INTRODUÇÃO: Imunodeficiências primárias são um grupo heterogêneo de distúrbios de origem genética que afetam a imunidade e se caracterizam por infecções de repetição. Aproximadamente metade dos casos estão ligados a deficiências humorais e dentre estas podemos destacar a Imunodeficiência Comum Variável (ICV). Uma vez que os pacientes com ICV possuem redução dos níveis de anticorpos, esses pacientes apresentam infecções recidivantes do trato respiratório e aproximadamente 90% tiveram no mínimo um episódio de rinossinusite (RNS). A RNS se instala devido ao desequilíbrio entre o meio ambiente e fatores do hospedeiro e a infecção viral é pelo menos 20 vezes mais frequente do que a infecção bacteriana em indivíduos normais. OBJETIVOS: (1) Identificar os agentes virais da RNS nos pacientes com ICV e em indivíduos controles em um contexto prospectivo; (2) Definir quais citocinas e quimiocinas estão presentes e avaliar a expressão de genes relacionados à imunidade inata e adaptativa antiviral no lavado nasal de pacientes com ICV e nos indivíduos controles. CASUÍSTICA, MATERIAIS E MÉTODOS: Pacientes com ICV e indivíduos controles foram avaliados quando apresentavam sinais e sintomas de uma RNS viral e foi realizado a coleta de lavado nasal para a identificação de vírus respiratórios, além da quantificação da secreção de citocinas e quimiocinas e da avaliação da expressão gênica de genes relacionados à imunidade inata e adaptativa antiviral. A avaliação foi repetida quando todos os indivíduos previamente estudados se encontravam assintomáticos. RESULTADOS: De abril de 2012 a novembro de 2014, foram colhidas 65 amostras de lavado nasal, 43 amostras de 34 indivíduos controles e 22 amostras de 14 pacientes com ICV. Quatro amostras foram positivas para vírus pela técnica da imunofluorescência direta e dezoito amostras foram positivas pelo PCR. Pacientes com ICV tiveram mais infecções, duração maior dos sintomas e maior necessidade de uso de antibióticos que o grupo controle. A avaliação da produção de citocinas e quimiocinas no lavado nasal mostrou aumento da secreção de CXCL10, CCL2, CCL5, CXCL8 IL-6, IL-10, IL-1beta e TNF em ambos os grupos quando esses apresentavam quadro agudo de RNS viral. Foi realizada a expressão de genes pela técnica do PCR Real Time. Os pacientes com ICV apresentaram um aumento de expressão de genes relacionados à imunidade inata e adaptativa anitiviral substancialmente maior frente a um quadro de RNS viral do que os indivíduos controles em situações semelhantes. Quando comparamos os pacientes ICV e os controles ambos sem infecção aguda, observamos que os genes apresentam em sua maioria uma redução de expressão nos pacientes com ICV. DISCUSSÃO: Os vírus detectados respeitaram a sazonalidade em que normalmente são detectados e pacientes com ICV proporcionalmente tiveram mais infecções e uma evolução pior que o grupo controle. Aparentemente não houve diferenças significativas entre os grupos estudados quanto à liberação de citocinas e quimiocinas. Com relação ao estudo da expressão gênica, a maior amplitude de variação observada nos pacientes com ICV pode significar um desajuste de resposta imune levando a um quadro de maior inflamação local com consequente maior dano tecidual e justificando assim a incidência aumentada de complicações, duração aumentada dos sintomas e replicação viral aumentada nesse grupo de pacientes / INTRODUCTION: Primary immunodeficiencies (PIDs) are a heterogeneous group of genetic disorders that affect immunity and are characterized by relapsing, usually severe infections. Approximately half of the cases are linked to humoral deficiencies, being common variable immunodeficiency (CVID) the most frequent. CVID patients have reduced levels of antibodies; therefore, these patients have recurrent infections in the respiratory tract and approximately 90% had at least one episode of rhinosinusitis (RS). RS installs itself due to the imbalance between the environment and host factors and viral infection is at least 20 times as common as the bacterial infection in normal individuals. OBJECTIVES: (1) Identify the viral agents of rhinosinusitis in patients with CVID and in control individuals on a prospective context; (2) define which cytokines and chemokines are present in the nasal wash and evaluate the expression of genes related to innate and adaptive antiviral immunity in nasal wash of CVID patients and in control individuals. CASES, MATERIALS, AND METHODS: patients with CVID and control individuals were examined at Outpatient Facility of Dermatological Manifestations of Primary Immunodeficiencies and when they presented signs and symptoms of a viral RS. Nasal wash was collected in order to identify respiratory viruses; secretion of cytokines and chemokines were quantified and gene expression of genes related to innate and adaptive antiviral immunity were evaluated. This evaluation was repeated when all individuals previously studied were asymptomatic. RESULTS: From April 2012 to November 2014, 65 samples of nasal wash, 43 samples of 34 control individuals and 22 samples of 14 patients with CVID were collected. Four samples were positive for virus by direct immunofluorescence technique and eighteen samples by PCR. The detected viruses behaved according to the season in which they are normally detected and patients with CVID proportionally had more and longer infections and required more antibiotics than the control group. The evaluation of the production of cytokines and chemokines showed an increased secretion of CXCL10, CXCL8 CCL2, CCL5, IL-6, IL-10, IL-1beta and TNF in both groups when they presented acute viral RS. Gene expression was performed by using Real Time PCR. CVID patients showed increased expression of genes related to innate and adaptive antiviral immunity when compared to control individuals presenting acute viral RS. Conversely, when we compared CVID patients and control individuals both without acute infection, we observed a reduction in gene expression in CVID patients. DISCUSSION: The viral rhinosinusitis respected seasonality and CVID patients had proportionally more infections and a worse evolution than the control group. Apparently, there were no significant differences between the groups regarding the release of cytokines and chemokines. The greater magnitude of gene expression variation observed in CVID patients suggests an imbalance of immune response leading to a state of greater local inflammation with consequent greater tissue damage, therefore justifying an increased incidence of complications, increased duration of symptoms and increased viral replication in this group of patients

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-30T14:49:37Z No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-30T14:49:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 regina_p_carvalho_ipec_pesquisaclinicadi_0005_2010.pdf: 1759534 bytes, checksum: 3ba01da2b81179270af6897d913fd20c (MD5) Previous issue date: 2010 / Fiocruz / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Introdução: A imunidade mediada por células tem um papel importante na resposta imune do hospedeiro à Leishmania. Em pacientes com leishmaniose cutânea, a presença de células ativadas tem sido correlacionada positivamente com o tamanho das lesões. Já a atividade citolítica de células T CD8 + vem sendo associada ao dano tecidual e à gravidade da forma mucosa. No entanto, não se sabe o perfil fenotípico induzido nas células de indivíduos clinicamente curados quando estes reencontram os antígenos de Leishmania. Objetivo: Identificar perfis imunológicos associados à cura clínica na leishmaniose cutânea, com foco na análise das características fenotípicas e funcionais de linfócitos T específicos para a Leishmania. Materiais e Métodos: Foram estudados 26 indivíduos curados de leishmaniose cutânea (LCC) divididos em dois grupos de acordo com o tempo de cura: (i) menor que 2 anos (<2 anos, n=13) e (ii) 2 a 5 anos (2-5 anos, n=13). Como grupo controle, foram utilizados 12 indivíduos sadios (IS) sem histórico prévio de leishmaniose. As células mononucleares do sangue periférico foram analisadas ex vivo e após cultivo in vitro na presença de antígenos de Leishmania (Ag-Lb). Foi analisada a expressão de moléculas de superfície relacionadas ao fenótipo dos linfócitos (CD3, CD4 e CD8), ao fenótipo funcional dos linfócitos de memória central (TMC) ou de memória efetora (TME) - (CCR7 e CD45RO), à ativação (CD69 e CD25), à citotoxicidade (C1.7) e à migração linfocitária (CLA). Essas moléculas foram avaliadas dentro da subpopulação de células T CD4+ e T CD8+. Resultados: A média da razão TCD4+/TCD8+ nos pacientes LCC foi similar nas células ex vivo e nas células estimuladas por Ag-Lb. Nos LCC, houve um aumento significativo do percentual de células CD25+ e CD69+ em T CD4+ e em T CD8+ após o estímulo com Ag-Lb. Houve uma correlação negativa entre o tempo de cura e o percentual de células T ativadas pelo antígeno (CD25 + e CD69+). Nos pacientes LCC, o percentual de linfócitos TME em CD4+ e CD8+ aumentou após o estímulo com Ag-Lb, quando comparado com as células ex vivo. Já o percentual de células TMC não se modificou. O percentual de células C1.7+ dentro de T CD8+ e de células CLA+ em T CD4+ e T CD8+ foi similar na análise de células ex vivo e após estímulo com Ag-Lb, em pacientes LCC. Nos IS, não foi observado aumento do percentual de células T para nenhuma das moléculas avaliadas, quando comparadas às células ex vivo e estimuladas com Ag- Lb. Conclusão: À medida que aumenta o tempo de cura clínica, há uma redução de moléculas associadas à ativação tanto em linfócitos T CD4+ quanto em T CD8+. Esses indivíduos apresentam um aumento de células de ME que poderiam participar no controle dos parasitos caso ocorra uma reinfecção. Além disso, as células expandidas não apresentaram moléculas de superfície relacionadas à citotoxicidade ou migração para a pele. Considerando que os pacientes curados possuem um padrão de resposta imunoprotetor, tal padrão pode ser considerado um parâmetro importante para a seleção de antígenos candidatos para uma vacina. / Introduction: The cell-mediated immunity plays an important role in the immune response of the host to Leishmania. In cutaneous leishmaniasis patients, the presence of activated cells has been positively correlated with lesion size. The cytolytic activity of T CD8+ cells has been associated with tissue damage and the severity of mucosal form. However, the phenotypic profile induced in cells of clinical cured individuals, when they are exposed to Leishmania antigens again, is not known. Objective: Identify imunological profiles associated with clinical cure in cutaneous leishmaniasis, with emphasis on phenotypical and functional characteristics of Leishmania-specific T cells. Materials and Methods: In the study, 26 individuals cured from cutaneous leishmaniasis (CCL) were divided in two groups according to the time of cure: (i) less than 2 years (<2 years, n=13) and (ii) from 2 to 5 years (2-5 years, n=13). As the control group, 12 healthy subjects (HS) without previous history of leishmaniasis were used. Peripheral blood mononuclear cells were evaluated ex vivo and after in vitro culture in the presence of Leishmania antigens (Lb-Ag). It was analysed the expression of surface molecules related with lymphocytes phenotype (CD3, CD4 and CD8), functional phenotype of central memory (TCM) or effector memory lymphocytes (TEM) - (CCR7 and CD45RO), activation (CD69 and CD25), citotoxicity (C1.7) and lymphocyte migration (CLA). These molecules were evaluated within subpopulations of CD4 + and CD8+ T cells. Results: The mean ratio T CD4+/T CD8+ in CCL patients was similar in ex vivo cells and in Lb-Ag stimulated cells. In CCL, there was a significant increase in the percentual of CD25 + and CD69+ in CD4+ and in CD8+ T cells after Lb-Ag stimulus. There was a negative correlation between the time of cure and the percentual of T cells activated by the antigen (CD25+ and CD69+). In CCL patients, the percentual of TEM lymphocytes in CD4+ and in CD8+ increased after Lb-Ag stimulus, when compared to ex vivo cells. The percentual of TMC cells has not altered. The percentual of C1.7+ cells within CD8+ T cells and CLA+ in CD4+ and in CD8+ T cells was similar to the analysis of ex vivo cells and after Lb-Ag stimulus, in CCL patients. In the HS, it was not observed an increase in the percentual of T cells in any of the molecules analised, when comparing ex vivo to Lb-Ag stimulated cells. Conclusions: As the time of cure increases, there is a decrease of molecules related to activation in both CD4+ and CD8+ T cells. These individuals present an increase in EM cells that could take part in the parasite control in case of reinfection. Moreover, expanded cells have not presented surface molecules related to citotoxicity or migration to skin. Considering that cured patients have a imunoprotective response profile, such profile should be considered as an important parameter for selection of antigen candidates for the development of a vaccine.

Introdução: Durante o inverno de 2009, o vírus influenza A(H1N1)09pdm surgiu e se espalhou globalmente. A infecção por este vírus pode induzir a síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA) em alguns pacientes. O dano alveolar difuso (DAD), padrão histopatológico principal da SDRA, tem etiologia multifatorial, sendo possível que a imunopatologia seja diferente nas várias apresentações do DAD. Objetivo: Descrever, quantificar e comparar a imunopatologia viral (influenza A (H1N1) pdm09) e não-viral em casos de autópsia com dano alveolar difuso. Métodos: Foram analisados tecidos pulmonares de autopsia de 44 pacientes, sendo divididos em 3 grupos: grupo H1N1 (n=15), caracterizado por DAD secundário à influenza A(H1N1)pdm09; grupo SDRA (n=13), caracterizado por pacientes com DAD exsudativo de causas não-pulmonares; e o grupo de controle (n=16) com indivíduos que faleceram de causas não-pulmonares. Foram utilizadas as técnicas de imunohistoquímica e análise de imagem para quantificar, no parênquima pulmonar e nas pequenas vias aéreas, os marcadores de células imunes. Resultados: Foi observada uma elevada densidade celular de linfócitos T CD4+ e T CD8+, células Natural Killer CD57+, células dendríticas CD83+ e granzima A+ no parênquima pulmonar do grupo H1N1 (p < 0,05) em relação aos outros grupos. Na análise das pequenas vias aéreas, observou-se uma menor densidade célular de mastócitos (triptase), células dendríticas (CD207), e um aumento de IL-17 nos grupos H1N1 e SDRA, além de um aumento do número de granzimas A+ e diminuição de celulas dendríticas (CD83) apenas no grupo H1N1 (p < 0,05). Conclusão: O DAD causado pelo vírus influenza A (H1N1) pdm09 está associado com um fenótipo citotóxico inflamatório diferente do DAD de causas não-virais, com uma resposta parcialmente divergente no parênquima pulmonar em relação às pequenas vias aéreas / Rationale: The pandemic influenza A (H1N1) virus emerged in 2009 and spread globally. This virus infection can induce acute respiratory distress syndrome (ARDS) in some patients. Diffuse alveolar damage (DAD), which is the histological surrogate for ARDS, has a multifactorial etiology. Therefore, it is possible that the immunopathology differs among the various presentations of DAD. Objectives: To compare the lung immunopathology of viral (influenza A(H1N1)pdm09) to non-viral, extrapulmonary etiologies in autopsy cases with DAD. Methods: The lung tissue of 44 patients, was divided into 3 groups: the H1N1 group (n=15) characterized by DAD due to influenza A(H1N1)pdm09 infection; the ARDS group (n=13), characterized by patients with exudative DAD due to non-pulmonary causes; and the control group (n=16), consisting of patients with non-pulmonary causes of death. Measurements and main results: Immunohistochemistry and image analysis were used to quantify, in the lung parenchyma and small airways, several immune cell markers. There was higher expression of CD4+ and CD8+ T lymphocytes, CD83+ dendritic cells, granzyme A+ and natural killer+ cell density in the lung parenchyma of the H1N1 group (p < 0,05). In the small airways, there was a lower cell density of tryptase+ mast cells and dendritic+ cells and an increase of IL-17 in both DAD groups, with an increased number of granzyme A in H1N1 group (p < 0,05). Conclusion: DAD due to viral A(H1N1)pdm09 is associated with a cytotoxic inflammatory phenotype that is different from non-viral causes of DAD, with partially divergent responses in the parenchyma relative to the small airways.

Embora a fumaça do cigarro configure-se como o principal fator de risco para o desenvolvimento da DPOC, nem todos os fumantes desenvolvem a DPOC clinicamente significativa, sugerindo outros fatores intrínsecos ao indivíduo, como diferenças nas respostas imunológicas envolvidas na patogênese e progressão desta doença. Objetivos: Compreender melhor o papel da resposta imune adaptativa na progressão da DPOC. Métodos: Foram estudados amostras de tecidos pulmonares de 21 indivíduos não fumantes (grupo controle); 22 fumantes não obstrutivos (FNO) e 17 fumantes com DPOC. A densidade de células CD4+ e CD8+, células T regulatórias (Treg) FOXP3+, células B e células positivas para interleucinas IL-10 e IL-17, e citocinas como CCL19, BAFF e TGF-beta foram avaliadas em pequenas e grandes vias aéreas, e em tecidos linfoides associados ou não aos brônquios (BALT e iBALT, respectivamente). Resultados: Observamos um aumento das células T CD4+ e CD8+ em pequenas e grandes vias aéreas, BALT e iBALT em fumantes; no entanto, os valores mais elevados foram detectados em pequenas vias aéreas dos indíviduos DPOC. Além disso, observouse uma diminuição na expressão de TGF-? em pacientes com DPOC em comparação aos grupos de FNO e controle em pequenas e grandes vias aéreas ao passo que uma diminuição na densidade de Treg foi observado apenas em pequenas vias aéreas, com consequente diminuição da densidade de células positivas para IL-10 em pequenas e grandes vias aéreas. Em BALT observou-se uma resposta diferente, com um aumento na densidade de Treg no grupo DPOC, sem diferenças para as análises de IL-10. Houve um aumento da densidade de células positvas para IL-17 em pequenas e grandes vias aéreas e iBALT na DPOC. Conclusões: Observamos que a redução da atividade regulatória do processo inflamatório em pequenas vias aéreas e a progressão da obstrução em fumantes esteve associado à diminuição da densidade de células Treg e da expressão de IL-10 e aumento da expressão de IL-17. Além disso, verificou-se diferenças entre o perfil inflamatório nos compartimentos pulmonares estudados / Although cigarette smoke is configured as the primary risk factor for the development of COPD, not all smokers develop COPD clinically significant, suggesting that there are other factors intrinsic to the individual, such as differences in immune responses involved in the pathogenesis and progression of this disease. Objectives: To better understand the role of the adaptive immune response in the progression of COPD. Methods: Lung tissue samples from 21 nonsmokers were studied (control group); 22 non-obstructive smokers (NOS) and 17 COPD smokers. The density of CD4 + cells and CD8 + regulatory T cells (Treg) FOXP3 + cells, B cells and positive cells for interleukins IL-10 and IL-17, and cytokines as CCL19, BAFF and TGF-beta were evaluated in large and small airways, and lymphoid tissue associated with bronchi or not (BALT and iBALT, respectively). Results: We observed an increase in CD4 + T cells and CD8 + in small and large airways, BALT and iBALT in smokers; however, the highest amounts were detected in the small airways of COPD patients. Furthermore, there was a decrease in TGF-beta expression in COPD patients compared to FNO and control groups in large and small airways while a decrease in Treg density was observed only in small airway and consequent decrease in the density of cells positive for IL-10 in large and small airways. In BALT we observed a different response, with an increase in Treg density in COPD patients without differences in IL-10 analysis. There was an increase in cell density for IL-17 in large and small airways, and iBALT in COPD. Conclusions: We observed that reduction of inflammation regulatory activity in small airways obstruction and progression of smoking was associated with decreased Treg cell density and IL-10 expression and increased IL-17 expression. Furthermore, there are differences between the inflammatory profile in the lung compartments studied