Submitted by Eduarda Figueiredo (eduarda.ffigueiredo@ufpe.br) on 2015-03-12T14:19:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_oceanografia.pdf: 1445279 bytes, checksum: 3027171fff7f9f76800597b9c4f442b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T14:19:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação_oceanografia.pdf: 1445279 bytes, checksum: 3027171fff7f9f76800597b9c4f442b7 (MD5) Previous issue date: 2012-02 / CAPES / As microalgas estão dentre os organismos mais recomendados para avaliação de toxicidade aquática, pois fornecem informações sobre possíveis alterações qualitativas e quantitativas das populações, tornando-se importantes em monitoramento ambiental. Este estudo teve por objetivo avaliar a sensibilidade da microalga Thalassiosira weissflogii à possível toxicidade das águas do complexo portuário de Suape e ao dicromato de potássio durante os meses de julho, setembro e novembro de 2010 e janeiro e setembro de 2011, além de comparar com os resultados obtidos para o ouriço do mar Lytechinus variegatus. Os testes de toxicidade crônica para as duas espécies seguiram normas padronizadas, onde após o período de exposição, foi avaliado o crescimento populacional da microalga, através de dados de densidade celular e taxas de crescimento, tendo sido avaliado, também, o percentual de larvas pluteus de L. variegatus apresentando desenvolvimento normal e anômalo. Os resultados, baseados no crescimento algal e no percentual de pluteus, evidenciaram que a toxicidade nos pontos analisados variou de acordo com os meses. O estudo verificou que o melhor momento para encerramento do teste com a microalga T. weissflogii foi com 72 horas de exposição. Os resultados baseados na densidade celular da microalga, em 72 horas, foram eficientes para avaliação da toxicidade de amostras de águas superficiais e foram mais significativos do que para as taxas de crescimento. A microalga T. weissflogii demonstrou ser um organismo-teste sensível ao tóxico de referência. Setembro foi o mês mais comprometido, nos dois anos estudados.

A procura por suplementos alimentares cresce a cada ano, pois o seu uso contínuo promove a melhora e manutenção da qualidade de vida do hospedeiro. Sustentado neste princípio, a ingestão de produtos probióticos, principalmente leites fermentados, passa a ser uma alternativa neste segmento do mercado. Os probióticos são suplementos alimentares que contem microrganismos vivos que trazem benefícios à saúde do consumidor pela manutenção e melhora do balanço microbiano do trato gastrintestinal. Existem vários gêneros de microrganismos que apresentam propriedades probióticas, destacando-se o gênero Lactobacillus; que exercem várias funções benéficas ao hospedeiro como a diminuição dos níveis de colesterol sangüíneo, efeito anticarcinogênico, adesão ao epitélio intestinal, melhora do sistema imune e a exclusão competitiva, conhecida também como efeito barreira. Dentro deste contexto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de inibição exercido por cinco cepas de Lactobacillus isoladas de fezes humanas: denominadas L. plantrum (Lac-01), L. plantarum (Lac-02), L. fermentum (Lac-03), L. fermentum (Lac-04) e L. fermentum (Lac-05) sobre o crescimento de E. coli O157:H7, Listeria spp., P. aeruginosa ATCC 27853, Salmonella typhi e Shigella spp , por meio da técnica de co-cultura. Os resultados revelaram que as cepas Lac-01, Lac-02 e Lac-03 foram capazes de inibir, em diferentes níveis, o crescimento das cepas patogênicas avaliadas, sendo este efeito mais acentuado para S. typhi e Shigella spp. Observou-se ainda que a cepa Lac-04 não apresentou efeito de inibição sobre E. coli O157:H7 e P. aeruginosa, ao passo que a cepa Lac-05 inibiu o crescimento de P. aeruginosa, S. typhi e Shigella spp., sendo incapaz de inibir E. coli O157:H7 e Listeria spp, nas condições estudadas. Posteriormente ao se verificar a produção de substâncias antimicrobianas por meio do método \"spot-test\", observou-se o efeito positivo de inibição exercida pelas cepas de Lactobacillus sobre o crescimento dos respectivos patógenos. Verificou-se também, por meio de testes enzimáticos específicos, que as substâncias antimicrobianas produzidas pelas cepas de Lactobacillus não foram sensíveis às enzimas utilizadas, não podendo afirmar, desta forma, que estas substâncias são bacteriocinas. Os testes de co-agregação demonstraram que as cepas Lac-04 e Lac-05 exerceram melhor efeito sobre os patógenos, quando comparadas com as cepas Lac-01 e Lac-02. A cepa Lac-03 não exerceu efeito de coagregação com nenhum dos patógenos avaliados. Os testes de autoagregação revelaram que as cepas Lac-01, Lac-02, Lac-04 e Lac-05 exerceram efeito de autoagregação acentuado. Observou-se ainda que nenhum dos patógenos estudados foi capaz de autoagregar. / The probiotics are special food that contain live microorganisms that promote beneficits to consumer health through maintenance and improvement of microbial balance of gut tract. There are many microorganisms species used in probiotics products, standing out Lactobacillus species that produce many beneficies to consumer like decrease of blood cholesterol level, anti-carcinogenic effect, adhrence to intestinal epithelium, immune system stimulation and the competitive exclusion, also known as barrier effect. In this regard, the present work aimed to evaluate the inhibition effect exerted by five Lactobacillus strains, isolated from humam faeces: denominate, L. plantarum Lac-01, L. plantarum Lac-02, L. fermentum Lac-03, L. fermentum Lac-04 e L. fermentum Lac-05 on the gowth of E. coli O157:H7, Listeria spp., Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Salmonella typhi and Shigella spp., by means of coculture technique. The results showed that the strains Lac-01, Lac-02 and Lac-03, were able to inhibit, at different levels, the growth of pathogenic strains, and this effect was more accentuated on S. typhi and Shigella spp. It was also observed that the strain Lac-04 did not present inhibition effect on E. coli O157:H7 and P. aeruginosa ATCC 27853, and the Lac-05 inhibited the growth of P. aeruginosa, S. tyhpi and Shigella spp., and showed no effect on E. coli O157:H7 and Listeria spp. Afterwards, the production of antimicrobial substance was verified by means of \"spot-test\" method, showing the positive inhibition effect exerted by all Lactobacillus strains on the growth of the respective pathogens. By means of specific enzymatic test, the antimicrobial substances produced by lactobacillus strains were not sensible to the action of enzymes proteinase-K, papain and pepsin, but this is not enough to affirm that this substances are bacteriocins. The coaggregation test demonstrated that the strains Lac-04 and Lac-05 exerted better effect on the pathogens, when compared to strains Lac-01 and Lac-02. The strain Lac-03 did not coaggregate with any pathogenic strains. The autoaggregation test showed that the strain Lac-01, Lac-02, Lac-04 and Lac-05 exerted accentuated auto-aggregation effect. The studied pathogen was not able to autoaggregate.

A mastite é o processo inflamatório da glândula mamária que constitui uma doença comum no setor pecuário leiteiro, evidenciado principalmente durante o período de lactação de vacas leiteiras e, cujos principais agentes etiológicos são o Staphylococcus aureus, Streptococcus sp. e espécies de coliformes. Os protocolos de combate à mastite preconizam o uso de antibióticos, o que pode trazer riscos à saúde dos animais e humana. Dependendo do agente patogênico, esta estratégia é considerada frequentemente ineficiente e de alto custo, o que leva pesquisadores a buscarem alternativas à antibioticoterapia, testando princípios ativos homeopáticos, fitoterápicos e micro-organismos probióticos, que apresentam potencial como alternativa promissora para a terapia quimioterápica. As formulações contendo bactérias probióticas podem representar uma alternativa de baixo custo para o combate à mastite, com a vantagem de não estimular a resistência entre os patógenos. Desta forma, este estudo baseou-se na avaliação in vitro do potencial antimicrobiano de cepas de Lactobacillus frente a agentes patógenos causadores de mastite, bem como na avaliação in vivo da inocuidade de formulações contendo probióticos em vacas em lactação. Para tanto, 6 cepas de Lactobacillus, na forma isolada e na forma de pool foram avaliadas quanto à capacidade inibitória sobre Streptococcus agalactiae (cepas 1 e 2) por diferentes técnicas de difusão em ágar e co-cultura em meio líquido. A inibição pela técnica de co-cultura foi avaliada mediante determinação de células viáveis das cepas patogênicas por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR). De acordo com os resultados observados no estudo de inibição in vitro, foram preparadas formulações probióticas utilizando dois veículos diferentes, sendo uma emulsão (Formulação A) e outra utilizando um veículo de um medicamento comercial (Formulação B) adicionadas de células de Lactobacillus na forma isolada e na forma de pool. Estas formulações foram avaliadas quanto à inocuidade em 17 vacas separadas em grupos sob regime de 1 ordenha/dia (A e B1) e 2 ordenhas/dia (B2), mediante a aplicação das formulações A e B contendo 109 ou 106 células/dose. Ao longo do cada tratamento, foram avaliados parâmetros fisiológicos como temperatura do úbere, presença de hiperemia, inchaço e manifestação de dor, contagem de células somáticas (CCS), California Mastitis Test (CMT), bem como condutividade elétrica e aspecto do leite e avaliação microbiológica. O estudo de inibição em co-cultura mostrou que as cepas de Lactobacillus avaliadas inibiram o crescimento das cepas patogênicas, em níveis superiores a 75% após 72 horas de ensaio. Após 24 horas, os maiores níveis de inibição sobre S. agalactiae cepa 1 foram exercidos pelas cepas L. acidophilus ATCC 4356, L. fermentum ATCC 9338, com índices de inibição de 99,79% e 99,91%, respectivamente. Nas mesmas condições a inibição de S. agalactiae cepa 2 por L. acidophilus ATCC 4356 e L. delbrueckii UFV H2B20 foi de 86,7% e 79,5%, respectivamente. Estes resultados indicam o potencial de inibição das cepas de Lactobacillus estudadas sobre S. agalactiae causadora de mastite. Estudos de inocuidade demonstraram que as formulações probióticas (A e B) induziram reação inflamatória no úbere dos animais, confirmado pelo aumento significativo da condutividade elétrica do leite (CEL), CCS (p < 0,05), bem como do escore de CMT. As formulações testadas no presente estudo não se mostraram adequadas ao emprego terapêutico na cura da mastite, uma vez que no teste de inocuidade provocaram processos inflamatórios nas glândulas mamárias dos animais testados. / Bovine mastitis is a common disease in dairy farms, usually observed during lactation period in dairy cattle, whose main etiological agents are Staphylococcus aureus, Streptococcus sp. and coliform species. Current protocols of mastitis therapy include the use of antibiotics, which may represent serious risks for both animal and human health. Depending on the pathogen specie, this strategy is often considered ineffective and highly expensive, what stimulates scientists to search for alternative treatments, including homeopathic or phytotherapic drugs or probiotic microorganisms, which may be a good alternative to chemotherapeutic drugs. Formulations containing probiotic bacteria may represent a low-cost alternative for mastitis treatment. The present study aimed to assess in vitro ability of Lactobacillus strains to inhibit mastitis pathogens growth, as well as in vivo assessment of the safety of formulations containing probiotics in cows with predisposition or affected by mastitis. Thus, six Lactobacillus strains were evaluated on their inhibitory ability over Streptococcus agalactiae (strains 1 and 2) by techniques of agar diffusion and co-culture in liquid medium. The effectiveness of the co-culture was evaluated by enumerating viable pathogen cells through quantitative polymerase chain reaction (qPCR). According to the results of in vitro study, two formulations were prepared based on a probiotic emulsion (formula A) and a commercial matrix (formula B) containing Lactobacillus cells (isolated or pool). Safety tests for the formulations were performed in 17 cows, which were separated into two groups under 1 milking/day (A and B1) and another group submitted to 2 milkings/day (B2), through the application of preparation A or preparation B containing 109 or 106 cells/dose. In each treatment, every cow was assessed on physiological parameters including temperature, presence of hyperemia, swelling and pain, somatic cell count (SCC), electrical conductivity and aspect of milk (color and clots/lumps formation) and microbiological evaluation. The results of the inhibition studies in co-culture showed that all Lactobacillus strains inhibited the growth of pathogenic strains, in at least 75% after 72 h of test. The highest levels of inhibition of S. agalactiae strain 1 were performed by strains L. acidophilus ATCC 4356 and L. fermentum ATCC 9338, at level of 99.79% and 96.70% after 24h, respectively. For the same period, the inhibition of S. agalactiae strain 2 by L. acidophilus ATCC 4356 and L delbrueckii UFV H2B20 was 86.7 % and 79.5%, respectively. These results showed the potential of Lactobacillus strains studied concerning to the inhibition of mastitis caused by Streptococcus agalactiae. Safety studies showed that both formulations evaluated induced inflammatory response in the udder of the animals, what was confirmed by significant raise on electric conductivity and SCC (p < 0,05) and CMT scores on milk. All formulations were considered inappropriate to be used in mastitis therapeutics, once they failed at safety tests, inducing mastitis on tested animals.

As proteínas S100A8/A9 são expressas em diferentes tipos celulares e quando sozinhas ou complexadas e em baixas concentrações, promoveram proliferação, migração celular e formação de estruturas capilares. Por outro lado, quando em altas concentrações, esse complexo inibe o crescimento de diversos tipos de células tumorais murinas e humanas. Ainda, tanto a proteína S100A9 humana, quanto um peptídeo sintético idêntico a porção C-terminal da proteína S100A9 murina (pS100A9m) possuem efeitos antinociceptivo e imunorregulatório. Apesar dessas evidencias, até o momento não foi investigado o efeito do pS100A9m sobre a angiogênese e a tumorigênese. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar, in vitro, o efeito do pS100A9m sobre os eventos fundamentais envolvidos com a angiogênese e o desenvolvimento tumoral. Para tanto, a fim de avaliar o efeito do pS100A9m sobre a angiogênese foi utilizada a linhagem de células endoteliais tímicas murinas (tEnd.1) nos ensaios de proliferação, migração da célula endotelial em meio de cultura, avaliada nos modelos de wound healing e transwell ou migração em meio condicionado, obtido de células tumorais LLC WRC256, avaliada no modelo de transwell, ensaio de adesão (aos componentes de matriz, tais como o colágeno tipo I, fibronectina e laminina) e formação de tubos em matrigel tridimensional (3D). Para os estudos sobre o efeito do pS100A9m sobre as células tumorais, foi utilizada a linhagem de células LLC WRC256 para realização dos ensaios funcionais de proliferação, migração (wound healing) e adesão (sobre os componentes da matriz extracelular). Os resultados obtidos demonstraram que o pS100A9m inibe a proliferação, migração, adesão sobre os componentes de matriz e, consequentemente, a formação de estruturas capilares em matriz 3D. Em relação às células tumorais LLC WRC256, foi observada, novamente, a ação inibitória do pS100A9m sobre os eventos de proliferação e migração. Em relação à adesão, o peptídeo aumentou a capacidade de adesão das células tumorais sobre o colágeno tipo I e fibronectina, porém inibiu a adesão dessas células sobre laminina. Em conclusão, os dados aqui obtidos demonstram que o pS100A9m inibe in vitro os eventos fundamentais envolvidos com a angiogênese e com a progressão tumoral. Desta forma, o peptídeo da porção C-terminal da proteína S100A9 pode ser considerado uma nova ferramenta para o estudo da angiogênese e tumorigênese, além apresentar potencial para uma possível aplicação terapêutica nesses processos / The S100A8/A9 proteins are expressed in different cell types and alone or when complexed, and at low concentrations promoted proliferation, cell migration and formation of capillary structures. On the other hand, at higher concentrations, this compound inhibits the growth of many types of murine and human tumor cells. Moreover, both human S100A9 protein and a synthetic peptide identical to the C-terminal portion of murine S100A9 (mS100A9p) present antinociceptive and immunomodulatory effects. Despite these evidences, the effect of mS100A9p on angiogenesis and tumorigenesis has not been investigated. Therefore, the aim of this study was to investigate the in vitro effect of mS100A9p on crucial events involved in angiogenesis and tumor development. For this, in order to evaluate the effect of mS100A9p on angiogenesis was used the murine endothelial cell line derived from thymus hemangioma (tEnd.1) for proliferation assays, endothelial cell migration in the presence of culture medium (scratch wound healing and chemotaxis assays) or in conditioned medium prevenient from LLC WRC256 tumor cells (chemotaxis assays), adhesion assay (on extracellular matrix components, such as type I collagen, fibronectin and laminin) and tube like-structure formation in 3D matrix. For the analyzes of the effect of mS100A9p on tumor cells, the cell line LLC WRC256 was used to perform functional assays such as proliferation, migration (scratch wound healing model) and adhesion (on components of the extracellular matrix). The results showed that the mS100A9p inhibits the proliferation, migration and adhesion of endothelial cells to the matrix components and consequently the formation of capillary structures in 3D matrix. Regarding LLC WRC256 tumor cells, it was observed again the inhibitory action of the mS100A9p on proliferation and migration events. In relation to cellular adhesion, this peptide increased this parameter of tumor cells on type I collagen and fibronectin. However mS100A9p inhibited the adhesion of these cells on laminin. In conclusion, the data obtained show that the mS100A9p inhibits in vitro crucial events involved in angiogenesis and tumor progression. Thus, the C-terminal portion of murine S100A9 protein may be considered as a new tool for the study of tumorigenesis and angiogenesis besides presenting potential to a possible therapeutic application in these processes

As proteínas S100A8/A9 são expressas em diferentes tipos celulares e quando sozinhas ou complexadas e em baixas concentrações, promoveram proliferação, migração celular e formação de estruturas capilares. Por outro lado, quando em altas concentrações, esse complexo inibe o crescimento de diversos tipos de células tumorais murinas e humanas. Ainda, tanto a proteína S100A9 humana, quanto um peptídeo sintético idêntico a porção C-terminal da proteína S100A9 murina (pS100A9m) possuem efeitos antinociceptivo e imunorregulatório. Apesar dessas evidencias, até o momento não foi investigado o efeito do pS100A9m sobre a angiogênese e a tumorigênese. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar, in vitro, o efeito do pS100A9m sobre os eventos fundamentais envolvidos com a angiogênese e o desenvolvimento tumoral. Para tanto, a fim de avaliar o efeito do pS100A9m sobre a angiogênese foi utilizada a linhagem de células endoteliais tímicas murinas (tEnd.1) nos ensaios de proliferação, migração da célula endotelial em meio de cultura, avaliada nos modelos de wound healing e transwell ou migração em meio condicionado, obtido de células tumorais LLC WRC256, avaliada no modelo de transwell, ensaio de adesão (aos componentes de matriz, tais como o colágeno tipo I, fibronectina e laminina) e formação de tubos em matrigel tridimensional (3D). Para os estudos sobre o efeito do pS100A9m sobre as células tumorais, foi utilizada a linhagem de células LLC WRC256 para realização dos ensaios funcionais de proliferação, migração (wound healing) e adesão (sobre os componentes da matriz extracelular). Os resultados obtidos demonstraram que o pS100A9m inibe a proliferação, migração, adesão sobre os componentes de matriz e, consequentemente, a formação de estruturas capilares em matriz 3D. Em relação às células tumorais LLC WRC256, foi observada, novamente, a ação inibitória do pS100A9m sobre os eventos de proliferação e migração. Em relação à adesão, o peptídeo aumentou a capacidade de adesão das células tumorais sobre o colágeno tipo I e fibronectina, porém inibiu a adesão dessas células sobre laminina. Em conclusão, os dados aqui obtidos demonstram que o pS100A9m inibe in vitro os eventos fundamentais envolvidos com a angiogênese e com a progressão tumoral. Desta forma, o peptídeo da porção C-terminal da proteína S100A9 pode ser considerado uma nova ferramenta para o estudo da angiogênese e tumorigênese, além apresentar potencial para uma possível aplicação terapêutica nesses processos / The S100A8/A9 proteins are expressed in different cell types and alone or when complexed, and at low concentrations promoted proliferation, cell migration and formation of capillary structures. On the other hand, at higher concentrations, this compound inhibits the growth of many types of murine and human tumor cells. Moreover, both human S100A9 protein and a synthetic peptide identical to the C-terminal portion of murine S100A9 (mS100A9p) present antinociceptive and immunomodulatory effects. Despite these evidences, the effect of mS100A9p on angiogenesis and tumorigenesis has not been investigated. Therefore, the aim of this study was to investigate the in vitro effect of mS100A9p on crucial events involved in angiogenesis and tumor development. For this, in order to evaluate the effect of mS100A9p on angiogenesis was used the murine endothelial cell line derived from thymus hemangioma (tEnd.1) for proliferation assays, endothelial cell migration in the presence of culture medium (scratch wound healing and chemotaxis assays) or in conditioned medium prevenient from LLC WRC256 tumor cells (chemotaxis assays), adhesion assay (on extracellular matrix components, such as type I collagen, fibronectin and laminin) and tube like-structure formation in 3D matrix. For the analyzes of the effect of mS100A9p on tumor cells, the cell line LLC WRC256 was used to perform functional assays such as proliferation, migration (scratch wound healing model) and adhesion (on components of the extracellular matrix). The results showed that the mS100A9p inhibits the proliferation, migration and adhesion of endothelial cells to the matrix components and consequently the formation of capillary structures in 3D matrix. Regarding LLC WRC256 tumor cells, it was observed again the inhibitory action of the mS100A9p on proliferation and migration events. In relation to cellular adhesion, this peptide increased this parameter of tumor cells on type I collagen and fibronectin. However mS100A9p inhibited the adhesion of these cells on laminin. In conclusion, the data obtained show that the mS100A9p inhibits in vitro crucial events involved in angiogenesis and tumor progression. Thus, the C-terminal portion of murine S100A9 protein may be considered as a new tool for the study of tumorigenesis and angiogenesis besides presenting potential to a possible therapeutic application in these processes

A mastite é o processo inflamatório da glândula mamária que constitui uma doença comum no setor pecuário leiteiro, evidenciado principalmente durante o período de lactação de vacas leiteiras e, cujos principais agentes etiológicos são o Staphylococcus aureus, Streptococcus sp. e espécies de coliformes. Os protocolos de combate à mastite preconizam o uso de antibióticos, o que pode trazer riscos à saúde dos animais e humana. Dependendo do agente patogênico, esta estratégia é considerada frequentemente ineficiente e de alto custo, o que leva pesquisadores a buscarem alternativas à antibioticoterapia, testando princípios ativos homeopáticos, fitoterápicos e micro-organismos probióticos, que apresentam potencial como alternativa promissora para a terapia quimioterápica. As formulações contendo bactérias probióticas podem representar uma alternativa de baixo custo para o combate à mastite, com a vantagem de não estimular a resistência entre os patógenos. Desta forma, este estudo baseou-se na avaliação in vitro do potencial antimicrobiano de cepas de Lactobacillus frente a agentes patógenos causadores de mastite, bem como na avaliação in vivo da inocuidade de formulações contendo probióticos em vacas em lactação. Para tanto, 6 cepas de Lactobacillus, na forma isolada e na forma de pool foram avaliadas quanto à capacidade inibitória sobre Streptococcus agalactiae (cepas 1 e 2) por diferentes técnicas de difusão em ágar e co-cultura em meio líquido. A inibição pela técnica de co-cultura foi avaliada mediante determinação de células viáveis das cepas patogênicas por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (RT-qPCR). De acordo com os resultados observados no estudo de inibição in vitro, foram preparadas formulações probióticas utilizando dois veículos diferentes, sendo uma emulsão (Formulação A) e outra utilizando um veículo de um medicamento comercial (Formulação B) adicionadas de células de Lactobacillus na forma isolada e na forma de pool. Estas formulações foram avaliadas quanto à inocuidade em 17 vacas separadas em grupos sob regime de 1 ordenha/dia (A e B1) e 2 ordenhas/dia (B2), mediante a aplicação das formulações A e B contendo 109 ou 106 células/dose. Ao longo do cada tratamento, foram avaliados parâmetros fisiológicos como temperatura do úbere, presença de hiperemia, inchaço e manifestação de dor, contagem de células somáticas (CCS), California Mastitis Test (CMT), bem como condutividade elétrica e aspecto do leite e avaliação microbiológica. O estudo de inibição em co-cultura mostrou que as cepas de Lactobacillus avaliadas inibiram o crescimento das cepas patogênicas, em níveis superiores a 75% após 72 horas de ensaio. Após 24 horas, os maiores níveis de inibição sobre S. agalactiae cepa 1 foram exercidos pelas cepas L. acidophilus ATCC 4356, L. fermentum ATCC 9338, com índices de inibição de 99,79% e 99,91%, respectivamente. Nas mesmas condições a inibição de S. agalactiae cepa 2 por L. acidophilus ATCC 4356 e L. delbrueckii UFV H2B20 foi de 86,7% e 79,5%, respectivamente. Estes resultados indicam o potencial de inibição das cepas de Lactobacillus estudadas sobre S. agalactiae causadora de mastite. Estudos de inocuidade demonstraram que as formulações probióticas (A e B) induziram reação inflamatória no úbere dos animais, confirmado pelo aumento significativo da condutividade elétrica do leite (CEL), CCS (p < 0,05), bem como do escore de CMT. As formulações testadas no presente estudo não se mostraram adequadas ao emprego terapêutico na cura da mastite, uma vez que no teste de inocuidade provocaram processos inflamatórios nas glândulas mamárias dos animais testados. / Bovine mastitis is a common disease in dairy farms, usually observed during lactation period in dairy cattle, whose main etiological agents are Staphylococcus aureus, Streptococcus sp. and coliform species. Current protocols of mastitis therapy include the use of antibiotics, which may represent serious risks for both animal and human health. Depending on the pathogen specie, this strategy is often considered ineffective and highly expensive, what stimulates scientists to search for alternative treatments, including homeopathic or phytotherapic drugs or probiotic microorganisms, which may be a good alternative to chemotherapeutic drugs. Formulations containing probiotic bacteria may represent a low-cost alternative for mastitis treatment. The present study aimed to assess in vitro ability of Lactobacillus strains to inhibit mastitis pathogens growth, as well as in vivo assessment of the safety of formulations containing probiotics in cows with predisposition or affected by mastitis. Thus, six Lactobacillus strains were evaluated on their inhibitory ability over Streptococcus agalactiae (strains 1 and 2) by techniques of agar diffusion and co-culture in liquid medium. The effectiveness of the co-culture was evaluated by enumerating viable pathogen cells through quantitative polymerase chain reaction (qPCR). According to the results of in vitro study, two formulations were prepared based on a probiotic emulsion (formula A) and a commercial matrix (formula B) containing Lactobacillus cells (isolated or pool). Safety tests for the formulations were performed in 17 cows, which were separated into two groups under 1 milking/day (A and B1) and another group submitted to 2 milkings/day (B2), through the application of preparation A or preparation B containing 109 or 106 cells/dose. In each treatment, every cow was assessed on physiological parameters including temperature, presence of hyperemia, swelling and pain, somatic cell count (SCC), electrical conductivity and aspect of milk (color and clots/lumps formation) and microbiological evaluation. The results of the inhibition studies in co-culture showed that all Lactobacillus strains inhibited the growth of pathogenic strains, in at least 75% after 72 h of test. The highest levels of inhibition of S. agalactiae strain 1 were performed by strains L. acidophilus ATCC 4356 and L. fermentum ATCC 9338, at level of 99.79% and 96.70% after 24h, respectively. For the same period, the inhibition of S. agalactiae strain 2 by L. acidophilus ATCC 4356 and L delbrueckii UFV H2B20 was 86.7 % and 79.5%, respectively. These results showed the potential of Lactobacillus strains studied concerning to the inhibition of mastitis caused by Streptococcus agalactiae. Safety studies showed that both formulations evaluated induced inflammatory response in the udder of the animals, what was confirmed by significant raise on electric conductivity and SCC (p < 0,05) and CMT scores on milk. All formulations were considered inappropriate to be used in mastitis therapeutics, once they failed at safety tests, inducing mastitis on tested animals.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-09T19:40:42Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 151397 bytes, checksum: 519b67c765e61f265cc494c9a79c87b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-09T19:40:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 151397 bytes, checksum: 519b67c765e61f265cc494c9a79c87b7 (MD5) Previous issue date: 2000-08-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A inibição de Listeria monocytogenes e Staphylococcus aureus por 51 linhagens de bactérias do ácido láctico isoladas de salame tipo italiano foi estudada. Algumas linhagens que demonstraram atividade inibitória quando cultivadas em superfície de ágar não tiveram este resultado confirmado em meio líquido. Para a maioria das linhagens, ácido láctico e peróxido de hidrogênio foram as substâncias inibidoras produzidas. No entanto, os sobrenadantes das culturas de várias linhagens conservaram a atividade inibitória mesmo após a neutralização do ácido e o tratamento com catalase. Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris ID8.5, Lactobacillus mali PR3.1 e quatro linhagens ainda não identificadas, PD4.7, PD1.5, ID3.1, e ID3.2, tiveram as atividades inibitórias suspensas por proteases. A purificação parcial das proteínas dos sobrenadantes das culturas mostra a presença de frações protéicas inibidoras com massas moleculares maiores que 100KDa e entre 30 e 100KDa. / Inhibition of Listeria monocytogenes and Staphylococcus aureus by 51 strains of lactic acid bacteria isolated from Italian type fermented sausage was studied. Some of the strains that displayed inhibitory activity when grown on agar plates did not reproduce the results when grown in liquid media. For most strains, lactic acid and hydrogen peroxide production could account for the inhibitory activity, however, the supernatants of some strains retained activity after neutralization and treatament with catalase. One strain identified as Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris ID8.5, one identified as Lactobacillus mali PR3.1 and four unidentified strains (PD4.7, PD1.5, ID3.1 and ID3.2) had their inhibitory activities suspended by proteases. Partial purification of the proteins from the growth media supernatants shows that inhibitory proteins of MW > 100KDa and between 30 and 100 KDa are present.

CARNEIRO, Victor Alves. Inibição de formação de biofilme bacteriano através de lectinas vegetais. 2007. 89 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2007. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-15T13:40:45Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_vacarneiro.pdf: 1083928 bytes, checksum: e8c87c7ccb243cae82022d5153e98560 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:25:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_vacarneiro.pdf: 1083928 bytes, checksum: e8c87c7ccb243cae82022d5153e98560 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:25:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_vacarneiro.pdf: 1083928 bytes, checksum: e8c87c7ccb243cae82022d5153e98560 (MD5) Previous issue date: 2007 / Natural and complementary medicine, especially phytotherapy, is becoming more and more useful to fulfill the needs of great part of the population when it comes to oral health, particularly in the developing countries. Among the phytotherapics, lectins may be valuable as anti-plaque and antimicrobial agents, since they can be intimately related with inference in biofilm formation, given that these proteins recognize carbohydrates in a specific and reversible way. Within that context, this study aimed to test the ability of five lectins (extracted from Canavalia ensiformis, Canavalia maritima, Cymbosema roseum, Acacia farnesiana and Hypnea cervicornis) in inhibiting the formation of biofilm and killing oral microorganisms(Streptococcus sanguis ATCC10556 e S. mutans UA159). The antimicrobial activity of the five lectins tested was determined by the convetional test of microdilution in polystyrene plaques. The lectin concentrations assayed against the microorganisms varied from 2mg/mL to 31. 5μ g/mL. To evaluate the adherence, a semi -quantitative assay was perfomed within microtitulation plaques (96 wells), to where were added 100μL of each lectin, and then 100μL of bacterial suspension (108 CFU/mL). This material was incubated in 10% CO 2 atmosphere at 37ºC. Adherence was revealed and quantified by violet crystal staining. Absorption of violet crystal was determined by spectophotometry (595nm). Only ConA presented bactericide or bacteriostatic activity against the strains tested. The assay of inhibition of biofilm formation revealed that almost all lectins had this kind of activity, reducing the adherence in a significant way (p<0.05). ConA had no effect on the formation of biofilm for any bacteria tested. / A medicina natural e complementar, especialmente a fitoterapia, se torna cada vez mais utilizada no combate as necessidades de grande parte da população em saúde bucal, particularmente nos países em desenvolvimento. Dentre os fitoterápicos, as lectinas podem ter um valor como agentes antiplaca e antimicrobianos, uma vez que podem estar intimamente relacionadas com a interferência da formação do biofilme dos microrganismos, já que se tratam de proteínas que reconhece carboidratos de forma específica e reversível. O objetivo deste estudo foi testar in vitro a capacidade de inibição das lectinas isoladas das espécies de Canavalia ensiformis, Canavalia maritima, Cymbosema roseum, Acacia farnesiana e Hypnea cervicornis, na formação de biofilmes bacterianos e atividade antimicrobiana contra microrganismos orais (Streptococcus sanguis ATCC10556 e S. mutans UA159). A atividade antimicrobiana das cinco lectinas testadas foi determinada pelo teste convencional da microdiluição em placas de poliestireno, sendo testada as concentrações de 2mg/mL à 31,5μg/mL contra os microrganismos em estudo. Para avaliação de aderência foi feito um ensaio semiquantitativo de aderência em placas de microtitulação de poliestireno (96 poços), onde foi adicionado 100 μL de cada uma das lectinas, em seguida adicionada 100 μL de suspensão bacteriana (108 UFC/mL) e incubado a 37ºC em uma atmosfera de 10% de CO2. A aderência foi revelada e quantificada por tintura com cristal violeta. A absorção do cristal violeta foi determinada através da leitura no espectrofotômetro (595nm). Somente a lectina de ConA apresentou a atividade bactericida ou bacteriostática contra os microorganismos estudados. No teste de inibição da formação do biofilme, todas as lectinas testadas foram favoráveis na inibição, reduzindo significativamente a aderência (p< 0,05). A lectina de ConA não teve ação sobre a formação do biofilme de nenhumas das bactérias testadas.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2015-10-29T18:00:03Z No. of bitstreams: 1 2015_PatríciaGrandizoliSaletti.pdf: 47057297 bytes, checksum: f3315f28ce8b31713e5d97266adc91b6 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2015-12-20T16:34:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_PatríciaGrandizoliSaletti.pdf: 47057297 bytes, checksum: f3315f28ce8b31713e5d97266adc91b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-20T16:34:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_PatríciaGrandizoliSaletti.pdf: 47057297 bytes, checksum: f3315f28ce8b31713e5d97266adc91b6 (MD5) / O reflexo de sobressalto acústico é uma resposta primitiva de defesa dos animais após um estímulo sonoro intenso e repentino. Essa resposta é inibida quando um estímulo de baixa intensidade é apresentado previamente. A inibição por pré-pulso (IPP) da reposta de sobressalto é uma maneira de mensurar o filtro sensório-motor, mecanismo utilizado para filtrar o excesso de informação do meio. O teste de IPP é muito utilizado de forma experimental para testar déficits no filtro sensório-motor em modelos animais. Alguns transtornos neurológicos humanos apresentam danos na resposta de IPP, como por exemplo a esquizofrenia, devido a déficits no funcionamento do filtro sensório-motor comuns em pacientes com esse transtorno. Algumas drogas podem ser utilizadas para gerar efeitos esquizotípicos, como antagonistas de receptores glutamatérgicos NMDA. Sabe-se que essas drogas causam déficits no teste de IPP em roedores. Com a validação de um protocolo experimental que envolve a resposta de IPP é possível realizar testes de substâncias que provocam efeitos esquizotípicos, bem como substâncias que apresentam características antipsicóticas. Geralmente os animais utilizados como modelos de esquizofrenia são roedores e poucos estudos tem sido realizados para avaliar o efeito de substâncias no teste de IPP em primatas nãohumanos. Assim, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver um teste de IPP para ser utilizado em macacos-pregos (Sapajus spp.). Além disso, objetivou-se avaliar o papel do colículo superior na resposta de IPP e testar os efeitos de dois fármacos, a dizocilpina (MK-801) e o canabidiol na medida de IPP desses primatas. Para isso, esse trabalho foi dividido em dois estudos. O estudo 1 avaliou a resposta de IPP em oito macacos-pregos utilizando um protocolo experimental que mensura o movimento do corpo do animal. Após essa primeira análise, dois animais com lesão no colículo superior, dois animais submetidos à lesão fictícia e os oito macacos acima citados foram testados nesse protocolo para que fosse identificada alguma alteração na resposta de IPP. Os resultados do primeiro estudo mostraram que o gênero Sapajus segue o mesmo padrão de resposta de IPP que outros primatas não-humanos. Observamos que as intensidades de 115 dB e 80 dB foram suficientes para gerar sobressalto e inibir essa resposta, respectivamente. Além disso, observamos que o intervalo entre os dois estímulos apresentados que melhor inibiu a resposta de sobressalto foi o de 120 ms. Os animais com lesão no colículo superior apresentaram uma tendência a diminuição da IPP corroborando estudos realizados em roedores, que indicam participação dessa estrutura cerebral na via neural da IPP. O estudo 2 foi realizado para determinar os efeitos do MK 801 e do canabidiol na resposta de IPP em primatas não-humanos. Novamente, oito macacos-pregos foram submetidos ao teste após administrações das drogas. O MK-801 foi administrado em três diferentes doses (0,01; 0,02; 0,03 mg/kg) antes do teste de IPP. Após algumas semanas os animais foram submetidos ao teste após o tratamento com canabidiol também em três doses (15, 30, 60 mg/kg). Posteriormente, os animais receberam MK-801 por quatro semanas consecutivas e foram expostos ao teste de IPP. Na quarta semana, além do MK-801, os animais foram pré-tratados com canabidiol e submetidos ao teste de IPP. Os resultados do estudo 2 mostraram que a MK-801, na maior dose testada diminuiu a resposta de IPP nos macacos de forma aguda. Entretanto, ao contrário do que é observado em roedores, a administração repetida do MK-801, concomitantemente ao teste de IPP, gerou uma interação droga-treino que reverteu o efeito inicial gerado pelo MK-801. Devido a isso, não foi possível detectar efeito antipsicótico do canabidiol. Porém, corroborando estudos prévios realizados em roedores, o canabidiol isoladamente não alterou a resposta de IPP dos macacos-pregos. Concluímos assim, que animais do gênero Sapajus são bons modelos experimentais para o teste de IPP e que o MK-801 pode ser utilizado para gerar déficits de IPP de forma aguda nesses animais para avaliação de antipsicóticos. O processo de habituação observado nos animais indica que efeitos adversos do MK-801, como prejuízo no filtro sensório-motor, podem ser reduzidos pela tolerância e pela familiarização ao teste de IPP. Ademais foi possível identificar diferenças neurofarmacológicas entre roedores e primatas e a importância desses animais para pesquisas básicas e testes pré-clinicos. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The acoustic startle reflex is a primitive defense response in animals that occurs after an intense and sudden acoustic stimulus. This response can be inhibited when a low stimulus is presented previously. The prepulse inhibition (PPI) of the startle response is a useful way to measure sensorimotor gating mechanisms. This mechanism protects against an excess of information. PPI test is widely used experimentally to test deficits in sensorimotor gating in animal models. PPI deficits are commonly observed in some human neurological disorders, such as schizophrenia, due to damage in sensorimotor gating caused by cognitive deficits. Some drugs can be used to induce schizophrenic-like effects, such as NMDA receptor antagonists. These drugs induce deficits in PPI response in rodents. Validation of an experimental protocol on PPI response makes it possible to perform tests on substances that cause schizophrenic-like effects, as well as compounds with antipsychotic properties. Studies usually employ rodents as experimental models of schizophrenia and only few studies have been performed with nonhuman primates to test pharmacological effects in the PPI paradigm. Thus, the present study aimed to develop a PPI test to be applied in capuchin monkeys (Sapajus spp.) to evaluate the role of the superior colliculus in PPI response and test the effects of two drugs in these animals: dizocilpine (MK-801) and cannabidiol. Therefore, two studies were conducted. The first study characterized the PPI response of eight capuchin monkeys using a whole-body prepulse inhibition protocol. After that, two animals with superior colliculus (SC) lesion, two SC sham lesion and the eight monkeys cited above were tested to evaluate the role of this brain structure in the PPI response. Results showed that Sapajus follows the same PPI pattern as other nonhuman primates. The intensities of 115 dB and 80 dB were sufficient to induce a startle response and to inhibit this response, respectively. We also observed that 120 ms was the best interstimuli interval for PPI. Animals with superior colliculus lesion showed a downward tendency of PPI response, corroborating studies in rodents that indicate a participation of this brain structure in the neural pathway of PPI. The second study was conducted to determine the effects of MK-801 and cannabidiol on nonhuman primates’ PPI response. MK-801 was administered in three different doses (0.01; 0.02; 0.03 mg/kg) before the PPI assay. After a few weeks, the animals were submitted to PPI test after receiving cannabidiol also in three doses (15, 30, 60 mg/kg). Subsequently, animals received MK-801 during four consecutive weeks and were then exposed to the PPI test. On the fourth week, subjects were pre-treated with cannabidiol before the MK-801 administration and then the PPI test was performed. Results from the second study demonstrated that MK-801, at the dose of 0.03 mg/kg, decreased the PPI response of an acute administration. However, repeated administration of MK-801 throughout the PPI test induced a drug-training interaction that reversed the effects of MK- 801 on PPI disruption, unlike reports in rodents. As such it was not possible to detect an antipsychotic effect for cannabidiol. However, cannabidiol alone did not change the PPI response in the capuchin monkeys, corroborating previous studies in rodents. Therefore, we conclude that capuchin monkeys are useful experimental models to test PPI response. Moreover, MK-801 can be used to induce PPI deficits in this species. The habituation process observed in our study indicates that the adverse effects of MK-801, as sensorimotor gating impairments, may be reduced by MK-801 tolerance effect such as after familiarization with the PPI test. Furthermore, our results underscore neuropharmacological differences between rodents and nonhuman primates and the importance of primates in basic research and preclinical assays.

Dissertação (mestrado)-Universidade Federal do Rio Grande, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Ambientes Aquáticos Continentais, Instituto de Ciências Biológicas, 2012. / Submitted by Cristiane Gomides (cristiane_gomides@hotmail.com) on 2014-01-13T17:44:25Z No. of bitstreams: 1 0000010069.pdf: 1538365 bytes, checksum: c202c5228cc013b57b32fa76d75fad5d (MD5) / Approved for entry into archive by cristiane soares (krikasoares@live.com) on 2014-02-23T02:04:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 0000010069.pdf: 1538365 bytes, checksum: c202c5228cc013b57b32fa76d75fad5d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-23T02:04:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 0000010069.pdf: 1538365 bytes, checksum: c202c5228cc013b57b32fa76d75fad5d (MD5) Previous issue date: 2012 / A contaminação de ambientes aquáticos por compostos potencialmente tóxicos oriundos de atividades agrícolas é um problema que tem se agravado nos últimos anos. O tebuconazol é um fungicida amplamente usado na agricultura, frequentemente encontrado em águas naturais, inclusive no Rio Grande do Sul, e cuja toxicidade para o fitoplâncton não é conhecida. O objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade do tebuconazol em quatro espécies fitoplanctônicas dulcícolas subtropicais. Foram montadas culturas estanque em triplicata testando seis diferentes concentrações de tebuconazol (10; 100; 500; 1.000; 5.000 e 10.000 μg L-1) para Cosmarium depressum var. planctonicum, Desmodesmus communis, Pediastrum boryanum e Spondylosium pygmaeum, assim como um controle somente com a microalga, sem a adição do tebuconazol, para verificar o crescimento padrão. Os experimentos foram mantidos por 13 dias, nos quais foram realizadas amostragens diárias nos 4 primeiros dias e a cada 72 h até o final do experimento para a análise de crescimento (clorofila-a e densidade celular) e parâmetros toxicológicos. As quatro cepas apresentaram diferença significativa de crescimento em relação ao controle, para C. depressum var. planctonicum nas concentrações 5.000 e 10.000 μg L-1, D. communis e P. boryanum em 1.000, 5.000 e 10.000 μg L-1 e S. pygmaeum a partir de 500 μg L-1. A EC50 (concentração que inibe 50% do crescimento) foi de 3.616 μg L-1 para C. depressum var. planctonicum, 3.246 μg L-1 para D. communis, 3.863 μg L-1 para P. boryanum e 1.851 μg L-1 para S. pygmaeum, sendo o S. pygmaeum a cepa mais sensível. Para LOEC (concentração mais baixa com efeito observado) e NOEC (concentração mais alta sem efeito observado) S. pygmaeum também apresentou concentrações mais baixas, seguido de C. depressum var. planctonicum, D. communis e P. boryanum. / Public concern has increased regarding the uncontrolled use of pesticides, including fungicides. Tebuconazol is a broad-spectrum fungicide that is used worldwide; however, its toxicity to phytoplankton is unknown. This work aims to evaluate the tebuconazol influence on the growth of four subtropical freshwater phytoplanktonic strains. Experimental cultures of Cosmarium depressum var. planctonicum, Desmodesmus communis, Pediastrum boryanum and Spondylosium pygmaeum were prepared with six tebuconazol concentrations (10, 100, 500, 1.000, 5.000 and 10.000 μg L-1), besides a control that was also prepared to measure the regular growth of each microalgae. The cultures (triplicates) were maintained for 13 days to determine both the growth (cellular density and chlorophyll-a content) and toxicological parameters. Tebuconazol inhibited the growth of all phytoplanktonic strains when they were exposed to 5.000 and 10.000 μg L-1. D. communis and P. boryanum were also inhibited when exposed to 1.000 μg L-1, while S. pygmaeum was inhibited since 500 to 10.000 μg L-1. The calculated EC50 was 3.616 μg L-1 to C. depressum var. planctonicum, 3.246 μg L-1 to D. communis, 3.863 μg L-1 to P. boryanum and 1.851 μg L-1 to S. pygmaeum, that was the most sensible strain to tebuconazol. LOEC and NOEC were also lower to S. pygmaeum followed by C. depressum var. planctonicum, D. communis and P. boryanum.