O câncer compreende uma doença multifatorial responsável por altíssimos indíces de mortalidade globalmente. Embora atualmente tenhamos resultados positivos em relação ao tratamento do câncer principalmente voltados à imunoterapia, dados alarmantes ainda são encontrados. Assim, desenvolvemos linhagens tumorais geneticamente modificadas para expressarem ovalbumina (mOVA ou cOVA) e luciferase, a fim de estudarmos as interações do sistema imune com o tumor. Em nossos resultados, a presença da ovalbumina indicou: Alteração no perfil de crescimento tumoral em animais previamente imunizados com OVA e posteriormente desafiados com o tumor, ativação de células TCD8+ citóxicas anti-OVA além de demonstrar também a capacidade imunogênica das linhagens tumorais quando estas são administradas nos animais em estado necrótico. Ao todo, nosso modelo demonstrou que estratégias de vacinação anti-tumorais possuem a capacidade de ativação do sistema imune para na otimização do reconhecimento e resposta anti-tumoral. / Cancer is characterized as a multifactorial disease responsible for many deaths globally. Although nowadays we can find positive perspectives regarding cancers treatment, it is still very common to notice some alarming data. Therefore, our group developed some genetically modified tumoral lineages expressing ovalbumin (mOVA or cOVA) together with luciferase, in order to elucidate the relationship between tumor and the immune system. In our results, the presence of ovalbumin demonstrated: Changes in tumoral growth when animals were previously immunized with OVA and then challenged with our tumoral lineages; TCD8+ lymphocytes anti-OVA activation thus ovalbumin immunogenic potential when lineages were exposed to necrotic death followed by in vivo administration. In summary, our model showed that anti-tumoral vaccinations are indeed capable of promoting immune systems activation and consequently, improving the anti-tumor immunity.

A doença de Chagas, zoonose causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, apresenta uma ampla distribuição na América Latina estendendo-se do Sul dos Estados Unidos até a Argentina. Estima-se existirem 10 milhões de pessoas infectadas e outras 25 milhões expostas ao risco. Apesar de descoberta há mais de um século, o mal de Chagas ainda é uma infecção grave que provoca grande impacto sócio-econômico, sem tratamento efetivo na fase crônica e que carece de conhecimentos científicos. O presente trabalho teve como objetivo a obtenção e o uso de linhagens consômicas de camundongos, na investigação da resistência. As linhagens consômicas foram produzidas por meio de acasalamentos programados e monitoração com marcadores polimórficos de DNA, onde um de seus cromossomos foi substituído pelo seu homólogo da outra linhagem. Como parentais foram utilizadas as linhagens isogênicas C57BL/6/J Unib, de fenótipo resistente (doadora) e A/JUnib, susceptível (receptora) empregadas na produção de cinco linhagens consômicas para os cromossomos 7 (CSs7), 11 (CSs11),14 (CSs14),17 (CSs17) e 19 (CSs19); descritos por Passos et al. (2003), como importantes no controle da infecção causada pela cepa Y do T.cruzi. Nos ensaios experimentais, os consômicos foram inoculados pela via i.p., com as doses de 101, 102, 103 e 104 empregando-se como controles animais de ambas as linhagens parentais. Em todos os consômicos, a resistência foi superior àquela observada no parental susceptível. Em um segundo protocolo, os consômicos foram acasalados com associações programadas e as progênies foram desafiadas empregando-se inóculos com doses crescentes de tripomastigotas. A resistência observada neste grupo foi também superior àquela observada no parental de fenótipo susceptível. Os resultados observados demonstram que o emprego das linhagens consômicas produzidas possibilitam avaliar a participação de cada cromossomo na resistência, bem como os efeitos da associação entre os cromossomos, que são uma estratégia eficiente no estudo de doenças multifatoriais de trato complexo, como a doença de Chagas. / Chagas disease, a zoonosis caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, has a wide distribution in Latin America and extends from the southern part of the United States to Argentina. A number of 10 million of infected people is estimated and another 25 million exposed to the risk. Although discovered over a century, Chagas disease is still a serious infection that causes great socioeconomic impact, with no effective treatment at the chronic phase and in which, a lack of scientific knowledge can be observed. The main goal of this work was that obtaining and using consomic strain of mice, the resistance could be investigated. Consomic strains were produced by programmed mating, in which the animals were monitored with DNA polymorphic markers, and one of his chromosomes was replaced by his homologue from another strain. As parental, were used, the inbred strains C57BL/6/J Unib with resistant phenotype (donor) and as receiver, the A/JUnib strain, that has a susceptible phenotype. These models were used to produce five consomic strains: for the chromosomes 7 (CSs7), 11 (CSs11), 14 (CSs14), 17 (CSs17) and 19 (CSs19), described by Passos et al. (2003) as important in controlling infection caused by the Y strain of T. cruzi. In experimental testing, the consomics were inoculated intraperitoneally at doses of 101, 102, 103 and 104 using as control, animals from both parental lines. In all consomics, resistance was higher than that observed in the susceptible parental. In a second protocol, the consomics were mated with scheduled associations and the progenies were challenged with inocula employing increasing doses of trypomastigotes. The resistance observed in this group was also higher than that observed in the parental with susceptible phenotype. The observed results demonstrate that the use of the consomic strains that were produced order to assess the contribution of each chromosome in the resistance, as well as the effects of association between chromosomes are an effective strategy in the study of complex multifactorial diseases tract, such as Chagas disease.

Na etapa inicial do desenvolvimento de novos fármacos, a avaliação do metabolismo e da toxicidade é fundamental para definir seu potencial emprego como candidato a fármaco. Nestes estudos, diversos modelos in vitro são empregados, dentre eles linhagens de hepatoma humano. Entretanto, uma grande limitação ao uso deste modelo in vitro é a baixa expressão das enzimas do sistema citocromo P450. O carotenóide bixina, componente majoritário do anato (urucum), apresentou em estudos in vivo, a capacidade de induzir algumas isoformas do sistema citocromo P450, com a vantagem de apresentar baixa toxicidade. Neste trabalho, a fração lipossolúvel do anato (bixina) e hidrossolúvel (norbixina) foram avaliadas como indutores do sistema citocromo P450 em linhagens de hepatoma humano. Ensaios de MTT, empregando as linhagens HepG2, C3A e SK-HEP-1 indicaram que bixina e norbixina em concentrações abaixo de 0,22 mM são seguras quanto à citotoxicidade. A expressão dos genes CYP 1A1, 1A2, 2C9, 2B6, 2E1 e 3A4 foi avaliada, através de ensaios de RT-PCR em tempo real, em linhagens de hepatoma humano submetidas a tratamento com os compostos bixina e norbixina. Os resultados mostraram que células HepG2 e C3A tratadas com bixina nas concentrações de 0,05 e 0,1 mM, por períodos de 24 e 48 horas, apresentaram aumento de expressão da CYP 1A1 e CYP 1A2. Porém, a exposição de células HepG2 e C3A ao composto norbixina não resultou em aumento de expressão das isoformas avaliadas neste estudo. Os resultados deste trabalho indicaram o potencial emprego de bixina como agente indutor das CYPs 1A1 e 1A2, em linhagens de hepatoma humano utilizadas como modelo in vitro, para estudo de compostos cuja metabolização envolva uma destas vias, entretanto, estudos adicionais são fundamentais, a fim de avaliar a ação deste composto sobre outras isoformas do sistema citocromo P-450, bem como outros sistemas enzimáticos. / In the early development stage of the new drugs, the pharmacological and toxicological properties are critical to define the potential use of the candidate drug. During this stage, several in vitro models systems are employed, including human hepatoma cell lines. However, the main limitation of the use of cell lines as in vitro model is the low expression level of cytochrome P450 enzymes. A carotenoid knowed as bixin, the main pigment in the annatto (urucum), it has been reported to induce some isoforms of cytochrome P450 in rats, with the advantage of its low toxicity. In this work, the oil-soluble (bixin) and aqueous soluble extracts (norbixin) were evaluated as inducers of the cytochrome P450 system in human hepatoma cell lines (HepG2, C3A, SK-HEP-1). The results of MTT assays showed that bixin concentrations below 0.22 mM were not cytotoxic in HepG2, C3A and SK-HEP-1 cell lines. Expression changes in CYP 1A1, 1A2, 2C9, 2B6, 2E1 and 3A4 were evaluated, by real time RT-PCR and the results showed that the exposition to 0,05 mM and 0,1 mM bixin, for 24 and 48 hours of treatment, lead to an increase in CYP 1A1 and CYP 1A2 expression level. By contrast, the cytochrome P450 isoforms were not affected by the exposition to norbixin. In conclusion, this work indicated the potential use of bixin induced hepatoma cell lines as in vitro model for studies of biotransformation and toxicity of drugs involving CYP 1A, however, further studies are necessary to evaluate the effect of bixin on the other cytochrome P450 isoforms as well as other enzymatic systems.

Os defeitos de pernas são decorrentes do rápido crescimento das aves, tornando-se necessário um estudo genético das associações entre essas características. Os objetivos deste estudo foram estimar os parâmetros genéticos para defeitos de pernas por escore visual, discondroplasia tibial, características de desempenho e carcaça, assim como estimar as tendências genéticas, ganho genético potencial e respostas correlacionadas, em uma linhagem de frangos de corte. O banco de dados utilizado neste estudo foi composto por registros de 128.459 aves, com informações de pedigree, manejo, desempenho, qualidades e defeitos de carcaça pertencentes a um rebanho elite de uma linhagem comercial de frangos de corte sob seleção. As características estudadas foram: os pesos vivos do animal aos sete (P7), 30 (P30) e 38 dias de idade (P38), peso ao abate (PA), peso eviscerado (PE), peso de peito (PPEI), peso de pernas (PPER), rendimento de carcaça (RCAR), rendimento de peito em relação ao peso ao abate (RPEI), rendimento de pernas em relação ao peso ao abate (RPER), eficiência alimentar (EFAL), defeito de pernas por escore visual (DPER), discondroplasia tibial (DT) e defeito de pernas total (DPERT). Para as características P7, P30, P38, PA, PE, PPEI, PPER, RCAR, RPEI, RPER, EFAL as análises genéticas foram realizadas pela metodologia dos modelos lineares clássicos, utilizando o método da Máxima Verossimilhança Restrita (REML) sob um modelo animal. Além da metodologia dos modelos lineares clássicos, as análises genéticas para as características DPER, DT e DPERT foram realizadas utilizando modelos lineares generalizados com função de ligação logit, devido à natureza categórica destas características, empregando-se modelo animal e modelo pai, com o método da quasi-verossimilhança penalizada (PQL). As análises foram obtidas utilizando-se o software ASREML®. As estimativas de herdabilidades obtidas para as características estudadas variaram de moderadas a altas, exceto para DT e DPERT, para as quais as estimativas de herdabilidades foram baixas. As estimativas de correlações genéticas entre as características de desempenho e carcaça e defeitos de pernas variaram de moderadas a altas, exceto para DPER e EFAL que apresentaram baixas correlações genéticas com as características de desempenho carcaça. As tendências genéticas para as características de desempenho e carcaça são indicativas que há seleção para características de peso vivo em diferentes idades e de desempenho e carcaça nesta linhagem, diferente do que acontece para as características de DPER, DT e DPERT, para as quais não há seleção evidente nessa linhagem. / The legs defects are caused by rapid growth of broilers, therefore it is necessary to study of genetic associations between these traits. The objectives of this study were to estimate genetic parameters for legs defects by visual score, tibial dyschondroplasia, performance and carcass traits, and to estimate the genetic trends, potential genetic gain and correlated response in a broiler line. The database used in this study consisted of records from 128,459 birds, containing pedigree information, management, performance, qualities and defects, of an elite flock from a commercial strain of broiler chickens under selection. The traits studied were: the live weight at seven (P7), 30 (P30) and 38 days old (P38), slaughter weight (PA), carcass weight (PE), breast weight (PPEI), leg weight (PPER), carcass yield (RCAR), breast yield (RPEI), legs yield (RPER), feed efficiency (EFAL), legs defect by visual score (DPER), tibial dyschondroplasia (DT) and legs total defects (DPERT). For the traits P7, P30, P38, PA, PE, PPEI, PPER, RCAR, RPEI, RPER, EFAL statistics and genetic analysis done through classical linear models methodology, using the method of Restricted Maximum Likelihood (REML) under an animal model. Besides the classical linear model methodology, genetic analyzes for the traits DPER, DT and DPERT were done using generalized linear models with logit link, due to the categorical nature of these traits, using an animal and sire models, by the method of penalized quasilikelihood (PQL). Full analyzes were obtained using the ASREML® software. Estimates of heritability obtained for the traits varied from moderate to high, except for DT and DPERT, which heritability were low. Estimates of genetic correlations between performance and carcass traits and leg defects varied from moderate to high, except for DPER and EFAL, which presented low genetic correlations with performance characteristics of the carcass. Genetic trends for performance and carcass characteristics indicate that selection occurs for body weight at different ages and performance and carcass traits in this strain, in a different way to the observed for traits of DPER, DT and DPERT, which no evident selection in this line was observed.

Os camundongos têm sido amplamente utilizados na experimentação desde o século XVII, devendo sua qualidade microbiológica ser pesquisada e mantida, para evitar que eles adoeçam ou morram durante o experimento, não transmitam zoonoses e para que os resultados apresentados no experimento sejam confiáveis. A Escherichia coli faz parte da microbiota entérica dos mamíferos, podendo algumas linhagens causar infecções. As estirpes patogênicas apresentam diferentes fatores de virulência, como as endotoxinas, adesinas, enterotoxinas, fator citotóxico necrosante e as hemolisinas. Este trabalho teve como objetivos: analisar as microbiotas aeróbias bacteriana e fúngica presentes no intestino das linhagens de camundongos Swiss, C57BL/6, BALB/c, C3H/HePas, C3H/HeJ, MDX e YCx43, verificando se existem diferenças entre elas; avaliar a suscetibilidade \"in vitro\" frente aos antimicrobianos das E. coli isoladas, verificando se existem diferenças entre as linhagens; verificar a ocorrência de resistência a múltiplos antimicrobianos nas E. coli isoladas; pesquisar os fatores de virulência das E. coli isoladas, também investigando se existem diferenças destes entre as linhagens estudadas; identificar os microrganismos presentes nos diferentes ambientes em que estes animais são mantidos, verificando se existem diferenças entre eles. Os camundongos foram necropsiados e coletou-se uma pequena quantidade de seu conteúdo fecal que foi semeado nos meios de cultura BHI, ágar sangue de carneiro 5%, ágar MacConkey e ágar Saboraud dextrose. Foi realizando o antibiograma e PCR das E. coli isoladas. Realizou-se a cultura de suabes da mesa, maçaneta de porta e exterior das luvas dos funcionários. Verificou-se que as linhagens de camundongos estudadas apresentam microbiotas fecais diferentes; as estirpes de E. coli são diferentes em cada linhagem e apresentam resistência a múltiplos antibióticos, que as estirpes de E. coli isoladas não são patogênicas, que as bactérias isoladas nas salas do biotério não foram influenciadas pela microbiota fecal dos camundongos e que o monitoramento microbiológico de rotina dos animais, do ambiente e dos técnicos, e as normas de biossegurança são indispensáveis e devem ser sempre adotados e mantidos no biotério. / Mice have been largely used at experiences since 17o century, so their microbiological quality should be investigated and kept safety in order to avoid they become ill or die during an investigation and don\'t transmit zoonosis to those who handle them; this is important in order to make the results presented in the experience be reliable. The Escherichia coli is part of enteric microbiota of mammals, and some of them may cause infections. The pathogenic strains of E. coli show different virulence factors, such as endotoxins, adhesins, enterotoxins, necrotizing citotoxic factors (cnf) and hemolysins. This study has aimed to analyze: the bacterial and fungi aerobic microbiota present at intestine of lineages Swiss, C57BL/6, BALB/c, C3H/HePas, C3H/HeJ, MDX and YCx43 mice, checking if there are differences among them; to evaluate the susceptibility in vitro to antimicrobial agents of E. coli isolated, checking if there are differences among lineages; to verify the occurrence of resistance to multiple antimicrobial agents at E. coli isolated; to investigate the virulence factor\'s of lineages of E. coli, also checking if there are differences among these lineages and the lineages studied; identify the micro-organisms presented at different environments where these animals are kept, checking if there are differences among them. The mice were submitted to necropsy and it was collected a little amount of their fecal content. This fecal content was seeded in culture mediums of BHI, sheep blood agar 5%, MacConkey agar and Saboraud dextrose agar. The mice\'s lineages studied have different fecal microbiotas; the E. coli strains are different in each lineage and they\'ve showed resistance to multiple antibiotics; the E. coli strains are not pathogenics; isolated bacteria on animal rooms were not affected by mice\'s fecal microbiotas, the microbiological monitoring of animals and biosafety standards always must be adopted and followed at animal rooms.

Estudos funcionais in vitro são essenciais para a compreensão do papel de miRNAs, pequenas moléculas de RNA que desempenham papel importante na regulação gênica, no câncer. Neste estudo analisamos a viabilidade de linhagens celulares derivadas de carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço (CECP), queratinócitos orais provenientes de culturas primárias e queratinócitos imortalizados, como modelos para estudos funcionais de miRNAs previamente identificados como desregulados nesse tipo de carcinoma: miRNA-1, miRNA-7, miRNA-10b e miRNA- 196a. Com este fim avaliamos inicialmente a expressão dos quatro miRNAs em todos os tipos celulares propostos através de reações em cadeia da polimerase em tempo real específicas. As linhagens celulares de carcinoma epidermoide de boca foram previamente caracterizadas quanto ao seu perfil de sequências de DNA do tipo STR (do inglês Short Tandem Repeats ou repetições curtas em sequência) com o objetivo de confirmar a identidade da linhagem. Foram realizados ensaios para a super-expressão e inibição da expressão destas quatro moléculas na linhagem SCC25 e em queratinócitos orais derivados de cultura primária e, uma vez constatado o sucesso da transfecção, avaliamos, para cada caso, a expressão de alvos (mRNAs) validados na literatura. O impacto destas intervenções em proliferação celular, um importante processo desregulado em câncer, também foi avaliado. Os resultados apontam diferenças significativas na expressão dos miRNAs entre linhagens celulares passíveis de serem utilizadas como modelos para estudos funcionais em carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço. Ressaltam-se diferenças entre linhagens de carcinoma de língua e de faringe, bem como diferenças expressivas entre a linhagem de queratinócitos orais imortalizados e queratinócitos orais normais provenientes de culturas primárias. Conclui-se que cada modelo celular possui características particulares que os tornam mais ou menos adequados para um determinado estudo. A inibição da expressão de genes alvo em função da super-expressão do miRNA regulador foi observada apenas em parte das situações avaliadas. Este resultado decorre do fato que um alvo é regulado por diferentes miRNAs, bem como por diversos outros fatores genéticos e/ou epigenéticos, que podem variar de acordo com modelo estudado. Este resultado ressalta o fato de que seleção cuidadosa das linhagens é fundamental para conclusões precisas em estudos funcionais. A super- expressão de miRNA-10b e miRNA-196a afetou significativamente a progressão do ciclo celular tanto em SCC25 quanto em queratinócitos orais em cultivo, sugerindo um possível papel em CECP relacionado ao controle da proliferação celular. / Functional in vitro studies are fundamental for the comprehension of the role of microRNAs, small noncoding RNA molecules that function as posttranscriptional regulators, in cancer. The aim of this study was to determine the applicability of head and neck squamous cell carcinoma cell lines and human oral keratinocytes as models for functional studies of microRNAs previously identified as deregulated in squamous cell carcinomas of the head and neck: miRNA-1, miRNA-7, miRNA-10b e miRNA-196a. The expression level of the four microRNAs was assessed in cell lines and in primary cultures of oral keratinocytes using specific real-time polymerase chain reactions. The identity of oral squamous cell carcinoma cell lines was confirmed by means of STR (Short Tandem Repeats) profiling. We performed gainof- function and loss-of-function experiments in a HNSCC cell line, SCC25, as well as in normal human keratocytes. After successful transfection, we evaluated the expression of selected target genes. Significant differences in microRNA gene expression were observed between squamous cell carcinoma cell lines, particularly between cells lines from distinct sub-sites, and between primary culture of human keratinocytes and the immortalized keratinocyte cell line. Thus, each cell model possesses a characteristic phenotype; while one may be useful for a particular study, it may be inappropriate for another. The down-regulation of selected target genes was not observed after the over-expression of all miRNAs studied, an expected result since gene targets might be regulated by more than one microRNA, as well as by genetic and epigenetic mechanisms which are not common among all cell types. There is, therefore, an imperative for cautious selection of suitable cell lines for functional studies in cancer. Finally, the over-expression of miR-10b and miR-196a clearly interfered with cell cycle progression, suggesting a possible role in cell proliferation control for these molecules in HNSCC.

A leishmaniose é uma doença causada por parasitos do gênero Leishmania e transmitida por insetos flebotomíneos. O objetivo deste trabalho foi comparar o perfil da infecção por L. amazonenses em BALB/c, BALB/c nude e C57BL/6, e avaliar a expressão das proteínas CP, LACK, LRR17, metacaspase, PDI e STI, em amastigotas isolados de BALB/c e BALB/c nude. Observamos em 13 semanas o aumento mais precoce da espessura da pata em BALB/c do que em BALB/c nude. A carga parasitária nos animais nude foi superior à dos demais. Por outro lado, animais C57BL/6 controlaram a infecção a partir da sexta semana. A análise da expressão gênica nas lesões mostrou um padrão misto Th1/Th2 em todos os animais, e maior expressão de IFN-g, IL-4, IL1b e iNOS em BALB/c. Em baço e linfonodo observamos baixa expressão de CD3e e elevada expressão de iNOS em BALB/c nude. A análise por FACs mostrou em baço e linfonodo a esperada baixa porcentagem de células TCD4 e T CD8 em BALB/c nude, no entanto com capacidade de produzir IFN-g e IL-4. A LACK e a metacaspase estão aumentadas nos parasitas isolados de BALB/c nude. A metacaspase apresentou maior atividade também em nude. Não observamos diferença na expressão da LACK e metacaspase em amastigotas isolados de macrófagos infectados na presença de IFN-g e IL-4. / Leishmaniasis is caused by parasites of Leishmania genus, transmitted by phlebotomine sandflies. The aim of this study was to compare the profile of the infection by L. amazonenses in BALB/c, BALB/c nude and C57BL/6 and to analyze the expression of CP, LACK, LRR17, metacaspase, PDI and STI proteins, in amastigotes isolated from BALB/c and BALB/c nude lesions. We observed during 13 weeks an early increase in footpad thickness in BALB/c compared to BALB/c nude. Parasite loads in nude mice were higher than the others. C57BL/6 mice controlled infection since the sixth week. Gene expression analysis of the lesions indicated a mixed Th1/Th2 pattern in all mice, and higher expression of IFN-g, IL-4, IL1b and iNOS in BALB/c. In spleens and lymph nodes we observed lower expression of CD3e and high expression of iNOS in BALB/c nude. FACs analysis of spleens and lymph nodes showed low percentages of TCD4 and T CD8 cells in BALB/c nude, but producing IFN-g and IL-4. LACK and metacaspase are increased in parasites isolated from BALB/c nude, and metacaspase had higher enzymatic activity in amastigotes from nude. No differences in LACK or metacaspase in amastigotes isolated from macrophages infected in the presence of IFN-g and IL-4 were observed.

As distrofias musculares constituem um grupo heterogêneo de doenças genéticas, caracterizadas por uma degeneração progressiva e irreversível dos músculos. Modelos murinos distróficos, como o mdx, SJL/J, Largemyd e Lama2dy-2J/J, são ferramentas importantes para o estudo destas doenças. O objetivo deste trabalho consistiu em estabelecer parâmetros de avaliação funcional que visem a sua utilização para elucidar os benefícios clínicos de futuras terapias. Para tanto, foram avaliadas as quatro linhagens distróficas, em diferentes idades, e comparadas a controle normal. Os testes padronizados consistiram em nado forçado, avaliação de resistência/equilíbrio pelos membros anteriores e pelos quatro membros, caminhar em plataforma suspensa, suspensão pela cauda, grip strength e rota rod. Comprovou-se a existência de diferentes padrões de força, resistência, coordenação motora e aprendizagem/memória ao longo do tempo de vida de cada linhagem, o que permitiu traçar parâmetros a serem utilizados em futuras pesquisas de terapia celular e farmacológica. / Muscular dystrophies are a heterogeneous group of genetic diseases characterized by a progressive and irreversible degeneration of the muscles. Dystrophic mouse models, like the mdx, SJL/J, Largemyd and Lama2dy-2J/J, are important tools for studying these diseases. The aim of this study was to establish parameters for functional evaluation aiming its use to elucidate the clinical benefits of future therapies. Thus, we evaluated the four strains of dystrophic mice, at different ages, and compared to normal control. Standardized tests consisted of forced swimming, evaluation of resistance/balance by forelimb and four members, walking on suspended platform, suspension by the tail, grip strength and rota rod. We observed the existence of different patterns of strength, endurance, coordination and learning / memory over the lifetime of each strain, which allowed tracing parameters to be used in future studies of cell and pharmacology therapies.

Com o objetivo de avaliar as características produtivas e a severidade de doenças de linhagens avançadas de aveia branca, provenientes de cruzamentos controlados do programa de melhoramento de aveia da APTA, visando à seleção de materiais com qualidades agronômicas superiores para o Estado de São Paulo, foram realizados experimentos no Pólo Regional de Desenvolvimento Tecnológico dos Agronegócios do Sudoeste Paulista, em Capão Bonito, nas safras de inverno de 2004 a 2007. Foram avaliados vinte genótipos (IAC-7, CB990107, CB990318, CB990321, CB990324, CB990434, CB990436, CB9952115, CB9958126, CB9958128, CB9960132, CB9962152, CB9968160, CB9968162, CB9968165, CB9968167, CB9924172, CB9930177, CB9967184 e CB9967185) de aveia branca (Avena sativa L.) em relação ao estande, altura de plantas, produtividade e severidade de doenças. O delineamento experimental foi o de blocos ao acaso, com vinte tratamentos e três repetições. Cada parcela experimental foi constituída por quatro linhas de três metros de comprimento, espaçadas de 0,20m, sendo consideradas como área útil, para realização das avaliações, as duas linhas centrais. Houve diferenças significativas entre os genótipos em relação a todos os caracteres avaliados, exceto para helmintosporiose em 2004, 2006 e 2007. Os resultados permitiram obter as seguintes conclusões: (i) as linhagens CB9967184, CB9962152, CB990436, CB9960132, CB990321, CB990434, CB990324, CB9930177, CB9967185, CB990107 e CB9968165 possuem características produtivas promissoras, e (ii) as linhagens CB990318, CB9967185, CB9968167, CB9967184, CB9924172 e CB9960132 possuem nível promissor de resistência/tolerância à ferrugem da folha, helmintosporiose e virose do nanismo amarelo da cevada. Essas linhagens devem ser mais bem avaliadas para seu futuro lançamento como novas variedades de aveia branca para o cultivo no Estado de São Paulo. / With the purpose of evaluating the productive characters and the diseases severity of white oat genotypes, from controlled crosses of APTA oat breeding program, seeking the selection of materials with superior agronomic qualities to the State of São Paulo, field experiments were carried out at \'Technological Development Regional Center of Agribusiness\' of the Southwest region of São Paulo State, in Capão Bonito county, during the winter seasons from 2004 to 2007. Twenty white oat (Avena sativa L.) genotypes were evaluated (IAC-7, CB990107, CB990318, CB990321, CB990324, CB990434, CB990436, CB9952115, CB9958126, CB9958128, CB9960132, CB9962152, CB9968160, CB9968162, CB9968165, CB9968167, CB9924172, CB9930177, CB9967184 and CB9967185) in relation to stand, plant height, productivity and disease severity. The statistical experimental design was random blocks, with twenty treatments and three replications. Each experimental plot had four rows of three meters length (spacing of 20cm between plant rows), being considered as useful area, to make the evaluations, the two central rows. There were significant differences among genotypes for all characters evaluated, except for helminthosporium disease in 2004, 2006 and 2007. The results allowed to obtain the following conclusions: (i) the genotypes CB9967184, CB9962152, CB990436, CB9960132, CB990321, CB990434, CB990324, CB9930177, CB9967185 and CB990107 have promising productive characters, and (ii) the genotypes CB990318, CB9967185, CB9968167, CB9967184, CB9924172, CB9960132 and CB9968165 have promising level of resistance/tolerance to leaf rust and helminthosporium diseases and viral disease of barley yellow stunting. These genotypes should be better evaluated to their future release as new white oat varieties to be cultivated at State of São Paulo.

Na etapa inicial do desenvolvimento de novos fármacos, a avaliação do metabolismo e da toxicidade é fundamental para definir seu potencial emprego como candidato a fármaco. Nestes estudos, diversos modelos in vitro são empregados, dentre eles linhagens de hepatoma humano. Entretanto, uma grande limitação ao uso deste modelo in vitro é a baixa expressão das enzimas do sistema citocromo P450. O carotenóide bixina, componente majoritário do anato (urucum), apresentou em estudos in vivo, a capacidade de induzir algumas isoformas do sistema citocromo P450, com a vantagem de apresentar baixa toxicidade. Neste trabalho, a fração lipossolúvel do anato (bixina) e hidrossolúvel (norbixina) foram avaliadas como indutores do sistema citocromo P450 em linhagens de hepatoma humano. Ensaios de MTT, empregando as linhagens HepG2, C3A e SK-HEP-1 indicaram que bixina e norbixina em concentrações abaixo de 0,22 mM são seguras quanto à citotoxicidade. A expressão dos genes CYP 1A1, 1A2, 2C9, 2B6, 2E1 e 3A4 foi avaliada, através de ensaios de RT-PCR em tempo real, em linhagens de hepatoma humano submetidas a tratamento com os compostos bixina e norbixina. Os resultados mostraram que células HepG2 e C3A tratadas com bixina nas concentrações de 0,05 e 0,1 mM, por períodos de 24 e 48 horas, apresentaram aumento de expressão da CYP 1A1 e CYP 1A2. Porém, a exposição de células HepG2 e C3A ao composto norbixina não resultou em aumento de expressão das isoformas avaliadas neste estudo. Os resultados deste trabalho indicaram o potencial emprego de bixina como agente indutor das CYPs 1A1 e 1A2, em linhagens de hepatoma humano utilizadas como modelo in vitro, para estudo de compostos cuja metabolização envolva uma destas vias, entretanto, estudos adicionais são fundamentais, a fim de avaliar a ação deste composto sobre outras isoformas do sistema citocromo P-450, bem como outros sistemas enzimáticos. / In the early development stage of the new drugs, the pharmacological and toxicological properties are critical to define the potential use of the candidate drug. During this stage, several in vitro models systems are employed, including human hepatoma cell lines. However, the main limitation of the use of cell lines as in vitro model is the low expression level of cytochrome P450 enzymes. A carotenoid knowed as bixin, the main pigment in the annatto (urucum), it has been reported to induce some isoforms of cytochrome P450 in rats, with the advantage of its low toxicity. In this work, the oil-soluble (bixin) and aqueous soluble extracts (norbixin) were evaluated as inducers of the cytochrome P450 system in human hepatoma cell lines (HepG2, C3A, SK-HEP-1). The results of MTT assays showed that bixin concentrations below 0.22 mM were not cytotoxic in HepG2, C3A and SK-HEP-1 cell lines. Expression changes in CYP 1A1, 1A2, 2C9, 2B6, 2E1 and 3A4 were evaluated, by real time RT-PCR and the results showed that the exposition to 0,05 mM and 0,1 mM bixin, for 24 and 48 hours of treatment, lead to an increase in CYP 1A1 and CYP 1A2 expression level. By contrast, the cytochrome P450 isoforms were not affected by the exposition to norbixin. In conclusion, this work indicated the potential use of bixin induced hepatoma cell lines as in vitro model for studies of biotransformation and toxicity of drugs involving CYP 1A, however, further studies are necessary to evaluate the effect of bixin on the other cytochrome P450 isoforms as well as other enzymatic systems.