Resumo: O sistema OPG, RANK e RANKL é uma das mais importantes descobertas da biologia óssea. Essas proteínas regulam as atividades celulares na remodelação do tecido ósseo e na literatura há diversas investigações nos tecidos dentários. No entanto, no reimplante dentário, ainda não foram encontrados relatos. Foi objetivo deste trabalho, avaliar a imunomarcação das proteínas OPG, RANK e RANKL em dentes reimplantados de rato. Um grupo controle foi formado com quatro ratos no qual o reimplante dentário não foi realizado. Vinte e quatro ratos (Rattus norvegicus, albinus) tiveram seu incisivo superior extraído e depois reimplantado formando os seguintes grupos: grupo I - reimplante imediato; grupo II - reimplante tardio sem tratamento e grupo III - reimplante tardio com tratamento endodôntico (ressecção da papila dentária e preenchimento do canal com pasta de hidróxido de cálcio) e tratamento da superfície radicular (raspagem mecânica do ligamento periodontal necrosado e imersão em solução de flúor fosfato acidulado de sódio a 2,5%). Ao final dos períodos experimentais (10 e 60 dias) os ratos foram eutanasiados. Foram obtidos cortes longitudinais parafinados com 6μm de espessura. Os cortes foram submetidos à reação imunoístoquímica mediante a utilização de anticorpos primários para OPG, RANK e RANKL. Os resultados mostraram que a imunomarcação de OPG e RANKL ocorreu em todos os grupos e períodos estudados, muito embora RANKL não tenha sido observada no grupo reimplante imediato aos 60 dias. RANK foi observada somente aos 10 dias de todos os grupos no qual o reimplante foi realizado. A análise qualitativa dos resultados demonstrou que o sistema OPG, RANK e RANKL apresentou marcação evidente no reimplante tardio, sugerindo a efetiva participação no início do processo de reabsorção radicular, uma vez que aos 60 dias a imunomarcação foi discreta. / Abstract: The OPG, RANK and RANKL system is one of the most important discoveries in bone biology. These proteins are key regulators of bone remodeling and in the literature there are several studies of tooth resorption. However, in tooth replantation, reports have not been found. The purpose of this study was to determine the immunolabeling of OPG, RANK and RANKL in replanted teeth in rats, using immunohistochemistry methodology. A control group (no replanted teeth) was formed by four rats. Twenty-four rats (Rattus norvegicus, albinus) were submitted to the extraction of their upper right incisors. The replantation was performed according to the groups below: group I - immediate replantation; group II - delay replantation without treatment and group III - delay replantation with endodontic treatment (extirpation of papilla and the root canal filled with calcium hydroxide) and root surface treatment (periodontal ligament was removed with scalpel and teeth were immersed in 2% acidulated phosphate sodium fluoride). The animals were euthanized at the end of the experimental periods (10 and 60 days). Longitudinal 6μm slices embedded in paraffin were obtained. The slices were submitted to immunohistochemistry reaction by means of the primary antibodies for OPG, RANK and RANKL proteins. The results showed the expression of OPG in all groups and periods. RANKL expression was observed in all groups, except in the immediate replanted teeth group (60 days). RANK expression was observed only at 10 days in all groups which replantation was performed. The qualitative analysis of our findings indicated that the system OPG, RANK and RANKL presented strong expression in delayed replantation, suggesting effective participation at the beginning of root resorption, since at 60 days the immunostained cells were discreet. / Orientador: Wilson Roberto Poi / Coorientador: Roberta Okamoto / Banca: Sônia Regina Panzarini Barioni / Banca: Celso Koogi Sonoda / Banca: Luiz Guilherme Brentegani / Banca: Mirian Marubayashi Hidalgo / Doutor

Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar histológica, histometrica e imunoistoquimicamente os efeitos do laser (LLLT) e da terapia fotodinâmica (PDT) no tratamento periodontal de ratas ovariectomizadas com ou sem reposição hormonal. Duzentas e setenta ratas foram divididas em 3 grupos de 90 animais: (A) SHAM; (B) Ovariectomizadas; (C) Ovariectomizadas tratadas com reposição hormonal. Nos primeiros molares inferiores esquerdos, de todos os animais, a doença periodontal foi induzida por ligadura. Após 7 dias, esta foi removida e nestes dentes procedeu-se a raspagem e alisamento corono-radicular (RAR). A seguir foram dividos em subgrupos de acordo com os tratamentos locais: I (n = 90) - Irrigação com 1 ml de soro fisiológico (RAR); II (n = 90) - Irrigação com 1 ml de soro fisiológico associado a aplicação de laser de baixa intensidade (LLLT) e III (n = 90) - Irrigação com 1 ml de azul de toluidina-O e, após 1 minuto, aplicação de laser em baixa intensidade (PDT). Dez animais de cada subgrupo foram sacrificados aos 7, 15 e 30 dias. Os animais do grupo A apresentaram perda óssea (PO) significativamente maior (p<0,01) no tratamento com RAR (1.11±0.26; 0.84±0.47) comparado à PDT (0.70±0.30; 0.42±0.20) nos períodos de 7 e 15 dias respectivamente. Os espécimes tratados com LLLT aos 30 dias demonstraram PO significativamente menor (p<0,01) no grupo A (0.35±0.18) comparado aos grupos B (0.82±0.21) e C (0.83±0.19). No tratamento com PDT, observou-se PO significativamente menor (p<0,01) no grupo A (0.42±0.20) comparado aos grupos B (0.95±0.20) e C (0.81±0.32) aos 15 dias. No entanto, no grupo C aos 30 dias a PDT demonstrou PO (0.52±0.23) em nível próximo ao observado nos espécimes do grupo A, no mesmo período (0.50±0.26). Na análise entre períodos, no mesmo grupo e tratamento, observou-se no grupo A, que o tratamento I apresentou PO significativamente maior... (Resumo completo clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate histological, histometrically and immunohistochemistry the influence of laser and photodynamic therapy (PDT) as an adjuvant treatment on the experimentally induced periodontitis in ovariectomy rats with or without replacement hormone. Two hundred and seventy females rats were divided into 3 groups of 90 animals. (A) Normal female rats; (B) Control - Ovarectomy; (C) Ovarectomy treated with replacement hormone. The periodontal disease was induced by ligation and after 7 days was removed and the animals divided into subgroups who received the treatments: I - scaling and root planing (SRP) and irrigation with saline; II - SRP and irrigation with saline solution and LLLT (Laser -AsGaAl - 685 nm); III - SRP, irrigation with 1ml of Toluidine Blue (TBO) and, after 1 minute, application of laser (685 nm), performing photodynamic therapy (PDT). Ten animals of each subgroup were sacrificed at 7, 15 and 30 days. The animals of the group A presented bony loss (BL) significantly larger (p <0,01) in the treatment with RAR (1.11±0.26; 0.84±0.47) compared to PDT (0.70±0.30; 0.42±0.20) at 7 and 15 days respectively. In the specimens treated with LLLT at 30 days showed BL significantly less (p <0,01) in the group A (0.35±0.18) compared at groups B (0.82±0.21) and C (0.83±0.19). In the treatment with PDT, it was observed BL significantly less (p <0,01) in the group A (0.42±0.20) than groups B (0.95±0.20) and C (0.81±0.32) at 15 days. However, in the group C at 30 days PDT showed BL (0.52±0.23) in close level that observed in the specimens of the group A, in the same period (0.50±0.26). In the analysis among periods, in the same group and treatment, it was observed in the group A, that the treatment I presented BL significantly larger (p <0,01) at 7 days (1.11±0.26); that the treatment II showed larger BL (p <0,01) in the period of 7 days (0.90±0.29)... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Valdir Gouveia Garcia / Coorientador: Maria José Hitomi Nagata / Banca: Álvaro Francisco Bosco / Banca: Juliana Rico Pires / Mestre

As estatinas são medicamentos comumente prescritos para a prevenção da hiper-lipidemia. Além da redução do colesterol, tais medicamentos parecem estimular a osteogênese e suprimir a reabsorção óssea, o que poderia afetar a movimentação dentária induzida (MDI) e a recidiva ortodôntica. Assim, o objetivo deste estudo foi determinar se a atorvastatina (ATV) pode afetar a MDI, a recidiva e a osteoclastogênese, por meio da modulação da expressão das moléculas: - ligante do receptor ativador de NFκB (RANKL) e osteoprotegerina (OPG). Ainda foram analisados os potenciais efeitos adversos da ATV sobre a ossificação endocondral e sobre o turnover de ossos longos. No primeiro experimento, 36 ratos foram sujeitos a MDI durante 21 dias, quando o aparelho foi removido. Aos animais, foram administrados, diariamente, ATV ou solução salina (SAL), via gavagem. Após 7, 14 e 21 dias de administração de ATV / SAL, a recidiva dentária foi mensurada, e foram obtidos os cortes histológicos da maxila e fêmur, os quais foram submetidos às seguintes colorações: - H&E – para análise histomorfométrica; - fosfatase acida tartrato resistente (TRAP) – para contagem de osteoclastos e; - imunohistoquímica para RANKL e OPG. A atorvastatina resultou numa inibição da recidiva ortodôntica (p < 0,05), e numa transiente redução do número de osteoclastos (p < 0,05); havendo uma correlação positiva e significativa (p < 0,01) entre o estes dois fatores (número de osteoclastos e a taxa de recidiva). A administração de estatinas também aumentou significativamente a expressão de OPG (p < 0,01), mas não a de RANKL. Além disso, após 21 dias de administração de ATV, a espessura da cartilagem da placa de crescimento e da zona hipertrófica condrocítica foi significativamente aumentada. Já no segundo experimento, 24 ratos começaram a receber diariamente ATV ou solução salina (SAL), via gavagem. Duas semanas mais tarde, a MDI foi iniciada. O deslocamento do dente foi medido após 7, 14 e 21 dias, enquanto que os cortes histológicos da maxila e do fêmur foram obtidos após 14 e 21 dias de MDI; sendo então submetidos às colorações de H&E e TRAP, para avaliação histomorfométrica e contagem de osteoclastos. A administração de atorvastatina gerou um menor movimento dentário (p <0,05) e uma redução transitória do número de osteoclastos (p <0,05). No grupo SAL, após 14 dias de MDI, ocorreu um aumento no número de osteoclastos, assim reduzindo a taxa de volume ósseo, quando comparado com as maxilas controle (sem movimento dentário), deste mesmo grupo. Contudo, tal comportamento não foi observado no grupo ATV. Interessantemente, depois de 35 dias, a atorvastatina não afetou a remodelação óssea nas maxilas controle, nem a ossificação endocondral em fêmures. Logo, guardando as devidas limitações deste estudo pré-clínico, nossos resultados sugerem que a administração sistêmica de atorvastatina é capaz de minimizar a MDI e recidiva ortodôntica. No entanto, os seus efeitos celulares sobre a ossificação endocondral e remodelação óssea durante a MDI e recidiva, parecem ser limitados a um curto período de tempo, o que aparentemente necessita de investigações futuras. Finalmente, nossos resultados lançam luz sobre a superexpressão OPG induzida por estatinas, o que representa um alvo molecular para modular o metabolismo do ósseo e, assim minimizar a recidiva ortodôntica. / Statins are drugs commonly prescribed for prevention of hyper-lipidemia. In addition to the cholesterol-lowering, these medicines seem to enhance osteogenesis and suppress bone resorption, which could affect orthodontic tooth movement (OTM) and relapse. Therefore, the aim of this study was to determine whether atorvastatin (ATV) might affect the orthodontic relapse or tooth movement and osteoclastogenesis, through the modulation of the following molecules: receptor activator of nuclear κ B ligand (RANKL) and; - osteoprotegerin (OPG). Furthermore, we analyzed potential adverse effects of ATV on long bone turnover and endochondral ossification. In the first experiment, 36 rats were subjected to OTM for 21 days, when the appliance was removed. After, the animals were administered daily with ATV (15mg/Kg) or saline (SAL), via gavage (n=18, per group). Up to 7, 14 and 21 days of ATV/SAL administration the tooth relapse was measured while maxillary and femur histologic sections were obtained and prepared to: - H&E staining – used in histomorphometric analysis, tartrate resistant acid phosphatase histochemical staining (TRAP) – used to osteoclasts counting and, immunohistochemistry to RANKL and OPG. Atorvastatin resulted in a decreased tooth relapse (p<0.05), and a transient reduction of osteoclasts number (p<0.05). There was a positive and significant correlation (p<0.01) between these two parameters (osteoclasts number and relapse rate). The statin administration increased significantly the OPG (p<0.01), but not the RANKL expression. Furthermore, after 21 days of ATV administration, the thickness of growth plate cartilage and chondrocytic hypertrophic zone was enhanced. In the second experiment, 24 rats started to be administered daily with ATV or SAL, via gavage. Two weeks later, the OTM started. The tooth displacement was measured after 7, 14, and 21 days, while the maxillary and femur histologic sections were obtained only after 14 and 21 days of OTM. At these times, the sections were prepared to H&E and TRAP, intending to perform the histomorphometric analysis and osteoclasts count. Atorvastatin administration promoted a decreased tooth movement (p<0.05), and a transient reduction of osteoclasts number (p<0.05). In the SAL group, after 14 days of OTM, the increased number of osteoclasts was associated to a reduced bone volume rate, when compared to its control maxillae. However, this trend was not obvious in ATV group. Interestingly, after 35 days, statins did not affect the bone turnover and endochondral ossification. The big picture of our study suggests that systemic administration of statins is able to minimize OTM and relapse. However, its cellular effects on endochondral ossification and bone turnover during OTM or relapse seem to be limited to a short period, apparently requiring further investigations. Finally, our results shed light on OPG overexpression induced by statins, which represents a molecular target modulating maxillary bone metabolism thus inhibiting orthodontic relapse.

Orientador: Osmir Batista de Oliveira Junior / Resumo: Estudos clinicos, randomizados, controlados, cegos e de medidas repetidas foram realizados para avaliar o efeito da técnica walking bleach de clareamento dental realizada com concentração reduzida de peroxido (PH13). O efeito de PH13 foi comparado ao obtido com peroxido de hidrogênio a 35% utilizado como controle (PH35). O desempenho clinico de PH13 e PH35 foi avaliado em função de: 1) eficácia estética, determinada por avaliação objetiva (espectroscopio) e subjetiva de cor (comparação visual) mensuradas por ΔE e ΔSGU; 2) impacto sobre fatores psicosociais de qualidade de vida, mensurados pelos indices PIDAQ e OHIP Estetico e; 3) expressão de biomarcadores de inflamação e reabsorção (IL-1β e RANK-L) no fluido crevicular. Material e Método: Um total de 50 incisivos superiores escurecidos devido ao tratamento endodontico de um total de 47 voluntários foram selecinados e randomicamente divididos nos grupos PH35 (controle) e PH13 (teste). Todos os dentes receberam 4 sessões de clareamento. A eficácia estética e a expressão dos biomarcadores foram registrados antes (baseline - T0), após cada sessão de clareamento (T1, T2, T3, T4), uma semana (T5), um mês (T6) e tres meses (T7) após o fim do tratamento clareador. Os questionarios de qualidade de vida (PIDAQ e OHIP Estético) foram aplicados no baseline, imediatamente após e fim do tratamento e após 1 mês. Resultados: foram observados aumentos significativos nos níveis de IL-1β e RANK-L, a partir do baseline (P<0.05); Não houve difer... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Three clinical studies, randomized, controlled, blind and with repeated measurements were performed to evaluate the effect of bleaching, performed with walking bleach technique with reduced concentration of peroxide (PH13). The PH13 effect was compared to that obtained with 35% hydrogen peroxide used as control (PH35). The clinical performance of PH13 and PH35 was evaluated in terms of: 1) aesthetic efficacy, determined by objective evaluation (spectrophotometer) and subjective evaluation (visual comparison), measured in ΔE and ΔSGU respectively; 2) impact on psychosocial factors of quality of life, measured by questionnaire PIDAQ and OHIP aesthetic; 3) expression of biomarkers of inflammation and resorption (IL-1β and RANK-L) in crevicular fluid. Material and Methods: A total of 50 incisors with endodontic treatment and color change of a total of 47 selected volunteers were randomly divided into PH35 groups (control) and PH13 (test). All teeth received 4 bleaching sessions . The aesthetic effect and the expression of biomarkers were recorded before (baseline - T0), after each whitening session (T1, T2, T3, T4), one week (T5), one month (T6) and three months (T7) after the end of the bleaching treatment. The questionnaires of quality of life (OHIP PIDAQ and Esthetic) were applied at baseline, immediately after of treatment and after 1 month. Results: Significant increases were observed in IL-1β and RANK-L from baseline (P <0.05); There was no difference in IL-1β levels betwee... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

As estatinas são medicamentos comumente prescritos para a prevenção da hiper-lipidemia. Além da redução do colesterol, tais medicamentos parecem estimular a osteogênese e suprimir a reabsorção óssea, o que poderia afetar a movimentação dentária induzida (MDI) e a recidiva ortodôntica. Assim, o objetivo deste estudo foi determinar se a atorvastatina (ATV) pode afetar a MDI, a recidiva e a osteoclastogênese, por meio da modulação da expressão das moléculas: - ligante do receptor ativador de NFκB (RANKL) e osteoprotegerina (OPG). Ainda foram analisados os potenciais efeitos adversos da ATV sobre a ossificação endocondral e sobre o turnover de ossos longos. No primeiro experimento, 36 ratos foram sujeitos a MDI durante 21 dias, quando o aparelho foi removido. Aos animais, foram administrados, diariamente, ATV ou solução salina (SAL), via gavagem. Após 7, 14 e 21 dias de administração de ATV / SAL, a recidiva dentária foi mensurada, e foram obtidos os cortes histológicos da maxila e fêmur, os quais foram submetidos às seguintes colorações: - H&E – para análise histomorfométrica; - fosfatase acida tartrato resistente (TRAP) – para contagem de osteoclastos e; - imunohistoquímica para RANKL e OPG. A atorvastatina resultou numa inibição da recidiva ortodôntica (p < 0,05), e numa transiente redução do número de osteoclastos (p < 0,05); havendo uma correlação positiva e significativa (p < 0,01) entre o estes dois fatores (número de osteoclastos e a taxa de recidiva). A administração de estatinas também aumentou significativamente a expressão de OPG (p < 0,01), mas não a de RANKL. Além disso, após 21 dias de administração de ATV, a espessura da cartilagem da placa de crescimento e da zona hipertrófica condrocítica foi significativamente aumentada. Já no segundo experimento, 24 ratos começaram a receber diariamente ATV ou solução salina (SAL), via gavagem. Duas semanas mais tarde, a MDI foi iniciada. O deslocamento do dente foi medido após 7, 14 e 21 dias, enquanto que os cortes histológicos da maxila e do fêmur foram obtidos após 14 e 21 dias de MDI; sendo então submetidos às colorações de H&E e TRAP, para avaliação histomorfométrica e contagem de osteoclastos. A administração de atorvastatina gerou um menor movimento dentário (p <0,05) e uma redução transitória do número de osteoclastos (p <0,05). No grupo SAL, após 14 dias de MDI, ocorreu um aumento no número de osteoclastos, assim reduzindo a taxa de volume ósseo, quando comparado com as maxilas controle (sem movimento dentário), deste mesmo grupo. Contudo, tal comportamento não foi observado no grupo ATV. Interessantemente, depois de 35 dias, a atorvastatina não afetou a remodelação óssea nas maxilas controle, nem a ossificação endocondral em fêmures. Logo, guardando as devidas limitações deste estudo pré-clínico, nossos resultados sugerem que a administração sistêmica de atorvastatina é capaz de minimizar a MDI e recidiva ortodôntica. No entanto, os seus efeitos celulares sobre a ossificação endocondral e remodelação óssea durante a MDI e recidiva, parecem ser limitados a um curto período de tempo, o que aparentemente necessita de investigações futuras. Finalmente, nossos resultados lançam luz sobre a superexpressão OPG induzida por estatinas, o que representa um alvo molecular para modular o metabolismo do ósseo e, assim minimizar a recidiva ortodôntica. / Statins are drugs commonly prescribed for prevention of hyper-lipidemia. In addition to the cholesterol-lowering, these medicines seem to enhance osteogenesis and suppress bone resorption, which could affect orthodontic tooth movement (OTM) and relapse. Therefore, the aim of this study was to determine whether atorvastatin (ATV) might affect the orthodontic relapse or tooth movement and osteoclastogenesis, through the modulation of the following molecules: receptor activator of nuclear κ B ligand (RANKL) and; - osteoprotegerin (OPG). Furthermore, we analyzed potential adverse effects of ATV on long bone turnover and endochondral ossification. In the first experiment, 36 rats were subjected to OTM for 21 days, when the appliance was removed. After, the animals were administered daily with ATV (15mg/Kg) or saline (SAL), via gavage (n=18, per group). Up to 7, 14 and 21 days of ATV/SAL administration the tooth relapse was measured while maxillary and femur histologic sections were obtained and prepared to: - H&E staining – used in histomorphometric analysis, tartrate resistant acid phosphatase histochemical staining (TRAP) – used to osteoclasts counting and, immunohistochemistry to RANKL and OPG. Atorvastatin resulted in a decreased tooth relapse (p<0.05), and a transient reduction of osteoclasts number (p<0.05). There was a positive and significant correlation (p<0.01) between these two parameters (osteoclasts number and relapse rate). The statin administration increased significantly the OPG (p<0.01), but not the RANKL expression. Furthermore, after 21 days of ATV administration, the thickness of growth plate cartilage and chondrocytic hypertrophic zone was enhanced. In the second experiment, 24 rats started to be administered daily with ATV or SAL, via gavage. Two weeks later, the OTM started. The tooth displacement was measured after 7, 14, and 21 days, while the maxillary and femur histologic sections were obtained only after 14 and 21 days of OTM. At these times, the sections were prepared to H&E and TRAP, intending to perform the histomorphometric analysis and osteoclasts count. Atorvastatin administration promoted a decreased tooth movement (p<0.05), and a transient reduction of osteoclasts number (p<0.05). In the SAL group, after 14 days of OTM, the increased number of osteoclasts was associated to a reduced bone volume rate, when compared to its control maxillae. However, this trend was not obvious in ATV group. Interestingly, after 35 days, statins did not affect the bone turnover and endochondral ossification. The big picture of our study suggests that systemic administration of statins is able to minimize OTM and relapse. However, its cellular effects on endochondral ossification and bone turnover during OTM or relapse seem to be limited to a short period, apparently requiring further investigations. Finally, our results shed light on OPG overexpression induced by statins, which represents a molecular target modulating maxillary bone metabolism thus inhibiting orthodontic relapse.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-10Bitstream added on 2014-06-13T19:01:31Z : No. of bitstreams: 1 manfrin_tm_dr_araca.pdf: 3862156 bytes, checksum: dd6ccb05bd3012f8f38552fa7c669deb (MD5) / O sistema OPG, RANK e RANKL é uma das mais importantes descobertas da biologia óssea. Essas proteínas regulam as atividades celulares na remodelação do tecido ósseo e na literatura há diversas investigações nos tecidos dentários. No entanto, no reimplante dentário, ainda não foram encontrados relatos. Foi objetivo deste trabalho, avaliar a imunomarcação das proteínas OPG, RANK e RANKL em dentes reimplantados de rato. Um grupo controle foi formado com quatro ratos no qual o reimplante dentário não foi realizado. Vinte e quatro ratos (Rattus norvegicus, albinus) tiveram seu incisivo superior extraído e depois reimplantado formando os seguintes grupos: grupo I – reimplante imediato; grupo II - reimplante tardio sem tratamento e grupo III - reimplante tardio com tratamento endodôntico (ressecção da papila dentária e preenchimento do canal com pasta de hidróxido de cálcio) e tratamento da superfície radicular (raspagem mecânica do ligamento periodontal necrosado e imersão em solução de flúor fosfato acidulado de sódio a 2,5%). Ao final dos períodos experimentais (10 e 60 dias) os ratos foram eutanasiados. Foram obtidos cortes longitudinais parafinados com 6μm de espessura. Os cortes foram submetidos à reação imunoístoquímica mediante a utilização de anticorpos primários para OPG, RANK e RANKL. Os resultados mostraram que a imunomarcação de OPG e RANKL ocorreu em todos os grupos e períodos estudados, muito embora RANKL não tenha sido observada no grupo reimplante imediato aos 60 dias. RANK foi observada somente aos 10 dias de todos os grupos no qual o reimplante foi realizado. A análise qualitativa dos resultados demonstrou que o sistema OPG, RANK e RANKL apresentou marcação evidente no reimplante tardio, sugerindo a efetiva participação no início do processo de reabsorção radicular, uma vez que aos 60 dias a imunomarcação foi discreta. / The OPG, RANK and RANKL system is one of the most important discoveries in bone biology. These proteins are key regulators of bone remodeling and in the literature there are several studies of tooth resorption. However, in tooth replantation, reports have not been found. The purpose of this study was to determine the immunolabeling of OPG, RANK and RANKL in replanted teeth in rats, using immunohistochemistry methodology. A control group (no replanted teeth) was formed by four rats. Twenty-four rats (Rattus norvegicus, albinus) were submitted to the extraction of their upper right incisors. The replantation was performed according to the groups below: group I – immediate replantation; group II – delay replantation without treatment and group III – delay replantation with endodontic treatment (extirpation of papilla and the root canal filled with calcium hydroxide) and root surface treatment (periodontal ligament was removed with scalpel and teeth were immersed in 2% acidulated phosphate sodium fluoride). The animals were euthanized at the end of the experimental periods (10 and 60 days). Longitudinal 6μm slices embedded in paraffin were obtained. The slices were submitted to immunohistochemistry reaction by means of the primary antibodies for OPG, RANK and RANKL proteins. The results showed the expression of OPG in all groups and periods. RANKL expression was observed in all groups, except in the immediate replanted teeth group (60 days). RANK expression was observed only at 10 days in all groups which replantation was performed. The qualitative analysis of our findings indicated that the system OPG, RANK and RANKL presented strong expression in delayed replantation, suggesting effective participation at the beginning of root resorption, since at 60 days the immunostained cells were discreet.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-02Bitstream added on 2014-06-13T20:57:35Z : No. of bitstreams: 1 gualbertojunior_ec_me_araca_parcial.pdf: 636906 bytes, checksum: 30b5eac1385afd759fc12c6f7102d1ac (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:52Z: gualbertojunior_ec_me_araca_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:36Z : No. of bitstreams: 1 000620078.pdf: 2149145 bytes, checksum: f1633139b567f0389855aac6984d0cbc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar histológica, histometrica e imunoistoquimicamente os efeitos do laser (LLLT) e da terapia fotodinâmica (PDT) no tratamento periodontal de ratas ovariectomizadas com ou sem reposição hormonal. Duzentas e setenta ratas foram divididas em 3 grupos de 90 animais: (A) SHAM; (B) Ovariectomizadas; (C) Ovariectomizadas tratadas com reposição hormonal. Nos primeiros molares inferiores esquerdos, de todos os animais, a doença periodontal foi induzida por ligadura. Após 7 dias, esta foi removida e nestes dentes procedeu-se a raspagem e alisamento corono-radicular (RAR). A seguir foram dividos em subgrupos de acordo com os tratamentos locais: I (n = 90) - Irrigação com 1 ml de soro fisiológico (RAR); II (n = 90) - Irrigação com 1 ml de soro fisiológico associado a aplicação de laser de baixa intensidade (LLLT) e III (n = 90) - Irrigação com 1 ml de azul de toluidina-O e, após 1 minuto, aplicação de laser em baixa intensidade (PDT). Dez animais de cada subgrupo foram sacrificados aos 7, 15 e 30 dias. Os animais do grupo A apresentaram perda óssea (PO) significativamente maior (p<0,01) no tratamento com RAR (1.11±0.26; 0.84±0.47) comparado à PDT (0.70±0.30; 0.42±0.20) nos períodos de 7 e 15 dias respectivamente. Os espécimes tratados com LLLT aos 30 dias demonstraram PO significativamente menor (p<0,01) no grupo A (0.35±0.18) comparado aos grupos B (0.82±0.21) e C (0.83±0.19). No tratamento com PDT, observou-se PO significativamente menor (p<0,01) no grupo A (0.42±0.20) comparado aos grupos B (0.95±0.20) e C (0.81±0.32) aos 15 dias. No entanto, no grupo C aos 30 dias a PDT demonstrou PO (0.52±0.23) em nível próximo ao observado nos espécimes do grupo A, no mesmo período (0.50±0.26). Na análise entre períodos, no mesmo grupo e tratamento, observou-se no grupo A, que o tratamento I apresentou PO significativamente maior... / The aim of this study was to evaluate histological, histometrically and immunohistochemistry the influence of laser and photodynamic therapy (PDT) as an adjuvant treatment on the experimentally induced periodontitis in ovariectomy rats with or without replacement hormone. Two hundred and seventy females rats were divided into 3 groups of 90 animals. (A) Normal female rats; (B) Control - Ovarectomy; (C) Ovarectomy treated with replacement hormone. The periodontal disease was induced by ligation and after 7 days was removed and the animals divided into subgroups who received the treatments: I - scaling and root planing (SRP) and irrigation with saline; II – SRP and irrigation with saline solution and LLLT (Laser -AsGaAl - 685 nm); III - SRP, irrigation with 1ml of Toluidine Blue (TBO) and, after 1 minute, application of laser (685 nm), performing photodynamic therapy (PDT). Ten animals of each subgroup were sacrificed at 7, 15 and 30 days. The animals of the group A presented bony loss (BL) significantly larger (p <0,01) in the treatment with RAR (1.11±0.26; 0.84±0.47) compared to PDT (0.70±0.30; 0.42±0.20) at 7 and 15 days respectively. In the specimens treated with LLLT at 30 days showed BL significantly less (p <0,01) in the group A (0.35±0.18) compared at groups B (0.82±0.21) and C (0.83±0.19). In the treatment with PDT, it was observed BL significantly less (p <0,01) in the group A (0.42±0.20) than groups B (0.95±0.20) and C (0.81±0.32) at 15 days. However, in the group C at 30 days PDT showed BL (0.52±0.23) in close level that observed in the specimens of the group A, in the same period (0.50±0.26). In the analysis among periods, in the same group and treatment, it was observed in the group A, that the treatment I presented BL significantly larger (p <0,01) at 7 days (1.11±0.26); that the treatment II showed larger BL (p <0,01) in the period of 7 days (0.90±0.29)... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2015-10-22T17:34:42Z No. of bitstreams: 1 MaiaraDeMoraes_TESE.pdf: 4430780 bytes, checksum: 1f816fb63ca894e21d7bb94602ef5210 (MD5) / Approved for entry into archive by Elisangela Moura (lilaalves@gmail.com) on 2015-10-22T21:22:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MaiaraDeMoraes_TESE.pdf: 4430780 bytes, checksum: 1f816fb63ca894e21d7bb94602ef5210 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-22T21:22:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MaiaraDeMoraes_TESE.pdf: 4430780 bytes, checksum: 1f816fb63ca894e21d7bb94602ef5210 (MD5) Previous issue date: 2014-06-05 / Embora a terapia fotodin?mica venha sendo utilizada como uma ferramenta ?til nos ?ltimos 30 anos em oncologia, poucos estudos cl?nicos em odontologia t?m sido conduzidos. A terapia fotodin?mica (TFD) utiliza fotossensibilizantes at?xicos e seletivos que s?o administrados nas c?lulas alvo seguida de aplica??o local de luz vis?vel, produzindo esp?cies reativas de oxig?nio capazes de ocasionar morte celular por apoptose ou necrose, de afetar a vascularidade local, al?m de exercer importantes efeitos no sistema imune. Novas gera??es de f?rmacos fotossensibilizantes, como as ftalocianinas nanoparticuladas tem apresentado excelentes resultados na atividade antitumoral e antibacteriana. Neste contexto, o presente trabalho realizou o primeiro protocolo cl?nico de aplica??o local da nanoemuls?o de cloro-alum?nio ftalocianina (AlClFc) seguida de irradia??o em gengiva de humanos, e analisou descritiva e comparativamente, por meio de imunoistoqu?mica, a express?o de RANK, RANKL, OPG e VEGF em um modelo split-mouth. Oito volunt?rios saud?veis com indica??o cl?nica de exodontia foram inclu?dos no estudo. Sete dias antes da exodontia, foi aplicado na gengiva dos participantes, 5?M de nanoemuls?o de AlClFc seguida de irradia??o com laser diodo (660nm, 100J/cm2), o lado contralateral foi utilizado como controle. Os esp?cimes teciduais foram removidos sete dias ap?s a TFD e subdivididos em dois grupos (grupo teste e grupo controle) para an?lise histol?gica e imunoistoqu?mica. Os pacientes foram monitorados no dia aplica??o, 7, 14 e 30 dias ap?s a terapia para avalia??o de efeitos adversos da terapia. Altera??es vasculares foram observadas nas amostras gengivais que receberam a TFD. ?reas de edema e congest?o vascular, al?m de intensa vasculariza??o foram visualizadas. Adicionalmente, focos de calcifica??o distr?fica em regi?o subepitelial foram visualizados nos esp?cimes do grupo teste. Os resultados demonstraram um padr?o similar dos escores de imunomarca??o de RANK, RANKL e VEGF entre os grupos teste e controle, n?o havendo diferen?a estat?stica significante (p=0.317, p=0.777, p=.814, respectivamente). RANK e RANKL exibiram imunomarca??o fraca ou ausente em todos os esp?cimes analisados. N?o houve imunomarca??o para a OPG. O VEGF mostrou imunomarca??o moderada a forte nos esp?cimes do grupo teste. Adicionalmente, o estudo cl?nico mostrou que a terapia foi bem tolerada por todos os pacientes. Os efeitos adversos foram de curta dura??o e totalmente revers?veis. Tomados em conjunto, os resultados apresentados neste estudo mostraram que o protocolo da TFD mediada por nanoemuls?o contendo AlClFc ? segura para aplica??o cl?nica em tecido gengival e, sugerem uma forte imunomarca??o para o VEGF ap?s a terapia. / Although photodynamic therapy have been used as a useful tool over the past 30 years in oncology, few clinical trials have been conducted in dentistry. Photodynamic therapy (PDT) uses non - toxic photosensitizers and selective which are administered in target cells followed by local application of visible light, producing reactive oxygen species capable of causing cell death by apoptosis or necrosis, injured the local vasculature, and exert important effects on the im mune system. New generations of photosensitizing agents, such as nanoparticulate phthalocyanines, has shown excellent results in antitumor and antibacterial activity . In this context, the present work constitutes the first clinical protocol of local appli cation of nanoemulsion chloro - aluminum phthalocyanine (AlClFc) followed by irradiation in human gingiva, and analyzed descriptively and comparatively , by means of immunohistochemistry , the expression of RANK , RANKL , OPG and VEGF in a split - mouth model . Eight healthy volunteers with clinical indication for extraction were included in the study . Seven days before the extraction, was injected in the gingiva of participants, 5 ? M of nanoemulsion AlClFc followed by irra diation with diode laser (660nm , 7 J/cm2 ), the contralateral side was used as control. Tissue specimens were removed seven days after the TFD is performed. Tissues sample were divided into two groups (test and con trol groups) for histological and immunohistochemical analysis. Patients were monitored at days, 0, 7, 14 and 30 to assess adverse effects of the therapy. Vascular alterations were seen in gingival samples that received PDT. Areas of edema and vascular con gestion, and intense vascularization were viewed . Additionally, dystrophic calcification in subepithelial region were observed in the test group. The results showed a similar pattern of immunostaining scores of RANK, RANKL and VEGF between the test and co ntrol groups, with no statistically significant difference (p = 0.317, p = 0.777, p = 0 .814, respectively). RANK and RANKL exhibited weak or absent immunostaining in most specimens analyzed. There was n o immunostaining for OPG. VEGF showed moderate to stro ng immunostaining in specimens from the test group. In addition, the clinical study showed that therapy was well tolerated by all patients. Adverse effects were short - time and completely reversible. Taken together, the results presented in this study showe d that PDT mediated by nanoemulsion containing AlClPc is safe for clinical application in gingival tissue and suggests that a strong immunostaining for VEGF after therapy .

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-02-01T21:57:42Z No. of bitstreams: 1 ConceicaoAparecidaDornelasMonteiroMaia_TESE.pdf: 4715408 bytes, checksum: ce943e481eedb60a4a5cb2e44f04c0f6 (MD5) / Approved for entry into archive by Elisangela Moura (lilaalves@gmail.com) on 2016-03-07T23:10:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ConceicaoAparecidaDornelasMonteiroMaia_TESE.pdf: 4715408 bytes, checksum: ce943e481eedb60a4a5cb2e44f04c0f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-07T23:10:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ConceicaoAparecidaDornelasMonteiroMaia_TESE.pdf: 4715408 bytes, checksum: ce943e481eedb60a4a5cb2e44f04c0f6 (MD5) Previous issue date: 2014-08-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / O sistema RANK/RANKL/OPG contribui para a compreens?o do processo e regula??o da forma??o e reabsor??o do osso, tendo sido o maior avan?o na biologia ?ssea com rela??o a osteoclastog?nese. RANKL e OPG inibem RANK regulando a forma??o, ativa??o e sobreviv?ncia de osteoclastos na remodela??o ?ssea. O objetivo desse estudo foi investigar a express?o dos marcadores RANKL/RANK/OPG em dentes de ratos reimplantados, bem como observar a rela??o entre a express?o desses marcadores com o processo de reabsor??o dent?ria e ?ssea. Foram utilizados 30 incisivos superiores direitos de 30 ratos machos, adultos, da linhagem Wistar (Rattus norvegicus albinus). Os dentes foram avulsionados e divididos em dois grupos que permaneceram extra-alveolar em ar seco: G1 (n=15) - 5 minutos e G2 (n=15) - 60 minutos, e em seguida foram reimplantados e analisados nos intervalos de 1, 3 e 7 dias. Finalizado os per?odos experimentais, ocorreu a eutan?sia dos animais. Cortes longitudinais com 5?m de espessura foram obtidos e corados pela t?cnica H/E para a an?lise histol?gica e cortes com 3?m de espessura foram submetidos ? rea??o imuno-histoqu?mica mediante a utiliza??o de anticorpos prim?rios para ratos como OPG, RANK e RANKL. Os resultados demonstraram que o sistema RANK/RANKL/OPG participa ativamente, tanto do processo de reparo de dentes de ratos reimplantados, quanto das reabsor??es dent?rias e ?sseas; que RANKL apresentou maior imunomarca??o em ambos os grupos, participando em todas as fases da reabsor??o ?ssea e dent?ria; e o aumento da express?o de RANKL foi observada em ambos os grupos em todos os intervalos de tempo, comprovando que a resposta inflamat?ria no ligamento periodontal ocorre no in?cio do processo de reparo; e que a fraca express?o de RANK e OPG e o aumento da express?o de RANKL sugere uma diminui??o da reabsor??o ativa e aumento da reabsor??o reparada no osso e no cemento, sendo maior no osso. / The RANK / RANKL / OPG sy stem plays an important role in bone formation and resorption . This finding has been regarded as one of the m ost important advances in the understanding of bone biology with respect to osteoclastogenesis. The aim of this study was to investigate the expression of RANKL / RANK / OPG markers in reimplanted t eeth of rats, and to observe the relationship between the expression of these markers and to oth and bone resorption. Thirty male Wistar rats (Rattus norvegicus albinos) had their maxillary right incisors extrac ted , and were divided into 2 groups according to the period that the extracted teeth were kept in dry air before reimplantation : G1 (n = 15) - 5 minutes , and G2 (n = 15) - 60 minutes . After reimplantation, teeth were analyzed at intervals of 1, 3 and 7 da ys. After these experimental periods, the animals were euthanized. Longitudinal sections with 5?m thick were obtained and stained with Hematoxylin and Eosin for histological analysis , while 3?m thick sections were subjected to immunohistochemical analysis of OPG , RANK and RANKL. The results showed that the RANK / RANKL / OPG system actively participates in both the repair process, as well as tooth and bone resorption . Extr a - alveolar time of 60 minutes before replantation caused minor expressions of RANKL a nd OPG, not influencing the expression of RANK; RANKL immunostaining showed higher in both groups when compared to other biomarkers, participating in all phases of bone and tooth resorption; RANKL was associated to both osteoclastogenesis and c ell ular proliferation , and was expressed in both groups.

As estatinas são medicamentos comumente prescritos para a prevenção da hiper-lipidemia. Além da redução do colesterol, tais medicamentos parecem estimular a osteogênese e suprimir a reabsorção óssea, o que poderia afetar a movimentação dentária induzida (MDI) e a recidiva ortodôntica. Assim, o objetivo deste estudo foi determinar se a atorvastatina (ATV) pode afetar a MDI, a recidiva e a osteoclastogênese, por meio da modulação da expressão das moléculas: - ligante do receptor ativador de NFκB (RANKL) e osteoprotegerina (OPG). Ainda foram analisados os potenciais efeitos adversos da ATV sobre a ossificação endocondral e sobre o turnover de ossos longos. No primeiro experimento, 36 ratos foram sujeitos a MDI durante 21 dias, quando o aparelho foi removido. Aos animais, foram administrados, diariamente, ATV ou solução salina (SAL), via gavagem. Após 7, 14 e 21 dias de administração de ATV / SAL, a recidiva dentária foi mensurada, e foram obtidos os cortes histológicos da maxila e fêmur, os quais foram submetidos às seguintes colorações: - H&E – para análise histomorfométrica; - fosfatase acida tartrato resistente (TRAP) – para contagem de osteoclastos e; - imunohistoquímica para RANKL e OPG. A atorvastatina resultou numa inibição da recidiva ortodôntica (p < 0,05), e numa transiente redução do número de osteoclastos (p < 0,05); havendo uma correlação positiva e significativa (p < 0,01) entre o estes dois fatores (número de osteoclastos e a taxa de recidiva). A administração de estatinas também aumentou significativamente a expressão de OPG (p < 0,01), mas não a de RANKL. Além disso, após 21 dias de administração de ATV, a espessura da cartilagem da placa de crescimento e da zona hipertrófica condrocítica foi significativamente aumentada. Já no segundo experimento, 24 ratos começaram a receber diariamente ATV ou solução salina (SAL), via gavagem. Duas semanas mais tarde, a MDI foi iniciada. O deslocamento do dente foi medido após 7, 14 e 21 dias, enquanto que os cortes histológicos da maxila e do fêmur foram obtidos após 14 e 21 dias de MDI; sendo então submetidos às colorações de H&E e TRAP, para avaliação histomorfométrica e contagem de osteoclastos. A administração de atorvastatina gerou um menor movimento dentário (p <0,05) e uma redução transitória do número de osteoclastos (p <0,05). No grupo SAL, após 14 dias de MDI, ocorreu um aumento no número de osteoclastos, assim reduzindo a taxa de volume ósseo, quando comparado com as maxilas controle (sem movimento dentário), deste mesmo grupo. Contudo, tal comportamento não foi observado no grupo ATV. Interessantemente, depois de 35 dias, a atorvastatina não afetou a remodelação óssea nas maxilas controle, nem a ossificação endocondral em fêmures. Logo, guardando as devidas limitações deste estudo pré-clínico, nossos resultados sugerem que a administração sistêmica de atorvastatina é capaz de minimizar a MDI e recidiva ortodôntica. No entanto, os seus efeitos celulares sobre a ossificação endocondral e remodelação óssea durante a MDI e recidiva, parecem ser limitados a um curto período de tempo, o que aparentemente necessita de investigações futuras. Finalmente, nossos resultados lançam luz sobre a superexpressão OPG induzida por estatinas, o que representa um alvo molecular para modular o metabolismo do ósseo e, assim minimizar a recidiva ortodôntica. / Statins are drugs commonly prescribed for prevention of hyper-lipidemia. In addition to the cholesterol-lowering, these medicines seem to enhance osteogenesis and suppress bone resorption, which could affect orthodontic tooth movement (OTM) and relapse. Therefore, the aim of this study was to determine whether atorvastatin (ATV) might affect the orthodontic relapse or tooth movement and osteoclastogenesis, through the modulation of the following molecules: receptor activator of nuclear κ B ligand (RANKL) and; - osteoprotegerin (OPG). Furthermore, we analyzed potential adverse effects of ATV on long bone turnover and endochondral ossification. In the first experiment, 36 rats were subjected to OTM for 21 days, when the appliance was removed. After, the animals were administered daily with ATV (15mg/Kg) or saline (SAL), via gavage (n=18, per group). Up to 7, 14 and 21 days of ATV/SAL administration the tooth relapse was measured while maxillary and femur histologic sections were obtained and prepared to: - H&E staining – used in histomorphometric analysis, tartrate resistant acid phosphatase histochemical staining (TRAP) – used to osteoclasts counting and, immunohistochemistry to RANKL and OPG. Atorvastatin resulted in a decreased tooth relapse (p<0.05), and a transient reduction of osteoclasts number (p<0.05). There was a positive and significant correlation (p<0.01) between these two parameters (osteoclasts number and relapse rate). The statin administration increased significantly the OPG (p<0.01), but not the RANKL expression. Furthermore, after 21 days of ATV administration, the thickness of growth plate cartilage and chondrocytic hypertrophic zone was enhanced. In the second experiment, 24 rats started to be administered daily with ATV or SAL, via gavage. Two weeks later, the OTM started. The tooth displacement was measured after 7, 14, and 21 days, while the maxillary and femur histologic sections were obtained only after 14 and 21 days of OTM. At these times, the sections were prepared to H&E and TRAP, intending to perform the histomorphometric analysis and osteoclasts count. Atorvastatin administration promoted a decreased tooth movement (p<0.05), and a transient reduction of osteoclasts number (p<0.05). In the SAL group, after 14 days of OTM, the increased number of osteoclasts was associated to a reduced bone volume rate, when compared to its control maxillae. However, this trend was not obvious in ATV group. Interestingly, after 35 days, statins did not affect the bone turnover and endochondral ossification. The big picture of our study suggests that systemic administration of statins is able to minimize OTM and relapse. However, its cellular effects on endochondral ossification and bone turnover during OTM or relapse seem to be limited to a short period, apparently requiring further investigations. Finally, our results shed light on OPG overexpression induced by statins, which represents a molecular target modulating maxillary bone metabolism thus inhibiting orthodontic relapse.