O objetivo desse estudo foi caracterizar e selecionar linhagens de soja, considerando sua reação à ferrugem asiática (FAS) e a produtividade de grãos (PG). O presente trabalho foi desenvolvido no Setor de Genética Aplicada às Espécies Autógamas, no Departamento de Genética da Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, localizada no município de Piracicaba, SP, Brasil. No ano agrícola 2004/2005 (A1), foram conduzidos três experimentos com fungicidas (impact, derosal e controle) com genótipos de ciclo médio (EGM) e três com genótipos tardios (EGT), totalizando seis experimentos delineados em blocos casualizados, com quatro repetições. As parcelas experimentais foram representadas por quatro fileiras de 5 m x 0,5 m, sendo que a área útil de 4 m2 constituiu-se pelas duas fileiras centrais, eliminando-se 0,5 m em cada extremidade da parcela. Os três experimentos, para cada ciclo, foram utilizados para possibilitar a caracterização dos genótipos quanto a RFA: (i) Experimento I: três aplicações de Impact (Flutriafol, Cheminova): fungicida eficiente para o controle das doenças de final de ciclo (DFC), incluindo-se a FAS; (ii) Experimento II: três aplicações de Derosal (Carbendazim, Bayer): fungicida eficiente para o controle das DFC, exceto a FAS; (iii) Experimento III: controle: sem aplicação de fungicidas. Os EGM envolveram duas testemunhas (BR-16 e IAS-5) e 12 linhagens de ciclo médio, selecionadas pelo diferencial positivo de 4% a 221% sobre a PG da melhor testemunha, na presença da FAS. Na seleção das linhagens experimentais utilizadas nesse trabalho, além do ciclo e da PG, também foi considerada a presença de ancestrais tolerantes a FAS em suas genealogias, que contribuiram como fontes de genes para resistência a FAS, com destaque para : FT-2, IAC PL1, TN#4 (Taiwan) e PI 230970 (Taiwan). Tal fato aumentou a probabilidade de se encontrar genótipos tolerantes (T) ou moderadamente resistentes (MR) dentre as linhagens avaliadas. Foram realizadas avaliações experimentais para FAS e PG. A FAS foi avaliada através de três notas (NF1, NF2 e NF3), usando-se uma escala diagramática, com notas variando de 1 (0,2% de área doente) a 9 (78,5% de área doente ou mais). A PG de cada linhagem foi estimada por meio da pesagem das parcelas. A linhagem de ciclo médio USP 97-08.135 mostrou-se MR. Já as linhagens BULK USP 01-28, USP 04-18.029 e USP 04-18.074 mostraramse T a FAS. Os EGT também envolveram duas testemunhas (FT-2000 e Conquista) e 12 linhagens com diferencial positivo de PG de 87% a 177%. As linhagens tardias USP 191-102-03, USP 191-103-12, USP 191-108-05, USP 98-13.035, USP 98-13.049 e USP 98-13.102 foram classificadas como MR e as demais linhagens como não-tolerantes (NT) ou suscetíveis (S). Dentre as linhagens testadas no A1 foram selecionadas 12, para compor os experimentos do ano agrícola 2005/2006 (A2) e mais as duas testemunhas de ciclo médio e as duas tardias. Em A2 todas as linhagens e testemunhas foram classificadas como NT ou S, porém, a linhagem que mais se aproximou do comportamento T foi USP 97-08.135. / This research aimed to characterize and select soybean genotypes, considering their reaction to Asian soybean rust (FAS) and grain yield (PG). This work was developed in the Sector of Applied Genetics to Self-Pollinated Crops, Department of Genetics, Faculty of Agriculture Luiz de Queiroz, University of São Paulo located in Piracicaba city, State of São Paulo, Brazil. In 2004/2005 agricultural year (A1) were conducted three experiments with intermediate cycle genotypes (EGM) and three with late cycle genotypes (EGT) outlined in random blocks, with four repetitions. Then, in A1 were conducted six experiments in the total (Impact, Derosal and Control for each cycle). The plots were represented by four rows of 5 m x 0,5 m. The useful plot (4 m2) were the two central rows, eliminating up 0,5 m at each end of the plot. Were used three experiments for the genotypes characterization about their reaction to rust in each cycle: (i) Experiment I: three applications of Impact (Flutriafol, Cheminova): effective to control the end of cycle diseases (DFC), including FAS; (ii) Experiment II: three applications of Derosal (Carbendazim, Bayer): effective to control the DFC, except the FAS; (iii) Experiment III: control: no application of fungicides. The EGM involved two soybean cultivars (BR-16 and IAS- 5) and 12 lines selected by the positive differential of 4% to 221% on the PG of the best, in the presence of rust. In the lines selection used in this experimental work, beyond the cycle and PG, was also considered the presence in their pedigrees of a tolerant ancestral to the FAS, which could contribute as a source of genes for resistance to FAS, with emphasis on: FT - 2, IAC - PL1, TN # 4 (Taiwan) and PI 230.970 (Taiwan). This fact increased the likelihood of finding tolerant or resistant genotypes in that evaluated. Were carried out evaluations to reaction to FAS and PG. The reaction to FAS was evaluated through three assessments (NF1, NF2 and NF3), with a diagrammatic scale, with visual notes ranging from 1 (0,2% of the foliar area affected) to 9 (78,5% of the foliar area affected). The PG of each line was estimated by the weight of the plots. It was observed moderate resistance (MR) to FAS on the line USP 97-08.135 and tolerance (T) to FAS on the lines BULK USP 01-28, USP 04-18.029 e USP 04-18.074 in the intermediate genotypes. The EGT also involved two cultivars (FT-2000 and Conquista) and 12 lines with a PG positive differential of 87% to 177%. The late cycle lines USP 191-102-03, USP 191-103-12, USP 191-108-05, USP 98-13.035, USP 98-13.049 e USP 98-13.102 were classified as MR and the others as no-tolerants or susceptible. Were selected 12 lines among the lines tested in A1 to compose the experiments of the agricultural year 2005/2006 (A2) and over the two early cultivars and the two late cultivars. The line that stood out more about the reaction to FAS was USP 97- 08.135.

Genes homeobox, vitais para muitos aspectos relacionados com crescimento e diferenciação celular, têm sido descritos desregulados em alguns cânceres. Seu papel na carcinogênese, principalmente de carcinomas epidermóides de boca, permanence pouco claro e pobremente caracterizado. Desse modo, esse estudo objetivou avaliar, em cultura de células, o perfil de expressão de seis genes homeobox (ASH2L, HOXA7, HHEX, PKNOX1, PITX1, TGIF) selecionados dentre aqueles previamente identificados no Projeto Genoma Câncer de Cabeça e Pescoço (2001) sob estímulo de EGF e TGF-beta1. Para tal, linhagens celulares de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço primário (HN6) e metastático (HN31) e uma linhagem não-tumoral (HaCat) foram cultivadas sob condições-padrão. Após a confecção dos cDNAs de cada linhagem, por meio de RT-PCR, os transcritos foram amplificados e quantificados pela técnica de PCR em tempo real. Os dados foram normalizados com o gene HPRT e a quantificação relativa foi realizada seguindo o método do delta Ct. De acordo com os resultados foi possível verificar que o EGF produziu uma modulação variável da expressão dos genes avaliados em todas as linhagens celulares, enquanto que, em geral, o TGF-beta1 foi capaz de aumentar significantemente (ANOVA, p<0,05) a expressão dos transcritos de 5 genes homeobox (HOXA7, HHEX, PKNOX1, PITX1, TGIF). Particularmente transcritos dos genes PITX1 e TGIF foram signicantemente mais expressos nas linhagens tumorais (HN6 e HN31) frente à linhagem não-tumoral quando tratados com TGF-beta1. Desse modo, sugere-se que os genes homeobox estudados desempenhem diferentes funções na carcinoma epidermóide de boca, e que, especialmente PITX1 e TGIF atuem como oncogenes inibindo a resposta anti-proliferativa dependente de TGF-beta e levando a progressão tumoral. / Homeobox genes, vital to many aspects related with cellular growth and differentiation, had been described as deregulated in some cancers. Their role in carcinogenesis, mainly oral squamous cell carcinomas, remains unclear and poorly characterized. Thus, this study had the purpose to evaluate, in cell cultures, the expression profile of six homeobox genes (ASH2L, HOXA7, HHEX, PKNOX1, PITX1, TGIF) selected among genes previously identified in the Head and Neck Cancer Genoma Project (2001), under stimulation with EGF and TGF-beta1. Oral squamous cell carcinoma cell lines from primary tumour (HN6) and from methastasis (HN31), and a non-tumoral cell line (HaCat) were cultured under standard procedures. CDNAs were obtained by RT-PCR and the transcripts were amplified and quantified by real-time PCR. Data were normalized by HPRT gene and the relative quantification was made by the delta Ct method. According to the results, it was possible to observe that EGF produced a variable modulation of the analyzed genes, in all cell lines. Generally, TGF-beta1 was able to significantly increase (ANOVA, p<0,05) the expression of the transcripts of 5 homeobox genes (HOXA7, HHEX, PKNOX1, PITX1, TGIF). Transcripts of PITX1 and TGIF genes were particularly more expressed in the tumoral cell lines (HN6 e HN31), when compared to the non-tumoral cell line, when treated with TGF-beta1. It is suggested that the studied homeobox genes play different roles in oral squamous cell carcinoma and that, especially the PITX1 and TGIF act as oncogenes, inhibitting the TGF-dependent anti-proliferative response, leading to tumour progression.

Com o objetivo de avaliar o potencial de utilização de espécies/linhagens de Trichogramma como mais um componente do manejo de Ecdytolopha aurantiana (Lima, 1927), importante praga da citricultura paulista, foram realizadas avaliações biológicas envolvendo seleção de linhagens, biologia em diferentes temperaturas, exigências térmicas, capacidade de parasitismo e número de ideal de parasitóides a ser liberado por ovo da praga. A seleção de linhagens/espécies de Trichogramma é básica para o controle de E. aurantiana, pois ocorreu uma grande variação no parasitismo de ovos da praga dentre os vários materiais biológicos estudados. A razão sexual das espécies/linhagens não foi afetada pela temperatura na faixa de 18 a 32ºC, sendo a temperatura de 25ºC a mais adequada para as espécies/linhagens estudadas. A duração do período ovo-adulto de T. atopovirilia Oatman & Platner, 1983 e de T. pretiosum Riley, 1879 foi inversamente relacionada como aumento da temperatura, na faixa térmica de 18 a 32ºC, sendo as exigências térmicas dessas espécies muito próximas, em torno de 108 GD. O hospedeiro de criação natural, E. aurantiana ou o alternativo, Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) não afetaram o parasitismo das espécies/linhagens selecionadas. Em laboratório, obteve-se maior parasitismo expondo-se 30 ovos de E. aurantiana por fêmea de Trichogramma spp. durante 34 horas. As maiores taxas de parasitismo de ovos de bicho-furão para as duas espécies/linhagens ocorreram quando os parasitóides foram provenientes de ovos de E. aurantiana. A proporção estimada de 36 parasitóides por ovo de E. aurantiana possibilitou a maior porcentagem de parasitismo por T. pretiosum. Os resultados obtidos indicaram que os parasitóides de ovos do gênero Trichogramma apresentam potencial de controle de E. aurantiana, desde que liberados em grandes quantidades por unidade de área e em torno das plantas. / In order to evaluate the potential of use of Trichogramma species/strains as an additional component in the management of Ecdytolopha aurantiana (Lima, 1927), an important pest of Citrus in the state of São Paulo, biological trials were carried out involving strain selection, biology at different temperatures, thermal requirements, parasitism capacity and optimal number of parasitoids to be released per pest egg. The selection of Trichogramma strains/species is basic to control E. aurantiana for the egg parasitism of the pest varied greatly among several biological materials studied. The sex ratio of the species/strains was not affected by the temperature at a 18-32ºC range, and 25ºC was the more suitable temperature for the species/strains studied. The duration of the egg-adult period of T. atopovirilia Oatman & Platner, 1983 and T. pretiosum Riley, 1879 was inversely related to the increased temperature at a thermal range of 18-32ºC, and the thermal requirements of these species are very close, ranging 108 DD (degree days). Neither the natural rearing host, E. aurantiana, nor the factitious host, Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) affected the parasitism of the selected species/strains. The proportion of 30 eggs of E. aurantiana per Trichogramma spp. female provided a higher parasistism rate, with eggs exposed to the parasitoid for 34 hours. The higher parasitism rates of the eggs of citrus fruit borer for the two species/strains occurred when the parasitoids were reared on eggs of E. aurantiana. The estimated ratio of 36 parasitoids per egg of E. aurantiana allowed a higher parasitism percentage of T. pretiosum. The results achieved showed that the egg parasitoids of Trichogramma have a potential to control E. aurantiana provided that they are released in large amounts per area unit and surrounding the plants.

O experimento teve por objetivo avaliar genótipos de frangos de corte através do desempenho zootécnico utilizando-se o conceito de medidas repetidas e avaliar os mesmos genótipos a partir de suas características de carcaça. Os tratamentos consistiram de quatro genótipos, dois sexos e seis idades para avaliar o desempenho zootécnico e as características de carcaça foram avaliadas aos 42 dias. As variáveis de desempenho zootécnico foram: consumo médio de alimento (CONS), peso médio vivo (PMV), conversão alimentar (CA), ganho médio diário de peso (GMDP), viabilidade (VIAB) e fator europeu de eficiência produtiva (FEEP) e de características de carcaça foram: rendimento de carcaça (CARPV), rendimento de peito (PTPV) e de pernas (PRPV) em relação ao peso vivo e rendimento de peito (PTCAR) e de pernas (PRCAR) em relação ao peso de carcaça. O delineamento experimental para o desempenho zootécnico foi em blocos incompletos desbalanceados, em um esquema fatorial 4x2x6, considerando-se o box com 40 aves a unidade experimental e a análise foi realizada nos procedimentos GLM e MIXED, sendo neste último testadas cinco estruturas de variância e covariância, escolhendo-se a que apresentou menor valor para o Critério de Informação de Akaike; para as características de carcaça foi em blocos incompletos desbalanceados, em um esquema fatorial 4x2, considerando-se a ave a unidade experimental e a análise foi realizada no procedimento GLM. As médias foram estimadas através do "least square means" e comparadas pelo teste de Tukey-Kramer. Para CONS, PMV, CA, GMDP e VIAB foi escolhida a estrutura auto regressiva de primeira ordem heterogênea e para FEEP a estrutura simetria composta heterogênea. Os resultados observados detectaram diferenças significativas (P<0,05) nos valores de PMV e GMDP nas comparações entre genótipos, sexos, idades e nas interações idade x genótipo, idade x sexo e idade x genótipo x sexo. Para CONS foram detectados efeitos significativos (P<0,05) nas comparações entre genótipos, sexos, idades e nas interações idade x genótipo e idade x sexo para ambos procedimentos, porém foi detectado efeito significativo (P<0,05) da interação idade x genótipo x sexo apenas no proc MIXED. Para CA verificaram-se diferenças significativas (P<0,05) nas comparações entre genótipos, sexos, idades e na interação idade x genótipo; para VIAB as diferenças significativas (P<0,05) foram observadas nas comparações entre genótipos, idades e interação idade x sexo. O FEEP apresentou diferenças significativas (P<0,05) nas comparações entre genótipos, sexos, idades e nas interações idade x genótipo e idade x sexo. Para as características de carcaça, os resultados mostraram diferenças significativas (P<0,05) entre genótipos, sexos e interação genótipo x sexo para CARPV, PTPV; para PTCAR apenas foi verificada diferença significativa (P<0,05) entre sexos. Os genótipos de frangos de corte foram melhor avaliados utilizando-se o conceito de medidas repetidas através do proc MIXED, sendo este mais apropriado e indicado para a análise dos dados de desempenho zootécnico; dentre os genótipos estudados, o D apresentou melhor desempenho zootécnico. O genótipo B apresentou os melhores resultados de características de carcaça. / This trial aimed to evaluate the effect of genotypes on performance of broilers using the concept of repeated measures and to evaluate the effects of genotypes on carcass characteristics of broilers. The treatments consisted of four genotypes, two sexes and six ages to evaluate the performance and the carcass characteristics were only evaluated at 42 days of age. The variables of performance were: average feed intake (AFI), average alive weight (AAW), feed:gain ratio (FGR), average daily weight gain (ADWG), viability (VIAB) and European factor of productive efficiency (EFPE). The variables of carcass characteristics were: carcass yield (CY), breast yield (BAW) and legs yield (LAW) in relation to average alive weight and breast yield (BCY) and legs yield (LCY) in relation to carcass weight. The experimental design for performance analysis was desbalanced incomplete blocks, in a factorial scheme 4x2x6, considering each box with 40 broilers as an experimental unit. This analysis was accomplished in the GLM and MIXED procedures, being in this last tested five variance and covariance structures, choosing the one that presented smaller value for the Akaike´s Information Criterion. For carcass characteristics the experimental design was desbalanced incomplete blocks, in a factorial scheme 4x2, considering each broiler as an experimental unit and the analysis was accomplished in the GLM procedure. The averages were estimated by the least square means and compared by the test of Tukey-Kramer. For AFI, AAW, FGR, ADWG and VIAB was chosen the structure first-order autoregressive heterogeneous and for EFPE was chosen the structure compound symmetry heterogeneous. The observed results detected significant differences (P<0,05) in the values of AAW and ADWG in the comparisons among genotypes, sexes, ages and in the interactions age x genotype, age x sex and age x genotype x sex. For AFI were detected significant effects (P<0,05) in the comparisons among genotypes, sexes, ages and in the interactions age x genotype and age x sex for both procedures. Additionally, it was detected significant effect (P<0,05) in the interaction age x genotype x sex in MIXED proc. For FGR significant differences were verified (P<0,05) in the comparisons among genotypes, sexes, ages and in the interactions age x genotype and age x sex, being this last one just verified in the MIXED proc. For VIAB significant differences (P<0,05) were observed in the comparisons among genotypes, ages and in the interaction age x sex. EFPE presented significant differences (P<0,05) in the comparisons among genotypes, sexes, ages and in the interactions age x genotypes and age x sex. For the carcass characteristics the results showed significant differences (P<0,05) among genotypes and sexes for CY, BAW and LAW; the interaction genotype x sex was only significant (P<0,05) for CY and BAW. The broiler chicken genotypes were better evaluated using of the concept of repeated measures by MIXED proc, being it more appropriated and indicated for the analysis of the performance’s data; between the genotypes studied, D presented the best performance. The genotype B presented the best results on carcass characteristics.

O objetivo do presente trabalho foi selecionar a linhagem mais adequada de T. pretiosum para o controle de T. absoluta na cultura do tomate, dentre as linhagens da coleção do Laboratório de Biologia de Insetos do Departamento de Entomologia e Acarologia da Escola Superior de Agricultura \"Luiz de Queiroz\", e comparar a qualidade dos insetos criados em ovos do hospedeiro alternativo, Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) com aquela dos insetos oriundos de ovos de T. absoluta, com vistas à utilização do parasitoide para o controle da traça-do-tomateiro. Para atingir tal objetivo foram realizadas as seguintes etapas: seleção de linhagens, efeito da idade do hospedeiro no parasitismo, efeito do hospedeiro na qualidade do parasitoide e número de parasitoides a ser liberado por ovo da praga. A linhagem PR de T. pretiosum, proveniente do Paraná, foi, entre as estudadas, a mais adequada para o uso em programas de controle biológico de T. absoluta. T. pretiosum parasitou igualmente ovos de T. absoluta de 0 a 48 horas de idade. A capacidade de parasitismo, longevidade, capacidade locomotora e o tamanho do parasitoide foram reduzidos quando provenientes de ovos da traça-do-tomateiro em comparação a insetos emergidos de ovos de A. kuehniella. O número ideal de T. pretiosum a ser liberado na cultura do tomate para o controle de T. absoluta foi superior a 50 parasitoides/ovo. Portanto, T. pretiosum pode ser utilizado em programas de Controle Biológico Aplicado, visto que, devido à menor qualidade dos parasitoides provenientes de ovos de T. absoluta, o inimigo natural terá dificuldades em se estabelecer no campo, indicando ser necessário um grande número de liberações, pois T. pretiosum terá uma ação contra T. absoluta semelhante a um inseticida, desde que os parasitoides que nascerem nas gerações subsequentes às liberações serão menos agressivos e competitivos do que os insetos da natureza. / The aim of this study was to select the most suitable T. pretiosum strain for the biological control of T. absoluta in tomato crops, within the existing strains in the Laboratório de Biologia de Insetos\' colection at Escola Superior de Agricultura \"Luiz de Queiroz\", and compare the quality of the insects reared on eggs of the alternative host Anagasta kuehniella (Zeller, 1879) and on eggs of T. absoluta. For this, the following characteristics were studied: strain selection, host age effect on parasitism, different host effect on parasitoid quality and ideal number of released parasitoid per pest egg. The T. pretiosum strain PR, originated in Paraná state, was the most suitable for its use in T. absoluta biological control programs. T. pretiosum parasitism rate was the same for eggs aged from 0 to 48 hours. T. pretiosum\'s parasitism capability, longevity, mobility capability and parasitoid size were reduced when reared on T. absoluta eggs in comparison to the ones reared on A. kuehniella eggs. The ideal parasitoid number for release in order to control T. absoluta in tomato crops is over 50 per egg. Since the quality of parasitoids hatched from T. absoluta eggs is lower, populations of T. pretiosum will present difficulties to establish itself in the field. Therefore, T. pretiosum should be used in applied biological control programs, where a large number of parasitoids is released in the field from time to time, which will act similarly to insecticides.

O presente trabalho teve por objetivo identificar fragmentos homólogos a genes de resistência em Brassica oleracea e Zea mays, por meio da amplificação por PCR, utilizando oligonucleotídeos homólogos a regiões conservadas de genes de resistência de plantas. Em B. oleracea, os oligonucleotídeos foram desenhados com base na seqüência de um gene homólogo ao RPS2 de Arabidopsis thaliana descrito em B. oleracea. Um fragmento de 2,5 Kb foi amplificado em duas linhagens. Os fragmentos amplificados apresentaram polimorfismo de comprimento entre as linhagens, gerando um marcador molecular. Este marcador foi utilizado em uma população F2 segregante para resistência a Xanthomonas campestris pv. campestris oriunda do cruzamento entre as linhagens BI-16 e Lc201. O marcador, no entanto, não apresentou-se ligado a nenhum gene de resistência a este patógeno. Análise da expressão por meio de RT-PCR detectou a expressão do fragmento homólogo nas linhagens resistente e suscetível de B. oleracea com e sem inoculação, indicando que o gene é expresso constitutivamente. Em Z. mays, oligonucleotídeos sintetizados com base em seqüências de milho homólogas a genes de resistência, denominadas Pics, e a ESTs de milho, também homólogos a genes de resistência, foram utilizados para amplificação em linhagens resistente e suscetível a Exserohilum turcicum, Colletotrichum graminicola e Phaeosphaeria maydis. Um par de oligonucleotídeos amplificou um fragmento polimórfico entre as linhagens resistente e suscetível a E. turcicum. Este foi utilizado em uma população segregante, mas também não observou-se ligação com o gene Ht de resistência a E. turcicum. Nas demais linhagens, os fragmentos foram monomórficos. Os oligonucleotídeos baseados em ESTs amplificaram fragmentos em todas as linhagens parentais. Esses fragmentos foram digeridos com enzimas de restrição, mas não apresentaram polimorfismo entre nenhuma das linhagens. Os resultados indicaram que a estratégia de utilização de seqüências conservadas é eficiente para amplificação de genes homólogos. O polimorfismo entre estes homólogos pode ser usado como marcador molecular para detecção de genes de interesse. Todavia, nem sempre estes marcadores estão ligados a esses genes. / The aim of this work was to identify homologs of resistance genes in Brassica oleracea and Zea mays by PCR amplification using primers based on conserved domains of plant resistance genes. In B. oleracea, the primers were based on the sequence of a homolog of the Arabidopsis thaliana RPS2 gene previously described in B. oleracea. A 2.5 Kb fragment was amplified on two lines. These fragments showed length polymorphisms between lines, based on which a molecular marker was developed. This marker was used in a F2 population, derived from the crossing between the inbred lines BI-16 and Lc201, and which segregates to resistance to Xanthomonas campestris pv. campestris. The marker, however, was not linked to any Xcc resistance gene. Expression analyses by RT-PCR detected the expression of these homologs on both resistant and susceptible lines with and without inoculation, indicating that the gene is constitutively expressed. In Z. mays, primers based on resistance gene homologs sequences, named Pics, and on maize ESTs homologous to disease resistance genes, were used to amplify genomic fragments on resistant and susceptible lines to Exserohilum turcicum, Colletotrichum graminicola and Phaeosphaeria maydis. A set of primers amplified a polymorphic fragment between lines resistant and susceptible to E. turcicum. This fragment was used in a segregating population, but no linkage was detected between this marker and the E. turcicum resistance gene Ht. Among the other lines, the fragments were not polymorphic. The primers based on ESTs amplified fragments on all parental lines. These fragments were digested with restriction enzymes but did not reveal any polymorphism between lines. The results indicated that the strategy of using conserved sequences is efficient to amplify disease resistance gene homologs. The polymorphism among these homologs may be used as a molecular marker, but these markers are not always linked to disease resistance genes.

Made available in DSpace on 2017-07-25T19:30:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Debora Silva Maximo.pdf: 2516559 bytes, checksum: f42192c8a7ed6389d9fb8661f4c843b0 (MD5) Previous issue date: 2013-03-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objectives of this study were to determine the genetic control of resistance to anthracnose stalk rot of corn and estimate the gene action involved in the generations descended from crosses between inbred lines of tropical maize. The estimation of genetic parameters was used to determine the mode of inheritance of resistance in nine families derived from crosses between resistant and susceptible inbred lines to Colletotrichum graminicola. Each family consisted of six generations (P1, P2, F1, RC1 and RC2), which were evaluated for resistance in two experiments implanted in a randomized block design in a split plot design, with three replications. Inoculations were performed using a suspension of 5 x 105 conidia mL-1 applied into the stalk. The quantification of the disease was performed using the external and internal length of lesion (cm), and number of internodes discolored. The three forms of assessment were effective in discriminating individuals resistant and susceptible to the pathogen. Through the analysis of mean generations, it was observed that there is great genetic variability among inbred lines used, where the LR 04-2 was the most effective in all families/ generations in which participated, always conditioning the lower values of lesion. The results indicated a similar mode of inheritance among families, with a predominance of additive genetic effects explaining 81.92% on average. The heritability coefficients (broad and narrow sense) were of high magnitude, indicating facility in the process of artificial selection by breeding programs. Estimates of heterosis were high and negative in all families studied, revealing the ability of resistant inbred lines to transfer the character resistance for the next generations, reducing the length of the lesions. The results showed that the genetic control of corn to anthracnose stalk rot is governed by a few genes of large effect on phenotypic expression. The addictive nature of inheritance, associated with higher estimates of heritability and oligogenic genetic control, infer that the genetic gains with selection will be successful in breeding programs that develop maize populations resistant to anthracnose stalk rot. / Os objetivos do presente trabalho foram determinar o controle genético da resistência de milho à antracnose do colmo e estimar a ação gênica envolvida nas gerações descendentes de cruzamentos entre linhagens endogâmicas de milho tropical. A estimativa dos parâmetros genéticos foi utilizada para determinar o modo de herança da resistência, em nove famílias derivadas dos cruzamentos entre linhagens resistentes e suscetíveis à Colletotrichum graminicola. Cada família foi constituída de seis gerações (P1, P2, F1, F2, RC1 e RC2), as quais foram avaliadas para resistência em dois experimentos implantados no delineamento de blocos casualizados, em esquema de parcelas subdivididas, onde nas parcelas foi estudado o efeito de famílias e nas subparcelas o efeito das gerações, com três repetições. As inoculações dos colmos foram realizadas no estádio de florescimento pleno com suspensão de 5,0 x 105 conídios mL-1. A quantificação da doença foi realizada no estádio de florescimento pleno da cultura, através do comprimento externo e interno de lesão (cm), e pelo número de internódios descoloridos. As três formas de avaliação foram eficientes em discriminar indivíduos resistentes e suscetíveis ao patógeno. Na análise das médias das gerações, observou-se a existência de grande variabilidade genética entre as linhagens endogâmicas utilizadas. A linhagem LR 04-2 destacou-se em todas as famílias/gerações em que participou, sempre condicionando os menores valores de lesão. Os resultados indicaram modo de herança semelhante entre as famílias, com predomínio de efeitos genéticos aditivos explicando em média 81,92%. Os coeficientes de herdabilidade (sentido amplo e restrito) foram de elevada magnitude, indicando a facilidade no processo de seleção artificial pelos programas de melhoramento. As estimativas de heterose foram altas e negativas em todas as famílias estudadas, revelando a capacidade das linhagens resistentes em transmitir o caráter resistência para as gerações filiais, diminuindo o comprimento das lesões. Os resultados demonstraram que o controle genético da resistência de milho à antracnose do colmo é governado por poucos genes de grande efeito na expressão fenotípica. A herança de natureza aditiva, associada às altas estimativas de herdabilidade e controle genético oligogênico, permitem inferir que os ganhos genéticos com a seleção lograrão êxito em programas de melhoramento, que buscam desenvolver populações de milho resistentes à antracnose do colmo.

Uma das abordagens mais utilizadas atualmente para se estudar o metabolismo e a transdução de sinais hormonais é o uso de mutantes com alterações nos genes que codificam os principais componentes desses processos. A cultivar miniatura de tomateiro (Lycopersicon esculentum) denominada Micro-Tom (MT) possui porte reduzido (8 cm) e ciclo de apenas 75 dias, constituindo-se em um excelente modelo para uma abordagem genética de estudos fisiológicos. Mutantes com alterações no balanço auxina/citocinina, ou na capacidade de resposta a esse balanço, podem ser utilizados para desvendar o papel da interação entre esses hormônios no controle do desenvolvimento, inclusive no que se refere à capacidade de regeneração in vitro. O presente trabalho teve como objetivo criar um modelo para se estudar o papel do balanço auxina/citocinina endógeno na competência para regeneração in vitro, através da incorporação das mutações dgt, brt, gf, lutescent, ls e bu, as quais sugerem alterações no metabolismo e/ou sensibilidade hormonal, na cultivar MT. Essas mutações foram caracterizadas quanto à sensibilidade à auxina e citocinina através da obtenção de curvas de dose-resposta, utilizando-se diferentes concentrações de AIA (0; 0.1; 1; 10 e 100 µM) e TDZ (0; 0.01; 0.1; 1; 10 e 100 µM), em segmentos de pecíolo e plântulas germinadas em gerbox, respectivamente. As mutações caracterizadas para auxina e citocinina, bem como o controle MT, foram testadas in vitro, quanto à sua capacidade de regeneração, em meio de cultura MS, suplementado com 5µM de BAP (explantes cotiledonares e segmentos de hipocótilo) e 4,5 µM de Zeatina (segmentos de raiz). Os mutantes lutescent, gf e bu, apesar de possuírem fenótipo bastante interessante, não parecem ser relacionados à sensibilidade à auxina e citocinina, bem como ao etileno. Já os mutantes dgt e brt apresentaram respostas típicas de mutantes com pouca sensibilidade à auxina e citocinina, respectivamente. Dessa forma, a resposta ao balanço AIA/Cks é alterado nesses mutantes, afetando o processo de regeneração. Nos segmentos de hipocótilo, houve formação de calos em todos os explantes, entretanto, poucos explantes formaram gemas adventícias, sendo que o mutante dgt foi o que apresentou menor taxa de regeneração. Nos explantes cotiledonares, a taxa de regeneração foi menor ainda no MT e no mutante dgt, e ausente no mutante brt. Não houve regeneração em nenhum dos genótipos em segmentos de raiz. Esses resultados sugerem que, embora a competência para regeneração in vitro possa ser dependente do balanço AIA/Cks, ou da resposta a esse balanço, existem interações mais complexas entre esses hormônios e seus efeitos na regeneração. A exemplo disso, era de se esperar uma maior formação de gemas caulinares em dgt, já que sua capacidade de resposta ao balanço está voltada para Cks. Um estudo mais aprofundado para a correta interpretação dessa interação deve levar em conta que a sensibilidade à auxina é necessária também no processo de desdiferenciação. Além disso, auxinas e citocininas não só atuam na diferenciação, mas também podem interferir na regeneração, independente do balanço AIA/Cks, já que são necessárias para a expansão e divisão celular. / To date, one of approaches more used to study the metabolism and transduction of hormone signals are the mutants with alterations in genes which encode the principal components of this process. The miniature cultivar of tomato (Lycopersicon esculentum) named Micro-Tom (MT) possesses reduced size (8 cm) and a life cycle of just 75 days, constituting an excellent model for a genetic approach of physiology studies. Mutants with altered auxin/cytokinin ratio, or in the response capacity to this ratio, can be used to clear up the role of interactions between these hormones in the control of development, including those concerning the in vitro regeneration capacity. The current work aimed to produce a model to study the role of endogenous auxin/cytokinins ratio in the competence for in vitro regeneration, through incorporation of the dgt, brt, gf, lutescent, ls and bu mutations, which concern altered hormone metabolism and/or sensibility, in the MT cultivar. These mutations were tested for the hypothesis of being related to auxin and cytokinin sensibility by means of dose-response curves, using different concentrations of IAA (0; 0.1; 1; 10 e 100 µM) and TDZ (0; 0.01; 0.1; 1; 10 e 100 µM), in petiole segments and gerbox-germinated seedlings, respectively. The mutations confirmed to be auxin and cytokinin related, as well the MT control, were tested in vitro for regeneration capacity, in MS culture media, with either 5µM de BAP (cotyledon explants and hypocotyl segments) or 4,5 µM Zeatin (root segments). The luescent, gf and bu mutants, despite showing an interesting phenotype, do not seem to be related to auxin and cytokinin sensibility, as well as to ethylene. However, the dgt and brt mutants showed typical responses of reduced auxin and cytokinin sensibility, respectively. Thus, the response to auxin/cytokinin is altered in these mutants, affecting the regeneration process. Calli were observed in all hypocotyl segments, however few explants formed adventitious buds, with the dgt mutant presenting the least regeneration ratio. In the cotyledon explants, the regeneration ratio was even less than in MT and in dgt, and absent in the brt mutant. There was no regeneration whatsoever from root segments in any genotype. These results suggest that, although the competence for in vitro regeneration might be dependent on the IAA/Cks ratio, or the response to this ratio, interactions far more complex exist between these hormones and their effects on regeneration. For instance, a greater adventitious buds formation was expected in dgt, because its response ability is biased toward Cks. A deeper study for the correct interpretation of these data should consider that the sensibility to auxin is also necessary in the process of undifferentiation. Besides, both auxins and cytokinins have roles not only in differentiation, but also can interfere with regeneration independent of the IAA/Cks ratio, as they are required for cell division and expansion.

A produção vegetal é dependente do processo fotossintético. As técnicas de biologia molecular e transformação genética de plantas trouxeram boas perspectivas para a alteração do metabolismo fotossintético. Plantas transgênicas de tabaco (Nicotiana tabacum, L.) que superexpressam o gene quimérico Lhcb1*2 de ervilha têm sido estudadas por apresentarem uma série de alterações no desenvolvimento e no metabolismo fotossintético, em relação à linhagem selvagem. Vários autores observaram mudanças morfológicas, fisiológicas, bioquímicas e adaptativas que favorecem essas plantas em diversas condições de cultivo. O objetivo desse trabalho foi o de avaliar o impacto da superexpressão desse gene na formação plastidial de plântulas de tabaco germinadas e mantidas no escuro por sete dias e depois transferidas à luz, com coletas periódicas de 0, 6, 18 e 120 horas pós-iluminação. O desenvolvimento plastidial, avaliado por microscopia de luz, mostra um provável adiantamento na formação dos cloroplastos dos materiais vegetais transgênicos (TR1 e TR2) em relação à selvagem (WT). A análise de ultraestrutura dos plastídios por microscopia eletrônica de transmissão, demostrou um real adiantamento na formação dos cloroplastos maduros nas duas linhagens transgênicas A análise de Western blot confimou a presença de proteínas específicas do fotossistema II (Lhcb 1-2 e D1). Este fato implica que a montagem do aparato fotossintético é antecipada nos transgênicos, assim como o desenvolvimento morfológico e estrutural observado nos plastídios. / The vegetal production is strictly dependent on the photosynthetic process. Techniques of molecular biology and genetic transformation of plants brought good perspectives for the alteration of the photosynthetic metabolism. Transgenic tobacco plants (Nicotiana tabacum, L.) which express the chimeric pea Lhcb1*2 gene were pbtained and presenta series of alterations on development and photosynthetic metabolism in relation to the wild type. Previous analysis have demonstrated morphological, physiological, biochemical and adaptative changes that favour these transgenic lines in various conditions of culture. The aim of this work was to evaluate the impact of the expression of this gene in the plastid formation, of tobacco seedlings. Seeds were germinated and kept in darknes for seven days, and transferred to light. The seedlings were then collected after 0, 6, 18 and 120 hours of exposure to continuous ilumination. The plastidial development evaluated by light microscopy, showed an advanced chloroplast formation of the transgenic lines (TR1 and TR2) in relation to the wild type (WTSR1). The ultrastructural analysis of the plastids by electronic microscopy showed, indeed on advanced formation of mature chloroplasts in the transgenic lines. The Western blot analysis confirmed the presence of two specific proteins (CAB and D1), of the photosystem II. This fact implies that the assembly of the photosynthetic apparatus might occurs earlier in the transgenic lines, as well as the morphological and structural development of the plastids.

A tendência da indústria em produzir alimentos mais saudáveis, com menos gordura vem aumentando sensivelmente. O desafio do melhoramento nos dias atuais é melhorar a qualidade da carcaça dos frangos juntamente com a redução nos teores de gordura, que é uma exigência do mercado consumidor. A leptina é um hormônio polipeptídico secretado principalmente pelo tecido adiposo com um importante papel na regulação da ingestão de alimentos, metabolismo de energia e reprodução. O gene da leptina e seu receptor vem sendo objeto de intensa investigação representando excelentes genes candidatos para deposição de gordura na carcaça nos programas de seleção assistida por marcadores. A função desses genes tem sido intensamente estudada em mamíferos, porém, em aves poucos estudos foram realizados. O presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de polimorfismos no gene da leptina e de seu receptor em galinhas, e avaliar os efeitos desses polimorfismos sobre características de desempenho e carcaça. Duas linhagens de aves, uma de corte (TT) e uma de postura (CC) foram utilizadas para desenvolver a população referência F2 empregada no presente estudo. A polução referência foi desenvolvida no sistema de Melhoramento Genético de Aves da Embrapa Suínos e Aves, em Concórdia/SC. Foram desenhados primers para amplificar o gene da leptina e os íntrons 8 e 19 do do gene do receptor da leptina. Entretanto, após diversas tentativas não foi possível amplificar o DNA genômico e cDNA do gene da leptina. No íntron 8 do gene do receptor da leptina o SNP C352T foi genotipado por seqüenciamento em 247 animais da população F2. O alelo T foi associado ao maior rendimento de carcaça (P=0,0165), rendimento de peito (P=0,0137), gramas de proteína bruta (P=0,0112) e cinza na carcaça (P=0,0150), enquanto o alelo C foi associado somente ao rendimento de fígado (0,0102). No íntron 19 o SNP G915A foi genotipado por PCR-RFLP em 137 animais da população F2. O alelo A foi associado ao consumo de ração (P=0,0339)), o alelo G ao rendimento de pulmão (P=0,287) e os alelos A e G quando em homozigose foram associados com rendimento de coxas e sobrecoxas (0,0302). Por ocorrerem em região de íntron, provavelmente esses SNPs não estão envolvidos diretamente com as características associadas, mas podem estar ligados a outra mutação localizada na região regulatória do gene do receptor da leptina ou em outro gene próximo. No futuro outros polimorfismos deverão ser explorados, em regiões codificadoras desse gene, para serem utilizados como marcadores associados a características de desempenho e carcaça em aves. Em adição o gene do receptor da leptina foi localizado no mapa de ligação do cromossomo 8 da população de aves da Embrapa, o próximo passo será realizar a análise de QTL incluindo os SNPs estudados como marcadores. / The trend of industry in producing healthier nourishment, with less fat has raised sensibly. The challenge of animal breeding in the current days is to improve carcass quality of chickens with concomitant reduction in the fat content, witch is a consumer\'s demand. Leptin is a polypeptide hormone secreted mainly by adipocytes with an important role in the regulation of food ingestion, energy metabolism energy and reproduction. The leptin (LEP) and its receptor (LEPR) genes are being subject of intense investigation representing excellent candidate genes for fat deposition in the carcass in marker assisted selection programs. The function of those genes has been intensely studied in mammals, however, in birds few studies were accomplished. The present work aimed to investigate the occurrence of polymorphisms in the LEP and LEPR genes in Chickens, and also evaluate the effects of those polymorphisms on performance and carcass traits. Two chicken lines, a broiler (TT) and a layer line (CC) were used to develop an F2 reference population used in the present study. The reference population was developed in the Poultry Genetic Breeding System at Embrapa Suínos e Aves, in Concórdia/SC. Primers were designed for the PCR amplification of the LEP gene leptina and introns 8 and 19 of the LEPR gene. However, after several attempts it was not possible to amplify the genomic DNA or cDNA of the leptin gene. In the intron 8 of the LEPR gene, SNP C352T was genotyped by DNA sequencing of 247 animals of the F2 population. The T allele was associated with greater carcass yield (P=0,0165), breast yield (P=0,0137), grams of crude protein (P=0,0112) and ashes in the carcass (P=0,0150), while the C allele was associated only to liver yield (0,0102). The SNP G915A in the intron 19 was genotyped by PCR-RFLP of 137 animals from the F2 population, the allele A was associated to the feed intake (P=0,0339), the allele G to the lung yield (P=0,287), and the alleles A and G, when in homozigose, were associated with drumstick and thigh yield (0,0302). Because these SNP are located within an intron area, they are not likely directly involved with the associated characteristics, but they can be linked the other mutation located in the regulatory area of the LEPR gene. In the future other polymorphisms should be explored, in the coding regions of this gene, so they can be used as markers associated to performance and carcass characteristics in poultry. In addition, the LEPR gene was located in the ligation map of the chromosome 8 for the Embrapa population. The next step will be to accomplish the analysis of QTL including the SNPs studied as markers.