Made available in DSpace on 2016-08-19T18:15:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FLAVIA LOPES CARVALHO.pdf: 442162 bytes, checksum: b9d2b399e741a894bb9550e5094975a0 (MD5) Previous issue date: 2009-11-18 / Co-infection Leishmania-HIV/Aids is a serious public health problem in almost of the world. The visceral leishmaniasis is the clinical form of leishmaniosis hat is most associated with HIV/Aids cases being the co-infection understated, since the leishmaniasis is not AIDS-defining illness. This was a descriptive cross sectional study from March 2006 to December 2008, aiming to investigate the occurrence of co-infection Leishmania-HIV in individuals living with HIV/Aids in a Reference Center in São Luís-MA. The population studied was composed of 287 individuals. It was used a questionnaire to collect demographic, epidemiological and socioeconomic data. The physical examination was performed and biological material for detection of infection by Leishmania chagasi was collected by indirect immunofluorescence technique (IIFT), and laboratory tests (blood count, CD4 and CD8, viral load, myelography) were found in charts. We used the chi-square test to assess association of demographic, socioeconomic and epidemiological variables between women and men, whereas p ≥ 0.05 for significance. Women and men had a statistically significant difference in color, destination of waste, occupation and family income. The presence of pen and near the residence showed statistically significant differences when comparing men and women. The prevalence of infection with Leishmania sp, detected by Montenegro Skin Test (MST) was 1,4%. All co-infected showed RIFI and as well as the bone marrow aspirate (myelogram) positives. This study helped identify the magnitude of the prevalence of co-infection Leishmania/HIV. Thus, we suggest that the anti-Leishmania has to be part of the differential diagnosis of individuals with HIV / AIDS and those public policies are increased for this problem. / A co-infecção Leishmania-HIV/Aids é um sério problema de saúde pública em quase todo o mundo. A Leishmaniose Visceral é a forma clínica das leishmanioses que está mais associada ao HIV/Aids, sendo os casos de co-infecção considerados subestimados, uma vez que, a leishmaniose não se constitui doença definidora de Aids. Foi realizado um estudo descritivo transversal de março de 2006 a dezembro de 2008, com o objetivo de investigar a ocorrência de co-infecção Leishmania-HIV em indivíduos convivendo com HIV/Aids, atendidas em um Centro de Referência em São Luís-MA. A população do estudo foi constituída por 287 indivíduos. A coleta de dados foi feita por meio de um questionário para a obtenção de dados demográficos, socioeconômicos e epidemiológicos, bem como foi realizado exame físico e coleta de material biológico para detecção da infecção por Leishmania sp , por meio da Intradermorreação de Montenegro (IDRM), Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e os exames laboratoriais (hemograma, contagem de CD4 e CD8, carga viral, mielograma) foram consultados nos prontuários. Através do teste qui-quadrado foi avaliado as variáveis demográficos, socioeconômicas e epidemiológicas entre mulheres e homens convivendo com HIV/Aids, considerando p ≥ 0,05 de significância. Houve diferença estatística significante na cor da pele, no destino dos dejetos, na ocupação e na renda familiar; como também na presença de chiqueiro em local próximo à residência. A prevalência da infecção por Leishmania sp detectada pela Intradermorreação de Montenegro (IDRM) foi de 1,4% e a prevalência da co-infecção Leishmania-HIV/Aids foi de 4,2%. Todos os co-infectados apresentaram RIFI e o aspirado de medula óssea (mielograma) positivos. Este estudo permitiu conhecer a magnitude da prevalência da co-infecção Leishmania/HIV. Assim, sugerimos que o teste anti-Leishmania seja realizado em todos os indivíduos com HIV/Aids, e que sejam incrementadas políticas públicas voltadas para essa problemática.

As leishmanioses constituem um complexo de doenças causadas por protozoários do gênero Leishmania, as quais incluem diversas espécies responsáveis por desencadear formas clínicas distintas. A espécie Leishmania infantum, disseminada no Brasil e na América do Sul, está relacionada com comprometimento das vísceras, principalmente baço, fígado e medula óssea, apresentando alto índice de morbidade e mortalidade. É classicamente demonstrado que uma resposta mediada por linfócitos Th1 e Th17 conferem resistência na LV. Nesse sentido, as vias de sinalização ativadas, bem como os mediadores gerados durante a infecção, podem auxiliar no desenvolvimento da resposta imune protetora. Dentre as citocinas produzidas, destaca-se a IL-1 (IL-1? e IL- 1?) que possui papel importante na geração do processo inflamatório conferindo resistência às infecções fúngicas, bacterianas, e também na leishmaniose cutânea. No presente estudo, nosso objetivo foi determinar o papel da via de sinalização mediada por IL-1R durante a infecção experimental por Leishmania infantum. Nossos resultados demonstram que tanto IL-1? quanto IL-1? são produzidas durante a infecção in vivo por L. infantum, sugerindo sua participação na LV. De maneira interessante, a via de sinalização mediada por IL-1R parece estar envolvida na susceptibilidade ao protozoário, visto que animais geneticamente deficientes para IL-1R (IL-1R KO) são mais resistentes à infecção, apresentando menor número de parasitos no baço e fígado nas fases crônicas de infecção. Ainda, o fenômeno de susceptibilidade foi associado a uma regulação negativa da resposta inflamatória, principalmente acerca de células Th1 e também de Th17. A inflamação neutrofílica também foi alterada em animais IL-1R KO infectados. Foi observado aumento do número de neutrófilos bem como da produção de CXCL1 (KC), mediador quimioatraente para neutrófilos no baço de animais IL-1R KO, XVIII mas sem alterar o perfil de ativação dessas células. Ao determinar a citocina envolvida na regulação do processo inflamatório e consequentemente na susceptibilidade ao parasito, observamos que preferencialmente a IL-1? possui papel na progressão da doença, visto que a deleção gênica de enzimas essenciais para a liberação de IL-1? como Caspase 1/11 não alterou o número de parasitos no baço e fígado. Porém, na ausência de IL-1? foi observado um perfil de resistência associado ao aumento dos níveis de IFN-? e IL-17 nos órgãos alvos da doença. Confirmando o papel regulador, o tratamento com anticorpo monoclonal anti-IL1? em animais selvagens (do inglês wild type - WT) infectados reverteu o fenótipo de susceptibilidade e aumentou a resposta imune adaptativa na LV. Ao determinar o papel de IL-1?, macrófagos IL-1? KO diferenciados a partir de precursores de médula óssea, quando infectados com L. infantum, apresentaram concentrações elevadas de óxido nítrico no sobrenadante da cultura, quando comparados aos macrófagos IL-1R KO ou WT, confirmando um papel regulador da resposta imune efetora à infecção por L. infantum. Os efeitos reguladores de IL-1? parecem ser mediados por IL-10, visto que animais IL-1R KO possuem redução significativa dessa citocina mensurada no fígado durante a 6ª semana de infecção. Em conjunto, no presente trabalho demonstramos que a sinalização via IL-1R, com prevalência da IL-1?, regula negativamente a resposta imune efetora do perfil Th1 e Th17 . Consequentemente, há o comprometimento da migração de neutrófilos para o sítio de infecção e ativação de macrófagos permitindo o escape do parasito e estabelecimento da infecção. / The leishmaniases are a set of diseases caused by a protozoan of the genus Leishmania, which will lead to different clinical outcomes depending on the specific specie infecting the patient. The specie Leishmania infantum, already spread throughout Brazil and South America, is associated to visceral damage, mainly to the spleen, kidney and bone marrow, presenting high rates of morbidity and mortality. It is classically demonstrated that a response mediated by Th1 and Th17 lymphocytes promotes resistance to VL. Thus, the activated signaling pathways, as well as mediators generated during the infection, can assist in the development of a protective immune response. Among the expressed cytokines, the IL-1 (IL-1? e IL-1?) stands out for its important role in the inflammatory process and resistance to fungi and bacterial infections, and also in cutaneous leishmaniasis. In the present study, our aim was to determine the signaling role via IL-1R during experimental infection by L. infantum. Our results show IL-1? and IL-1? are produced in vivo infection by L. infantum, suggesting your participation in VL. Interestingly, the signaling pathway mediated by IL-1R appears to be involved in susceptibility to protozoal, since the animals genetically deficient for IL-1R (IL-1R KO) are more resistant to infection, presenting fewer parasites in the spleen and liver in chronic stages of infection. Additionally, the susceptibility phenomenon was associated with downregulation of the inflammatory response, mainly on Th1 cells and Th17. The neutrophilic inflammation has also been changed in IL-1R KO infected animals. Was observed an increase in neutrophils and production of CXCL1 (KC) in the spleen of IL- 1R KO animals, but without changing the activation profile of these cells. In determining the regulatory cytokine involved in the inflammatory process and therefore the susceptibility to the parasite, observed that IL-1? preferably has role in disease XX progression, since genic deletion of essential enzymes for IL-1? secretion (i.e.: Caspase 1/11) did not alter the number of parasites in the spleen and liver. However, in the absence of IL-1? was observed resistance profile associated with increased IFN-? and IL-17 in the target organ disease. Confirming the regulatory role, treatment with antiIL1? monoclonal antibody in WT mice infected reversed the susceptibility phenotype and increased adaptive immune response in LV. To determine the role of IL-1?, macrophages from IL-1? KO differentiated from bone marrow when infected with L. infantum showed high concentrations of nitric oxide in the culture supernatant when compared to macrophages from IL-1R KO and WT, confirming a regulatory role of the effector immune response to L. infantum infection. IL-1? regulatory effects appear to be mediated by IL-10, since IL-1R knockout animals have significant reduction of this cytokine measured in the liver during the 6th week of infection. Taken together, the present study demonstrated that IL-1R signaling pathway, with prevalence of IL-1?, negatively regulates effector immune response of Th1 and Th17 profile. Consequently, the impairment of neutrophil migration to the site of infection and activation of macrophages allowing the escape of the parasite and the establishment of infection.

Made available in DSpace on 2016-05-17T16:51:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-13. Added 1 bitstream(s) on 2016-05-17T16:54:16Z : No. of bitstreams: 1 000864272_20160704.pdf: 706780 bytes, checksum: 4d6888c37d677fae1dd7bf418a013985 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-07-25T13:17:41Z: 000864272_20160704.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-25T13:18:48Z : No. of bitstreams: 1 000864272.pdf: 941126 bytes, checksum: 0602961cda7c25695afee5dc324562ba (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The progression of the canine visceral leishmaniasis (CVL) is related to the immune response profile. The effective cellular immunity is related to the predominance of Th1 cytokines such as TNF-α and the disease is related to an exacerbated humoral immune response, with the predominance of Th2 cytokines such as IL-10 and TGF-β. TLR-2 is an important receptor of the innate immunity involved in the induction of the cytokines production and the activation of iNOS in visceral leishmaniasis. To understand how the skin may become a permissive microenvironment for the multiplication of this parasite, the expression of genes encoding to TLR-2, to the iNOS enzyme and to the cytokines IL-10, TNF-α and TGF-β was evaluated in skin of dogs naturally affected by CVL and were then was related to the parasite load of this tissue. We observed that the skin of dogs naturally affected by visceral leishmaniasis has a mixed Th1/Th2 immune response profile, with an increased expression of TLR-2, IL-10 and TNF-α that correlates to the increasing of the parasitic load in this tissue, giving these mediators an important role in the pathogenesis of CVL

Made available in DSpace on 2016-08-11T14:41:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KalidiaFLC_DISSERT.pdf: 856483 bytes, checksum: e43d2e204d51ed594479cbaaac37b82f (MD5) Previous issue date: 2014-03-21 / Visceral Leishmaniasis (VL) is a zoonosis in which dogs are reservoir in the urban environment and its diagnosis consists in one of the main strategies to control the disease in Brazil. Nevertheless, another important approach for the control and prevention of VL is through the awareness of the population about the disease, which could be promoted with health education practices by health professionals like Agentes Comunitários de Saúde (ACS) (Health Agents for the Community). Thus, the research study aim is to evaluate the population in the riverside areas that are susceptible to VL, likewise the residents that own dogs in their homes and the ACS that work in these areas. The study also aims to evaluate if the Agents includes measures to prevent the disease in their work duty and if the administration of the city of Mossoró, Rio Grande do Norte enables them with vocational training activities and if they facilitate these professionals with good work condition. For that, a research study was made with 79 riverside residents and 42 ACS. For both riverside residents and ACS, a semi-structured interview about the disease and prevention of VL were performed, the ACS were also questioned about surveillance and control activities developed and about professional training. Additionally, 88 dogs residing in households were included in the survey and were tested for canine VL (CVL) by Polymerase Chain Reaction. The data was analyzed by Qui-quadrado e Exato de Fisher tests (p <0.05). 59% of the riverine population which were interviewed knew how the disease was transmitted, but were unaware that sand-fly was a vector of VL and 58% were unaware of the preventive measures of VL. Regarding human VL, was concluded that they were unaware about the symptoms and treatment; and, there were doubts about whether a vaccine and a cure for the disease existed. About the canine VL was noticed a greater knowledge about the symptoms, cure and euthanasia, but they were unaware about whether a vaccine existed or not. From among the dogs, 32% were positive for Leishmania. When the canine diagnostic test was correlated with the answers of the local population, there was an association with the educational level of the population and the awareness of VL (p<0,05). Regarding the ACS, most of them knew some kind of symptoms of the disease, the cure, and the type of diagnosis, but they were unaware about the treatment and whether a vaccine for VL existed; they also received training about the matter. There was an association of the ACS profile and their participation in vocational training activities, with their knowledge about epidemiological surveillance and the implementation of prevention activities (p <0.05). We have come to the conclusion that both the local population interviewed, as well as the ACS have insufficient knowledge about the VL, constituting in a reflection of the lack of investment in vocational training activities, by the government, undermining the development of health education activities. Furthermore, with the identification of reagents dogs for VL in riverside areas we confirmed the existence of the disease cycle in these areas, leaving both the human population as well as the canine susceptible to the VL / A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose que tem o cão como reservatório no ambiente urbano e cujo diagnóstico constitui uma das principais estratégias de controle da doença no Brasil. Contudo, outra medida importante para o controle e prevenção da LV diz respeito ao conhecimento da população sobre a doença, que pode ser estimulado a partir de práticas de educação em saúde de profissionais como os Agentes Comunitários de Saúde (ACS). Assim, o presente estudo buscou avaliar o conhecimento das populações ribeirinhas que residem em áreas favoráveis a LV e que possuem cães no domicílio e dos ACS que trabalham nessas áreas, o trabalho se propõe também avaliar se os agentes incluem medidas de prevenção da doença em seu trabalho e se a gestão do Município de Mossoró, Rio Grande do Norte capacita e fornece condições de trabalho para esses profissionais. Para isso, foi realizado um estudo com 79 ribeirinhos e 42 ACS. Tanto para os ribeirinhos quanto para os ACS foram realizadas entrevistas semiestruturadas sobre a doença e a prevenção da LV, sendo que os ACS também foram questionados sobre as atividades de vigilância e controle desenvolvidas e a participação em atividades de capacitação profissional. Adicionalmente, 88 cães domiciliados nas residências incluídas na pesquisa foram testados para LV canina (LVC) por Polimerase Chain Reaction. Os dados foram analisados pelos testes Qui-quadrado e Exato de Fisher (p<0,05). Da população ribeirinha entrevistada 59% conheciam a forma de transmissão da doença, mas não souberam identificar o flebotomíneo como vetor da LV e 58% desconheciam as medidas preventivas da LV. Sobre a LV humana constatou-se desconhecimento quanto à sintomatologia e ao tratamento; houve dúvida quanto a existência da vacina e a cura para a doença. Sobre a LVC percebeu-se maior conhecimento sobre os sintomas, cura e a eutanásia, mas houve desconhecimento sobre a existência ou não de vacina. Dos cães, 32% foram reagentes para Leishmania. Quando correlacionou-se o teste de diagnóstico canino com as respostas da população ribeirinha, houve associação com a escolaridade da população e conhecimento sobre a LV (p<0,05). Sobre os ACS, a maioria conhece algum sintoma da doença, a cura, o tipo de diagnóstico, mas desconhece o tratamento e a existência vacinas e receberam capacitação sobre o tema. Houve associação do perfil dos ACS com sua participação em atividades de capacitação profissional, com seu conhecimento sobre a vigilância epidemiológica e realização de atividades de prevenção (p<0,05). Conclui-se que tanto a população ribeirinha entrevistada quanto os ACS apresentam conhecimento insuficiente sobre a LV, constituindo um reflexo da carência de investimento em atividades de capacitação profissional, por parte do poder público, comprometendo o desenvolvimento de atividades de educação em saúde. Além disso, com a identificação de cães reagentes para LV nas áreas ribeirinhas reforçamos a existência do ciclo da doença nessas áreas, deixando tanto a população humana quanto a canina suscetível à LV

Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-02-19T13:03:29Z No. of bitstreams: 5 denio.pdf: 1745055 bytes, checksum: 531bb76e60dd34c17e7c27620ce5b5c0 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2110 bytes, checksum: b4c884761e4c6c296ab2179d378436d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2015-02-20T10:55:25Z (GMT) No. of bitstreams: 5 denio.pdf: 1745055 bytes, checksum: 531bb76e60dd34c17e7c27620ce5b5c0 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2110 bytes, checksum: b4c884761e4c6c296ab2179d378436d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T10:55:25Z (GMT). No. of bitstreams: 5 denio.pdf: 1745055 bytes, checksum: 531bb76e60dd34c17e7c27620ce5b5c0 (MD5) license_url: 52 bytes, checksum: 3d480ae6c91e310daba2020f8787d6f9 (MD5) license_text: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) license.txt: 2110 bytes, checksum: b4c884761e4c6c296ab2179d378436d4 (MD5) Previous issue date: 2013-02-21 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / Neste trabalho, foi realizado o desenvolvimento de um imunosensor para detec??o de anticorpos anti-Leishmania infantum. O princ?pio de transdu??o foi a Resson?ncia de Pl?smons de Superf?cie (SPR) e o sensor foi produzido atrav?s da imobiliza??o covalente de ant?genos sol?veis de Leishmania infantum sobre Monocamada Auto-Organizada (SAM) do ?cido 11-Mercaptoundecan?ico (11-MUA) ativado pela mistura contendo 100,0 mmol.L-1 de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) e 150 mmol.L-1 de N-hidroxisuccinimida (NHS). Atrav?s das t?cnicas de Voltametria C?clica e Redu??o Dessortiva por Voltametria de Pulso Diferencial o processo de forma??o da SAM foi otimizado. Sob condi??es otimizadas, 1,0 mmol.L-1 da solu??o etan?lica de 11-MUA e 24 horas foram suficientes para a forma??o de uma SAM est?vel sobre a superf?cie de ouro. Para obten??o de informa??es complementares da SAM, foram realizados c?lculos da Cobertura de Superf?cie, Constante Diel?trica e Espessura do tiol adsorvido no substrato de ouro. Ap?s esta etapa, a adi??o de ant?genos sol?veis de L. infantum sobre a SAM foi acompanhada por SPR. As t?cnicas de Voltametria C?clica e Espectroscopia de Imped?ncia Eletroqu?mica foram usadas para caracterizar a imobiliza??o do ant?geno. Ap?s constru??o do imunosensor, foram adicionados em sua superf?cie soros caninos positivos para Leishmaniose Visceral, evidenciando varia??o significativa no ?ngulo de SPR, mostrando excelente sensibilidade da t?cnica para detec??o da intera??o ant?geno-anticorpo. Por outro lado, a adi??o dos soros negativos n?o foi acompanhada com resposta significativa, concluindo-se tamb?m que o imunosensor apresentou boa especificidade contra anticorpos anti-L. infatum. Portanto, neste trabalho foi desenvolvido com sucesso um sensor empregando SPR para detec??o em tempo real de anticorpos anti-L. infatum, apresentando grande perspectiva como sistema de sensoriamento da Leishmaniose Visceral em ?reas end?micas. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2012. / ABSTRACT In this work, the development of an immunosensor for detection of anti-Leishmania infantum antibodies was performed. The principle of transduction used was the Surface Plasmon Resonance (SPR) and the sensor was constructed by covalent immobilization of soluble antigens of Leishmania infantum on self-assembled monolayers (SAMs) of 11-mercaptoundecanoic acid (11-MUA) which was activated by the mixture 100.0 mmol.L-1 1-ethyl-3 (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) and 150 mmol.L-1 N-hidroxisuccinimide (NHS). Cyclic Voltammetry and Dessortive Reduction by Differential Pulse Voltammetry techniques were employed in monitoring of SAM formation. Under optimized conditions, 1.0 mmol.L-1 of the 11-MUA in ethanolic solution and 24 hours were sufficient for the formation of a stable SAM on the gold surface. To obtain further information about the SAM, the Surface Coverage, Dielectric Constant and Thickness of the thiol film adsorbed on gold substrate were performed. After this step, the addition of soluble antigens?of L.?infantum?on the?SAM?was monitored?by SPR. Cyclic Voltammetry and Electrochemical Impedance Spectroscopy techniques were employed in characterization of antigen immobilization. After construction of immunosensor, positive canine serum for Visceral Leishmaniasis were added on its surface showing significant variation in the SPR angle, indicating excellent sensitivity of the technique for?antigen-antibody interaction detection. On the other hand, the addition of negative serum was not accompanied with a significant response, demonstrating that the immunosensor shows excellent specificity against anti-L infantum antibodies. Therefore, this work shows a successfully development of a SPR sensor for anti-L. infatum antibodies detection in real time, showing a great perspective as a sensing system of Visceral Leishmaniasis in endemic regions.

Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2017-09-22T18:10:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) marcelo_sousa_xavier.pdf: 3096603 bytes, checksum: dae91257943ac86316978d8deb31ff3e (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-10-09T13:42:33Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) marcelo_sousa_xavier.pdf: 3096603 bytes, checksum: dae91257943ac86316978d8deb31ff3e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-09T13:42:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) marcelo_sousa_xavier.pdf: 3096603 bytes, checksum: dae91257943ac86316978d8deb31ff3e (MD5) Previous issue date: 2017 / A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) ? considerada um problema de sa?de p?blica causada por um protozo?rio do g?nero Leishmania que acomete c?es, o qual no ciclo urbano de transmiss?o ? o principal reservat?rio. Neste trabalho, investigou-se o desenvolvimento de um imunossensor impedim?trico sobre eletrodos de grafite (EG) e eletrodos impressos de ?xido de grafeno (EIG) modificados com filmes polim?ricos para detec??o de Leishmaniose infantum em amostras de soros caninos. Os EG e o EIG foram modificados pela eletrodeposi??o do ?cido 2-hidroxicin?mico (2-HCA). A eletropolimeriza??o do 2-HCA foi realizada por voltametria c?clica (VC), utilizando-se solu??o monom?rica 2,50 mM preparada em H2SO4 0,50 M contendo 1,0 mL de etanol. Para o EG utilizou-se 100 ciclos de potencial na faixa de +0,20 a +1,20 V a 50 mV/s e para o EIG 15 ciclos consecutivos de potencial de 0,00 a +1,00V a 100 mV/s. Para ambos os eletrodos modificados o poli(2-HCA) apresentou caracter?sticas adsortivas e eletroativas. Estudos de Espectroscopia de Imped?ncia Eletroqu?mica (EIE) foram realizados para avaliar as propriedades el?tricas dos eletrodos modificados. Para o EG/2-HCA utilizou-se o circuito equivalente descrito como (Rs(RQp)(Qdl[RtcW]) onde obteve-se o valor de resist?ncia a transfer?ncia de carga (Rtc) de 13,2 k?, enquanto que para EIG/2-HCA o circuito equivalente proposto foi o de Randles, no qual o valor de Rtc foi de 4,2 k?. Visando a miniaturiza??o do sistema, optou-se pelo desenvolvimento do biossensor sobre os EIG. Desta forma, foram colocados sobre a superf?cie dos EIG/2-HCA, utilizando a t?cnica de adsor??o, 35 ?L de diferentes concentra??es do ant?geno L. infantum (Ag) (15, 30, 50, 70 e 100 ?g/mL), sendo realizados testes de intera??o com amostras de soros caninos contendo os anticorpos positivos (Ac+) de L. infantum em diferentes propor??es 1:80, 1:160, 1:320, 1:640 e 1:1280 dilu?dos em tamp?o HBS-EP pH 7,40 com 20 minutos de intera??o a 37 ?C. Os melhores resultados foram obtidos utilizando-se o ant?geno em concentra??o de 50 ?g/mL durante 20 min a 37 ?C e a dilui??o do soro de 1:320. Posteriormente, avaliou-se o tempo de imobiliza??o do Ag e de imunorrea??o Ag-Ac em 20, 40 e 60 minutos. Obteve-se 20 min de como tempo ideal de imobiliza??o de Ag e para imunorrea??o Ag-Ac+. Ap?s otimiza??o destes par?metros, avaliou-se a resposta do imunossensor na presen?a de amostras de soros caninos diagnosticados como positivos (Ac+) e negativos (Ac-) para Leishmaniose infantum, onde observou-se valores de Rtc para o sistema Ag-Ac+ 82% maior do que o obtido para o Ag-Ac-, demonstrando margem de seguran?a confi?vel no reconhecimento do analito de interesse. O imunossensor proposto para detec??o de Leishmaniose infantum apresentou boas perspectivas para aplica??o ao diagn?stico da doen?a, podendo-se tornar mais uma alternativa para realiza??o de testes r?pidos e de simples aplica??o para detec??o de LVC. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2017. / Visceral Canine Leishmaniasis (LVC) is considered a public health issue caused by a protozoan of the Leishmania genre that attacks dogs, which is the main reservoir in the urban transmission cycle. In this work, we investigated the development of an impedimetric immunosensor on graphite electrodes (GE) and graphene oxide-modified screen-printed carbon electrode (GSP) both modified with polymeric films to detect Leishmaniose infantum in canine serum samples. The GE and GSP were modified by the electrodeposition of 2-hydroxycinnamic acid (2-HCA). Electropolymerization of 2-HCA was performed by cyclic voltammetry (CV) using a 2.50 mM monomeric solution prepared in 0.50 M H2SO4 containing 1.0 mL of ethanol. For the EG and EIG, 100 cycles of potential between +0.20 and +1.20 V at 50 mV/s and 15 cycles of potential between 0.00 and + 1.00 V at 100 mV/s were used, respectively. Poly(2-HCA) shown adsorptive and electroactive characteristics for both electrodes. Electrochemical Impedance Spectroscopy (EIS) studies were performed to evaluate the electrical properties of the modified electrodes. For the GE/2-HCA was used an equivalent circuit described as (Rs(RpQp)(Qdl[RtcW]), and a resistance of charge transfer (Rct) of 13.2 k? was obtained. For GSP/2-HCA the proposed equivalent circuit was that of Randles in which the value of Rct obtained was 4.2 k?. For system miniaturization it was developed the biosensor over GSP. Thus, 35 ?L of different concentrations of L. infantum antigen (Ag) (15, 30, 50, 70 e 100 ?g/mL) were placed on the GSP/2-HCA surface using the adsorption technique. Interaction tests were carried out with canine serum samples containing the positive antibodies (Ac+) of L. infantum in different proportions of 1:80, 1:160, 1:320, 1:640 e 1:1280, diluted in HBS-EP buffer pH 7.4 with 20 minutes of interaction at 37 ?C. The best results were obtained using the antigen at a concentration of 50 ?g/mL for 20 min at 37 ?C and a serum dilution of 1:320. Subsequently, the Ag immobilization and Ag-Ac immunoreaction time were evaluated in 20, 40 and 60 min. 20 min was obtained as the ideal time for Ag immobilization and Ag-Ac+ immunoreaction. After optimization of these parameters, the immunosensor response was evaluated in the presence of canine serum diagnosed as positive (Ac+) and negative (Ac-) for Leishmaniose infantum, where the Rct values for the Ag-Ac+ system were 82% higher than those obtained for Ag-Ac-, demonstrating a reliable safety margin in the recognition of the analyte of interest. The proposed immunoassay for the detection of Leishmaniasis infantum presented good prospects for application in the diagnosis of the disease, and it could become an alternative for performing rapid tests and simple application for the detection of LVC.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-25T19:33:12Z No. of bitstreams: 1 Lucilene Amorim. Aspectos da leish...pdf: 1746710 bytes, checksum: 7f38cc7f5b1d001e9d6d0f813fc05bcd (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-25T19:33:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucilene Amorim. Aspectos da leish...pdf: 1746710 bytes, checksum: 7f38cc7f5b1d001e9d6d0f813fc05bcd (MD5) Previous issue date: 2011 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença sistêmica grave, causada pelo protozoário Leishmania chagasi. Os mecanismos envolvidos na susceptibilidade e resistência dos cães a esta infecção são controversos. Neste trabalho, os aspectos epidemiológico, imunológico e terapêutico da LVC foram estudados. Inicialmente foi realizado um estudo epidemiológico na Raposa, município de alta endemicidade para LVC, localizado na ilha de São Luís, Maranhão. A triagem dos animais soropositivos para Leishmania foi feita por ELISA e os cães soropositivos foram clinicamente avaliados. Os animais foram classificados em assintomáticos e sintomáticos de acordo com os sinais clínicos, sendo avaliado seu perfil epidemiológico, incluindo sexo, convivência com outros animais, tipo de alimentação e idade. A sorologia para IgG1 e IgG2 anti-Leishmania foi feita por ELISA e foi testada a presença de correlação entre as subclasses e os sinais clínicos. Em seguida, foi investigada a produção de óxido nítrico (NO), interferon-g (IFN-g) e fator de necrose tumoral (TNF-a) no soro e sobrenadante de cultura do linfonodo e baço. Na segunda fase da pesquisa, foram utilizados cães da raça Beagle. Após confirmação da infecção por Leishmania chagasi por PCR, os cães foram divididos em dois grupos (n=10/grupo) e foram tratados durante 90 dias, por via oral, diariamente, com Aluporinol (droga de referência) ou com um composto químico promissor, Haloacetamido (droga teste). A cada 30 dias, foi realiza avaliação clínica e bioquímica sérica. Foram quantificadas também as concentrações séricas de IL-10, IFN-g e Superóxido dismutase (SOD). A carga parasitária foi monitorada nos linfonodos por PCR em tempo real e na pele por imunohistoquimica. O acompanhamento dos animais foi continuado até 90 dias após o final do tratamento. Os resultados obtidos demonstraram que a soroprevalência foi de 29,6%. Do total de cães infectados, a maioria eram machos, jovens, conviviam com outros animais e se alimentavam de comida caseira. Em relação aos sinais clínicos, 37% eram assintomáticos e 63% eram sintomáticos. Os cães sintomáticos apresentaram aumento de anticorpos IgG anti-Leishmania, de NO e de IFN-g, entretanto, apresentaram uma diminuição na produção de TNF-a. Houve correlação positiva entre os níveis de IgG2 e o número de sinais clínicos. O tratamento com Haloacetamido reduziu significativamente a carga parasitária, tanto nos linfondos quanto na pele, e aumentou a produção de SOD no ultimo mês de tratamento, mas induziu uma piora no quadro clínico, sem alterações séricas hepáticas e renais, quando comparado ao tratamento com Alopurinol. Entretanto, noventa dias após a suspensão dos fármacos, não houve diferenças entre os grupos nos parâmetros avaliados, com exceção das citocinas que forma aumentadas nos animais tratados com Haloacetamido. Dessa forma, demonstramos que: o NO, associado ao aumento de IFNg, pode induzir diminuição nas concentrações de TNF-a e concomitante imunossupressão nos cães;, que a produção aumentada de IgG2 parece estar relacionada ao quadro mais grave da infecção; e que embora sejam necessários estudos complementares para comprovar a sua eficácia a longo prazo, o tratamento com o Haloacetamido, pode reduzir a carga parasitária de animais infectados, aumentando a produção de SOD e regulando a secreção de citocinas. / chagasi protozoan. The mechanisms involved in susceptibility or resistance of dogs to this infectious disease are controversy. In this work, the epidemiologic, immunological and therapeutic aspects of CVL were evaluated. Initially it was done an epidemiologic study in Raposa municipality situated at Sao Luis island, Maranhão state, and highly endemic to CVL. The trial of serum positive dogs to Leishmania was done by ELISA and the serum positive dogs were clinically evaluated. The dogs were classified in asymptomatic and symptomatic according to the clinical status, and their epidemiologic aspects, including sex, presence of other animals, kind of food, and age were observed. The correlation among anti-Leishmania IgG1 and IgG2 isotypes and the clinical signs was evaluated. Then, the production of nitric oxide (NO), interferon-g (IFN-g) and tumor necrosis factor (TNF-a) in the serum and supernatant of lymph node and spleen cultures was evaluated. In the second phase, dogs from the Beagle strain was used. After confirmation of Leishmania chagasi infection by PCR, the dogs were shared in two groups (n=10/group) and were daily treated by oral route, with aluporinol (reference drug) or a new and promissory chemical compound, haloacetamid (test drug). The treatment was maintained by 90 days. Each 30 days, the dogs were clinically and biochemically evaluated. The serum levels of IL-10, IFN-g and Superoxide dismutase (SOD) were evaluated. The parasite burden was followed at lymph nodes and skin by real time PCR and imunohistochemistry, respectively. The dogs were followed until 90 days after the end of treatment. The results showed a prevalence of 29.6% to Leishmania infection. The majority of infected dogs was male, young, lived with other animals and was fed with house food. The clinical evaluation shown that 37% of the dogs were asymptomatic and 63% were symptomatic. The symptomatic dogs shown increase of anti-Leishmania IgG antibody, NO and IFN-g. However, they shown decrease of TNF-a production. There was a positive correlation only between the IgG2 levels and the clinical signs number. The treatment with haloacetamid reduced the parasite burden in the lymph nodes and in the skin and increased the SOD production however the dogs became worst at the third month of treatment, even so they did not show alterations in the liver and kidney biochemical profile when compared to the Alopurinol group. Nevertheless, ninety days after the suspension of the treatments, there was no difference between the groups at all the evaluated parameters, with exception of cytokine which was increased in the Haloacetamid group. Hence, we shown here that: the NO associated to the IFNg increase can induce a decrease of TNF-a and an immunesuppressive status in the dogs; the increased production of IgG2 seems to be related to the infection progression; and finally, however more studies are necessary to verify the long term efficacy of the haloacetamid, the treatment by three months with this product can reduce the parasite burden from infected dogs by increasing the SOD production and regulating the cytokines secretion.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-04-03T13:38:30Z No. of bitstreams: 1 Joselli Silva. Desestruturação da polpa... 2014.pdf: 6952851 bytes, checksum: 512840eb0cc488e4f61742ce875c4837 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-03T13:38:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joselli Silva. Desestruturação da polpa... 2014.pdf: 6952851 bytes, checksum: 512840eb0cc488e4f61742ce875c4837 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / A leishmaniose visceral está associada às alterações arquiteturais esplênicas e redistribuição de populações celulares envolvidas na resposta imunológica. Os objetivos desta tese foram estudar a desestruturação da polpa branca do baço na leishmaniose visceral canina e quais as células e citocinas envolvidas nesse processo. Para isso, amostras de baços de cães de uma área endêmica para LV foram agrupadas em três categorias: TIPO1-CONT ou TIPO1-SIA (cães não infectados ou sem infecção ativa e com polpa branca organizada), TIPO1-INF (cães infectados com polpa branca organizada) e TIPO3-INF (cães infectados com polpa branca desorganizada). No capítulo 2 e 3, as secções de baço foram marcadas através de imunoistoquímica com anticorpos anti-CD3 (linfócitos T), anti-CD79-α (linfócitos B), anti-S100 (célula dendrítica folicular), anti-Ki-67 (células em proliferação), anti-IgG e anti-IgM (plasmócitos secretores de IgA, IgG e IgM). Foram estimadas as densidades de todas as populações celulares através de morfometria. As expressões de citocinas e quimiocinas foram avaliadas através de RT-PCR em tempo real. A ativação policlonal de células B e hipergamaglobulinemia foram avaliadas por ELISA e eletroforese de proteínas séricas. No capítulo 2, foi visto que a densidade de linfócitos B foi maior nos folículos e na zona marginal dos animais com baço TIPO1 do que nos dos animais com baço TIPO3 (teste de Mann-Whitney P < 0,02). Os números de células proliferantes, células B e células dendríticas foliculares foram menores em animais de baço TIPO3. A expressão da quimiocina CXCL13 foi maior nos animais com baço TIPO 1 (teste de Mann-Whitney, P < 0,02). No capítulo 3, foi visto que a plasmocitose foi maior em animais de baço TIPO3 do que nos animais com baço TIPO1 (Teste qui-quadrado, P < 0,04). A densidade de plasmócitos secretores de imunoglobulina do isotipo IgG foi maior na polpa vermelha de animais com baço TIPO3 (Teste Man-Whitney, P <0,05). Em geral, observou-se uma tendência de maior densidade de plasmócitos secretores de imunoglobulinas dos isotipos IgM e IgG nos animais de baço TIPO3 em comparação com animais do baço TIPO1. Animais de baço TIPO3 apresentam maiores níveis séricos de proteína gamaglobulina e também uma maior expressão das citocinas BAFF e APRIL e da quimiocina CXCL12, que estão envolvidas no processo de ativação e homing de plasmócitos. No capítulo 4 foi visto que uma região de aproximadamente 1.28Mb do cromossomo 8 canino foi encontrada com os segmentos gênicos VH, DH e JH. As principais conclusões obtidas nesse estudo foram que a redistribuição de populações celulares do baço, especialmente de linfócitos B, células dendríticas foliculares e plasmócitos estão relacionada com a desorganização do tecido esplênico e com a expressão anômala de CXCL13, CXCL12, BAFF e APRIL, que são citocinas e quimiocinas envolvida com a organização do tecido esplênico, ativação e homing de plasmócitos. A ativação policlonal, a hipergamaglobulinemia e a diglobulinemia são também relacionadas com a desorganização do baço. As regiões variáveis (VH), diversidade (DH) e de junção (JH) da cadeia pesada de imunoglobulina são compostos de noventa e dois, dez e nove genes obtidos na linha germinativa canina, respectivamente. / Visceral leishmaniasis is associated with splenic architectural changes and redistribution of cell populations involved in the immune response. The objectives of this thesis was to study the disruption of the white pulp of the spleen in canine visceral leishmaniasis and which cells and cytokines are involved in this process. For this, samples of spleens of dogs from an endemic area for VL were grouped into three categories: TYPE1-CONT or TYPE1-NIF (non-infected dogs or without active infection with organized white pulp), TYPE1-INF (infected dogs with pulp organized white) and TYPE3-INF (infected animals with disorganized white pulp). In Chapter 2 and 3 the spleens sections were stained by immunohistochemistry with anti-CD3 (T lymphocytes), anti-CD79 (B lymphocytes), anti-S100 (follicular dendritic cells), anti-Ki-67 (cells proliferation), anti-IgG and anti-IgM (plasma cells). The number and distribution of all cell populations were estimated by morphometry. The expressions of cytokines and chemokines were assessed by real time RT-PCR. The polyclonal B cell activation and hypergammaglobulinemia were evaluated by ELISA and serum protein electrophoresis. In chapter 2, it was seen that the density of B lymphocytes was higher in the marginal zone and follicles of animals with spleen TYPE1-INF than animals with the spleen TYPE3-INF (Mann -Whitney test P < 0.02). The numbers of proliferating cells, B cells and follicular dendritic cells was lower in animals of TYPE3-INF. The expression of the chemokine CXCL13 was higher in the spleen of animal with the spleen TYPE 1 (Mann-Whitney, P < 0.02). No difference was observed in the expression of other cytokines compared between the two groups of animals. In chapter 3, it was seen that the plasma cells was higher in animals with spleen TYPE 3 than in animals with spleen TYPE1 (Chi-square test, P < 0.04). The density of plasma cells secreting the isotype IgG was higher in the red pulp of spleen of animals TYPE3 (Man-Whitney test, P < 0.05). In general, there was a trend toward higher density of plasma cells secreting the immunoglobulin of isotype IgM and IgG in the spleen of animals with spleen TYPE3-INF in comparison to animal’s spleen TYPE1. Animals with spleen TYPE3 have higher levels of serum gamma globulin protein as well as increased expression of citokines, BAFF and APRIL and the chemokine CXCL12 that are involved in the activation and homing plasma cells. The main conclusions of this study were that the redistribution of cell populations of the spleen, especially B lymphocytes, follicular dendritic cells and plasma cells (characterized by intense plasmacytosis) are related to the disorganization of the splenic tissue and aberrant expression of CXCL13, CXCL12, BAFF and APRIL, which are cytokines and chemokines involved in the organization of the splenic tissue, activation of B cells and plasma cell homing. The polyclonal activation, hypergammaglobulinemia and diglobulinemia are also related to the structural disorganization of the splenic lymphoid tissue. In addition, it was concluded that the variable regions (VH), the diversity (DH) and junction (JH) immunoglobulin heavy chain are composed of ninety-two, ten and nine genes that have been obtained in canine germline.

Introdução: A leishmaniose visceral (LV) é um importante problema de saúde pública no Brasil, com cerca 3000 mil casos notificados anualmente. Nos últimos anos, a LV tem ampliado sua distribuição em vários estados do país, associada principalmente aos processos socioambientais, antrópicos e migratórios. A LV é causada pela infecção com Leishmania infantum chagasi, transmitida, principalmente, por Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae). Este flebotomíneo apresenta ampla distribuição nas Américas, todavia, evidências sugerem que se constitui em um complexo de espécies crípticas. A dinâmica de transmissão da LV é modulada por fatores ecológicos locais que influenciam a interação entre populações do patógeno, do vetor e dos hospedeiros vertebrados. Portanto, o estudo das variáveis associadas a esta interação pode contribuir para elucidar aspectos dos elos epidemiológicos e contribuir para a tomada de decisões em saúde pública. Objetivo: Avaliar parâmetros relacionados à capacidade vetorial da população de Lu. longipalpis presente em área urbana do município de Panorama, estado de São Paulo. Métodos: Foram realizadas capturas mensais durante 48 meses para avaliar a distribuição espaço-temporal de Lu. longipalpis e investigar a circulação de Le. i. chagasi. Também foram realizados os seguintes experimentos com o vetor: captura-marcação-soltura-recaptura para estimar a sobrevida da população e a duração do seu ciclo gonotrófico, a atratividade dos hospedeiros mais frequentes em áreas urbanas, a proporção de repasto em cão, infecção experimental e competência vetorial. Resultados: Observou-se que no município de Panorama, Lu. longipalpis apresentou as frequências mais elevadas na estação chuvosa (entre outubro e março), maior densidade em áreas com presença de vegetação e criação de animais domésticos, locais aonde também foi demonstrada a circulação natural de espécimes de Lu. longipalpis infectados com Le. i. chagasi. Além disto, foi corroborado que a população de Lu. longipalpis apresentou hábito hematofágico eclético, altas taxas de sobrevivência e que foi competente para transmitir o agente da LV. Nos experimentos de laboratório foi evidenciada a heterogeneidade na infecção de fêmeas de Lu. longipalpis desafiadas a se alimentarem em cães comprovadamente infectados por L. i. chagasi e o rápido desenvolvimento do parasita neste vetor natural. Conclusões. As observações do presente estudo corroboram a capacidade vetora de Lu. longipalpis para transmitir a Le. i. chagasi e ressaltam a importância da espécie na transmissão do agente etiológico da LV. Ações de manejo ambiental, educação e promoção à saúde são recomendadas às autoridades municipais para diminuir o risco potencial de infecção na população humana e canina, considerando-se o elevado potencial vetor de Lu. longipalpis e a presença de condições que favorecem a interação dos componentes da tríade epidemiológica da LV. / Introduction: Visceral leishmaniasis (VL) is an important public health problem in Brazil, where annually about 3000 cases are notified. In the later years VL has spread through some states, associated mainly to environmental, anthropic and migratory process. Visceral leishmaniasis is caused by the infection with Leishmania infantum chagasi transmitted by the sand fly species Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae). This species have a broad distribution in the Americas, however, there are evidences suggesting that it constitutes a cryptic species complex. The VL transmission dynamic is modulated by focal ecological factors that influence the pathogen-vector-host interactions. Thus, the analyses of variables associated to this interaction could contributes to elucidate the epidemiological links and to the public health decision-making. Objective: To evaluate parameters related to the vectorial capacity of Lutzomyia longipalpis in the Panorama municipality, São Paulo state, Brazil. Methods: Monthly captures of sand flies were undertaken during 48 months to evaluate the spatial and temporal distribution of Lu. longipalpis and its natural infection with Le. i. chagasi. Experiments of capture-mark-release-recapture to estimate the population survival, the gonotrophic cycle duration and the attractiveness of the most frequent host to Lu. longipalpis were also performed. Additionally experiments to evaluate the blood feeding rate of Lu. longipalpis on dog, experimental infection and the vectorial competence were undertaken. Results: In the Panorama municipality, Lu. longipalpis presents the highest frequencies during the rainy season (October - March) with high densities in areas with vegetation near to the domiciles and with the animal husbandry. In this areas was also demonstrated the circulation of sand flies naturally infected with Le. i. chagasi. Besides, it was corroborated that Lu. longipalpis presents eclectic haematophagic habit, high survival rates and it is competent to transmit Le. i. chagasi. It was also observed the heterogeneity of the female infection rates after them take the blood meal on infected dogs and a short time to complete the extrinsic incubation period. Conclusions: the observations of this study corroborate the vectorial capacity of Lu. longipalpis and reinforce the epidemiological importance of this species in the transmission of Le. i. chagasi. Considering the high vectorial efficiency of Lu. longipalpis and the presence of conditions favoring the interaction of the VL ecological components (competent vectors, infected hosts and susceptible humans), environmental management as well as educational and health promotion measures are recommended to the municipality authorities to reduce the potential risk of human infections.

Introdução - A leishmaniose visceral no Estado de São Paulo vem acometendo populações caninas e humanas de vários centros urbanos e encontra-se em franca expansão. Desde a sua introdução no Estado de São Paulo, novas áreas na região metropolitana da Grande São Paulo têm sido identificadas com a infecção na população canina e felina, sem que a espécie vetora comprovada, Lutzomyia longipalpis, tenha sido encontrada. Diferentemente de outras áreas, onde a transmissão da leishmaniose visceral se dá em ambiente urbano consolidado, na Grande São Paulo, ocorre em ambiente de transição urbano-rural. Neste ocorrem resíduos de matas nos quais os flebotomíneos antropofílicos, Pintomyia fischeri e Migonemyia migonei se desenvolvem. A capacidade vetorial é definida como a taxa diária de picadas potencialmente infectivas que a população de um vetor levará a cabo ao se alimentar em um único tipo de hospedeiro (REISEN, 1989). Objetivo Comparar a capacidade vetorial de Pintomyia fischeri e Migonemyia migonei oriundas de foco de leishmaniose visceral canina da Grande São Paulo e compará-la com a de Lu. longipalpis, proveniente de área endêmica, Campo Grande, estado de Mato Grosso do Sul, para a transmissão do agente, Leishmania (L.) infantum chagasi, da leishmaniose visceral americana. Métodos A sobrevida infectiva de cada espécie de flebotomíneo foi calculada por meio da estimativa vertical (tábua de vida) de fêmeas de primeira geração cultivadas em laboratório. Os demais parâmetros compreenderam: atratividade do cão doméstico aos flebotomíneos (dado de campo); e, em condições de laboratório: infecção experimental dos flebotomíneos pela L. (L.) i. chagasi após sua alimentação em cães infectados, período de incubação extrínseca do parasita e duração do ciclo gonotrófico. Resultados Em relação aos parâmetros estudados, observou-se respectivamente para Lu. longipalpis, Pi. fischeri e Mg. migonei: densidade de fêmeas/cão/dia 3,5, 5,5 e 0,04; proporção de fêmeas alimentando-se no cão 0,71, 0,64 e 0,70; períodos de incubação extrínseca estimados (dias) 7, 4 e 7; mediana do ciclo gonotrófico (dias) 5, 6 e 7, e sobrevida infectiva (dias) 4,13, 0,74 e 2,14. A capacidade vetorial da população de Lutzomyia longipalpis foi de 2,02 novas infecções por dia de exposição de um cão infectado. Para Pintomyia fischeri este valor compreendeu 0,108 e para Migonemyia migonei, 0,0024. Conclusões. Lu. longipalpis apresenta a capacidade vetorial em relação a Leishmania infantum chagasi 18,7 vezes à de Pi. fischeri e esta espécie 45 vezes à de Mg. migonei. Portanto, no foco de leishmaniose visceral canina da região Embu/Cotia, se demonstrada a competência para as duas espécies de flebotomíneos, Pi. fischeri poderia atuar na transmissão desta Leishmania em virtude da sua densidade elevada e infecção experimental, enquanto que a participação de Mg. migonei parece pouco provável / Introduction - Visceral leishmaniasis has been affecting canine and human populations in various urban centers in São Paulo state and the area of its distribution has been growing steadily. Since its introduction into the state, the infection has been identified in canine and feline populations of Greater São Paulo. Differently from other areas, where the transmission of visceral leishmaniasis occurs in a consolidated urban environment, in Greater São Paulo it takes place in a transitional urban-rural environment, where in the residual forests the anthropophilic sandflies Pintomyia fischeri and Migonemyia migonei are found. Vectorial capacity is defined as the daily rate of the potentially infectious bites that a vector population will inflict on one single type of host while feeding on it (REISEN, 1989). Objective To compare the vectorial capacity of Pintomyia fischeri and Migonemyia migonei from a focus of visceral canine leishmaniasis of Greater São Paulo to that of Lu. longipalpis from Campo Grande, an endemic area of the Mato Grosso do Sul state, in terms of the transmission of Leishmania (L.) infantum chagasi, the agent of American visceral leishmaniasis. Methods The infective survival time of each phlebotomine species was calculated by means of vertical estimation (life table) of first generation females bred in the laboratory. The other parameters included: the attractiveness of the domestic dog to phlebotomines (field data) and; under laboratory conditions: the experimental infection of phlebotomines by L. (L.) i. chagasi after being fed on infected dogs; the extrinsic incubation period of the parasite and the duration of the gonotrophic cycle. Results As regards the studied parameters were respectively observed for Lu. longipalpis, Pi. fischeri and Mg. migonei: the density of females/dog/day 3.5, 5.5 and 0.04; the proportion of females that fed on the dog 0.71, 0.64 and 0.70; the extrinsic incubation period (days) 7, 4 and 7 (estimated); the median gonotrophic cycle (days) 5, 6 and 7, and the infective survival period(days) 4.13, 0.74 and 2.14. The vectorial capacity of the Lutzomyia longipalpis population was calculated as 2.02 new infections per day of the exposure of an infected dog. For Pintomyia fischeri this value was 0.108 and for Migonemyia migonei, 0.0024. Conclusions. The vectorial capacity of Lu. longipalpis in relation to Leishmania infantum chagasi was 18.7 times that of Pi. fischeri and that of this latter species was 45 times that of Mg. migonei. Thus, in the focus of visceral canine leishmaniasis in the Embu/Cotia region, if the vectorial competence of the two species be demonstrated, Pi. fischeri might be active in the transmission of this leishmania by virtue of its greater density and higher experimental infection rate, whereas the participation of Mg. migonei seems unlikely