La voie Fas-FasL est la voie majeure d’apoptose dont le rôle est indispensable pour l’homéostasie des cellules hématopoïétiques et la tolérance périphérique. Mon projet de thèse consiste à étudier le rôle de FasL dans la réponse anti tumorale, notamment le rôle de son expression sur les cellules myéloïdes, en l’occurrence les macrophages et les cellules myéloïdes suppressives.Les souris Fasl KO sont caractérisées par une accumulation des différentes populations de cellules hématopoïétiques dans les organes lymphoïdes périphériques. Cependant, elles ne développent pas de tumeurs spontanées. De façon intéressante, nos résultats montrent que lors qu’elles sont transplantées par les cellules tumorales, leur survie est significativement diminuée par rapport aux souris contrôles (Fasl fl/fl), ce qui suggère un rôle de FasL dans la réponse anti-tumorale. Une caractérisation fine de la répartition des cellules myéloïdes chez les souris Fasl KO porteuses de tumeur, montre une répartition différentielle des cellules Gr1+, par une accumulation des M-MDSC, dans la rate de ces souris. En plus, un enrichissement de l’infiltrat tumoral par les macrophages TAM chez les souris Fasl KO a été observé. Ces macrophages, indépendamment de génotype exècrent une forte activité d’arginase et iNOS et une inhibition de la prolifération des cellules T in vitro. Ainsi, la mortalité plus importante chez les souris Fasl KO pourrait, en partie, être associée à cet enrichissement des TAM dans l’infiltrat des souris déficientes en FasL.Afin de déterminer si cette accumulation des cellules myéloïdes immunosuppressives déficientes en FasL est spécifique d’un environnement tumoral ou le reflet d’un état inflammatoire, nous avons examiné le phénotype des macrophages dans un modèle d’inflammation induite par le thioglycollate. Les résultats montrent que les macrophages CD11b+F480+, recrutés sur le site de l’inflammation, lorsqu’elles sont déficientes en FasL, sur-expriment les gènes anti-inflammatoires comme IL-10, Arg1, CCL17. La caractérisation plus fine de cette population de macrophages a montré que la population responsable de ce phénotype suppressive est F480+CD115+IL-4R+. Chez les souris Fasl KO, le pourcentage des macrophages F480+CD115+IL-4R+ est significativement augmenté en comparaison avec les souris contrôles. L’analyse fonctionnelle de cette population CD115+ a montré que ces cellules, inhibent la prolifération et la production d’IFN- des cellules T activées. Ces caractéristiques fonctionnelles sont en faveur d’un phénotype anti-inflammatoire de ces macrophages, qui lorsqu’ils sont déficients en FasL, leur recrutement sur le site de l’inflammation est plus important.L’ensemble de ces résultats suggère que l’expression de FasL sur les cellules myéloïdes pourrait jouer un rôle dans leur polarisation vers un phénotype pro inflammatoire. Ainsi, ce travail pourrait apporter de nouvelles approches de levée de l’immunosuppression pour une immunothérapie efficace. / Fas-FasL pathway is the major pathway of apoptosis, the role of which is essential for the homeostasis of hematopoietic cells and peripheral tolerance. The project of my dissertation is to investigate the role of FasL in anti-tumor response, particulary the role of its expression on myeloid cells i.e., macrophages and myeloid derived suppressor cells. Fasl KO mice are characterized by an accumulation of different populations of hematopoietic cells in the peripheral lymphoid organs. However, they do not develop spontaneous tumors. Interestingly, our results show that when they are transplanted by tumor cells, their survival rate is significantly reduced in comparison to control mice, suggesting the implication of FasL in the anti-tumor response. Detailed characterization of the distribution of myeloid cells in Fasl KO mice injected with tumor cells shows a differential distribution of the sub populations of Gr1+ cells, an M-MDSC accumulation in the spleen. Furthermore, the enrichment of tumor infiltrate by suppressive macrophages in Fasl KO mice was observed. These macrophages, regardless of genotype, have a high arginase and iNOS activity and they inhibit the proliferation of T cells in vitro. Thus, the higher mortality in Fasl KO mice could in part be explained by the enrichment of tumor infiltrate by TAM in mice that are FasL deficient.To determine whether the accumulation of FasL deficient immunosuppressive myeloid cells is specific to a tumor environment or is the reflection of an inflammatory condition, we examined the phenotype of macrophages in an experimental inflammation induced by thioglycollate. The results show that CD11b + F480 + macrophages, which are recruited to the site of inflammation, when they are FasL deficient, they upregulate anti-inflammatory genes such as IL-10, Arg1, CCL17. More detailed characterization of this population of macrophages shows that the population responsible for the suppressor phenotype is F480+CD115+IL4R+. In Fasl KO mice, the percentage of F480+CD115+IL4R+ macrophages is significantly increased compared with control mice. Functional analysis of CD115+ population shows that they inhibit proliferation of activated T cells and their IFN-g production. These functional characteristics favor an anti-inflammatory phenotype of these macrophages, suggesting that when deficient in FasL, their recruitment to the site of inflammation is more important.Taken together, these results suggest that the expression of FasL on myeloid cells plays a significant role in their bias towards a pro inflammatory phenotype pointing toward a new class of approaches to raising immunosuppression for more effective immunotherapy.

La caractérisation moléculaire multidimensionnelle des tumeurs et des tumeurs gliales en particulier est une étape importante pour l’identification de biomarqueurs (diagnostique, pronostique, théranostique et/ou de prédisposition), pour l’identification de cibles thérapeutiques et pour une meilleure compréhension de l’oncogénèse moléculaire.Nos travaux ont permis de confirmer et de consolider certaines données de la littérature comme par exemple : (i) la valeur pronostique favorable de la codélétion 1p/19q, (ii) la valeur pronostique favorable de la mutation IDH, (iii) le caractère mutuellement exclusive des mutations TP53 et de la codélétion 1p/19q et (iv) la rareté des altérations génétiques du PDGFRA dans les gliomes de bas grade (GDBG). De manière plus originale, nous avons identifié plusieurs sous-groupes génomiques de GDBG pertinents sur le plan clinico-biologique, notamment au sein des GDBG non 1p/19q codélétés : (i) 19q-délété ; (ii) 11p-délété, (iii) 7-gagné, (iv) 19-gagné et (v) inclassés. La perte du bras chromosomique 19q annule la valeur pronostique favorable de la mutation IDH dans les GDBG non 1p/19q codélétés. Nous avons également identifié des mutations géniques originales dans les GDBG (i.e. mutation TEP1 et RNF40) qui renforcent le rôle des télomères et du remodelage de la chromatine au sein des GDBG.Enfin, nous nous sommes concentrés sur la caractérisation des GDBG 11p-délétés qui sont de phénotype majoritairement astrocytaire et de moins bon pronostic. Ces GDBG surexpriment des gènes des cellules immunitaires (les GIM -Glioma infiltrating microglia-, les macrophages de type 1, les macrophages de type 2) et sont infiltrés par des cellules macrophagiques et microgliales. Ce microenvironnement dérégulé peut constituer une cible thérapeutique au sein des GDBG 11p-délétés. En conclusion, nos travaux participent à la dissection clinico-moléculaire des GDBG et à préciser la biologie d’un sous-type de GDBG caractérisé la perte du bras chromosomique 11p. / Multildimensional molecular characterization of tumors and more specifically of gliomas is of pivotal importance to identify: (i) new biomarkers (i.e. diagnostic, prognostic, theranostic or predisposing), (ii) new therapeutic targets and (iii) to improve our understanding of molecular oncogenesis.Our work has confirmed and consolidated previous data published in the literature, for example that: (i) 1p/19q co-deletion is associated with better prognosis, (ii) IDH mutation is associated with better prognosis, (iii) TP53 mutations and 1p/19q codeletion are mutually exclusive and (iv) PDGFRA is rarely altered, at genomic level, in low-grade gliomas (LGG).More originally, we have identified several genomic groups, with clinical and biological relevances, in LGG and more specifically in LGG without 1p/19q co-deletion: (i) 19q-deleted, (ii) 11p-deleted, (iii) 7-gained, (iv) 19-gained and (v) unclassified. Interestingly, 19q deletion abrogates the positive prognostic value of IDH mutation in LGG without 1p/19q codeletion.We have also identified new recurrent somatic gene mutations in LGG (i.e. TEP1 and RNF40 mutations), supporting the critical role of telomeres and chromatin remodelling in LGG.Finally, we have characterized further 11p-deleted LGG that exhibit mostly astrocytic phenotype and poor prognosis. This subgroup includes LGG overexpressing genes of inflammatory/immune cells (GIM -Glioma infiltrating microglia-, M1 macrophages and M2 macrophages) and infiltrated by macrophagic/microglial cells. This peculiar microenvironment detected in 11p-deleted LGG might be used as a therapeutic target. In conclusion, our work participates to characterize clinico-biological portrait of LGG and to describe a singular genomic subgroup of LGG characterized by 11p loss.

La fibrose radio-induite (FRI) est une complication tardive de la radiothérapie souvent associée à une réponse inflammatoire chronique et à un infiltrat de macrophages. Aujourd’hui, les macrophages sont pressentis comme des médiateurs cellulaires important dans le processus de fibrose mais leur rôle n’a jamais été étudié dans le contexte de la FRI. Dans une précédente étude nous avions montré que l’irradiation (IR) induit une polarisation M1 des macrophages cardiaques après irradiation de souris ApoE-/- et est associée un score de fibrose élevé, ce qui suggérait que la polarisation des macrophages pourrait contribuer à la fibrogénèse radio-induite. Afin de valider cette hypothèse, nous avons cherché à caractériser le rôle des macrophages dans la FRI en utilisant un modèle classique de fibrose pulmonaire chez la souris C57Bl/6 induit après IR thoracique à 16Gy. Nous avons caractérisé les phénotypes et la fonction des macrophages alvéolaires (MA) et interstitiels (MI). Durant la phase précoce, les résultats montrent une déplétion des MA accompagnée de la sécrétion de CXCL1, MCP-1 et de MCSF. Cette déplétion est suivie d’une repopulation suite au recrutement et à la prolifération des monocytes/macrophages d’origine médullaire. La nouvelle population de MA présente une polarisation hybride accompagnée d’une augmentation simultanée de la sécrétion de cytokines Th1 et Th2. Durant la phase tardive les MI présentent une polarisation de type M2 accompagnée d’une diminution des cytokines Th1 et d’une augmentation de cytokines Th2 dans le lysat tissulaire. Nous avons ensuite cherché à caractériser la contribution des MA hybrides vs MI M2 dans le processus de fibrose. Nous avons montré que contrairement au MA hybrides, les MI M2 étaient capables d’induire l’activation des fibroblastes in vitro et l’expression de TGF-β1. De plus, la déplétion des MA hybrides avec une administration intranasale de clodronate exacerbe la FRI et induit l’augmentation de l’infiltrat de MI M2. Ensuite, nous nous somme interrogés à la contribution du processus de fibrose dans la polarisation des macrophages. Après 24h de coculture entre fibroblastes irradiés et macrophages pulmonaires non irradiés, une sécrétion de cytokines telles que M-CSF et TIMP-1 qui pourraient stimuler l’activation des fibroblastes est observée. De plus, l’inhibition de la FRI avec de la pravastatine montre que l’inhibition de la fibrose est accompagnée d’une augmentation des MI M1 et d’une diminution des MI M2 dans le poumon. En résumé, nos résultats montrent une contribution opposée des Macrophages Alvéolaires et des Macrophages Interstitiels dans le processus de fibrose radio-induite ainsi qu’une contribution du processus de fibrose dans le type d’activation des Macrophages interstitiels formant ainsi une boucle d’activation fibrogénique chronique. / Radiation-induced fibrosis (RIF) is a delayed complication of radiotherapy often associated with chronic inflammatory process and macrophage infiltration. Nowadays, macrophages are suggested to be important cellular contributors to fibrogenic process, but their implication in the context of RIF has never been investigated. In a previous study we have shown that irradiation (IR) induced the polarization of cardiac macrophages into M1 in ApoE-/- mice and was associated with a high fibrosis score in ApoE-/- mice, suggesting that macrophage polarization could drive tissue sensitivity to ionizing radiation. This observation prompted us to investigate the role of macrophages in RIF using a classical experimental model of lung fibrosis developed in C57Bl/6 mice after 16Gy thorax-IR. We profiled both alveolar macrophages (AM) and interstitial macrophages (IM). During the acute phase we found AM depletion associated with CXCL1, MCP-1 and M-CSF secretion, followed by a repopulation phase mediated by recruitment and proliferation of monocytes/macrophages from the bone marrow. Interestingly, the newly recruited AM exhibited a yet never described hybrid polarization (M1/M2), associated with the up-regulation of both Th1 and Th2 cytokines. At delayed times points, IM were M2-polarized and associated with downregulation of Th1 cytokines and upregulation of Th2 cytokines in tissue lysates. These results suggest a differential contribution of hybrid AM vs M2 IM to fibrogenesis. Interestingly, in contrast to activated hybrid AM, activated M2 IM were able to induce fibroblast activation in vitro mediated by an enhanced TGF-β1 expression. Therefore, specific depletion of hybrid AM using intranasal administration of clodrosome increased RIF score and enhanced M2 IM infiltration. We next evaluated if the fibrogenic process can in turn affect macrophage polarization. Interestingly, after coculture of irradiated fibroblast with non-irradiated pulmonary macrophages, secretion of cytokines such as M-CSF and TIMP-1, which can stimulate macrophage activation, was observed. Furthermore, RIF inhibition using pravastatin treatment showed that fibrosis inhibition was associated with a decrease in M2 IM accompanied by an increase in M1 IM, but had no effect on polarization of AM. These present study shows a dual and opposite contribution of alevolar versus intertitial macrophages in RIF and the contribution of the fibrogenic process to IM polarization, resulting thereby in a chronical fibrogenic loop.

L’inflammasome NLRP3 est un complexe multi-protéique responsable de la production d’IL-1β en réponse à des signaux de danger. Certaines mutations de NLRP3 étant responsables de maladies inflammatoires l’activation de ce complexe se doit d’être finement régulée. Dans cette étude je me suis intéressé à l’importance de la protéine de choc thermique HSP70 dans l’activation de l’inflammasome NLRP3. J’ai dans un premier temps mis en évidence que l’absence d’HSP70 entraine une amplification des symptômes de la péritonite chez la souris. Le manque d’HSP70 augmente également l’activation de la caspase-1 et la production d’IL-1β par les macrophages issus de la moelle osseuse de souris (BMDMs) à la suite d’un traitement par différents activateurs de NLRP3 in vitro. Ces phénomènes sont associés à une augmentation du nombre et de la taille des complexes ASC/NLRP3 dans la cellule. De manière correspondante, la surexpression d’HSP70 dans les BMDMs diminue l’activation de la caspase-1 et la production d’IL-1β après traitement par des activateurs de NLRP3. Une des explications possibles de l’effet inhibiteur d’HSP70 est son interaction avec NLRP3 que j’ai observé par PLA (Proximity Ligation Assay). J’ai également utilisé un choc thermique pour surexprimer HSP70 et observé une inhibition de l’inflammasome NLRP3 in vitro. Finalement, une hyperthermie in vivo inhibe également les symptômes de la péritonite chez la souris, soulignant la relevance physiologique de ces observations. Cette étude fournit donc des preuves de l’effet inhibiteur d’HSP70 sur l’inflammasome NLRP3 et met en lumière un possible nouvel outil de traitement des maladies inflammatoires. / NLRP3 inflammasome is a multi-protein complex aimed at producing IL-1β in response to danger signals. Gain of function mutations of NLRP3 are responsible for inflammatory diseases, so NLRP3-dependent inflammation required tight regulation. Here we investigated the importance of the stress sensor, Heat Shock Protein 70 (HSP70) on the NLRP3 inflammasome activation. First, the lack of HSP70 leads to a worsening of NLRP3-dependent peritonitis in mice. HSP70 deficiency also enhances caspase-1 activation and IL-1β production by murine Bone Marrow-Derived Macrophages (BMDMs) under NLRP3 activators treatment in vitro. These phenomena are associated with an increase in the number and size of ASC/NLRP3 specks. At the opposite side, the overexpression of HSP70 in BMDMs decreases caspase-1 activation and IL-1β production under NLRP3 activators treatment in vitro. One possible explanation of the inhibitory effect of HSP70 is its interaction with NLRP3. A heat shock, used as a way to induce the expression of HSP70 also inhibits the NLRP3 inflammasome activation in vitro. Finally, in vivo hyperthermia also inhibits peritonitis features in mice, highlighting the physiological relevance of our observations. This study provides evidences on the inhibitory role of HSP70 on the NLRP3 inflammasome and on the possibility to treat inflammatory diseases by inducing its expression, mainly by hyperthermia.

過敏性疾病的患病率一直上升，約30%至40%的世界人口受到一個或多個過敏疾病影響。然而，現時仍然缺乏有效治療過敏性疾病的方法，大多數傳統療法只能改善臨床症狀，卻沒有針對導致過敏性炎症的主要因素。嗜酸性粒細胞浸入和積累於局部炎症部位以及延緩了的細胞凋亡是過敏性炎症的標誌，而嗜酸性粒細胞亦被認為是過敏性炎症的主要效應細胞。因此，針對嗜酸性粒細胞，抑制其活性和衍生產物，是一個有潛力和有效地治療過敏性炎症的策略。發展針對嗜酸性粒細胞的療法需要詳細了解嗜酸性粒細胞介導炎症反應的機制。 / 在第三章中，我們把嗜酸性粒細胞與皮膚成纖維細胞一起培養，建立了一個體外的皮膚炎症模型，用以研究嗜酸性粒細胞在過敏性皮炎發病病理中的作用。我們發現，嗜酸性粒細胞和成纖維細胞的共培養顯著誘導促炎性的細胞因子IL-6和濕疹相關趨化因子CXCL1，CXCL10，CCL2和CCL5的釋放。這些炎症介質的釋放在能導致皮膚瘙癢的細胞因子IL-31和內源性警報因子IL-33的刺激下進一步加強。 IL-31和IL-33可顯著引起嗜酸性粒細胞和成纖維細胞釋放CXCL8，而當兩種細胞共培養後，CXCL8的釋放進一步增強。在共培養系統中，嗜酸性粒細胞是釋放CCL5的主要來源，而成纖維細胞則是釋放IL-6，CXCL1, CXCL8，CXCL10和CCL2的主要來源。嗜酸性粒細胞和成纖維細胞之間的直接相互作用是CXCL1，CXCL10，CXCL8和CCL5的釋放所必需的。在IL-31和IL-33的刺激下，共培養系統中嗜酸性粒細胞和成纖維細胞的細胞表面粘附分子ICAM-1的表達上調。而嗜酸性粒細胞和成纖維細胞間的互作用，以及IL-31和IL-33對兩種細胞的激活，是經由p38、ERK、JNK，NF-κB和PI3K-AK訊息傳遞徑路所調節的。另外，我們亦發現1,25-二羥維生素D3能顯著抑製共培養系統在IL-31或IL-33激活下IL-6，CCL2和CXCL8的釋放。 / 在第四章中，我們探討在嗜酸性粒細胞和支氣管上皮細胞BEAS-2B的共培養系統中，兩種細胞的細菌相關模式識別受體成員NOD1和NOD2激活機制。我們發現NOD配體iE-DAP和NOD2配體MDP能激活嗜酸性粒細胞內的ERK和NF-κB信號傳導通路，而MDP可以激活嗜酸性粒細胞和BEAS-2B細胞的ERK信號傳導通路。當嗜酸性粒細胞和BEAS-2B細胞共培養時，iE-DAP和MDP均可激活嗜酸性粒細胞和BEAS-2B細胞的ERK和NF-κB信號傳導通路，而且與單獨培養的細胞相比，激活的程度更強。此外，我們還探討了iE-DAP和MDP對 BEAS-2B細胞和嗜酸性粒細胞的核轉錄因子的激活作用。我們發現iE-DAP和MDP可以激活嗜酸性粒細胞和BEAS-2B細胞的某些轉錄因子，包括因子NF-κB、STAT-3和NFAT等，而多數被激活的轉錄因子都跟過敏性炎症和哮喘的發病有關。除了體外研究，我們還建立了過敏性肺部炎症的小鼠模型，用以研究iE-DAP和MDP的生理效應。iE-DAP和MDP均可激活第二型輔助性T細胞相關的免疫球蛋白E生產，以及誘導嗜酸性粒細胞趨化因子CCL5。 / 上述的研究結果表明IL-31與IL-33在過敏性皮炎的發病病理中發揮關鍵作用，通過不同的信號傳導機制激活嗜酸性粒細胞與成纖維細胞的相互作用。另外，我們探討了在嗜酸性粒細胞和BEAS-2B細胞中，調節NOD1和NOD2激活的信號傳導機制，加上動物實驗，所得的結果有助了解細菌感染在哮喘發作中所發揮的影響。這些關於細胞之間和細胞內調控機制的研究結果，進一步增強我們對嗜酸性粒細胞介導炎症的理解，並為發展更高專一性、效用和更少副作用的消炎藥提供了新的標靶和方向。 / The prevalence of allergic diseases has been steadily increased, with about 30-40% of the world population being affected by one or more allergic conditions. Effective treatments on allergic diseases are still lacking, as most of the traditional therapies aim at clinical improvement without targeting the factors that primarily promote the allergic inflammation. Infiltration, delayed apoptosis and accumulation of eosinophils at the local inflammatory sites are the hallmarks of allergic inflammation and eosinophils are considered as the principal effector cells in allergic inflammation. Anti-eosinophils therapeutics inhibit eosinophil activity and eosinophil-derived products are thus potential strategies in treating allergic inflammation effectively. Elucidation of the detailed mechanisms of eosinophil-mediated inflammation is therefore necessary for the development of anti-eosinophils therapeutics. / In Chapter 3, we established an in vitro skin inflammation model by co-culturing eosinophils with dermal fibroblasts in order to study the pathophysiology of eosinophils’ involvement in the pathogenesis of atopic dermatitis (AD). We revealed that co-culture of eosinophils and fibroblasts significantly induced release of pro-inflammatory cytokine IL-6 and AD-related chemokines CXCL1, CXCL10, CCL2 and CCL5. Such inductions were further enhanced with pruritogenic cytokine IL-31 and endogenous alarmin IL-33 stimulation. IL-31 and IL-33 could significantly provoke the release of CXCL8 from eosinophils and fibroblasts, respectively, which was further enhanced upon co-culture. In co-culture, eosinophils and fibroblasts were the main source for the release of CCL5, and IL-6, CXCL1, CXCL8, CXCL10 and CCL2, respectively. Direct interaction between eosinophils and fibroblasts was required for CXCL1, CXCL10, CXCL8 and CCL5 release. Cell surface expression of intercellular adhesion molecule-1 on eosinophils and fibroblasts was upregulated in co-culture upon IL-31 and IL-33 stimulation. The interaction between eosinophils and fibroblasts under IL-31 and IL-33 stimulation differentially activated ERK, JNK, p38 MAPK, NF-κB and PI3KAkt pathways. 1,25-dihydroxy vitamin D3 exerted in vitro suppressive effect on the release of IL-6, CCL2 and CXCL8 release from IL-31 or IL-33 activated co-culture of eosinophils and fibroblasts. / In Chapter 4, we revealed the mechanisms underlying bacterial-related pattern recognition receptor members NOD1 and NOD2 activation in eosinophils and bronchial epithelial cells BEAS-2B from the co-culture system and animal model experiment. NOD1 ligand iE-DAP and NOD2 ligand MDP could activate ERK and NF-κB pathways in eosinophils, while MDP stimulation could activate ERK in both eosinophils and BEAS-2B cells. When the eosinophils and BEAS-2B cells were co-cultured together, both iE-DAP and MDP could induce ERK and NF-κB activation in the two cells, and the activation was enhanced when compared with that in cells cultured alone. Besides, we also investigated the transcription factors activation in eosinophils and BEAS-2B cells by iE-DAP and MDP. iE-DAP and MDP could also activate a panel of transcription factors in eosinophils and BEAS-2B cells, including NF-κB, STAT-3 and NFAT etc, the nuclear transcription factors commonly involved in allergic inflammation and related to the pathogenesis of asthma. Apart from in vitro study, we also established an in vivo allergic pulmonary inflammation mice model to study the physiological effects of iE-DAP and MDP. Both iE-DAP and MDP could activate the Th2 related IgE production and induce eosinophil chemokine CCL5. / The above findings suggest a crucial immunopathological role of IL-31 and IL-33 in AD through the activation of eosinophils-fibroblasts interaction via differential intracellular signaling mechanisms. The intracellular signaling mechanisms regulating NOD1 and NOD2 activation in eosinophils and bronchial epithelial cells and animal experiment were also revealed and give implications of the role of bacterial infections in the exacerbation of asthma. Such information further enhances our understandings on both the intercellular and intracellular mechanisms of eosinophil-mediated inflammation, and gives implications for new targets for the development of anti-inflammatory drugs with higher specificity, potency, and less side effects. / Detailed summary in vernacular field only. / Detailed summary in vernacular field only. / Detailed summary in vernacular field only. / Detailed summary in vernacular field only. / Leung, Ming Lam. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2012. / Includes bibliographical references (leaves 136-153). / Abstracts also in Chinese. / ACKNOWLEDGEMENTS --- p.I / ABSTRACT --- p.III / 摘要 --- p.VI / PUBLICATIONS --- p.IX / ABBREVIATIONS --- p.XI / TABLE OF CONTENTS --- p.XIV / Chapter Chapter 1 --- : General Introduction / Chapter 1.1 --- Allergy --- p.1 / Chapter 1.1.1 --- Definition and characteristics of allergy --- p.1 / Chapter 1.1.2 --- Allergic diseases and their prevalence --- p.2 / Chapter 1.1.3 --- Allergic inflammation --- p.2 / Chapter 1.2 --- Biology of eosinophils --- p.8 / Chapter 1.2.1 --- Development of eosinophils --- p.8 / Chapter 1.2.2 --- Cellular characteristics of eosinophils --- p.9 / Chapter 1.2.3 --- Eosinophils surface and intracellular markers --- p.10 / Chapter 1.2.4 --- Eosinophil-derived mediators --- p.13 / Chapter 1.2.5 --- Accumulation and activation of eosinophils at inflammatory sites --- p.16 / Chapter 1.3 --- Adhesion molecules in allergic inflammation --- p.19 / Chapter 1.3.1 --- Selectins --- p.19 / Chapter 1.3.2 --- Integrins --- p.20 / Chapter 1.3.3 --- Immunoglobulin gene super family --- p.21 / Chapter 1.4 --- Cytokines in allergic inflammation --- p.23 / Chapter 1.4.1 --- Pro-inflammatory cytokines --- p.23 / Chapter 1.4.2 --- Anti-inflammatory cytokines --- p.25 / Chapter 1.5 --- Chemokines in allergic inflammation --- p.27 / Chapter 1.6 --- Signal transduction in allergic inflammation --- p.29 / Chapter 1.6.1 --- Intracellular signaling mechanisms --- p.29 / Chapter 1.6.2 --- Transcription factors activation --- p.33 / Chapter 1.7 --- Perspective treatments --- p.36 / Chapter 1.7.1 --- Inhibition of pro-inflammatory cytokines --- p.36 / Chapter 1.7.2 --- Inhibition of chemokines --- p.37 / Chapter 1.7.3 --- Small interfering (si)RNA against transcription factor --- p.37 / Chapter 1.7.4 --- Signaling pathway inhibitors --- p.38 / Chapter 1.8 --- Aim of study --- p.39 / Chapter Chapter 2 --- : Materials and Methods / Chapter 2.1 --- Materials --- p.42 / Chapter 2.2 --- Methods --- p.60 / Chapter 2.2.1 --- Purification of human eosinophils --- p.60 / Chapter 2.2.2 --- Cell culture --- p.61 / Chapter 2.2.3 --- Cell surface and intracellular immunofluorescence staining --- p.63 / Chapter 2.2.4 --- Western blot --- p.64 / Chapter 2.2.5 --- Allergic asthmatic mice model --- p.64 / Chapter 2.2.6 --- Statistical analysis --- p.65 / Chapter Chapter 3 --- : Activation of Eosinophils Interacting with Dermal Fibroblasts by Pruritogenic Cytokine IL-31 and Alarmin IL-33: Implications in Atopic Dermatitis / Chapter 3.1 --- Introduction --- p.66 / Chapter 3.1.1 --- Atopic dermatitis --- p.66 / Chapter 3.1.2 --- Eosinophils in AD --- p.68 / Chapter 3.1.3 --- IL-31 --- p.68 / Chapter 3.1.4 --- IL-33 --- p.70 / Chapter 3.1.5 --- Vitamin D --- p.71 / Chapter 3.1.6 --- Hypothesis and aim of study --- p.73 / Chapter 3.2 --- Results --- p.74 / Chapter 3.2.1 --- Surface expression of receptors for IL-31 and IL-33 on human eosinophils and dermal fibroblasts --- p.74 / Chapter 3.2.2 --- Cytokine and chemokine release upon the interaction of eosinophils and dermal fibroblasts activated by IL-31 and IL-33 --- p.77 / Chapter 3.2.3 --- Source of the release of cytokines and chemokines in the co-culture system upon IL-31 and IL-33 stimulation --- p.80 / Chapter 3.2.4 --- Effect of transwell inserts on cytokine and chemokine release in IL-31 and IL-33-treated co-culture --- p.83 / Chapter 3.2.5 --- Effect of IL-31 and IL-33 on adhesion molecule expression on eosinophils and dermal fibroblast in co-culture system --- p.86 / Chapter 3.2.6 --- Intracellular signaling pathways involved in the interaction of eosinophils and dermal fibroblasts under IL-31 and IL-33 stimulation --- p.88 / Chapter 3.2.7 --- Surface expression of vitamin D receptor on human eosinophils and dermal fibroblasts --- p.96 / Chapter 3.2.8 --- Suppressive effects of 1,25-dihydroxy vitamin D₃ (calcitriol) on cytokine and chemokine release from IL-31 and IL-33-treated co-culture --- p.97 / Chapter 3.3 --- Discussion --- p.100 / Chapter Chapter 4 --- :Intracellular Signal Transduction Mechanisms of NLR Activation in Human Eosinophils and Bronchial Epithelial Cells: Implication for Bacterial Infection in Allergic Asthma / Chapter 4.1 --- Introduction --- p.107 / Chapter 4.1.1 --- Allergic asthma --- p.107 / Chapter 4.1.2 --- Eosinophils in allergic asthma --- p.108 / Chapter 4.1.3 --- NOD-like receptors --- p.109 / Chapter 4.1.4 --- Hypothesis and aim of study --- p.110 / Chapter 4.2 --- Results --- p.112 / Chapter 4.2.1 --- Intracellular signaling pathways involved in the interaction of eosinophils and BEAS-2B cells under iE-DAP and MDP stimulation --- p.112 / Chapter 4.2.2 --- Transcription factors activation in eosinophils and BEAS-2B cells under iE-DAP and MDP stimulation --- p.119 / Chapter 4.2.3 --- In vivo activating effect of NOD1,2 ligands on the IgE and chemokine concentration in serum and BALF in allergic asthmatic mice --- p.122 / Chapter 4.3 --- Discussion --- p.125 / Chapter Chapter 5 --- : Concluding Remarks and Future Studies / Chapter 5.1 --- Concluding remarks --- p.130 / Chapter 5.2 --- Future studies --- p.131 / REFERENCES --- p.136

Depuis quelques années, les plaquettes sanguines sont reconnues comme un véritable élément de l’immunité. En effet, de nombreux rôles clés lors du processus inflammatoire sont attribués aux plaquettes, tels que la détection d’un signal, la libération de nombreux immunomodulateurs ou une forte interaction avec les autres cellules immunitaires. Le constat clinique d’une corrélation entre le taux plaquettaire et la mortalité du sepsis permet de relever l’importance de cette cellule dans la physiopathologie du sepsis. Ainsi ce travail doctoral a eu pour objectif de mettre en relief la part inflammatoire des plaquettes lors des interactions entre les facteurs de virulence de Staphylococcus aureus (S.aureus) que sont différentes exotoxines ou de souches de S. aureus issues de bactériémies de patients septiques. Un modèle expérimental de sepsis murin nous a permis de comprendre la composante inflammatoire jouée par les plaquettes ainsi que leurs implications dans la dysfonction pulmonaire issue lors du sepsis. Enfin, nous avons évalué la modulation de molécules antiplaquettaires, et particulièrement de l’acide acétylsalicylique, sur les nombreux rôles pathogéniques des plaquettes durant cette pathologie. / During some years, platelets are recognized as an key element of immunity. In fact, platelets play several roles, as signal detection, immunomodulator release and interaction with other immunity cells. The clinical significance of a correlation between platelet rate and sepsis mortality reveals the importance of this cell in the pathophysiology of sepsis. Thus, the purpose of this doctoral work was to highlight the inflammatory role of platelets in the interactions between the virulence factors of Staphylococcus aureus (S. aureus) that are different exotoxins or strains of S. aureus from bacteremia of septic patients. An experimental model of murine sepsis allowed us to understand the inflammatory component played by platelets as well as their implications in pulmonary dysfunction resulting from sepsis. Finally, we evaluated the modulation of antiplatelet molecules, particularly acetylsalicylic acid, on the numerous pathogenic roles of platelets during this pathology.

La transfusion sanguine permet de sauver des vies et réduit la morbidité pour un grand nombre de maladies et d'affections cliniques, mais elle n'est pas exempte de complications. Un incident néfaste lié à une transfusion, également appelé Effet Indésirable Receveur (EIR), est un incident défavorable survenant chez un patient pendant ou après une transfusion sanguine. Parmi eux, le TRALI est considéré comme l’une des réactions inflammatoires les plus critiques. Cette pathologie se développe généralement dans les 6 heures après transfusion. On en reconnaît deux types, les TRALI immunologiques et les TRALI non-immunologiques. En France, les premiers sont presque entièrement prévenus par une politique de sécurité des produits sanguins, tandis que la fréquence des seconds augmente. La physiopathologie du TRALI reste mal connue. Tandis que certains y accordent une place importante aux plaquettes sanguines du patient transfusé, d’autres les considèrent comme pas réellement impliquées. Le but de ce travail de thèse a été, dans un premier temps, d’investiguer le potentiel inflammatoire des plaquettes sanguines conservées dans les concentrés plaquettaires et l’influence de cette inflammation sur l’endothélium vasculaire général. Ensuite, sera évalué le rôle des plaquettes sanguines de l’organisme, notamment par l’intermédiaire de leurs produits de sécrétion, dans la pathogénie de cette complication transfusionnelle. Pour cela, un ALI (mimant un TRALI) a été déclenché, dans un modèle in vivo, par une injection d’anticorps anti-CMH I chez des souris préalablement stimulées avec du LPS. L’ensemble de nos résultats confirme le potentiel inflammatoire des plaquettes sanguines, au sein des concentrés plaquettaires, pouvant probablement assumer l’entière responsabilité du déclenchement d’un TRALI non-immunologique, ainsi qu’un rôle secondaire des plaquettes sanguines de l’organisme, participant activement à l’amplification de la sévérité de la pathologie. Cette thèse s’inscrit dans la continuité logique des études menées, au sein du laboratoire GIMAP-EA3064, investiguant la place des plaquettes sanguines au sein de l’inflammation, ouvrant ainsi de nouvelles perspectives dans la sécurité transfusionnelle. / Blood transfusion saves lives and reduces morbidity for many diseases and clinical conditions, but it is not without complications. A transfusion-related adverse event, also known as the Adverse Reaction (AR), is an incident occurring in a patient during or after a blood transfusion. Among them, TRALI is considered as one of the most critical inflammatory reactions. This pathology usually occurs within 6 hours after transfusion. Two types are recognized: immune TRALI and non-immune TRALI. In France, the first is almost completely prevented by a blood product safety policy, while the frequency of the second increases. The pathophysiology of TRALI remains poorly understood. While some scientists give an important function of patient blood platelets, others consider them dispensable. The aim of this thesis was, first, to investigate the inflammatory potential of blood platelets stored in platelet concentrates and its impact on the general vascular endothelium. Next, the role of patient blood platelets, including their secretory products, in the pathogenesis of this transfusion complication will be evaluated. For it, an ALI (mimicking a TRALI) was triggered, in an in vivo model, by an injection of anti-MHC I antibody in mice previously stimulated with LPS. Our results confirm the inflammatory potential of blood platelets in platelet concentrates, which can probably assume the entire responsibility for triggering a non-immune TRALI, and a secondary role for patient blood platelets in the amplification of the severity of this pathology. This thesis is the continuity of studies conducted in the laboratory GIMAP-EA3064, investigating the function of blood platelets in inflammation, thus opening up new perspectives in transfusion safety.

Le laboratoire a établi un modèle de souris α6ΔIEC qui développe une inflammation chronique intestinale associée à la formation d’adénocarcinomes colorectaux. Ce modèle correspond à une délétion ciblée à l’épithélium intestinal de l’intégrine α6β4. Mon projet de thèse a consisté à définir les mécanismes qui influencent la transformation de lésions inflammatoires en adénocarcinomes. La caractérisation du modèle α6ΔIEC a permis de mettre en évidence plusieurs altérations : détachement de l’épithélium, régénération du tissu, prolifération, augmentation de la perméabilité intestinale, hypersécrétion du mucus, ségrégation anormale des bactéries, inflammation chronique et formation de tumeurs.Pour étudier la séquence et la cinétique des mécanismes, j’ai développé un modèle de souris inductible (α6ΔIECTAM). Cette lignée présente, deux semaines après l’invalidation de l’intégrine α6,les mêmes signes d’inflammation que les souris α6ΔIEC. Mon approche a consisté à dissocier les processus impliqués dans chacune des étapes-clés de la pathologie afin de définir la contribution respective de l’infection par les bactéries et du stress mécanique. / We generated a new mouse model, α6ΔIEC, in which the genetic ablation of α6 integrin from intestinal epithelial cells triggered the development of spontaneous colitis and colorectal cancer. My main goal was to define the mechanisms by which inflamed lesions degenerate into infiltrating adenocarcinomas. Loss of α6 integrin in this model resulted in epithelial barrier damage, enhanced permeability, altered mucus layers, abnormal bacterial segregation, chronic inflammation and tumor development.In order to define the sequence of events and the mechanisms involved at each stage of the disease, from inflamed to tumor lesions, I developed an inducible mouse model, α6ΔIECTAM, in which α6 integrin ablation was induced by tamoxifen treatment. This line recapitulates all aspects of inflammation observed in the α6ΔIEC model, as early as two weeks after tamoxifen treatment. In particular, I tried to define the respective contribution of infection by bacteria and mechanical stress during disease progression.

Lors de l’obésité un état inflammatoire chronique de bas grade se développe dans le tissu adipeux et contribue à son dysfonctionnement participant ainsi au développement de l’insulino-résistance. Cette inflammation est due à une infiltration et une activation de différentes cellules immunitaires dans le tissu adipeux, dont des macrophages. Les acides gras saturés et le LPS participent à l’activation des cellules immunitaires conduisant ainsi à la production de cytokines inflammatoires, tous ces facteurs étant impliqués dans le dysfonctionnement du tissu adipeux et dans l’insulino-résistance. La kinase inflammatoire Tpl2 activée par le LPS et les cytokines, a récemment été identifiée comme une nouvelle kinase dont l’expression est augmentée dans le tissu d’obèses. Son rôle dans l’inflammation de ce tissu et dans la résistance à l’insuline est donc un axe de recherche majeur dans la recherche de nouvelles cibles thérapeutiques pour le traitement de l’obésité et des complications métaboliques qui lui sont associées. Nos résultats impliquent Tpl2 dans les effets délétères des macrophages activés par les acides gras ou le LPS sur la biologie des adipocytes. De même, l’inhibition pharmacologique de Tpl2 ou l’utilisation d’ARN interfèrent altère le potentiel chimiotactique du sécrétome d’adipocytes vis-à-vis des macrophages. Nos résultats indiquent que la kinase Tpl2 est activée par l’hypoxie dans les adipocytes et les macrophages, et que son inhibition entraîne une réduction de l’expression et de la production de facteurs inflammatoires. Ces études permettent de proposer Tpl2 comme cible thérapeutique potentielle dans le traitement de l’obésité et du diabète. / During obesity a chronic low grade inflammation is developed in adipose tissue and contributes to its malfunction and participating in the development of insulin resistance. This inflammation is due to the infiltration and activation of various immune cells in adipose tissue, such as macrophages. Saturated fatty acids and LPS are involved in immune cell activation and leading to the production of inflammatory cytokines, all of which are involved in the malfunction of adipose tissue and insulin resistance. The inflammatory TPL2 kinase activated by LPS and cytokines, has recently been identified as a novel kinase, whose expression is increased in obese tissue. Its role in the inflammation of this tissue and in the insulin resistance is a major area of research in the search for new therapeutic targets for the treatment of obesity and metabolic complications associated. Our results suggested that TPL2 is involved in the deleterious effects of macrophages activated by fatty acids or LPS on the biology of adipocytes. Similarly, the pharmacological inhibition of TPL2 or use of interfering RNA impairs chemotactic potential secretome of adipocytes versus the macrophages. Our results indicate that the TPL2 kinase is activated by hypoxia in adipocytes and macrophages, and its inhibition leads to a reduction of the expression and production of inflammatory factors. These studies suggested thatTPL2 is a potential therapeutic target in the treatment of obesity and diabetes.

Introduction : Linflammation intervient à tous les stades dans la pathogénie de l'athérosclérose. Initialement, la maladie est caractérisée par une dysfonction endothéliale favorisée par les facteurs de risque cardiovasculaires classiques, des forces hémodynamiques anormales, et des substances vasoactives. A la faveur de cette dysfonction, des processus inflammatoires participent à la formation de la plaque dathérosclérose (1).Les lipoprotéines de basse densité pénètrent dans l'intima artérielle et subissent des modifications chimiques oxydatives responsables de réactions inflammatoires secondaires via la transcription nucléaire du facteur B. Des monocytes circulants activés adhèrent ensuite à la surface endothéliale, la traversent et se différencient en macrophages (activation via l'expression de molécules d'adhésion à la surface endothéliale : VCAM-1 et ICAM-1, qui lient des ligands de la famille des intégrines présents sur la membrane des leucocytes ; sélectines E et P). Cette migration subendothéliale est favorisée par la présence de chémoattractants. Les macrophages se transforment en cellules spumeuses en phagocytant les LDL oxydées via des récepteurs "scavengers". Les lipides d'abord intracellulaires vont devenir extracellulaires et se regrouper pour former un amas appelé le cur lipidique. Des lymphocytes T activés sont aussi présents et interagissent avec les macrophages, entretenant une réaction inflammatoire chronique qui favorise la croissance de la plaque. La plaque adulte est composée d'une chape fibro-musculaire (cellules musculaires lisses, protéines de matrice extracellulaire) séparant le coeur lipidique de la lumière artérielle. Au début, la croissance de la plaque nimplique pas obligatoirement une réduction de la lumière, laugmentation du volume de la plaque dans la paroi étant compensée par une majoration de la taille du vaisseau (remodelage positif). Des cytokines pro-inflammatoires (TNF-, interleukines 1, ...) induisent l'expression de métalloprotéinases par les cellules de la plaque ce qui conduit à sa fragilisation. Dautres cytokines ont des propriétés anti-inflammatoires et l'activité des métalloprotéinases peut être neutralisée par des inhibiteurs spécifiques naturels (TIMP-1, TIMP-2). La stabilité de la plaque résulte donc déquilibres complexes encore imparfaitement compris. La rupture de la plaque est le point de départ de l'évolution thrombotique dont l'importance est variable mais il est vraisemblable que certaines érosions ou ruptures n'entraînent pas de thrombose, favorisant par contre la croissance de la plaque. Activation inflammatoire induite par l'angioplastie dans les syndromes coronariens stables et instables, influence des dommages myocardiques : La CRP ultrasensible (CRPus) possède un pouvoir prédictif de complications chez les patients atteints d'infarctus aigu du myocarde, d'angor stable ou instable. L'origine de cette inflammation est incertaine : réaction inflammatoire au sein même de la plaque ? embolisation a partir d'une plaque friable avec nécrose infra-clinique ? Nous avons donc étudié l'influence pronostique des marqueurs inflammatoires mesurés avant et après l'angioplastie (ACP) et leur relation avec les marqueurs spécifiques de dommage myocardique (troponines). 200 patients (39 à 85 ans) traités par ACP avec ou sans stent entre 01/97 et 05/99 furent étudiés et suivis afin de dépister la survenue de complications. 20% des patients présentaient avant lACP une CRP us > à 6 mg/l. Après ACP, les taux de CRP us > à 6 mg/l et à 12 mg/l étaient respectivement de 40,8 % et 26,4%. Avant lACP, tous les patients présentaient une valeur de troponine I normale alors qu'après lACP, 10,6 % avaient une troponine I > à 5µg/l. Durant le suivi moyen de 38 mois, nous avons recensé 52 événements cardiovasculaires majeurs : 9 décès, 12 infarctus, 5 pontages aorto-coronaire, 26 resténoses, 13 ACP sur une autre lésion que celle traitée initialement. En analyse multivariée, étaient prédictifs de complication : la troponine I après ACP, la CRP us après ACP, les antécédents d'hypertension artérielle et dACP préalable (p<0.05). Nous avons évalué une association entre entre la CRP us après ACP et l'élévation de troponine. Le test t de Student montrait une différence moyenne entre les taux de CRP us pré- et post-ACP de 3,75 mg/l chez les patients avec troponine < à 5µg/l après ACP et de 6,85 mg/l chez ceux avec troponine >5µg/l (p < 0,02). Dans cette étude, l'inflammation et lembolisation après ACP sont prédictives d'événements cardiovasculaires à moyen terme le. L'association entre la CRP us et la troponine après ACP suggère un lien entre ces 2 marqueurs, les patients présentant une inflammation accrue courant un risque supérieur dembolisations péri-procédurales, ce qui pourrait expliquer leur pronostic moins favorable (2). Impact pronostique à long terme de l'activation inflammatoire dans les syndromes coronariens stables Limportance pronostique de la CRP us dans l'angor stable n'est pas établie; la plupart des études préalables évaluaient le court terme or les événements plus tardifs reflètent plus la progression de l'athérosclérose qu'une complication de l'angioplastie à proprement parler. Nous avons donc analysé l'impact pronostique à long terme de la CRP us avant et après ACP et l'influence de l'amplitude de lélévation de ce marqueur sur le devenir à long terme des patients dilatés pour un angor stable. Entre 08/98 et 05/99, 89 patients traités pour un angor stable furent inclus prospectivement et suivis pendant 6 ans. La CRP us moyenne était de 3,35 mg/l avant ACP et de 8,69 mg/l après. La plupart des patients présentait une élévation de ce paramètre ( CRP moyen = 5,34 mg/l ; ≥ à 3 mg/l chez 43 patients). Nous n'avons pas retrouvé de corrélation entre une élévation de CRP > à 3 mg/l et une élévation de troponine T >0,01µg/l. Durant le suivi, 38 patients ont présenté une complication cardiovasculaire (3 décès, 6 infarctus, 6 pontages, 12 ACP sur une autre lésion que celle traitée initialement, 11 resténoses). On notait un taux supérieur d'événements chez les patients présentant une  CRP > à 3 mg/l à la fois à un an de suivi (18 vs 2,2 %; p < 0,001) et à 6,6 ans (39,3 vs 3,4 %; p < 0,001).En analyse multivariée, les paramètres prédictifs indépendants étaient un antécédent d'infarctus du myocarde préalable, une  troponine T > à 0,01µg/l et une  CRP > à 3 mg/l (p = 0, 004, p = 0,013 et p = 0,004 respectivement).L'élévation de CRP us > 3 mg/l après ACP présentait une valeur prédictive d'événements cardiovasculaires supérieure à celle de la CRP us, considérée isolément avant ou après ACP. Donc, bien que le niveau inflammatoire basal soit important, lindice prédictif de complication le plus puissant est l'augmentation de ce marqueur induit par langioplastie. Une élévation importante de CRP ultrasensible après ACP chez certains patients pourrait refléter l'hyperréactivité de leur système inflammatoire aux agressions vasculaires. Une telle hyperréactivité pourrait être un marqueur de progression de l'athérosclérose et/ou d'instabilité clinique future (3). Activation neutrophilique dans les syndromes coronariens instables Nous avons évalué l'existence dune activation des polynucléaires secondaires à une angioplastie avec pose simultanée dune endoprothèse (stenting direct) au niveau d'une lésion responsable d'un syndrome coronarien instable. Nous avons aussi mesuré, la libération de cytokines associée. L'activation des polynucléaires a été évaluée par la mesure des taux de myéloperoxydase (MPO), de lactoferrine (LCF) et d'élastase.Vingt patients en angor instable furent étudiés (19 hommes; âge moyen : 53,9 ± 12,1 ans). Ils furent séparés en 2 groupes : groupe A : 15 patients traités par stenting direct de la lésion responsable ; groupe B : 5 patients n'ayant pas subi de revascularisation. Des prélèvements biologiques étaient réalisés chez les patients après l'insertion de l'introducteur fémoral (T0), 30après lACP ou après la procédure diagnostique (T1), puis 30 minutes, 3, 6, 12 et 24 heures après (T2 à T6). Les deux groupes étaient comparables du point de vue clinique et angiographique. Dans le groupe contrôle, aucune variation ne fut observée pour les dosages de MPO et de LCF. Dans le groupe A, une augmentation plasmatique du niveau de MPO fut observée immédiatement après l'angioplastie (p = 0,0009 à T1 vs T0; p < 0,0001 à T2 vs T0; p = 0,008 pour T3 vs T0). Pour la LCF, l'élévation était similaire (p = 0,004 pour T1 vs T0 et pour T2 vs T0). Des différences significatives furent observées à T1, T2 et T3 entre les groupes A et B pour la MPO (p = 0,015; p = 0,005; p = 0,042 respectivement) et pour la LCF (p = 0,0001; p = 0,0005; p = 0,003 respectivement). Le test ANOVA démontrait une valeur de p < à 0,0001 pour la MPO et la LCF dans le groupe A. Pour l'élastase et le TNF-, nous n'avons pas observé de différence significative au sein des groupes et entre les groupes. Nous avons observé une élévation plasmatique de l'IL-6 dans les 2 groupes (test ANOVA : p= 0,0065 pour le groupe B et p< 0,0001 pour le groupe A). Pour la première fois, nous rapportons une élévation rapide et intense d'enzymes neutrophiliques spécifiques (MPO et LCF) après pose dun stent coronarien (4). Cette libération pourrait en partie être responsable de la libération secondaire de cytokines (IL-6, IL-12, IL-8, CRP us). Il reste à déterminer si ces phénomènes peuvent influencer le pronostic clinique ou représenter une cible thérapeutique. Activation neutrophilique dans les syndromes coronariens stables; comparaison avec les tableaux cliniques instables L'activation des polynucléaires neutrophiles est donc impliquée dans la physiopathologie des syndromes coronariens instables et est aussi observée après ACP. Les leucocytes activés relâchent de la MPO, un agent oxydant puissant dont l'activité entraîne la production de dérivés d'oxygène réactif. Cette enzyme est augmentée chez les patients présentant un syndrome coronarien aigu, plus particulièrement chez ceux qui vont présenter une évolution clinique défavorable. Actuellement, on ignore si la MPO intervient dans la rupture de plaque ou contribue directement aux lésions tissulaires. Elle favorise l'athérogenèse via la production de molécules pro-athérogènes (dérivés oxydés de l'oxyde nitrique par exemple) et en utilisant comme substrat l'oxyde nitrique qui lui est athéroprotecteur. Nous avons comparé l'expression des cytokines inflammatoires et l'activation leucocytaire induites par un direct stenting chez des patients en angor stable par rapport aux instables. Quinze patients (groupe A) en angor instable furent comparés à 11 patients (groupe B) en angor stable. Tous présentaient une seule lésion sévère cible, traitable par langioplastie et pose simultanée dun stent. Les échantillons sanguins furent prélevés comme décrit dans létude précédente. A l'exception d'un âge moyen supérieur dans le groupe B, tous les paramètres cliniques et biologiques étaient similaires dans les deux groupes. Dans le groupe A, une augmentation du niveau plasmatique de MPO fut observée immédiatement après la pose du stent avec une élévation parallèle de la LCF. Dans le groupe B, nous avons également observé une élévation de MPO et de LCF après l'intervention qui était néanmoins inférieure que dans le groupe A (ANOVA test : p < 0,001 à la fois pour la MPO et la LCF dans les deux groupes). Pour l'élastase, aucune différence significative ne fut observée entre les groupes. Les niveaux plasmatiques d'IL-8 et dIL-12 ne furent pas significativement affectés dans chacun des groupes mais leurs valeurs moyennes étaient supérieures chez les patients stables, bien que restant dans les limites de la normale (< 30pg/ml chez les patients normaux; n = 34). Nous avons également observé une élévation significative de lIL-6, 12 heures après l'intervention dans les 2 groupes. Le pic sérique de ces cytokines survenait néanmoins plus tard par rapport à la libération aiguë de MPO et de LCF. Cette observation souligne l'importante activation des neutrophiles après pose de stent, démontrant que la rupture mécanique d'une plaque d'athérosclérose par un stent, est rapidement suivie d'une libération denzymes spécifiques. Lactivation des polynucléaires neutrophiles est plus intense dans les syndromes coronariens aigus que dans les situations cliniques stables. Donc, parallèlement aux modifications des taux de MPO trans-cardiaque observées dans l'angor instable (reflétant l'inflammation généralisée de l'arbre coronaire), nous rapportons pour la première fois que le stenting coronarien a un effet direct sur lélévation de la MPO.(5) Conclusions : Nos travaux montre que : 1) Langioplastie coronaire est associée à une élévation des paramètres inflammatoires systémiques, limportance de ces manifestations inflammatoires possédant une signification pronostique. 2) Le niveau basal et lincrément secondaire des paramètres inflammatoires sont hautement prédictifs des évènements cardio-vasculaires futurs suggérant que la réactivité individuelle est déterminante. 3) Les neutrophiles par leurs enzymes spécifiques interviennent précocement dans la cascade inflammatoire induite. 4) Lintensité de la réponse est différente en fonction de la présentation clinique (Hyper-réactivité diffuse? Composition de la plaque?). Une meilleure compréhension de la pathogénie de linsuffisance coronarienne devrait permettre une meilleure stratification du risque impliquant une prise en charge thérapeutique maximalisée et le développement de stratégies thérapeutiques alternatives plus efficaces tant en prévention primaire que secondaire. Références : 1. Gach O, Piérard L, Legrand V. Inflammation and atherosclerosis. State of the Art in 2004-2005. Rev Med Liège 2005; 60: 235-241. 2. Gach O, Louis O, Martinez C, Legrand V. Impact of markers of myocardial damage and inflammation after PCI on late outcome. Heart 2002; 87. 3. Gach O, Legrand V, Biessaux Y, Chapelle JP, Vanbelle S, Pierard L. Long term prognostic significance of High-Sensitivity C-Reactive Protein before and after coronary angioplasty in patients with stable angina pectoris. Am J Cardiol, 2007, 99:31-35. 4. Gach O, Biemar C, Nys M , Deby-Dupont G, Chapelle JP, Deby C, Lamy M, Pierard LA, Legrand V. Early release of neutrophil markers of activation after direct stenting in patients with unstable angina. Coron Artery Dis 2005; 16: 59-65. 5. Gach O, Nys M, Deby-Dupont G, Chapelle JP, Lamy M, Piérard LA, Legrand V. Acute neutrophil activation in direct stenting: comparison of stable and unstable angina patients. Int J Cardiol. 2006; 112(1): 59-65.