Orientador: Wilma Aparecida Starke Buzetti / Banca: Maria Conceição Zocoller Seno / Banca: Caris Maroni Nunes / Resumo: A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose parasitária causada pelo protozoário Leishmania infantum transmitido principalmente pela picada do vetor flebotomíneo da espécie Lutzomyia longipalpis. O presente estudo objetivou avaliar a prevalência da LVC em cães, a distribuição de flebotomíneos e os fatores de riscos associados à doença, em uma área rural periurbana denominada por Cinturão Verde, localizada do município de Ilha Solteira, SP. Dessa forma, amostras de 250 cães, incluindo aspirados de linfonodos, de sangue e de suabe conjuntival foram coletadas para a realização dos exames parasitológico direto (PA), sorológico (ELISA e RIFI) e PCR (suabe conjuntival). A positividade dos cães para LVC foi de 31,6% (79/250) à RIFI, 28,8% (72/250) ao teste ELISA, 25,2% (63/250) ao PA e 20,4% (49/240) à PCR. A concordância entre os métodos, quando analisada pelo índice Kappa (p ≤ 0,05), foi considerada excelente entre ELISA x RIFI (94,5%), moderada entre ELISA x PA (81,7%) e entre RIFI x PA (78,3%), mas foi baixíssima entre PCR e os demais testes analisados. Os flebotomíneos da espécie Lu. longipalpis foram capturados com auxilio de armadilhas luminosas do tipo CDC ("Center for Disease Control and Prevention"), colocadas mensalmente no peridomicílio das propriedades rurais do Cinturão Verde, no período de setembro/2012 a agosto/2013, com três coletas em três dias consecutivos por mês. O numero de flebotomíneos capturados totalizou 65 machos e 25 fêmeas em 12 meses. O maior número de flebotomíneos capturados foi nos meses de dezembro/2012, fevereiro/2013, maio/2013 e julho/2013. Os fatores de riscos associados à LVC foram determinados estatisticamente pela análise univariada, os quais foram estatisticamente significativos (p ≤ 0,05) para os cães de porte grande, mostrando serem estes os mais susceptíveis à LVC, além da presença de galinhas nas propriedades ... / Abstract: Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a parasitic zoonosis caused by Leishmania infantum, which is transmitted by the bite of Phebotominae insect of the Lutzomyia longipalpis species (sandfly). This study aimed to survey the prevalence of CVL in dogs, the distribution of sand flies and the risk factors associated with the disease in a rural area called "Cinturão Verde", located in the municipality of Ilha Solteira, SP. Thus, samples of lymph node aspirates and blood were collected from 250 dogs for ELISA and indirect fluorescence antibody test (IFAT) and direct parasitological (PA) exams. In addition, conjunctival swab samples were also collected for Polymerase Chain Reaction (PCR). 79/250 (31.6%) dogs were positive by IFAT; 72/250 (28.8%) by ELISA; 63/250 (25.2%) by PA and 49/240 (20.4%) by PCR. The concordance of methods when statistically analysed two by two by the Kappa índexes (p ≤ 0.05) were considered of excellent agreement between ELISA and IFAT (94.5%), moderate between ELISA and PA (81.7%) and between IFAT and PA (78.3%), but when PCR was compared with the other tests, the agrrement indexes were very low. Lu. longipalpis were captured with the help of CDC (Center for Disease Control and Prevention) light traps, placed three consecutive times per month in the rural peridomiciliary properties of the "Cinturão Verde", from September/2012 to August/2013 in 100 % of the properties visited. The parasite density ranged from 01 to 12 per month including males and females, totaling 64 males and 25 females over 12 months. The largest number of insects captured was in December 2012, February/2013, May/2013 and July/2013. The univaried statistical analysis of risk factors associated with CVL revealed that the big size-dogs, the presence of chickens in the properties as well as the lack of knowledge by the rural population about the CVL disease were considered indicators to predict infection ... / Mestre

Orientadora: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Ana Patrícia Yatsuda Natsui / Banca: Carlos Wilson Gomes Lopes / Banca: Aramis Augusto Pinto / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: A neosporose é uma doença causada pelo protozoário Neospora caninum, e causa um grande impacto econômico na pecuária mundial. Sabe-se que muitos mamíferos são considerados hospedeiros intermediários, e que recentemente, foi confirmado o papel das aves no ciclo de vida de N. caninum como hospedeiros intermediários. O presente trabalho teve como finalidade estudar o ciclo evolutivo e patogenia de N. caninum em cães alimentados com ovos embrionados de Gallus gallus domesticus previamente inoculados com taquizoítas. Realizou-se diariamente o exame de fezes dos animais, pela técnica de flutuação, constatando a presença de oocistos nas fezes a partir de 7 dia apósinfecção. Anticorpos anti- N. caninum foram pesquisados semanalmente nos cães pela RIFI, sendo observados anticorpos a partir dos 14dai. Semanalmente um cão foi eutanasiado e durante a necropsia observou-se em todos os cinco animais, aumento dos linfonodos mesentéricos e das tonsilas, presença de muco no duodeno e jejuno e hepatoesplenomegalia, com hiperplasia de polpa branca do baço. Pelo exame histopatológico detectou-se reatividade dos linfonodos, lesões no fígado, coração, pulmão, baço e rim. Pelas técnicas de imunoistoquímica, imunofluorescência indireta dos tecidos e no Real-time PCR, observou-se a presença do parasito. Os resultados obtidos apontam que, os ovos embrionados infectados pelo parasito mostraram eficiência como modelo experimental para infectar cães, que eliminaram oocistos nas fezes, mesmo não apresentando sinais clínicos da neosporose. Ademais, os cães infectados apresentaram prematura soroconversão pela prévia administração de bicarbonato de sódio e o uso das técnicas citadas tornou possível a detecção do parasito nos tecidos analisados. / Abstract: Neosporosis is a protozoan disease caused by Neospora caninum and affects the reproductive system in cattle worldwide. Infection by the parasite has been widely described in mammals, and recently the role of birds in its lifecycle was confirmed as intermediate hosts. This work aimed to study the life cycle of N. caninum and the pathogeny in dogs that were fed with embryonated eggs inoculated with tachyzoites. The tested dogs were followed up for oocyst shedding, by flotation technique, and it was detected at 7 days after infection. Antibodies anti- N. caninum were detected at 14dai. Once a week, one dog was euthanized and at the necropsy alterations was observed on the mesenteric lymph nodes and tonsils, presence of mucus at duodenum and jejunum portions, and hepatosplenomegaly. At the histopathological examination lymph nodes alterations were noticed ranging from moderate to intense. In addition, there were alterations in liver, heart, lung, spleen and kidney. The parasite was detected by immunochemistry and indirect immunofluorescense tests as well as by Real-time PCR. The results herein presented suggest that inoculated embryonated eggs showed to be an efficient model to infect dogs, because of shedding oocysts, and no clinical alterations. Moreover, the infected dogs presented earlier seroconvertion because of sodium bicarbonate solution administration and the parasite detection in the analyzed tissues was successful by the techniques used. / Doutor

Orientador: Juliany Gomes Quitzan / Resumo: A diminuição da complacência da bexiga está relacionada com modificações no equilíbrio dos componentes da matriz extracelular e na concentração das fibras de colágeno, acarretando em espessamento da parede vesical e fibrose. O objetivo do estudo é analisar a relação entre suplementação oral dos glicosaminogicanos (GAGs), distribuição de pequenos proteoglicanos ricos em leucina (SRLPs) e síntese de colágeno em bexigas saudáveis e fibrosadas por obstrução parcial submetidas a cistotomia. Foram utilizados 56 ratos da linhagem Wistar, fêmeas, divididos em cinco grupos experimentais- G1 (8) – controle, sem procedimento, G2 (12) – animais não suplementados, submetidos ao procedimento de obstrução vesical e posterior cistotomia, G3 (12) – animais suplementados e submetidos ao procedimento de obstrução vesical e posterior cistotomia, G4 (12) – animais não suplementados e submetidos ao procedimento de cistotomia e G5 (12) animais suplementados e submetidos ao procedimento de cistotomia. A suplementação de glicosaminoglicanos foi realizada a cada 24 horas por via oral durante 28 dias pós cistotomia, quando então os animais foram eutanasiados. O colágeno foi avaliado pela Microscopia Cars e biglican, decorina, lumican e fibromodulina pelo método de imunofluorescência. Para análise estatística foi utilizado o teste ANOVA e T-STUDENT, com nível de significância p <0,05. Os animais dos grupos G2 e 3 foram os que apresentaram diferença estatística na seguinte constante: peso bexiga final /p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Transcutaneous Electrical Nerve Stimulation (TENS) has been widely used by physical therapists for pain management, though other non-analgesic properties have been cited. A series of studies have shown that TENS acts through both central and peripheral mechanisms. However, little is known about the mechanisms of action of TENS. So, in order to improve the research on such mechanisms, this work aimed to identify brain areas activated by different protocols of TENS stimulation in non-hyperalgesic rats. Fos protein expression in neurons has been used as a marker of neural activity. A total of 15 male Wistar rats weighing between 250 to 350 g received a single administration of TENS with low (4 Hz) or high (100 Hz) frequency and sensory (absence of muscle contraction) or motor (muscle contraction) intensity of stimulation. Ninety minutes after stimulation, the animals were euthanized under general anesthesia and their encephalons were perfused and sectioned to perform the immunofluorescence for Fos technique. Then images were captured and analyzed. The animals were split into five groups (n=3, per group): control, whose animals did not received electrical stimulation, low frequency TENS at sensory level, low-frequency TENS at motor level, high frequency TENS at sensory level and high frequency TENS at motor level. After analyzing the images, a significant higher c-Fos expression was found in the electrically stimulated animals when compared to the control group at the following brain areas: preoptic area (p=0.003), insular cortex (p=0.01), motor cortex (p=0.009), prefrontal cortex (p=0.003), thalamic paraventricular nucleus (p=0.003), endopiriform cortex (p=0.01), inferior colliculus (p<0.005), entorhinal cortex (p.0.0003), secondary somatosensory cortex (p.0.0003) and olfactory tract (p.0.0003) in a manner dependent from both frequency of stimulation and intensity of current. Thus, one suggest that TENS activated several important encephalon regions, which are involved in neural function such as cognition, memory, cardiovascular regulation and motor control; however, we cannot restrict these areas as the only ones that are influenced by TENS stimulation. These results are of great relevance, because it open perspectives on new and different neurobiological actions of TENS and its possible clinical applicability and therapeutic efficacy for addressing clinical situations unrelated to analgesia, allowing wider direction for further studies. / A estimulacao eletrica nervosa transcutanea (TENS) e bastante utilizada para o controle da dor; no entanto, outras propriedades nao analgesicas tem sido citadas. Uma serie de estudos tem demonstrado que a TENS atua atraves de mecanismos perifericos e centrais. A fim de aprimorar as pesquisas sobre esses mecanismos, esse trabalho teve o objetivo de verificar as areas encefalicas ativadas pelo uso de diferentes protocolos de eletroestimulacao com TENS em ratos nao-hiperalgesicos. A imunodeteccao da proteina Fos em neuronios tem sido utilizada como marcador de atividade neural. Logo, um total de 15 ratos Wistar, pesando entre 250 a 350 g, receberam uma unica aplicacao de TENS, sendo utilizada com baixa (4 Hz) ou alta (100 Hz) frequencia de estimulacao e com intensidade em nivel sensorial (ausencia de contracao muscular) e motor (presenca de contracao muscular). Noventa minutos apos a eletroestimulacao, os animais foram eutanasiados sob anestesia e seus encefalos foram perfundidos e seccionados para realizacao de imunofluorescencia para proteina Fos. Posteriormente, imagens foram capturadas e analisadas. Os animais foram divididos em cinco grupos (n=3, por grupo): controle, cujos animais nao receberam nenhuma estimulacao eletrica; TENS de baixa frequencia em nivel sensorial, TENS de baixa frequencia em nivel motor, TENS de alta frequencia em nivel sensorial e TENS de alta frequencia em nivel motor. Apos analise das imagens, verificou-se um numero de celulas Fos positivas significativamente maior nos grupos eletroestimulados em comparacao ao grupo controle nas seguintes areas encefalicas: area preoptica (p=0,003), cortex insular (p=0,01), cortex motor (p=0,009), cortex pre frontal (p=0,003), nucleo paraventricular talamico (p=0,003), nucleo endopiriforme (p=0,01), coliculo inferior (p<0,005), cortex entorrinal (p.0,0003), cortex somatossensorial 2 (p.0,0003), nucleo supraoptico (p.0,0003) e trato olfatorio (p.0,0003). Entretanto, esta ativacao neuronal ocorreu de forma dependente da frequencia de estimulacao e da intensidade da corrente nas diferentes regioes encefalicas. Assim, conclui-se que a TENS ativou diversas regioes encefalicas importantes, associadas a funcao de cognicao, memoria, regulacao cardiovascular e controle motor; no entanto, nao se pode restringir essas areas como as unicas cujos neuronios sao ativados pela TENS. Esses resultados sao relevantes uma vez que disparam perspectivas quanto a novas e diferentes acoes neurobiologicas da TENS e sua possivel aplicabilidade e eficacia terapeutica para a abordagem de situacoes clinicas que nao relacionadas a analgesia, possibilitando a ampliacao do direcionamento para a realizacao de novos estudos.

Orientador: Hélio Amante Miot / Resumo: A patogênese do melasma, especialmente o papel dos queratinócitos e fibroblastos no desenvolvimento e manutenção da doença não é bem compreendida. Alterações dérmicas como dano estrutural à zona de membrana basal, melanócitos em pêndulo, elastose solar, celularidade, proliferação vascular, além da expressão de mediadores inflamatórios, fatores de crescimento, expressão epitelial de melanocortina e receptores dos hormônios sexuais; sugerem interação entre a unidade epidermo-melânica e a derme na fisiopatologia do melasma. A pigmentação melânica da pele pode ser estimulada por diferentes vias de sinalização, sendo a radiação ultravioleta, citocinas dérmicas e inflamação epidérmica, os modelos mais usuais. Neste estudo, objetivamos comparar a morfologia nuclear e a textura da cromatina entre queratinócitos basais no melasma facial e pele adjacente, investigar a ativação das diferentes vias de estímulo à pigmentação, além do envolvimento da derme, com foco na zona de membrana basal e colágeno, no melasma facial. Para a sua execução, foram coletados pares de biópsias faciais (2mm) de mulheres adultas com melasma e de pele adjacente (<2 cm). Processaram-se para coloração de PAS e picrosirius red; imunofluorescência para p53, p38, IL- 1α, αMSH, MC1R e COX2; imunoistoquímica para Melan-Acontracorada com PAS; Microscopia Eletrônica de Transmissão, além de cultura primária de fibroblastos para real-timePCR array e marcação para SA-β-gal. Foram avaliados: núcleos de quer... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The melasma pathogenesis, specially the role of keratinocytes and fibroblast in the disease development and maintenance are not completely understood. Dermal alterations such as basal membrane structural damage, pendulous melanocytes, solar elastosis, cellularity, vascular proliferation, in addition to the expression of inflammatory mediators, grow factors, epithelial melanocortin and sexual hormones receptors, suggest there is an interaction between the epidermal melanin unit and dermis in melasma physiopathology. The melanin skin pigmentation can be stimulated by different signaling pathways. UVR, dermal cytokines and epidermal inflammation are the most common models. These study aims to compare the nuclear morphology and chromatin texture in basal keratinocytes between melasma and adjacent skin, to investigate the activation of different pigmentation signaling pathways, and the dermal involvement, focusing on basal membrane zone and collagen. Therefore, facial skin biopsies (2 mm) from women were taken from melasma and normal skin (<2 cm apart) and processed for PAS and picrosirius red; immunofluorescence for p53, p38, IL-1α, αMSH, MC1R and COX2, immunohistochemistry for Melan-A counterstaining with PAS, and transmission electronic microscopy. Furthermore, primary fibroblast culture for real-timePCRarray and SA-β-gal staining. The nuclei of basal keratinocytes were evaluated as nuclear morphometry and chromatin texture; the fluorescence intensity was quantified in the epid... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Hélio Amante Miot / Resumo: O melasma é hipermelanose crônica e adquirida decorrente de um complexo processo que envolve hipertrofia melanocítica e disfunção melanogênica. Acomete preferencialmente o sexo feminino e as lesões ocorrem nas áreas fotoexpostas, especialmente a face. Sua patogênese não é bem compreendida e os estudos clássicos avaliam apenas pele acometida e perilesional, mas pouco se sabe do comportamento da pele fotoprotegida, submetida aos mesmos fatores sistêmicos e genéticos. Neste estudo, objetivamos avaliar características histológicas, vias epidérmicas que influem na melanogênese (Wnt e ASIP) e características ultraestruturais da pele com melasma em comparação com a pele sã adjacente e retroauricular. Para a execução deste estudo transversal com controle intra-sujeito, foram coletadas três biópsias cutâneas (punch 3 mm) de onze mulheres com melasma facial. As áreas de coleta foram a pele com melasma, pele sã adjacente (distando no máximo 2 cm do limite da lesão) e pele retroauricular ipsilateral. Os fragmentos provenientes de dez participantes foram corados por hematoxilina-eosina, ácido periódico de Schiff, Fontana-Masson, picrosirius red, azul de toluidina e Verhöff; imunomarcados para CD34 e submetidos à imunofluorescência direta (IFD) de dupla marcação para proteínas Wnt1, WIF-1 e ASIP. Já os três fragmentos de uma das participantes foram processados para Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET). Os dados obtidos foram comparados entre as topografias por modelo linear generali... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_alvaro_carlos_menezes_arteche.pdf: 1268541 bytes, checksum: 48cb8939395a534c09b30fdb0ec17ef9 (MD5) Previous issue date: 2011-11-21 / This study analyzed, by reaction to indirect immunofluorescence and individual weighting, the levels of protection and weight-gain in beef calves from birth to the age of eight month, which received two doses of vaccine against tick fever and were maintained free from ticks, compared to naturally infested calves in extensive management conditions with continuous grazing in a rural property situated in the municipality of Santana do Livramento Espinilho / RS. Two groups were randomly gathered, n=30, from which Group I (test) was kept free from ticks from birth to weaning and received two doses of the attenuated, trivalent, refrigerated vaccine against tick fever. Groupe II (control) followed the property s traditional management, which reflects the one used in the region, allowing the tick infestation by the animals. Weight control was accomplished in the first day (d0) and in the last day of the experiment (d180). The serology revealed that 100% of the vaccinated animals presented titles equal to 1:5120 for the three parasites Anaplasma marginale, Babesia bovis e Babesia bigemina (p≤0,025), whereas in the control group the highest titles were 1:2560 in four animals for A. marginale, 1:1280 in four animals for B. bovis and 1:1280 in two animals for B. bigemina (p≤ 0,025). Group I got a mean weight-gain of 30,5 kg more than the control group at the end of the experiment (p≤0,025). The results obtained show that keeping animals free from tick, from birth to weaning, and maintaining them vaccinated against tick fever is safer, more efficient and economically and technically more advantageous than the traditional management system carrapateamento (natural tick infestation). / Avaliaram-se, pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e de pesagens individuais, os níveis de proteção e ganho de peso de terneiros de corte do nascimento ao desmame com oito meses de idade que receberam duas doses de vacina contra tristeza bovina e foram mantidos livres de carrapatos em comparação a terneiros naturalmente infestados em condições de manejo extensivo com pastoreio contínuo em propriedade rural localizada no município de Santana do Livramento-Espinilho/RS. Formaram-se dois grupos aleatóriamente, n=30, sendo o GRUPO I (teste) mantido livre de carrapatos desde o nascimento até o desmame e com duas doses da vacina atenuada, trivalente e refrigerada contra tristeza bovina. O GRUPO II, controle, seguiu o manejo tradicional da propriedade, que reflete o da região, permitindo que os animais fossem infestados por carrapatos. As pesagens foram realizadas no primeiro dia do experimento (d0) e no último dia do experimento (d180). A sorologia revelou que 100% dos animais vacinados apresentaram títulos maiores ou iguais a 1:5120 para os três parasitos Anaplasma marginale, Babesia bovis e Babesia bigemina (p≤0,025) enquanto que no grupo controle os títulos máximos foram 1:2560 em quatro animais para A. marginale, 1:1280 em quatro animais para B. bovis e 1:1280 em dois animais para B. bigemina. Houve diferença significativa entre os dois grupos (p≤0,025). O grupo I obteve 30,5 Kg a mais de ganho médio de peso que o grupo controle no final do experimento (p≤0,025). Com os resultados obtidos, conclui-se que é mais eficiente, seguro e vantajoso econômica e tecnicamente manter os animais livres de carrapatos, desde o nascimento até o desmame, e vacinados contra tristeza bovina, do que com o manejo tradicional carrapateamento .