O poeta milanês Giuseppe Parini (1729-1799), embora ocupe um papel de destaque na história da literatura italiana no século XVIII, não é estudado no Brasil, inclusive dentro do ambiente acadêmico voltado aos estudos da italianística. Seu poema narrativo Il Giorno é considerado uma das mais importantes obras do Settecento italiano, apresentando uma dura crítica à nobreza do século XVIII por meio de uma sátira que busca se opor à poesia árcade sentimental em voga na época. O poema de Parini serviu de inspiração para grandes autores da literatura italiana estudados atualmente inclusive no Brasil, como Giacomo Leopardi, Alessandro Manzoni e Ugo Foscolo. Original, clássico e, ao mesmo tempo, atual, Il Giorno é uma obra que merece ser incluída nos estudos de literatura da academia brasileira e, portanto, necessita de uma versão comentada e anotada em língua portuguesa. Entendemos que sua ausência nos estudos dos italianistas brasileiros deva-se sobretudo à dificuldade de compreensão do poema, repleto de latinismos e figuras de linguagem e som, e julgamos que apresentar uma tradução comentada de ao menos uma parte Il Giorno é uma forma de incentivar o contato de professores, pesquisadores e estudantes com esse grande autor e, dessa forma, torná-lo conhecido em nosso meio acadêmico. Portanto, apresentamos uma tradução comentada de Il Mattino, primeira parte da obra. Trata-se de uma tradução estrangeirizante, que preserva os arcaísmos e rebuscamentos do poema italiano, fundamentais em sua constituição como obra satírica ao se contrapor ao assunto narrado na obra: o dia a dia superficial e irrelevante de um jovem membro da aristocracia italiana do século XVIII. / Although the Milanese poet Giuseppe Parini (1729-1799) plays a prominent role in the history of Italian literature of the eighteenth century, he is not studied in Brazil, not even within the academic community focused on Italian studies. His narrative poem Il Giorno is considered one of the most important works of the Italian Settecento: it presents a harsh criticism to the nobility of the eighteenth century by means of a satire that seeks to oppose itself to the sentimental Arctic poetry, very much in vogue at the time. Parinis poem was an inspiration for great Italian writers that are studied nowadays, in Brazil as well as abroad, such as Leopardi, Manzoni and Ugo Foscolo. Original, classic and modern at the same time, Il Giorno deserves to be included in the literature studies of the Brazilian academic community, and, therefore, needs an annotated version in Brazilian Portuguese. We understand that its absence in the field of Italian studies in Brazil is dewed mainly to the difficulty of its comprehension, full of Latinisms and stylistic literary devices, and we believe that an annotated translation of at least one part of Il Giorno is a way to encourage teachers, researchers and students to get in touch with this great writer and, thereby, make him known in our academic community. Therefore, we present an annotated translation of Il Mattino, the first part of Il Giorno. It is a foreignization translation, with all the archaisms and refinements of the Italian poem, considering that those archaisms and refinements, when countering the subject narrated in the work the superficial and irrelevant day-to-day of a young member of the Italian aristocracy of the eighteenth century , are fundamental to the formation of the poem as a satiric work.

A doença dos legionários consiste em uma broncopneumonia severa e atípica, que acomete de 2 a 7% das pessoas infectadas com Legionella spp e que apresenta taxa de mortalidade que varia de 5 a 30%, sendo considerada uma importante causa de morbidade e mortalidade mundial. A patologia causada pela espécie L. pneumophila tem sido amplamente estudada em modelos experimentais e suas características clínicas foram extensivamente descritas. No entanto, este modelo não representa adequadamente a doença que acomete seres humanos, pois L. pneumophila não é letal aos camundongos como é para humanos. Recentemente, uma nova espécie de bactéria do gênero Legionella, denominada Legionella longbeachae, foi descrita como importante agente de doença dos legionários em países do hemisfério sul. A pneumonia induzida por L. longbeachae em humanos não difere da induzida por L. pneumophila. No entanto, L. longbeachae é letal para camundongos em doses baixas, o que torna esse modelo murino de doença dos legionários mais fidedigno ao que ocorre com humanos. Com a acentuada mudança dos hábitos de nossa sociedade, há o aumento do número de pessoas com fatores que predispõe a doença, como idade elevada ou tratamento imunossupressor. Assim, entender melhor a relação patógeno-hospedeiro no curso da doença dos legionários por meio da utilização de um modelo experimental adequado é importante para a descoberta de novos meios de combater este patógeno. Neste trabalho, geramos uma cepa de L. longbeachae mutante para rpsL, que se torna resistente à estreptomicina. Essa cepa pode ser utilizada para infecções in vivo nas quais a quantificação da CFU foi estimada em placas contendo antibiótico, o que culmina em maior eficiência experimental e menor quantidade de contaminações. Essa cepa foi utilizada em experimentos in vivo para avaliar os componentes do sistema imune que operam na resistência diante de uma dose letal bacteriana administrada pela via intranasal. Demonstramos que camundongos deficientes para as citocinas IFN ou TNF e para o receptor de quimiocinas CCR2 são mais susceptíveis à infecção do que os camundongos selvagens. No entanto, camundongos deficientes para o receptor de quimiocinas CCR5, para o receptor de IL-17, para a citocina IL-6 ou para o receptor citoplasmático NOD2 são mais resistentes à infecção quando comparados com animais selvagens. A descoberta destas moléculas em um modelo de infecção letal in vivo ressalta a importância de alguns componentes da imunidade para a resistência durante a doença dos legionários experimental e possíveis alvos terapêuticos para essa doença. / Legionnaires disease is a severe and atypical bronchopneumonia, which affects 2-7% people infected with Legionella spp and has a mortality rate of 5 to 30%, therefore it is considered an important cause of mortality and morbidity worldwide. Disease caused by Legionella pneumophila has been largely studied in experimental models and its clinical characteristics was extensively described. However this model does not adequately represent the disease that affects humans, because L. pneumophila is not lethal to mice, as it is to humans. Recently, a new species of bacterium from Legionella genus, called Legionella longbeachae, was described as an important agent of Legionnaires disease in the southern hemisphere. The pneumonia induced by L. longbeachae in humans is not different from pneumonia induced by L. pneumophila. However, a low dose of L. longbeachae is lethal to mice, which makes this murine infection model of Legionnaires disease more reliable than that which occurs in humans. Because our society is changing, there is an increase in the number of persons with predisposing factors, like higher age or immunosuppressive treatment. So, a better understanding of host-pathogen relationship by using a suitable experimental model is important to find new ways to fight this pathogen. Here, we generated a strain of rpsL mutant L. longbeachae, which becomes resistant to streptomycin. This strain could be used in in vivo infections, when CFU quantification was estimated in plates with antibiotic, culminating in greater experimental efficiency and lower contamination. This strain was used in in vivo experiments to evaluate components of the immune system that participates in resistance against lethal dose of bacteria administered intranasally. We showed that Tnf-/-, Ifn-/- or Ccr2-/- mice are more susceptible to infection than wild type mice. However Ccr5-/-, Il17r-/-, Il6-/- or Nod2-/- mice are more resistant to infection than wild type animals. The discovery of these molecules in a lethal infection model in vivo highlights the importance of some components of immunity to resistance during experimental Legionnaires disease and potential therapeutic targets to disease.

Introdução: A Doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa e a forma mais comum de demência. Processos inflamatórios parecem desempenhar importante papel na fisiopatologia da DA. A neuroinflamação é caracterizada pela ativação da microglia e a liberação de citocinas inflamatórias, tais como IL-1β, IL-6 e TNF-α. Porém, não se sabe qual é a real contribuição destes marcadores inflamatórios no desenvolvimento da DA. Objetivos: A proposta deste estudo é avaliar a possível relação entre marcadores inflamatórios no liquido cefalorraquidiano de indivíduos com comprometimento cognitivo leve amnéstico (CCL-a), com 60 anos ou mais, e comparar com controles saudáveis da mesma faixa etária. Métodos: Foram examinadas as concentrações de IL-1β, IL-6 e TNF-α no líquido cefalorraquidiano de sujeitos com CCL-a e em controles pelo método ELISA. Diagnósticos de CCL-a foram baseados na anamnese e nos critérios de Petersen, corroborados pela escala CDR. Para avaliar a função cognitiva o teste de memória e reconhecimento de palavras do CERAD e o Teste do Relógio foram aplicados aos participantes. Para a avaliação de sintomas depressivos usou-se o GDS. Resultados: Este estudo demonstrou diminuição significativa nos níveis de IL-1β (13.735 vs 22.932 pg/mL; p <0.001) e TNF-α (1.913 vs 2.627 pg/mL; p: 0.002), mas não nos níveis da IL-6 (4.178 vs 5.689 pg/mL; p: 0.106), entre casos e controles. Indivíduos com IL-1β < 17 pg/mL possuem 7.2 (CI: 1.5-36; p: 0.016) mais chances de evoluírem à CCL-a. Além disso, houve correlação positiva entre IL-1β e a pontuação da lista de palavras do CERAD (rs: 0.299; p: 0.046). A análise de regressão linear mostrou que os níveis de IL-1β podem explicar 13.7% (β: 24.545; p: 0.012) da variância da pontuação do CERAD, o que sugere uma dependência linear direta. Conclusões: A neuroinflamação, mediada pela IL-1β e pelo TNF-α, provavelmente possui importante papel na prevenção de CCL-a. / Introduction: Alzheimer Disease (AD) is a neurodegenerative disorder and the most common form of dementia. Inflammatory processes may play a significant role at the pathophysiology of AD. Neuroinflammation is characterized by activation of microglia and the release of inflammatory cytokines, such as IL-1β, IL-6 and TNF-α. Although, it is unknown what is the real contribution of these inflammatory markers in the development of AD. Aims: The purpose of this study is to assess the possibly relationship between inflammatory markers in CSF of amnestic MCI subjects, with sixty years or older, and compare to aged healthy controls. Methods: We examined concentrations of IL-1β, IL-6 and TNF-α at CSF of amnestic MCI subjects and controls by ELISA. MCI diagnoses were based on anamnesis and Petersen criteria, corroborated by CDR. To assess the cognitive function the word list memory test and word recognition of CERAD and Clock Drawing Test were applied to subjects, and to evaluated depression symptoms the GDS was used. Results: This study demonstrated significant diminish in the levels of IL-1β (13.735 vs 22.932 pg/mL; p <0.001) and TNF-α (1.913 vs 2.627 pg/mL; p: 0.002), but not IL-6 (1.913 vs 2.627 pg/mL; p: 0.002), between cases and controls. Individuals with IL-1β < 17 pg/mL were at a 7.2 (CI: 1.5-36; p: 0.016) increased odds of aMCI. Furthermore, there was a positive correlation between IL-1β and the CERAD word list score (rs: 0.299; p: 0.046). The linear regression analysis showed that IL-1β levels can explain 13.7% (β: 24.545; p: 0.012) of the variance on this CERAD subscore, suggesting a direct linear dependence. Conclusion: Neuroinflamation mediated by IL-1β and TNF-α may play an important role in preventing aMCI.

Orientadores: Áureo Tatsumi Yamada, Michael Joseph Soares / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T04:12:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lippe_ElianaMaraOliveira_D.pdf: 1508385 bytes, checksum: f80492236b91aa11f6167dbfd5369199 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Um processo de remodelação progressiva da vascularização uterina precede a placentação em humanos e roedores para prover o suprimento sanguíneo adequado na interface materno-fetal, tendo as células NK um papel modulador através da produção de citocinas como o IFN'gama', fatores de crescimento como o VEGF e radicais livres como o óxido nítrico (NO). A regulação das células uNK nesta atividade tem sido atribuída à influência de fatores exógenos como a hipóxia e parácrinos como a prolactin-like protein-A (PLP-A). Contudo, como estes mecanismos são integrados no controle da angiogênese e vasculogênese da interface materno-fetal envolvendo as células uNK não são plenamente compreendidos. No presente trabalho, foram investigadas experimentalmente a resposta das células uNK relacionadas com os mecanismos de regulação dos fatores angiogênicos sob influência da hipóxia no período pré-placentário. Para tanto, foram avaliados camundongos CD1 e geneticamente modificados IL15-/-, PLPA-/- e IL15-/-/PLPA-/- gestantes no 8° dia de gestação (dg), mantidos em hipóxia (42 0Torr - 11%O2) durante 48 horas. Em comparação com os animais mantidos em normóxia (760Torr - 21%O2) a quantidade de sítios anormais apresentou incremento estatisticamente significativo sob hipóxia nos animais CD1, porém este índice era substancialmente maior nos animais depletados dos genes IL15 e PLPA. As amostras dos sítios uterinos de desenvolvimento embrionários coletados foram processados para obtenção de criocortes destinados às reações citoquímicas, imunocitoquímicas e hibridização in situ, e homogeneizados teciduais para extração do RNAm ou proteínas. Conforme esperado, os resultados da citoquímica com lectina DBA e imunocitoquímica de perforina comprovam a ausência de células uNK nos animais IL15-/- e IL15-/-/PLPA-/-, enquanto nos animais PLPA-/-, a incidência das células uNK perforina positivas não difere dos CD1 em normóxia ou hipóxia. A concentração protéica de VEGF e dos genes das isoformas VEGFA, VEGFB e VEGFC, assim como do IFN? e das isoformas iNOS e eNOS, o do TNF? e seus receptores TNFR1 e TNFR2 não apresentaram variações em suas concentrações ou níveis de expressões com padrões definidas de regulação negativa ou positiva entre os animais avaliados. Contudo a imunocitoquímica demonstrou redução de marcação de células endoteliais endoglinpositivas no endométrio e aumento no potencial invasivo de células trofoblásticas TROMA-I positivas dos animais IL15-/-. O conjunto destes resultados confirma que a ausência das células uNK afeta a vascularização normal do endométrio, a qual pode resultar em perdas gestacionais e induz a hipertrofia placentária, sem a participação direta da atividade citotóxica destas células. Comprovam também que os mecanismos de controle da expressão de fatores angiogênicos no útero gestante são multifatoriais, não sendo dependente de uma via única como o da PLPA/VEGF, ou exclusivamente das células uNK como fontes de fatores que modulam a angiogênese na interface maternofetal do útero gestante / Abstract: A gradual process of remodeling of uterine vasculature precedes placentation in humans and rodents to provide adequate blood supply in maternal-fetal interface, where NK cells producing cytokines like growth factor (VEGF) and IFN'gama' and free radical as nitric oxide (NO). Regulation of this uNK cells activity seems to be under influence of exogenous and endogenous factors such as hypoxia as paracrine effects of prolactin-like protein-A (PLPA). Nevertheless, how these mechanisms are integrated in the control of maternal-fetal interface angiogenesis and vasculogenesis involving uNK cells are not fully understood. In this study, we investigated experimentally the uNK cells response related to the mechanisms of regulation of angiogenic factor under hypoxia influence in pre-placental period. Thus, we evaluated genetically modified mice and CD1-IL15-/-, PLPA-/- and IL15-/- /PLPA-/-pregnant on the 8th day of gestation (dg), maintained in hypoxia (420Torr-11%O2) for 48h. When compared to the control animals in normoxia (760Torr-21%O2) the amount of abnormal embryo developing sites showed statistically significant increase under hypoxia in CD1 animals, but this rate was substantially higher in the PLPA and IL15 gene depleted animals. Uterine samples were processed to obtain cryosection for cytochemical, immunocytochemical and in situ hybridization reactions and extraction of mRNA or protein for PCR or ELISA reactions, respectively. As expected, the results of cytochemistry and immunocitochemistry with DBA lectin and perforin prove the absence of uNK cells in IL15-/- and IL15-/-/PLPA-/-animals, while in PLPA-/-animals, the incidence of uNK cells perforinpositive did not differ from CD1 animlas in normoxia or hypoxia. The concentration of protein VEGF and the gene isoforms expression of VEGF (A, B and C), as well as, IFN?, iNOS and eNOS, TNF? and their receptors TNFR1 and TNFR2 did not show constancy in the pattern of variations. However, the immunocytochemistry showed reduced staining of endoglin-positive endothelial cells in the endometrium and increase in invasive potential of trophoblast cells by TROMA-I positive in IL15-/- animals. This set of results confirms that the absence of uNK cells affects the normal vasculature of the endometrium which may increased intrauterine growth restriction (IUGR) or pregnancy failure rates and induces placental hypertrophy. This abnormality at the maternal-fetal interface does not seems to be involves direct participation of cytotoxic activity of uNK cells. Furthemore, the control mechanisms of angiogenic factors expression in the pregnant uterus are multifactorial rather than dependent of a single pathway like the PLP-A/VEGF, or limited to uNK cells as a source of factors that modulate angiogenesis in the maternal-fetal interface of pregnant uterus / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

O cavalo tem sido há milhares de anos um dos animais de maior utilidade para o homem, tanto no trabalho quanto no esporte. A integridade de sua estrutura física é determinante para a qualidade de seu desempenho, sendo alvo importante das estratégias terapêuticas e preventivas da atualidade. Diversos estudos têm esclarecido parte da cascata de eventos que ocorre em ambiente intra-articular, revelando os principais mediadores nocivos e ampliando as opções para tratamentos mais eficientes. Experimentos utilizando a citometria de fluxo foram capazes de demonstrar que a adição de plasma às células de líquido sinovial (LS) previamente inflamadas diminui a produção de espécies reativas de oxigênio durante o burst oxidativo, conferindo capacidade antioxidante a este hemoderivado. Pouco se sabe, no entanto, sobre seu potencial pró ou anti-inflamatório, pois não existem relatos na literatura investigando tal atividade. Assim, desenvolvemos este estudo com o objetivo de acompanhar os efeitos exercidos pelo plasma autólogo condicionado (ACP) sobre os tecidos articulares, reportando as alterações clínicas e no LS das articulações metacarpofalangeanas hígidas que receberam este tratamento. Foram administrados 4 ml de ACP em 10 articulações metacarpofalangeanas de equinos saudáveis, enquanto as articulações contralaterais receberam 4 ml de solução fisiológica, como controle. LS foi coletado antes de cada aplicação e nos momentos 3, 6, 24, 48 e 168 horas após. Foi realizada avaliação física diária, e as amostras coletadas foram submetidas imediatamente a análise física (volume, cor, aspecto e viscosidade), teste da qualidade do precipitado de mucina, contagem total e diferencial das células nucleadas. O sobrenadante foi congelado para dosagem posterior de ureia, proteína total, ácido hialurônico (AH), condroitim sulfato (CS), prostaglandina E2 (PGE2) e das citocinas fator de necrose tumoral alfa (TNF-&#945;), interleucina 1 beta (IL-1&#946;) e antagonista do receptor de IL-1 (IL-1ra). A avaliação física dos animais detectou presença de claudicação nas articulações metacarpofalangeanas tratadas com ACP nos momentos 24 e 48 horas após sua administração. A análise física do LS das mesmas articulações revelou maior contaminação das amostras com sangue às 6 horas e maior contagem de células nucleadas às 3, 6, 24 e 48 horas, com predomínio de leucócitos polimorfonucleares. Ainda, o ACP induziu maiores concentrações de proteína total e PGE2 às 3 e 6 horas, e maior concentração de CS às 24 horas. Houve também tendência ao aumento de TNF-&#945; às 24 horas. Às 168 horas, todavia, nenhuma alteração foi observada em quaisquer dos itens avaliados. Não ocorreram alterações nos demais aspectos físicos do LS nem na qualidade do precipitado de mucina, tampouco nas concentrações de ureia e AH. Estes resultados indicam que em articulações hígidas o ACP possui ação pró-inflamatória transitória, com maiores concentrações de PGE2 induzindo o catabolismo dos PGs da matriz, aumentando particularmente o CS. / History has connected human and equine species, for work and pleasure purposes and in both scenarios, horses\' physical integrity is of paramount importance for adequate performance. Soundness has been the target of many studies in orthopedic therapeutics and preventive equine medicine. Several of these studies have thrown light on the sequence of deleterious intra-articular events that take place after an insult, revealing key mediators of joint destruction and widening treatment options. Experiments evaluating the effects of plasma on reactive oxygen species production by chemically stimulated synovial fluid (SF) cells revealed a potent antioxidant effect. Little is known, however about plasma´s anti or pro inflammatory activities, still an unexplored property of plasma. This study was to designed to observe the effects of autologous conditioned plasma (ACP) on articular components, reporting findings of serial SF analysis and clinical evaluations, before and after its administration in healthy metacarpophalangeal joints. Four mililiters of ACP were injected in 10 healthy metacarpophalangeal joints, and the contralateral joints were injected with 4 ml of saline, serving as controls. SF was obtained for analysis before, and then 3, 6, 24, 48 and 168 hours after treatment injection. Horses were subjected to daily clinical evaluations and synovial fluid samples were immediately analyzed for color, viscosity, volume, aspect, quality of mucin clot and total and differential nucleated cell counts. The supernatant was frozen and stored for posterior dosages of urea, total protein, hyaluronic acid (HA), chondroitin sulphate (CS), prostaglandin E2 (PGE2), tumor necrosis factor alpha (TNF-&#945;), interleukin 1 beta (IL- 1&#946;), and interleukin 1 receptor antagonist (IL-1ra). Physical evaluation of ACP treated subjects detected mild lameness at 24 and 48 hours observation points. SF analysis of ACP treated joints revealed blood contamination and higher total nucleated cell counts at 3, 6, 24 and 48 hours, with predominance of polymorphonuclear cells. ACP treatment has also induced higher protein concentrations and PGE2 levels at 3 and 6 hours and higher CS levels at 24 hours in synovial fluid analysis. At 24 hours, TNF&#945; concentrations were higher, although not significantly. At 168 hours post ACP treatment, however, no change was observed in any parameter of synovial fluid analysis. No alterations were detected in the remaining items evaluated, nor in the quality of the mucin clot, urea concentration or HA. These results indicate that, when injected into healthy joints, ACP elicits a transient inflammatory response, characterized by higher PGE2 concentrations, matrix catabolism, with particular increase in CS.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-03T14:21:30Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Muriel Vilela Teodoro Silva - 2016.pdf: 1776615 bytes, checksum: bc5d7dd181834fb9ecdb5584e16756a9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-03T14:21:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Muriel Vilela Teodoro Silva - 2016.pdf: 1776615 bytes, checksum: bc5d7dd181834fb9ecdb5584e16756a9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-03T14:21:53Z (GMT). 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After 3, 6 and 9 weeks, the animals were euthanized for tissue parasitism analysis by the limiting dilution technique, in infected ears, draining lymph node and spleen of mice. The draining lymph node cells were incubated (48 h) in the presence or absence of L. amazonensis antigen (Ag) for analysis of cytokines by ELISA. IL-32γTg mice present IL-32 production in spleen, liver, lymph node and ear. IL-32γTg mice have a lower injury than the WT mice during the third week of infection. From the 5th to the 9th week of infection, the two groups had similar lesion development profiles. Interestingly, in the 3rd week of infection, the parasitic load in the lesion of IL-32γTg mice was 100 times greater than that of WT mice. After three weeks, IL-32γTg mice maintained the same parasitic load up to nine weeks. In WT mice, however, the number of parasites increased exponentially during weeks evaluated. The parasite load in the spleen and lymph node was lower in IL-32γTg mice when compared with WT mice. There was no difference in histological sections of the lesions in WT and IL-32γTg mice infected with L. amazonensis. We did not observe differences between WT and IL-32γTg groups on the product -10) by lymph node cells stimulated with Ag, in the 3rd, 6th and 9th week of infection. Our data suggest that IL-32γ favors infection by L. amazonensis in the early stages, allowing the growth of the parasites. However, this cytokine seems to limit the growth and spread of parasites in the later stages of infection. In vitro analyzes show the similar percentage of infected cells and the number of parasites per infected cell in WT macrophages and IL-32γTg after 3 and 48h of infection with L. amazonensis. However, the production of NO by macrophages seems to be lower in IL- 32γTg mouse cells during infection with L. amazonensis. Understanding the mechanisms by which IL-32γ modulates Leishmania amazonensis infection in mice is essential to define the components that control cutaneous leishmaniasis caused by this specie in humans. / A IL-32 é uma citocina pró-inflamatória que apresenta diferentes isoformas. A isoforma IL- 32γ é a mais potente e foi detectada em lesões de pacientes com leishmaniose tegumentar americana. Células murinas respondem à IL-32, no entanto, camundongos não têm o gene para essa citocina. Para entender o papel da IL-32 na infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis, foram utilizados camundongos transgênicos para a IL-32γ humana (IL-32γTg). Camundongos C57BL/6 (WT) e C57BL/6 IL-32γTg foram infectados com formas promastigotas de L. amazonensis na orelha. O desenvolvimento da lesão foi acompanhado semanalmente com paquímetro digital (medida em mm de lesão). Após 3, 6 e 9 semanas, os animais foram eutanasiados para análise de parasitismo tecidual, pela técnica de diluição limitante, nas orelhas infectadas, no linfonodo drenante e no baço dos camundongos. As células do linfonodo drenante foram incubadas (48 h), na presença ou ausência de antígeno de L. amazonensis (Ag), para análise de citocinas pela técnica de ELISA. Camundongos IL- 32γTg apresentam produção de IL-32 no baço, fígado, linfonodo e orelha. Camundongos IL- 32γTg apresentam uma lesão menor do que a lesão dos camundongos WT, na terceira semana de infecção. Da 5ª até a 9a semana de infecção, os dois grupos apresentaram perfis semelhantes de desenvolvimento da lesão. Curiosamente, na 3ª semana de infecção, a carga parasitária na lesão do camundongo IL-32γTg era 100 vezes maior do que a dos camundongos WT. Após três semanas, os camundongos IL-32γTg mantiveram a mesma carga parasitária até nove semanas. Em camundongos WT, no entanto, o número de parasitos aumentou exponencialmente durante as semanas avaliadas. A carga parasitária do linfonodo e no baço foi menor nos camundongos IL-32γTg, quando comparado com camundongos WT. Não foi observada diferença nos perfis histológicos das lesões nos camundongos WT e IL-32γTg infectados por L. amazonensis. Não foi observada nenhuma diferença entre os grupos WT e IL-32γTg em relação à produção de citocinas (IFNγ, TNFα e IL-10), pelas células dos linfonodos estimuladas com Ag, na 3a, 6a e 9a semana de infecção. Os nossos dados sugerem que a IL-32γ favorece a infecção por L. amazonensis nas fases iniciais, permitindo o crescimento do parasito; no entanto, essa citocina parece limitar o crescimento e a disseminação dos parasitos nas fases mais tardias da infecção. As análises in vitro mostraram porcentagem de células infectadas e número de parasitas por célula infectada semelhantes nos macrófagos dos WT e IL-32γTg com 3 e 48h de infecção por L. amazonensis. Entretanto, a produção de NO por macrófagos parece ser menor nas células de camundongos IL-32γTg durante a infecção por L. amazonensis. Compreender os mecanismos pelos quais a IL-32γ modula a infecção por L. amazonensis nos camundongos é fundamental para a definição dos componentes que controlam a leishmaniose tegumentar causada por esta espécie em seres humanos.

A indução de tolerância ao enxerto através da administração de células do doador, em períodos que antecedem o transplante, tem se demonstrado eficiente, mesmo em receptores não imunosuprimidos. Os dados da literatura científica são conflitantes quanto ao vínculo entre o microquimerismo e a tolerância aos aloantígenos. No presente estudo, observou-se que a infusão da mistura de células do baço com as da medula óssea, provenientes do doador (BALB/c x C57BI/6)F1, vinte e um dias antes do transplante, resultou em aumento do tempo de sobrevivência dos enxertos de pele e cardíaco, em parentais BALB/c, principalmente quando comparado ao grupo de animais que receberam somente as células do baço do mesmo doador. Assim, procurou-se investigar o estabelecimento do microquimerismo, sua relação com o aumento do tempo de sobrevivência do enxerto e possíveis mecanismos envolvidos. Observou-se um aumento de IL-10 no sobrenadante de cultura das células esplênicas provenientes de animais inoculados com a suspensão mista de células. Em contrapartida, os camundongos que receberam apenas as células do baço apresentaram um aumento da população de linfócitos B. Verificou-se, ainda, que o desenvolvimento de microquimerismo estável não se correlacionou com a tolerância ao enxerto cardíaco, apesar do tempo de sobrevivência do órgão. Esses resultados sugerem que a IL-10 participa no aumento da sobrevida do mesmo quando células do baço com as da medula óssea do doador são administradas antes do transplante. / Tolerance induction to allografts by the administration of donor cells before transplantation has been shown to be efficient, even in non immunosuppressed hosts. There are conflicting reports in the literature regarding the role of microchimerism and tolerance to alloantigens. In the present work, augmentation of skin and cardiac survival time was observed after the infusion of a mixture of donor (BALB/c x C57BI/6)F1 spleen and bone marrow cells twenty-one days before transplantation, specially when compared to donor spleen cell receptors. The establishment of microchimerism, correlation with graft survival time and possible mechanisms involved in this strategy were investigated. An overproduction of IL-10 in the supernatants from spleen cell cultures of mice inoculated with semi-allogeneic cells was observed. Mice that received donor spleen cells only showed increased number of B lymphocytes. Moreover, the establishment of microchimerism did not correlate to tolerance to cardiac allografts despite the augmentation of graft survival time. These results suggest that the development of microchimerism does not prevent graft rejection and that there is a role for IL-10 in graft survival when donor spleen and bone marrow cells are infused before transplantation.

O sistema NADPH oxidase é um complexo enzimático gerador de ânion superóxido formado pelas subunidades gp91-phox e p22-phox, p47-phox, p67-phox e p40-phox. O eixo IL-12/23-IFN-g é crítico para a ativação dos fagócitos e controle de infecções. Defeitos na ativação deste eixo resultam em infecções recorrentes e à MSMD, e podem levar à diminuição da expressão do componente gp91-phox. Em minha Dissertação de Mestrado (Aragão-Filho, 2009), vimos que as subunidades 1 e 2 do receptor do IFN-g são necessárias para a expressão dos genes NCF1 e NCF2 e para a ativação do sistema NADPH oxidase humano nos modelos experimentais de células humanas por nós utilizados. Assim, no presente trabalho de doutorado, continuamos a investigar o papel dos defeitos no eixo IL-12/23-IFN-g sobre o sistema NADPH oxidase utilizando novas linhagens celulares de pacientes com defeitos no eixo IL-12/23-IFN-g. Verificamos que há defeito secundário da ativação da NADPH oxidase em pacientes com defeitos no eixo IL-12/23-IFN-g, o que representa um novo mecanismo imunopatológico envolvido na MSMD. / The NADPH oxidase system is an enzymatic complex that generates superoxide anion, it is formed by gp91-phox, p22-phox, p47-phox, p67-phox and p40-phox subunits. The IL-12/23-IFN-g axis is critical for the phagocytes activation and infection control. Defects in this axis activation result in recurrent infections and MSMD, and can lead to decreased expression of gp91-phox component. In my Master Thesis (Aragão-Filho, 2009), we found that the subunits 1 and 2 of the IFN-g receptor are required for NCF1 and NCF2 gene expression and activation of human NADPH oxidase system in human experimental cell models that we used. Therefore, in the present doctoral work, we continue to investigate the role of IL-12/23-IFN-g axis defects on NADPH oxidase system using new cell lines from patients with IL-12/23-IFN-g axis defects. We verify that there is a secundary defect in the activation of the NADPH oxidase from patients with IL-12/23-IFN-g defects, what represents a new immunopathological mechanism involved in MSMD.

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Evidências sugerem que a citocina IFN-γ produzida pelo perfil Th1 é crucial para o controle da infecção em camundongos. A interleucina-10 (IL-10) é conhecida por diminuir a produção de IFNγ in vitro interferindo diretamente no processo da eliminação do patógeno. Durante a infecção pela B. abortus, a IL-10 pode atuar limitando a resposta inflamatória e favorecendo o estabelecimento da infecção persistente em camundongos. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da IL-10 endógena na infecção pela B. abortus. Para acessar o papel da IL-10, camundongos deficientes para IL-10 (IL-10 KO) ou 129 Sv/Ev foram infectados com a cepa S2308 de B. abortus e foram avaliados os númerso de bactérias viáveis recuperadas no baço desses animais. Uma, 2, 3, 6 e 14 semanas após infecção, camundongos IL-10 KO apresentaram menor número de bactérias recuperadas quando comparadas com o grupo controle em todos os tempos de infecção, principalmente em 14 semanas. Adicionalmente, constatou-se por análise de curva de sobrevivência em um período de 14 semanas após infecção que aproximadamente 35% dos camundongos IL-10 KO morrem somente na 2ª ou 3ª semana. Ademais, a produção de IFN-γ, IL-10, IL-17 e TNF-α foi avaliada em esplenócitos dos camundongos infectados quando estimulados in vitro com a B. abortus viva (S2308), morta pelo calor (HKBA), LPS de E. coli ou ConA. Os animais IL-10 KO apresentaram uma maior quantidade de IFN-γ e TNF-α no sobrenadante das células estimuladas com Brucella quando comparada a produção destas citocinas pelas células provenientes dos camundongos 129 Sv/Ev. A citocina IL-17 somente foi produzida pelas células dos animais IL-10 KO em todos os tempos analisados. Adicionalmente, a produção de TNF-α, IL-6, IL-12-p40, NO e IL-10 foram avaliados em macrófagos derivados da medula óssea, dos animais IL-10 KO e 129 Sv/Ev. TNF-α, NO, IL-6 e IL-12 apresentaram aumento nos animais IL-10 KO apenas quando estimulados com HKBA. Entretanto, nos animais 129 Sv/Ev a bactéria viva e morta estimularam a produção de IL-10. Estas mesmas citocinas foram avaliadas em sobrenadante de cultura de células dendríticas derivadas da medula óssea. Níveis mais elevados de TNF-α e IL-12-p40 foram obtidos no sobrenadante de células de animais IL-10 KO quando comparados ao grupo controle, em todos os tempos e estímulos da cinética de infecção. A expressão de TGF-β foi avaliada por PCR em tempo real em células esplênicas nos tempos 0 (não infectado), 1, 2 e 6 semanas de infecção estimulados com a bactéria viva. Na 2ª semana após infecção os animais IL-10 KO expressaram níveis mais elevados de TGF-β em relação ao grupo controle, porém na 6ª semana este perfil é invertido. Adicionalmente, o nível de células CD4+CD25+Foxp3+ (Treg) presente no baço dos animais infectados foi analisado por citometria de fluxo. Esta população encontrouse aumentada nos animais IL-10 KO a partir da 3ª e 6ª semanas após a infecção. Análises histopatológicas descritiva dos fígados destes animais durante toda a cinética de infecção demonstraram a diminuição gradativa dos granulomas nos dois grupos estudados, porém essa redução foi mais eficiente nos camundongos IL-10 KO principalmente na 6ª semana após a infecção considerando-se a área do granuloma, analisada por morfemetria digital, e a recuperação do parênquima hepático. Em conjunto, os dados obtidos neste trabalho suportam que a ausência da produção da IL-10 está associada a uma maior resistência à infecção pela bactéria B. abortus em modelo murino, através do aumento da produção de citocinas próinflamatórias culminando com uma maior eliminação da bactéria e uma resolução mais rápida da patologia tecidual do hospedeiro levando, assim, a um controle efetivo da infecção. / Brucella abortus is a Gram-negative pathogenic bacterium which causes a chronic disease in bovine, humans and others species called brucellosis. The host ability to mount a Th1/pro-inflammatory response against the bacteria is crucial to control and to solve the infection. It is suggested that IFN-γ produced by Th1cells is crucial to control the infection in mice. The interleukin IL-10 is considered to be responsible to decrease the IFN-γ production in vitro interfering directly in the pathogen elimination. During B. abortus infection, IL-10 acts limiting inflammatory response favoring the establishment persistence infection in mice. The goal of this study was evaluated the role of endogenous IL-10 during B. abortus infection. To assess the role of IL-10 in vivo, IL-10 knockout (IL-10 KO) mice or 129 Sv/Ev mice were infected with B. abortus strain S2308 and the number of viable bacteria recovery from the spleen were evaluated. One, 2, 3, 6 and 14 weeks post infection, IL-10 KO mice showed lower number of bacteria in the spleen when compared to wild type mice during all the time points. It was observed the increase of the difference at 14th week post infection. Additionally, it was demonstrated by survival curve in a period of 14 weeks post infection that approximately 35% of IL-10 KO mice died only at 2 or 3 weeks. Furthermore, the IFN-γ, IL-10, IL-17 and TNF-α production were measured in the supernatant from spleen cell culture in vitro when the cells were stimulated with alive B. abortus (S2308), heat killed B. abortus (HKBa), E. coli LPS or ConA. IL-10 KO cells showed greater increase in IFN-γ and TNF-α level in the supernatant from these cells when they were stimulated with Brucella when compared to wild type cells production. IL-17 was only detected in the supernatant from IL-10 KO cells in all time points analyzed. In addition, the TNF-α, IL-6, IL-12-p40, NO and IL-10 levels were evaluated in bone-marrow macrophage derived cell supernatant. TNF-α, NO, IL-6 and IL-12 showed augmented in IL-10 KO cells when stimulated with HKBa. However, only in supernatant from 129 Sv/Ev mice it was observed IL-10 production. In bone-marrow dendritic cell supernatant greater levels of TNF-α and IL-12-p40 were observed in IL-10 KO cells when compared to wild type mice cells during all time points analyzed when the cells were stimulated with all stimulus. The TGF-β expression was evaluated by real time PCR in splenic cells culture at 0 (non-infected cells), 1, 2 and 6 weeks after infection with S2308. At 2 weeks post infection the IL-10 KO cells demonstrated greater increased of TGF-β expression when compared to wild type cells. At 6 weeks post infection the TGF-β expression profile showed inverted. Additionally, the level of CD4+CD25+Foxp3+ (Treg) cells was assessed at spleen of infected mice by flow cytometry during the infection process. This population was increased at 3th and 6th weeks post infection in IL-10 KO mice. Descriptive histopathology analyses were done at liver level demonstrating a gradual diminishment of granuloma in both kinds of analyzed animals. However, the decrease pathology was more effective at IL-10 KO livers considering the granuloma area, measured by digital morphometry, and the hepatic parenchyma recovery. Taken together, the data provided by this work support that the lack of IL-10 is related to higher resistance to B. abortus infection in murine infection throughout the increase production of pro-inflammatory cytokines culminating with better bacteria elimination and a quicker tissue pathological resolution leading to a more effective control of this infection.

Teblad innehåller en mängd substanser som på olika sätt kan påverka biologiska processer i människan. I föreliggande arbete har en sammanställning gjorts utifrån vetenskapliga artiklar över teets antagna effekter på människans immunsystem .Främst har den mest studerade komponenten i te, epigallocatechin gallate, EGCG, undersökts. De variabler som studerats i immunförsvaret är neutrofiler, tumörnekrosfaktor-α, interferon-γ, interleukin-1β, interleukin-2, interleukin-5, interleukin-6, interleukin-8, interleukin-10 ,interleukin-12, interleukin-13, eikosanoidmetabolismen, lymfocyter, makrofager, dendritiskaceller och T-cellsdifferentiering. Sammafattningsvis föreföll te hämma följande: Neutrofilaktiviteten, TNF-α-bildningen, IFN-γ-aktiviteten, stimuli-inducerad IL-β-bildning, IL-8-aktivering och IL-10-bildning. EGCG visades öka dendritiska cellers apoptos och ändra dedenderitiska cellernas morfologi och minska deras förmüga att stimulera T-cellproliferationen. EGCG-behandling av celler ledde till ökad makrofagaktivitet, ökad produktion av T-regceller kontra andra T-cellslinjer. Tebehandling ökade bildningen av IL-12 ochIL-13. EGCGs effekt på IL-6 var tvetydig; enligt en del artiklar påverkade EGCG ej IL-6, medan det enligt andra artiklar antingen ökade eller minskade IL-6-bildningen. Trots att resultaten ej var entydiga kunde slutsatsen att EGCG (och därmed te) utövade immunsupprimerande effekt dras men att det sannolikt krävs betydligt högre koncentrationer än de som är fysiologiskt uppnåbara (1 μM i plasma och 3 mM i tarmen) genom reguljärt tedrickande för att få en avgörande effekt på människans immunsystem. EGCGs hämmnade effekt på immunsystemet kan dock vara av intresse i högre – farmakologiska – koncentrationer genom att EGCG skulle kunna nyttjas som komplement eller alternativ till för närvarande nyttjade immunförtryckande läkemedel som ciklosporin och glukokortikoider.