o poder anti-oxidante de cada substância diminui na ordem: cianidina-3-glicosídeo, pelargonidina-3-glicosídeo, malvidina-3-glicosídeo, cianidina-3,5-diglicosídeo, delfinidina, cianidina, malvidina e pelargonidina. Um estudo teórico, baseado neste poder e na retenção dos compostos demonstrou que uma diminuição da retenção, por aumento na polaridade da molécula, implica em diminuição do poder anti-oxidante e ainda, relacionou o poder às características de ressonância, afetada pelos ângulos entre os sistemas de conjugação, bem como solvatação de grupos hidroxilas ligados à estrutura carbônica. / Anthocyanins are water soluble pigments, belonging to the class of flavonoids. They can be found in glycosylated and non-glycosylated forms. The diversity of these compounds is due to the number and position of hydroxyl, methoxyl and sugars attached to the carbon chain. They are highly unstable and susceptible to degradation. Interest in the study of these compounds is due to the possible anticancer, antimicrobial, antimutagenic and antioxidant properties. The antioxidant activity is associated with the capacity they have to donate protons and electrons to free radicals. The HPLC technique has been the most suitable for the analysis of these pigments and, coupled to a diode array detector, on-line spectra of the separated compounds can be obtained, achieving high selectivity. This work aims at optimizing the separation of eight anthocyanins by RP-HPLC, and developing methods for the extraction and hydrolysis of these compounds in strawberry; in addition, it includes the measurement of the antioxidant activity of anthocyanins by column post-derivatization, and the study of the quantitative relationship between retention and antioxidant property (QRPR). The separation was optimized by evaluating the composition and mobile phase flow rate, retention time of the anthocyanins and column temperature. The optimum was obtained with gradient elution (25-55% B) for 30 minutes with: A - water and B - methanol, both with 0.1% HCl (v / v), C18 column kept at 30 °C and mobile phase flow rate of 1.0 mL min-1; the dentification of the pigments were carried out at 522 nm. Solid-liquid extraction, liquid-liquid and SPE were tested on strawberry samples. The process also involved the selection of solvent and acid. The solid-liquid extraction showed greater efficiency. Strawberry pulps were mixed with a solution of 5.5% (v / v) MeOH HCl and cooled in ultrasound bath (20 ºC) for 10 minutes; the procedure was repeated five times. The stability was evaluated by submitting the extract at high temperatures (80, 90 and 100 ºC) for a long time and storage in a freezer, refrigerator and room temperature, showing that the degradation kinetics of anthocyanins followed a first order reaction. To obtain the aglycones, acid hydrolysis were performed. The mechanism of hydrolysis of pelargonidin-3-glucoside was evaluated and the best condition was: (1:1, v / v) extract : 8 mol L-1 HCl in 60 minutes at 100 ºC. The proposed method was validated with respect to: linearity, LOD, LOQ, accuracy, precision and robustness. Finally, studies to measure online the antioxidant activity of extracts were developed, coupling in parallel a flow injection system to the separation system, where a solution of ABTS•+ (100 µmol L-1) under a flow rate of 1.27 mL min-1 was mixed with the compounds eluted from the separation column. The resulting calibration curves of anthocyanins compared to Trolox indicated that the antioxidant power of each substance decreased in the order: cyanidin-3-glucoside, pelargonidin-3-glucoside, malvidin-3-glucoside, cyanidin-3,5-diglucoside, delphinidin, cyanidin, malvidin and pelargonidin. A theoretical study based on the antioxidant power and the retention of the compounds showed a decrease in retention due to an increase in the polarity of the molecule, implying in decreased antioxidant capacity, also related to the molecule resonance characteristics, affected by the angles between the systems conjugation, as well as the solvation of hydroxyl groups linked to the structure carbon.

Trilostane is a synthetic steroid analog used to treat canine hyperadrenocorticism. For small dogs, the dose found in commercially available dosage forms of trilostane is sometimes too high. Compounding trilostane in a liquid diluent provides an option for more precise dosing and adjustments, and can be easier to administer, versus a tablet or capsule. Trilostane suspends well in cod liver oil, which is generally palatable to dogs. The stability of a compounded trilostane suspension in cod liver oil stored at room temperature was investigated for 90 days. Compounded trilostane retained stability, defined as maintaining 90–105% labeled value, for 60 days when stored in amber glass bottles. However, drug potency fell >10% below the labeled value when stored in amber plastic bottles after 7 days.

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