Orientador: Maria Adelia Collier Farias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Campinas / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:51:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amaral_DarciodeAlmeida_M.pdf: 4625631 bytes, checksum: fc0c07532ed2285460c6b9187002a391 (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: Este trabalho descreve um instrumento capaz de calcular o conteúdo quanta 1 médio (o número médio de quanta de acetilcolina liberados por um potencial de ação), a partir de seqüências de potenciais de placa terminal e potenciais de placa terminal em miniatura; e assim, caracterizar de maneira quantitativa a ação. De drogas e toxinas na junção neuromuscular. O instrumento, baseado em um microcomputador, é versatil e de custo relativamente baixo. Seu software pode ser fácil mente expandido pela adição de novos programas que possibilitem uma análise mais sofisticada do problema. / Abstract: A microcomputer-based instrument, to study the effects of drugs and toxins in the transmission of impulses from nerve to muscle, is described. The instrument computes the mean number of packets of acetylcholine liberated by an impulse, from trains of end-plate potentials and miniature end-plate potentials. Being microcomputer-based, it is versatile and relatively inexpensive, and its software can be easily expanded to include other routines which would be necessary for a more sophisticated analysis. / Mestrado / Mestre em Engenharia Elétrica

Orientador: Maria Julia Marques / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T15:01:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_CandidaLuizaTonizzade_M.pdf: 3677031 bytes, checksum: 4fcc42091b0a8a57fba1a60cfabdcc79 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi verificar possíveis alterações no padrão de distribuição das células de Schwann nas junções neuromusculares de camundongos distróficos comparando-se com a distribuição observada em animais normais controle, desnervados ou não. Sabe-se que as células de Schwann induzem e guiam os brotamentos do terminal nervoso. Nos animais distróficos, os quais apresentam ausência de distrofina, bem como ciclos de degeneração-regeneração da fibra muscular, há aumento dos brotamentos intraterminais, sem lesão nervosa. Foram utilizados 10 animais distróficos mdx e 10 normais da linhagem controle C57BL/I0, com 14 (P14) e 60 (P60) dias, dos quais 5 foram desnervados. As células de Schwann e os receptores de acetilcolina (AChRs) foram marcados com anti-S 100-IgG-anti-rabbit-FITC erodaminaungarmona, respectivamente. Através da microscopia de fluorescência confocal observamos nos animais controles desnervados P60 (n = 100 junções) maior complexidade na distribuição dos prolongamentos das células de Schwann, conforme esperado. Em animais controle P14 (n = 536) o padrão de distribuição das células de Schwann e sua relação com os AchRs foram semelhantes aos animais distróficos P14 (n = 47), apresentando prolongamentos citoplasmáticos co-localizados, simples e contínuos ao longo dos braços dos AChRs. Em controle P60 (n = 237) os prolongamentos apresentam-se simples e contínuos ao longo dos braços dos AChRs, diferentemente no mdx P60 (n = 192), os prolongamentos encontram-se condensados e na porção distal fragmentados, no centro das ilhas de receptores. Estes resultados sugerem que as células de Schwann sofrem alterações que acompanham as do terminal nervoso, mesmo em ausência de lesão axonal, na fibra muscular distrófica / Abstract: The pattem of Schwann distribution was studied at the neuromuscular junction of the mdx mice. These mice show deficiency of dystrophin, a sarcolemmal protein that forms a complex with other cytoskeletal components of the muscle fiber membrane. In these fibers there is an increase in the amount of intracellular calcium leading to myonecrosis, which in the mdx is followed by cycles of muscle regeneration-degeneration. The major changes at the dystrophic neuromuscular junction are seen at the postsynaptic site. However, an increase in the complexity of the nerve terminal architecture was reported in this animal, possibly related to the changes in the postsynaptic membrane, with no alterations in the nerve terminal functional properties. By using fluorescence confocal microscopy, we observed that at most ofthe adult (2 month-old) mdx junctions (n = 192) viewed, terminal Schwann cells labeled with anti-S-100 presented prolongations of the cytoplasm co-localized with acetylcholine receptors, in a more compIex pattem of distribution as seen in controIs (n = 237 junctions). When viewed before the cycles of degeneration-regeneration had began (14 days after birth; n = 47 mdx endpIates), there were no qualitative differences in the pattem of Schwann cell distribution, when compared to controIs at the same age (n =536 neuromuscuIar junctions). This suggests that changes at the postsynaptic membrane may Iead to changes in Schwann cell pattem of distribution, which paralIel the alterations in nerve terminal architecture reported for the mdx mice, only after the degenerative- regenerative cycles of the muscle fiber had been established. / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Oswaldo Vital Brazil / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-18T02:24:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simioni_LeaRodrigues_D.pdf: 1992208 bytes, checksum: b387e29422a7e73827129c0c92d93ba2 (MD5) Previous issue date: 1976 / Resumo: As ações do McN-A-343 (McN) - potente estimulante ganglionar não-nicotínico - na junção neuromuscular foram estudadas em preparações inervadas e desnervadas dos músculos tibial anterior de gato "in situ" e diafragma isolado de rato, empregando-se técnicas mio gráficas e eletrofisiológicas. Com base nos nossos resultados e nas considerações tecidas a respeito, podemos concluir que: 1º) o McN apresenta dois tipos de efeitos na junção neuromuscular, dissociáveis pelo emprego de diferentes níveis de concentração do composto, isto é, um efeito estimulante quando aplicado em pequenas doses e um efeito bloqueador que se instala ap6s a aplicação de altas doses; 2º) o efeito estimulante, traduzido por um discreto porém prolongado aumento da amplitude da contração das referidas preparações, decorre fundamentalmente da despolarização dos terminais nervosos motores, evidenciada através do aumento da freqüência da descarga dos potenciais de placa terminal em miniatura (mepp) e, em menor grau, da discreta atividade anticolinesterásica do composto observada "in vivo" e comprovada "in vitro" na vigência da aplicação de pequenas doses de McN / Abstract: Not informed / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas

Orientadores: Marcos Dias Fontana, Maria Alice da Cruz-Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-26T15:39:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Serafim_FrancineGonzaga_M.pdf: 4224320 bytes, checksum: 6a88dc7a6201661e92cad25dc5ea78fe (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A serpente Micrurus dumerilii carinicauda (Md.carinicauda) é uma espécie de coral, encontrada do Norte de Santander, região nordeste da Colômbia, atravessa a Bacia do Maracaibo e estende-se até Caracas no Estado de Miranda, na Venezuela. Pouco se conhece sobre o modo de ação do veneno desta espécie de Micrurus, que contém uma variedade de neurotoxinas e miotoxinas. Neste trabalho, o veneno de M d. carinicauda induziu bloqueio neuromuscular nas preparações nervo frênico-diafragma de rato e biventer cervicis de pintainho. Em ambas as preparações, o veneno (5 ~g!ml) não deprimiu a resposta contrátil evocada pela estimulação elétrica direta. A Neo (5,8 ~) e a 3,4-DAP (230~) antagonizaram, parcialmente, efeito bloqueador neuro~uscular produzido pelo veneno (5, 10 e 20 ~gIml) nas preparações nervo frênico-diafragma de rato, enquanto a~ sucessivas lavagens da preparação com Tyrode foram ineficazes na tentativa de reverter o bloqueio neurotnuscular induzido pelo veneno. Tais resultados sugerem uma ação do veneno nos receptores colinérgicos nicotínicos pós-sinápticos. As contraturas induzidas pela adição de acetilcolina (ACh; 15 J..IM) tanto no diafragma desnervado como no biventer cervicis de pintainho (ACh; 37 tJM) foram inibidas pela ação do veneno (5 J..1g1ml), mas a contratura evocada pela adição do KCI (134 tJM) não foi deprimida. Sugerindo mais uma vez, que a ação do veneno ocorre nos receptores colinérgicos nicotínicos e que não possui ação sobre a fibra muscular, nesta dose estudada. Esta hipótese foi confirmada com o estudo dos potenciais bioelétricos. O veneno, na dose de 5 /-lg/ml, produziu um progressivo decréscimo na amplitude e freqüência dos potenciais de placa terminal em miniatura (pptm) até seu bloqueio completo. A Neo e a 3,4-DAP foram capazes de reverter totalmente o bloqueio dos pptm, sugerindo assim que a ação do veneno (5 /-lg/ml) ocorra pós sinapticamente. O estudo do potencial de membrana mostrou que o veneno (5 /-lg/ml) não possui ação despolarizante sobre a fibra muscular do diafragma de rato, embora os estudos morfológicos tenham demonstrado que este possui ação miotóxica já com esta dose. A dissociação dos efeitos miotóxicos dos efeitos farmacológicos está relacionado com o número de fibras musculares que permaneceram íntegras. O efeito miotóxico do veneno, na preparação nervo frênico-diafragma de rato, mostrou ser dose-dependente. Estudos histológicos e ultra-estruturais mostraram que nas doses de 5 e 10 /-lg/ml o veneno induziu miotoxicidade e, esta foi mais evidente com a dose de 10 /-lg/ml, afetando a integridade do sarcolema de numerosas fibras musculares e produziu desorganização dos sarcômeros e ainda condensação dos miofilamentos. Nestas mesmas doses, o veneno também causou alterações ultra-estruturais sobre a junção neuromuscular, dentre as quais a bipartição do terminal nervoso e invaginação dos processos da célula de Schwann, alterações topológicas na distribuição das vesículas sinápticas, bem como a presença de mitocôndrias degeneradas e indentações ômega, formando pequenas invaginações no axolema. Em conclusão, os resultados sugerem que o veneno induz miotoxicidade nas preparações estudadas, mas o efeito predominante do ocorre nos receptores colinérgicos nicotínicos pós-sinápticos / Abstract: The effects of the venom of Micrurus dumerilii carinicauda (M d. carinicauda), a coral snake restricted to north of South America (Venezuela and Colombia), was studied in mammal (rat hemidiaphragm) and avian (chick biventer cervicis) muscle preparations by pharmacological and morphological approaches. The venom induced neuromuscular blockade in the rat phrenic nerve-diaphragm preparation and on the chick biventer cervicis nerve-muscle preparation. Neostigmine (Neo) and 3,4-Diaminopyridine (3,4-DAP), antagonize partially the effect of the venom on the neuromuscular transmission in the rat nerve-diaphragm. Either in rat phrenic nerve~diaphragm preparation as well as on the chick biventer cervicis nerve-muscle preparation, the venom does not depress the twitch response elicited by direct muscle stimulation. The contractures induced by acetylcholine (ACh) .in the denervated rat hemidiaphragm and in the chick biventer cervicis are inhibited by the venom. This fmdings - suggests that the main cause of the neuromuscular blockade is due to a post synaptic action on the nicotinic receptors. It is corroborated by our findings on the bioelectrical potentials where Ju. d. carinicauda venom (5 ~g/m1) produced a progressive decrease in the amplitude of the miniature end-plate potentials until these were abolished. Neo (5.8 ~M) and 3,4-DAP (230 ~M) antagonized this blocked effect on neuromuscular transmission and fully prevented the venom-induced blockade of m.e.p.p.s These results indicates that M d. carinicauda venom produces neuromuscular blockade mainly by apost synaptic action. M d. carinicauda venom (5 ~g/ml) had no effect on the resting membrane potential and had no effects on the muscle contractile response under direct stímulation. Our fmdings also shown that this venom (5 or 10 Jlg/ml) induces pronounced myotoxicity (1 °Jlg/ml), affecting in a number of fibers the sarcolemma integrity and producing sarcomere disorganization and clumping of myofllaments. This effect though seems to have little influence on the neuromuscular-inducing effect, since even with 20 Jlg/ml of the venom there is no change in the muscle contractile response under direct stimulation. In parallel, Md.carinicauda venom produced adose-dependent morphological change on the mammal preparation. In addition the higher the dose the more frequent the presence of multiple zones of closely-massed myofibrils in diaphragm preparation. In biventer cervicis, changes have a slow onset and were greatly characterized by undulation of fibers and rarely by collapsing zones of myofibrils by the end of the incubation period. In this work, also was observed, that the most markedy morphological changes related was related to bipartition of the presynaptic elements with invagination of the Schwann cell processes. Furthermore, was observed topological ) / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Maria Julia Marques / Tese(mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-27T04:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Minatel_Elaine_M.pdf: 3919056 bytes, checksum: d240bd20bc93021c33a6a6666a17948c (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi investigar se fibras musculares regeneradas de camundongos normais apresentam alteração no padrão de distribuição dos receptores de acetilcolina (AChRs) e na expressão da óxido nítrico sintase neuronal (nNOS) e comparar os resultados obtidos com fibras regeneradas de camundongos mdx. Para tanto, a degeneração/regeneração foi induzida através de injeções de cloridrato de lidocaína no músculo esternomastóideo (STN) esquerdo de camundongos normais. O lado contralateral foi utilizado como controle. Após 21 dias os músculos foram retirados e marcados com rodamina-a-bungarotoxina para observação dos AChRs, com o anticorpo primário monoclonal anti-nNOS para observação da expressão da nNOS e montados para tluorêscencia. Foi adicionado ao meio de montagem o marcador de DNA nuclear DAPI o que possibilitou a observação dos núcleos celulares. Através da microscopia confocal de tluorêscencia observamos que a distribuição dos AChRs nas fibras regeneradas estava alterada em relação ao padrão das fibras do músculo controle. As fibras musculares regeneradas normais exibiram o mesmo padrão de distribuição dos AChRs observado em fibras regeneradas distróficas, ou seja, os braços juncionais estavam fragmentados, originando ilhas de receptores. Nossos resultados sugerem que a alteração no padrão de distribuição dos AChRs, que é observada no camundongo mdx, pode ser conseqüência apenas da degeneração/regeneração da fibra muscular e não devido a deficiência de distrofina. Quanto a nNOS, não houve alteração de sua expressão em fibras musculares regeneradas quando comparada com fibras do músculo controle. Isto sugere que a diminuição de sua expressão observada nos camundongos mdx pode ser atribuída a ausência de distrofina / Abstract: The aim of the present investigation was to study whether normal regenerated muscle fibers show changes in the pattem of distribution of the acetylcholine receptors (AChRs) and in neuronal nitric oxide synthase (nNOS) expression. Degenerative-regenerative changes were experimentaly induced in normal muscle fibers of mouse left sternomastoid (STN) muscle by injecting lidocaine hydrochIoride. The contralateral side .served as a controI. 21 days after lidocaine injection, the STNs (right and left) were removed, labelled with rhodamin a-bungarotoxin for AChRs observation, with anti-nNOS for nNOS observation and mounted in special mouting media for fluorescence with DAPI, a DNA stain for nuclei. By using fluorescence confocal microscopy regenerated muscle fibers showed disrupted AChRs distribution when compared to controls. Normal regenerated fibers exhibited the same pattem of AChR distribution as seen in dystrophic regenerated fibers. Our results suggest that changes in AChRs distribution seen in mdx were probably a consequence of muscle fiber degeneration-regeneration, rather than a symptom of dystrophin deficiency. Conversely, there were no changes in nNOS expression in normal regenerated fibers when compared to normal fibers, suggesting that the decrease in nNOS expression reported for mdx mice might be attributed to the absence of dystrophin / Mestrado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores : Marcos Dias Fontana, Maria Alice da Cruz-Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T05:14:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reali_Marielga_M.pdf: 22685186 bytes, checksum: 17c15905114c0ee764dfd3de22447fd6 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: No planeta existem cerca de três mil espécies de serpentes, sendo aproximadamente 400 espécies consideradas peçonhentas (BARRAVIERA, 1997). A família Elapidae distribui-se pela Áfiica, Ásia, Austrália, Nova Guiné e Américas. Já as serpentes do gênero Naja e, especificamente a espécie Naja naja kaouthia, aqui estudada, distribui-se no Nordeste da Índia, Burma, Tailândia, Indochina e Norte da Malásia. A serpente Naja naja kaouthia, popularmente denominada na Ásia, por cobra, diferencia-se das outras espécies do gênero por apresentar uma marca atrás do pescoço, em formato de olho, sendo por isto denominada cobra monocellate. Este trabalho relata que o veneno de Naja naja kaouthia induz a um bloqueio neuromuscular nas preparações nervo :&ênico-diaITagmade ratos e biventer cervicis de pintainho. O veneno foi utilizado nas doses de 5 e 10 J-lg/mle produziu 85% de bloqueio neuromuscular em 36,75 :!:2,01 min, n=5, e 18 :!:0,57 min, n=3, p<O,OI,respectivamente. Com o intuito de avaliar a ação da atividade fosfolipásica do veneno na indução do bloqueio, experimentos foram feitos tratando-se o veneno com bromofenacil para brometo. Os resultados mostraram a ocorrência de 85% de bloqueio em 54 :!:4,62 min, n=3 e 29 :!: 0,57 min, n=3, p<O,OI, respectivamente para 5 e 10 J-lglmlde veneno com atividade PLA2 inibida. A neostigmina (Neo, 5,8 J-lM)e a 4-aminopiridina (4-AP, 53 J-lM) antagonizaram, parcialmente, o bloqueio produzido pela dose de 5 J-lglml do veneno total em ambas as preparações, que não foi revertido mesmo após sucessivas lavagens com solução de Tyrode. Estes resultados apontam para uma ação irreversível do veneno sobre os receptores nicotínicos colinérgicos e não sobre as fibras musculares da preparação. A contratura induzida pela acetilcolina em dia:&agmade rato desnervado (Ach, 22 J-lM)e em biventer cervicis de pintainho (37 J-lM)foi inibida pela ação do veneno (5 J-lglml).Já a contratura induzida na preparação biventer cervicis pelo KCI (134 J-lM)não foi alterada pelo veneno na mesma dose. o estudo dos potenciais bioelétricos das preparações de ratos mostrou que o veneno na dose de 5 J..lg/mIreduz a amplitude e a fteqüência dos potenciais de placa terminal em miniatura (pptm) até seu total desaparecimento, mas este bloqueio é completamente revertido pela Neo e pela 4-AP. Estudos à microscopia de luz e eletrônica de transmissão corroboraram os achados de que o veneno induz alterações dose-dependentes em relação as doses utilizadas, 5 e 10 J..lg/mIde veneno total induzem o aparecimento de 37% e 56% de fibras musculares lesadas, sendo esse número significativo (p<O.OI).Por outro lado, a investigação do grau de ação do componente fosfolipase do veneno no aparecimento de fibras mionecróticas revelou que com as doses de 5 J..lg/mIe 10 J..lg/mI de veneno com atividade PLAz inibida, o número de fibras lesadas diminuí, não significativamente, para 27% e 52%. Qualitativamente, porém, essas alterações eram similares com qualquer das doses utilizadas, o mesmo acontecendo com relação às alterações ultra-estruturais envolvendo as células musculares, os fascículos nerVososintramuscularese as junções neuromusculares. Concluindo, sugere-se que o veneno apresenta componentes neurotóxicos e miotóxicos, que podem estar atuando predominantemente sobre os receptores nicotínicos pós-sinápticos. Dentre esses componentes a PLAz sozinha, parece não ter um papel relevante no desenvolvimento das ações miotóxicas, sugere-se que os efeitos podem estar acontecendo devido a um sinergismo entre ela e a cardiotoxina / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Humberto Santo Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T21:07:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luz_DjaniraAparecidada_M.pdf: 10076168 bytes, checksum: bfb65835c1fee9b7b2746e42965e9c75 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Seguindo-se a secção ou esmagamento de um nervo periférico, a porção distal à lesão sofre degeneração. Havendo condições apropriadas ocorre regeneração axonal e as fibras musculares são reinervadas pelos axônios regenerados. Em anfíbios, está estabelecido que cerca de 95% das fibras musculares são reinervadas em seus antigos sítios neuromusculares. Diversos estudos têm demonstrado que mo!éculas que compõem a lâmina basal da fibra muscular, no nível da junção neuromuscular, são fatores trópicos decisivos para essa seletividade. Contudo, o quanto areinervação em mam íferos ocorre com a mesma precisão ainda não foi efetivamente demonstrado. o objetivo deste trabalho foi estudar o quanto a membrana basal juncional influencia na redistribuição topográfica das junções neuromusculares em fibras musculares regeneradas. Para isto, realizamos autotransplantes cruzados livres entre os músculos sóleo e extensor longo dos dedos, não aquecidos e aquecidos. Os animais foram sacrificados, no período entre 95 e 130 dias após a cirurgia. Os músculos retirados foram imediatamente fixados em solução de Karnovsky e após a fixação, os sítios colinérgicos foram marcados com técnica histoquímica e a redistribuição das junções neuromusculares analisadas ao microscópio de luz. Em seguida, estes músculos foram lavados e seccionados transversalmente para técnica histológica. Nossos resultados demonstram que durante a reinervação muscular, os axônios em regeneração ocuparam especialmente os sítios sinápticos originais, sugerindo que os componentes associados à membrana basal juncional promovam a diferenciação e o crescimento dos terminais motores na direção dos antigos sítios sinápticos / Abstract: After the section or crushing of a peripheral nerve the distal portion to the lesion degenerates. When there are adequate conditions axonal regeneration occurs and the muscle fibers are reinnervated by the regenerated axons. In amphibians it is said that 95% of the muscle fibers are reinnervated in their neuromuscular sites. Many studies have demonstrated that molecules of the synaptic basal lamina play a central role for this selectivity. Neverthless whether the reinnervation in mammals occurs with the same accuracy has not effectively been demonstrated. The aim of the present was to study in Wistar rat how the integrity of junctional basal lamina influences the topographic redistribution of new neuromuscular junctions in reinnervated muscle fibers. For this we made crossed autotransplant between the soleus and extensor digitorium longus rat muscles, not heated and pre-heated which show neuromuscular junctions distributed in different places and for having been taken from its original beds the muscles were denervated. The animais were sacrificed 130 days after the surgery. The muscles which have been taken out were immediately fixed in Karnovsky's solution and after fixing the colinergic sites were marked with histochemistry technic and the redistribution of the neuromuscular junction was analysed in the light microscope. After, this muscles was washed, fixed and sections for histological technique.Our results demonstrated that during the muscular reinervation the axons grow occupy precisely at the original synaptic sites, supposed that components associated with the junctional basal lamina play role in the differentiation and the development of motors terminais in the direction at original synaptic sites / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores : Lea Rodrigues Simioni, Maria Alice da Cruz-Hofling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T17:57:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franco_YokoOshima_D.pdf: 36881160 bytes, checksum: f76f491f0939facad9ad247c1983472b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A bothropstoxina-I (BthTX-I), principal miotoxina do veneno de Bothrops jararacussu, tem atividades neurotóxica e miotóxica. Investigou-se a habilidade do antiveneno crotoxínico e da heparina em prevenir as atividades neurotóxica e miotóxica da BthTX-I. Preparações nervo ftênico-diaftagma (NFD) de camundongos estimuladas indiretamente (0.2 ms, O.I Hz) foram incubadas com BthTX-I (20 flglmI) ou com BthTX-I pré-incubada com antiveneno ou heparina, por 30 min a 37°C. BthTX-I (20 flg/ml) produziu 50% de bloqueio neuromuscular em preparações NFD em 31 :t 4 min, com completo bloqueio ocorrendo aos 120 mino...Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Bothropstoxm-I (BthTX-I), the principal myotoxm of Bothrops jararacussu venom, has myotoxic and neurotoxic activities. The ability of crotoxm antisermn and heparin in preventing the myotoxic and neurotoxic effects of BthTX-I was investigated. Mouse phrenic nerve-diaphragm preparations (PND) stimulated indirect1y with supramaximaI stimuli (0.2 ms, 0.1 Hz) were incubated with BthTX-I (20 llg/mI) alone or with BthTX-I preincubated with antisermn or heparin for 30 min at 37°C prior to testing. BthTX-I (20 1lg/mI) produced 50% neuromuscuIar blockade in PND preparatíons in 31 ::!:4 min, with complete blockade occurring in 120 min. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Selma Maria Michelin Matheus / Resumo: As lesões nervosas periféricas (LNPs) levam a uma perda da conexão entre o axônio e o músculo, ocasionandointerrupção na transmissão do impulso nervoso e alterações nas junções neuromusculares (JNMs). O reparo das LNPs através da neurorrafia é um método amplamente utilizado, porém a recuperação tanto morfológica e funcional é incompleta, sendo um desafio para a clínica médica. Diante disso métodos alternativos como uso de selante de fibrina vêm sendo utilizados para minimizar danos e acelerar a recuperação nervosa e muscular, havendo poucas referências em relação às JNMs. O objetivo deste estudo foi verificar se o uso do selante de fibrina associado a um ponto de sutura atinge ou supera os resultados da sutura convencional após LNP com foco nos receptores de acetilcolina (nAChRs) e proteínas associadas às JNMs no músculo sóleo. Foram utilizados 40 ratos Wistar machos adultos (CEUA: 1173/2016), divididos em 4 grupos: Controle-Sham (CS), Controle-Desnervado (CD), Lesão Sutura (LS) e Lesão Sutura + Selante de Fibrina (LSS). No grupo CS foi realizada incisão, afastamento da musculatura e localização do nervo isquiático direito. No grupo CD foi realizada neurotmese (gap de 6 mm).Nos grupos CD, LS e LSS foi realizadafixação dos cotos na musculaturaapós a neurotmese. Após 7 dias foi realizada reconexão dos cotos com três pontos de sutura no grupo LS e no grupo LSS um ponto de sutura foi associada ao selante de fibrina(CEVAP). Após 60 dias os animais foram eutanasiados, os músculos s... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Peripherical nerve lesions (PNLs) lead to a loss of the connection between axons and muscle, resulting in the interruption of the transmission of nerve impulses and alterations in the neuromuscular junctions (NMJs). The repair of PNLs through neurorrhaphy is a widely utilized method, however the recuperation of both morphology and function is incomplete, challenging medical clinic. Thus, alternative methods such as the usage of fibrin sealants have been utilized to minimize damages and accelerate nerve and muscular recuperation, with few references in relation to NMJs. The objective of this study was to verify if the use of fibrin sealants associated to a stitch of suture reaches or surpasses the results of traditional suture after PNLs with focus in the acetylcholine receptors (nAChRs) and proteins associated to the NMJs in the soleus muscle. Forty male adult Wistar rats were utilized (CEUA: 1173/2016), divided into4 groups: Sham-Control (SC), Denervated-Control (DC), Suture Lesion (SL) and Suture Lesion + Fibrin Sealant (SFS). In SC group,it was performed incision, muscle spacing and identification of the right sciatic nerve. In DC group,it was performed neurotmesis (gap of 6 mm). In DC, SL and SFS groups,it wascarried out fixation of stumps on the musculature after neurotmesis. After 7 days the reconnection of the stumps with suture was accomplished in SL group and in SFS group the suture was associated with the fibrin sealant (CEVAP). After 60 days the animals were euthan... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T07:49:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 OliveiraeSilva_SaraguaciHernandezde_D.pdf: 978243 bytes, checksum: 7e35557ec13bc4cdfff9957cdfcaf502 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Este trabalho está dividido em três momentos, o primeiro trata-se de um estudo comparativo do efeito dos venenos brutos de Crotalus durissus terrificus; C. d. ruruima; C. d. cascavella e C. d. collilineatus, bem como da crotoxina e da crotamina sobre a junção neuromuscular. O veneno C. d. ruruima foi purificado pela primeira vez através de HPLC em uma coluna Protein Pack SW 300, onde foi obtida a crotoxina e a crotamina (os demais venenos já foram purificados e os dados publicados). O estudo neurotóxico foi realizado em duas preparações nervo-frênico diafragma de camundongo e biventer cervicis de pintainho. Dos experimentos realizados em mamíferos e aves obteve-se o efeito neurotóxico esperado nas concentrações de 10 mg/ml. Os venenos brutos e as crotoxinas das serpentes C. d. terrificus e C. d. ruruima em preparações de mamífero produziram aumento da amplitude seguido de bloqueio total da resposta contrátil, diferentemente dos venenos e das crotoxinas das serpentes C. d. cascaavella e C. d. collilineatus, que causaram apenas bloqueio total neuromuscular. Em preparações de aves os quatro venenos e crotoxinas estudados induziram bloqueio total, porém sem causar facilitação. As crotaminas-positivas, estudadas em nervo-frenico diafragma de camundongo das serpentes C. d. terrificus e C. d. ruruima, na concentração de 10 mg/ml, causaram efeito facilitatório retornando à amplitude controle após 120 min de incubação. Ao recombinar a crotoxina 10 mg/ml e crotamina 5 mg/ml houve o aumento da amplitude seguido de bloqueio total da resposta contrátil. Nas preparações ensaiadas em aves, apresentou um efeito facilitatório fugaz seguido de bloqueio neuromuscular total. No segundo momento, as isoformas de crotapotina e PLA2 isoladas a partir da crotoxina dos venenos das serpentes de C. d. terrificus, C. d. cascavella e C. d. collilineatus, foram ensaiadas em mamíferos e aves nas concentrações de 10 mg/ml. As crotapotinas e PLA2 isoladas não causaram diferenças significativas em relação ao controle em preparações de mamíferos. O mesmo não ocorrendo com as PLA2 testadas em aves que causaram bloqueio neuromuscular, efeito este não esperado. Após a recombinação (5 mg/ml crotapotina) + (5 mg/ml PLA2), o complexo crotoxina causou bloqueio neuromuscular total em ambas preparações. Na terceita etapa deste trabalho, foram produzidos antivenenos específicos contra o veneno bruto e crotoxina do veneno C. d ruruima e PLA2 do veneno de C. d. collilineatus. O título de anticorpos e a especificidade dos antivenenos produzidos foram avaliados por ELISA. A neutralização da atividade neurotóxica foi avaliada em preparações biventer cervicis de pintainho. A capacidade neutralizante dos antivenenos produzidos em coelhos foi comparável ao soro anticrotálico comercial contra o veneno e crotoxina na proporção 1:1. O veneno, a crotoxina e os antivenenos estudados induziram liberação de CK significativamente diferente do controle / Abstract: This work is divided at three moments, the first one if terrificus deals with a comparative study of the effect of the crude venoms of Crotalus durissus; C. d. ruruima; C. d. cascavella and C. d. collilineatus, as well as of the crotoxin and the crotamine on the junction neuromuscular. Venoms C. d. ruruima was purified for the first time through HPLC in a column Protein Pack sw 300, where it was gotten the crotoxin and the crotamine (the too much venoms already had been purified and the published data). The neurotoxic study nerve-frênico was carried through in two preparations diaphragm of mouse and to chick biventer cervicis. The experiments carried through in mammals and birds the waited neurotoxic effect in the was gotten concentrations of 10 mg/ml. The crude venoms and the crotoxin of rastnaks C. d. terrificus and C. d. ruruima in preparations of mammal had produced increase of the followed amplitude of complete blockade of the contractil reply, differently of the venoms and the crotoxin of rastnakes C. d. cascavella and C. d. collilineatus, that they had caused only complete blockade to neuromuscular. In preparations of birds the four studied venoms and crotoxin had induced complete blockade, however without causing facilitation. The crotamine-positive, studied in nerve-frenico diaphragm of mouse of snakes C. d. terrificus and C. d. ruruima, in the concentration of 10 mg/ml, had caused facilitatori effect returning to the 120 after amplitude have controlled min of incubation. When crotoxin being recombined 10 mg/ml and 5 crotamine mg/ml had the increase of the followed amplitude of complete blockade of the contractil reply. In the preparations assayed in birds, fast followed of blockade presented a facilitatori effect to neuromuscular complete. At as the moment, isoforms of isolated crotapotin and PLA2 from the crotoxin of the venoms of the rastnakes of C. d. terrificus, C. d. cascavella and C. d. collilineatus, had been assayed in mammals and birds in the concentrations of 10 mg/ml. Isolated crotapotin and PLA2 had not caused significant differences in relation to the control in preparations of mammals. The same not occurring with the PLA2 tested in birds that blockade caused to neuromuscular, effect this not waited. After the recombination (5 mg/ml crotapotin) + (5 mg/ml PLA2), the crotoxin complex caused blockade to neuromuscular complete in both preparations. In the third stage of this work, specific antivenoms against crotoxin the crude venoms and of C. d. ruruima had been produced and PLA2 of the poison of C. d. collilineatus. The heading of antibodies and the especific of the produced antivenoms had been evaluated by ELISA. The neutralization of the neurotoxic activity was evaluated in preparations to chick biventer cervicis. The neutralizing capacity of the antivenoms produced in rabbits was comparable to commercial the anticrotalic serum against the venoms and crotoxin in ratio 1:1. The venoms, the crotoxin and the antivenoms, studied had induced significantly different release of CK of the control / Doutorado / Doutor em Farmacologia