Orientadora: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Marcelo Aparecido da Silva / Resumo: Paepalanthus é um dos gêneros mais representativos da família Eriocaulaceae e consta na literatura que já foram isoladas naftopiranonas e flavonoides, substâncias com comprovadas atividades como antirradicalar, antiúlcera e mutagênica. Apesar dos estudos realizados até o momento com espécies de Eriocaulaceae, é importante destacar que ainda existe um grande número de espécies que não foram estudados química e biologicamente. Portanto, neste trabalho descrevemos o estudo químico e biológico do extrato metanólico dos capítulos de Paepalanthus acanthophyllus. A estratégia de fracionamento por HPLC-PDA em escala semipreparativa do extrato metanólico permitiu isolar as substâncias 6-metoxicanferol-3-O-(6"-p-cumaroil)-β-D-glucopiranosil-7-O-β-D-glucopiranosídeo, Pa2, 6-metoxicanferol-3-7-di-O-β-D-glucopiranosídeo,Pa1, 6-metoxicanferol-3-O-β-D-glucopiranosídeo, Pa3, Paepalantina-9-O-β-D-glucopiranosideo, Pa4 e a Paepalantina, Pa5. A padronização do extrato metanólico foi realizada por meio da quantificação dos derivados do canferol glicosilados (Pa1, Pa2 e Pa3) e do derivado da paepalantina glicosilada (Pa4) por HPLC-PDA. A metodologia permitiu avaliar os parâmetros de linearidade, limites de detecção e quantificação.Os limites de detecção (12,22 μg.mL-1) e quantificação (30,03 μg.mL-1) foram satisfatórios para as condições analisadas para os derivados do canferol. Para o derivado da paepalantina glicosilada observou-se os valores de limite de detecção 25,54μg.mL-1 e de quantifica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paepalanthus is one of the most representative genus of the Eriocaulaceae family and it is known in literature that naphthopyrano nes and flavonoids were isolated. These substances are proven to have antiradical, antiulcer and mutagenic biological activities. Despite available studies of the Eriocaulaceae species, it is important to emphasize that there is still a large number of sp ecies that have not been studied chemically and biologically. Therefore, in this work we describe the chemical and biological study of the m ethanol extract of the capitula from Paepalanthus acanthophyllus . The fractionation strategy by HPLC - PDA semiprepa rative scale of the methanolic extract allowed us to isolate substances 6 - methoxykaempferol - 3 - O - (6" - p - coumaroyll) - β - D - glucopyranosyl - 7 - O - β - D - glucopyranoside, Pa2, 6 - methoxyKaempferol - 3 - 7 - di - O - β - D - glucopyranoside, Pa1, 6 - methoxyKaempferol - 3 - O - β - D - glucopyr anoside, Pa3, p aepalantina - 9 - O - β - D - glucopyranoside, Pa4 and p aepalantin e Pa5 . The standardization of the methanol extract was performed by quantification of glycosides kaempferol derivatives and paepalantina glycosylated by HPLC - PDA. The methodology allow ed us to evaluate the parameters: linearity, limits of detection and quantification. The detection limits (12.22 μ g.mL - 1 ) and quantitation (30.03 μ g.mL - 1 ) were satisfactory for the conditions tested for the kaempferol derivatives. For the derivative of the glycosylated paepalantina, the detection limit (25.54 μ g.mL - 1 ) and quantization limit (77.39 μ g.mL - 1 ) were observed. The content of substances found in the met hanolic extract of the capitula were 2.39 % ( Pa1 ), 1.22 % ( Pa2 ), 2.52 % ( Pa3 ) and 8.38 % ( Pa4 ) . The total phenols content obtained was 126.41 m g. g - 1 in the extract of the capitulae and the content of the total flavonoid founded were 122.15 mg.g - 1. At the same time we evaluated the... / Mestre

A leucemia mielóide crônica (LMC) é uma doença cujo marcador molecular é o rearranjo gênico BCR/ABL, original da translocação t(9;22), conhecida como cromossomo Philadelphia. Recentemente, os inibidores da enzima tirosina-quinase têm sido estudados e utilizados para o tratamento da LMC. Nesta classe, está o Mesilato de Imatinibe, uma pequena molécula que inibe competitivamente a BCR/ABL tirosina quinase, impedindo sua atividade. Por não possuir monografia publicada em compêndios oficiais, o objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil in vitro de dissolução de comprimidos de mesilato em diferentes condições. A quantificação do fármaco foi feita utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (CLAE-FR) e as análises foram realizadas em uma coluna C18 Gemini Phenomenex®, utilizando como fase móvel tampão acetato de sódio 10,7 mmol/L, pH 3,0:metanol (40:60 v/v). O método foi validado e apresentou-se linear no intervalo de concentração de 10-150 µg/mL (r=0,9993). Os coeficientes de variação obtidos foram inferiores a 2,0 % e a exatidão próxima de 100 %. Também foram avaliados os parâmetros seletividade, robustez, estabilidade e limite de quantificação (10 µg/mL). A avaliação do perfil in vitro de dissolução foi realizada em três diferentes meios de dissolução (HCl 0,1 N, tampão acetato de sódio pH 4,5 e tampão fosfato de potássio monobásico pH 6,8), três velocidades de agitação (50, 75 e 100 rpm) e dois tipos de aparatos (pá e cesta). Os resultados obtidos neste teste indicaram que a forma farmacêutica em estudo é de liberação imediata, uma vez que foi verificada liberação de grande quantidade do fármaco em um curto período de tempo. A comparação dos perfis de dissolução, realizada através do cálculo da eficiência de dissolução, apresentou diferenças em relação à porcentagem do fármaco liberado. a condição mais adequada para avaliar o perfil in vitro de dissolução é o meio de dissolução HCl 0,1 N, aparato da pá e velocidade de agitação de 75 ou 100 rpm. / Chronic myeloid leukemia (CML) is a disease whose molecular marker is the BCR/ABL, original of the translocation t (9; 22), known as the Philadelphia chromosome. Recently, inhibitors of the enzyme tyrosine kinase have been studied and used for the treatment of CML. In this class, is the Imatinib mesylate, a small molecule that competitively inhibits BCR/ABL tyrosine kinase, preventing its activity. To do not have a monograph published in official compendia, the objective of this study was to evaluate the in vitro dissolution of tablets mesylate in different conditions. The quantification of the drug was made using high performance liquid chromatography on reversed phase (RP-HPLC) and analysis was performed on a Phenomenex® Gemini C18 column using a mobile phase of sodium acetate buffer 10.7 mmol/L pH 3.0:methanol (40:60 v/v). The method was validated and presented in a linear concentration range of 10-150 µg/mL (r=0.9993). The coefficients of variation obtained were below 2.0% and accuracy near 100%. We also evaluated the parameters selectivity, robustness, stability and limit of quantification (10 µg/mL). The evaluation of in vitro dissolution was conducted in three different dissolution media (0.1 N HCl, sodium acetate buffer pH 4.5 and potassium phosphate monobasic buffer pH 6.8), three agitation speeds (50, 75 and 100 rpm) and two types of devices (paddle and basket). The results of this tests indicated that the pharmaceutical form in question is immediate release, since it was observed release of large amounts of the drug in a short period of time. The comparison of dissolution profiles, conducted by calculating the dissolution efficiency, showed differences compared to the percentage of drug released. The best conditions to evaluate the in vitro profile of dissolution is the dissolution medium 0.1 N HCl, paddle apparatus and stirring speed of 75 or 100 rpm.

As intoxicações decorrentes do uso de drogas de abuso representam atualmente um grave problema para a saúde pública. Dentre os principais agentes envolvidos, destaca-se a cocaína. Ela se tornou uma das drogas mais consumidas ao redor do mundo, sendo um dos principais motivos de atendimentos em pronto-socorro (PS) devido ao uso de substâncias ilícitas. Seu uso ocorre principalmente em associação com bebida alcóolica. Existem poucos estudos realizados que relacionem a concentração sanguínea de cocaína e a gravidade das manifestações clínicas em populações que a utilizam como droga de abuso, e que envolvam pacientes atendidos em PS. O objetivo do presente estudo foi verificar a possível relação entre concentração sanguínea de cocaína e cocaetileno (produto da interação de cocaína com etanol) com a gravidade das manifestações clínicas apresentadas por pacientes com hipótese diagnóstica de intoxicação por cocaína. As concentrações sanguíneas foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e a gravidade das manifestações clínicas foi avaliada através do Stimulant Intoxication Score (SIS). Dos 81 pacientes incluídos no estudo 77,8% são homens com idade média de 32,5 anos ± 8,5 e SIS médio de 3,4 ± 2,5. Do total de pacientes incluídos no estudo 20 (24,7%) tiveram resultados positivos em sangue para os analitos de interesse, sendo a concentração sanguínea média de cocaína igual a 0,34 µg/mL ± 0,45 e de cocaetileno igual a 0,38 µg/mL ± 0,34. A concentração sanguínea de cocaína e cocaetileno não se mostrou informação útil para tratamento e prognóstico dos pacientes, porém a detecção no sangue destas substâncias no momento do atendimento, independentemente de sua concentração, pode ser um indicador de gravidade, mostrando que quaisquer concentrações destas substâncias devem ser consideradas potencialmente tóxicas. A aplicação do score SIS revelou-se como importante alternativa capaz de predizer a gravidade dos pacientes atendidos devido a intoxicação por cocaína de maneira rápida e simplificada. / Currently, poisoning resulting from the abuse of drug represents a serious problem for public health. Among the main agents involved, cocaine stands out. It became one of the most abused drugs around the world, being one of the main reasons for visits to the emergency room due to the use of illicit substances. The use of cocaine is primarily in combination with alcoholic beverages. There are few studies that relate cocaine blood concentration and the severity of its clinical manifestations in patients attended in the Emergency Room. The aim of the present study was to verify the possible relationship between the blood concentration of cocaine and cocaethylene (product of the interaction of cocaine with ethanol) with the severity of the clinical manifestations presented by patients with cocaine intoxication. Blood levels were measured by high-performance liquid chromatography (HPLC) and the severity of clinical manifestations was assessed using the Stimulant Intoxication Score (SIS). Of the 81 patients included in the study, 77.8% were men with a mean age of 32.5 years ± 8.5 and mean of SIS 3.4 ± 2.5. From the total of patients included in the study 20 (24.7%) had positive blood results for the analytes of interest, being the mean blood concentration of cocaine equal to 0,34 µg/mL ± 0,45 and of cocaethylene equal to 0,38 µg/mL ± 0,34. The blood concentration of cocaine and cocaethylene has not been shown to be useful information for the treatment and prognosis of patients, but blood levels of these substances at the time of treatment, regardless of their concentration, may be an indicator of severity, showing that any concentrations of these substances should be considered as potentially toxic. The application of the SIS score proved to be an important alternative capable of predicting the severity of the patients attended due to cocaine intoxication in a fast and simplified way.

A própolis é uma substância resinosa coletada pelas abelhas de diversas partes das plantas, à qual têm sido atribuídas propriedades antimicrobiana, antioxidante, antinflamatória, antiviral, entre outras. Sua composição química depende de vários fatores, como a localização geográfica. Um novo tipo de própolis brasileira, denominada de própolis vermelha, por sua coloração intensa característica, foi identificada e coletada em região de mangue do Estado de Alagoas. O objetivo deste trabalho foi fracionar e isolar compostos com atividade antibacteriana dessa nova variedade de própolis. O extrato etanólico da própolis vermelha foi fracionado pela técnica de extração líquido-líquido, originando as frações hexânica (fr-Hex) e clorofórmica (fr-Clo). A fr-Clo apresentou alta atividade antibacteriana pelos testes de Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM), contra as bactérias Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans e Actinomyces naeslundii. Dessa forma, a fr-Clo foi refracionada por coluna seca gerando sete sub-frações. Após a avaliação da atividade antibacteriana das sub-frações pelas técnicas de CIM e CBM, a sub-fração 3, a mais bioativa, foi purificada em coluna de Sephadex LH-20. Dessa purificação foram obtidas três sub-frações bioativas, as quais foram submetidas ao isolamento dos compostos pela técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) preparativa. Dois compostos foram isolados e denominados de composto 1 e composto 2. O composto 2 foi o mais potente para as atividades inibitória e bactericida e sua CIM para os três tipos de bactéria testados variou entre 15,6 e 31,2 µg/mL, enquanto para o composto 1, este parâmetro variou de 31,2 a 62,5 µg/mL. As CBM do composto 1 e do composto 2 variaram entre 125 e 250 µg/mL e entre 31,2 e 62,5 µg/mL, respectivamente. Por meio da técnica Ressonância Magnética Nuclear (RMN) foi possível identificar o composto 1 como pertencente à classe das isoflavanas e o composto 2 como uma chalcona (isoliquiritigenina). A forte atividade antibacteriana apresentada pelos compostos isolados da própolis vermelha torna este produto uma importante fonte de compostos antibacterianos naturais. / Propolis is a resinous material, collected by honeybees from several parts of plants, known for its antimicrobial, antioxidant, anti-inflammatory, antiviral properties, among others. Its composition varies according to several factors, such as the geographical location. A novel type of Brazilian propolis, named red propolis due to its intense characteristic color, was collected in a mangrove area in the State of Alagoas. This research aimed to fractionate and isolate the compounds in this new type of propolis that present antibacterial activity. The ethanolic extract of red propolis (EEP) was fractionated using the liquid-liquid extraction technique, yielding the hexanic (Hex-fr) and the chloroformic fractions (Chlo-fr). Chlo-fr showed high antibacterial activity determined by the minimal inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) tests against Staphylococcus aureus Streptococcus mutans, and Actinomyces naeslundii. Thus, Chlo-fr was refractionated by Dry-Column Chromatography, yielding seven subfractions. After submitted to MIC and MBC techniques to assess their antibacterial activity, and subfraction 3, the most bioactive of them, was purified in Sephadex LH-20 column. After this purification, three bioactive subfractions were obtained, submitted to isolation of compounds using preparative High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Two compounds were isolated and named compound 1 and compound 2. Compound 2 presented the highest inhibitory and bactericidal activities and its MIC for the three types of bacteria tested ranged from 15.6 to 31.2 µg/mL, whereas for compound 1, this parameter ranged from 31.2 to 62.5 µg/mL. MBC of compound 1 and compound 2 ranged from 125 to 250 µg/mL and from 31.2 to 62.5 µg/mL, respectively. Through Nuclear Magnetic Resonance tecnique (NMR), it was possible to identify the compound 1 as belonging to class of isoflavans and the compound 2 as a chalcone (isoliquiritigenin). Due to the strong antibacterial activity presented by the compounds isolated from red propolis, it can be concluded that this product is an important source of natural antibacterial compounds.

A lercanidipina (LER) é uma dihidropiridina bloqueadora de canais de cálcio disponível comercialmente como uma mistura racêmica, ou seja, uma mistura equimolar dos enantiômeros (R)-LER e (S)-LER. Os efeitos farmacológicos da LER residem essencialmente no enantiômero (S)-LER, e estudos in vitro mostram que este enantiômero apresenta cerca de 100-200 vezes maior afinidade pelos canais de cálcio que o enantiômero (R)-LER. Consequentemente, os efeitos farmacodinâmicos da LER são devidos, principalmente, ao enantiômero (S)-LER. Neste sentido, fármacos racêmicos são exaustivamente estudados, para avaliar suas propriedades farmacocinéticas e farmacodinâmicas estereosseletivas e verificar se existem vantagens na produção do enantiômero puro. Além disso, devido às diferenças na atividade dos enantiômeros, é imprescindível realizar o controle de qualidade enantiosseletivo destas formulações. Associado a isto, as moléculas pertencentes a esta classe de fármacos são fotossensíveis. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um método enantiosseletivo para análise da LER e aplicá-lo no controle de qualidade de formas farmacêuticas e também avaliar sua fotodegradação. A análise enantiosseletiva da LER e aplicação no controle de qualidade de formas sólidas foi realizado por eletroforese capilar (CE) utilizando tampão acetato de sódio 200 mmol L-1, pH 4,0 como eletrólito de corrida, adicionado de TM-?-CD (2, 3, 6-O-metil-?-ciclodextrina) 10 mmol L-1 como seletor quiral, na temperatura de 15 °C e 25 kV de tensão. Os parâmetros de desempenho analítico, linearidade, precisão, exatidão, limite de quantificação e detecção, seletividade e robustez foram avaliados e estão de acordo com os requisitos preconizados pelos guias oficiais. O método foi aplicado para análise de comprimidos comerciais contendo LER, e mostrou ser adequado para quantificação das amostras, apresentando valores de coeficiente de variação (CV, %) e erro relativo (E, %) inferiores a 5 %. Além disso, foi avaliada a fotoestabilidade dos enantiômeros da LER na mistura racêmica e também dos enantiômeros separados, quando expostos à luz UVC (254 nm) e visível, por HPLC. A separação dos enantiômeros da LER foi alcançada empregando a coluna quiral Chiralpak® AD 250 × 4,6 mm, partículas de 10 ?m e fase móvel composta por hexano-etanol-dietilamina (97:3:0,3, v/v/v) e vazão de 1,0 mL min-1. O método foi validado e aplicado nos estudos de fotodegradação em soluçãos-padrão de LER. Em relação à exposição na luz UVC (254 nm) e visível foi observada degradação significativa dos enantiômeros da LER após 0,5 h de exposição. Além disso, os produtos de degradação foram caracterizados por LC/MS/MS e foi observada que a principal fragmentação ocorre no anel dihidropiridínico, assim como para outros fármacos desta classe, formando piridinas sem efeitos farmacológicos. / Lercanidipine (LER) is a dihydropyridine calcium channel blocker commercially available as a racemic mixture, or an equimolar mixture of enantiomers (R) and LER (S)-LER. The pharmacological effects of LER essentially reside in the enantiomer (S)-LER, and in vitro studies show that this enantiomer has about 100-200 times greater affinity for calcium channels that the enantiomer (R)-LER. Consequently, the pharmacodynamic effects of LER are due mainly to the enantiomer (S)-LER. Thus, racemic drugs are extensively studied to evaluate their pharmacokinetic and pharmacodynamic properties stereoselective and check if there are advantages in the production of pure enantiomer. Moreover, due to differences in the activity of the enantiomers is essential to perform quality control enantioselective these formulations. Additonally, the molecules of this class of drugs are photosensitive. The objective of this study was to develop and validate a method for enantioselective analysis of LER and apply it in the quality control of pharmaceutical forms and also evaluate their photodegradation. The enantioselective analysis of LER and application in quality control of solid forms was performed by capillary electrophoresis (CE) using sodium acetate buffer 200 mmol L-1, pH 4.0 as background electrolyte, 10 mmol L-1TM-?-CD (2, 3, 6-O-methyl-?-cyclodextrin) as chiral selector, at temperature of 15 °C and 25 kV voltage. The analytical parameters, linearity, precision, accuracy, limit of quantification and detection, selectivity and robustness were evaluated and accordance with the requirements recommended by official guideline. The method was applied for the analysis of commercial tablets containing LER, and proved to be suitable for quantification of the samples, with of CV (%) and E (%) less than 5%. In addition, the photostability was evaluated on the LER enantiomers and racemic mixture of the enantiomers also separated when exposed to UVC (254 nm) and visible light by HPLC. Separation of enantiomers of LER was achieved using the chiral column Chiralpak ® AD 250 × 4.6 mm, particles of 10 micrometres and a mobile phase composed of hexane-ethanol-diethylamine (97:3:0.3 v/v/v ) and flow rate of 1.0 mL min-1. The method was validated and applied in studies of photodegradation of standard solutions of LER. The method was validated and applied in studies of photodegradation in soluçãos standard of LERR With relation to UVC exposure (254 nm) and visible light, significant degradation was observed after 0.5 hour exposure of the solution containing the racemic mixture and after 1 h of exposure the solution containing the isolated enantiomers of LER. Also, the degradation products were characterized by LC/MS/MS and it was observed that the major fragmentation occurs in dihydropyridine ring, as well as other drugs of this class, forming pyridines no pharmacological effects.

Loratadina, desloratadina, rupatadina e ebastina são anti-histamínicos H1 de segunda geração, pertencentes ao grupo piperidínico, utilizados em casos clínicos de afecções alérgicas devido a sua ação sobre a histamina, que é o principal mediador da alergia e, também, pela sua ação anti-inflamatória ocorrida pelo bloqueio do fator de ativação plaquetária (PAF). Esses fármacos são denominados agonistas inversos dos receptores H1 não-sedativos. No presente estudo, foram desenvolvidos e validados métodos para a quantificação de loratadina, desloratadina, rupatadina e da ebastina em produtos farmacêuticos utilizando as técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (CE). As análises por CLAE foram realizadas utilizando coluna LiChroCART® 100 RP- CN, 5 µm, (125 x 4 mm), fase móvel constituída MEOH:Tampão Fosfato de Sódio 20 mmol/L pH 3,0, (65:35 v/v), vazão de 1,0 mL/min; volume de injeção 20 µL, temperatura de 25°C ± 1ºC, detecção CLAE-UV λmáx: 254 nm. Paralelamente, foram desenvolvidos e validados métodos por CE, utilizando modo de separação por CZE com capilar de sílica fundida de 40,5 cm efetivos e 50 cm totais, 75 µm de diâmetro interno e 375 µm de diâmetro externo, eletrólito: ácido bórico 35 mmol/L, pH 2,5, tensão aplicada de 20 kV para, loratadina, desloratadina e rupatadina, e de 24 kV para ebastina, injeção hidrodinâmica de 0,5 psi por 3 segundos, temperatura de 25ºC ± 1ºC. Detecção CE-UV λmáx:205 nm. Os procedimentos foram validados, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção e quantificação e robustez, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados pela RE nº 899 da ANVISA. Os métodos propostos foram aplicados na análise de produtos farmacêuticos. Deste modo, os procedimentos estabelecidos podem ser aplicados para o aprimoramento do controle de qualidade de medicamentos, bem como garantir a segurança e a eficácia do uso terapêutico. / Loratadine, desloratadine, rupatadine and ebastine are second generation H1 antihistamines belonging to the group piperidine. They are often used in the clinical cases of allergic diseases due to their action on histamine, which is the main mediator of allergy and also by their anti-inflammatory action mediated through platelet activating factor (PAF) blocking activity. These drugs are called inverse agonists of non-sedating H1 receptor. In present study a high performance liquid chromatographic (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) methods were developed and validated for quantitative determination of loratadine, desloratadine, ebastine rupatadine in pharmaceutical drug products. The HPLC method was developed using LiChroCART ® RP-100 CN 5 microns (125 x 4 mm) column, mobile phase composed of MeOH: sodium phosphate buffer 20 mmol/L, pH 3.0 (65:35 v/v ) at a flow rate 1.0 mL/min, injection volume 20µL. The temperature was maintained at 25 ± 1 °C and UV detection was made at 254 nm. In parallel, a CE method was developed and validated using CZE mode using a fused silica capillary of 40.5 cm effective length and 50 cm total length with inner and outer diameter of 75 µm and 375µm, respectively. The background electrolyte was composed of 35 mmol/L boric acid, pH 2.5, applied voltage of 20 kV for loratadine, desloratadine and rupatadine and 24 kV for ebastine, hydrodynamic injection at 0.5 psi for 3 seconds. All analyses were made at 25 ± 1 °C and UV detection was made at 205 nm. The CE method was validated and following parameters were evaluated; specificity, linearity, precision, accuracy, limit of detection and quantification and robustness. The results met the requirements recommended by RE No. 899 of ANVISA. The proposed methods were applied in the analysis of referred pharmaceuticals. Thus, the proposed methods can be applied to improve the quality control of pharmaceuticals and consequently ensure the safety and efficacy of these products in therapeutic use.

A maioria dos medicamentos normalmente prescritos são comercializados sob a forma racêmica, apesar de se ter conhecimento que a presença de diferentes enantiômeros em uma formulação farmacêutica pode levar a diferentes atividades farmacológicas, farmacocinéticas e perfis toxicológicos. O uso de enantiômeros puros em formulações farmacêuticas pode resultar em melhor ajuste de dose e diminuição dos efeitos adversos, fato que torna estudos a respeito de quiralidade de moléculas fundamental na área farmacêutica. Atualmente, os métodos analíticos mais empregados para a separação e determinação da pureza enantiomérica de compostos são a CLAE-FEQ e eletroforese capilar com seletores quirais. Os enantiômeros de esmolol foram separados através de CLAE-FEQ em fase reversa utilizando coluna Chiralcel-OD-RH (250 x 4,6 mm d.i.), 5 µm. A fase móvel foi composta por perclorato de potássio 100 mM, pH 2,08 : acetonitrila : dietilamina (80:20:0,2) com vazão de 0,5 mL.min-1 e detecção a 220 nm. Os enantiômeros de esmolol também foram separados através de CLAE-FEQ em fase normal utilizando coluna Chiralcel-OD (250 x 4,6 mm d.i.), 10 µm. A fase móvel foi composta por hexano : etanol : dietilamina (75:25:0,2) com vazão de 1,0 mL.min-1 e detecção a 220 nm. Ambos os métodos foram validados, sendo possível considerá-los precisos, seletivos, específicos, exatos e lineares para quantificar os enantiômeros de esmolol em medicamentos. Os testes realizados com cloridrato de sotalol por CLAE não indicaram separação enantiomérica ao serem utilizadas coluna Chiralcel OD®, Chiralcel OD-RH®, Burke e Whelk®. Os ensaios realizados por eletroforese capilar apresentaram separação parcial dos enantiômeros de sotalol e de esmolol, porém houve ausência de reprodutibilidade do método. / Most commonly prescribed drugs are marketed as racemic mixtures, even though it is well known that the presence of different enantiomers in a pharmaceutical formulation can lead to different pharmacological, pharmacokinetic and toxicological profiles. The use of pure enantiomers in pharmaceutical formulations can result in better dose adjustment and reduction of side effects, fact which makes studies on molecular chirality important to the pharmaceutical area. Currently, high performance liquid chromatography using chiral stationary phases (CSPs) and capillary electrophoresis with chiral selectors are the most commonly methods employed for the separation and determination of enantiomeric purity of compounds. The enantiomers of esmolol were separated through HPLC using a reversed phase CSP column Chiralcel-OD-RH (250 x 4,6 mm i.d.) 5 µm. The mobile phase was composed of 100 mM potassium perchlorate, pH 2,08 : acetonitrile: diethylamine (80:20:0,2) at a flow rate of 0,5 mL.min-1 and detection at 220 nm. The enantiomers of esmolol were also separated using HPLC-CSP using normal phase column Chiralcel OD (250 x 4,6 mm i.d.), 10 µm. The mobile phase consisted of hexane : ethanol : diethylamine (75:25:0,2) with a flow rate of 1,0 mL.min-1 and detection at 220 nm. Both methods were validated, and it was possible to consider them precise, selective, specific, exact and linear to quantify the enantiomers of esmolol on drugs. HPLC tests conducted with sotalol indicated no enantiomeric separation when Chiralcel OD, Chiralcel OD-RH, Burke and Whelk columns were used. Capillary electrophoresis tests showed partial separation of the enantiomers of sotalol and esmolol, but there was lack of reproducibility.

A avaliação no perfil das impurezas de fármacos está sendo alvo de atenção das agências regulatórias nacionais e internacionais visto que podem gerar implicações na saúde da população. Frente a isso, as indústrias farmacêuticas devem adequarse às novas regulamentações para garantir a qualidade, segurança e eficácia dos medicamentos. O fostato de sitagliptina (STG) e vildagliptina (VLG), liberados para uso clínico no Brasil em 2006 e 2007, respectivamente, são utilizados para o tratamento do diabetes mellitus tipo 2. Na literatura pesquisada não foram encontrados relatos referentes à determinação quantitativa de impurezas de síntese da vildagliptina e sitagliptina. Desta forma, este trabalho teve por objetivo desenvolver e validar métodos analíticos para a determinação de impurezas dos fármacos sitagliptina e vildagliptina, além de avaliar a toxicidade dos mesmos. Foi desenvolvido e validado método analítico por cromatografia líquida de alta eficiência para determinação do fosfato de sitagliptina na presença de duas impurezas de síntese de acordo com os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limites de detecção e quantificação. Para tanto, foi utilizada coluna cromatográfica XBridgeTM Pheny (250 mm x 4,6 mm, 5 μm), vazão 1,0 mL/min e detecção em 207 nm. A fase móvel foi composta por acetonitrila: solução aquosa em 0,05% de ácido fórmico (40:60, v/v). A determinação quantitativa da vildagliptina e duas impurezas de síntese foi desenvolvida e validada utilizando a técnica por cromatografia líquida de ultra-eficiência. A coluna cromatográfica utilizada corresponde ACQUITI UPLC® BEH C8 (50 x 2,1 mm; 1,7 μm), vazão 0,3 mL/min, volume de injeção de 1 μL e temperatura de 35°C. A fase móvel foi composta por metanol em ácido fórmico 0,1%: solução aquosa em ácido fórmico 0,1%. A partir dos resultados obtidos, verificou-se que estes estão de acordo com os requisitos preconizados pelos códigos oficiais. Esta pesquisa também apresenta resultados referentes aos estudos de citotoxicidade e genotoxicidade tanto dos fármacos quanto das respectivas impurezas realizados a partir dos ensaios de MTT, vermelho neutro, óxido nítrico, espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, potencial de membrana mitocondrial e teste cometa. / Impurities profiling have attention of national and international regulatory agencies as they may generate implications for the health of the population. Against this, pharmaceutical industry must be suitable for new regulations to ensure quality, safety and efficacy of medicines. The phosphate sitagliptin and vildagliptin, released for clinical use in Brazil in 2006 and 2007, respectively, and used for the treatment of diabetes mellitus type 2. In the literature, we not found any reports regarding the quantitative determination of impurities synthesis of vildagliptin and sitagliptin. Thus, this study aimed to develop and validate analytical methods for the determination of impurities of sitagliptin and vildagliptin in addition to performing toxicological tests. It was developed and validated an analytical method by high-performance liquid chromatography for determination of sitagliptin in presence of two impurities synthesis according to the specific parameters, linearity, precision, accuracy, robustness, limits of detection and quantification. The XBridgeTM Phenyl column (250 mm x 4.6 mm d.i., 5 μm), flow rate 1.0 mL/min and detection at 207 nm. The mobile phase was composed of acetonitrile: aqueous solution in 0.05% formic acid (40:60, v/v). The results obtained are in accordance with the requirements recommended by official guides. Quantitative determination of vildagliptin and its synthetic impurities was developed using liquid chromatography ultra efficiency. The chromatographic column ACQUITY UPLC® BEH C8 (50 x 2.1 mm, 1.7 μm) was used, flow rate 0.3 mL/min, injection volume 1 μL and temperature 35 °C. The mobile phase is composed of methanol in formic acid 0.1%: aqueous solution in formic acid 0.1%. This research presents results for the cytotoxicity and genotoxicity studies of both drugs and the impurities.

As técnicas de voltametria de pulso diferencial e de cromatografia líquida de alta eficiência foram utilizadas para a detecção do ácido ascórbico (AA) em amostras farmacêuticas. O eletrodo de carbono vítreo modificado com nanopartículas de antimônio ancoradas em nanotubos de carbono de paredes múltiplas foi utilizado para a determinação eletroanalítica de ácido ascórbico. Parâmetros como eletrólito suporte, volume adicionado do nanocompósito à superfície do eletrodo, pH do eletrólito, amplitude e incremento de potencial foram avaliados e definidos os que obtiveram os melhores resultados. A curva analítica obtida para a determinação de AA com concentrações entre 291-698 µmol L-1 em comprimidos pelo método eletroanalítico apresentou boa linearidade (0,998) e limites de detecção e quantificação 42,58 µmol L-1 e 25,00 µmg L-1, respectivamente. O método cromatográfico utilizado foi validado e a curva analítica obtida para a determinação de AA com concentrações entre 291-698 µmol L-1 em comprimidos através desse método apresentou boa linearidade (0,998) e limites de detecção e quantificação 37,24 µmol L-1 e 21,86 µmg L-1, respectivamente. Os resultados obtidos foram validados comparados estatisticamente pelo método de regressão linear descrito por Miller e Miller. Para avaliar a equivalência entre os métodos utilizou-se um teste t de Student pareado, que confirmou a equivalência dos métodos estudados para esta aplicação. / Techniques of differential pulse voltammetry and high-performance liquid chromatography were used for detection of ascorbic acid (AA) in pharmaceutical samples. The glassy carbon electrode modified with antimony nanoparticles anchored in multi-walled carbon nanotubes was used for electroanalytical determination of ascorbic acid. Parameters as supporting electrolyte, the volume of nanocomposite added to the electrode surface, pH of the electrolyte, amplitude and step potential were evaluated and defined. The calibration curve obtained by electroanalytical method for determination of AA with concentrations between 291-698 µmol L-1 using pills, showed good linearity (0.998) and limits of detection and quantification 42,58 µmol L-1 e 25,00 µmg L-1, respectively. The chromatographic method used was validated and the analytical curve obtained for determination of AA with concentrations between 291-698 µmol L-1 using pills showed good linearity (0.998) and limits of detection and quantification 37,24 µmol L-1 and 21,86 µmg L-1, respectively. The results were validated and statistically compared by the linear regression method described by Miller and Miller. To evaluate the equivalence between the methods, Student\'s paired t-test was used, which confirmed the equivalence of the methods studied for this application.

O presente estudo teve como objetivo desenvolver e validar um método analítico para a investigação de parabenos em tecido de peixe. Para o preparo de amostra empregou-se como método a microextração líquido-líquido (LLME) seguido de análise cromatográfica líquida de alta eficiência acoplada a um detector de arranjo de diodos. Empregou-se coluna Nucleodur C8 (4,6 x 250 mm, 5 µm), com injeção de 20µL, fluxo de 1mL min-1, temperatura de 25 °C, comprimento de onda 258nm e fase móvel composta por água acidificada com 1% de ácido acético e metanol em modo gradiente na proporção de 60% de metanol até 8 minutos e de 65% até 20 minutos. A recuperação do método para o metilparabeno nas concentrações 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,8 e 1,0 µgg-1 foi de 94; 95; 89; 83; 100 e 74% respectivamente e o desvio padrão relativo foi de 7,0; 0,5; 3,2; 10,0; 5,2 e 2,9 %para as seis concentrações. A recuperação do etilparabeno foi de 107; 103; 80; 89; 89 e 88% para as seguintes concentrações 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,8 e 1,0 µgg-1 e o desvio padrão foi de 7,4; 4,1; 12,2; 3,2; 7,7 e 3,6 % respectivamente. A recuperação do propilparabeno foi de 106; 96; 94; 97; 100 e 76 % para as seguintes concentrações 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,8 e 1,0 µgg-1 e o desvio padrão foi de 14,2; 8,6; 14,9; 4,0; 7,9 e 2,6 % respectivamente. A recuperação do butilparabeno foi de 102; 74; 96; 79; 112 e 78% para as seguintes concentrações 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,8 e 1,0 µgg-1 e o desvio padrão foi de 7,7; 4,0; 9,1; 5,5; 2,0 e 4,2 % respectivamente. Os limites de detecção variaram de 0,0007 a 0,0221 µgL-1 e os de quantificação de 0,0021 a 0,0738 µgL-1. Os coeficientes de correlação ficaram entre 0,9837 a 0,9906 dentro do limite estabelecido pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária para matrizes biológicas. O método foi aplicado em três amostra de peixes adquiridos no comércio de São Carlos - SP. Em 50% das amostras analisadas encontrou-se picos cromatográficos nos mesmos tempos de retenção dos padrões dos parabenos. A concentração do etilparabeno foi de 0,0438 µgg-1, para o propilparabeno a concentração foi de 0,0365 a 0,0564 µgg-1 e para o butilparabeno a concentração foi de 0,0322 a 0,0678 µgg-1. O metilparabeno foi o único que não foi encontrado nas amostras de tecido dos peixes analisadas. / his research aimed to develop and validate a new chromatographic method combined with liquid-liquid microextraction (LLME) for the determination and quantification of parabens in fish tissue. A high performance liquid chromatography coupled with diode array detection was employed with a Nucleodur C8 ec column (250 x 4.6 mm, 5 µm), injection volume of 20?L, wavelength of 258nm, flow rate of 1 mL min-1, temperature of 25 ° C and gradient mode, using 1% of acetic acid diluted in water and methanol, in the proportion of 60% of methanol until 8 minutes and 65% within 20 minutes. The liquid-liquid microextraction (LLME) provided adequate recoveries of 94; 95; 89; 83; 100 and 74% for the methylparaben at concentration of 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,8; 1,0 µgg-1 respectively, with accuracy of 7,0; 0,5; 3,2; 10,0; 5,2 and 2,9 %. The recoveries for the ethylparaben was 107; 103; 80; 89; 89 and 88% at concentration of 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,8 and 1,0 µgg-1 respectively,with accuracy of 7,4; 4,1; 12,2; 3,2; 7,7 and 3,6 % The recoveries for the propylparaben was 106; 96; 94; 97; 100 and 76 % at concentration of 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,8; 1,0 µgg-1 respectively, with accuracy of 14,2; 8,6; 14,9; 4,0; 7,9 and 2,6 % . The recoveries for the butylparaben was 102; 74; 96; 79; 112 and 78%at concentration of 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,8; 1,0 µgg-1 respectively,with accuracy of 7,7; 4,0; 9,1; 5,5; 2,0 and 4,2 %. The method detection limits (MDLs) ranged from 0,0007 a 0,0221 µgL-1 and the method quatification limists (MQLs) ranged from 0,0021 a 0,0738 µgL-1. The correlation coefficients ranged from 0.9837 to 0.9906 not further than the limits established by the Agência Nacional de Vigilância Sanitária for complex samples. The method LLME/HPLC-DAD was applied to the analysis of three samples from the market of São Carlos-SP. In 50% of the samples analysed, chromatographic peaks were found at the same retention times of parabens. The ethylparaben concentrations founded was 0,0438 µgg-1, for propylparaben concentration ranged from 0,0365 to 0,0564 µgg-1 and for butylparaben concentration ranged from 0,0322 to 0,0678 µgg-1. The methylparaben was not found in the fish tissue sample analyzed.