A Bradicinina, a mais importante das cininas plasmáticas, foi encontrada pela primeira vez em mamíferos. Pouco foi estudado sobre o sistema calicreína-cininas em serpentes, mas o que se sabe é que, provavelmente, são deficientes do Fator XII, um ativador da pré-calicreína em mamíferos. Com o objetivo de identificarmos novos peptídeos, submetemos plasmas das serpentes Bothrops jararaca (SBJ) e da Crotalus durissus terrificus (SCDT) tratados por duas metodologias simplificadas de determinação de bradicininogênio. O estudo com os plasmas das SBJ e da SCDT liberou uma substância com efeito semelhante à cinina de mamíferos que produziu hipotensão na serpente e no rato; esse efeito foi potencializado com o uso do captopril (0,05/0,010 mg/Kg), que inibe a cininase II, confirmando resultados diferentes das literaturas existentes sobre esse assunto. Com o resultado obtido, fracionamos este produto em aparelho de HPLC, e obtivemos seqüências peptídicas que não apresentaram homologia com a bradicinina. / The Bradykinin (BK), most important of the plasmatic kinins, was encountered for the first time in mammals. Little was studied in the kallikrein-kinin system in snakes, but it is known that, it is probably deficient of Factor XII, an activator of the daily prekallikrein in mammals. In order to identify new peptides, we submit plasma of the snakes Bothrops jararaca (SBJ) and e Crotalus durissus terrificus (SCDT) in two simplified methodologies for bradykininnogen determination, to analyze in bioassays of average arterial pressure of mammals and isolated ileum of guinea pig. The study with plasma of the SBJ and the SCDT showed that the kinin of mammals released a substance with effect similar to that producing hypotension in snakes and rats; this effect was potentiated with the use of captopril (0,05/0,010 mg/Kg), wich inhibits kininase II, confirming results different from literature?s obtained on this subject. With the obtained result, we fractioned this product in HPLC equipment and obtained peptides sequences with no homologie with the bradykinin.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-04-25T16:50:08Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Milton Junio Cândido Bernardes - 2012.pdf: 1056534 bytes, checksum: f6f739a120711136b922612ab0c4029c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-04-25T16:51:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Milton Junio Cândido Bernardes - 2012.pdf: 1056534 bytes, checksum: f6f739a120711136b922612ab0c4029c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-25T16:51:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Milton Junio Cândido Bernardes - 2012.pdf: 1056534 bytes, checksum: f6f739a120711136b922612ab0c4029c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2012-12-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Aspidosperma subincanum Mart. is a medicinal herb that is known to be useful for the treatment of cardiovascular-related illnesses. However, its effects and pharmacological mechanisms of action have not been studied. The aim of the present study was to determine the effect of an ethanol extract of Aspidosperma subincanum Mart. (EEAS) on blood pressure (in vivo) and vascular tension (in vitro) in the rat thoracic aorta. Catheters were inserted into the right femoral vein and artery of anesthetized rats for EEAS infusion and the measurement of blood pressure, heart rate and aortic blood flow (flow probes were placed around the aorta). Moreover, the vasodilator effect of EEAS in isolated pre-contracted rat aortas was examined. Intravenous infusion of EEAS resulted in significant and dose-dependent hypotension, bradycardia and increased aortic blood flow. In isolated arteries, EEAS (0-27μg/mL) induced a concentration-dependent relaxation of pre-contracted aortic rings; endothelial denudation potentiated this effect. Pre-treatment of the aortic rings with ODQ, an inhibitor of soluble guanylyl cyclase (sGC); MDL-12,330A, an inhibitor of adenylyl cyclase (AC); or CPA, a SERCA inhibitor, reduced EEAS-induced vasorelaxation. Treatment with an EEAS impaired contractions induced by phenylephrine (an adrenergic agonist) and Bay K 8644 (an L-type Ca(2+) channel activator). The blockade of K(+) channels with tetraethylammonium, clotrimazole, glibenclamide or 4-aminopyridine reduced the relaxation stimulated by EEAS. These findings suggest that EEAS induces hypotension associated with bradycardia. EEAS induces endothelium-independent vascular relaxation. The sGC/cGMP and AC/cAMP pathways, SERCA activation and Ca(2+) and K(+) flux across the sarcolemma, are likely involved in this relaxation. / O Aspidosperma subincanum Mart. é uma planta medicinal que é conhecida por ser utilizada para o tratamento de doenças relacionadas com o sistema cardiovascular. No entanto, seus efeitos e mecanismos de ação farmacológicos não estão muito bem elucidados. O objetivo do presente estudo foi determinar o efeito do Extrato Etanólico do Aspidosperma Subincanum Mart. (EEAS) sobre a pressão arterial (in vivo) em ratos anestesiados e da pressão arterial (in vitro) em artéria aorta torácicas de ratos. Para a realização do protocolos experimentais foram inseridos cateteres na veia e artéria femural direita de ratos anestesiados para que pudesse ser realizada a infusão do EEAS e a verificação da pressão arterial, frequência cardíaca e fluxo sanguíneo aórtico; foram inseridas sondas de fluxo e posicionadas em torno da aorta. Além da pressão foi verificado o efeito vasodilatador do EEAS em anéis de aortas isoladas de ratos pré-contraídas com vasoconstritor. A infusão intravenosa do EEAS resultou em significativa hipotensão, bradicardia e aumento do fluxo aórtico dose-dependente. Em artérias isoladas, o EEAS (0-27μg/mL) induziu relaxamento concentração-dependente em anéis de aorta pré-contraídas com agonista contrátil; foi potencializado o relaxamento nos anéis de aorta sem endotélio. O pré-tratamento dos anéis isoladas de aorta com ODQ, um inibidor da guanilato clicase solúvel (sGC), MDL – 12,330A um inibidor da adenilato ciclase (AC) e CPA um inibidor da bomba do retículo sarcoplasmático, reduziram o vasorelaxamento induzido pelo EEAS. O EEAS foi capaz de diminuir o efeito ocasionado pelo tratamento com fenilefrina (um agonista adrenérgico) e Bay K 8644 (ativador dos canais de Calcio do tipo L) de forma concentração-dependente. O bloqueio dos canais de K+ com tetraetilamonio, clotrimazol, glibenclamida ou 4-aminopiridina reduziu o relaxamento estimulado pelo EEAS. Estes achados sugerem que o EEAS induz hipotensão associada à bradicardia e o relaxamento independente do endotélio vascular. As vias do cGMP/sGC e cAMP/AC foram ativadas e a SERCA e os canais de K+ possivelmente estão envolvidos neste relaxamento.

A Bradicinina, a mais importante das cininas plasmáticas, foi encontrada pela primeira vez em mamíferos. Pouco foi estudado sobre o sistema calicreína-cininas em serpentes, mas o que se sabe é que, provavelmente, são deficientes do Fator XII, um ativador da pré-calicreína em mamíferos. Com o objetivo de identificarmos novos peptídeos, submetemos plasmas das serpentes Bothrops jararaca (SBJ) e da Crotalus durissus terrificus (SCDT) tratados por duas metodologias simplificadas de determinação de bradicininogênio. O estudo com os plasmas das SBJ e da SCDT liberou uma substância com efeito semelhante à cinina de mamíferos que produziu hipotensão na serpente e no rato; esse efeito foi potencializado com o uso do captopril (0,05/0,010 mg/Kg), que inibe a cininase II, confirmando resultados diferentes das literaturas existentes sobre esse assunto. Com o resultado obtido, fracionamos este produto em aparelho de HPLC, e obtivemos seqüências peptídicas que não apresentaram homologia com a bradicinina. / The Bradykinin (BK), most important of the plasmatic kinins, was encountered for the first time in mammals. Little was studied in the kallikrein-kinin system in snakes, but it is known that, it is probably deficient of Factor XII, an activator of the daily prekallikrein in mammals. In order to identify new peptides, we submit plasma of the snakes Bothrops jararaca (SBJ) and e Crotalus durissus terrificus (SCDT) in two simplified methodologies for bradykininnogen determination, to analyze in bioassays of average arterial pressure of mammals and isolated ileum of guinea pig. The study with plasma of the SBJ and the SCDT showed that the kinin of mammals released a substance with effect similar to that producing hypotension in snakes and rats; this effect was potentiated with the use of captopril (0,05/0,010 mg/Kg), wich inhibits kininase II, confirming results different from literature?s obtained on this subject. With the obtained result, we fractioned this product in HPLC equipment and obtained peptides sequences with no homologie with the bradykinin.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3215575 bytes, checksum: 8de9cf3f200ed4dc0ee4d1b0b672ce4f (MD5) Previous issue date: 2012-08-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The number of alkaloids containing the 1-substituted tetrahydroisoquinoline skeleton is extensive and impressive versatility of this pharmacological class arouses interest in experimental pharmacologists. Applying the consecrated Pictet-Spengler reaction of four phenyltetrahydroisoquinoline alkaloids was obtained, three of which are unpublished. Two of them obtained with excellent yield (93.45%) in one step. Starting from allylbenzene that initially passed through an isomerization followed by oxidation by applying the Limieux-Johnson reaction were obtained from two other alkaloids with an overall yield of 50%. In experimental models of acute inflammation, the 1-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)-7-methoxy-1,2,3,4,tetrahydroisoquinoline (MTHP) significantly reduced (p <0.05) cell migration into the abdominal cavity of mice and the release of pro-inflammatory mediators (TNF-α, IL-1 and IL-6) in a dose one hundred thirty-eight times lower dosage than the dose of aspirin administered (200 mg/Kg).The MTHP causes hypotension in non-anesthetized normotensive rats, which can be attributed to the participation of endothelium-derived factors, including NO and metabolites COX. These data suggest that MTHP has anti-inflammatory and hypotensive effect related to different mechanisms, and further studies are needed to explore its potential. / O número de alcaloides que contém o esqueleto tetrahidroisoquinolínico 1-substituído é extenso e a impressionante versatilidade farmacológica desta classe desperta o interesse nos farmacologistas experimentais. Aplicando a consagrada reação de Pictet-Spengler obtivemos quatro alcaloides fenil tetrahidroisoquinolínicos dos quais três são inéditos. Dois deles obtidos com excelente rendimento (93,45%) em uma única etapa. Partindo-se de alilbenzenos que inicialmente passaram por uma isomerização seguida de oxidação via reação de Limieux-Johnson, foram obtidos os outros dois alcaloides com rendimento global de 50%. Em modelo experimental de inflamação aguda, a 1-(3-metoxi-4-hidroxifenil)-7-metoxi-1,2,3,4,-tetrahidroisoquinolina (MTHP) reduziu significativamente (p<0,05) a migração celular para a cavidade abdominal de camundongos bem como a liberação dos mediadores pró-inflamatórios (TNF-, IL-1 e IL-6) em uma dose cento e trinta e oito vezes menor que a dose de AAS administrada (200mg/Kg i.p.). MTHP provoca hipotensão em ratos normotensos não anestesiados, que pode ser atribuída à participação de derivados do endotélio, incluindo fatores de NO e metabolitos COX. Estes dados sugerem que MTHP tem efeitos anti-inflamatórios e hipotensores relacionados a diferentes mecanismos, e novos estudos são necessários para explorar seu potencial.