11 |
The role of small intestinal permeability in the pathogenesis of colitis in the interleukin-10 gene deficient mouseArrieta Mendez, Marie Claire 06 1900 (has links)
It is currently believed that the etiology of inflammatory bowel disease involves an aberrant immune response towards the gastrointestinal microbial flora. In addition, an increase in intestinal paracellular permeability may also be a contributing factor of disease, as it precedes disease in several animal models. However, it remains unclear whether increased intestinal permeability is an epiphenomenon of disease or if it can lead to it. The goal of this thesis is to elucidate this cause-effect relationship.
The IL-10-/- mouse is a model of IBD that spontaneously develops colitis after 12 weeks of age. We measured intestinal permeability in this mouse from 4-17 weeks of age and observed that there was a significant increase in small intestinal permeability early in life and before the onset of colitis.
When small intestinal permeability was selectively decreased with AT-1001 (a ZOT antagonist peptide) colitis was significantly ameliorated. In contrast, when it was increased with AT-1002 (a ZOT agonist peptide) colitis worsened, indicating that modifications in the paracellular traffic of the small intestine had a significant effect on the severity of colonic disease.
In order to study the possible mechanisms by which small intestinal permeability modulated disease in the colon, we measured the effect of increasing small intestinal permeability on the colonic microbial flora of IL-10-/- mice. After AT-1002 treatment from 4-12 weeks of age, there was an evident shift in colonic adherent flora. This effect was not a consequence of inflammation as there was a similar effect in wild type mice.
We also studied the effect of increasing small intestinal permeability in the development of oral tolerance to dietary antigens. When wild-type mice were fed OVA under conditions of increased small intestinal permeability there was a significant increase in the proliferation of B cells in the spleen and an increase in OVA-specific humoral response, compared to animals fed OVA alone. Moreover, the production of IL-10 in response to oral OVA was prevented when OVA was given with AT-1002, both in the small intestine and the colon.
The studies presented in the doctoral thesis suggest that small intestinal permeability has a critical role in the development of colitis in IL-10-/-mice, and that increasing paracellular traffic in the small intestine may lead to changes in colonic bacterial flora and the abrogation of tolerance to oral antigens, two features of inflammatory bowel disease in humans. / Experimental Medicine
|
12 |
The Development and Function of Memory Regulatory T CellsSanchez, Ana January 2010 (has links)
<p>Naturally occurring CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells (TReg) are a cell lineage that develops in the thymus and exits to the periphery, where they represent 5-10% of the peripheral CD4+ T cell population. Phenotypically, they are characterized by the expression of the cell surface markers CD25, as known as the IL-2 receptor alpha chain, glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR), and cytotoxic T-lymphocyte antigen-4 (CTLA-4), as well as forkhead box P3 (Foxp3), a transcription factor considered to be the most specific TReg marker. Functionally, TReg cells are defined by their ability to suppress the activation of multiple cell types including CD4+ and CD8+ T cells, B cells, natural killer (NK) cells, and dendritic cells (DCs). Suppression can be achieved by the production of immunosuppressive cytokines or direct cell-to-cell contact, with these mechanisms directly affecting suppressed cells or indirectly affecting them by modulating antigen presenting cells (APCs). The suppressive abilities of TReg cells are crucial in maintaining dominant tolerance--the active, trans-acting suppression of the immune system for the prevention of autoimmune diseases. In addition to preventing autoimmune diseases, studies have also demonstrated critical roles for TReg cells in down-modulating anti-tumor immunity, suppressing allergic diseases, such as asthma, and achieving transplant tolerance. Recent studies have also demonstrated roles for TReg cells during pathogen infection, which will be the focus of this thesis.</p><p>Studies examining TReg cells during infection have largely focused on chronic infection models. These studies have shown that TReg cells can affect responses to pathogens in various ways that can be beneficial or detrimental for either the host or the invading pathogen. In some infections, TReg cells downregulation effector responses, which can lead to pathogen persistence and, in some cases, concomitant immunity. TReg cell-mediated suppression can also reduce immunopathology at sites of infection, which can occur as a result of a vigorous anti-pathogen immune response. </p><p>In contrast to chronic infection, how TReg cells behave and function following acute infections remains largely unknown as, to date, very few studies have been conducted. Current work with acute infection models has indicated that TReg cells affect immune responses in some acute infection models, but not in all. Furthermore, the results of these studies have implicated that current approaches to examine TReg cells during acute infection by depleting the total TReg cell repertoire, as opposed to targeting pathogen-specific TReg cells, may not be ideal. Finally, it is unclear what happens to activated TReg cells following the resolution of infection. </p><p>Due to the lack of knowledge about the role of pathogen-specific TReg cells during acute infection, we sought to employ a different approach to address some of the outstanding questions in the field. Here, we utilized CD4+ non-TReg and TReg cells from T cell receptor (TCR) transgenic mice that recognize a pathogen-specific epitope found in three different models of acute viral infection: recombinant vaccinia virus, recombinant adenovirus, and influenza. Using this model system, we were able to track pathogen-specific TReg cells following acute viral infection to determine their kinetics during the course of infection, as well as their influence on CD4+ non-TReg cells during different times after infection. We also employed major histocompatibility complex (MHC) Class II tetramer technology to track the fate of endogenous pathogen-specific TReg cells following infection with influenza. </p><p>Using these models systems, we show that pathogen-specific TReg cells can be activated and expand upon acute viral infections in vivo. The activated TReg cells then contract to form a "memory" pool after resolution of the infection. These "memory" TReg cells expand rapidly upon a secondary challenge, secrete large amounts of IL-10, and suppress excessive immunopathology, which is elicited by the expansion of non-TReg cells, via an IL-10-dependent mechanism. The work presented in this thesis reveals a previously unknown "memory" TReg cell population that develops after acute viral infections and may help design effective strategies to circumvent excessive immunopathology.</p> / Dissertation
|
13 |
Effects of IL-10 gene therapy to TAA-induced liver fibrosis in miceWu, Chia-Ling 06 January 2006 (has links)
Hepatic fibrosis represents a process of healing and scarring in response to chronic liver injury. Interleukin-10 (IL-10) is a cytokine that downregulates the proinflammatory response and has a modulatory effect on hepatic fibrogenesis. The aim of this study was to investigate whether IL-10 gene therapy possesses anti-hepatic fibrogenesis in mice. Liver fibrosis was induced by long-term thioacetamide administration in mice. Human IL-10 expression plasmid was delivered via electroporation after liver fibrosis established. IL-10 gene therapy reversed hepatic fibrosis and prevented cell apoptosis in a thioacetamide-treated liver. RT-PCR revealed IL-10 gene therapy could reduce liver transforming growth factor-£]1¡]TGF-£]1¡^, tumor necrosis factor-£\¡]TNF-£\¡^, collagen £\1, cell adhesion molecule, and tissue inhibitors of metalloproteinase¡]TIMPs¡^mRNA upregulation. Following gene transfer, the activation of £\-smooth muscle actin¡]£\-SMA¡^and cyclooxygenase-2¡]COX-2¡^were significantly attenuated. In brief, electroporative IL-10 gene therapy might be an effective therapeutic reagent for liver fibrosis with potential future clinical applications.
|
14 |
The role of small intestinal permeability in the pathogenesis of colitis in the interleukin-10 gene deficient mouseArrieta Mendez, Marie Claire Unknown Date
No description available.
|
15 |
Comparison of the Abilities of IL-10- and Retinoic Acid- Differentiated Dendritic Cells to Induce Allergen Tolerance in a Mouse Model of Asthma2014 October 1900 (has links)
Dendritic cells (DCs) in different compartments can affect tolerance via distinct mechanisms. Thus, retinoid acid (RA) and integrins expressed by CD103+ dendritic cells in the gut play important roles in regional regulatory T cell induction and trafficking, while IL-10 expression by lung-associated tolerogenic dendritic cells is integral to tolerance in that compartment. Whether RA- and IL-10-differentiated DC (DCRA and DC10, respectively) can reciprocally induce tolerance in either compartment remains largely unexplored. We have shown that DC10 induce asthma tolerance in part by activating CD25+Foxp3+ Treg, but also by recruiting other cells (e.g., endogenous pulmonary DC) into an infectious tolerance pathway. Herein we began to assess whether DCRA can be equally tolerogenic, and whether they employ similar mechanisms, in an OVA/alum mouse model of asthma. On FACS analysis, we found that DCRA expressed significantly higher levels of CD40, CD86 and MHC II than DC10 (i.e., at levels equivalent to fully mature DC). DCRA secreted higher levels of TGF-β1 and IL-27 than DC10, but equivalent levels of IL-10. DCRA and DC10 suppressed in vitro Th2 response, but DCRA were more effective than DC10 at suppressing proliferation. Both DCRA and DC10 increased expression of Foxp3+ on effector T cells. DCRA promoted little expansion of Foxp3+ T cells. In contrast, DC10 promoted expansion of Foxp3+ T cells. Treatment of asthmatic mice with DC10 and DCRA reduced airway hyperresponsiveness and serum allergen-specific IgE and IgG1 levels. We previously showed that DC10-induced tolerance is critically dependent on their expression of IL-10. The results of this study showed that both DCRA and DC10 induce tolerance in asthmatic mice through different mechanisms.
|
16 |
Role of Vaccination in the Control of Turkey Coccidiosis: Vaccine Associated Oocyst Shedding, Lesions, and Mucosal Gene ExpressionBehl, Michelle 1983- 02 October 2013 (has links)
Coccidiosis vaccine associated side effects, oocyst shedding patterns, intestinal lesions, and mucosal gene expression in the turkey were studied. The first study examined vaccine associated side effects and oocyst shedding patterns under experimental conditions. Peak oocyst shedding occurred on days 5-6, 13-17, and 19-20 days post vaccination. Throughout the course of the study, several poults exhibited clinical coccidiosis. Based on body weights, growth was correlated with vaccine cycling.
The second study examined coccidiosis vaccine induced lesions and changes in mucosal gene expression on day 5, 10, 13, 17, and 20 days post vaccination. Poults were gavaged the equivalent of 0x, 1/2x, 1x, and 2x the available vaccine dose. Intestinal sections adjacent to the Meckel's diverticulum, ileocecal junction, and middle of the ceca were collected for histological analysis and gene expression. Measurements from the tip of the villus to the base of the lamina propria, villus width, and the muscularis mucosae thickness were acquired from the histological sections. Interleukin-10, IL-1beta, and GAPDH gene expression were measured by extracting mRNA in the tissues and quantified using real-time RT-qPCR.
Starting on day five post vaccination, the control group weighed significantly more than the group that received the 2x dose. Body weight and oocyst dose were inversely related through day 17. Intestinal measurements did not necessarily correlate with the vaccine dose, although there appears to be some correlation on day five. There were no significant changes in the mucosal gene expression of IL-10 and IL-1beta in the intestinal tissue adjacent to the Meckel's diverticulum throughout the course of the study. On day five post vaccination, IL-10 and IL-1beta were significantly upregulted in the ileocecal junction. Interleukin-10 was significantly upregulated on day 17 and IL-1beta was significanlty down regulated on day 20 in the ileocecal junction. Both IL-10 and IL-1beta were significantly upregulated in the ceca days 5, 10, and 13 post vaccination. Interleukin-10 was significnalty upregulated in the ceca on day 17 and significantly down regulated on day 20. Individual variation among poults in the same group merits further attention.
|
17 |
Estudo do fenótipo, ativação celular e fonte produtora de IL-10 em asmáticos infectados pelo Schistosoma mansoniOliveira, Ricardo Riccio 12 December 2005 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-14T17:58:18Z
No. of bitstreams: 1
Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T17:58:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Introdução e Objetivos: Alguns estudos vêm demonstrando que as infecções por
helmintos são capazes de inibir a resposta ao teste cutâneo para aereoalérgenos e modificar
o curso clínico da asma, e que a IL-10, produzida em altos níveis em infecções pelo
Schistosoma mansoni, é capaz de modular a resposta imune do tipo 2 envolvida na
patogênese da asma. Os objetivos deste estudo foram avaliar a célula produtora de IL-10, o
fenótipo celular e a expressão de moléculas co-estimulatórias em asmáticos infectados pelo
S. mansoni, comparando estes resultados com os obtidos de asmáticos infectados por
outros helmintos e asmáticos não infectados.
Métodos e Resultados: O fenótipo celular (CD3, CD4, CD8 e CD14), a ativação celular
(CD25 e HLA-DR), as moléculas co-estimulatórias (CTLA-4, CD28, CD40L, CD80 e
CD86), ex vivo, e a citocina IL-10 foram avaliados pelo uso de anticorpos monoclonais por
citofluorimetria. CMSP estimuladas por 20 horas in vitro com alérgeno (Der p1) foram
avaliadas para a expressão intracelular de IL-10. Os resultados foram expressos em
percentagem de células positivas (média ± DP) e média de intensidade de fluorescência
(MIF) para HLA-DR (média ± DP). A frequência de CTLA-4 em células TCD4+ de
asmáticos infectados pelo S. mansoni foi 0,49 ± 0,39%, em asmáticos infectados por outros
helmintos foi 0,78 ± 0,25%, enquanto que em asmáticos não infectados foi 0,89 ± 0,56% (p
< 0.05). A expressão de CD28 nas células TCD4+ e do seu ligante CD80 em monócitos foi
semelhante em todos os grupos, enquanto que a expressão do CD86 foi diferente entre os
grupos (95,90 ± 3,47%, 89,66 ± 6,35% e 95,28 ± 4,93%, respectivamente, p < 0,05). A
expressão de CD25 em células TCD4+ também não diferiu significativamente entre os
grupos (7,45 ± 2,84%, 6,84 ± 2,36% e 7,84 ± 3,38%, respectivamente). Nos indivíduos
asmáticos infectados pelo S. mansoni foi observado que as células CD4+ foram as principais produtoras de IL-10, sendo, em percentual, as células CD4+CD25+ as principais
produtoras desta citocina. As células TCD8+ juntamente com as CD14+ também
representaram importantes fontes de IL-10 nestes pacientes.
Conclusões: A principal diferença no estado de ativação celular entre asmáticos com ou
sem a infecção pelo S. mansoni foi a maior frequência de células TCD4+ expressando
CTLA-4, um marcador de ativação, em asmáticos não infectados. A modulação da
resposta imune observada em indivíduos asmáticos cronicamente infectados pelo S.
mansoni, envolve mecanismos complexos, que incluem a produção de citocinas, a exemplo
da IL-10, e participação de células regulatórias.
|
18 |
Estudo do fenótipo, ativação celular e fonte produtora de IL-10 em asmáticos infectados pelo Schistosoma mansoniOliveira, Ricardo Riccio 12 December 2005 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-15T14:44:00Z
No. of bitstreams: 1
Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-15T14:44:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Introdução e Objetivos: Alguns estudos vêm demonstrando que as infecções por
helmintos são capazes de inibir a resposta ao teste cutâneo para aereoalérgenos e modificar
o curso clínico da asma, e que a IL-10, produzida em altos níveis em infecções pelo
Schistosoma mansoni, é capaz de modular a resposta imune do tipo 2 envolvida na
patogênese da asma. Os objetivos deste estudo foram avaliar a célula produtora de IL-10, o
fenótipo celular e a expressão de moléculas co-estimulatórias em asmáticos infectados pelo
S. mansoni, comparando estes resultados com os obtidos de asmáticos infectados por
outros helmintos e asmáticos não infectados.
Métodos e Resultados: O fenótipo celular (CD3, CD4, CD8 e CD14), a ativação celular
(CD25 e HLA-DR), as moléculas co-estimulatórias (CTLA-4, CD28, CD40L, CD80 e
CD86), ex vivo, e a citocina IL-10 foram avaliados pelo uso de anticorpos monoclonais por
citofluorimetria. CMSP estimuladas por 20 horas in vitro com alérgeno (Der p1) foram
avaliadas para a expressão intracelular de IL-10. Os resultados foram expressos em
percentagem de células positivas (média ± DP) e média de intensidade de fluorescência
(MIF) para HLA-DR (média ± DP). A frequência de CTLA-4 em células TCD4+ de
asmáticos infectados pelo S. mansoni foi 0,49 ± 0,39%, em asmáticos infectados por outros
helmintos foi 0,78 ± 0,25%, enquanto que em asmáticos não infectados foi 0,89 ± 0,56% (p
< 0.05). A expressão de CD28 nas células TCD4+ e do seu ligante CD80 em monócitos foi
semelhante em todos os grupos, enquanto que a expressão do CD86 foi diferente entre os
grupos (95,90 ± 3,47%, 89,66 ± 6,35% e 95,28 ± 4,93%, respectivamente, p < 0,05). A
expressão de CD25 em células TCD4+ também não diferiu significativamente entre os
grupos (7,45 ± 2,84%, 6,84 ± 2,36% e 7,84 ± 3,38%, respectivamente). Nos indivíduos
asmáticos infectados pelo S. mansoni foi observado que as células CD4+ foram as principais produtoras de IL-10, sendo, em percentual, as células CD4+CD25+ as principais
produtoras desta citocina. As células TCD8+ juntamente com as CD14+ também
representaram importantes fontes de IL-10 nestes pacientes.
Conclusões: A principal diferença no estado de ativação celular entre asmáticos com ou
sem a infecção pelo S. mansoni foi a maior frequência de células TCD4+ expressando
CTLA-4, um marcador de ativação, em asmáticos não infectados. A modulação da
resposta imune observada em indivíduos asmáticos cronicamente infectados pelo S.
mansoni, envolve mecanismos complexos, que incluem a produção de citocinas, a exemplo
da IL-10, e participação de células regulatórias
|
19 |
Avaliação da resposta imune de indivíduos asmáticos residentes em área endêmica em Schistosoma mansoniFigueiredo, Joanemile Pacheco de January 2004 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-08-12T16:15:37Z
No. of bitstreams: 1
Dissertação_ICS_ Joanemile Pacheco de Figueiredo.pdf: 786075 bytes, checksum: e932bb435d8f92e49c6cdcf62892ceac (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-08-23T15:31:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1
Dissertação_ICS_ Joanemile Pacheco de Figueiredo.pdf: 786075 bytes, checksum: e932bb435d8f92e49c6cdcf62892ceac (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-23T15:31:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Dissertação_ICS_ Joanemile Pacheco de Figueiredo.pdf: 786075 bytes, checksum: e932bb435d8f92e49c6cdcf62892ceac (MD5) / CAPES; CNPq; FAPESB; National Institute of Health; / A prevalência de infecção por helmintos é negativamente associada à prevalência de alergia, e alguns trabalhos têm demonstrado uma inversa associação entre infecções por helmintos e gravidade de asma. Neste trabalho, foi avaliada a resposta imune específica para alérgeno 1 de Dermatophagoides pteronyssinus (Der p 1) em asmáticos infectados com helmintos de uma área endêmica no município do Conde-Bahia (Grupo 1), comparando-se com a resposta em asmáticos não infectados de uma área não endêmica, Salvador-Bahia (Grupo 2). Os indivíduos foram selecionados utilizando-se questionário ISAAC modificado e exames parasitológicos de fezes por meio da técnica de Kato-Katz. Foram realizados testes cutâneos de leitura imediata com aeroalérgenos, dosagem de IgE específica para Der p 1, coleta de amostras de poeira domiciliar para estudo da fauna acarina, além da avaliação da resposta imunológica pela produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico estimuladas, in vitro, com Der p 1. A dosagem de citocinas no sobrenadante das culturas foi realizada pelo método de ELISA, a expressão de IL-4 pela técnica de RT-PCR e a fonte produtora de IL-10 foi avaliada utilizando-se citometria de fluxo. Foi observada menor positividade aos testes cutâneos de leitura imediata com aeroalérgenos nos asmáticos infectados por helmintos, incluindo S. mansoni (grupo 1), quando comparados com asmáticos não infectados. Embora a positividade aos testes cutâneos tenha sido baixa no grupo de asmáticos infectados, em 40,6% dos indivíduos foi observada IgE específica para o Der p 1 acima de 0,70 KU/L (classe II). Com relação à produção de citocinas, observou-se que células de asmáticos infectados pelo S. mansoni produziram baixos níveis de IL-5 em culturas estimuladas com Der p 1, quando comparados à produção desta citocina por células de indivíduos não infectados (p<0,0001). Da mesma forma, a razão da densitometria de IL-4/HPRT no grupo de infectados foi mais baixa do que no grupo de não infectados (p<0,05). Em contraste, os níveis de IL-10 foram altos em cultura de células de asmáticos infectados por S. mansoni e baixos ou indetectáveis no grupo controle (p=0,0018). Observou-se uma associação positiva entre carga parasitária de S. mansoni e níveis de IL-10 em culturas estimuladas com Der p 1 (= 0,3212, p=0,012). A adição de IL-10 recombinante humana (rhIL-10) às culturas de asmáticos não infectados resultou em diminuição na produção de IL-5 (p<0,05). Os indivíduos do grupo 1 foram tratados com anti-helmínticos e houve redução da produção de IL-10 específica para Der p 1 (p<0,05), associada à piora dos sintomas de asma após o tratamento. Por fim, os dados mostraram que, em asmáticos infectados com S. mansoni, a IL-10 foi produzida principalmente por células T CD8+ e monócitos e, no grupo de não infectados, esta citocina foi produzida basicamente por monócitos. Este estudo sugere que a IL-10 é uma citocina supressora da resposta imune inflamatória do tipo Th2 em asmáticos infectados por helmintos, incluindo S. mansoni e que as células T CD8+ constituem uma importante fonte produtora desta citocina nos indivíduos infectados.
|
20 |
Análise do efeito da ativação dos receptores tipo Toll 2 (TLR-2) sobre a replicação do HIV-1 em células primárias humanas.Montero, Sabina Victoria. January 2011 (has links)
Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2013-02-08T13:31:12Z
No. of bitstreams: 1
sabina_v_montero_ioc_bcm_0053_2011.pdf: 2783003 bytes, checksum: 58d0698eae0f2913066b128813d0d416 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-08T13:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1
sabina_v_montero_ioc_bcm_0053_2011.pdf: 2783003 bytes, checksum: 58d0698eae0f2913066b128813d0d416 (MD5)
Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / Pacientes infectados pelo HIV-1 apresentam aumentada permeabilidade intestinal, a qual permite a passagem para a circulação sanguínea de produtos microbianos, fenômeno conhecido por translocação microbiana. Dentre os produtos translocados são encontrados vários ligantes dos receptores do tipo Toll (TRL). A ativação de TLR desencadeia uma complexa cascata de sinalização, induz a síntese de diversas citocinas, e modula a função de células dendríticas (CDs), macrófagos e linfócitos, células-alvo da infecção pelo HIV-1. Estudos experimentais mostram que a ativação de TLRs influencia a replicação do HIV-1, como, por exemplo, a ativação de TLR-4 e TLR-3 resulta em diminuição da replicação viral. No entanto, os estudos relacionados à ativação de TLR-2 e HIV-1 são escassos. Assim, em nosso estudo, resolvemos analisar o efeito da ativação de TLR-2 sobre a replicação do HIV-1 em PBMCs e macrófagos primários humanos infectados in vitro. Para isto, PBMCs e macrófagos obtidos de doadores saudáveis foram infectados pelo HIV-1 e em seguida expostos ao Zymosaqn ou Pam3CSK4, ambos ligantes de TLR-2, e a replicação viral foi avaliada pela detecção da proteína viral p24 nos sobredanantes de cultura. Vimos que tanto o Zymosan quanto o Pam3CSK4 inibem de forma potente (até 90%) a replicação do isolado Ba-L (trópico para CCR5) de HIV-1 em PBMCs e macrófagos, assim como isolados primários trópicos para CCR5 e CXCR4. o tratamento das células com os ligantes de TLR-2 antes da infecção também induziu a queda da replicação viral. Ambos os ligantes de TLR-2 induziram aumento da produção das β-quimiocinas CCL3, CCL4 e CCL5 em macrófagos e PBMCs, e de IL-10 em macrófagos. A imuno-neutralização das β-quimiocinas diminuiu expressivamente o seu efeito inibitório sobre a replicação do HIV-1,.
sugerindo que estas moléculas participam da inibição da replicação do HIV-1 resultante da ativação de TLR2. no entanto, a neutralização do receptor de IL-10 não produziu resultados semelhantes. A expressão dos receptores celulares CD4, CCR5 e CXCR4 não foi alterada quando macrófagos e PBMCs foram tratados com Pam3CSK4. observamos, ainda, que a proteína quinase R (PKR) é ativada por Pam3CSK4 tanto em macrófagos quanto em PBMCs. Estes resultados mostram que a ativação de TLR-2 resulta em uma potente inibição da replicação do HIV-1 em PBMCs e macrófagos, e sugerem que as β-quimiocinas estão envolvidas neste fenômeno. Nossos achados ressaltam o papel anti-HIV-1 resultante da ativação de TLR-2, e indicam que novos estudos devem ser realizados para esclarecer, com maior profundidade, os mecanismos envolvidos neste processo / Patients infected with HIV-1 exhibit increased intestinal permeability, which allows passage into the bloodstream of microbial products, a phenomenon known as microbial translocation. Among the products are found translocated several ligands of Toll-like receptors (TRL). The activation of TLR triggers a complex cascade of signaling, inducing synthesis of different cytokines, and modulates the function of dendritic cells (DCs), macrophages and lymphocytes, target cells from infection by HIV-1. Experimental studies have shown that activation of TLRs influences the replication of HIV-1, for example, activation of TLR-4, TLR-3 results in decreased viral replication. However, studies related to the activation of TLR-2 and HIV-1 are scarce. Thus, in our study, we decided to analyze the effect of the activation of TLR-2 on HIV-1 replication in PBMCs and human primary macrophages infected in vitro. For this purpose, PBMC and macrophages obtained from healthy donors were infected with HIV-1 and then exposed to Zymosaqn or Pam3CSK4, both from the TLR-2 ligands, and viral replication was assessed by the detection of viral protein p24 in culture sobredanantes. We have seen that both Zymosan as potently inhibit Pam3CSK4 (up to 90%) replication isolated Ba-L (CCR5 tropic) HIV-1 PBMC and macrophages, as well as primary isolates tropic CCR5 and CXCR4. treating the cells with the ligands of TLR-2 prior to infection also induced decrease in viral replication. Both ligands of TLR-2 induced increased production of β-chemokines CCL3, CCL4 and CCL5 in PBMC and macrophages, and IL-10 in macrophages. The immuno-neutralization of β-chemokine significantly reduced their inhibitory effect on the replication of HIV-1.
suggesting that these molecules participate in inhibiting the replication of HIV-1 resulting from activation of TLR2. However, the neutralization of IL-10 did not produce similar results. The expression of cell receptors CD4, CCR5 and CXCR4 was not altered when macrophages and PBMCs were treated with Pam3CSK4. noted further that protein kinase R (PKR) is activated by Pam3CSK4 in both macrophages and in PBMCs. These results show that activation of TLR-2 results in a potent inhibition of HIV-1 replication in PBMC and macrophages, and suggest that β-chemokines are involved in this phenomenon. Our findings highlight the role of anti-HIV-1 resulting from the activation of TLR-2, and suggest that further studies should be conducted to clarify, in greater depth, the mechanisms involved in this process
|
Page generated in 0.0202 seconds