Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA13MA117.pdf: 974615 bytes, checksum: 1adc6a24dc175e42ba61d10eb2f142ea (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / The domestic chicken (Gallus gallus domesticus) was originated by the jungle red flow chicken (Gallus gallus) and the bankiva chicken (Gallus gallus bankiva). Since the domestication, around 7000 years ago in the Asian Southeast, the chicken came with the human migration, and then scattered to the entire world and arrived to Brazil around 1500 BC. In Brazil has came breeds from Europe and Asia, and they were let in freedom and they crossed at random breeding generating the chicken as know as Brazilian caipira chicken. With development of the national chicken producing the caipira s chickens were forgotten in countryside in third world countries, to be considered less productive. However, with the growing consumption of product considered healthier, this chicken was recovered. In additional, to be more rustic and disease resistance, because their high genetic variability, these chickens are considered an important source for alleles which can be use in the animal genetic improvement. The mitochondrial DNA (mtDNA) is characterized by had an exclusively maternal inheritance and the most used method amplify the mtDNA control region (D-loop), which has a high genetic variability. This study aimed to investigate the origin and composition of the maternal lines on these lineages. . We collected blood samples from 105 Brazilian blue-egg caipira s chickens. The fragments were amplified by PCR, sequenced, and analyzed by the MEGA 4.0 software. As result, 89,52% of the chicken belong to the clade A, 7,62% to C e 2,86% to E, which means that participated animals most from Asian and few from European origin, in the maternal lineages. The results indicate that these strains analyzed of Brazilian chickens, have a higher genetic variability so that observed in non-commercial poultry and conserve a strong founder effect / A galinha doméstica (Gallus gallus domesticus) é originária da galinha vermelha do mato (Gallus gallus) e galinha bankiva (Gallus gallus bankiva). Desde a sua domesticação, que ocorreu por volta de 7000 anos atrás no Sudeste asiático, a galinha acompanhou a migração humana, e assim se espalhou pelo mundo inteiro, chegando ao Brasil por volta do ano de 1500. No Brasil chegaram aves oriundas da Europa e da Ásia, e aqui foram deixadas em liberdade e cruzaram de forma aleatória gerando o que hoje se conhece como galinha caipira. Com o desenvolvimento da avicultura, estas aves foram esquecidas nos quintais de casa, por serem consideradas menos produtivas. No entanto, com o crescente aumento no consumo de produtos considerados naturais, esta ave voltou ao mercado. Por ser mais rústica e resistente a doenças, em virtude de sua variabilidade genética alta, estas aves também são consideradas uma importante fonte de alelos que podem ser utilizados no melhoramento animal. O DNA mitocondrial (mtDNA) caracteriza-se por ser de exclusiva herança materna, sendo o método mais utilizado consiste em amplificar a região controle (alça-D), que possui grande variabilidade genética. Desta forma, este trabalho tem como objetivo determinar a origem e composição das linhas maternas nestas linhagens. Foram coletadas amostras de sangue de 105 galinhas caipiras de ovos azuis oriundas do município de Dois Lajeados-RS. Os fragmentos foram amplificados pela PCR, sequenciados, e analisados pelo software MEGA 4.0. Como resultado, 89,52% das aves pertencem ao haplogrupo A, 7,62% ao C e 2,86% ao E. Para a composição desta ave foram utilizados em sua maioria aves de origem asiática e um pouco de origem europeia, em sua linhagem materna. Os resultados obtidos indicam que estas aves analisadas, apresentam uma variabilidade genética semelhante a aves não comerciais e conservam ainda um efeito fundador muito forte

Os camundongos têm sido amplamente utilizados na experimentação desde o século XVII, devendo sua qualidade microbiológica ser pesquisada e mantida, para evitar que eles adoeçam ou morram durante o experimento, não transmitam zoonoses e para que os resultados apresentados no experimento sejam confiáveis. A Escherichia coli faz parte da microbiota entérica dos mamíferos, podendo algumas linhagens causar infecções. As estirpes patogênicas apresentam diferentes fatores de virulência, como as endotoxinas, adesinas, enterotoxinas, fator citotóxico necrosante e as hemolisinas. Este trabalho teve como objetivos: analisar as microbiotas aeróbias bacteriana e fúngica presentes no intestino das linhagens de camundongos Swiss, C57BL/6, BALB/c, C3H/HePas, C3H/HeJ, MDX e YCx43, verificando se existem diferenças entre elas; avaliar a suscetibilidade \"in vitro\" frente aos antimicrobianos das E. coli isoladas, verificando se existem diferenças entre as linhagens; verificar a ocorrência de resistência a múltiplos antimicrobianos nas E. coli isoladas; pesquisar os fatores de virulência das E. coli isoladas, também investigando se existem diferenças destes entre as linhagens estudadas; identificar os microrganismos presentes nos diferentes ambientes em que estes animais são mantidos, verificando se existem diferenças entre eles. Os camundongos foram necropsiados e coletou-se uma pequena quantidade de seu conteúdo fecal que foi semeado nos meios de cultura BHI, ágar sangue de carneiro 5%, ágar MacConkey e ágar Saboraud dextrose. Foi realizando o antibiograma e PCR das E. coli isoladas. Realizou-se a cultura de suabes da mesa, maçaneta de porta e exterior das luvas dos funcionários. Verificou-se que as linhagens de camundongos estudadas apresentam microbiotas fecais diferentes; as estirpes de E. coli são diferentes em cada linhagem e apresentam resistência a múltiplos antibióticos, que as estirpes de E. coli isoladas não são patogênicas, que as bactérias isoladas nas salas do biotério não foram influenciadas pela microbiota fecal dos camundongos e que o monitoramento microbiológico de rotina dos animais, do ambiente e dos técnicos, e as normas de biossegurança são indispensáveis e devem ser sempre adotados e mantidos no biotério. / Mice have been largely used at experiences since 17o century, so their microbiological quality should be investigated and kept safety in order to avoid they become ill or die during an investigation and don\'t transmit zoonosis to those who handle them; this is important in order to make the results presented in the experience be reliable. The Escherichia coli is part of enteric microbiota of mammals, and some of them may cause infections. The pathogenic strains of E. coli show different virulence factors, such as endotoxins, adhesins, enterotoxins, necrotizing citotoxic factors (cnf) and hemolysins. This study has aimed to analyze: the bacterial and fungi aerobic microbiota present at intestine of lineages Swiss, C57BL/6, BALB/c, C3H/HePas, C3H/HeJ, MDX and YCx43 mice, checking if there are differences among them; to evaluate the susceptibility in vitro to antimicrobial agents of E. coli isolated, checking if there are differences among lineages; to verify the occurrence of resistance to multiple antimicrobial agents at E. coli isolated; to investigate the virulence factor\'s of lineages of E. coli, also checking if there are differences among these lineages and the lineages studied; identify the micro-organisms presented at different environments where these animals are kept, checking if there are differences among them. The mice were submitted to necropsy and it was collected a little amount of their fecal content. This fecal content was seeded in culture mediums of BHI, sheep blood agar 5%, MacConkey agar and Saboraud dextrose agar. The mice\'s lineages studied have different fecal microbiotas; the E. coli strains are different in each lineage and they\'ve showed resistance to multiple antibiotics; the E. coli strains are not pathogenics; isolated bacteria on animal rooms were not affected by mice\'s fecal microbiotas, the microbiological monitoring of animals and biosafety standards always must be adopted and followed at animal rooms.

O câncer compreende uma doença multifatorial responsável por altíssimos indíces de mortalidade globalmente. Embora atualmente tenhamos resultados positivos em relação ao tratamento do câncer principalmente voltados à imunoterapia, dados alarmantes ainda são encontrados. Assim, desenvolvemos linhagens tumorais geneticamente modificadas para expressarem ovalbumina (mOVA ou cOVA) e luciferase, a fim de estudarmos as interações do sistema imune com o tumor. Em nossos resultados, a presença da ovalbumina indicou: Alteração no perfil de crescimento tumoral em animais previamente imunizados com OVA e posteriormente desafiados com o tumor, ativação de células TCD8+ citóxicas anti-OVA além de demonstrar também a capacidade imunogênica das linhagens tumorais quando estas são administradas nos animais em estado necrótico. Ao todo, nosso modelo demonstrou que estratégias de vacinação anti-tumorais possuem a capacidade de ativação do sistema imune para na otimização do reconhecimento e resposta anti-tumoral. / Cancer is characterized as a multifactorial disease responsible for many deaths globally. Although nowadays we can find positive perspectives regarding cancers treatment, it is still very common to notice some alarming data. Therefore, our group developed some genetically modified tumoral lineages expressing ovalbumin (mOVA or cOVA) together with luciferase, in order to elucidate the relationship between tumor and the immune system. In our results, the presence of ovalbumin demonstrated: Changes in tumoral growth when animals were previously immunized with OVA and then challenged with our tumoral lineages; TCD8+ lymphocytes anti-OVA activation thus ovalbumin immunogenic potential when lineages were exposed to necrotic death followed by in vivo administration. In summary, our model showed that anti-tumoral vaccinations are indeed capable of promoting immune systems activation and consequently, improving the anti-tumor immunity.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5215_1.pdf: 1381913 bytes, checksum: 3a78f7ed849513c01bc3e4ced1760801 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / O ácido úsnico é um metabólito de líquen que apresenta uma grande variedade de atividades biológicas, dentre as quais, citotoxidade frente a células oriundas de tumores malignos humanos. Apesar da existência de revisões recentes sobre a atividade citotóxica do ácido úsnico, o mecanismo de ação desta droga ainda não foi completamente elucidado. Não existe na literatura referência ao envolvimento do gene supressor de tumor p53 com os efeitos do ácido úsnico. Na sua forma normal, a proteína p53 atua em resposta a diferentes estresses celulares levando à transcrição de genes que induzem a retenção do ciclo celular ou apoptose. Entre as formas de atuação do p53 está a repressão de genes que codificam proteínas associadas à polimerização e estabilização de microtúbulos. Estas funções são perdidas quando ocorrem mutações em sua via metabólica, o que acontece em mais de 50% dos tumores cancerosos humanos. O objetivo deste trabalho foi investigar se o mecanismo da ação anticancerígena do ácido úsnico envolve a ativação da via metabólica p53. Para estudos da sensibilidade de linhagens cancerígenas ao ácido úsnico, foram realizados ensaios pelo método colorimétrico do MTT [3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5diphenyl-tetrazolium bromide], utilizando-se várias concentrações do fármaco (1 a 60 μM) por 72h, frente às seguintes linhagens de células malignas humanas: MCF7(câncer de mama, positiva para receptores de estrogênio, p53 normal), MDA-MB-231(câncer de mama, negativa para receptores de estrogênio, p53 inativo), H1299 (câncer de pulmão, nula para p53). Para determinar o envolvimento do p53 na ação citotóxica do ácido úsnico, os níveis das proteínas p53 e p21 (um inibidor de quinases dependentes de ciclinas cuja expressão é controlada pelo p53) em células MCF7 tratadas com 29 μM de ácido úsnico por 24h foram determinados utilizando-se ensaios western blot com o anticorpo monoclonal DO-12 (específico para p53) e WAF1 (específico para p21). Para verificar se a ação anticancerígena do ácido úsnico resulta em dano ao DNA celular, a fosforilação da SER15 do p53 (um marcador para danos em DNA) foi investigada, após tratamento de células MCF7 com 29 μM de ácido úsnico por 24h. Nestes estudos, ensaios western blot foram realizados com o anticorpo policlonal FOSFO-SER15, específico para serina fosforilada. Para verificar se o aumento nos níveis da proteína p53 detectados após o tratamento com ácido úsnico eram acompanhados por um aumento em sua atividade transcricional, foram executados ensaios com ß-Gal. Nesta metodologia utilizaram-se fibroblastos T22 de camundongos, portadores do plasmídeo RGDFos-LacZ (contendo o resíduo de 36 pb do sítio de ligação para o p53), tratados com diferentes concentrações de ácido úsnico. Para a investigação dos efeitos do ácido úsnico na formação e estabilização de microtúbulos, células MCF7 foram tratadas com 29 μM de ácido úsnico por 24h, fixadas em metanol e tratadas com anticorpo monoclonal anti-ß-tubulina. O ácido úsnico mostrou atividade citotóxica frente às várias linhagens celulares oriundas de tumores malignos humanos, promovendo elevação nos níveis das proteínas p53 e p21. Entretanto, este aumento não foi acompanhado de incremento na atividade transcricional nem da fosforilação da SER15 do p53. Também não foram detectadas modificações na formação dos microtúbulos. As propriedades anticancerígenas do ácido úsnico como agente não genotóxico que atua de uma forma independente do p53 fazem dele um candidato em potencial para novas terapias de câncer

O fator IX (FIX) da coagulação sanguínea é uma proteína dependente de vitamina K de grande valor farmacêutico no tratamento da Hemofilia B, o qual é baseado na administração do fator de coagulação derivado de plasma humano ou da proteína recombinante produzida em células murinas. A terapia baseada nestas abordagens apresenta alto custo e está associada às contaminações com vírus e príons, além do desenvolvimento de inibidores de FIX. Esses efeitos aumentam o risco de morbidade e mortalidade relacionadas às hemorragias. Neste trabalho, clonamos o cDNA do FIX em um vetor lentiviral e avaliamos a expressão da proteína recombinante em duas linhagens celulares humanas. A clonagem do cDNA do FIXh no vetor de expressão lentiviral 1054 foi confirmada através da análise com enzimas de restrição específicas obtendo-se as bandas esperadas de 1407 pb e 10054 pb visualizadas em gel de agarose. As linhagens celulares 293T e SK-Hep-1 foram transduzidas com o vetor lentiviral 1054-FIX gerado em nosso laboratório e as células que apresentaram maior expressão de EGFP foram selecionadas e separadas por citometria de fluxo. A quantificação da expressão de FIXrh foi realizada por ensaios de ELISA e cromogênico. A quantificação de FIXrh total foi de 500 ng/106 células para a linhagem 293T e 803 ng/106 células para a linhagem SK-Hep-1. A atividade biológica específica de FIXh nas células 293T e SK-Hep-1 foi 0,047 UI/106 células e 0,186 UI/106 células, respectivamente. Com o intuito de avaliar o perfil de produção de FIXrh ativo ao longo do tempo, foi realizado um acompanhamento de 180 dias, no qual foi observado que a linhagem SK-Hep-1 cessou a expressão de FIX, enquanto as células 293T mantiveram a expressão durante o período. O FIXrh foi caracterizado por western blot confirmando a presença de uma banda imunoreativa esperada de 57 kDa. As linhagens 293T e SK-Hep-1 apresentaram 7,67 e 17 cópias do vetor inserido/célula, respectivamente. Considerando a importância do processo de ?-carboxilação, foi realizada uma análise da expressão gênica dos genes envolvidos neste processo, tais como o VKORC1, ?-carboxilase e o inibidor calumenina, nas linhagens celulares. Os resultados demonstraram razões elevadas entre os genes VKORC1 e calumenina e VKORC1 e ?-carboxilase nas duas linhagens. A cinética de crescimento das células foi realizada por um período de 7 dias apresentando diferenças significativas entre as células SK-Hep-1 transduzidas e não transduzidas, enquanto que as células 293T não presentaram diferenças estatísticas no crescimento celular. A suplementação do meio de cultura com íons Ca+2 e Mg+2 foi testada para avaliar sua influência na expressão de FIXrh ativo. As células 293T apresentaram melhor desempenho nas concentrações de 0,5 mmol/L de Ca+2 e 1,0 mmol/L de Mg+2 e as células SK-Hep-1 no meio de cultura não suplementado. Nossos dados indicam que a linhagem hepática SK-Hep-1 é a melhor produtora de FIXrh funcional e as comparações realizadas entre os dois tipos celulares são importantes na caracterização do comportamento de linhagens geneticamente modificadas voltadas para a expressão de proteínas recombinantes heterólogas e abre novos caminhos para futuros estudos que visam o melhoramento da produção desse tipo de proteína. / Blood coagulation factor IX is a vitamin K-dependent protein, and it has become a valuable pharmaceutical in the treatment of Hemophilia B which is based on the plasma-derived coagulation factors or recombinant protein produced in murine cells. Coagulation therapy based on these approaches has high costs and is closely associated with prion and virus contamination besides the FIX inhibitors development. These effects increase the risk for bleeding-related morbidity and mortality. The purpose of this study was to clone hFIX into a lentiviral vector and evaluate the expression of the recombinant protein in two human cell lines. The cloning of the hFIX cDNA into 1054 lentiviral expression vector was confirmed by enzymatic restriction obtaining the expected 1407 bp and 10054 bp bands in agarose gel. The 293T and SK-Hep-1 cell lines have been stable transduced with 1054-FIX lentiviral vector generated in our laboratory and the cells with higher expression of EGFP were selected and separated by flow cytometry. The quantification of the expression of rhFIX was performed by ELISA and chromogenic assays. The concentration of total rhFIX was 500 ng/106 cells in 293T cell line and 803 ng/106 cells in SK-Hep-1 cell line. The biological activity of FIX secreted by 293T and SK-Hep-1 was 0,047 UI/106 cells and 0,186 UI/106 cells, respectively. In order to evaluate the active rhFIX production profile over time, we conducted a monitoring of 180 days, which was noted that the SK-Hep-1 cell line ceased FIX expression, while 293T cells maintained the expression during this period. rhFIX was characterized by western blot analysis confirming the presence of a expected 57 kDa immunereactive band. The 293T and SK-Hep-1 cell lines showed 7.67 and 17 integrated vector copies/cell, respectively. Considering the importance of the ?-carboxylation process, we performed a gene expression analysis of genes involved in this process, such as VKORC1, ?-carboxylase and calumenin, in cell lines. The results showed high ratios among the genes VKORC1 and calumenin and among VKORC1 and ?-carboxylase in both cell lines. The cell growth kinetics was performed by a 7-day period, showed significant differences between SK-Hep-1 transduced cells and non-transduced cells, whereas 293T cells showed no difference in cell growth. Enrichment of culture medium with Ca +2 and Mg +2 ions was tested to evaluate its influence on the expression of active FIX. 293T cells showed better performance in 0.5 mmol/L Ca+2 and 1.0 mmol/L Mg +2 concentrations and SK-Hep-1 cells in culture medium control. Our data indicate that transduced SK-Hep-1 cells are the best producer of functional rhFIX, and comparisons between these two cell lines are important in characterizing the behavior of genetically modified cell lines focused on the heterologous expression of recombinant proteins and opens new avenues for future studies aimed at improving the production of this type of protein.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:44:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_enrique_parachu_moliterno.pdf: 1249954 bytes, checksum: 934585fa055374ac866ea4a1bfb4b4e1 (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 / Seed dormancy is a trait shown by a large variety of weedy plants, which helps the purpose of perpetuating the species through space and time by delaying germination until specific environmental cues happen. Black oat, a temperate forage grass, is widely used for pasture and as a cover crop in minimum tillage systems in Southern Brazil. However, the largest portion of the seed sown belongs to an old variety, which has no genetic identity, contributing to the appearance of undesirable agronomic traits in a crop species such as seed dormancy. This trait is hold responsible for turning black oat into a potential weedy species in areas sown to other cool season cereals, such as wheat and barley. Three methods were used to screen and select for black oat genotypes expressing low seed dormancy, i.e. screening of lines collected throughout different agricultural regions of the state of Rio Grande do Sul; subjecting a specific line of the species to the effects of two chemical and one physical mutagens and crossbreeding between selected lines and commercial cultivars of the species. All three methods were undertaken under a glasshouse environment (without temperature control), and since there are no known vegetative morphological traits associated to seed dormancy the procedure consisted on selecting seedlings from non dormant seeds. These were grown in the glasshouse environment and their progeny seeds tested for germinability, thus repeating the cycle. Genetic progress was slow for all three methods and cross breeding resulted the most difficult way for the creation of new genotypes, as only less than 8% of all pollinated flowers yielded hybrid seeds. Differences in germinability percentage among seeds of the first and second selection cycles were largest for the line- screening method, less for mutant seed phenotypes and minimum for the crossbreeding method, in which only F1 seeds were tested for germinability. On average, mutant seed treatments yielded 15% germinability after the first selection cycle, increasing to 20% germinability by the end of the second selection cycle. The screening of black oat lines yielded an initial 7% germinability, which increased to 36% germinability by the end of the second cycle. A common trend for all three methods was that seed germinability was highest during the first half of the standard germination test period for oat species, which implies that seedling selection was exercised for two traits simultaneously, i.e. absence of seed dormancy and seed vigor. The identification of several genotypes producing seeds expressing both traits increases the opportunity for genetic progress in this species. / A dormência de sementes é um caráter de muitas espécies de plantas invasoras de culturas agrícolas modernas, a qual tem por objetivo preservar a multiplicação da espécie através da germinação de suas sementes ao longo do tempo e o espaço. Aveia-preta é uma gramínea forrageira temperada muito semeada para produção de forragem e proteção do solo como cultura de cobertura, em sistemas de plantio direto. Porém, a maior parte da semente utilizada para semear a espécie pertence a uma variedade que praticamente não tem sido melhorada desde sua introdução, produzindo sementes com níveis variáveis de dormência. Esse caráter tem gerado problemas na área agrícola ocupada por essa espécie, tornado-a invasora potencial de outras culturas de estação fria. Com o objetivo de contribuir à melhora do caráter dormência de sementes quanto de outros de interesse numa espécie forrageira, foram aplicados três métodos de seleção de genótipos produtores de sementes com baixo nível de dormência: avaliação de genótipos fixos (linhagens) provenientes de diferentes regiões edafoclimáticas do estado de RS, indução a mutação de um genótipo fixo por dois agentes mutagênicos químicos e um físico e hibridações artificiais entre catorze genitores (linhagens e cultivares comerciais). Conforme a influência do ambiente num caráter quantitativo como a dormência de sementes, e o fato de não ter associação conhecida com caracteres morfológicos vegetativos, a estratégia adotada foi de multiplicar as sementes de cada tratamento sob ambiente de casa de vegetação e avaliar sua germinabilidade logo após a colheita. Os progressos na expressão do caráter de interesse foram lentos para os três métodos empregados, sendo que a hibridação artificial resultou o método mais difícil desde que o porcentual de sementes hibridas obtidas em relação ao número de polinizações efetuadas foi inferior a 8%. A diferença entre a germinabilidade das sementes oriundas do primeiro ciclo de seleção em relação às seguintes foi mais marcante para as linhagens do que para aqueles genótipos mutantes. Já, no caso dos híbridos, a avaliação só abrangeu a geração F1 por causa da baixa quantidade de sementes produzidas. Enquanto o progresso para o conjunto de tratamentos com mutagênicos foi relativamente baixo, com germinabilidade inicial média de 15% e final de 20%, as linhagens iniciaram em média com 7% de germinabilidade e logo do primeiro ciclo de seleção finalizaram a avaliação com 36% germinabilidade. Um aspecto comum aos três métodos empregados foi o fato da germinabilidade das sementes ser expressa em níveis mais importantes na primeira metade do período padrão da análise de germinação para a espécie. Isso implica em que a seleção de plântulas foi feita considerando dois caracteres, ausência de dormência e vigor de sementes em forma conjunta. A obtenção de vários genótipos no presente experimento produzindo sementes com ambos os caracteres abre boas perspectivas de progresso genético em aveia preta.

[pt] Criação seletiva bidirecional de uma resposta defensiva ou qualquer outra característica fenotípica é uma técnica na qual animais são criados com o objetivo de modificar a frequência dos genes que estão subjacentes a um fenótipo em particular. O acasalamento de animais de uma determinada população com base nos extremos opostos de uma característica observável vai propagar, após diversas gerações, este fenótipo particular em direções opostas, levando-se à criação de duas linhagens contrastantes. No presente trabalho empregamos o congelamento condicionado em resposta a estímulos contextuais previamente associados com choques elétricos nas patas como critério de seleção para o desenvolvimento de duas novas linhagens de ratos. O protocolo básico consistiu de acasalamento entre machos e fêmeas Wistar com as maiores e as menores taxas de congelamento condicionado em resposta a sinais contextuais da câmara experimental onde os animais foram expostos a três choques elétricos não sinalizados no dia anterior. O Estudo 1 apresenta os resultados iniciais de quatorze gerações de criação seletiva. Os resultados mostraram que diferenças significativas entre estas duas linhagens foram encontradas após 3 gerações, indicando um forte componente hereditário deste tipo de aprendizagem. As linhagens foram denominadas Cariocas com Alto Congelamento Condicionado (CAC) e Cariocas com Baixo Congelamento condicionado (CBC). Além disso, nós introduzimos um terceiro grupo de animais aleatoriamente selecionados (CTRL) em nosso programa de criação seletiva. No Estudo 2 investigamos os diferentes padrões de extinção e da reaquisição do medo condicionado nestas duas novas linhagens. Por fim, no Estudo 3, nossos resultados sugeriram uma dissociação entre o medo contextual e o medo discreto entre animais CAC e CBC. / [en] Bidirectional selective breeding of a defensive response or any other phenotypic characteristic is a technique in which animals are bred to modify the frequency of the genes that underlie a particular phenotype. Mating animals within a population based on the opposite extremes of an observable characteristic will push, over many generations, this particular phenotype in opposite directions, leading to two separately bred lines. In the present work we employed the conditioned freezing in response to contextual cues previously associated with footshock as the phenotype criterion for developing two new rat lines. The basic protocol consisted of mating male and female albino Wistar rats with the highest and lowest conditioned freezing in response to the contextual cues of the experimental chamber where animals were exposed to three unsignaled electric footshocks on the previous day. Study 1 presents the initial results of fourteen generations of selective breeding. We found that after three generations, reliable differences between these two lines were already present, indicating a strong heritable component of this type of learning. The lines were named Carioca High conditioned Freezing (CHF) and Carioca Low conditioned Freezing (CLF). Also, we introduced a third group of randomly selected animals (RND) in our selective breeding program. In Study 2, we investigated the different patterns of fear extinction and reacquisition in these two new lines. Finally, in Study 3, results showed dissociation between contextual and phasic fear between CHF and CLF rats.

As distrofias musculares constituem um grupo heterogêneo de doenças genéticas, caracterizadas por uma degeneração progressiva e irreversível dos músculos. Modelos murinos distróficos, como o mdx, SJL/J, Largemyd e Lama2dy-2J/J, são ferramentas importantes para o estudo destas doenças. O objetivo deste trabalho consistiu em estabelecer parâmetros de avaliação funcional que visem a sua utilização para elucidar os benefícios clínicos de futuras terapias. Para tanto, foram avaliadas as quatro linhagens distróficas, em diferentes idades, e comparadas a controle normal. Os testes padronizados consistiram em nado forçado, avaliação de resistência/equilíbrio pelos membros anteriores e pelos quatro membros, caminhar em plataforma suspensa, suspensão pela cauda, grip strength e rota rod. Comprovou-se a existência de diferentes padrões de força, resistência, coordenação motora e aprendizagem/memória ao longo do tempo de vida de cada linhagem, o que permitiu traçar parâmetros a serem utilizados em futuras pesquisas de terapia celular e farmacológica. / Muscular dystrophies are a heterogeneous group of genetic diseases characterized by a progressive and irreversible degeneration of the muscles. Dystrophic mouse models, like the mdx, SJL/J, Largemyd and Lama2dy-2J/J, are important tools for studying these diseases. The aim of this study was to establish parameters for functional evaluation aiming its use to elucidate the clinical benefits of future therapies. Thus, we evaluated the four strains of dystrophic mice, at different ages, and compared to normal control. Standardized tests consisted of forced swimming, evaluation of resistance/balance by forelimb and four members, walking on suspended platform, suspension by the tail, grip strength and rota rod. We observed the existence of different patterns of strength, endurance, coordination and learning / memory over the lifetime of each strain, which allowed tracing parameters to be used in future studies of cell and pharmacology therapies.

Os defeitos de pernas são decorrentes do rápido crescimento das aves, tornando-se necessário um estudo genético das associações entre essas características. Os objetivos deste estudo foram estimar os parâmetros genéticos para defeitos de pernas por escore visual, discondroplasia tibial, características de desempenho e carcaça, assim como estimar as tendências genéticas, ganho genético potencial e respostas correlacionadas, em uma linhagem de frangos de corte. O banco de dados utilizado neste estudo foi composto por registros de 128.459 aves, com informações de pedigree, manejo, desempenho, qualidades e defeitos de carcaça pertencentes a um rebanho elite de uma linhagem comercial de frangos de corte sob seleção. As características estudadas foram: os pesos vivos do animal aos sete (P7), 30 (P30) e 38 dias de idade (P38), peso ao abate (PA), peso eviscerado (PE), peso de peito (PPEI), peso de pernas (PPER), rendimento de carcaça (RCAR), rendimento de peito em relação ao peso ao abate (RPEI), rendimento de pernas em relação ao peso ao abate (RPER), eficiência alimentar (EFAL), defeito de pernas por escore visual (DPER), discondroplasia tibial (DT) e defeito de pernas total (DPERT). Para as características P7, P30, P38, PA, PE, PPEI, PPER, RCAR, RPEI, RPER, EFAL as análises genéticas foram realizadas pela metodologia dos modelos lineares clássicos, utilizando o método da Máxima Verossimilhança Restrita (REML) sob um modelo animal. Além da metodologia dos modelos lineares clássicos, as análises genéticas para as características DPER, DT e DPERT foram realizadas utilizando modelos lineares generalizados com função de ligação logit, devido à natureza categórica destas características, empregando-se modelo animal e modelo pai, com o método da quasi-verossimilhança penalizada (PQL). As análises foram obtidas utilizando-se o software ASREML®. As estimativas de herdabilidades obtidas para as características estudadas variaram de moderadas a altas, exceto para DT e DPERT, para as quais as estimativas de herdabilidades foram baixas. As estimativas de correlações genéticas entre as características de desempenho e carcaça e defeitos de pernas variaram de moderadas a altas, exceto para DPER e EFAL que apresentaram baixas correlações genéticas com as características de desempenho carcaça. As tendências genéticas para as características de desempenho e carcaça são indicativas que há seleção para características de peso vivo em diferentes idades e de desempenho e carcaça nesta linhagem, diferente do que acontece para as características de DPER, DT e DPERT, para as quais não há seleção evidente nessa linhagem. / The legs defects are caused by rapid growth of broilers, therefore it is necessary to study of genetic associations between these traits. The objectives of this study were to estimate genetic parameters for legs defects by visual score, tibial dyschondroplasia, performance and carcass traits, and to estimate the genetic trends, potential genetic gain and correlated response in a broiler line. The database used in this study consisted of records from 128,459 birds, containing pedigree information, management, performance, qualities and defects, of an elite flock from a commercial strain of broiler chickens under selection. The traits studied were: the live weight at seven (P7), 30 (P30) and 38 days old (P38), slaughter weight (PA), carcass weight (PE), breast weight (PPEI), leg weight (PPER), carcass yield (RCAR), breast yield (RPEI), legs yield (RPER), feed efficiency (EFAL), legs defect by visual score (DPER), tibial dyschondroplasia (DT) and legs total defects (DPERT). For the traits P7, P30, P38, PA, PE, PPEI, PPER, RCAR, RPEI, RPER, EFAL statistics and genetic analysis done through classical linear models methodology, using the method of Restricted Maximum Likelihood (REML) under an animal model. Besides the classical linear model methodology, genetic analyzes for the traits DPER, DT and DPERT were done using generalized linear models with logit link, due to the categorical nature of these traits, using an animal and sire models, by the method of penalized quasilikelihood (PQL). Full analyzes were obtained using the ASREML® software. Estimates of heritability obtained for the traits varied from moderate to high, except for DT and DPERT, which heritability were low. Estimates of genetic correlations between performance and carcass traits and leg defects varied from moderate to high, except for DPER and EFAL, which presented low genetic correlations with performance characteristics of the carcass. Genetic trends for performance and carcass characteristics indicate that selection occurs for body weight at different ages and performance and carcass traits in this strain, in a different way to the observed for traits of DPER, DT and DPERT, which no evident selection in this line was observed.

Durante a produção industrial de etanol combustível, as linhagens comerciais de Saccharomyces cerevisiae introduzidas no processo são naturalmente substituídas por linhagens selvagens, cuja origem é desconhecida. Com os objetivos de entender melhor esta questão, de se saber mais sobre o habitat natural de S. cerevisiae, e também na busca de fenótipos de interesse para aplicações industriais, avaliamos neste estudo características fisiológicas e genéticas de 14 linhagens selvagens de S. cerevisiae isoladas de Mata Atlântica e Cerrado brasileiros. Cultivos foram realizados em condições padrão de laboratório, sem ou com estresses térmico, ácido ou etanólico e também em condições similares às usadas na indústria. Como principal resultado, a linhagem S. cerevisiae UFMG-CM-Y257 apresentou alta velocidade específica de crescimento (0,57 ± 0,02 h-1), alto rendimento em etanol (1,65 ± 0,02 mol etanol mol hexose-equivalente-1), alta produtividade em etanol (0,19 ± 0,00 mol L-1 h-1), alta tolerância ao ácido acético (10 g L-1) e à alta temperatura (40 oC). / During industrial fuel ethanol production, the commercial Saccharomyces cerevisiae strains introduced in the process are naturally substituted by wild strains, whose origin is unknown. With the aims of gaining insight into this issue, of getting a better understanding on the natural habitat of S. cerevisiae, and also of identifying industrially relevant phenotypes, we performed a physiological and genetic characterization of 14 indigenous S. cerevisiae strains, isolated from Atlantic Forest and Cerrado biomes in Brazil. Cultivations were performed under standard laboratory conditions, with or without stress (high temperature, acid or ethanol), and also under conditions mimicking the industrial environment. As a main result, we identified S. cerevisiae UFMG-CM-Y257 as a strain displaying high specific growth rate (0.57 ± 0.02 h-1), high ethanol yield (1.65 ± 0.02 mol ethanol mol hexose-equivalent-1), high ethanol productivity (0.19 ± 0.00 mol L-1 h-1), high acetic acid tolerance (10 g L-1) and high temperature tolerance (40 oC).