O câncer de mucosa oral é um problema de saúde pública, com maior incidência em homens acima de 50 anos. Uma das manifestações clínicas mais precoces do câncer da mucosa oral são as lesões leucoqueratósica. O aspecto clínico não homogêneo e o tamanho maior de 200mm2, em mucosa não queratinizada como a do assoalho da boca e ventre da língua, são aspectos que implicam na possibilidade de evolução da lesão. A dificuldade do diagnóstico das lesões precoces está na seleção do local a ser biopsiado principalmente frente a lesões extensas e heterogêneas. O objetivo desta pesquisa é avaliar se a utilização do exame clínico juntamente com os métodos auxiliares de diagnóstico das lesões leucoqueratósica da mucosa oral (VELscope®, Azul de toluidina e Solução de lugol) contribui para uma maior precisão do diagnóstico de displasias nestas lesões quando comparado ao histopatológico. E, identificar os padrões morfológicos destas lesões quando avaliadas por meio da microscopia confocal reflectante. Foram selecionados 30 pacientes, maiores de 18 anos, portadores de lesão clínica compatível com leucoplasia oral triados no ambulatório da disciplina de Estomatologia Clínica da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo e que precisavam ser submetidos à biópsia para o estabelecimento do diagnóstico final. Foram realizados os testes de Azul de Toluidina, Solução de Lugol, VELscope®, microscopia confocal reflectante e posteriormente, a biópsia incisional para obtenção do diagnóstico final. Os pacientes incluídos possuíam média de idade 60,66 anos, sendo 70% (21/30) do gênero feminino e 30% (9/30) do gênero masculino. O tabagismo foi relatado por 16,7% (5/30) dos pacientes, sendo 60% (3/5) homens. A associação do tabagismo e etilismo foi relatada em 10% (3/30) dos pacientes, o tabagismo isoladamente por 6,6% (2/30) e o de etilismo por 3,3%(1/30). A associação dos hábitos e o etilismo isolado foram relatados somente por homens. Enquanto que o hábito de tabagismo isolado foi relatado somente por mulheres. Com o uso do VELscope® todas as lesões apresentaram perda da fluorescência tecidual sendo, portanto todas positivas para este método. Com a Solução de Lugol, 100% das lesões não coraram, sendo portanto positivas para este método. O exame histopatológico permitiu o diagnóstico de 30% (9/30) casos de carcinoma epidermoide, 10% (3/30) de neoplasia intraepitelial, 20% (6/30) de líquen plano oral e 40% (12/30) de líquen simple crônico oral. Para o uso do VELscope® e do Lugol foi observada uma sensibilidade de 100% e uma especificidade de 50%.Para o Azul de Toluidina foi observada uma sensibilidade de 63,15%- 66,66% e especificidade de 75,67%-82,35%.Na Microscopia Confocal Reflectante foram definidos padrões para os quatro diferentes diagnósticos observados. Os métodos auxiliares de diagnóstico por cromoscopia e fluorescência de mucosa se mostraram eficientes no auxílio da delimitação da extensão da lesão e a Microscopia Confocal Reflectante permitiu a visualização de padrões morfológicos das lesões brancas de forma não invasiva. A utilização da Microscopia Confocal Reflectante permitiu também a determinação de padrões morfológicos para o carcinoma epidermoide, a neoplasia intraepitelial, o líquen plano oral e o líquen simples crônico oral e se mostrou eficiente quando comparada ao exame histopatológico. / Cancer of the oral mucosa is a public health problem, with higher incidence in men above 50 years. One of the earliest manifestations of cancer of the oral mucosa lesions are leukokeratosis. The inhomogeneous clinical aspect and the larger size of 200mm2 in non-keratinized mucosa as the floor of the mouth and constipation of the tongue, are aspects that imply the possibility of evolution of the lesion. The difficulty of diagnosis of early lesions is in the selection of the site to be biopsied primarily against large and heterogeneous lesions. The objective of this research is to evaluate the use of clinical examination along with diagnostic aids leucoqueratósica of oral lesions (VELscope ®, Toluidine blue and Lugol solution) methods contributes to greater accuracy of diagnosis of dysplasia in these lesions when compared the histopathological. And identify the morphological patterns of these lesions when evaluated by reflectance confocal microscopy. 30 patients older than 18 years, with clinical lesion compatible with oral leukoplakia screened in the outpatient discipline of Clinical Dentistry, Faculty of Dentistry, University of São Paulo and that needed to be biopsied to establish the final diagnosis were selected. Tests toluidine blue, Lugol\'s solution, VELscope ®, reflectance confocal microscopy (RCM) and subsequently, incisional biopsy to obtain the final diagnosis were performed. Patients enrolled had a mean age 60.66 years, 70% (21/30) were female and 30% (9/30) were male. Smoking was reported by 16.7% (5/30) of patients, 60% (3/5) homens.A association of smoking and alcohol use was reported in 10% (3/30) of patients, smoking alone by 6.6% (2/30) and of alcoholism by 3.3% (1/30). The association of habits and alcoholism alone were reported by men only. While the habit of smoking alone was reported by women only. Using the VELscope ® all lesions showed loss of tissue fluorescence, so being all positive for this method. With Lugol\'s solution, 100% of the lesions did not stain, thus being positive for this method. Histopathological examination allowed the diagnosis of 30% (9/30) cases of squamous cell carcinoma, 10% (3/30) of intraepithelial neoplasia, 20% (6/30) of oral lichen planus and 40% (12/30) chronic oral lichen simple. For the use of Lugol VELscope ® and a sensitivity of 100% and a specificity of 50% was observed for the toluidine blue a sensitivity of 63.15%- 66.66% was observed and a specificity of 75.67% - 82.35%. Confocal Microscopy In reflective patterns observed for the four different diagnoses were defined. Auxiliary diagnostic methods chromoscopy and fluorescence mucosa were effective in aiding the delimitation of the extent of injury and Reflectance Confocal Microscopy allowed the visualization of morphological patterns of white lesions noninvasively. Use the Reflectance Confocal Microscopy also allowed the determination of morphological patterns to epidermoid carcinoma, intraepithelial neoplasia, oral lichen planus and lichen simplex chronic oral and proved efficient when compared to histopathology.

O Epstein-Barr Vírus (EBV) é um vírus da família Herpes (HHV-4), presente em grande parte da população mundial. É o agente etiológico da mononucleose infecciosa e da leucoplasia pilosa. A leucoplasia pilosa é uma doença epitelial benigna associada ao EBV, caracterizada pela reprodução replicativa do EBV nas células do epitélio oral, e é uma das mais freqüentes lesões oportunistas em pacientes HIV positivos, sendo menos freqüente apenas que a candidíase, com uma prevalência média entre 10 % e 30%. Por ser uma lesão oportunista bucal fortemente relacionada com a infecção pelo HIV e com a imunossupressão, seu diagnóstico é importante, pois pode sugerir o diagnóstico da infecção em pacientes de sorologia desconhecida para o HIV, e auxiliar no estadiamento da doença. Sua detecção e correto diagnóstico são de particular importância por essa condição estar relacionada à capacidade imune do paciente. Além disso, em pacientes já diagnosticados, ela é indicadora da progressão da doença e da eficácia da terapia antirretroviral. O objetivo desse estudo foi avaliar a presença e a quantidade do EBV na saliva e no sangue de pacientes infectados pelo HIV atendidos no CAPE-FOUSP, verificar a presença clínica de leucoplasia pilosa, estabelecendo a possibilidade da existência de vínculo entre a carga viral do EBV, a manifestação clínica da lesão e a carga viral do HIV. Também se buscou estabelecer relação entre o tipo de terapia antirretroviral em uso e a presença de leucoplasia pilosa, bem como estabelecer relação entre a carga viral do EBV na saliva e no sangue. Foram analisadas 20 lesões de leucoplasia pilosa, num total de 94 pacientes avaliados. Foi encontrada uma correlação positiva entre a Carga Viral do EBV no sangue e na saliva (p=0,001). Quanto maior a carga viral no sangue, maior a carga viral na saliva. Foi encontrada associação entre a Carga Viral do EBV na saliva e a presença de Leucoplasia Pilosa (p=0,045). Indivíduos com Leucoplasia Pilosa apresentam maior Carga Viral de EBV na saliva do que indivíduos sem essa lesão. Foi encontrada uma correlação positiva entre a Carga Viral do HIV e a Carga Viral do EBV na saliva (p=0,006) porém não no sangue. Quanto maior a carga viral de HIV, maior a carga viral do EBV na saliva. Foi encontrada correlação positiva entre a Carga Viral do EBV no sangue e as contagens de CD4 mais baixa registrada e a mais atual (p=0,028 e p=0,030 respectivamente). Quanto maior Carga Viral do EBV no sangue, maior a contagem de CD4. Não foi encontrada associação entre o tipo de medicação antirretroviral em uso e presença de lesão de leucoplasia pilosa. / The Epstein-Barr Virus (EBV) is a herpes virus family (HHV-4), is present in great part of the world population. It is the causative agent of infectious mononucleosis and oral hairy leukoplakia. Oral hairy leukoplakia is a benign epithelial disease associated with EBV, which is characterized by the replicative reproduction of EBV in oral epithelial cells, and is one of the most frequent opportunistic lesions in HIV positive patients, only less frequent than candidiasis, with an average prevalence between 10% and 30%. Being an opportunistic oral lesion strongly associated with HIV infection and immunosuppression, its diagnosis is important, because it may suggests the diagnosis of infection in patients of unknown HIV serology, and assist in the staging of the disease. Its detection and correct diagnosis are particularly important because this condition is related to the patient\'s immune capacity. Moreover, in patients already diagnosed, it is indicative of disease progression and effectiveness of antiretroviral therapy. The aim of this study was to evaluate the presence and quantity of EBV in saliva and blood of HIV-infected patients treated at the CAPE-FOUSP, verifying the presence of clinical OHL, establishing the possibility of the existence of a link between viral load and EBV, clinical manifestation of the lesion, and HIV viral load. It was also aimed to establish the relationship between the type of antiretroviral therapy in use and the presence of oral hairy leukoplakia, as well as establish the relationship between viral load of EBV in saliva and blood. We analyzed 20 lesions of oral hairy leukoplakia, a total of 94 patients. Found a positive correlation between viral load of EBV in blood and saliva (p = 0.001). The higher the viral load in blood, the higher the viral load in saliva. Association was found between viral load of EBV in saliva and the presence of oral hairy leukoplakia (p = 0.045).Individuals with oral hairy leukoplakia have a higher viral load of EBV in saliva than those without such injury. Found a positive correlation between viral load and HIV viral load of EBV in saliva (p = 0.006) but not in blood. The higher the viral load of HIV, the higher the viral load of EBV in saliva. A positive correlation was found between viral load of EBV in blood and CD4 counts the lowest recorded and most current (p = 0.028 and p = 0.030 respectively). The higher viral load of EBV in blood, increased CD4 count. No association was found between the type of antiretroviral medications in use and presence of oral hairy leukoplakia lesions.

O processo da carcinogênese é provocado por múltiplos estágios, envolvendo desordens potencialmente malignas, iniciação, invasão, progressão e metástase. O prognóstico do carcinoma epidermoide de boca (CEB) ainda permanece desfavorável devido ao diagnóstico tardio. Para mitigar esta complicação, biomarcadores tem sido utilizados para ajudar no diagnóstico precoce e entender melhor a influência sobre a carcinogênese oral, onde vias de sinalização são ativadas, principalmente a PI3K/AKT. MIF foi relacionada a progressão de diversos tipos cânceres, porém pouco se sabe seu papel na evolução do CEB. Por isso, o objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar através do padrão de expressão imuno-histoquímico proteínas participantes da via de sinalização de PI3K/AKT: AKT1 e PAKT e sua associação com a expressão de MIF em fragmento de mucosa, hiperqueratose sem e com displasia e CEB correlacionando com a progressão da doença e características clinico-demográficos. Foram utilizados 73 blocos de parafina, avaliados quanto à porcentagem da expressão de cada marcador e coletados os dados clínicos epidemiológicos referentes para correlaciona-los à imunomarcação. A imunonopositividade ocorreu nos casos de mucosa normal, sem e com displasia e CEB. Nos casos de mucosa normal foram positivos para PAKT (50%), AKT (60%), MIF (80%). Em sem displasia, foi observado imunomarcação para PAKT (50%) e MIF (50%). Com displasia houve marcação PAKT (81,81%) e MIF (81%). Nos espécimes de CEB ocorreu em PAKT(100%), AKT (95,23%) e MIF (90,5%). Todos os anticorpos tiveram alta expressão no CEB em comparação com a mucosa normal (p<0,0001), sem displasia (p<0,0001) e com displasia (p<0,0001). Observou-se também influência sobre o fator de risco como tabagismo, etilismo e etnia, respectivamente para os grupos sem displasia, CEB e com displasia. Assim, estas proteínas podem ser consideradas potenciais marcadores preditores do CEB. / The carcinogenesis process is caused by multiple stages, involving potentially malignant disorders, initiation, invasion, progression and metastasis. The prognosis of squamous cell carcinoma (CEB) remains unfavorable due to late diagnosis. To mitigate this complication, biomarkers have been used to aid in early diagnosis and better understand the influence on oral carcinogenesis, which are activated signaling pathways, particularly PI3K / AKT. MIF was related to progression of many types cancers, but its role in the evolution of CEB is little known. Therefore, the aim of this study was to identify and characterize by the expression pattern of immunohistochemical participants proteins signaling pathway PI3K / AKT: AKT1 and PAKT and its association with MIF expression in normal mucosa, hyperkeratosis with and without dysplasia and CEB correlating with the progression of the disease and clinical and demographic characteristics. 73 paraffin blocks were used, in which evaluated the percentage of expression of each marker and collected epidemiological clinical data to correlate them to immunostaining. The imunonopositividade occurred in cases of normal mucosa, hyperkeratosis with and without dysplasia. In cases of normal mucosa were positive for PAKT (50%), AKT (60%), MIF (80%). In no dysplasia, immunostaining was observed PAKT (50%) and MIF (50%). With dysplasia was marking PAKT (81.81%) and MIF (81%). In CEB specimens occurred in PAKT (100%), AKT (95.23%) and MIF (90.5%). All antibodies had high expression in the CEB compared to normal mucosa (p <0.0001) without dysplasia (p <0.0001), and dysplasia (p <0.0001). It was also observed influence on the risk factors such as smoking, alcohol consumption and the ethnicity, respectively, for with dysplasia groups, CEB and without dysplasia. Thus, these proteins can be considered potential early diagnostic markers of CEB.

O câncer de mucosa oral é um problema de saúde pública, com maior incidência em homens acima de 50 anos. Uma das manifestações clínicas mais precoces do câncer da mucosa oral são as lesões leucoqueratósica. O aspecto clínico não homogêneo e o tamanho maior de 200mm2, em mucosa não queratinizada como a do assoalho da boca e ventre da língua, são aspectos que implicam na possibilidade de evolução da lesão. A dificuldade do diagnóstico das lesões precoces está na seleção do local a ser biopsiado principalmente frente a lesões extensas e heterogêneas. O objetivo desta pesquisa é avaliar se a utilização do exame clínico juntamente com os métodos auxiliares de diagnóstico das lesões leucoqueratósica da mucosa oral (VELscope®, Azul de toluidina e Solução de lugol) contribui para uma maior precisão do diagnóstico de displasias nestas lesões quando comparado ao histopatológico. E, identificar os padrões morfológicos destas lesões quando avaliadas por meio da microscopia confocal reflectante. Foram selecionados 30 pacientes, maiores de 18 anos, portadores de lesão clínica compatível com leucoplasia oral triados no ambulatório da disciplina de Estomatologia Clínica da Faculdade de Odontologia da Universidade de São Paulo e que precisavam ser submetidos à biópsia para o estabelecimento do diagnóstico final. Foram realizados os testes de Azul de Toluidina, Solução de Lugol, VELscope®, microscopia confocal reflectante e posteriormente, a biópsia incisional para obtenção do diagnóstico final. Os pacientes incluídos possuíam média de idade 60,66 anos, sendo 70% (21/30) do gênero feminino e 30% (9/30) do gênero masculino. O tabagismo foi relatado por 16,7% (5/30) dos pacientes, sendo 60% (3/5) homens. A associação do tabagismo e etilismo foi relatada em 10% (3/30) dos pacientes, o tabagismo isoladamente por 6,6% (2/30) e o de etilismo por 3,3%(1/30). A associação dos hábitos e o etilismo isolado foram relatados somente por homens. Enquanto que o hábito de tabagismo isolado foi relatado somente por mulheres. Com o uso do VELscope® todas as lesões apresentaram perda da fluorescência tecidual sendo, portanto todas positivas para este método. Com a Solução de Lugol, 100% das lesões não coraram, sendo portanto positivas para este método. O exame histopatológico permitiu o diagnóstico de 30% (9/30) casos de carcinoma epidermoide, 10% (3/30) de neoplasia intraepitelial, 20% (6/30) de líquen plano oral e 40% (12/30) de líquen simple crônico oral. Para o uso do VELscope® e do Lugol foi observada uma sensibilidade de 100% e uma especificidade de 50%.Para o Azul de Toluidina foi observada uma sensibilidade de 63,15%- 66,66% e especificidade de 75,67%-82,35%.Na Microscopia Confocal Reflectante foram definidos padrões para os quatro diferentes diagnósticos observados. Os métodos auxiliares de diagnóstico por cromoscopia e fluorescência de mucosa se mostraram eficientes no auxílio da delimitação da extensão da lesão e a Microscopia Confocal Reflectante permitiu a visualização de padrões morfológicos das lesões brancas de forma não invasiva. A utilização da Microscopia Confocal Reflectante permitiu também a determinação de padrões morfológicos para o carcinoma epidermoide, a neoplasia intraepitelial, o líquen plano oral e o líquen simples crônico oral e se mostrou eficiente quando comparada ao exame histopatológico. / Cancer of the oral mucosa is a public health problem, with higher incidence in men above 50 years. One of the earliest manifestations of cancer of the oral mucosa lesions are leukokeratosis. The inhomogeneous clinical aspect and the larger size of 200mm2 in non-keratinized mucosa as the floor of the mouth and constipation of the tongue, are aspects that imply the possibility of evolution of the lesion. The difficulty of diagnosis of early lesions is in the selection of the site to be biopsied primarily against large and heterogeneous lesions. The objective of this research is to evaluate the use of clinical examination along with diagnostic aids leucoqueratósica of oral lesions (VELscope ®, Toluidine blue and Lugol solution) methods contributes to greater accuracy of diagnosis of dysplasia in these lesions when compared the histopathological. And identify the morphological patterns of these lesions when evaluated by reflectance confocal microscopy. 30 patients older than 18 years, with clinical lesion compatible with oral leukoplakia screened in the outpatient discipline of Clinical Dentistry, Faculty of Dentistry, University of São Paulo and that needed to be biopsied to establish the final diagnosis were selected. Tests toluidine blue, Lugol\'s solution, VELscope ®, reflectance confocal microscopy (RCM) and subsequently, incisional biopsy to obtain the final diagnosis were performed. Patients enrolled had a mean age 60.66 years, 70% (21/30) were female and 30% (9/30) were male. Smoking was reported by 16.7% (5/30) of patients, 60% (3/5) homens.A association of smoking and alcohol use was reported in 10% (3/30) of patients, smoking alone by 6.6% (2/30) and of alcoholism by 3.3% (1/30). The association of habits and alcoholism alone were reported by men only. While the habit of smoking alone was reported by women only. Using the VELscope ® all lesions showed loss of tissue fluorescence, so being all positive for this method. With Lugol\'s solution, 100% of the lesions did not stain, thus being positive for this method. Histopathological examination allowed the diagnosis of 30% (9/30) cases of squamous cell carcinoma, 10% (3/30) of intraepithelial neoplasia, 20% (6/30) of oral lichen planus and 40% (12/30) chronic oral lichen simple. For the use of Lugol VELscope ® and a sensitivity of 100% and a specificity of 50% was observed for the toluidine blue a sensitivity of 63.15%- 66.66% was observed and a specificity of 75.67% - 82.35%. Confocal Microscopy In reflective patterns observed for the four different diagnoses were defined. Auxiliary diagnostic methods chromoscopy and fluorescence mucosa were effective in aiding the delimitation of the extent of injury and Reflectance Confocal Microscopy allowed the visualization of morphological patterns of white lesions noninvasively. Use the Reflectance Confocal Microscopy also allowed the determination of morphological patterns to epidermoid carcinoma, intraepithelial neoplasia, oral lichen planus and lichen simplex chronic oral and proved efficient when compared to histopathology.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-03-16T17:16:39Z No. of bitstreams: 2 Tese - Andréia de Souza Gonçalves - 2017.pdf: 2952330 bytes, checksum: 1e8c4975cba85c509fcbc41ceea34245 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-03-20T13:18:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Andréia de Souza Gonçalves - 2017.pdf: 2952330 bytes, checksum: 1e8c4975cba85c509fcbc41ceea34245 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-20T13:18:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Andréia de Souza Gonçalves - 2017.pdf: 2952330 bytes, checksum: 1e8c4975cba85c509fcbc41ceea34245 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Study Rationale: Oral potentially malignant disorders (OPMDs) consist of morphologically altered tissues, which present a greater risk of malignant transformation than normal tissue. The most frequently found OPMDs are leukoplakia (OL) and actinic cheilitis (AC). It is now known that mutated or genetically altered cells have developed immunomodulatory strategies which allow them to escape antitumor immune response. The immune escape mechanisms used by mutated cells include the expressions of HLA-G, HLA-E and PD-L1 molecules and the IL-10 and TGF-β cytokines. Objective: To evaluate tissue and salivary expressions of HLA-G, HLA-E and PD-L1 molecules and IL-10 and TGF-β1, -β2 e -β3 cytokines in OPMDs, and relate such immunomodulatory mediators with antitumor immune response and potential for malignant transformation of lesions. Methods: Samples of patients with OL (n= 80) were submitted to immunohistochemistry and ELISA techniques to evaluate tissue and salivary expressions of the HLA-G, HLA-E, PD-L1, IL-10, TGF-β1, TGF-β2 and TGF-β3. In addition, samples of patients with QA (n= 30) were submitted to immunohistochemistry technique to evaluation tissue expression of HLA-G, HLA-E, PD-L1 and IL-10. Control group (n= 20) consisted of saliva and tissue of healthy individuals. The immunostained tissue samples were measured using a semi-quantitative method in association with staining intensity. The expression of these molecules and cytokines were related with the malignant potential of the lesions (epithelial dysplasia grading, proliferation- Ki-67 and apoptosis index- mutated p53). Moreover, the association with the density of granzyme B (GB+) cells and regulatory T cells FOXP3+ was investigated. The statistical tests used were: Fisher’s exact or Pearson Chi-Squared, Mann-Whitney and Kruskal- Wallis tests. The significance level was set at P < 0.05. Results: Fifteen samples showed severe dysplasia, twenty moderate, thirty-two mild and thirteen non-dysplasia. Forty samples (50%) of OL presented combined high Ki-67/p53. Irrespective of the severity of epithelial dysplasia and proliferation/apoptosis index in OL, an overexpression of HLA-G, -E, PD-L1, IL-10, TGF-β2 and -β3 was found in OL when compared with control (P < 0.05). The number of GB+ and FOXP3+ cells in OL was similar to control. Salivary concentration of sHLA-G, IL-10 and TGF-β did not allow distinction between OL patients and healthy individuals (P > 0.05). As regards to AC, we showed that this lesion had an increase in expression of HLA-G, HLA-E, IL-10 and PD-L1 when compared to control; however this increase was statistically significant only for PD-L1 (P= 0.04). Conclusion: The OL showed a reduced cytotoxic immune response (low number of GB+ cells) associated with a high expression of immunomodulatory mediators; however, this expression was independent of epithelial dysplasia grading, proliferation and apoptosis index. Regarding AC we also showed an increase in expression of HLA-G, -E, IL-10 and PD-L1 when compared to the control. Thus, our findings suggest that this lesion present an immunosuppressive microenvironment which favors the escape of mutated keratinocytes in any stage dysplastic, proliferation or apoptosis which this disease finds itself. / Justificativa do estudo: As desordens potencialmente malignas (DPMs) de boca consistem em tecidos morfologicamente alterados, os quais apresentam maior risco de transformação maligna que o tecido normal. Dentre as DPMs de boca, as mais frequentes são a leucoplasia (LE) e a queilite actínica (QA). Atualmente, sabe-se que células mutadas ou geneticamente alteradas são capazes de desenvolver estratégias imunomodulatórias que lhes permitem a evasão à resposta imune antitumoral. Dentre esses mecanismos, pode-se citar a expressão das moléculas HLA-G, HLA-E e PD-L1 e das citocinas IL-10 e TGF-β. Objetivo: Avaliar a expressão tecidual e salivar das moléculas HLA-G, HLA-E e PD-L1 e das citocinas IL-10 e TGF-β1, -β2 e -β3 em DPMs de boca e relacionar tais mediadores imunomodulatórios com a resposta imune antitumoral e com o potencial de transformação maligna dessas lesões. Metodologia: Amostras de pacientes acometidos pela LE (n= 80) foram submetidas às técnicas da imunoistoquímica e ELISA para avaliação da expressão tecidual e salivar, respectivamente, das proteínas supracitadas. Adicionalmente, amostras de pacientes acometidos pela QA (n= 30) foram submetidas à técnica da imunoistoquímica para avaliação da expressão tecidual das proteínas HLA-G, HLA-E, PD-L1 e IL-10. O grupo controle (n= 20) consistiu de tecido e saliva de indivíduos saudáveis. As amostras teciduais imunomarcadas foram mensuradas por um método semi-quantitativo associado à intensidade de marcação. A expressão dos mediadores imunomodulatórios foi associada com o potencial de malignização das lesões (gradação de displasia epitelial, índice de proliferação celular- Ki-67 e apoptose- p53 mutado). Além disso, a associação com a densidade de células granzima B+ (GB+) e células T regulatórias FOXP3+ foi investigada. Os testes estatísticos utilizados foram: teste exato de Fisher ou qui-quadrado de Pearson, Mann-Whitney e Kruskal- Wallis. O nível de significância foi estabelecido em P < 0,05. Resultados: No que se refere a LE, o presente estudo demonstrou que 15 amostras apresentaram displasia severa, 20 moderada, 32 leve e 13 sem displasia. Quarenta amostras (50%) apresentram o combinado alto Ki-67/p53. Independente da severidade da displasia epitelial e do índice de proliferação celular/ apoptose, observou-se uma expressão aumentada de HLA-G, HLA-E, PD-L1, IL-10, TGF-β2 e -β3 quando comporado ao controle (P < 0.05). O número de células GB+ e FOXP3+ nas LE foi similar ao controle. Os níveis salivares de HLA-G solúvel (HLA-Gs), IL-10 e TGF-β não nos possibilitou uma diferenciação entre os pacientes com LE e indivíduos saudáveis (P > 0,05). Em relação aos resultados obtidos para QA, evidenciou-se que essa lesão teve um aumento na expressão de HLA-G, HLA-E, IL-10 e PD-L1 em comparação ao controle, todavia esse aumento só foi estatisticamente significativo para o PD-L1 (P= 0,04). Conclusão: As LEs apresentaram uma reduzida resposta imunológica citotóxica (baixo número de células GB+) associada a uma elevada expressão de mediadores imunomodulatórios; todavia essa expressão não possui relação com a gradação de displasia epitelial e índice de proliferação celular e apoptose. Em relação à QA, nós também evidenciamos uma maior expressão de HLA-G, HLA-E, IL-10 e PD-L1 se comparado ao controle. Desta forma, nossos achados sugerem que tais lesões apresentam um microambiente imunossupressor que favorece a evasão de queratinócitos mutados em qualquer estágio de alteração displásica, proliferação ou apoptose que essa doença se encontre.

Leucoplasia oral (LO) é uma lesão potencialmente maligna, definida como uma placa branca que não pode ser caracterizada como outra doença da mucosa oral. Dentro de certo consenso, as LOs devem ser tratadas, mas nenhum tratamento disponível tem a capacidade de prevenir a transformação maligna. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia do tratamento cirúrgico das LOs por lasers de CO2 e diodo e verificar a ocorrência de desfechos clínicos de recidivas, desenvolvimento de novas lesões ou transformação maligna após o tratamento. Adicionalmente foi realizado estudo imunohistoquímico em material biopsiado das lesões e em tecido normal gengival (grupo controle). Fatores reconhecidamente de risco como hábitos nocivos (álcool e tabagismo), características clínicas das lesões, grau de displasia, bem como a expressão dos anticorpos investigados, foram analisados e relacionados com a ocorrência de desfechos clínicos em 40 pacientes atendidos no ambulatório de Estomatologia Clínica. Os cortes histológicos das lesões foram classificados de acordo com o grau de displasia e com um sistema binário, e subsequentemente foram testados para os anticorpos anti-p53, anti-COX-2 e anti- EGFR através de reação imuno-histoquímica. Análise de Kaplan-Meier, seguida do teste de log-rank e análise de regressão de Cox avaliaram a ocorrência de recorrência, desenvolvimento de novas lesões e transformação maligna e possíveis fatores relacionados com esses desfechos clínicos. Teste de odds ratio e de x2 avaliaram a expressão dos anticorpos investigados em LOs e grupo controle. Pacientes com LO apresentaram idade média de 60,5 anos e a relação homem/mulher foi de 1,35:1. Hábitos de tabagismo e etilismo foram prevalentes em homens. A maior parte das lesões era < 2 cm (57,1%), tinha aspecto homogêneo (67,3%) e displasia epitelial (61,2%); apenas 7 lesões eram de alto risco (sistema binário). Desfechos clínicos de recorrência, desenvolvimento de novas lesões ou transformação maligna foram observados em 37,5% dos pacientes; 2 pacientes desenvolveram malignidade em sítios distintos da LO inicial. Análise estatística mostrou associação entre desfecho de recorrência e lesões de alto risco, e entre desfecho de desenvolvimento de novas lesões e mulheres acima de 60 anos. Os anticorpos p53 e COX-2 foram mais expressos em LOs que no grupo controle, mas a expressão de nenhum anticorpo foi relacionada com os desfechos clínicos avaliados. O tratamento por lasers de alta potência (CO2 e diodo) mostrou-se eficiente na remoção das lesões, embora não tenha evitado desfechos clínicos de recorrência, desenvolvimento de novas lesões e transformação maligna. Lesões de alto risco e mulheres acima de 60 anos constituíram fatores de risco aos desfechos clínicos, enquanto os anticorpos analisados não foram eficientes para prognosticar a evolução das LOs. / Oral leukoplakia (OL) is a potentially malignant lesion, defined as a white patch that cannot be characterized as any other disease of the oral mucosa. In general, OL should be treated; however no treatment available has been able to prevent malignant transformation. The aim of this study was to evaluate the efficacy of surgical treatment with CO2 and diode lasers in 40 patients with OL and the occurrence of clinical outcomes of recurrence, development of new lesions or malignant transformation, after treatment. Additionally, an immunohistochemistry study was performed in OL biopsy-specimen and in gingival normal tissue (control group). Recognized risk factors such as habits (alcohol and tobacco), clinical characteristics of lesions, grade of dysplasia, as well as the expression of immunohistochemistry reaction were analyzed. Histological slides of lesions were classified according to the grade of dysplasia and a binary system, and subsequently tested for the anti-p53, anti-COX-2 and anti-EGFR antibodies by immunohistochemistry assay. Kaplan-Meier analysis along with log-rank test and Cox regression analysis were used to assess the occurrence of clinical outcomes and the association with risk factors. Odds ratio and x2 tests evaluated the expression of the investigated antibodies in OLs and in the control group. Patients with OL had a mean age of 60.5 years and the men/women ratio was of 1.35:1. Smoking and alcohol habits were more prevalent among men than in women. Lesions were clinically characterized as measuring less than 2 cm (57.1%), with a homogenous aspect (67.3%) and histologically with epithelial dysplasia (61.2%); only 7 lesions were classified as of high-risk (binary system). Clinical outcomes (recurrence, development of new lesions and malignant transformation) were observed in 37.5% patients; 2 patients developed malignancy in areas distant from the initial OL site. Statistical analysis showed association between recurrence and high-risk lesions, and between development of new lesions and women over 60 years old. Anti-P53 and anti-COX-2 antibodies were more expressed among OL than in the control group, but no antibody expression was related to the clinical outcomes analyzed. Surgical treatment with high-power lasers (CO2 and diode) showed to be efficient in the removal of OL lesions, but it did not avoid clinical outcomes of recurrence, development of new lesions and malignant transformation. High-risk lesions and women over 60 years old constituted risk factors for the clinical outcomes, while the analized antibodies were not usefull markers to characterize OL lesions with higher risk of malignancy.

Leucoplasia oral (LO) é uma lesão potencialmente maligna, definida como uma placa branca que não pode ser caracterizada como outra doença da mucosa oral. Dentro de certo consenso, as LOs devem ser tratadas, mas nenhum tratamento disponível tem a capacidade de prevenir a transformação maligna. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia do tratamento cirúrgico das LOs por lasers de CO2 e diodo e verificar a ocorrência de desfechos clínicos de recidivas, desenvolvimento de novas lesões ou transformação maligna após o tratamento. Adicionalmente foi realizado estudo imunohistoquímico em material biopsiado das lesões e em tecido normal gengival (grupo controle). Fatores reconhecidamente de risco como hábitos nocivos (álcool e tabagismo), características clínicas das lesões, grau de displasia, bem como a expressão dos anticorpos investigados, foram analisados e relacionados com a ocorrência de desfechos clínicos em 40 pacientes atendidos no ambulatório de Estomatologia Clínica. Os cortes histológicos das lesões foram classificados de acordo com o grau de displasia e com um sistema binário, e subsequentemente foram testados para os anticorpos anti-p53, anti-COX-2 e anti- EGFR através de reação imuno-histoquímica. Análise de Kaplan-Meier, seguida do teste de log-rank e análise de regressão de Cox avaliaram a ocorrência de recorrência, desenvolvimento de novas lesões e transformação maligna e possíveis fatores relacionados com esses desfechos clínicos. Teste de odds ratio e de x2 avaliaram a expressão dos anticorpos investigados em LOs e grupo controle. Pacientes com LO apresentaram idade média de 60,5 anos e a relação homem/mulher foi de 1,35:1. Hábitos de tabagismo e etilismo foram prevalentes em homens. A maior parte das lesões era < 2 cm (57,1%), tinha aspecto homogêneo (67,3%) e displasia epitelial (61,2%); apenas 7 lesões eram de alto risco (sistema binário). Desfechos clínicos de recorrência, desenvolvimento de novas lesões ou transformação maligna foram observados em 37,5% dos pacientes; 2 pacientes desenvolveram malignidade em sítios distintos da LO inicial. Análise estatística mostrou associação entre desfecho de recorrência e lesões de alto risco, e entre desfecho de desenvolvimento de novas lesões e mulheres acima de 60 anos. Os anticorpos p53 e COX-2 foram mais expressos em LOs que no grupo controle, mas a expressão de nenhum anticorpo foi relacionada com os desfechos clínicos avaliados. O tratamento por lasers de alta potência (CO2 e diodo) mostrou-se eficiente na remoção das lesões, embora não tenha evitado desfechos clínicos de recorrência, desenvolvimento de novas lesões e transformação maligna. Lesões de alto risco e mulheres acima de 60 anos constituíram fatores de risco aos desfechos clínicos, enquanto os anticorpos analisados não foram eficientes para prognosticar a evolução das LOs. / Oral leukoplakia (OL) is a potentially malignant lesion, defined as a white patch that cannot be characterized as any other disease of the oral mucosa. In general, OL should be treated; however no treatment available has been able to prevent malignant transformation. The aim of this study was to evaluate the efficacy of surgical treatment with CO2 and diode lasers in 40 patients with OL and the occurrence of clinical outcomes of recurrence, development of new lesions or malignant transformation, after treatment. Additionally, an immunohistochemistry study was performed in OL biopsy-specimen and in gingival normal tissue (control group). Recognized risk factors such as habits (alcohol and tobacco), clinical characteristics of lesions, grade of dysplasia, as well as the expression of immunohistochemistry reaction were analyzed. Histological slides of lesions were classified according to the grade of dysplasia and a binary system, and subsequently tested for the anti-p53, anti-COX-2 and anti-EGFR antibodies by immunohistochemistry assay. Kaplan-Meier analysis along with log-rank test and Cox regression analysis were used to assess the occurrence of clinical outcomes and the association with risk factors. Odds ratio and x2 tests evaluated the expression of the investigated antibodies in OLs and in the control group. Patients with OL had a mean age of 60.5 years and the men/women ratio was of 1.35:1. Smoking and alcohol habits were more prevalent among men than in women. Lesions were clinically characterized as measuring less than 2 cm (57.1%), with a homogenous aspect (67.3%) and histologically with epithelial dysplasia (61.2%); only 7 lesions were classified as of high-risk (binary system). Clinical outcomes (recurrence, development of new lesions and malignant transformation) were observed in 37.5% patients; 2 patients developed malignancy in areas distant from the initial OL site. Statistical analysis showed association between recurrence and high-risk lesions, and between development of new lesions and women over 60 years old. Anti-P53 and anti-COX-2 antibodies were more expressed among OL than in the control group, but no antibody expression was related to the clinical outcomes analyzed. Surgical treatment with high-power lasers (CO2 and diode) showed to be efficient in the removal of OL lesions, but it did not avoid clinical outcomes of recurrence, development of new lesions and malignant transformation. High-risk lesions and women over 60 years old constituted risk factors for the clinical outcomes, while the analized antibodies were not usefull markers to characterize OL lesions with higher risk of malignancy.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacaoo_Deise_de_ Avila_Silva.pdf: 596277 bytes, checksum: bb38f7b6e8b73ab071ecabe2d943800c (MD5) Previous issue date: 2012-09-14 / This study aims to evaluate the immunohistochemical expression of antibodie MAGE-(Y18) in potentially malignant oral lesions and malignant lesions in patients with or without factor risk, and also to check the interexaminers variability on histological classification of oral epithelial dysplasia. Paraffin-embedded samples of 20 cases of severe dysplasia/carcinoma in situ and 20 cases of intraoral squamous cell carcinoma (SCC) were used in the study, and in both groups the samples had been distributed between patients with and without other risk factors associated with the occurrence of injury (tobacco and alcohol). The positive immunohistochemical expression of MAGE(Y-18) was defined by a cytoplasmic staining pattern, and it was used a scoring system considering the homogeneity of the reaction. In order to verify the interexaminer variability when performing a histological classification of oral epithelial dysplasia, 75 cases of potentially malignant oral lesions were selected from a referral service in oral disease. Slides were read independently and blindly by three pathologists in two stages. In the first stage it was made available to examiners the slides stained with H & E along with the clinical information of each case, and pathologists had to classify the lesions: no dysplasia, mild dysplasia, moderate dysplasia, severe dysplasia or carcinoma in situ.In the second stage, it was not given access to clinical information to the examiners, and they had to classify slides into two categories: low risk (non-dysplastic lesions / mild dysplasia) and high risk (moderate or severe dysplasia / carcinoma in situ). . The results were positive in 4/20 PML and 17/20 SCC. Through the Kruskal-Wallis test, it was observed a statistically significant difference (p<0.05) between groups of CPB and the group of potentially malignant lesions (PML) without the risk factor. The Mann-Whitney test found a statistically significant difference between carcinomas and potentially malignant lesions (p<0.001). The Fisher Exact test showed no statistically significant difference between the lesions that had the same histological diagnosis when compared in subgroups of associated risk factor (p=1). Detection of MAGE antigen may be useful in identifying LPM that has a higher risk of progression to invasive SCC, but it seems to be unrelated to exposure to popular risk factors The agreement between the examiners and the gold standard ranged from low to moderate, regardless of the classification system that was used. In the first stage, the intraclass correlation coefficient showed a moderate agreement between examiners 1 and 3 (r = 0.479 and r = 0.544) and, a low agreement of the examiner 2 (r = 0.384). In the second phase, it was observed a moderate agreement between examiners 2 and 3 and the gold standard (k = 0.433 k = 0.422) and, a low concordance between the examiner 1 and the gold standard (k = 0.186).Taking into account that grading dysplasia is a subjective process and still there is no test that outperforms the histological observation on diagnosis of oral epithelial dysplasia, it is understood that the process of grading made by two or more examiners should be encouraged, in order to assist in defining more precisely the diagnostics / O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão imuno-histoquímica do MAGE (Y-18) em LPM e malignas de pacientes com e sem fator de risco associado, bem como verificar a variabilidade interexaminadores na classificação histológica das displasias epiteliais orais. Foram utilizadas amostras incluídas em parafina de 20 casos de displasia severa/carcinoma in situ e 20 casos de CEC intraoral, sendo que em cada grupo as amostras estavam distribuídas entre pacientes com e sem fator de risco associado à ocorrência da lesão (tabaco e álcool). A expressão imuno-histoquímica positiva de MAGE (Y-18) foi definida por um padrão de coloração citoplasmático, sendo utilizado um sistema de pontuação considerando a homogeneidade da reação. Para classificar as displasias epiteliais orais, 75 casos de lesões orais potencialmente malignas foram selecionados de um serviço de referência em patologia bucal. Três patologistas analisaram as lâminas de forma independente e cega em dois momentos.Na primeira etapa foram disponibilizadas aos examinadores as lâminas coradas em H&E juntamente com as informações clínicas de cada caso e os patologistas classificaram as lesões em sem displasia, displasia leve, moderada, severa ou carcinoma in situ. Na segunda etapa, os avaliadores não tiveram acesso às informações clínicas e classificaram as lâminas em duas categorias: baixo risco (lesão não displásica/displasia leve) e alto risco (displasia moderada/severa/carcinoma in situ). A análise das reações imuno-histoquímicas demonstrou positividade em 4/20 LPM e 17/20 CEC. Pelo teste de Kruskall-Wallis observou-se diferença estatisticamente significativa (p<0,05) entre os grupos de CEC e o grupo das lesões potencialmente malignas sem fator de risco. O teste de Mann-Whitney verificou diferença estatisticamente significativa entre os carcinomas e as lesões potencialmente malignas (p<0.001). O teste Exato de Fischer não demonstrou diferença estatisticamente significativa entre as lesões de mesmo diagnóstico histológico quando comparadas nos subgrupos de fator de risco associado (p=1). Nossos resultados sugerem que a detecção do antígeno MAGE pode ser útil na identificação de LPM com maior risco de progressão para o CEC invasivo, mas parece não ter relação com a exposição aos fatores de risco mais conhecidos. Quando na classificação das displasias, independente do sistema de classificação utilizado, a concordância entre os avaliadores e o padrão ouro variou de fraca a moderada.Na primeira etapa, o Coeficiente de Correlação Intraclasse demonstrou uma concordância moderada entre os avaliadores 1 e 3 (r=0,479 e r=0,544) e uma concordância baixa do avaliador 2 (r=0,384). No segundo momento observou-se uma concordância moderada entre os examinadores 2 e 3 e o padrão ouro (k=0,433 e k=0,422) e uma baixa concordância entre o avaliador 1 e o padrão ouro (k=0,186). Tendo em vista que a graduação da displasia é um processo subjetivo, e que ainda não dispomos de nenhum exame que supere a observação histológica no diagnóstico das displasias epiteliais orais, entendemos que o processo de graduação entre dois ou mais observadores deve ser incentivado, a fim de auxiliar na definição mais precisa do diagnóstico