Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Estudos demonstram que polimorfismos nos genes das citocinas estão envolvidos na patogênese de várias doenças humanas neoplásicas e não neoplásicas. O polimorfismo da IL-6 parece estar envolvido com o alto risco de câncer ginecológico, inclusive câncer cervical. Este estudo, caso-controle, compara o polimorfismo da IL-6 em 56 mulheres com câncer cervical com um grupo de 253 mulheres saudáveis atendidas pelo serviço de saúde da UNIFESP/EPM. Todas foram testadas pela técnica de reação em cadeia da polimerase para o gene da IL-6 e posteriormente genotipadas pela técnica de polimorfismo de fragmentos de DNA obtidos por enzimas de restrição. Os genótipos GG, GC e CC do grupo de casos e do grupo controle são estatisticamente diferentes (p=0,033), quando comparados aos genótipos GC e CC do grupo de câncer cervical, tendo o GG como referência. Apresentam, dessa forma, um risco aumentado de 1,90 ajustado para idade (intervalo de confiança de 95% 1,1-3,4) para desenvolverem o referido tumor. Nosso estudo sugere que mulheres infectadas com HPV, que têm ao menos um alelo C na região promotora do gene da interleucina-6 (–174G/C), têm um risco maior de desenvolver o câncer cervical. / Recent data implicate that cytokine gene polymorphisms are important in pathogenesis of various neoplastic and nonneoplastic human diseases, and it was recently suggested that polymorphisms in interleukin (IL)-6 might increase the risk of gynecological malignancies, including cervical carcinomas. The aim of this case-control study is to compare the IL-6 polymorphisms in cervical cancer patients and healthy controls and to assess whether any of these polymorphisms would increase the risk of developing cervical cancer. The material in this case-control study consists of 56 patients with cervical carcinoma and 253 population based control subjects, all ethnic Brazilian women. Control subjects were cancer-free women, following a negative cervical cytology and colposcopy. IL-6 genotyping was performed using a polymerase chain reaction–based restriction fragment length polymorphism. Distribution of the GG, GC, and CC genotypes in cases and controls was significantly different (P=0.033). Compared with the GG genotype as reference, the adjusted odds ratio for the combined GC and CC genotypes in cancer patients was 1.90 (95% confidence interval, 1.1–3.4). These data suggest that women carrying at least one C genotype in their IL-6 promoter region (–174G/C) are at higher risk of developing cervical cancer. / FAPESP: 03/04533-1 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Fernando Henrique Azevedo Lopes. Níveis séricos de interleucina-6 e polimorfismo - 174G>C em infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis. 2012. 70 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T13:15:49Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_fhalopes.pdf: 6329480 bytes, checksum: 293198c77f20aefef6e6e1fef618297a (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T13:16:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_fhalopes.pdf: 6329480 bytes, checksum: 293198c77f20aefef6e6e1fef618297a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-03T13:16:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_fhalopes.pdf: 6329480 bytes, checksum: 293198c77f20aefef6e6e1fef618297a (MD5) Previous issue date: 2012 / Interleukin-6 (IL-6) is an important cytokine involved in the pathogenesis of multiple infectious diseases. The aim of this study was to investigate the levels of IL-6 production and to correlate to the -174G>C polymorphism at the IL-6 gene in latent infection with M. tuberculosis (ILTB). As controls, two groups were used. One of them with active pulmonary tuberculosis (TB) patients and the other with healthy blood donors. ILTB group was composed by 15 individuals, selected among active pulmonary TB contacts seen at the Hospital São José de Doenças Infecciosas and the Centro de Saúde da Família Anastácio Magalhães. TB group had 38 patients with active pulmonary disease seen at the Hospital de Messejana, Hospital de Maracanaú and the Hospital Geral Dr. César Cals. The third group was composed by 63 healthy blood donors from the Centro de Hematologia e Hemoterapia do Ceará. Serum levels of IL-6 were measured by an ELISA using specific kits from Invitrogen Corporation. For DNA purification a GFX Genomic Blood DNA Purification kit (GE Healthcare) was used. The -174GC polymorphism was analyzed by a SSP-PCR method using One-Lambda kits. Median values of serum levels of IL-6 from ILTB, TB and healthy groups were, respectively, 1.7 pg/mL, 4.3 pg/mL and 0.5 pg/mL (p < 0.0001). For the three studied group, the most frequent genotype found was the G/G (ILTB = 80%; TB = 58.9%; saudáveis = 62.8%). In conclusion, it is possible to consider that IL-6 should play an important role in the maintenance of latent infection state as its concentrations were 3.4 fold higher in ILTB group than that of healthy controls. Moreover, the -174GC polymorpism was not functional in the ILTB group. / A interleucina-6 (IL-6) é uma importante citocina que exerce papel fundamental na imunopatogênese de diversas doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi investigar o nível de produção sistêmica de IL-6 e aferir o papel funcional do polimorfismo -174 G>C do gene dessa citocina em indivíduos diagnosticados como portadores de infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis (ILTB). Para controle, foram utilizados dois grupos de comparação: um deles composto por portadores de tuberculose pulmonar ativa (TB) e o outro formado por indivíduos saudáveis, doadores de sangue. O grupo ILTB foi composto por 15 indivíduos, selecionados dentre os contactantes de portadores de TB pulmonar ativa, atendidos no Hospital São José de Doenças Infecciosas e no Centro de Saúde da Família Anastácio Magalhães. O grupo TB foi formado por 38 pacientes com TB pulmonar ativa, procedentes do Hospital de Messejana, Hospital de Maracanaú e Hospital Geral Dr. César Cals. O grupo de indivíduos saudáveis contava com 63 doadores voluntários de sangue do Centro de Hematologia e Hemoterapia do Ceará. A dosagem sérica de IL-6 foi realizada por meio de um ensaio imunoenzimático (ELISA), com kit específico fornecido pela Invitrogen Corporation. Para purificação do DNA, foi utilizado o kit GFX Genomic Blood DNA Purification, da GE Healthcare. O polimorfismo -174GC do gene da IL – 6 foi tipificado pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), utilizando-se iniciadores de sequência específica (PCR-SSP) (One-Lambda). As medianas de concentrações séricas de IL-6 para os grupos ILTB, TB e saudáveis foram de, respectivamente, 1,7 pg/mL, 4,3 pg/mL e 0,5 pg/mL (p < 0,0001). Nos três grupos estudados, o genótipo encontrado com maior frequência foi o G/G [ILTB = (80%); TB = (58,9%); saudáveis = (62,8%)]. Em conclusão, podemos inferir que a IL-6 deve desempenhar um papel importante na manutenção do estado de latência, haja vista que sua concentração, nos indivíduos com ILTB, foi 3,4 vezes maior que no grupo saudável. Ademais, constatamos que, na população estudada, o polimorfismo -174GC não se mostrou funcional no âmbito da infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:41:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) maristela_hernadez_ioc_dout_2007.pdf: 1703579 bytes, checksum: c6aea9db2011c8948799e66defbf0152 (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os receptores da família LILR (Leukocyte Immunoglobulin- like Receptor) pertencem à superfarm1ia .das imunoglobulinas e são expressos em células de origem mielóide e linfóide. Os receptores inibidores (LILRB) apresentam longos domínios citoplasmáticos contendo de 2 a 4 domínios ITIM e são capazes de inibir ativação celular recrutando proteínas tirosinas fosfatases SHP-I. Já os receptores ativadores (LILRA) apresentam curto domínio citoplamático mas após associação com a cadeia gama do receptor Fc, que apresenta domínio ITAM, são capazes de transduzir sinais estimulatórios às células. Já foi demonstrado que LILRB I e LILRB2 podem inibir a citotoxidade de células NK e aumentar o limite de ativação de linfócitos T. Pouco se sabe a respeito da função dos receptores ativadores. No entanto. foi observado que LILRA2 estava com a expressão gênica aumentada nas lesões dos pacientes de hanseníase do polo lepromatoso. A função deste receptor foi investigada e os possíveis efeitos do Mycobacterium leprae sobre a ativação induzida por LILRA2 avaliados Foram realizados experimentos de "cross-linking" em células dendríticas derivadas de monócitos (MDDC). Inicialmente, foi observado que após a estimulação àtravés de LILRA2 ocorria aumento no conteúdo de proteínas tirosina fosforiladas, sugerindo haver transdução de sinal. Também foi observado que as MDDC estimuladas via LILRA2 apresentavam marcadores de ativação celular, como a expressão de CD83, aumento na expressão de moléculas co-estimulatórias e do MHC. Foi observado ainda que a ativação de LILRA2 não induz a secreção de níveis significativos das citocinas. No entanto, um forte efeito sinergístico na secreção de TNF e IL-IO pode ser observado quando as células eram estimuladas via LILRA2 e TLR4 ou CD40. Foi observado ainda que após o "cross-linking", as MDDC apresentam forte capacidade aloestimulatória. A presencade células LILRA2+ CD68+ nas lesões dos pacientes lepromatosos foi detectada utilizando microscopia confocal. Nos experimentos subseqüentes foi avaliado se o M. leprae ativaria as MDDC e modularia a ativação induzida por LILRA2. Inicialmente observamos que as MDDC estimuladas com M. tuberculosis, mas não com M. leprae, secretam TNF Baixas concentrações de IL-IO foram encontradas nas culturas estimuladas com M. leprae quando comparadas às culturas estimuladas com M tuberculosis. E ainda, o M. tuberculosis, mas não o M. leprae, teve efeito sinergístico com LILRA2 na produção de TNF. Na tentativa de encontrar o ligante deste receptor, foi gerado um tetrâmero e sua ligação a diversos tipos celulares foi testada. Interação do tetrâmero com monócitos estimulados com IL-4 e também MDDC foi detectada. Embora experimentos de imunoprecipitação tenham sido realizados, o ligante não foi encontrado. Até o momento, já observamos que a LILRA2 pode favorecer a maturação de MDDC, pelo menos in vitro, e contribuir para aumentada produção de citocinas. O M. leprae não parece ser um potente ativador das células dendríticas e ainda pode limitar a ativação induzida por outros receptores. A elevada expressão de moléculas coestimulatórias, a presença de IL-I O e ausência de IL-12 nas MDDC estimuladas com M. leprae ou via LILRA2 sugere que estes podem estar envolvidos na indução de tolerância observada nos pacientes lepromatosos / LILR (Leukocyte Immunoglobulin- like Receptor) are a family of receptors from the immunoglobulin superfamily expressed on myeloid and lymphoid cells. LILR are characterized by either 2 or 4 homologous Immunoglobulin-like dom ais. One subset of receptors, LILRB, displays long citoplasmatic tails containing immuno receptor tyrosine-based inhibitory motifs (ITIM). These receptors inhibit cell activation by recruiting protein tyrosine phosphatase SHP-1. Another subset of receptors, LILRA, contains short cytoplasmatic domain that lack recognizable docking motifs for signalling mediators. These rece ptors associate with the gamma chain of the Fc receptor, which transduces stimulatory signals b y recruiting protein tyrosine kinases through a cytoplasmatic immunoreceptor tyrosine-based activat ion motif (ITAM). A third subset of receptors has no transmembrane domain and is secret ed as a soluble receptor. Some of these receptors, LILRB1 and LILRB2, are specific receptor s for MHC class I molecules. LILRBs have been shown to inhibit cell activation in several ex perimental systems. Little is know about the activating receptors. LILRA2 was found to be up-reg ulated in lesions of lepromatous leprosy patients. In order to clarify whether this receptor might influence the immune response in leprosy, the function of this receptor was investigated. Cro ss-linking of LILRA2 on dendritic cell (DC) caused an up-regulation on protein tyrosine phospho rylation, suggesting LILRA2 stimulates intracellular signaling. Upon cross-linking, DC exp ress high levels of MHC I and II and co- stimulatory molecules, but cytokines were not detec ted on culture supernatant. However, a strong synergistic effect on TNF and IL-10 production was observed when cells were simultaneously stimulated by LILRA2 and TLR4 or CD40. LILRA2 activ ated DC also induced allogeneic T lymphocytes proliferation. By double immunofluoresc ence labeling, it was identified that LILRA2 is expressed on macrophage-like CD68+cells i n lepromatous leprosy skin lesions. The capacity of M. leprae to induce DC activation and/or to modulate LILRA2- induced activation was further investigated. In functional experiments it was observed that M. tuberculosis but not M. leprae stimulated cells induce TNF secretion. IL-10 was d etected on M. leprae -stimulated cultures, albeit at lower level than that of M. tuberculosis -stimulated cells. M. leprae had no synergistic effect on LILRA2 activated cells. To id entify LILRA2 ligand, a tetramer was generated and it’s binding to different cell types was tested. The tetramer interacted with IL-4 stimulated monocytes and DC. Although Immunoprecipi tation experiments were preformed, the ligand was not successfully identified. The data ob tained so far indicates that LILRA2 activation enhances DC maturation markers expression and cytok ine secretion by activated DC. M. leprae is not a potent DC activator. The high surface levels of co-stimulatory molecules, the presence of IL-10 and absence of IL-12 suggest that DC stimulat ed by M. leprae or LILRA2 are only partially activated and they might contribute to lepromatous leprosy tolerance

Made available in DSpace on 2016-03-04T14:02:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 priscila_andrade_ioc_dout_2014.pdf: 6946480 bytes, checksum: 1eca06682311d8d83fb18d7d32053a36 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Na hanseníase, a reação reversa (RR) é considerada um fenômeno de reativação imune, no qual uma resposta inflamatória abrupta se inicia, comprometendo a pele e os nervos periféricos. A RR ocorre ao longo do espectro da hanseníase, sendo descrita, inclusive, nas formas anérgicas lepromatosas (LL) subpolares. É sugerido que nas formas reacionais, células imunes da pele como macrófagos e células dendríticas, se tornam ativadas espontaneamente e iniciam uma resposta imune contra componentes do Mycobacterium leprae (ML), o que levaria a quebra da imunossupressão pré-existente. O objetivo desse estudo é caracterizar as populações celulares que constituem as lesões de pele L-lep (BL e LL) antes e no início da RR, assim como, determinar a programação genética envolvida na quebra da anergia tecidual nesse grupo durante esse episódio. O início da RR altera drasticamente a organização e morfologia da lesão L-lep, levando ao aparecimento de novas estruturas e tipos celulares, como células epitelioides, granulomas e uma grande diversidade fenotípica de macrófagos e células dendríticas. O marcador de células dendríticas plasmocitoides, CD123, foi mais expresso em lesões de pele RR do que no tecido não reacional, com a população CD123+ exibindo tanto marcadores fenotípicos de macrófagos quanto de células dendríticas. Por sua vez, o ML pôde induzir a expressão dessa molécula in vitro A análise de expressão gênica mostrou um aumento dos níveis de RNA mensageiro da interleucina-3 (IL-3), fator estimulador de colônias de macrófagos (M-CSF), fator estimulador de colônias de macrófagos e granulócitos (GM-CSF), fator de necrose tumoral-\03B1 (TNF\03B1), interferon-\03B3 (IFN-\03B3), indoleamina-2,3-dioxigenase (IDO), interleucina-15 (IL-15), receptor de vitamina D (VDR), quimiocina CXCL10 e receptor Toll-like 2 (TLR2) nas lesões RR quando em comparação com o grupo L-lep. Em síntese, nosso estudo demonstrou que o microambiente da lesão RR favorece a diferenciação e plasticidade celular, além de exibir uma variedade de populações mielomonocíticas, destacando o papel das células CD123+ e de um eixo de ativação dependente de IL-3 durante a RR / In leprosy, type 1 reaction (T1R) is considered a Th1 immune reactivation in which a sudden inflammatory response takes place that compromises t he skin and peripheral nerves. T1R occurs across the leprosy clinical spectrum and has even been d escribed in the anergic subpolar lepromatous (LL) forms. It is hypothesized that in the T1R forms, skin immune cells such as macrophages and dendritic cells (DCs) become activated, which in turn could initiate a local innate immune response against the exi sting Mycobacterium leprae (ML) components, overwhelm ing the predominant immunosuppressive state. The aim of the present study is to characterize the skin cellular populations that constitute the BL and LL (L - lep) skin lesion before and during the T1R epis ode , as well as to determine the gene programming involved in the disruption of the tissue immunosuppression brought about by this phenomenon. The outset of T1R drastically alters the morphological landscape of the LL skin lesion, leading to the appearance of new structures and cell types such as epithelioid granulomas and a wide variety of macrophagic and DC phenotypes. The plasmacytoid DC marker, CD123, was more intensely expressed in T1R skin lesions than in non - reactional tissue, with CD123 + cells exhibiting both macrophag ic and DC phenotypic markers. In turn, ML, but not TNF - α, was able to increase CD123 expression while gene expression analyses demonstrated IL - 3, M - CSF , GM - CSF , TNF α , IFN - γ , IDO , IL - 15 , VDR , CXC L 10, and TLR2 upregulation in the T1R lesions in comparison to the non - reactional group. In summary , our study showed that the T1R lesion environment favors cell differentiation and plasticity in addition to displaying a high diversity of myelomonocytic populations and highlighting the role of CD123 + cells and the IL - 3 axis during the progression of T1R.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 bruno_alves_ioc_mest_2014.pdf: 1630885 bytes, checksum: 8913e4844c4acbc32212713a6c96f73c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Pacientes infectados pelo HIV-1 apresentam maior permeabilidade intestinal, a qual permite a passagem para a circulação sangüínea de elevada quantidade de produtos microbianos, fenômeno conhecido por translocação microbiana. Tal fenômeno induz crônica ativação do sistema imune, um dos principais mecanismos indutores da queda do número de linfócitos T CD4+ nos pacientes infectados. Dentre os produtos translocados encontram-se ligantes dos receptores tipo Toll (TLR), os quais reconhecem componentes microbianos e podem, portanto, ser ativados por uma grande variedade de patógenos. A ativação de TLR desencadeia uma complexa cascata de sinalização, induz a síntese de diversas citocinas, e modula a função de células dendríticas, macrófagos e linfócitos, células-alvo da infecção pelo HIV-1. Em estudos realizados em nosso laboratório vimos que a ativação de TLR2 resulta na inibição da replicação do HIV-1 em linfócitos e macrófagos, fenômeno este mediado pela citocina IL-10 e por \03B2-quimiocinas. No entanto, tendo em vista a potente resposta imunitária inata desencadeada pela ativação de TLRs, com a produção de ampla variedade de produtos inflamatórios, era possível que outros fatores, como a citocina IL-27, um potente inibidor da replicação do HIV-1, estivessem envolvidos na inibição da replicação viral gerada pela ativação deste receptor. Neste trabalho, investigamos se a IL-27 estaria envolvida na inibição da replicação induzida pela ativação de TLR2. Para tanto, tratamos macrófagos primarios humanos com agonistas de TLR2 para analisar a expressão e produção de IL-27 por qPCR e ELISA Nossos dados mostram que Pam3CSK4, ligante do dímero TLR2/TLR1, promoveu um aumento de expressão de EBI3 e p28 (subunidades da IL-27), e que Pam2CSK4 aumentou a expressão de EBI3. Os mesmos ligantes aumentaram nos níveis de IL-27p28 solúvel medidos por um kit de ELISA que detecta apenas a subunidade IL-27p28. Entretanto, a IL-27 em sua forma heterodimérica não foi encontrada quando um kit de ELISA capaz de detectar as duas subunidades da IL-27 foi utilizado. A seguir, observamos que a inibição da replicação do HIV-1 por ambos os ligantes de TLR2 foi significantemente revertida por anticorpos policlonais bloqueadores da IL-27. Da mesma forma, o bloqueio da via de MyD88, uma proteína adaptadora com papel na sinalização desencadeada pela maioria dos TLRs, o efeito anti HIV-1 de Pam2CSK4, mas não o de Pam3CSK4. Por que a inibição do HIV-1 mediada por IL-27 é dependente de Interferon tipo 1 (IFN-1), a expressão de IFN-1 e APOBEC3G (um gene estimulado por IFN-1 que inibe o HIV-1) também foi avaliada, e descobrimos que a expressão de nenhum dos dois genes foi modulada pela ativação de TLR2. Finalmente, a ativação de TLR2 induziu aumento na expressão de p35 e p40, subunidades de citocinas da família da IL-12/IL-27. Concluindo, nossos resultados sugerem que a subunidade p28 da IL-27 (IL-27p28) está implicada na redução da replicação do HIV-1 induzida por TLR2 em macrófagos humanos. Nosso estudo também abre caminho para a investigação do papel de outros membros da família de citocinas da IL-12 (como a IL-35) no controle da replicação do HIV-1 / HIV - 1 infected patient s present increased intestinal permeability , which allows the passage of microorganisms or microbial antigens to the blood, phenomenon known as microbial translocation . This phenomenon induces a chronic activation of the immune system of these patients, which is one of the main mechanisms contributing for the decrease of the CD4 + T cell number in HIV - 1 - infected patients . Among st the translocated products are several agonists of Toll like receptor (TLR), whic h recognize microbial component s and may , therefore , be activated by a large variety of pathogens . TL R activation triggers a complex signaling pathway , induces the synthesis of several cytokines , and modulates the function of dendritic cells, macrophages and lymphocytes , cells that are target for HIV - 1 infection . Studies performed in our laboratory show t hat TLR2 activation results in inhibition of HIV - 1 replication in lymphocytes and macrophages , a phenomenon mediated by IL - 10 and β - chemokines . However , because of the potent innate i m mune response triggered by TLR activation , resulting in the production of a wide variety of inflammatory molecules , it is possible that other factors contribute to reduce the HIV - 1 replication in this condition. In this study , we investigate whether the cytokine IL - 27, a potent inhibitor of HIV - 1 replication , could be involv ed in inhibition of HIV - 1 replication upon activation of TLR2 . Thus, h uman primary macrophages were treated with different TLR2 agonists in order to analyze the expression and production of IL - 27 by qPCR and ELISA. We found that Pam3CSK4 increased the expr ession of EBI3 and p28 (IL - 27 subunits ) , and Pam2CSK4 increased the expression of EBI3. The same ligands augmented the production of soluble IL - 27p28, as measured by an ELISA kit that detects only the IL - 27p28 subunit . However, the IL - 27 in its heterodi mer ic structure was not found when an ELISA kit able to detec t both IL - 27 subunits was used . Next, we observed that the inhibition of HIV - 1 replication induced by both TLR2 ligands was significantly reversed by anti - IL - 27 monoclonal antibodies. Likewise, the blockage of MyD88 pathway reduced (over 80%) the anti - HIV - 1 effect of Pam2CSK4 , but not the HIV - 1 inhibitory effect induced by Pam3CSK4. Because the IL - 27 - mediated HIV - 1 inhibition is dependent of Interferon type - 1 (IFN - 1), the expression of IFN - 1 and APOBEC3G (an IFN - 1 stimulated gene that inhibits HIV - 1) was also assessed, and we found that the expression of both genes was not modulated by TLR2 ligation. Finally, the TLR2 activation led to an enhanced expression of p35 and p40, subunits of the IL - 12/I L - 27 family of cytokines. In conclusion, our results suggest that the IL - 27 subunit p28 (I L - 27p28) is implicated in the TLR2 - induced reduction of HIV - 1 replication in primary human macrophages. Our study also warrants the investigation of the role of other members of IL - 12 family of cytokines (such as IL - 35) in the control of HIV - 1 replication.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:07:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 bianca_franca_ioc_dout_2015.pdf: 11028145 bytes, checksum: e8f2a4ece5e213dd7f7e288656fd0f9d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A produção aumentada de eosinófilos pela medula óssea sustenta a inflamação crônica na asma, compensando a apoptose de eosinófilos maduros nos sítios inflamados. Outros trabalhos mostraram que a eosinopoiese poderia ser suprimida pela prostaglandina E2 (PgE2) por uma via iNOS-CD95L dependente. Sendo a PgE2 um ativador da produção de AMPc intracelular, testamos uma série de agentes capazes de mimetizar este aumento de AMPc. Foram realizadas culturas de medula óssea em meio líquido ou semi-sólido para a análise da eosinopoiese e neutropoiese a partir de camundongos mutantes e seus respectivos controles de tipo selvagem (WT), dos backgrounds BALB/c, C57BL/6. Todos os agentes testados, incluindo isoproterenol, mimetizaram os efeitos de PgE2, suprimindo a eosinopoiese pela mesma via utilizada para supressão pela PgE2. Outros agentes como a IL-17A, uma citocina pró-inflamatória, e a a- galactosilceramida (\03B1-GalCer), um glicolipídeo que ativa células iNKT de forma restrita por CD1d, também suprimiram a eosinopoiese pela via de iNOS-CD95L, mas cada agente utilizou um ponto de atuação e um mecanismo de ação próprio. Por outro lado, o ácido retinóico all-trans (ATRA) também suprimiu a eosinopoiese de forma dependente de CD95L, mas um papel para a iNOS só foi evidenciado, até o momento, para a supressão de formação de colônias pelo ATRA na presença de GM-CSF. Também evidenciamos uma interrelação entre a via da cicloxigenase (COX), a via da 5-lipoxigenase (5-LO) e a ação dos glicocorticóides (GC) na regulação da eosinopoiese Dados anteriores do laboratório mostram que: a) na ausência de 5-LO, a medula óssea estimulada por IL-5 não responde aos inibidores da COX, que potencializam a eosinopoiese em controles WT (Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008)(Elsas et al., 2008); b) a ação supressiva da PgE2 é antagonizada pelos cisteinil-leucotrienos, produtos da 5-LO, e também pelos glicocorticóides (Gaspar-Elsas et al., 2009). Neste trabalho, mostramos que controles WT e mutantes WASP-KO (deficientes na proteína do Síndrome de Wiskott-Aldrich, que é um elemento importante na motilidade e função de defesa de várias células hematopoiéticas, por sua função no controle do citoesqueleto) respondem normalmente aos inibidores da COX na presença de 5-LO. Mutantes WASP-KO apresentaram menor celularidade da medula óssea recém-coletada, com um déficit significativo na população granulocítica, e não apresentaram resposta eosinopoiética a GC, nem in vivo nem in vitro, com respostas normais à PgE2. Os bloqueadores da COX reconstituíram a eosinopoiese in vitro na medula óssea mutante de forma dependente de 5-LO e leucotrienos. Portanto, WASP mostrou-se relevante tanto para a celularidade da medula óssea in vivo quanto para a sinalização da resposta ao GC. Essas observações reforçam o interesse de estudar a influência dos GC sobre a produção de granulócitos in vivo, e permitem distinguir com base em critério bioquímico (WASPdependência), a via de atuação dos GC daquela via utilizada pelos produtos da 5-LO para bloquear a eosinopoiese iNOS/CD95L-dependente / Increased eosinophil production by bone-marrow sustains chronic inflammation in asthma, by replacing mature eosinophils which undergo apoptosis in inflammatory sites. Other studies have shown that eosinopoiesis could be suppressed by prostaglandin E2 (PgE2) in vitro. Because PgE2 increases intracellular cAMP levels, we tested a panel of agents capable of induction or mimesis of intracellular cAMP rises. We established bone-marrow cultures, in liquid or semisolid media, to examine eosinopoiesis and neutropoiesis, from mutant mice and their respective wild-type (WT) controls of the BALB/c and C57BL/6 backgrounds. All these agents, including isoproterenol, duplicated the effects of PgE2, suppressing eosinopoiesis by the same biochemical pathway previously characterized for PgE2. Other agents such as IL-17 A, a proinflammatory cytokine. and a-galactosilceramide (\03B1-GalCer), a CD1d-restricted glycolipid which activates iNKT cells, also supressed eosinopoiesis through the iNOS-CD95L pathway, but each agent entered the sequence at a distinctive point and used a distinctive mechanism of action. By contrast, all-trans Retinoic Acid (ATRA) also suppressed eosinopoiesis in a CD95L-dependent manner, but a role for iNOS was so far only demonstrated in suppression of colony-formation by ATRA in the presence of GM-CSF. We also demonstrated the three-way connectivity between the cyclooxygenase (COX) pathway, the 5-lipoxygenase (5-LO) pathway and glucocorticoid (GC) regulatory effects on eosinopoiesis. Our group previously reported that: a) in the absence of 5-LO, IL-5-stimulated bone-marrow did not respond to COX inhibitors, which enhance eosinopoiesis in WT bone-marrow; b) the supressive effects of PgE2 are antagonized by cysteinilleukotrienes, produced by 5-LO, and by GC (Elsas et al., 2008) Here we show that WT controls and WASP-KO mutants (lacking the Wiskott-Aldrich Syndrome Protein, a critical element in motility and immunological function of various hemopoietic cell types, due to its role in cytoskeleton regulation) respond normally to COX inhibitors in the presence of 5-LO. WASPKO mutants present lower cellularity in freshly harvested bone-marrow, with significantly decreased granulocyte numbers, and lack an eosinopoietic response to GC, in vitro and in vivo, but show normal responsivess to PgE2. COX inhibitors reconstituted eosinopoiesis in mutant bone-marrow in vitro in a 5-LO- and cysteinyl-leukotriene-dependent manner. Hence, WASP is relevant to bone-marrow cellularity in vivo, as well as to GC signaling. This highlights the interest of further studying the influence of GC on in vivo granulocyte production, and enables us to distinguish, based on a biochemical criterion (WASP-dependency), the targets of GC from the pathway used by cysteinyl-leukotrienes to prevent iNOS-CD95L-mediated suppression of eosinopoiesis / 2100-04-28

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-05-11T16:05:45Z No. of bitstreams: 1 Barbara Maria Nascimento de Oliveira Produção... 2016.pdf: 2363764 bytes, checksum: ec48ade14eccf109aecb436eec7cd66a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-05-11T16:05:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Barbara Maria Nascimento de Oliveira Produção... 2016.pdf: 2363764 bytes, checksum: ec48ade14eccf109aecb436eec7cd66a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-11T16:05:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbara Maria Nascimento de Oliveira Produção... 2016.pdf: 2363764 bytes, checksum: ec48ade14eccf109aecb436eec7cd66a (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO. A interleucina 7 (IL-7) é uma citocina pleiotrópica produzida principalmente por células estromais da medula óssea, células epiteliais tímicas e intestinais. IL-7 e que promove o desenvolvimento de linfócitos T e B e diferenciação de células T memória, especialmente CD4+. Por isso, diversos autores têm estudado a capacidade de IL-7 promover a restauração da população de linfócitos em situações de linfopenia e resposta imune de memória. Cães que desenvolvem leishmaniose visceral e recebem tratamento especfico apresentam cura clínica. No entanto, após a interrupção do tratamento, a maioria dos animais exibe recaída da doença, mesmo na ausência de reinfecção. É possível que esse fenômeno esteja associado a uma dificuldade de estabelecimento de linfócitos T de memória específicos para Leishmania em cães. Em nosso laboratório, tentativas prévias foram realizadas para produzir a IL-7 canina em Escherichia coli, no entanto, o rendimento da proteína biologicamente ativa foi pequeno. OBJETIVO. Por isso, resolveu-se avaliar a viabilidade de produzir IL-7 do sistema baculovírus-células de inseto. MATERIAL E MÉTODOS. No presente trabalho, uma construção de DNA foi concebida contendo uma sequência de nucleotídeos que codificam o peptídeo sinal da proteína GP64 do baculovírus da Autographa californica (AcMNPV), a IL-7 canina (proteína madura) com códons otimizados para a tradução em Trichoplusia ni, um espaçador com 23 aminoácidos e uma cauda de seis histidinas. A construção de DNA elaborada foi sintetizada quimicamente, inserida em um plasmídeo de clonagem (pUC57-GP64caIL-7), subclonada em um plasmídeo carreador (pFastBac1- GP64caIL-7), adequado para o sistema baculovirus-célula de inseto, e transferida para o cromossoma artificial do baculovírus recombinante (bacmídeo). RESULTADOS. A produção de IL-7 recombinante canina (rcaIL-7) em células de inseto infectadas com baculovírus recombinante foi otimizada. Em seguida, a rcaIL-7 foi produzida em células High-five cultivadas em suspensão utilizando multiplicidade de infecção (MOI) de 5 e tempo de infecção (TOI) de 48 h. A proteína recombinantes foi purificada por cromatografia de afinidade em Sepharose-níquel, obtendo-se um rendimento médio de 5,5 mg por litro de cultivo. CONCLUSÃO. RcaIL-7 purificada, avaliada a 40 ng/mL, mostrou-se capaz de promover a proliferação de células mononucleares de sangue periférico de cães sadios, sem estímulo prévio ou concomitante, indicando que a proteína foi produzida biologicamente ativa. Futuros estudos serão realizados para avaliar a capacidade imunomoduladora da rcaIL-7 em cães e determinar a utilidade dessa citocinas no tratamento de enfermidades caninas, como por exemplo, na leishmaniose visceral canina. / INTRODUCTION. The interleukin 7 is a pleiotropic cytokine produced mainly by bone marrow stromal cells, thymus and intestinal epithelial cells. IL-7 promotes the development of T and B limphocytes and differentiation T cells to memory cells, especially T CD4+ cells. For these reasons, several authors have studied the ability of IL- 7 to promote restoration of the lymphocyte population in cases of lymphopenia and memory imune responses. Dogs which develop visceral leishmaniasis and are treated with specific drugs develop only transient clinical cure. After treatment withdrawal, most animals show disease relapse, even in the absence of reinfection. One possible explanation for the lack of control of the infection after treatment in dogs is a difficulty to develop/maintain specific memory T cells. Therefore, it is possible that effective treatments for canine visceral leishmaniasis be developed by manipulating the immune system. Previously, in our laboratory, it was attemped to produce recombinant canine IL- 7 (rcaIL-7) in Escherichia coli, however there was a low yield of biologically active protein. OBJECTIVE. In the current project, the baculovírus-insect cell system was evaluated to produce rcaIL-7. MATERIAL AND METHODS. In this study, a construction of DNA was designed to encode nucleotides of Autographa californica GP64 signal peptide, canine IL-7 (mature protein) with optimized codons for Trichoplusia ni, a 23-amino acid spacer and a six histidine tail. The DNA construct was chemically synthesized, inserted into a cloning plasmid (pUC57-GP64caIL-7), subcloned into a carrier plasmid (pFastBac1-GP64caIL-7), suited to the baculovirus-insect cell expression system, and transfered to an artificial chromosome of the recombinant baculovirus (bacmid). RESULTS. Recombinant protein expression was optimizatized, then, the rcaIL-7 was produced in a cell culture in suspension using multiplicity of infection (MOI) 5 and time of infection (TOI) 48 hours. Subsequently rcaIL-7 was purified by Nickel Sepharose-Affinity chromatography, obtaining an average yield of 5.5 mg per liter of culture. CONCLUSION. The purified recombinant rcaIL-7 at 40 ng/mL was able to induce prolifereation of peripheral blood mononuclear cells of heath adult dog, suggesting it was biologically active. Given the results, the rcaIL-7 may be used in further studies to assess its ability to modulate canine immune system, that would be useful for the development immunotherapy

LEITE, C. A. V. G. Bloqueio do receptor da interleucina-1 com Anakinra Inibe a cistite hemorrágica induzida por ifosfamida. 2014. 117 f. Faculdade de Medicina, Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Universidade Federal do Ceará, 2014. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-03-28T13:12:59Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_cavgleite.pdf: 15500726 bytes, checksum: 5778b5236486c0be61c59f733cd9532e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-03-28T13:13:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_cavgleite.pdf: 15500726 bytes, checksum: 5778b5236486c0be61c59f733cd9532e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-28T13:13:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_cavgleite.pdf: 15500726 bytes, checksum: 5778b5236486c0be61c59f733cd9532e (MD5) Previous issue date: 2014-04-11 / Hemorrhagic cystitis (HC) induced by ifosfamide (IFO) is an important clinical complication in patients with cancer. Despite prophylaxis, HC is observed. The role of interleukin-1 (IL-1) and tumor necrosis factor (TNF) in the pathogenesis of HC provides targets for treatment. Thus, this study aimed to evaluate the protective effect of the IL-1 receptor antagonist (anakinra) and anti-TNF-alpha antibody (infliximab) in experimental HC-induced by IFO in mice. Swiss , C57BL6 , IL -1R-/-, CASP1-/-, TNFR1-/-, TNFR1/R2-/- mice were used. Animals were submitted to pre- treatment with anakinra 100 mg/ kg, ip or infliximab 5 mg/ Kg, ip, or saline ip, 1h after, they were treated with IFO 400 mg/ kg ip, and 12 h after IFO injection they were killed. Then, it was performed resection of the bladder for macroscopic and histopathological evaluation, vascular permeability assay, myeloperoxidase assay, muscle contractility, cistometrogram and flow cytometry to neutrophils and macrophages. Some animals prior to death, were subjected to evaluation of visceral nociception. Anakinra was able to attenuate hemorrhage, edema, neutrophil infiltration, visceral hypernociception and bladder dysfunction. In addition, it was observed reduction of inflammatory parameters and bladder infiltration of neutrophils and macrophages in IL -1R-/- mice, when compared to wild type animals. In contrast, caspase-1-/- mice did not change the inflammatory pattern when compared to wild type animals. Conversely, infliximab inhibited bladder edema and visceral hypernociception, but did not inhibit hemorrhage, infiltration of neutrophils and macrophages and bladder dysfunction. A reduction in bladder edema was also observed in TNFR1-/- mice, when compared with wild type animals, although TNFR1-/- mice did not block infiltration of neutrophils and macrophages. In other hand, TNFR1/R2-/- mice treated with IFO showed a deterioration of HC. Thus, this study shows the efficacy of anakinra in preventing the HC syndrome induced by IFO, and efficacy of infliximab in inhibiting hypernociception. In addition, the pathogenesis of HC appears to be independent of IL- 1β produced by caspase-1 or IL-1α dependent. Furthermore, HC appears to be partially dependent of TNFR1, but possibly arising from a physiological protection TNFR2. / Cistite hemorrágica (CH) induzida por ifosfamida (IFO) é uma importante complicação clínica em pacientes com câncer. Atualmente, mesna e hiper- hidratação são utilizadas como profilaxia, a despeito de ainda ser observada CH através de cistoscopia e histopatologia mesmo com essas medidas. A participação de interleucina-1 (IL-1) e fator de necrose tumoral (TNF) na patogênese da CH provê alvos para o tratamento dessa doença. Assim, esse trabalho objetivou avaliar o efeito protetor do antagonista do receptor da IL-1 (anakinra) e do anticorpo anti-TNF- alfa (infliximabe) nas respostas inflamatórias, nociceptivas e funcionais da CH experimental induzida por IFO em camundongos. Foram utilizados camundongos Swiss, C57BL6, IL-1R-/-, CASP1-/-, TNFR1-/-, TNFR1/R2-/-. Os animais WT foram submetidos ao tratamento com anakinra 100 mg/kg i.p. ou infliximabe 5 mg/kgi.p. ou salina i.p., foram tratados 1h após com IFO 400 mg/kg i.p., e 12 h após a IFO foi realizado o sacrifício, com excisão das bexigas para avaliação macroscópica, histopatológica, permeabilidade vascular, mieloperoxidase, contratilidade, cistometrografia e citometria de fluxo para neutrófilos e macrófagos. Alguns animais, antes do sacrifício, foram submetidos a avaliação de nocicepção visceral. Anakinra foi capaz de atenuar hemorragia, edema, infiltrado neutrofílico, hipernocicepção visceral e disfunção vesical. Além disso, foi observada redução dos parâmetros inflamatórios e no infiltrado vesical de neutrófilos e macrófagos em animais IL-1R-/-em comparação a animais selvagens. Por outro lado, com animais caspase-1-/-, não houve mudança no padrão inflamatório. O infliximabe, por sua vez, inibiu o edema vesical e a hipernocicepção visceral, sem interferir na hemorragia, no infiltrado de neutrófilos e macrófagos e na disfunção vesical. Foi observada também uma melhora do edema vesical em animais TNFR1-/-, sem melhora no infiltrado de neutrófilos e macrófagos, e observou-se uma piora da CH em animais TNFR1/R2-/-. Com isso, o presente trabalho demonstra a eficácia de anakinra em prevenir a síndrome da CH induzida por IFO, e a eficácia do infliximabe em inibir a hipernocicepção. Adicionalmente, a patogênese da CH parece ser independente de IL-1β produzido por caspase-1, ou dependente de IL-1α. Além disso, a CH parece ser dependente parcialmente do receptor TNFR1, e possivelmente possui uma proteção fisiológica advinda do receptor TNFR2.

Objetivo: Citocinas são sintetizadas e secretadas em resposta a uma variedade de estímulos inflamatórios, razão pela qual podem ser indicadores muito precoces de sepse neonatal precoce. A proposta deste estudo foi avaliar a contribuição da interleucina-6, fator de necrose tumoral-a e interleucina-1 P para o estabelecimento de critérios diagnósticos de sepse neonatal precoce. F oram estudadas correlações dos níveis plasmáticos dessas citocinas com testes laboratoriais comumente utilizados (leucograma) e com a presença de febre. Método: Foi realizado um estudo de coorte controlado com 117 recém-nascidos (RN) admitidos na Unídade Neonatal do HCPA no período compreendido entre julho de 1995 e agosto de 1996, com idade de zero a 5 dias de vida e suspeita clínica de infecção suficiente para o médico assistente indicar a necessidade de avaliação laboratorial. Nesse momento foi coletado material para hemograma, hemocultura ou qualquer outro teste cultural, dosagens plasmáticas de IL-6, TNF-a e IL-1 P, pela técnica de enzimoimunoensaio, utilizando-se kits R & D Systems. Os pacientes foram divididos em quatro grupos: Grupo I, sepse neonatal comprovada (n= 13); Grupo li, sepse presumível, sem uso de antibiótico pela mãe no periparto (n=36); Grupo III, sepse presumível, no entanto a mãe recebeu antibioticoterapia no periparto (n=17) e Grupo IV (n=51 ), RNs saudáveis, ou seja, aqueles com alguma suspeita clínica inicial de sepse, sem, no entanto, necessidade de antibioticoterapia para melhorarem e com ausência de germe na hemocultura e demais exames de cultura. Resultados: Os quatro grupos tiveram composição semelhante quanto ao peso de nascimento, idade gestacional, tipo de parto e escore de Apgar no 5° minuto. Não foi observada diferença entre os quatro grupos quanto a leucopenia, leucocitose, relação VT 2 </ 0,2, neutropenia e trombocitopenia. Um número reduzido de pacientes apresentou alguma dessas alterações laboratoriais. Como o comportamento dos parâmetros clínicos e laboratoriais dos Grupos I, II e III não mostrou diferença estatisticamente significativa, foi possivel agrupá-los em RN infectados (n=66) e compará-los com os não-infectados (n=Sl). A maioria dos RNs (82,9%) teve seu sangue coletado para avaliação dos níveis plasmáticos das citocinas nas primeiras 24 horas de vida. Interleucina-6 e TNF-a. foram significativamente mais elevados nos Grupos I, II e III, quando comparados com o Grupo IV. As medianas dos valores de IL-lP nos quatro grupos não foram estatisticamente diferentes. IL-6 e IL-1 p tiveram seus níveis plasmáticos mais elevados na presença de febre. A IL-1 p foi o melhor mediador da resposta febril no RN. Foram obtidas curvas ROC (receiver operating characteristics) para IL-6 e TNF-a. , a fim de estabelecer o ponto de corte ideal para esses mediadores. Com um ponto de corte de 32 pg/rnl para IL-6, a sensibilidade foi de 90%, e a especificidade, de 43%; o valor preditivo positivo foi de 67,4%, e o valor preditivo negativo, de 78,6%. Com relação ao TNF-a., o ponto de corte de 12 pg/rnl forneceu uma sensibilidade de 87,9% e uma especificidade de 43%. Os valores preditivos positivos e negativos foram, respectivamente, de 66,7% e 73,3%. Combinando os valores de pontos de corte de IL-6 e de TNF-a, a sensibilidade aumentou para 98,5%, demonstrando que essas citocinas contribuem decisivamente para o diagnóstico precoce de sepse neonatal precoce. Conclusão: É possível caracterizar a resposta inflamatória e o comportamento dos mediadores quando precocemente estudados na evolução da sepse neonatal precoce, pois as citocinas, de um modo geral, alteram-se no início da instalação do processo inflamatório e apresentam meia-vida muito curta. A avaliação do leucograma (leucopenia, relação 1/T) não foi efetiva para o diagnóstico de sepse neonatal precoce, provavelmente porque esses parâmetros laboratoriais necessitam de maior tempo para se mostrarem alterados que as citocinas estudadas. Os níveis plasmáticos de IL-6 e TNF -a foram significativamente mais elevados em RNs com sepse neonatal precoce comprovada ou presumível quando comparados com os de RNs saudáveis. A associação desses mediadores mostrou-se o melhor marcador para sepse no período pós-natal imediato. / Objectives: Cytokines are synthetysed and secreted in response to a variety of inflammatory stimuli, therefore they can be very initial indicators of early onset neonatal sepsis. The purpose of this study was to evaluate the contribution of interleukin-6, tumor necrosis facto r-a., and interleukin-1 J3 for the diagnosis of early onset neonatal sepsis. We studied the correlation between cytokine plasma leveis with commonly used laboratory tests (leukogram) and the presence offever. Methods: A cohort of 117 newborn infants (postnatal age within zero and 5 days old) admitted to the Neonatal Unit of Hospital de Clínicas de Porto Alegre, between July 1995 and August 1996, with a clinicai suspicion of infection were included in the study. At that moment, samples were collected for complete blood count, blood culture or any other culture, plasma leveis o f IL-6, TNF -a. and IL-1 J3 by enzyme-immunoassay (R&D Systems kits). Patients were divided in four groups: Group I: proved neonatal sepsis (n=13); Group II: probably infected with no maternal peripartum use of antibiotic (n=36); Group ill: probably infected but mother received peripartum antibiotic (n=17), and Group IV: newborn infants that did not receive any antibiotic therapy (n=Sl ). Resu1ts: The four groups were similar in relation to birth weight, gestational age, type o f delivery and Apgar scores in the fifth rninute o f life. There were no differences among the four groups in relation to the presence of leukopenia, leukocytosis, VT ratio </ 0.2, neutropenia, and thrombocytopenia. Very few patients had such alterations. There were no statistícal differences among groups I, Il and III in relation to clinicai and laboratory findings, therefore, they were put together (n=66) and compared with group IV. Most of the newborn infants (82.9%) had their blood collected in the first 24 hours of life. IL-6 and TNF-a. were significantly higher in groups I, II and III than in group IV. The median leveis of IL-1 p were similar in ali four groups. Newborn infants with fever had the highest leveis of IL-6 and IL-1 p. The latest was the best mediator for fever in the neonatal period. The optimal cutoff point obtained with the receiver operating characteristics (ROC) curve was 32 pglml for IL-6 (sensitivity = 90%, specificity = 43%, positive predictive value = 67.4%, negative predictive value = 78.6%) , and 12 pglml for TNF-a. (sensitivity = 87.9%, specificity = 43%, positive predictive value = 66. 7%, nega tive predictive value = 73.3% ). Combining IL-6 and TNF-a. cutoff points provides a sensitivity of 98%. Conclusion: It is possible to evaluate the inflammatory response during the evolution of early onset neonatal sepsis. Cytokines become abnormal very early. The blood count was not useful for diagnosis of early onset neonatal sepsis. IL-6 and TNF-a. leveis were signjficantly higher in newborn infants with neonatal sepsis than in normal newborn infants. The combination o f IL-6 and TNF -a. appears to be a highly sensitive marker o f sepsis in the immediate post-natal period.

Submitted by JOÃO PAULO BURIAN null (joaopauloburian@gmail.com) on 2016-04-07T19:17:24Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Alho.pdf: 1147027 bytes, checksum: 14de6564bb0a0f0b37cd02405a0bd734 (MD5) / Rejected by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Por favor, corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-04-08T12:38:59Z (GMT) / Submitted by JOÃO PAULO BURIAN null (joaopauloburian@gmail.com) on 2016-04-21T18:18:31Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Alho.docx: 1520845 bytes, checksum: 54391a3f711bcf02c685c8a8cdf13400 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-02T16:15:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 burian_jp_me_arafcf.pdf: 1339974 bytes, checksum: 93eb88dfc1c01bdf44ebb0d72bd5bfe8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T16:15:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 burian_jp_me_arafcf.pdf: 1339974 bytes, checksum: 93eb88dfc1c01bdf44ebb0d72bd5bfe8 (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O alho (Allium sativum L.) é cultivado em todo o mundo como hortaliça condimentar e medicinal desde 3.000 a. C. A aliina (composto majoritário) e a alinase permanecem em compartimentos separados nos bulbilhos de alho, e somente quando cortados ou triturados, a aliina é convertida em alicina pela ação da alinase. A alicina é o principal componente do alho, sendo atribuída a ela a maior parte das suas atividades biológicas, dentre elas as ações bactericida, antifúngica e antiviral. Porém, outros compostos do alho apresentam atividade antioxidante, hipocolesterolemiante, vasodilatadora, ação protetora contra diversos tipos de câncer e imunomoduladora. Ante a invasão de patógenos, o sistema imunológico desencadeia respostas que envolvem células como macrófagos e linfócitos. Essa complexa interação entre células é coordenada pela liberação de citocinas e outros mediadores. A nutrição tem papel relevante na modulação da resposta imune e inflamatória em diferentes tipos de doenças. As infecções por fungos são causas importantes de morbidade e mortalidade no homem principalmente em indivíduos imunossuprimidos. O Sporothrix schenckii, agente causal da esporotricose (micose subcutânea mais comum na América Latina), é fungo dimórfico, de vida saprofítica no solo ou em vegetais, infectando homens e os animais principalmente através de lesões e arranhões na pele. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do consumo de alho na imunomodulação de camundongos Swiss saudáveis e infectados por S. schenckii, a partir do estado funcional dos macrófagos peritoneais desses animais quanto à produção de óxido nítrico e das citocinas (IL-1β, IL-10 e IL-12) e avaliar o potencial antifúngico do alho frente ao S. schenckii por meio de teste de concentração inibitória mínima e unidades formadoras de colônia. Os resultados demonstraram que o alho apresenta potencial antifúngico frente S. schenckii. A administração oral de extratos de alho influencia a liberação de citocinas por macrófagos ex vivo, o consumo regular apresenta efeito anti-inflamatório em animais sadios, e seu uso agudo pode gerar uma resposta inflamatória. Camundongos que consumiram alho responderam de forma mais efetiva ao combate da infecção. / Garlic (Allium sativum L.) is grown all over the world as seasoning and medicinal food since 3,000 a. C. The aliin (major compound) and alliinase remain in separate compartments in intact garlic clove, and when the garlic is cut or crushed, the alliin is converted to allicin by the action of alliinase. Allicin is the main component of garlic is attributed to it most of the biological activities of garlic, including the bactericide, antifungal and antiviral action. However, other garlic compounds have antioxidant activity, hypocholesterolemic and vasodilating activities, guard action against many types of cancer and immunomodulatory. At the invasion of pathogens, the immune system triggers responses involving cells such as macrophages and lymphocytes. This complex interaction between cells is coordinated by the release of cytokines and other mediators. Nutrition plays an important role in modulating the immune and inflammatory response in different types of diseases. Fungal infections are significant reasons of human morbidity and mortality mainly in immunocompromised people. The Sporothrix schenckii, the causal agent of sporotrichosis (most common subcutaneous mycosis in Latin America), is dimorphic fungus, of saprophytic life in soil or in plant that infects humans and animals mainly through skin injuries and scratches. The aim of this study was to evaluate the influence of garlic consumption in immunomodulation of Swiss healthy and infected mice by S. schenckii from the functioning of peritoneal macrophages of the animals and the production of nitric oxide and cytokines (IL 1β, IL-10 and IL-12) and evaluating the antifungal potential of garlic against S. schenckii by minimum inhibitory concentration test and colony forming units. The results show that garlic has potential antifungal front S. schenckii. Oral administration of garlic extracts influences the releasing of cytokines by macrophages ex vivo, regular consumption has anti-inflammatory effects in healthy animals, and its use can generate an acute inflammatory response. Mices that consumed garlic responded more effectively to combat the infection.