avaliar, em mulheres idosas, os efeitos agudos do tempo sentado prolongado (TSP) de 5 horas na curva glicêmica e insulinêmica e comparar com os efeitos de diferentes padrões de interrupção do TSP por meio de atividade física (AF), nestes mesmos marcadores. Materiais e Métodos: participaram do estudo mulheres, com idade >= 65 anos, não obesas e não diabéticas. As voluntárias realizaram uma pré-avaliação na qual foram analisadas variáveis clínicas, antropométricas e padrão de AF espontânea. Em seguida, foram propostas 4 diferentes fases de intervenção. 1) TSP: composto por 300 minutos ininterruptos na postura sentada; 2) Intensidade Leve e Curta Duração (ILCD): TSP interrompido a cada 20 minutos por 2 minutos de AF de baixa intensidade (50 a 60% da FC máx prevista para a idade); 3) Intensidade Moderada e Curta Duração (IMCD): TSP interrompido a cada 20 minutos por 2 minutos de AF de moderada intensidade (65 a 75% da FC máx prevista para a idade); 4) Intensidade Moderada e Longa Duração (IMLD): TSP interrompido a cada 75 minutos por 10 minutos de AF de moderada intensidade (65 a 75% da FC máx prevista para a idade). As áreas sob a curva (ASC) glicêmica e insulinêmica foram verificadas por meio de coleta seriada de sangue, após a ingestão de refeição padrão e calculada pelo método do trapézio. Para as comparações entre os grupos foi proposto o modelo de regressão linear com efeitos mistos e controlado para idade, peso e classificação de NAF. Resultados: 16 idosas da comunidade com média de 69,2 ± 4 anos participaram do estudo. Na fase pré-avaliação as voluntárias passaram cerca de 9 horas/dia em posturas sedentárias. O TSP foi a fase de intervenção que apresentou os maiores valores de ASC de glicemia e insulina (555,9 ± 75,4 mg / dl) e (220,1 ± 76,2 µIU/mL), respectivamente. As fases de interrupção do TSP apresentaram menores valores de ASC de glicemia (ILCD: 514,0 ± 55,1; IMCD: 531,7 ± 69,1; IMLD: 530,0 ± 45,5 mg/dl) e insulina (ILCD: 155,0 ± 53,1; IMCD: 169,5 ± 81,7; IMLD: 164,9 ± 54,4 µIU/mL) em comparação com a fase de TSP (p < 0,05). No entanto, quando comparadas entre si, não houve diferença entre as fases ILCD, IMCD e IMLD (p > 0,05). Conclusão: o TSP foi relacionado a piora dos níveis de glicemia e insulinemia, enquanto a interrupção por meio de AF de intensidade leve ou moderada, de curta ou longa duração mostraram-se potenciais estratégias de redução desses marcadores de risco cardiovascular. Nenhum padrão de interrupção mostrou-se significativamente superior ao outro, sendo interrupções de curta duração e leve intensidade eficazes na redução dos níveis da ASC glicêmica e insulinêmica. / assess the acute effects of uninterrupted sitting time compared to sitting interrupted by physical activity (PA) bouts (light and moderate intensity, short and long duration) in relation to blood glucose and insulin responses, in older women. Subjects and Methods: community- dwelling women aged >= 65 years, non-obese and non-diabetic. The volunteers performed a pre-evaluation in which clinical, anthropometric and spontaneous PA patterns were analysed. Four different phases of intervention were proposed. 1) Uninterrupted sitting: 300 minutes in sitting posture 2) Sitting + 2 min Light Breaks: sitting time break every 20 minutes for 2 minutes of low intensity PA (50 to 60% of predicted HR max for age). 3) Sitting + 2 min Moderate Breaks: sitting time break every 20 minutes for 2 minutes of moderate intensity PA (65 to 75% of predicted HR max for age).4) Sitting + 10 min Moderate Breaks: sitting time break every 75 minutes for 10 minutes of moderate intensity PA (65 to 75% of predicted HR max for age). The glucose and insulin area under curve were verified by serial blood collection after the ingestion of a standard meal. Results: 16 older women, aged 69 ± 4 years were evaluated. In the pre-evaluation phase the volunteers spent about 9 hours / day in sedentary postures. The participants had lower values of blood glucose AUC during interrupted sitting time (2 min light 514.0 ± 55.1 vs 2 min moderate 531.7 ± 69.1 vs 10 min moderate 530.0 ± 45.5 mg / dl) and of insulin AUC ( 2 min light 155.0 ± 53.1 vs 2 min moderate 169.5 ± 81.7 vs 10 min moderate 164.9 ± 54.4 ?UI / mL) when compared to the uninterrupted phase (555.9 ± 75.4 mg / dl, 220.1 ± 76.2) (p <0.05). There was no significant differences between the different interruption patterns physical (p > 0.05). Conclusion: Uninterrupted sitting was associated with worsening blood glucose and insulin response, while breaking up prolonged sitting by bouts of short or long duration, light or moderate intensity showed to be potential strategies for improving blood glucose and insulin responses to a meal. No interruption pattern was found to be better than other, with even short breaks of light intensity being effective in reducing blood glucose and insulin levels.

Generalitat Valenciana (GV-3117-95); Ministerio de Sanidad (FIS 94/0014-01, FIS 96/1994-01); Unión Europea (ERBSC1-CT920833)

Objetivamos identificar os efeitos celulares pelo qual o DHEA melhora a função das ilhotas pancreáticas. Ratos wistar com 12-14 meses de idade receberam uma única injeção subcutânea de DHEA (10mg.kg-1) ou veículo. Após uma semana, ilhotas pancreáticas foram isoladas para realização dos testes: secreção de insulina, respiração mitocondrial, oxidação de glicose, atividade da citrato sintase, fragmentação de DNA, expressão gênica e dosagem plasmáticas de hormônios esteróides sexuais. DHEA apresentou melhoria significativa na secreção de insulina. Notou-se um aumento na oxidação da glicose, respiração mitocondrial, atividade da citrato sintase, expressão do PCNA mRNA e reduzida apoptose. O uso de inibidores de receptores de andrógeno e estrógeno inibiu a secreção de insulina estimulada por glicose. Concluímos que o DHEA é capaz de melhorar a funcionalidade metabólica e reduzir o índice de apoptose da ilhota pancreática, melhorando a capacidade secretora, sendo este papel modulado, provavelmente, pela ligação do DHEA aos receptores de andrógenos e estrógenos. / We sought to identify the cellular effects by which DHEA improves pancreatic islets function. Male Wistar rats, 12-14 month-old, receive one subcutaneous injection of DHEA (10mg.kg-1) or vehicle. After a week, pancreatic islets from these animals were isolated and submitted to the following tests: insulin secretion, mitochondrial respiration, glucose oxidation, citrate synthase activity, DNA fragmentation, gene expression and the dosage of plasmatic steroid hormones. DHEA treatment resulted in significant improvement in insulin secretion. We observed an increase in glucose oxidation, mitochondrial respiration, citrate synthase activity, PCNA mRNA expression, and reduced apoptosis. Glucose-stimulated insulin secretion was inhibited by androgen and estrogen receptor inhibitors. We conclude that DHEA is capable of improving metabolic functionality and reduces apoptosis index in pancreatic islets, improving the secretory capacity stimulated by different secretagogues, with this being probably modulated by the binding of DHEA to androgen and estrogen receptors.

Foram utilizados quatro éguas, da raça brasileiro de hipismo, com idade aproximada de 24 meses, com peso médio de 500 Kg, em um delineamento experimental Quadrado Latino balanceado 4X4, com arranjo fatorial 2X2 dos tratamentos e medidas repetidas no tempo, sendo o primeiro fator dois concentrados, um somente peletizado (CT) e o outro peletizado com pré-extrusão do ingrediente milho (CM), e o segundo fator é constituído pela diferença na ordem de fornecimento do concentrado e do volumoso onde um o concentrado é fornecido às 7:00h e às 19:00h e o volumoso às 9:00h e às 21:00h (C7V9); e o outro o inverso (V7C9). Não houve efeito dos tratamentos na aceitabilidade, na digestibilidade aparente total da matéria seca (51,2; 54,5; 53,4; 58,2%) da matéria orgânica (54,1; 57,5; 56,1; 60,7%), do amido (98,2; 98,3; 98,2; 98,2%), da proteína bruta (65,6; 70,3; 68,9; 72,6%), da fibra em detergente neutro (42,5; 44,6; 42,9; 49,3%) e da fibra em detergente ácido (34,8; 37,3; 37,0; 42,3%), porém noto-se uma tendência de melhora para os fatores V7C9 e CM. A resposta glicêmica plasmática foi analisada pela área abaixo da curva de glicose com valores obtidos para CTC7V9 de 493,7; CTV7C9, 407,6; CMC7V9, 430,7 e CMV7C9, 387,8, porém não houve efeito do fator concentrado, já o fator sistema de alimentação sofreu diferença estatística com aumento para o sistema C7V9, o que demonstra uma curva menos acentuada para V7C9, demonstrando uma absorção mais uniforme da glicose. / Four mares had been used, of the race Brazilian of jumping, with approach age of 24 months, average weight of 500 kg, in balanced Latin Squared experimental delineation 4X4, with factorial arrangement 2X2 of the treatments and measures repeated in the time, being the first factor two concentrates, one only pelletized (CT) and the other pelletized with daily pay-drawing of the ingredient maize (CM), and as the factor is constituted by the difference in the order feeding the concentrate and the voluminous one where one the concentrate is feeded 7:00h and to 19:00h and voluminous 9:00h and 21:00h (C7V9); e the other the inverse one (V7C9). It did not have effect of the treatments in acceptability, in the total apparent digestibilidade of dry substance (51,2; 54,5; 53,4; 58,2%) of organic substance (54,1; 57,5; 56,1; 60,7%), of starch (98,2; 98,3; 98,2; 98,2%), of rude protein (65,6; 70,3; 68,9; 72,6%), of the fiber in neutral detergent (42,5; 44,6; 42,9; 49,3%) and of the fiber in acid detergent (34,8; 37,3; 37,0; 42,3%), however I notice a trend of improvement for factors V7C9 and cm. The plasmatic glucose it was analyzed by the area below of the glucose curve with values gotten for CTC7V9 of 493,7; CTV7C9, 407,6; CMC7V9, 430,7 and CMV7C9, 387,8, however did not have effect of the concentrated factor, already the factor feeding system suffered to difference statistics with increase for system C7V9, what it less demonstrates an accented curve for V7C9, demonstrating an absorption more uniform of the glucose.

A nutrição é o principal fator que interfere com o desempenho reprodutivo de mamíferos e vários metabólitos e hormônios, envolvidos no metabolismo energético, funcionam como sinalizadores para o eixo hipotálamo-hipófise-gonadal. O fato de a insulina ser o principal regulador da homeostase de glicose e exercer controle em diversas etapas do metabolismo de gorduras e proteínas, fez desse hormônio, ao longo do processo evolutivo, um modulador da reprodução. Neste estudo, no experimento 1, foi comparado o efeito da hiper e da hipoinsulinemia, no desempenho reprodutivo relacionado ao processo de superovulação em ovelhas. Para tanto foram utilizadas 27 ovelhas, distribuídas em 3 grupos: a) controle; b) grupo diabético (induzido pela aplicação I.V. de 50mg/kg de Alloxano); e c) grupo hiperinsulinêmico (suplementado com 1 UI/kg ao dia, S.C.). Todos os animais receberam um pessário vaginal, contendo 60 mg de medroxiprogesterona no D0 e foram superovulados, com 250UI de FSH em 6 aplicações, iniciadas no D10. No D12 aplicaram-se 250UI de eCG e 125 g de cloprostenol sódico. As ovelhas foram submetidas à monta natural e a colheita dos embriões foi realizada no sétimo dia após o início do estro. Em média, os teores de insulina medidos a partir da remoção dos pessários até a colheita dos embriões foram de 14,52±0,4 vs 10,18 ± 0,5 vs 20,05±0,9 UI/mL (P<0,01), respectivamente para os grupos controle, diabético e hiperinsulinêmico. Os valores para glicemia, medida no mesmo período, para os grupos controle, diabético e hiperinsulinêmico foram de 83,1±2,1 mg/dL vs 241,2±9,2 mg/dL vs 53,9±2,7 mg/dL (P<0,01), respectivamente. O grupo diabético apresentou menor produção de corpos lúteos que os animais controle e hiperinsulinêmicos (5 ±1,1 vs 10.3±1,9 e 11,3±1, P<0,01); pior qualidade do CL (IQCL de 2,3±0,3 vs 1.6±0,1 e 1.3±0,1, P<0,01), menor número de embriões (2.3±1.2 vs 7.9±1.97e 7.4±1.2, P<0,01), que por sua vez também foram de pior qualidade (IQE de 2.9±0.2 vs 2±0.1 e 1.7±0.1, P<0,01). De um modo geral, os animais hiperinsulinêmicos apresentaram desempenho reprodutivo semelhante aos do grupo controle; entretanto, embora o número de embriões colhidos não tenha sido estatísticamente diferente, os dados são sugestivos de que o estado de hiperinsulinemia pode favorecer o crescimento embrionário, acelerando seu desenvolvimento. Histologicamente, os CL do grupo diabético se apresentaram com hipotrofia das LLC, aumento no número de células apoptóticas por campo, quando comparados aos dos tratamentos controle e hiperinsulinêmico. Adicionalmente, no experimento 2, foram testadas formulações de nanopartículas de quitosana, para liberação sustentada de insulina, bem como permeação da mucosa gastrintestinal. A formulação de insulina nanoestruturada, sem proteção lipídica,administrada pela via SC, liberou 92,1 ± 3,01% da quantidade inicial de insulina, in vitro, porém o padrão desejado de liberação sustentada não foi atingido. No teste in vivo, a redução da glicemia foi apenas parcial (em média 60,8±3,2% em relação à linha de base). O sistema composto por nanopartículas incorporadas à matriz lipídica, no teste in vitro, liberou apenas 15,6 ± 4,9% da quantidade inicial. Entretanto, quando administrada pela via oral, no teste in vivo, reduziu, embora parcialmente, a glicemia de ovinos diabéticos alloxano induzidos (em média 79,88±4,3% em relação à linha de base). Concluiu-se, com base no experimento 1 que, na dose empregada, a insulina não foi capaz de produzir benefícios reprodutivos que justifiquem seu uso em protocolos de superovulação de ovelhas. As concentrações subfisiológicas de insulina, observadas nos animais diabéticos podem ser responsáveis por uma série de alterações metabólicas, que, em conjunto, comprometeram os índices de desempenho reprodutivo, relacionados ao processo de superovulação e induziram um quadro inicial de regressão de CL. Com isso, observou-se que o uso de ovelhas, como modelo animal, para estudo dos efeitos reprodutivos da insulina, foi satisfatório. Pela análise do experimento 2, concluiu-se que o sistema de nanopartículas revestidas por lipídios foi capaz de carrear a insulina, ao longo do trato digestivo de um ruminante, no teste in vivo, e compatibilizar sua permeação através da mucosa intestinal, mantendo a atividade biológica do hormônio, o que consiste em um fato inédito. / Nutrition is the main factor that interferes with the reproductive development of all mammals and many of the matobolites and hormones involved in the energetic metabolism work as signaling factors for the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The fact of insulin being the main regulator of glucose homeostasis and having control in various steps of fat and protein metabolism, has made this hormone, along the evolution process, a reproductive modulator. In the first experiment of this study, the effect of hyper and hypoinsulinemia were compared as to how it affects the reproductive performance related to superovulation in sheep. For this, 27 sheep were used, distributed in 3 groups a) control, b) diabetic group (induced by IV injection of 50mg/kg of Alloxan); and c) hyperinsulinemic group (supplemented with 1 UI/kg per day, SC). All animals received a vaginal pessary, containing 60 mg of medroxiprogesterone on D0 and were superovulated, with 250UI of FSH in 6 applications, starting on D10. On D12 250UI of eCG and 125 g of sodium cloprostenol were administered. The sheep were submitted to natural breeding and embryo collection was performed on the seventh day after the beginning of estrus. In average, the insulin levels recorded starting on the day of pessary removal until the day of embryo collection were 14,52±0,4 vs 10,18 ± 0,5 vs 20,05±0,9 UI/mL (P<0,01), respectively for the control, diabetic and hyperinsulinemic groups. The values for glycemia, measured during the same period, for the control, diabetic and hyperinsulinemic groups were 83,1±2,1 mg/dL vs 241,2±9,2 mg/dL vs 53,9±2,7 mg/dL (P<0,01), respectively. The diabetic group showed less corpus lutea production than the control and hyperinsulinemic groups (5 ±1,1 vs 10.3±1,9 and 11,3±1, P<0,01); worse CL quality (IQCL de 2,3±0,3 vs 1.6±0,1 and 1.3±0,1, P<0,01), less number of embryos (2.3±1.2 vs 7.9±1.97 and 7.4±1.2, P<0,01), which by its turn were also of worse quality (IQE de 2.9±0.2 vs 2±0.1 and 1.7±0.1, P<0,01). Overall, hyperinsulinemic animals presented a reproductive performance similar to the control group; however, although the number of embryos recovered were not statiscally different, the data suggest that the state of hyperinsulinemy can favor embryo growth, acceleratting its development. Histologically, the CLs from the diabetic group showed hypotrophy of LLC and an increase in the number of apoptotic cells per field when compared to the control and hyperinsulinemic treatments. In addiction, the second experiment, chitosan nanoparticles formulations were tested, for sustained release of insulin as well as gastrointestinal mucosal permeability. The nanostructured insulin formulation without lipid protection, administered SC, released 92,1 ± 3,01% of the initial insulin amount, in vitro, however, the desired standard for sustained release was not reached. In the in vivo test, the reduction in glycemia was only partial (on average 60,8±3,2% in relation to base line ). In the in vitro test, the system made up of nanoparticles incorporated to the lipid matrix, released only 15,6 ± 4,9% of the initial amount. However, when administered orally, in the in vivo test, it reduced, although only partially, the glycemia of the alloxan induced diabetic ovines (on average 79,88±4,3% in relation to base line). In conclusion, based on the first experiment, the applied insulin dose was not able to produce any reproductive benefits that may justify its use in sheep superovulation protocols. The sub-physiologic insulin concentrations observed in the diabetic animals may be responsable for various metabolic alterations, that together compromised the reproductive performance levels related to the superovulation process and induced an initial state of CL regression. With that, it was noticed that the use of sheep as an animal model for the study of the effects of insulin on reproduction was satisfatory. By analyzing the second experiment, it was concluded that the nanoparticles system coated with lipids was able to carry insulin along the ruminant digestive during the in vivo test, show permeability through the intestinal mucosa, maintaining the hormone biologic activity, which is a new and unpublished fact.

Sepse e choque séptico são causas frequentes de morte nas unidades de terapia intensiva, sendo responsável pelo alto custo global de internação, segundo DATA-SUS. Sabendo-se que o paciente diabético apresenta um maior risco de infecção e que 22% dos indivíduos com sepse apresentam diabetes, é de extrema importância o melhor entendimento da sua fisiopatologia no paciente diabético para que medidas intervencionistas sejam desenvolvidas, preservando vidas. O projeto buscou avaliar a sepse experimentalmente através do modelo de ligadura e perfuração do ceco (CLP - 2 perfurações) em ratos Wistar machos sadios e tornados diabéticos através da injeção endovenosa de aloxana (42 mg/kg, i.v., 10 dias). Além disso, buscamos avaliar se o tratamento com insulina alteraria as variáveis escolhidas. O trabalho avaliou parâmetros hematológicos e bioquímicos como uréia, creatinina, alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST) e fosfatase alcalina (FAL). Após 6 horas da realização da CLP foram coletados lavados broncoalveolares (LBA) e peritoneal (LPe) com o objetivo de estudar o perfil de citocinas através da dosagem das interleucinas (IL)-1&#946;, IL-6, IL-10, fator de necrose tumoral (TNF)-&#945; e cytokine-induced neutrophill chemoattractant (CINC)-1 e CINC-2, celularidade total e específica. Rim, pulmão e fígado foram coletados para análises morfológicas e da atividade da mieloperoxidase (MPO). Após 6 horas de CLP observamos que a hematimetria, hemoglobina, plaquetometria e celularidade do LBA não sofreram alterações nem após o tratamento com insulina. A sepse provocou diminuição da leucometria total nos animais diabéticos e controles, aumento da celularidade total do LPe com um predomínio de polimorfonucleares, que foi semelhante em ambos os grupos; aumento da concentração no LPe de IL-1&#946;, IL-6, CINC-1, CINC-2 e IL-10; as concentrações do TNF-&#945; permaneceram idênticas em ambos os grupos. Em relação aos marcadores hepáticos, foram observados que os animais diabéticos possuem os maiores valores de ALT, AST e FAL em relação ao grupo controle e já apresentavam uma disfunção morfológica de hepatócitos, porém, sem infiltrado neutrofílico. O tratamento com insulina reduziu os valores dessas enzimas em níveis próximos aos do controle. Dos marcadores renais, apenas a uréia sofreu aumento significativo nos animais diabéticos em relação aos controles, sendo exacerbada pela CLP. Alterações glomerulares, como capilares dilatados e redução do espaço de Bowman foram observadas nos animais com sepse, os quais não sofreram influência após o tratamento com insulina. Estes dados sugerem que a insulina teve um efeito hepato-protetor e que o padrão causado pela sepse nos animais controles e diabéticos não foi modificado pelo tratamento com insulina. / Sepsis and septic shock are common cause of death in intensive care units (ICU) and according to Brazilian DATA-SUS is one of the major causes of high cost hospitalization. Since diabetic patients have a higher risk of infection and represent approximately 22% of all the septic individuals, it is extremely important to understand the pathophysiology of sepsis in diabetic patients in order to develop interventional measure. The objective of this study is to evaluate the experimental sepsis model by cecal ligation and puncture (CLP 2 punctures) in Wistar healthy males rendered diabetic by intravenous injection of alloxan (42 mg/kg, i.v., 10 days). The study analyzed hematological and biochemical parameters such as urea, creatinine, alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and alkaline phosphatase (ALP). Furthermore, we studied how insulin treatment could modulate these parameters. After 6 hours of CLP bronchoalveolar (BAL) and peritoneal lavages (PeL) were collected and a cytokine profile was accessed: interleukin (IL)-1&#946;, IL-6, IL-10, tumor necrosis factor (TNF)-&#945;, cytokine-induced neutrophill chemoattractant (CINC)-1, CINC-2. Samples from kidney, lung and liver were collected for morphological analysis and for the measurement of myeloperoxidase activity (MPO). After 6 hours of CLP, red blood cell count, hemoglobin, platelet count, cytokine profile and cellularity of the BAL did not change. In addition, insulin treatment did not change these parameters. CLP caused a decrease in total leukocyte count in both groups diabetic and control rats. Moreover, this model induced a rise in total PeL cellularity with a predominance of polymorfonuclear cells, which was similar in both groups control and diabetic rats. In the PeL, proinflammatory cytokines such as IL-1&#946;, IL-6, CINC-1, CINC-2 and the antinflammatory cytokine IL-10 were enhanced. The TNF-&#945; concentrations remained similar in both groups. Hepatic markers inferring in hepatocyte dysfunction were higher in the diabetes-induced animals what was in part restored after insulin administration. Regarding renal markers, only urea levels were enhanced in diabetic rats and worsened after CLP induction. Morphological changes, such as capillary dilatation and reduced Bowman space was already observed in the kidney of animals with sepsis, insulin treatment did not corrected the values. These data suggest that insulin had a hepato-protective effect but further changes were not observed after insulin treatment.

INTRODUÇÃO: A obesidade é uma doença multifatorial associada com alto risco de desenvolver resistência à insulina (RI), diabetes melito tipo 2 (DT2), síndrome metabólica (SM) e doenças cardiovasculares (DCV). Os mecanismos moleculares da fisiopatologia das doenças metabólicas não são totalmente compreendidos, emergindo a necessidade de novas estratégias. As modificações epigenéticas, especialmente os miRNAs, podem representar uma importante ferramenta, uma vez que são relacionados com o desenvolvimento de diversas doenças complexas, como as metabólicas. OBJETIVO: Avaliar o perfil de expressão de miRNAs séricos de indivíduos com obesidade, síndrome metabólica e resistência à insulina e sua relação com os mecanismos moleculares envolvidos nas suas fisiopatologias. CASUÍSTICA E MÉTODOS: O estudo foi realizado no Instituto Dante Pazzanese de Cardiologia (IDPC) e no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo (HU/USP). Um total de 233 indivíduos foram distribuídos em três grupos: peso normal (n=47), sobrepeso (84) e obesos (102), de acordo com seu índice de massa corpórea (IMC). Os mesmos pacientes também foram re-classificados em com SM (n=89) e sem SM (n=144) de acordo com recomendações da Federação internacional de Diabetes e em com RI (n=123) e sem RI (n=110). As informações biodemográficas e amostras de sangue foram coletadas para testes laboratoriais clínicos e análises de perfis de expressão de miRNA pela PCR array (372 alvos). Analises in silico com a ferramenta Ingenuity Pathway Analysis (IPA) foi realizada para integração do perfil de miRNAs e seus genes alvos com doenças metabólicas. RESULTADOS: Os pacientes obesos e com RI, apresentaram aumento similar das concentrações de marcadores dos perfis lipídico, glicídico e inflamatório quando comparado com indivíduos com peso normal e sem RI. O perfil de miRNAs dos grupos obesos e com RI mostrou que o miR-346 (p=0,010; p=0,019), 483-5p (p=0,034; p=0,020), 296-3p (p=0,010; p=0,008), 1224-3p (p=0,044; p=0,012) e 95-3p (p=0,003; p=0,019) foram expressos similarmente nestes pacientes quando comparados a seus respectivos controles. Estes miRNAs, por predição in silico, desempenham um importante papel na regulação de vias metabólicas associadas a doenças hepáticas gordurosas, inflamação, DCV e doenças metabólicas. Na SM, o grupo portador da doença apresentou altas concentrações de marcadores do perfil lipídico, glicídico e inflamatório. O perfil de expressão de miRNA indicou uma expressão reduzida do miR-183-5p (p=0,008) e miR-301a-3p (p=0,007) e aumentada do miR-542-5p (p=0,003), miR-424-3p (p=0,040), miR-326 (p=0,037), miR-421 (p=0,023) e miR-574-3p (p=0,001) no grupo SM comparado ao sem SM. A análise de regressão linear múltipla stepwise indicou que a expressão aumentada do miR-421 explica em 22,5% o aumento da associação de Hb1Ac, LDL-C, PAI-1, HOMA-IR, glicose e insulina (p <0,001, p=0,014, p=0,009, p <0,001, p=0,001 e p=0,007, respectivamente). Além disso o miR-421 foi predito in silico estar associado com a regulação de 11 mRNA alvos envolvidos em vias regulatórias de doenças como infarto do miocárdio, obesidade, diabetes melito, esteatose hepática, tolerância a glicose, distúrbio do metabolismo da glicose, hiperglicemia e resistência à insulina, bem como atua em vias regulatórias da resposta inflamatória, sendo associado com a variabilidade na quantidade de citocinas, massa do tecido adiposo e quantidade de leptina no sangue. Mediante a relação do miR-421 com a homeostase da glicose, sua expressão foi testada em pacientes com RI e interessantemente se manteve aumentada nesses pacientes em comparação com os sem RI (p=0.014). CONCLUSÕES: Os miR-346, miR-483-5p, miR-296-3p, miR-1224-3p e miR-95-3p podem ser considerados potenciais biomarcadores como preditores de DCV em pacientes obesos e resistência à insulina e o miR-421 um potencial biomarcador precoce de predição de risco de DCV em pacientes com síndrome metabólica. / BACKGROUND: Obesity is a multifactorial disease associated with high risk of developing insulin resistance (IR), Diabetes mellitus type 2 (DT2), metabolic syndrome (MetS) and cardiovascular disease (CVD). Molecular mechanisms of metabolic diseases\' pathophysiology are not fully understood, emerging the need for new strategies. Epigenetic modifications, especially miRNAs, may represent an important tool, since they are related to the development of several complex diseases, such as those metabolic. OBJECTIVE: Evaluate miRNA-derived serum expression profile in individuals with obesity, MetS and IR and their relationship with molecular mechanisms involved in the metabolic disease pathophysiology. MATERIAL AND METHODS: The study was conducted at the Dante Pazzanese Institute of Cardiology (IDPC) and at University Hospital of the University of São Paulo (HU/USP). Two hundred thirty-three subjects were distributed into three groups: normal weight (n = 47), overweight (n=84) and obese (n=102), according to their body mass index (BMI). The same patients were also re-classified as MetS (n=89) and Non-MetS (n=144) according to recommendations of the International Diabetes Federation and in IR (n=123) and Non-IR. Biodemographic data were registered and blood samples were collected for clinical laboratory tests and miRNA expression profiles by PCR array (372 targets). In silico analysis using Ingenuity Pathway Analysis (IPA) tool was performed to integrate the miRNA profile and their target genes with metabolic diseases. RESULTS: Obese and IR patients had similar increases in the concentrations of lipid, glucose and inflammatory markers when compared to individuals with normal weight and without IR, respectively. miRNA profile of obese and IR groups showed that miR-346 (p = 0.010, p = 0.019), 483-5p (p = 0.034, p = 0.020), 296-3p (p = 0.010, p = 0.008), 1224-3p (p = 0.044, p = 0.012) and 95-3p (p = 0.003, p = 0.019) were similarly expressed in these patients in comparison to their respective controls. These miRNAs, by in silico prediction, play an important role in the regulation of metabolic pathways associated with fatty liver diseases, inflammation, CVD and metabolic diseases. In MetS, patients diagnosed with the disease showed high concentrations of lipid, glycogen and inflammatory markers. The miRNA expression profile indicated a reduced expression of miR-183-5p (p=0.008) and miR-301a-3p (p=0.007) and increased miR-542-5p (p=0.003), miR- 3 (p=0.040), miR-326 (p=0.037), miR-421 (p=0.023) and miR-574-3p (p=0.001) in the MetS group compared to Non-MetS. Stepwise multiple linear regression analysis indicated that increased expression of miR-421 explain in 22.5% increased of Hb1Ac, LDL-C, PAI-1, HOMA-IR, glucose and insulin (p<0.001, p=0.014, p=0.009, p<0.001, p=0.001 and p=0.007, respectively). In addition the miR-421 was predicted in silico to associated with regulation of eleven mRNA of gene targets involved in regulatory pathways of diseases such as myocardial infarction, obesity, diabetes mellitus, hepatic steatosis, glucose tolerance, glucose metabolism disorder, hyperglycemia and insulin resistance, as well inflammatory response and is also associated with variability in the amount of cytokines, adipose tissue mass and amount of leptin in the blood. Due the relationship of miR-421 with glucose homeostasis, the miRNA expression was tested in patients with IR. Interestingly, miR-421 remained increased in these patients compared to those without IR (p = 0.014). CONCLUSIONS: The miR-346, miR-483-5p, miR-296-3p, miR-1224-3p and miR-95-3p may be potential biomarkers to predict CVD in obese and IR patients, while the miR-421 is a potential biomarker to predict CVD in MetS patients.

No presente estudo, analisamos a regulação das etapas iniciais da ação insulínica através de imunoprecipitação e imunobloting do tecido hipotalâmico, hepático, adiposo e músculo esquelético de ratos idosos tratados cronicamente com melatonina. O tratamento crônico com melatonina induziu aumento da sensibilidade à insulina acompanhada de regulação positiva das etapas iniciais da ação do hormônio em hipotálamo, fígado, músculo esquelético e tecido adiposo de ratos com 13 meses de idade. Os efeitos da ação da melatonina sobre a sinalização insulínica também ocorreu de forma tecido-específica, de maneira semelhante aos efeitos pleiotrópicos da insulina. Nosso estudo reafirma o papel da melatonina como um fator regulador da ação insulínica e permitem a conclusão de que a reposição desse hormônio pode contribuir com a reversão da resistência à insulina e redução do peso corporal que acompanha o processo normal de envelhecimento. / Melatonin can negate several morphological and metabolic aged-induced changes. Although, this has been known for some time, the mechanism underlying melatonins actions are unclear. As suggested by some studies, a putative interaction between insulin and melatonin could be involved. In the present study, we have examined the regulation of the insulin signaling pathways by using immunoprecipitation and immunoblotting in hypothalamus, liver, adipose tissue and skeletal muscle of aged rats chronically treated with melatonin. Melatonin treatment promoted increase in insulin sensitivity and a reduction of visceral fat. These modifications were accompanied by the increased phosphorylation of insulin signaling downstream compounds associated with food ingestion in hypothalamus, glucose homeostasis in liver and adipose tissue (e.g. IRS-1) and mitogenic action on insulin in skeletal muscle (e.g. ERK-1/2). These results indicate that, in aged rats, melatonin regulates insulin signaling downstream components in a tissue-specific manner.

Orientador: Patrícia Monteiro Seraphim / Banca: Ubiratan Fabres Machado / Banca: Ercy Mara Cipulo Ramos / Resumo: O tabagismo altera o metabolismo celular em vários aspectos e evidências apontam que este pode desencadear um quadro de resistência à insulina e, em longo prazo, Diabetes tipo 2. Dentre as alterações metabólicas mais importantes associadas à resistência à insulina, encontra-se a alteração na quantidade de transportador de glicose GLUT4 disponível na membrana plasmática de tecido muscular e tecido adiposo. No entanto, a atividade física aparece como um dos fatores que poderia modificar o risco dos indivíduos desenvolverem resistência insulínica e/ou diabetes, uma vez que pode aumentar a expressão da proteína e do RNAm do transportador de glicose GLUT4, estimulando o transporte de glicose por uma via independente da via de sinalização da insulina. Dentro deste contexto, este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito do tabagismo e de atividade física moderada associada sobre a sensibilidade à insulina em músculos de ratos, através da quantificação de proteína e do RNAm do transportador de glicose GLUT4. Para a realização deste estudo foram utilizados ratos Wistar, divididos em 4 grupos: (CS) grupo controle, (CE) controle exercitado, (FS) fumante sedentário e (FE) fumante submetido a exercício físico. Os grupos FS e FE foram submetidos à combustão dee4 cigarros/vez, 30 minutos, 2x/dia, durante 60 dias. Os grupos CE e FE executaram protocolo de exercício em esteira rolante, 60 dias, 60 minutos por sessão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cigarette smoking changes the cellular metabolism in many aspects and evidences suggest that it is related to insulin resistance and type 2 diabetes. Within the metabolic alterations associated to insulin resistance we can mention disturbs on GLUT4 content in plasma membrane of muscle e adipose tissue. However, physical activity appears as a factor that could modify the risk for these pathologies, increasing GLUT4 expression and stimulating glucose transport, in an independent-pathway of insulin signaling. In this context, this study aimed to evaluate the effect of smoking and moderated physical activity on insulin sensitivity in muscle of rats, by quantifying GLUT4 protein and mRNA. For this study, it was used Wistar rats divided into 4 groups: control (CS), control submitted to an exercise protocol (CE), sedentary smoker (FS) and smoker submitted to an exercise protocol (FE). The FS and FE groups were submitted to cigarette smoke exposition, 4 cigarettes/30 min./twice a day for 60 days. Groups CE and FE performed running on a treadmill for 60 days during 60 minutes per session... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Doris Hissako Sumida / Banca: João Cesar Bedran de Castro / Banca: Fabio Santos de Lira / Banca: José Antunes Rodrigues / Banca: Sérgio Eduardo de Andrade Perez / Resumo: Nos últimos anos, a relação entre infecções orais e desordens sistêmicas tem se consolidado como área de grande interesse na comunidade cientifica médica e odontológica. A lesão periapical (LP) é caracterizada como uma inflamação oral e está associada ao aumento da quantidade de citocinas pró-inflamatórias que possivelmente induzem resistência insulínica (RI). A RI é definida como a incapacidade dos tecidos periféricos em responder adequadamente às concentrações fisiológicas deste hormônio, no entanto, os mecanismos que causam RI não são totalmente compreendidos. Estudos anteriores do nosso laboratório observaram que a LP promove aumento das concentrações plasmáticas de TNF-α, prejuízos na transdução do sinal insulínico e redução do conteúdo de GLUT4 na membrana plasmática em tecido muscular esquelético, indicando uma relação entre LP e RI. Tais achados evidenciam a necessidade de realizar mais estudos para verificar os mecanismos envolvidos nestas alterações. O presente estudo, conduzido em ratos com LP, teve como objetivos: 1) calcular o índice HOMA-IR a partir dos concentrações plasmáticas de glicose e insulina 2) avaliar conteúdo total das proteínas inflamatórias (JNK, IKKα/ e TNF-) no músculo gastrocnêmio (MG) e o grau de fosforilação de JNK e IKKα/ no mesmo tecido; 3) verificar a presença de macrófagos infiltrados por meio da detecção da proteína F4/80 em MG; 4) quantificar a expressão de fatores de transcrição envolvidos com a diferenciação de linfócitos no baço (T-... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the last few years, the relationship between oral infections and systemic disorders has been consolidated as an issue of great interest in the medical and dental scientific community. The periapical lesion (PL) is characterized as an oral inflammation and is associated with an increase in the levels of pro-inflammatory cytokines that possibly induce insulin resistance (IR). IR is defined as the inability of peripheral tissues to respond adequately to the physiological concentrations of this hormone, however, mechanisms that cause IR are not fully understood. Previous studies performed by our laboratory have found that PL promotes an increase in plasma TNF-α concentrations, impairment of insulin signal transduction, and reduction of plasma membrane GLUT4 content in skeletal muscle tissue, indicating a relationship between PL and IR. These findings highlight the need for further studies to verify the mechanisms involved in these changes. The present study was conducted in rats with PL and aimed: 1) to calculate the HOMA-IR index from the plasma glucose and insulin levels 2) to evaluate the total content of the inflammatory proteins (JNK, IKKα/β and TNF-α) in the gastrocnemius muscle (GM) and the JNK and IKKα/β phosphorylation status in the same tissue; 3) to verify the presence of infiltrated macrophages by F4/80 protein detection of in GM; 4) to quantify the expression of transcription factors involved in the lymphocytes differentiation into spleen (T-bet, GATA3 and FOXP3);... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor