Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 425543.pdf: 747447 bytes, checksum: 25a6005ed4d57ac7cb87a5a7d22ed8de (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / O envelhecimento est? associado com o decl?nio progressivo nas fun??es do sistema imunol?gico (imunosenesc?ncia), tanto na imunidade humoral quanto na imunidade mediada por c?lulas, resultando em maior suscetibilidade a infec??es e c?ncer, al?m da diminui??o na capacidade de responder a vacinas. As c?lulas dendr?ticas (DCs) s?o as mais poderosas e eficientes apresentadoras de ant?genos (APC), desempenhando um papel primordial na apresenta??o e conseq?ente resposta imune mediada por c?lulas T. Poucos estudos enfocam a atividade das c?lulas dendr?ticas no envelhecimento, sendo que a maioria dos dados s?o relativos ?s fun??es das c?lulas T. As intera??es entre as c?lulas dendr?ticas e as c?lulas T afetam o processamento e consequente apresenta??o de ant?genos, influenciando a efetividade das respostas imunes mediadas por c?lulas T. Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade estimulat?ria de c?lulas dendr?ticas de camundongos velhos em uma resposta espec?fica T CD4+ comparada ? resposta imune de camundongos jovens. Para isso, c?lulas T de camundongos transg?nicos TEa, espec?ficas para o complexo Ea:IAb foram transferidas para camundongos normais C57Bl/6, c?lulas T de camundongos jovens para animais velhos e jovens, e c?lulas T de camundongos velhos para animais velhos e jovens. Os resultados demonstram que, ap?s imuniza??o com o ant?geno EaRFP, tanto as c?lulas T jovens quanto as c?lulas T velhas foram estimuladas de modo semelhante por c?lulas dendr?ticas jovens. Contudo, c?lulas dendr?ticas de animais velhos n?o foram capazes de estimular suficientemente as c?lulas T de animais velhos nem mesmo as c?lulas T de animais jovens. Enquanto ambas as c?lulas T, jovens e velhas, adquiriram o fen?tipo CD44+ quando transferidas para os animais jovens, c?lulas T jovens transferidas para animais velhos n?o adquiriram o mesmo fen?tipo. Esse fato sugeriu que c?lulas dendr?ticas de animais velhos possuem baixa capacidade de estimular c?lulas T, mesmo que essas c?lulas venham de um animal jovem. N?s hipotetizamos que esse resultado poderia estar ligado a um n?mero extremamente diminu?do de c?lulas dendr?ticas nos animais velhos, ou ainda em uma defici?ncia em um dos sinais fornecidos pelas c?lulas dendr?ticas no priming de linf?citos T (apresenta??o de ant?geno ou sinais coestimulat?rios). O n?mero total de c?lulas dendr?ticas foi significativamente menor em camundongos velhos comparado a camundongos jovens. Al?m disso, o n?mero de c?lulas apresentando ant?geno foi menor no linfonodo drenante de animais velhos, e a express?o de CD86 por c?lulas dendr?ticas de animais velhos n?o foi diferente da dos animais jovens. Os resultados sugerem que a diminui??o da capacidade de apresenta??o de ant?geno apresentada no envelhecimento ? cr?tica para a perda do potencial estimulat?rio de c?lulas T CD4+ por c?lulas dendr?ticas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 449080.pdf: 1184660 bytes, checksum: f918d3fc3af9f13cf34642a6c280de6f (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / The rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease, besides the physical damage, the RA has been associated with premature aging of the immune system (immunosenescence) and age-related morbidities, including a decline in cognitive functioning. Factors such as chronic inflammation and the use of glucocorticoids (GCs) for a long time, both related to RA, are potential mechanisms involved in cognitive dysfunction in the general population. Experimental studies have shown the beneficial contribution of immune cells on the central nervous system (CNS). Moreover, disorders, such as mild cognitive impairment and Alzheimer s disease, exhibit alterations in peripheral lymphocytes subtypes. Based on this, here we explore the relationship between cognitive function, disease activity score (DAS-28) and lymphocytes subsets in RA. Thirty patients with RA and 19 healthy controls, which did not differ significantly in sex, age and schooling were recruited in this study. Cognitive function (MMSE, logic and working memory), stress and depression were assessment through interviews where specific clinical questionnaires were applied. Lymphocytes were isolated from mononuclear cells of peripheral blood (PBMCs) and immuphenotyped by flow cytometry to investigate the following lymphocytes subsets: B cells, activated T cells, na?ve/memory T cells, regulatory FoxP3+ T cells, IL-17+ cells, natural killer (NK) cells, and senescence-associated CD28- T cells. RA patients had a lower cognitive performance on the MMSE, logical and working memory compared to healthy controls. Though, all individuals in both groups had a score higher than the cutoff point established by the MMSE. The time use of GC and the C-reactive protein (CRP) levels did not correlated with cognitive assessment. Patients had an increased proportions of regulatory T cells, na?ve CD4+ T cells and senesce-associated T cells (CD28-), but lowered percentages of B and memory CD8+ T cells compared to healthy controls. Early activated T cells (CD3+CD69+) and CD8+CD28- T cells were found negatively associated with cognition. Concluding, patients with RA have a lower cognitive performance compared to healthy controls. GC and CRP were not correlated with memory; however expansions of activated and senescence-associated T cells were correlated with poor memory performance. / A artrite reumatoide (AR) ? uma doen?a autoimune, que al?m da presen?a de danos f?sicos, tem sido associada com o envelhecimento prematuro do sistema imune (imunossenesc?ncia) e morbidades relacionadas ? idade, incluindo decl?nio no funcionamento cognitivo. Fatores como a inflama??o cr?nica e o uso de glicocorticoides (GCs), ambos relacionados a AR, s?o potenciais mecanismos envolvidos com a disfun??o cognitiva na popula??o geral. Estudos experimentais tem revelado a contribui??o ben?fica das c?lulas imunol?gicas sobre o sistema nervoso central (SNC). Al?m disto, patologias como o dano cognitivo leve e doen?a de Alzheimer apresentam altera??es nos subtipos linfocit?rios perif?ricos. Com base nisto, neste trabalho nos exploramos as rela??es entre fun??o cognitiva, score de atividade da doen?a (DAS-28), e subtipos linfocit?rios na AR. Trinta pacientes com AR e dezenove controles saud?veis, que n?o diferiram significativamente em rela??o a sexo, idade e escolaridade, foram recrutados neste estudo. A fun??o cognitiva (mini-exame do estado mental - MMSE, mem?ria l?gica e mem?ria de trabalho), estresse e depress?o foram avaliados atrav?s de entrevistas onde foram aplicados question?rios cl?nicos espec?ficos. Os linf?citos foram isolados das c?lulas mononucleares do sangue perif?rico (PBMCs), e imunofenotipados por citometria de fluxo para investigar a presen?a dos seguintes subgrupos: c?lulas B, c?lulas T ativadas, c?lulas T naive/mem?ria, c?lulas T regulat?ria (reg) CD4+FoxP3+, c?lulas IL-17+, c?lulas natural killer (NK), e c?lulas T CD28- associadas a senesc?ncia. Os pacientes com AR tiveram um desempenho cognitivo inferior no MMSE, mem?ria l?gica e mem?ria de trabalho se comparado a controles saud?veis. Embora todos os indiv?duos, de ambos os grupos, tiveram uma pontua??o superior ? estabelecida pelo cutoff do MMSE. O tempo de uso de GCs e os n?veis de prote?na C - reativa (PCR) n?o se correlacionaram com avalia??o cognitiva. Os pacientes tem aumento nas propor??es de c?lulas Treg, c?lulas T CD4+ naive e c?lulas T associadas a senesc?ncia (CD28), mas baixas porcentagens de c?lulas B e c?lulas T CD8+ de mem?ria do que controles saud?veis. C?lulas T rec?m ativadas e c?lulas T CD8+CD28- foram negativamente associadas com a cogni??o. Concluindo, pacientes com AR tem um desempenho cognitivo inferior se comparado a controles saud?veis. GCs e PCR n?o se correlacionaram com mem?ria, no entanto, expans?o da popula??o de c?lulas T ativadas e c?lulas T associadas ? senesc?ncia foram correlacionadas com performance de mem?ria.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 449724.pdf: 6148140 bytes, checksum: 12da4cf8a6d912387d56ee8f32c58f7b (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / The irritant contact dermatitis (ICD) is a non-allergic inflammatory reaction of the skin that occurs independently of the T cells participation. ICD is caused by exposure to low molecular weight chemicals and it is initiated by damage or activation of epidermal cells which trigger the activation of the innate immune system. The purine nucleotide adenosine triphosphate (ATP) is the universal energy molecule and appears as is an important extracellular messenger. In healthy tissues, ATP is almost exclusively localized intracellularly, whereas in pathological conditions as inflammation, the tissue injury leads to the release of large amounts of ATP to the extracellular medium. In the extracellular medium, ATP can be hydrolyzed by nucleotidases to their breakdown products ADP and AMP. These nucleotidases control the availability of nucleotides for purinergic receptors. Currently, experimental observations indicate that extracellular ATP acting via purinergic receptors plays a relevant role on skin inflammation. Several models in vitro and in vivo had been used to study the mechanisms of ICD. However, this pathology is still poor understood. This study aimed to evaluate the involvement of the purinergic receptor P2X7 in ICD using in vivo and in vitro approaches. The croton oil (CrO) is a chemical irritant that has been shown to exert its effects independent of inflammatory T cells, therefore we used the mice model of irritant contact dermatitis induced by CrO to investigate the involvement of P2X7 receptor in the immunes mechanisms of ICD. We use several pharmacological approaches, in vitro and in vivo tests and mice with gene deletion to P2X7 receptor and showed evidences that the P2X7 receptor activation by ATP in macrophages and dendritic cells (DCs) is connected with neutrophil recruitment induced by CrO. Furthermore, we demonstrated that CrO decreased the hydrolysis of ATP and ADP in the serum of mice and caused necrosis of keratinocytes in culture, both effects related to activation of P2X7. Taken together, the data obtained in this study suggested that CrO exerts its toxic effects by promoting keratinocytes necrosis and decreasing the activity of ectonucleotidades leading to an increase of ATP extracellular levels. Then, extracellular ATP promotes the P2X7 receptor activation in DCs and macrophages causing the release of IL-1β, which is partially responsible for the neutrophils recruitment observed in irritant contact dermatitis induced by croton oil. Noteworthy, the treatment with the selective P2X7 receptor antagonist A438079 decreased the edema and others proinflammatory effects induced by croton oil, pointing the P2X7 receptor as an important pharmacological target for the treatment of ICD. / A dermatite de contato irritante (ICD, irritant contact dermatitis) ? uma rea??o inflamat?ria local n?o al?rgica da pele que ocorre independentemente da participa??o de c?lulas T. ? ocasionada pela exposi??o a subst?ncias qu?micas de baixo peso molecular e acredita-se que seja iniciada por dano ou ativa??o de c?lulas epidermais que desencadeiam a ativa??o do sistema imune inato. O nucleot?deo ATP ? uma mol?cula energ?tica que desempenha importantes fun??es como mensageiro extracelular. Em tecidos saud?veis, o ATP est? localizado quase exclusivamente no meio intracelular, entretanto quando ocorre inj?ria tecidual, grandes quantidades de ATP s?o liberadas para o meio extracelular. No meio extracelular, o ATP pode ser hidrolisado por nucleotidases gerando ADP e AMP. As nucleotidases controlam a disponibilidade do ATP para os receptores purin?rgicos. Muitas observa??es experimentais t?m indicado que o ATP atuando via receptores purin?rgicos desempenha um papel preponderante em processos inflamat?rios na pele. V?rios modelos in vitro e in vivo t?m sido utilizados para o estudo da ICD, entretanto a fisiopatologia da doen?a ainda ? pouco conhecida. Este estudo teve como objetivo avaliar o envolvimento do receptor purin?rgico P2X7 (P2X7R) na ICD utilizando abordagens in vivo e in vitro. O ?leo de cr?ton (CrO) ? um irritante qu?mico que tem mostrado exercer seus efeitos inflamat?rios independente de c?lulas T, portanto n?s utilizamos o modelo de dermatite de contato irritante induzida por CrO em camundongos para investigar o envolvimento do receptor P2X7 nos mecanismos imunopatol?gicos da ICD. Atrav?s da utiliza??o de diversas abordagens farmacol?gicas in vitro e in vivo e do uso de camundongos com dele??o g?nica para o receptor P2X7, n?s primeiramente mostramos evid?ncias de que a ativa??o do P2X7R por ATP em macr?fagos e c?lulas dendr?ticas (DCs) est? relacionada com o recrutamento de neutr?filos induzido por CrO. Al?m disso, foi demonstrado que o CrO decresce a hidr?lise de ATP e ADP no soro de camundongos e provoca a necrose de queratin?citos em cultura, ambos os efeitos foram relacionados com a ativa??o do receptor P2X7. Portanto, a partir dos dados obtidos neste estudo, n?s sugerimos que o ?leo de croton exerce seus efeitos t?xicos promovendo a morte celular de queratin?citos, diminuindo a atividade de ectonucleotidades e aumentando os n?veis extracelulares de ATP. O ATP extracelular, via ativa??o de P2X7R em DCs e macr?fagos, provoca a libera??o de IL-1β que ? parcialmente respons?vel pelo recrutamento de neutr?filos observado na dermatite de contato irritante induzida por ?leo de cr?ton. Digno de nota, o tratamento com o antagonista seletivo do receptor P2X7, A438079, diminuiu o edema e outros efeitos pr?-inflamat?rios induzidos pelo ?leo de cr?ton, apontando o receptor P2X7 como um alvo farmacol?gico importante para o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento da ICD.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaLDLA_DISSERT.pdf: 3287914 bytes, checksum: 244a318f2c60d05b41aef3b1d3d6d2a0 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Periapical lesions are chronic inflammatory conditions of periradicular tissues considered direct consequences of infectious diseases resulting from pulp necrosis and subsequent progression to periapical region. The participation of the immune response and bone resorption in the formation of these lesions has been investigated, so that different cell types and cytokines have been identified as contributors to this process. In this perspective, this study aimed to evaluate the immunohistochemical expression of IL-17, TGF-?1 and FoxP3 in periapical granulomas (PGs), radicular cysts (RCs) and residual radicular cysts (RRCs), seeking a better understanding of the etiopathogenesis these periapicopatias. To this end, we selected 20 cases of GPs, 20 CRs and 10 RRCs to undergo morphological analysis and immunohistochemistry for biomarkers above, the latter being performed quantitatively using scores and average percentages of immunostaining for the analysis of IL-17 and TGF- ?1, while for the FoxP3 were counted only the positive lymphocytes. The results showed statistically significant differences between TGF-?1 and FoxP3 imunoexpressions, in relation to the periapical lesions studied (p = 0.002, p <0.001, respectively) but not between IL-17 and these (p = 0.355). Furthermore, the analysis of lymphocytes FoxP3-positive revealed significant statistical differences in that refers to the intensity of inflammatory infiltrate (p = 0.003) and also regarding thickness of the epithelial lining (p = 0.009). Finally, it was observed in the case of PGs, strong positive correlation between the amount of FoxP3- positive lymphocytes and the immunohistochemical expression of TGF-?1 (r = 0.755, p<0.001), as well as moderate positive correlation between IL-17 and TGF-?1 imunoexpressions (r = 0.503, p = 0.024). Thus, we can conclude that interactions between Th17 and Treg cells seem to be established at the site of injury, suggesting the involvement of both pro-inflammatory and immunoregulatory cytokines in the pathogenesis of periapical lesions / Les?es periapicais cr?nicas s?o condi??es inflamat?rias dos tecidos perirradiculares consideradas sequelas diretas de processos infecciosos resultantes da necrose pulpar e consequente progress?o para a regi?o periapical. A participa??o da resposta imunol?gica e da reabsor??o ?ssea na forma??o destas les?es tem sido bastante investigada, de modo que diversos tipos celulares e citocinas foram apontados como colaboradores deste processo. Nesta perspectiva, o presente estudo objetivou avaliar a express?o imuno-histoqu?mica da IL- 17, TGF-?1 e FoxP3 em granulomas periapicais (GPs), cistos radiculares (CRs) e cistos radiculares residuais (CRRs), buscando um melhor entendimento sobre a etiopatog?nese destas periapicopatias. Para tanto, foram selecionados 20 casos de GPs, 20 de CRs e 10 de CRRs para serem submetidos ? an?lise morfol?gica e imuno-histoqu?mica para os biomarcadores supracitados, sendo esta ?ltima realizada quantitativamente atrav?s de escores e percentuais m?dios de imunomarca??o para a an?lise da IL-17 e do TGF-?1, enquanto que para o FoxP3 foram contados apenas os linf?citos positivos. Os resultados demonstraram diferen?as estatisticamente significativas entre as imunoexpress?es do TGF-?1 e do FoxP3 em rela??o as les?es periapicais pesquisadas (p = 0,002; p < 0,001, respectivamente), mas n?o entre a IL-17 e estas (p = 0,355). Al?m disso, a an?lise dos linf?citos FoxP3-positivos revelou diferen?as estat?sticas significativas no que se refere ? intensidade do infiltrado inflamat?rio (p = 0,003) e tamb?m quanto ? espessura do revestimento epitelial (p = 0,009). Por fim, observou-se nos casos de GPs, forte correla??o positiva entre a quantidade de linf?citos FoxP3-positivos e a imunoexpress?o do TGF-?1 (r = 0,755; p < 0,001), assim como moderada correla??o positiva entre as imunoexpress?es da IL-17 e do TGF-?1 (r = 0,503; p = 0,024). Destarte, pode-se concluir que intera??es entre c?lulas Th17 e Treg parecem ser estabelecidas no local da agress?o, sugerindo a participa??o de citocinas tanto pr?inflamat?rias como imunorregulat?rias na patogenia das les?es periapicais

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JanainaCL.pdf: 1946389 bytes, checksum: 9edf9a3e8f8e033293bf82a3b2344d4d (MD5) Previous issue date: 2009-02-28 / Host response plays a major role in the pathogenesis of periodontal disease. Mediators such as inflammatory cytokines which are secreted during the immune response to bacterial challenges have ambiguous functions that may or may not lead to protection of the attacked tissue. In this context, experimental evidence suggests that T-helper 1 (Th-1) and T-helper 2 (Th-2) mediated responses are potentially important during the disease process. The aims of this study therefore were to further clarify the role played by Th2 cells during different time points of the active phase of periodontal disease, as well as, to investigate whether there was any evidence of a Th1 response in the periodontal disease microenvironment. Experimental periodontitis was induced in 30 Wistar male rats by placing cotton ligatures around the mandibular first molars. The rats were then randomly divided into two groups. Group1 (G1=15) and Group 2 (G2=15). In G1 the ligatures were maintained for 2 days, whereas in G2 the ligatures were left for 15 days, a time point that corresponds to the advanced stage of periodontal disease The contra-lateral teeth served as controls (no ligatures). Immunohistochemical investigation for the presence in gingival tissue of Th2 specific transcription factor (GATA3) and the subunit of the IFN-&#947; receptor was carried out after the disease induction period. Light microscopy analysis revealed a decrease in the expression of GATA-3 as bone loss progressed. On the other hand, although IFN-&#947; R1 was detected at an early stage of the active phase of disease its expression remained unaltered during the remaining period of the study. These results indicate that the Th2 response have a protective role during the pathogenesis of periodontal disease and that the progression of the periodontal disease is related with the unbalance of the responses Th1/Th2 / A resposta do hospedeiro tem um importante papel na patog?nese da doen?a periodontal. Mediadores como as citocinas liberadas por c?lulas inflamat?rias durante a resposta imune, frente a um ataque bacteriano, desempenham pap?is antag?nicos que podem culminar com a prote??o ou n?o do tecido agredido, o que fundamenta o paradigma da resposta Th1/Th2 na doen?a periodontal. Na tentativa de esclarecer a participa??o das c?lulas Th2, em diferentes tempos, na fase ativa da doen?a periodontal, bem como observar se o microambiente encontrava-se preparado para uma resposta Th1, induziu-se doen?a periodontal experimental em 30 ratos Wistar machos, atrav?s da coloca??o de ligaduras de algod?o ao redor dos primeiros molares mandibulares. Os animais foram divididos, aleatoriamente, em dois grupos: Grupo 1 (G1 = 15) e Grupo 2 (G2 = 15). Em G1 as ligaduras foram mantidas por 2 dias, que configurou o est?gio inicial da doen?a periodontal e no G2, as ligaduras foram mantidas por 15 dias, que foi considerado o est?gio avan?ado da doen?a periodontal. Os dentes contralaterais serviram de controle (sem ligaduras). Avalia??o imuno-histoqu?mica para o fator de transcri??o espec?fico para c?lula Th2 (GATA-3) e da subunidade IFN- &#947; R1 do receptor para IFN-&#947; (principal citocina da resposta Th1) foram avaliados nos tecidos gengivais dos ratos ap?s o per?odo de indu??o da doen?a. Ap?s an?lise microsc?pica observamos que o fator de transcri??o GATA-3 teve sua express?o diminu?da com o avan?o da perda ?ssea induzida e a subunidade IFN-&#947; R1 passou a se expressar na fase ativa da doen?a experimental, contudo n?o se alterou com a progress?o da destrui??o tecidual. Estes resultados indicam que a resposta Th2 pode estar associada a uma resposta protetora na patog?nese da doen?a periodontal e que a progress?o da doen?a periodontal est? relacionada com o desequil?brio das respostas Th1/Th2