CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Este trabalho teve como objetivo incentivar a implantaÃÃo de tÃcnicas de gerenciamento e procedimentos de boas prÃticas de laboratÃrio junto a Rede Brasileira de LaboratÃrios - REBLAS a partir da avaliaÃÃo de diagnÃstico situacional, a qual foi realizada atravÃs da aplicaÃÃo de questionÃrios em laboratÃrios de instituiÃÃes pÃblicas de ensino superior e pesquisa na Ãrea da saÃde em quatro capitais brasileiras. Metodologia: A pesquisa de campo foi realizada atravÃs de visitas em laboratÃrios de instituiÃÃes de ensino superior e pesquisa para diagnosticar a situaÃÃo dos mesmos por meio de entrevistas com aplicaÃÃo de questionÃrios. O tamanho da amostra foi estabelecido em cinqÃenta (50) pesquisadores, distribuÃdos em instituiÃÃes de ensino e pesquisa de quatro (04) capitais brasileiras. Em cada instituiÃÃo foram selecionados laboratÃrios e identificados os pesquisadores responsÃveis para serem entrevistados. Em seguida foi elaborado um diagnÃstico situacional dos laboratÃrios atravÃs dos quais foram comparados modelos de boas prÃticas de laboratÃrio previamente existentes na literatura com aqueles dos laboratÃrios entrevistados, os quais foram avaliados e conduzidos sob sigilo absoluto, de modo a manter a integridade dos laboratÃrios e instituiÃÃes em questÃo. Resultados: atravÃs do diagnÃstico situacional dos laboratÃrios foram desenvolvidos modelos de procedimentos de boas prÃticas de laboratÃrio e garantia da qualidade (procedimentos operacionais padrÃo e formulÃrios), os quais poderÃo ser implantados e implementados em laboratÃrios de instituiÃÃes pÃblicas de ensino superior e pesquisa existente no Brasil. ConclusÃo: As concepÃÃes teÃricas que fundamentaram a dissertaÃÃo foram analisadas e comparadas com as pesquisas teÃricas e de campo e viabilizaram a escolha e elaboraÃÃo de tÃcnicas de gerenciamento e procedimentos padronizados em funÃÃo do diagnÃstico situacional dos laboratÃrios entrevistados. Isso poderà refletir na comunidade cientÃfica uma confiabilidade em decorrÃncia da implantaÃÃo de procedimentos e tÃcnicas padronizadas e no futuro permitirà que os laboratÃrios possam ser credenciados na - REBLAS, conferindo seguranÃa aos pesquisadores, bem como, reprodutibilidade dos resultados. / To make possible the implantation of management techniques and good practice of laboratory on the Brazilian Net of Laboratories - REBLAS from an evaluation of diagnosis, for the application of questionnaires in laboratories of public institutions of superior education and health research, in four Brazilian capitals. Methodology: The research was carried through visits in laboratories of institutions of superior education and health research, to diagnosis the situation of them by interviews with application of questionnaires. The size of the sample was in fifty (50) researchers, distributed in institutions of education and research of four (04) Brazilian capitals. In each institution had been selected a laboratories and identified the responsible researchers to be interviewed. After that, a diagnosis of the situation of the laboratories was elaborated, and been compared with previously existing models of good practice of laboratory in literature, which had been evaluated and lead under absolute secrecy, in order to keep the integrity of the laboratories and institutions in question. Results: through the diagnosis of the laboratories were developed models of good practice of laboratory and quality warranty (operational procedures standard and forms), which could be implanted and be implemented in laboratories of institutions of existing health education and research in Brazil. Conclusion: The theoretical conceptions that had based the study had been analyzed and compared with the theoretical research and on field and had made possible the choice and elaboration of management techniques and standardized procedures in function of the diagnosis of the interviewed laboratories. This will be able to reflect trust in the scientific community through the implantation of procedures and standardized techniques and in the future those laboratories may be credential in the REBLAS, conferring security to the researchers, as well as, credibility of the results.

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A giardíase é uma doença entérica de alta prevalência particularmente nos países em desenvolvimento. Diferentes espécies foram descritas em função de seus hospedeiros. A G. duodenalis é a espécie que parasito não só o homem, mas também animais domésticos e silvestres. Recentemente, com a aplicação de técnicas moleculares, foi possível identificar sete diferentes agrupamentos sendo que cada um deles tem predileção por determinadas espécies de hospedeiro. Essa discriminação não é possível por meio da microscopia. A identificação do(s) agrupamento(s) presente(s) na população de determinada região pode ser de grande importância na elaboração de políticas de saúde pública já que revela o perfil de transmissão desse protozoário. Este estudo teve por objetivos verificar o grau de positividade de enteroparasitos, a contribuição de cada um deles nesse índice e o genótipo dos cistos de G. duodenalis presentes em amostras de fezes de indivíduos atendidos no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo. Foram analisadas 6717 amostras com positividade para algum enteroparasito de 12,5%, sendo S.stercoralis e G. duodenais respectivamente o helminto e protozoário patogênico mais frequentes. A maioria dos casos de G. duodenalis genotipada era dos agrupamentos AII e B. / Giardiasis is a very prevalent enteric disease occurring mainly in developing countries. Different species have been described concerning their hosts. G. duodenalis parasites not only men but also domestic and wild animals. Recently molecular techniques have been used to identify seven different assemblages which parasites specific hosts. The microscopic analysis do not allows that discrimination. It can be useful to know the assemblage profile of specific population in order to provide some important information to built public health politicies once it reveals the transmition of the protozoan The aim of this study was to verify the enteroparasites infection degree, the individual contribution of each one in this picture and to genotyping G. duodenalis cysts from human faecal samples of individuals from University Hospital from Universty of São Paulo. So, 6717 faecal samples were analysed and 12,5% were positive for some enteroparasite and S.stercoralis and G. duodenais were the helminth e pathogenic protozoan more frequently found. Most of the cases of G. duodenalis were from the assemblages AII and B.

Os antibióticos beta-lactâmicos, principalmente as aminopenicilinas (ampicilina e amoxicilina) são causa freqüente de exantema maculo papular e urticária tardia em pacientes tratados com estes medicamentos. Entretanto, a falta de métodos para diagnóstico destas reações constitui uma lacuna na abordagem destes indivíduos. Objetivos: Os objetivos deste estudo foram determinara a freqüência e significância de testes cutâneos positivos em pacientes com história de exantema maculo-papular e urticária tardias induzidos por antibióticos beta-lactâmicos e determinar a sensibilidade e especificade dos testes diagnósticos in vitro para o diagnóstico de alergia a drogas: proliferação linfocitária e dosagem de citocinas no sobrenadante da cultura linfocitária.. Métodos: Os pacientes foram submetidos à dosagem de IgE específica para os seguintes determinantes: benzilpeniciloil, amoxiciloil e ampiciloil. Testes cutâneos de puntura e intradérmico com benzilpeniciloil polilisina, mistura de determinantes menores da penicilina, benzilpenicilina (10.000 UI/ml), amoxicilina (2 mg/ml) e ampicilina (2mg/ml) foram realizados em todos os pacientes com leituras após 20 minutos, 48 horas e 72 horas. Foi realizado teste de contato com os mesmos medicamentos (amoxicilina 5%, ampicilina 5% e penicilina G 5000UI/g de vaselina sólida). Todos os testes foram feitos em duplicata com controles positivo e negativo. Amostras de sangue foram coletadas para a proliferação linfocitária (incorporação de timidina triciada) e dosagem de citocinas no sobrenadante da cultura (IL-5, IFN-gama e TNF- 17 alfa) através de ELISA. Resultados: Foram estudados 20 pacientes e 15 controles. Nenhum dos pacientes ou controles apresentou teste cutâneo de leitura imediata positivo. Três pacientes reagiram positivamente aos testes cutâneos de leitura tardia nas leituras de 48 e 72 horas. Não houve nenhum resultado positivo dos testes cutâneos no grupo controle. A proliferação linfocitária mostrou-se positiva em somente 2 controles (13%) e 10 pacientes (50%). A sensibilidade dos experimentos de proliferações linfocitária variou entre 25% com penicilina na concentração de 250 ?g/ml até 55% com ampicilina 1000 ?g/ml. Sua especificidade foi de 80% a 100%. Conclusão: os testes cutâneos de leitura tardia não constituíram métodos diagnósticos eficazes para as reações tardias aos antibióticos beta-lactâmicos. A proliferação linfocitária apresentou baixa sensibilidade, porém, alta especificidade para o diagnóstico das mesmas reações. A detecção de IFN-gama e IL-5 evidenciaram alta especificidade e baixa sensibilidade, enquanto a dosagem de TNF-alfa mostrou-se altamente sensível (95%), porém, pouco específica (40%) / The beta-lactam antibiotic, mainly aminopenicillins: ampicillin (AMP) and amoxicillin (AMX), are frequently cited as causes of morbiliforme eruptions and late onset urticaria. A major problem with existing data on beta-lactam reactions of the delayed type includes a lack of standardized testing methods. Objectives: The goal of this study is to establish the frequency and significance of positive skin testing in patients with history of beta-lactam induced maculo-papular exanthema and late onset urticaria and the sensibility/specificity of in vitro tests for drug allergy investigation: lymphocyte proliferation assay and cytokine detection. Methods: Patients were submitted to complete penicillin (PEN) allergy test: specific detection for serum IgE antibody to benzyl penicilloyl polylysine, amoxicilloyl polylysine and ampicilloyl polylysine; puncture and intradermal skin test with benzyl penicilloyl polylysine and minor determinants mixture, benzylpenicillin (10.000 UI/ml), amoxicillin (2mg/ml), ampicillin (2mg/ml) were performed and read at 20 minutes, 48hours and 72 hours. All patients had epicutaneous patch testing done with the same drugs (5% amoxicillin, 5% ampicillin and 5000 IU/g penicillin G all in petrolatum). All tests were performed in duplicate with positive and negative controls. All subjects had blood collected for lymphocyte proliferation assay (H3-thymidine incorporation assay) and IL-5, TNF-alpha and IFN-gamma profile were analyzed in culture supernatant by ELISA. Results: None of the patients or controls had positive immediated skin test. Only three patients reacted positively to the 48 and 72 hours 15 reading of intradermal skin test and patch test with the same reagents. There was no positive skin test result among the control group. The lymphocyte proliferation test (LTT) was positive in only two control subjects, while in the study group, 10 patients had positive proliferation tests (50%). The LTT sensitivity varied from 25% to 55% depending on the drug and concentration tested. The specificity ranged from 80% to 100%. IFN-gamma and IL-5 detection had a high specificity, but low sensitivity, while TNF-alpha showed high sensitivity (95%) and low specificity (40%)

Recentemente, foi descrito um grupo de alterações no metabolismo da creatina denominado Síndromes de Deficiência de Creatina. Há três formas da doença geneticamente determinadas que cursam com deficiência de creatina, seja por comprometimento de sua síntese ou por defeito na proteína transportadora. O espectro de apresentação clínica dessa condição é inespecífico e inclui atraso ou estagnação do desenvolvimento neuromotor, hipotonia muscular, movimentos involuntários do tipo coreoatetose, retardo ou ausência do desenvolvimento da fala, retardo mental de grau variável, comportamento autista e epilepsia. Neste trabalho, foi desenvolvida e validada uma alternativa metodológica àquelas disponíveis na literatura, com a utilização de extração por troca catiônica forte e separação e detecção por cromatografia líquida de interação hidrofílica acoplada a espectrometria de massas em tandem em que foram exploradas as características químicas das moléculas de creatina e guanidinoacetato, metabólito intermediário da síntese de creatina. Os valores de referência para o método foram definidos pela sua aplicação a 150 amostras de urina e 197 amostras de soro de indivíduos de ambos os sexos e idades entre 0 e 16 anos. Foram também analisadas amostras de urina, soro e plasma de 54 pacientes com clínica compatível com a síndrome de deficiência de creatina sendo que 3 deles apresentaram perfil bioquímico característico de uma das formas dessa condição / Recently, a new group of inborn errors of metabolism, collectively named as creatine deficiency syndrome, was identified. Three genetically determined presentations are currently known, affecting both creatine synthesis and transport. Clinical presentation spectrum is non-specific and includes developmental delay, hypotonia, involuntary movements as choreoathetosis, delay or lack of speech acquisition, mental retardation of variable severity, autistic behavior, and epilepsy. Herein, we developed and validated an innovative method for determination of creatine and of its metabolic intermediate, guanidinoacetate, based on cation-exchange solid-phase extraction and hydrophilic interaction liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry. Reference values for the method were defined testing 150 urine and 197 serum samples in males and females with age ranging from 0 to 16 years. Urine and serum samples from 54 patients with some clinical features that might be attributable to creatine deficiency were also evaluated, and in three, biochemical profile characteristic of one of the disorders was detected

A giardíase é uma doença entérica de alta prevalência particularmente nos países em desenvolvimento. Diferentes espécies foram descritas em função de seus hospedeiros. A G. duodenalis é a espécie que parasito não só o homem, mas também animais domésticos e silvestres. Recentemente, com a aplicação de técnicas moleculares, foi possível identificar sete diferentes agrupamentos sendo que cada um deles tem predileção por determinadas espécies de hospedeiro. Essa discriminação não é possível por meio da microscopia. A identificação do(s) agrupamento(s) presente(s) na população de determinada região pode ser de grande importância na elaboração de políticas de saúde pública já que revela o perfil de transmissão desse protozoário. Este estudo teve por objetivos verificar o grau de positividade de enteroparasitos, a contribuição de cada um deles nesse índice e o genótipo dos cistos de G. duodenalis presentes em amostras de fezes de indivíduos atendidos no Hospital Universitário da Universidade de São Paulo. Foram analisadas 6717 amostras com positividade para algum enteroparasito de 12,5%, sendo S.stercoralis e G. duodenais respectivamente o helminto e protozoário patogênico mais frequentes. A maioria dos casos de G. duodenalis genotipada era dos agrupamentos AII e B. / Giardiasis is a very prevalent enteric disease occurring mainly in developing countries. Different species have been described concerning their hosts. G. duodenalis parasites not only men but also domestic and wild animals. Recently molecular techniques have been used to identify seven different assemblages which parasites specific hosts. The microscopic analysis do not allows that discrimination. It can be useful to know the assemblage profile of specific population in order to provide some important information to built public health politicies once it reveals the transmition of the protozoan The aim of this study was to verify the enteroparasites infection degree, the individual contribution of each one in this picture and to genotyping G. duodenalis cysts from human faecal samples of individuals from University Hospital from Universty of São Paulo. So, 6717 faecal samples were analysed and 12,5% were positive for some enteroparasite and S.stercoralis and G. duodenais were the helminth e pathogenic protozoan more frequently found. Most of the cases of G. duodenalis were from the assemblages AII and B.

As células sangüíneas originam-se da medula óssea através da célula tronco que sofre processo de proliferação, diferenciação e maturação no microambiente hematopoiético. O microambiente hematopoiético é uma estrutura altamente organizada composta de células estromais, moléculas da matriz extracelular (MEC) e citocinas. A desnutrição protéico-energética diminui a produção de células sangüíneas e interfere na defesa do organismo. Neste trabalho estudamos os efeitos da desnutrição protéica (dieta contendo 4% de caseína) sobre a MEC da medula óssea em camundongos. Avaliamos a composição da MEC através de SDS-PAGE 7,5% e Western blot para Fibronectina (FN), laminina (LN) e trombospondina (TSP). Verificamos a capacidade da MEC aderir e sustentar proliferação da célula mielóide FDC-P1, na ausência e na presença de citocinas (GM-CSF e IL3). Avaliamos também a capacidade de ligação destas citocinas na MEC. O perfil eletroforético mostrou diferenças nas proteínas da MEC do animal desnutrido em relação ao controle. Através da densitometria dos géis observamos nas amostras obtidas do animal desnutrido, maior intensidade nas bandas de peso molecular 220, 182, 108 e 56 KDa em relação ao controle. Em 72 KDa a banda foi mais intensa nas amostras dos animais controles. A banda de 60 KDa foi evidenciada apenas nas amostras obtidas dos animais desnutridos. As bandas de 123 e 49 KDa foram evidenciadas apenas nas amostras dos animais controles. A expressão de FN, LN e TSP foi maior nas amostras obtidas dos animais desnutridos. Os ensaios de adesão e proliferação na presença e ausência de citocinas não apresentaram diferenças significativas entre as amostras. Quando avaliamos a capacidade da MEC ligar-se ao GM-CSF, houve maior interação com a MEC proveniente do animal desnutrido do que a MEC do animal controle. O teste de ligação para o IL3 não mostrou diferenças entre as amostras. Esses achados sugerem que a desnutrição protéica induz modificações na MEC, alterando o microambiente hematopoiético. / Blood cells have their origin at the bone marrow through the stem cell which undergoes a proliferation, differentiation and maturation process in the hematopoietic microenvironment. The hematopoietic environment is a highly organized structure formed by stromal cells, extracellular matrix (ECM) molecules, and cytokines. Protein-energy malnutrition reduces the production of blood cells, interfering with the defense of the organism. In the present work we have studied the effects protein malnutrition has on the ECM of bone marrow in mice. We have evaluated ECM composition by means of SDS PAGE 7,5% and Western blot for fibronectin (FN), laminin (LN) and thrombospondin (TSP). We assessed the capacity ECM has in adhesion and support of proliferation of the FDC-P1 myeloid cell both in the absence and in the presence of GM-CSF and IL3 cytokines. We have also measured the binding capacity of these cytokines in the ECM. The electrophoresis profile showed the existence of differences between the ECM proteins in the undernourished animal and the control. Using gel densitometry, we observed in samples from the undernourished animal a greater intensity of bands of 220, 182, 108, 60 and 56 KDa molecular weight as compared to control. At 72 KDa the band was more intense on samples from control animals. The 60 KDa band was evident only on samples taken from undernourished animals. The 123 and 49 KDa bands were evident on control animals only. Expression of FN, LN, and TSP was greater on samples from undernourished animals. Adhesion and proliferation assays, both in the presence and in the absence of cytokines, did not show significant differences among samples. When we evaluated the capacity ECM has to bind to GM-CSF, a greater interaction was seen with the ECM from the undernourished animal than the ECM from the control. Binding test for IL3 showed no differences existed among samples. Such findings suggest protein malnutrition causes alterations of the ECM, modifying the hematopoietic microenvironment.

Title from PDF of title page. / Document formatted into pages; contains 86 pages. / Thesis (M.S.P.H.)--University of South Florida, 2003. / Includes bibliographical references. / Text (Electronic thesis) in PDF format. / ABSTRACT: The Enterovirus genus within the family Picornaviridae contains over 100 serotypes, of which sixty-four are known to be human pathogens. Infection with this group of RNA viruses produces a myriad of clinical conditions including poliomyelitis, meningitis, encephalitis, respiratory illnesses, and hand-foot-and-mouth disease. Outbreaks have been documented worldwide; significant morbidity and mortality exist to warrant laboratory surveillance. Traditionally, enteroviruses have been identified to the level of serotype by the serum neutralization assay. However, numerous problems are associated with this assay. The serum neutralization assay is labor intensive, results are often ambiguous, and reagents are becoming difficult to obtain. Recently, molecular-based typing protocols have been described that are cost effective and produce results that are more reliable. / ABSTRACT: The overall objective of this thesis was to implement a molecular-based typing protocol to replace the serum neutralization method currently used. Three specific aims were identified to reach this objective. First, a database cataloging all enteroviruses isolated at the Florida Department of Health - Tampa Branch Laboratory from 1981 through 2002 was created. Serotype prevalence, specimen submission rates, and temporal trends were analyzed to demonstrate the public health importance of enterovirus surveillance. Next, five oligonucleotide primer sets were compared with respect to sensitivity, specificity, and overall utility in molecular typing protocols developed to accurately determine enterovirus type. Finally, the most effective molecular assay was used to conduct two basic molecular epidemiological analyses of intratypic variation of Coxsackievirus B5 isolates, and of intratypic variation of successive Echovirus 9 passages. / ABSTRACT: The results from this study show that implementation of a molecular-based typing system for enteroviruses would be an improvement over current enterovirus serotyping methods. Results are obtained more rapidly and are more reliable. The implementation of such a system would improve the surveillance capabilities of the State of Florida Department of Health. / System requirements: World Wide Web browser and PDF reader. / Mode of access: World Wide Web.

Thesis (Ph. D.)--University of Texas Health Science Center at Houston, School of Public Health, 2008. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 69-02, Section: B, page: 0769. Advisers: Claudia Pedroza; Asha S. Kapadia. Includes bibliographical references.

Orientador: Luzia Helena Queiroz da Silva / Banca: Wagner Andre Pedro / Banca: Elenice Maria Sequetin Cunha / Resumo: O diagnóstico laboratorial da raiva em morcegos é realizado utilizando-se, principalmente, o encéfalo do animal suspeito. O objetivo do presente trabalho foi testar a hipótese de que o método de aspiração com pipeta plástica (tipo Pasteur) é eficaz na obtenção de encéfalo de morcegos para a realização do diagnóstico comparado com o método tradicional de abertura de crânio. Para tanto, estudaram-se quatro espécies diferentes de morcegos, Molossus rufus (E. Geoffroy, 1805), Molossus molossus (Pallas, 1766), Artibeus lituratus (Olfers,1818) e Myotis nigricans (Schinz, 1821), totalizando 200 amostras. A quantidade de massa encefálica obtida pelo método tradicional foi significativamente maior, contudo, o material colhido pela aspiração foi suficiente para a execução do diagnóstico da doença. Ambos os métodos detectaram indivíduos positivos, sendo que o método de aspiração teve a vantagem de preservar o crânio possibilitando melhor identificação das espécies. / Abstract: Rabies diagnosis in bats is usually performed using the brain of suspected animals. The main hypothesis tested by this work was that aspiration method using plastic pipette (Pasteur type) was effective in the collection of bat brain sample for rabies diagnosis when compared to the opening skull method. A total of two hundred bats of four species were studied: Molossus rufus (E. Geoffroy, 1805), Molossus molossus (Pallas, 1766), Artibeus lituratus (Olfers, 1818) and Myotis nigricans (Schinz, 1821). The proportion of brain weight compared to body weight was statistically higher when using the traditional method, although the brain mass collected by aspiration method was enough for rabies diagnosis. Results demonstrate that independently of the collecting method, both gated to detect positive samples and the aspiration method has the advantage of skull preservation, permitting the identification of the species. / Mestre