Con el fin de conocer los efectos de la intoxicación aguda por una dosis subletal de micotoxina T-2 a 28 ratones ICR:CD1 (Grupo T) se les adminestró 10 mg de micotoxina T-2 por kg de peso vivo por intubación gástrica. Otro grupo similar (Grupo C) fue utilizado como control. Los animales se sacrificaron a las 8, 16, 24 y 48 HPA. Se obtubieron muestras de diversos órganos, las que se procesaron para estudios histopatológicos, ultraestructurales, lectinhistoquímicos e inmunohistoquímicos (métodos ABC y TUNEL). Se realizó el análisis estadístico (prueba de Fisher) del peso corporal y de los órganos, así como de las lesiones microscópicas y de los resultados del estudio lectinhistoquímico. Los resultados del estudio inmunohistoquímico (método TUNEL) se evaluaron mediante la pruebat de Student. La micotoxina T-2 causó alteraciones morfológicas celulares y subcelulares en estómago, intestino delgado y grueso, hígado, timo, bazo y linfonódulo mesentérico. Las lesiones más evidentes fueron la necrosis de las células epiteliales de las glándulas fúndicas del estómago y de las criptas del intestino con reducción del porcentaje de mitosis y la necrosis, apotosis y disminución en el número de células linfoides del timo, linfonudo mesentérico, bazo y placas de Peyer. Las lesiones más significativas se observaron a las 8 y 16 HPA en todos los órganos. Con excepción del timo, el resto de los órganos mostró una tendencia a la normalidad hacia el final del período experimental. No hubo diferencias en el patrón de afinidad a las lectinas entre los Grupos T y C. No se identificaron la micotoxina T-2 o sus derivados en los cortes de estómago, intestino, hígado y riñon mediante la técnica de ABC. El método TUNEL resultó útil en la identificación de células epiteliales apotóticas en los órganos del tracto gastrointestinal. En general, se observó un incremento en la tasa de apotosis a las 8 y 16 HPA, en correspondencia con los hallazgos histopatológicos. / To study the effects of acute toxicity by a sublethal dosis of T-2 mycotoxin, twenty eight ICR:CD-1 mice (T-Group) were administered orally with 10mg/kg body weight of T-2 toxin. Other similar grupof mice (C-Group) were used as a control. Mice were sacrificed at 8, 16, 24 and 48 hours post-administration (HPA). Samples from several organs were for histopathological, ultrastructural,lectinhistochemical and immunohistochemical studies. Body and organs weight, microscopic and lectinhistochemical finding were analyzed by statiscal methods (Fisher`s test). Immunohistochemical results (TUNEL method) were evaluated by Student`s t-test. T-2 mycotoxin induced histological and subcellular changes in stomach, small and large intestine, pancreas, liver, thymus, spleen and mesenteric lymphonode. The main lesions consisted in necrosis of epithelial cells of the fundic glands and intestinal crypts with a decrease of mitotic activity, and necrosis, apotosis and depletion of lymphonode, spleen and Peyer`s patches. All the organs showed the most significant lesions at 8 and 16 HAI. Most organs, except for the thymus, return almost to normal at the end of the experimental period. There were no specific in lectins expression of binding affinity between C and T Groups T-2 mycotoxin or derivates were not identified using ABC method. Epithelial apoptotic cell in the gastrointestinal tract were recogniced by the TUNEL method. Apoptotic index increaded at 8 and 16 HAL. This result was concurrent with histopathological findings.

El objetivo principal de esta tesis consiste en la obtención de anticuerpos recombinantes frente a los fungicidas azólicos tetraconazol, hexaconazol e imazalil, y su aplicación en la determinación de residuos de estos fungicidas en muestras agroalimentarias. Para ello, en primer lugar, se han aplicado técnicas de biología molecular para la obtención de los fragmentos recombinantes scFv (single chain fragment variable) a partir del material genético de hibridomas productores de anticuerpos monoclonales frente a los fungicidas tetraconazol, hexaconazol e imazalil. Posteriormente, dichos fragmentos se han expresado en sistemas bacterianos empleando vectores de expresión plasmídicos. Por otro lado, se ha optimizado un sistema de cribado y selección de colonias bacterianas productoras de fragmentos de anticuerpos recombinantes capaces de reconocer a los plaguicidas en estudio. Este sistema está basado en ELISAs simultáneos, competitivos y no competitivos, de la fracción soluble del anticuerpo recombinante. Finalmente, en el caso de los anticuerpos frente a hexaconazol e imazalil, se ha aplicado un protocolo de enriquecimiento cíclico denominado panning, basado en la tecnología de presentación de moléculas proteicas en la superficie de fagos (phage display). De este modo, se han obtenido anticuerpos recombinantes a partir de cada hibridoma productor de anticuerpos monoclonales. Cada anticuerpo recombinante se ha expresado tanto en su forma de proteína libre (scFv) como en forma de proteína de fusión (scFv-pIII). De igual modo, se han empleado técnicas de biología molecular para la generación de bibliotecas de fragmentos recombinantes scFv a partir del material genético de linfocitos de ratones inmunizados frente a cada uno de los tres fungicidas. En este caso, se han optimizado las condiciones tanto de la etapa de construcción de bibliotecas como del posterior proceso de enriquecimiento por panning. / Plana Andani, E. (2010). Selección y caracterización de anticuerpos recombinantes para fungicidas. Aplicación al desarrollo de técnicas inmunoanalíticas [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/8477 / Palancia

Los insecticidas organofosforados se utilizan como tratamientos fitosanitarios en el cultivo del olivar y debido a su solubilidad en las grasas, sus residuos tienden a concentrarse en el aceite. España es uno de los principales países productores y exportadores de aceite de oliva, por lo que mejorar su calidad y garantizar su seguridad alimentaria, es primordial para defender este producto. En esta Tesis se ha desarrollado un método para el cribado rápido y sensible de residuos de organofosforados en aceite de oliva virgen extra, con la menor manipulación posible de la muestra, de modo que sea aplicable en el propio campo y en las almazaras. Para ello, se han desarrollado inmunoensayos en formato ELISA para los plaguicidas organofosforados diazinón, fentión, malatión y clorpirifos, y se ha estudiado su especificidad y tolerancia a disolventes orgánicos. Conjuntamente, se ha puesto a punto un método rápido y sencillo de extracción de residuos de plaguicidas en aceite de oliva virgen extra basado en extracción líquido-líquido y limpieza en frío. Este procedimiento se ha aplicado a la determinación de residuos de los plaguicidas organofosforados objeto de estudio, sin más que realizar una dilución del extracto -que contiene los residuos de los cuatro plaguicidas- previa al análisis mediante los ELISAs desarrollados, y utilizando curvas de calibrado en la matriz. Los resultados obtenidos se han comparado con el método de referencia (GC-MS), alcanzándose buenas correlaciones. Esta metodología se ha aplicado también a otros aceites vegetales (orujo, maíz, girasol, soja) sin más que realizar la curva de calibrado en el mismo tipo de aceite que se desea analizar. Además, se han desarrollado inmunoensayos en membrana para el cribado de residuos de diazinón, fentión, malatión y clorpirifos en aceite de oliva utilizando la metodología ELIFA. Combinando la inmunofiltración y el protocolo de extracción previamente desarrollado para aceite de oliva, la detección visual de una t / Garcés García, M. (2008). Inmunoensayos rápidos para la determinación de residuos de plaguicidas organofosforados en aceite de oliva [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/2930 / Palancia