Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-21T22:58:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thirone_AnaClaudiaPelegrinelli_M.pdf: 3468685 bytes, checksum: 5b77284d1cf448cbe7c8ba863ce0f7ef (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: A insulina estimula a atividade tirosina quinase de seu receptor, resultando na fosforilação de substratos citoplasmáticos, substratos I e 2 do receptor de insulina (IRS-I e IRS-2). Estes dois substratos, por sua vez, ativam a fosfatidilinositol 3-quinase (PI 3-quinase). Sabe-se que um excesso crônico de hormônio do crescimento (GH) produz resistência insulínica, mas o exato mecanismo permanece não esclarecido. No presente estudo, examinamos os níveis protéicos e graus de fosforilação do receptor de insulina, do IRS-I e do IRS-2, bem como a associação destes substratos com a PI 3-quinase, no fígado e músculo de ratos tratados cronicamente com GR. Os níveis de receptor de insulina no fígado e músculo foram semelhantes nos grupos tratados com GH e controle. A autofosforilação do receptor, estimulada pela insulina, não mudou no fígado, mas mostrou se reduzida para 56 ::!: 5% (p<O,OOI) no músculo dos ratos tratados com GR. Em contraste, o nível protéico de IRS-I diminuiu para 40 ::!: 6% (p<O,OOI) no fígado dos ratos tratados com GH, mas não no músqIlo. A fosforilação do IRS-I, estimulada pela insulina, mostrou se diminuída para 67 ::!: 11% (p<0,05) e 64 ::!: 9% (p<O,OI) no fígado e músculo, respectivamente. A quantidade de IRS-2 fícou semelhante nos animais tratados com GH, em relação aos controles, tanto em fígado quanto em músculo, enquanto a fosforilação deste substrato, após estímulo com insulina, reduziu para 43 ::!: 4% (p<O,OOI) no fígado e 72 ::!: 8% (p<0,05) no músculo dos ratos tratados com GR. A associação do IRS-I com a PI 3 quinase, estimulada pela insulina, mostrou-se diminuída para 45 ::!: 5% (p<O,OOI) no fígado e para 63 ::!: 10% (p<0,05) no músculo dos ratos tratados com GR. Também a associação do IRS-2 com a PI 3-quinase decresceu para 47 ::!: 10% (p<0,05) e 68 ::!: 10% (p<0,05) em fígado e músculo, respectivamente. Concomitantemente, houve redução para 75::!: 4% (p<O,OOI) no nível hepático da PI 3-quinase. Estes dados sugerem que estas alterações, nas etapas iniciais de transmissão do sinal insulínicq, possam desempenhar alguma função na resistência insulínica observada nos animais tratados cronicamente com GR / Abstract: Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of its receptor which results in the phosphorylation of the cytosolic substrates, insulin receptor substrate-l (IRS-l) and insulin receptor substrate-2 (IRS-2). These two substrates in tum associate with and activate phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-kinase). An excess of growth hormone (GH) is known to produce insulin resistance, but the exact molecular mechanism remains unclear. In the present study, we have examined the levels and phosphorylation status of the insulin receptor and its substrate IRS-l, as well as the association between this substrate and PI 3-kinase, in the liver and muscle of rats chronically treated with GH. The levels of insulin, receptor in the liver or muscle were similar in both the GH-treated and non-treated rats. Insulin-stimulated receptor autophosphorylation, as determined by immunoblotting with an antiphosphotyrosine antibody, did not change in the liver, but was reduced by 56 :t 5% (p<O. 001) in the muscle of rats treated with GH. In contrast, IRS-l protein levels decreased to 40 :t 6% (p<O.OOI) in, the liver of GH-treated rats, but not in muscle. In samples previously immunoprecipitated with anti-IRS-l antibody and blotted with antiphosphotyrosine antibody, there was a decrease in insulin stimulated IRS-l phosphorylation levels to 67:t 11% (p<0.05) and 64 :t 9% (p<O.OI) in the liver and muscle of GH treated rats, respectively. The insulin-stimulated IRS-l association with PI 3-kinase decreased to 45:t 5% (p<O.OOI) in the liver and to 63 :t 10% (p<0.05) in.the muscle ofrats treated with GR. Concomitantly, there was a decrease to 75:t 4% (p<O.OOI) in t4e leveI of hepatic PI 3-kinase. While there was no change in the hepatic and musde IRS-2 concentrations, the tyrosine phosphorylation of this substrate after insulin stimulation was reduced to 43 :t 4% (p<O,OOI) and 73 :t 8% (p<0,05) in the liver and muscle of GH treated rats, respectively. The association of IRS-2 with PI 3-kinase decreased to 47 :t 10% (p<0,05) in the liver and to 68 :t 11 % (p<0,05) iR the muscle of GH treated rats. These data suggest that changes in the early steps of insulin signal transduction may have a role in the insulin resistance observed' in animaIs chronically treated with GH / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Medicina

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-22T13:35:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_CarlaRobertadeOliveira_D.pdf: 7786553 bytes, checksum: 2b33335c5ecf4960d08954265cb09959 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A insulina estimula a atividade tiro sina quinase de seu receptor, resultando na fosforilação de substratos citosólicos, IRS-I e IRS-2, que se associam à fosfatidilinositol-3-quinase (PI 3-quinase), ativando-a. A resistência à insulina é uma condição fIsiopatológica associada ao envelhecimento. Entretanto, o mecanismo molecular envolvido nesta situação de resistência não é conhecido. Neste estudo, examinamos a regulação das proteínas envolvidas nas etapas iniciais da ação insulínica em fígado e músculo de ratos com diferentes idades, 2, 5, 12 e 20 meses. Não houve mudanças na concentração do receptor de insulina, em ambos os tecidos, em ratos com 2 e 20 meses de idade (idosos), determinado pelo "immunoblotting" com anticorpo anti-receptor de insulina. Entretanto o grau de fosforilação, refletindo a autofosforilação do receptor, mostrou um especillcidade tecidual, diminuindo em fígado, para 66±7% (p<0,05), mas não em músculo, nos ratos com 20 meses. Curiosamente, os níveis protéicos teciduais de IRS-l diminuiram precocemente (5 meses) para 51±9% (p<0,001) e permaneceram em níveis reduzidos, em músculo, porém não em fígado. Nas amostras de animais com 2 e 20 meses, previamente imunoprecipitadas com anticorpos anti¬IRS-l e' anti-IRS-2 e incubadas com anticorpo antifosfotirosina, houve redução do grau de fosforilação para 39±9% (p<0,001) e 55±12% (p<0,001) respectivamente em fígado e para13±2% (p<0,01) e 10±3% (p<0,05) em músculo, respectivamente. A associação IRS-l/PI 3-quinase diminuiu significativamente para 27±14% (p<0,01) e 20±1O% (p<0,005) em fígado e músculo de ratos senis, respectivamente. A associação IRS-2/PI 3-quinase apresentou uma variação tecido específica, sem alteração no tecido hepático e diminuindo signillcantemente para 5001 % (p<0,05) em músculo dos ratos com 20 meses. Estes dados sugerem que alterações, nas etapas iniciais da transmissão do sinal insulínico, podem contribuir para a resistência à insulina observada em animais senis. A seguir, constou também dos objetivos deste estudo investigar o efeito do captopril, inibidor da enzima conversora da angiotensina, que aumenta a sensibilidade à insulina, nas etapas iniciais da ação insulínica, em ratos senesce. Os animais com 20 meses que receberam o captopril apresentaram um aumento da sensibilidade à insulina, demonstrado pelo teste venoso de tolerância à insulina, acompanhado de um aumento na autofosforilação, induzido pela insulina de seu receptor de 462±253% (p<0,05) em fígado e de 697±78% (p<0,001) em músculo dos ratos. Houve, concornitantemente, um aumento no grau de fosforilação do IRS-l para 25O±17% (p<0,001) e 280±50% (p<0,05) no fígado e músculo respectivamente. E a associação IRS-l/PI 3-quinase aumentou para 305±20% (p<0,001) em fígado e para 267±48% (p<0,05) em músculo. Corno o captopril age, tanto diminuindo os níveis de angiotensina 11 corno elevando os níveis de bradicinina, estes efeitos foram simulados, na tentativa de isolar o efeito predominante nas etapas inicias da ação insulfuica. A administração de losartan, um inibido r do receptor de angiotensina 11, não induziu efeitos no grau de fosforilação do IRS-l, nos tecidos estudados. A administração aguda de bradicinina aumentou o grau de fosforilação, induzido pela insulina, em seu receptor e no IRS-l de fígado e músculo dos ratos senis. Tais dados demonstram que o captopril modula as etapas iniciais da ação insulínica e que estes efeitos podem ser simulados pela administração de bradicinina / Abstract: Insulin initiates its metabolic and growth-promoting effects by binding to the a subunit of its receptor, thereby activating the kinase in the J3 subunit. This event leads to tyrosyl phosphorylation of its cytosolic substrate, insulin receptor substrate-l (IRS-l), which in tum associates with and activates phosphatidylinositol 3-kinase (pI 3-kinase). The clínical use of angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEi) has been associated with increased insulin sensitivity. However, the exact molecular mechanism is unknown. In the present study, we have examined the phosphorylation status of the insulin receptor and IRS-l, as well as the association between IRS-l and PI 3-kinase in the liver and muscle of rats treated acutely with captopril, using immunoprecipitation with anti¬peptide antibodies to the insulin receptor, IRS-l, and immunoblotting with antiphosphotyrosine and anti-PI 3-kinase antibodies. Insulin stimulation increased receptor autophosphorylation to 462:1=253% (p<0.05) in the liver and 697:1:78% (p<0.001) in the muscle of ACEi treated rats. There were also increases to 250:1:17% (p<O.OOI) and 280:1:50% (p<0.05) in the insulin-stimulated IRS-l phosphorylation levels in the liver and muscle, respectively, of animals treated with captopril. The insulin-stimulated IRS-l association with PI 3-kinase in the liver rose to 305:1:200/0 (p<0.001) and in the muscle to 267:1:48% (p<0.05). The losartan, an angiotensin receptor (ATl) blocker, had no significant effect on insulin-stimulated IRS-l phosphorylation in both tissues. The acute administration of bradykinin increased insulin¬stimulated tyrosine phosphorylation of the insulin receptor and of IRS-l in the liver and muscle. These data demonstrate that ACE inhibitors modulate the early steps of insulin signalling, and that this effect may be simulated by the administration of bradykinin / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T09:57:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_AnaCristinadosSantos_M.pdf: 2984469 bytes, checksum: 05ad25856a10ccc3e82024835a6de424 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Este trabalho objetivou avaliar a maturação do sistema secretor de insulina em ratos, através de um estudo, temporal da resposta secretória frente a diferentes estímulos. Para isso, fragmentos de pâncreas - (0,5 à 1 mm3) de fetos e neonatos e ilhotas adultas, foram incubados por 1 hora à ¿37 GRAUS C¿ em atmosfera de 95% 'O IND. 2¿ /5% 'C¿O IND. 2¿. As incubações foram realizadas em. solução de Krebs-Ringer contendo diferentes concentrações de glicose,potássio, teofilina e carbamilcolina. Após o período de incubação, a insulina secretada no meio, bem como, a extraída dos fragmentos de pâncreas ou de ilhotas isoladas, foram medidas por radioimunoensaio, sendo a secreção expressa como percentagem do conteúdo total de insulina ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The aim of this work was to study, in rats, the maturation process of the secretory response of insulin following several stimuli. For that, pieces of pancreas (0,5-1 mm3) from rat fetuses and newborns or isolated adults islets, were incubated for 1 .hour at ¿37 GRAUS C¿ in 95% 'O IND. 2¿ /5% 'C¿O IND. 2¿ atmosphere with differents concentrations of glucose, potassium;. theophylline and carbamylcholine. Following the incubation,. the insulin secreted into the medium and extracted from the tissues, were measured hy radioimmunoassay,and were expressed as percentage of total insulin content ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T20:11:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arantes_VanessaCristina_M.pdf: 2202517 bytes, checksum: 96df5e7928eb9ee77b90e029f2b8e569 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Em animais, a desnutrição intra-uterina exerce efeitos marcantes sobre o desenvolvimento fetal e pós-natal. Além disso, baixo peso ao nascer está associado à secreção alterada de insulina, resistência à insulina e área diminuída da ilhota pancreática. Neste trabalho, verificamos a expressão do fator de transcrição PD X-I, a área da ilhota e a secreção de insulina em ilhotas de ratos neonatos e recém-desmamados (28 dias de vida), mantidos durante o período fetal e da lactação com uma dieta normoprotéica (17% de proteína) ou hipoprotéica (6% de proteína). Esses parâmetros também foram avaliados em ratos com 28 dias, recuperados da desnutrição intra-uterina. Após o desmame, a secreção de insulina em ilhotas isoladas em resposta 2,8 e 16,7 mmol/L de glicose foi reduzida em ratos desnutridos. Ao nascer e após 28 dias, a área da ilhota e a expressão protéica do PDX-1 também foram diminuídas, enquanto os níveis de mRNA em ilhotas de ratos desnutridos recém desmamados foram semelhantes aos níveis encontrados em ratos controles. A expressão protéica do PDX-1 e a área da ilhota, bem como a secreção de insulina, foram restauradas em ratos recuperados, enquanto o mRNA do PDX-l foi maior do que em ratos controles. Esses resultados sugerem associação entre expressão protéica do PDX-l diminuída, redução no tamanho da ilhota e secreção diminuída de insulina em ratos desnutridos. A reintrodução de dieta normal, logo após o nascimento, restaurou todos os parâmetros avaliados / Abstract: Intra-uterine and early postnatal malnutrition has profound consequences on fetal and postnatal development, both in humans and animals. In addition, low birth weight has been reported to be associated with impaired insulin secretion, insulin resistance and diminished area of pancreatic islets. To assess the expression of the transcription factor pancreatic and duodenal homeobox gene 1 (PDX-l) in pancreatic B-cells, and to examine the islet area and glucose-induced insulin secretion by islets from rats maintained on a low protein diet. PDX-l expression and islet area were assessed in rats maintained on a low (6%) or normal (17%) protein diet during fetal life. PDX-I protein and rnRNA levels, as well as insulin secretion and islet area were also measured after 28 days of life in normal, 10w protein, and recovered rats which received a normal protein diet after birth. Insulin secretion by isolated islets in response to 2.8 and 16.7 mmol glucose/L was reduced in 28-day-old low protein rats (P < 0.0001). At birth and after 28 days of life, the islet area and PDX-l protein expression were also reduced (P < 0.01). In contrast, PDX-l rnRNA levels in islets from 28-day-old low protein rats was similar to normal rats. PDX-l protein expression in B cells, the area of islets and insulin secretion were restored in recovered rats, whereas PDX-l rnRNA was higher than normal rats (P < 0.05). These results suggest a link between diminished PDX-l protein expression, a reduction in islet area and impaired insulin secretion in low protein rats. The reintroduction of a normal diet early in life restored islet area and cell physiology / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Everson Alves Miranda, Carlos Eduardo Calmanovici / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-02T03:20:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bernardo_Andre_M.pdf: 2864644 bytes, checksum: f4f594dd6e89725fcb4c67d65b5ec1c1 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A cristalização de proteínas tem sido tradicionalmente aplicada como uma técnica de apoio a estudos cristalográficos, sendo referida muitas vezes como uma arte mais do que uma ciência. A cristalização como uma operação de recuperação e purificação de bioprodutos (RPB) tem sido sub-utilizada devido principalmente à carência de parâmetros cinéticos e termo dinâmicos que auxiliem no projeto adequado de processos industriais. Neste contexto, o tempo de indução, definido como o tempo transcorrido desde o estabelecimento da supersaturação até a formação e crescimento a um tamanho detectável dos núcleos, medido em diferentes níveis de supersaturação e temperatura, é um parâmetro relativamente fácil de se obter e permite a inferência da cinética de nucleação e da tensão interfacial. O presente trabalho apresenta medidas do tempo de indução pela variação da absorbância no comprimento de onda de 320 nm da insulina suína e da lisozima de clara de ovo de galinha, os resultados de ensaios de dissolução dessas proteínas em diferentes níveis de pH e temperatura, a partir dos quais foram determinados a solubilidade e o calor de dissolução Os ensaios de medida do tempo de indução em diferentes concentrações permitiram inferir a influência do pH na cinética de nucleação e na tensão interfacial. Dos ensaios de dissolução, pôde-se observar a existência de polimorfismo nas proteínas estudadas - confirmado por análises de raios- X - e que a insulina tem solubilidade retrógrada. Também, a partir desses resultados, foi possível estimar a cinética de crescimento da insulina. Das medidas de tempo de indução, observou-se que as interações eletrostáticas são preponderantes na nucleação de proteínas e que a resistência à nucleação diminui exponencialmente com o aumento da carga superficial das proteínas / Abstract: The crystallization of proteins has been traditionally applied as an auxiliary technique to crystallographic studies, and is often referred as an art more than a science. Crystallization as an operation of recovery and purification of bioproducts (RPB) has been underused main1y because of the lack of kinetic and thermodynamic parameters that allow the adequate design of industrial processes. Therefore, the induction time, defined as the period of time elapsed since the establishment of super saturation until the appearing and growth to a detectable size of nuclei, is an easily obtainable parameter and allows to infer nuc1eation kinetics and interfacial tension, when it is measured in different temperatures and super saturation degrees. The present work presents induction time measurements by absorbance in 320 nm of porcine insulin and hen egg white lysozyme, the results of dissolution assays of these proteins in different pH and temperature levels, ITom which were determined the solubility and the heat of dissolution. The induction time measurements in different concentration allowed inferring the influence of pH in the nucleation kinetics and in the interfacial tension. From dissolution assays, it could be observed protein polymorphism - which was confirmed by X-ray analyses. Moreover, it was determined that insulin has retrograde solubility, besides insulin growth kinetics. It was observed ITom induction time measurements that the electrostatic interactions are preponderant in protein nucleation and that the resistance to nucleation decreases exponentially as the surface charge of proteins mcreases / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T16:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zecchin_HenriqueGottardello_M.pdf: 28934250 bytes, checksum: db4e45dda12195dad37965b91fd18adc (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Estudos epidemiológicos demonstram forte associação entre resistência à insulina, hipertensão e morbidade cardiovascular. A insulina, além de seus efeitos metabólicos, exerce efeitos cardiovasculares mediados pelo sistema nervoso simpático e pela via do óxido nítrico (NO). Recentemente foi descoberto que, em situações normais, a insulina ativa a produção de NO em células endoteliais em cultura através de um mecanismo dependente da fosfatidilinositol (PI) 3-quinase, com ativação da Akt e subseqüente fosforilação da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS ou NOS3) em resíduos de serina. As ações da insulina no sistema cardiovascular estão reduzidas em diversos estados de resistência à insulina, porém o mecanismo através do qual ocorre manutenção da pressão arterial normal e ausência de doença cardiovascular em alguns modelos animais de resistência à insulina ainda não foi estudado. Neste estudo, usando técnicas de imunoprecipitação e immunoblotting, examinamos in vivo a regulação das proteínas envolvidas na transmissão do sinal de insulina no músculo esquelético e na aorta torácica de ratos obesos envelhecidos (12 meses de idade), os quais apresentaram resistência à insulina mas não desenvolveram doença cardiovascular, comparando-os com ratos jovens (2 meses de idade). As vias envolvidas na transmissão intracelular do sinal de insulina tiveram comportamentos diferentes nos tecidos estudados. Os ratos com 12 meses de idade apresentaram redução significativa na transmissão do sinal de insulina pela via da PI 3-quinase no músculo esquelético, com níveis teciduais e graus de ativação normais da MAP quinase. Na aorta, entretanto, a via da PI 3-quinase / Akt mostrou-se preservada, levando à ativação normal da óxido nítrico sintase endotelial; as isoformas ERK1/2 da MAP quinase apresentaram maiores graus de fosforilação e níveis teciduais nos animais com 12 meses, tanto na ausência quanto após estímulo com insulina, em comparação aos animais jovens. A redução na ativação da via da PI 3-quinase / Akt pela insulina no músculo esquelético de ratos com 12 meses de idade pode ter contribuído para o fenótipo de resistência à insulina apresentado por este modelo animal. No vaso, entretanto, apesar do aumento da quantidade e ativação da MAP quinase, a preservação da via da PI 3-quinase pode ter contribuído para evitar a aterosclerose e hipertensão arterial sistêmica no rato obeso e envelhecido / Abstract: The association between insulin resistance, hypertension and cardiovascular morbidity has been well established. However, the mechanism by which there is maintenance of normal blood pressure and absence of cardiovascular disease despite insulin resistance in some animal models is not c1ear. Besides its metabolic effects, insulin is able to act in cardiovascular system direct1y in vascular cells promoting the increase in amino acid transport, glycogen synthesis, DNA synthesis, gene expression, nitric oxide release and regulation of mRNA expression of matrix proteins. Insulin stimulates the tyrosine kinase activity of its receptor, resulting in the phosphorylation of its cytosolic substrates IRSs and Shc, which bind differentially to various downstream signaling proteins, such as phosphatidylinositol 3-kinase (pI 3-K). Recently, it has been demonstrated that insulin is able to stimulate NO production in cultured endothelial cells through a PI 3-K pathway, activating the serine/threonine protein kinase Akt and subsequently phosphorylating and activating the endothelial nitric oxide synthase (eNOS I NOS3). As is the case for other growth factors, insulin also stimulates the mitogen-activated protein (MAP) kinase extracellular signal-regulated kinase (ERK), which is critical in mitogenic response. The insulin resistance of type 2 diabetes, obesity and aging is characterized by defects at many levels, with decreases in receptor concentration and kinase activity, in concentration and phosphorylation of IRS-l and -2, in PI 3-K activity, in glucose transporter translocation and in the activity of intracellular enzymes in muscle, liver and adipocytes. In the present study, the insulin signaling pathways in skeletal muscle and thoracic aortae from 2- and 12-month-old rats - which have insulin resistance but do not develop cardiovascular disease - have been analysed using immunoprecipitation and immunoblotting technics. The 12-month-old normotensive rats showed marked insulin resistance, which parallels the reduced effects of this hormone in insulin signaling cascade in muscle. In aorta, hosphatidylinositol (PI) 3-kinase / Akt pathway was preserved, leading to a normal activation of endothelial nitric oxide synthase; however, mitogen-activated protein (MAP) kinase isoforms showed higher levels and activation in middle-aged rats, both in the basal state and afier stimulation with insulin, when compared to young rats. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T08:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pelegrinelli_FabianaFernandesFontana_D.pdf: 16389885 bytes, checksum: 5d058208b3c5558d1744a26a73e4362e (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A insulina é um importante regulador de crescimento, iniciando suas ações através da ligação ao seu receptor que se autofosforila e, posteriormente, direciona sua capacidade tirosina quinase em direção a outras moléculas intermediárias, incluindo o substrato-1 do receptor de insulina (IRS-I), IRS-2 e Shc. Proteínas IRS podem se ligar a proteínas sinalizadoras que contêm um domínio SH2, tais como a subunidade de 85 kDa da fosfatidilinositol 3-quinase (pI 3K) e Grb2. A serina-treonina quinase Akt é ativada à jusante da PI 3K. Tem-se mostrado que a proteína Shc liga-se diretamente a Grb2 e leva à ativação da MAPK. No presente trabalho, investigamos as vias de sinalização da insulina na pele intacta de ratos, por meio de imunoprecipitação e "immunoblotting" com anticorpos específicos, e também através de imuno-histoquímica com anti-receptor de insulina. Nossos resultados mostraram claramente a presença do receptor de insulina (IR) em fragmentos de pele nas células da epidérme e folículos pilosos e menos intensamente nos fibroblastos da derme. Também observamos que o estímulo agudo com insulina pode induzir fosforilação em tirosina do IR e que as proteínas IRSs e Shc servem como moléculas sinalizadoras para a insulina na pele de ratos e que a insulina é capaz de induiir a associação de IRS-I/PI3K e Shc/Grb2 neste tecido, bem como a fosforilação de MAPK e Akt, demonstrando que proteínas envolvidas nas etapas iniciais da ação insulínica estão expressas na pele de ratos e são rapidamente ativadas após estímulo insulínico. O processo de cicatrização está comprometido no diabetes mellitus. Entretanto, a patogênese deste processo não está esclarecida e pode envolver anormalidades na sinalização insulínica. O outro objetivo deste estudo foi investigar a regulação destas proteínas na pele em cicatrização de ratos normais e diabéticos. Nossos resultados mostraram que a fosforilação induzida pela insulina e a expressão tecidual do IR, IRS-I, IRS-2, Shc, MAPK e Akt estão aumentadas em tecido cicatricial de pele em comparação com a pele intacta e diminuída em tecido cicatricial de ratos diabéticos, quando comparado com tecido cicatricial de ratos normais. A sinalização insulínica está aumentada na pele em reparo e é possível que a sinalização insulínica anormal, como demonstrado na pele dos ratos diabéticos, pode afetar a função celular na pele / Abstract: Insulin is an important regulator of growth and initiates its action by binding to its receptor that undergoes tyrosyl autophosphorylation and further enhances its tyrosine kinase activity towards other intermediate molecules, including insulin receptor substrate-1 (IRS-l), IRS-2 and Shc. IRSs proteins can dock various SH2-containing signaling proteins, such as the 85 kDa subunit of phosphatidylinositol 3-kinase (pI 3-kinase) and Grb2. The serine-threonine kinase Akt is activated downstream to PI 3-kinase. Shc protein has been shown to directly induce the association with Grb2 and downstream the activation of the mitogen-activated protein kinase (MAPK). In the present study we investigated insulin signal transduction pathways in skin of intact rats by immunoprecipitation and immunoblotting with specific antibodies, and also by immunohistochemistry with anti-insulin receptor antibody. Our results showed that skin fragments clearly demonstrated the presence of insulin receptor (IR) in cell bodies of the epidermis and hair follicles and some faint staining was also detected in fibroblasts of the dermis. It was also observed that acute stimulation with insulin can induce tyrosyl phosphorylation of IR and that the IRSs and Shc proteins serve as signaling molecules for insulin in skin of rats and that insulin is able to induce association of IRS-1/PI 3-kinase and Shc/Grb2 in this tissue, as well as phosphorylation of MAPK and Akt, demonstrating that proteins involved in early steps of insulin action are expressed in skin of intact rats and are quickly activated afier insulin stimulation. Wound healing is impaired in diabetes mellitus. However the pathogenesis ofthis process is not known and may involve abnormalities in insulin signaling. The other purpose of this study was to investigate the regulation of these proteins in wound healing skin of normal and diabetic rats. Our results showed that insulin induced tyrosyl phosphorylation and tissue expression ofIR, IRS-l, IRS-2, SHC, MAPK and Akt, are increased in the wound healing tissue compared to intact skin and decreased in wounded skin of diabetic rats when compared to wounded skin of normal rats. Insulin signal transduction is increased in repair tissue in skin and it is possible that abnormal insulin signaling, as demonstrated in skin of diabetic rats, could affect skin function / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Gil Guerra Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:29:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Armani_MariaClaudiadeAraujo_M.pdf: 1132841 bytes, checksum: 51ca74c9d7fbd1a4c8865bbd097a8e68 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Objetivo: Avaliar a resistência insulínica e o perfil lipídico das pacientes com síndrome de Turner (ST) e correlacionar com a idade, o cariótipo, e a presença de hipertensão arterial sistêmica, de obesidade e de desenvolvimento puberal. Casuística e Métodos: Estudo transversal de 35 pacientes com ST sem uso prévio de anabolizantes ou hormônio de crescimento, com avaliação de idade, cariótipo, pressão arterial, desenvolvimento puberal, estatura, peso, IMC, cintura (C), quadril (Q), C/Q. Foram feitas dosagens séricas basais em jejum de colesterol total, HDL, triglicérides, insulina e glicose, e cálculos de LDL, índices de HOMA e QUICKI, e relação entre glicose e insulina (G/I). Foi feita análise descritiva dos dados, e aplicados o teste de Mann-Whitney em relação aos grupos de cariótipo e puberdade e o de Spearman. Resultados: A idade variou de 5 a 43 anos, sendo 10 acima dos 20 anos. Dezessete com cariótipo 45,X e 6 com aberrações estruturais; não se observaram diferenças das variáveis em relação aos cariótipos. Quinze eram impúberes e 20 púberes; os triglicérides e o HOMA foram significativamente maiores na puberdade, e a G/I menor. Sete com estatura normal, 8 com IMC > 25 Kg/m2 (6 entre 25 e 30 e 2 maior que 30), 19 com C/Q > 0,85. O colesterol foi de 180 + 42 mg% (Média + 1DP, 4 acima de 240); o HDL de 57 + 16 mg%; o LDL de 99 + 34 mg%; os triglicérides de 108 + 96 mg% (2 acima de 200); o HOMA de 1,01 + 0,71; o QUICKI de 0,4 + 0,04 e a G/I de 23,5 + 12,1 (2 abaixo de 7,0). Conclusões: Neste estudo foram observadas poucas alterações no perfil lipídico da ST independentemente da faixa etária, do cariótipo, da hipertensão arterial e da obesidade. A resistência insulínica não foi observada neste estudo com a freqüência descrita na literatura / Abstract: Objective: To evaluate the insulin resistance and lipid profile of patients with Turner Syndrome (TS), and to check the influence of age, karyotype, presence of systemic arterial hypertension, obesity and pubertal development. Casuistic and Methods: A transversal study of 35 TS patients without previous use of anabolic steroid or growth hormone, with evaluation of age, karyotype, blood pressure, pubertal development, height, weight, BMI, waist (W), hip (H), and W/H (waist-to-hip ratio). Fasting blood was collected to determine the levels of total cholesterol, high-density lipoprotein, triglycerides, insulin and glucose, followed by the estimate of low-density lipoprotein, HOMA and QUICKI indexes, and relation between glucose and insulin (G/I) was made. A descriptive analysis was done and data were examined by Mann-Whitney test for pubertal and karyotype groups, and Spearman test. Results: The age varied from 5 to 43 years; 10 were above 20 years old. Seventeen had a 45,X karyotype and 6 structural aberrations; differences of the variables in relation to the karyotypes were not observed. Fifteen were nonpubertal and 20 pubertal; triglycerides and HOMA were significantly higher in puberty, while G/I was lower. Seven had normal height, 8 had BMI > 25 Kg/m2 (6 between 25 and 30 and 2 > 30), and 19 W/H > 0.85. The cholesterol level was 180 + 42 mg% (Mean + 1SD, 4 above 240); HDL 57 + 16 mg%; LDL 99 + 34 mg%; triglycerides 108 + 96 mg% (2 above 200); HOMA 1.01 + 0.71; QUICKI 0.4 + 0.04 and G/I 23.5 + 12.1 (2 below 7.0). Conclusions: This sample shows that a few patients with TS had changes in lipid profile independent of age, karyotype, hypertension and obesity. The frequency of insulin resistance in this study was lower than described in literature / Mestrado / Pediatria / Mestre em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T14:30:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AlvarezRojas_Fernanda_M.pdf: 3140894 bytes, checksum: 7d5f8766dbf8cf0c2dea66da1d3b08d0 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A insulina é um potente hormônio com efeito metabólico e promotor do crescimento atuando no metabolismo de carboidratos, proteínas e lipídios. O efeito no crescimento é induzido pela participação da insulina na síntese de RNA e DNA, em praticamente todas as células. A insulina inicia suas ações celulares através da ligação ao seu receptor transmembrana. Este receptor comporta-se, funcionalmente, como uma enzima alostérica, com uma subunidade a regulatória e uma subunidade ß catalítica, que uma vez ativada se autofosforila e fosforila outros substratos em resíduos tiro sina, desencadeando uma cascata de ativações e desativações de proteínas. Têm sido descritos vários substratos endógenos para o receptor de insulina e o nosso laboratório demonstrou que a insulina fosforila uma proteína da família das quinases, a J anus-quinase 2 ou JAK2. Acredita-se que a transmissão do sinal pelas JAKs ocorre através da fosforilação em tiro sina de proteínas citoplasmáticas chamadas STATs, provavelmente relacionas ao crescimento celular. Maegawa et aI. (1996) demonstraram que a insulina também é capaz de ativar a interação JAK2/Syp. A proteína Syp é uma tirosina fosfatase também chamada de SHPTP2 ou PTPID. Entretanto a regulação desta nova via de transmissão do sinal insulínico não foi ainda investigado em situações que alteram a sensibilidade à insulina. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi investigar os níveis e grau de fosforilação em tiro sina da proteína JAK2, a associação de JAK2 com SHPTP2 e com STATl em coração de ratos em três situações de resistência à insulina: jejum prolongado de 72 horas, tratamento crônico com dexametasona e tratamento agudo com adrenalina.Nossos resultados demonstraram uma diminuição na quantidade de proteína JAK2 nos ratos submetidos a jejum prolongado, apresentando igualmente uma diminuição na estoiquiometria da fosforilação de 70% (p<0.05). Também foi observado um aumento na associação da JAK2/STATl de 160% (p<0.05) e uma redução na associação de JAK2/SHPTP2 de 85% (p<0.05) nos ratos em jejum. Quando os ratos foram tratados durante cinco dias com dexametasona foi observado um importante aumento na quantidade de proteína JAK2 e uma diminuição da estoiquiometria de fosforilação para 20% (p< 0.05). A associação JAK2/STATl foi reduzida para 70% (p<0.05) e a associação JAK2/SHPTP2 apresentou um aumento de 170% (p<0.05) nesses animais. No tratamento agudo com adrenalina não foi observado diferença na fosforilação da proteína JAK2, nem nas associações JAK2/STATl e JAK2/SHPTP2. Em resumo, este trabalho mostra que tanto nos ratos em jejum de 72 horas como nos ratos tratados com dexametasona, duas situações de resistência à insulina, ocorre uma diminuição no grau de fosforilação em tiro sina da JAK2 induzido por insulina em coração apesar de uma regulação diferente na quantidade tecidual desta proteína. Esta redução da fosforilação da JAK2 foi acompanhada de alterações inversas na associação desta quinase com as proteínas SHPTP2 e STAT1 / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T10:20:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delattre_Edson_M.pdf: 5860184 bytes, checksum: df331b5d5bdcc08a28a0871326e0528b (MD5) Previous issue date: 1981 / Resumo: Neste trabalho, propôs-se estudar os possíveis efeitos inibitórios de antibióticos da família da gentamicina sobre a secreção de insulina bem como elucidar os mecanismos envolvidos nessa inibição. Numa etapa preliminar, validou-se um radioimunoensaio (RIE-PEG) para dosagem de insulina de rato secretada in vitro. Para esse fim, após titulação do anticorpo e determinação da sua constante de associação e capacidade ligante, foram executadas a prova da diluição e ensaios comparativos entre as insulinas murina, bovina e porcina, com o objetivo de verificar da identidade imunoquímica entre essas insulinas. Constatada a falta dessa identidade, ao se comparar insulina de rato com insulina de boi ou porco, optou-se pela execução e emprego, em cada RIE-PEG, de uma curva de equivalência, a fim de se ajustar os dados obtidos em curvas de insulina bovina. Finalmente, foi determinada a precisão intra-ensaio de um RIE-PEG executado em condições de rotina. Os resultados obtidos na validação do RIE-PEG permitiram concluir-se que: As insulinas bovina e porcina não são referenciais adequados para radioimunoensaios de insulina. O uso de uma curva de equivalência, para o ajuste de valores lidos em curva de insulina bovina, possibilita, ao menos, a obtenção de resultados qualitativamente corretos. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas