Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-13T16:46:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Heidiane Alves dos Santos.pdf: 1654611 bytes, checksum: d1c1496a80a371c6d05868103f946b63 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-13T16:46:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Heidiane Alves dos Santos.pdf: 1654611 bytes, checksum: d1c1496a80a371c6d05868103f946b63 (MD5) / A linfadenite caseosa é uma doença infecto-contagiosa crônica, de ocorrência mundial que acomete pequenos ruminantes, causando grandes perdas econômicas. Esta doença tem como agente etiológico a bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis e caracteriza-se pela formação de granulomas em gânglios linfáticos superficiais, podendo também acometer órgãos e linfonodos internos, como forma de resposta do sistema imune do hospedeiro à penetração deste agente que resiste a ação bactericida das células fagóciticas. Este patógeno se relaciona filogeneticamente ao Mycobacterium tuberculosis. A avaliação da resposta imune é uma importante ferramenta para localização de animais possivelmente infectados, dificultando desta forma a disseminação do agente. Estudos têm demonstrado a importância de citocinas na defesa de patógenos intracelulares facultativos, inclusive para C. pseudotuberculosis, destacando-se o interferon-gama (IFN-) citocina característica de células Th1, que pode está envolvida na proteção à patógenos intracelulares. O presente estudo avaliou aspectos da resposta imunológica de camundongos da linhagem C57Black/6 selvagem e knockout para IFN-gama, durante a infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis. Os grupos foram acompanhados ao longo de 7 e 14 dias após infecção intraperitoneal com 107 UFC, durante os quais foram avaliados a disseminação bacteriana, a frequência de granulomas, a variação de peso do baço, o padrão de migração celular para a cavidade peritoneal, além da resposta imune humoral através da dosagem de IgG e subclasses e resposta imune celular através da dosagem de citocinas e imunofenotipagem. Os camundongos knockout para IFN-gama se mostraram mais susceptíveis à infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis apresentando maior disseminação bacteriana nos linfonodos mesentéricos, maior frequência de granulomas, aumento considerável no peso do baço, intensa migração celular para a cavidade peritoneal, principalmente neutrófilos e macrófagos e expressão de linfócitos T CD8+ nas células esplênicas, e consequentemente menor expressão de citocinas pró-inflamatórias e regulatórias. Estes achados apontam para a importância do IFN-γ na resposta imune a patógenos intracelulares a exemplo de C. pseudotuberculosis, ao tempo em que demonstra a resposta deficiente do sistema imune dos animais nocauteados à infecção. / Salvador

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Antonio Carlos Paes / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Adolfo Carlos Barreto Santos / Banca: Rogério Giuffrida / Resumo: A linfadenite infecciosa em suínos representa uma das afecções mais preocupantes na criação de suínos em todo mundo, causada por patógenos de origem bacteriana, geralmente diagnosticada na linha de abate. Acarreta prejuízos econômicos com a condenação total ou parcial das carcaças, bem como reflexos em saúde pública, devido ao potencial zoonótico dos agentes causais. O presente estudo investigou a ocorrência e as principais espécies do gênero Mycobacterium, assim como marcadores de virulência plasmidial em linhagens de Rhodococcus equi (R. equi) isoladas de linfonodos e das fezes de suínos de abatedouros do interior do estado de São Paulo, com e sem linfadenite. Foram examinados 150 linfonodos (50 mesentéricos, 50 mediastínicos e 50 submandibulares) com lesões, 150linfonodos (50 mesentéricos, 50 mediastínicos e 50 submandibulares) sem lesões aparentes e 150 fezes de suínos, provenientes de animais destinados ao abate, em dois frigoríficos do interior do estado de São Paulo. As amostras de linfonodos e fezes foram submetidas ao cultivo microbiológico simultaneamente nos meios de ágar acrescido de sangue bovino (5%) desfibrinado, e meios seletivos de CAZ-NB, TCP e TVP para R. equi, e Stonebrink-Lesslie e Lowenstein-Jensen para micobactérias. As colônias sugestivas de R. equi e positivas no teste de CAMP, foram enviadas ao Japão para detecção de linhagens VapA ou VapB, associadas a virulência. As linhagens sugestivas no cultivo microbiano para o gênero Mycobacterium foram submetidas a caracterização de espécies por PCR pela técnica de PRA. Foram identificados nos linfonodos de suínos com lesões 48 (32,0%) linhagens de Mycobacterium spp.e 6 (4,0%) Rhodococcus equi. Nos linfonodos de suínos sem lesões foram identificados 11 (7,3%) isolados de Mycobacterium spp.e nenhuma linhagem de R. equi. Nas fezes foram identificadas 40 (26,6%) linhagens de Rhodococcus equi e ... / Abstract: The infectious lymphadenitis represents one of the most important diseases in pigs worldwide caused by bacterium, usually diagnosed on the slaughterhouses.The disease leads to economic losses due to total or partial condemnation of carcasses, as well as public health concern due to the zoonotic potential of microorganisms. The present study investigated the occurrence and the main species of the genus Mycobacterium as well as virulence markers of plasmid in Rhodococcus equi (R. equi) strains isolated from lymph nodes and feces from pigs of slaughterhouses in the state of São Paulo, with and without lymphadenitis. Were sampled 150 lymph nodes (50 mesenteric, 50 mediastinal and 50 submandibular) with lesions, 150 lymph nodes (50 mesenteric, 50 mediastinal and 50 submandibular) without visible lesions, and 150 feces from pigs of slaughterhouses of state of São Paulo, Brazil. The lymph nodes samples and feces were subjected to microbiological culture simultaneously indefibrinated bovine blood agar (5%), selective media of CAZ-NB, TCP, TVP for R. equi, and Stonebrink-Lesslie, and Lowenstein-Jensen for mycobacteria . The suggestive colonies of R. equi and positive to CAMP test were sent to Japan for evaluation of plasmid profile (VapA or VapB). The suggestive of Mycobacterium sp. were subjected to polymerase chain reaction (PCR) - based species identification using restriction enzyme pattern analysis (PRA). Among lymph nodes of pigs with lesions, 48 (32.0%) Mycobacterium spp. and 6 (4.0%) R. equi strains were identified. In the lymph nodes of pigs without lesions were identified 11 (7.3%) Mycobacterium spp. and none R. equi strain. From the fecal samples, 40 (26.6%) R. equi and 2 (1.3%) Mycobacterium spp. isolates were identified. From 48 Mycobcterium isolates from pigs with lesions, 37 (77.0%) were identified by PRA as M. avium type 1, and 11 (23.0%) M. avium type 2. Among limph nodes with lesions wer ... / Doutor

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-09-01T17:09:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Robson Bahia Cerqueira.pdf: 448377 bytes, checksum: 8fd6e1c0b18fb33f9312c9869e1631ed (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T17:09:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Robson Bahia Cerqueira.pdf: 448377 bytes, checksum: 8fd6e1c0b18fb33f9312c9869e1631ed (MD5) / Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. Esta doença, de curso crônico, caracteriza-se pela formação de granulomas nos linfonodos e em órgãos internos, como forma de resposta do sistema imune do hospedeiro à penetração deste agente que resiste à ação bactericida das células fagocíticas. Apesar da resposta imune envolver todos os componentes das imunidades inata e adquirida, a natureza dos antígenos protetores ainda é desconhecida. O presente estudo avaliou a resposta imune humoral a partir do soro caprino coletado de grupos de animais infectados com a linhagem atenuada T1, a linhagem virulenta VD 57 e um grupo controle inoculado com PBS-T. Esses grupos foram acompanhados durante 12 semanas e os níveis de anticorpos específicos foram avaliados por cinco diferentes ensaios imunoenzimáticos indiretos utilizando os antígenos MQD, TPP, BHI e as frações Q5 e Q6. A sensibilidade e especificidade do teste ELISA indireto Q5 foram de 97,8% e, 95,6% respectivamente e a sensibilidade e especificidade do teste ELISA indireto Q6 foi de 91,1% e 95,6%. Os testes ELISA indireto MQD, Q5 e Q6 apresentam uma capacidade de discriminação maior entre os animais infectados com uma linhagem selvagem VD 57 comparados aos animais infectados com uma linhagem atenuada T1.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T19:10:47Z No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-07T13:17:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T13:17:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / FAPESB / Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente causador da linfadenite caseosa em caprinos e ovinos caracterizado por formação de granulomas nos linfonodos superficiais e em órgãos internos. Diversas tentativas já foram realizadas para o desenvolvimento de candidatos vacinais que sejam capazes de induzir uma resposta imune protetora eficaz. O presente estudo avaliou indicadores da resposta imune inata e adaptativa em ovinos inoculados com uma linhagem de baixa virulência de C. pseudotuberculosis e a seus antígenos secretados. Cinco ovinos foram inoculados com a dose 109 UFC de uma linhagem de baixa virulência (T1) de C. pseudotuberculosis, cinco com 250μg de antígenos secretados em um meio quimicamente definido (MQD) e três animais foram utilizados para compor o grupo controle. Os animais foram desafiados com uma dose de 2x105 UFC de uma linhagem virulenta de C. pseudotuberculosis, e posteriormente necropsiados. Foram utilizados testes ELISA para identificação de IgM e IgG específica, e dosagem de IFN- para avaliação dos mecanismos humoral e celular. A técnica de PCR em tempo real foi utilizada para avaliação da expressão do RNAm de TNF-α, IL-1β e dos TLRs 2, 4, 9 em células de linfonodos inguinais. Com este experimento, conclui-se que o aumento na produção de IgG e uma maior expressão de RNAm de TNF-α e dos TLRs 2,4 e 9 em células de linfonodos inguinais podem estar associados a uma menor chance de surgimento de lesões em animais inoculados com a cepa de baixa virulência (T1). Os níveis de IFN- estiveram associados à progressão clínica da enfermidade no grupo MQD. / Corynebacterium pseudotuberculosis is the causative agent of caseous lymphadenitis in goats and sheep, which induces the formation of caseous lesions in subcutaneous lymph nodes and in internal organs. Several attempts have already been made for the development of vaccine candidates capable of inducing an effective protective immune response. The present study aimed to evaluate indicators of innate and adaptive immune response in sheep inoculated with a strain of low virulence of C.pseudotuberculosis and their secreted antigens. Five animals were inoculated with a dose 109 CFU of C. pseudotuberculosis of low virulence strain (T1), five with 250μg of secreted antigens in a chemically defined medium (CDM) more 1,5 mg saponins from Quillaja saponaria saponin as adjuvant and three animals were used to compose the control group. Animals were challenged with a dose of 2x105 CFU of virulent strain of C. pseudotuberculosis, and later necropsied. ELISA tests for identification of specific IgM and IgG and dosage of IFN -  were used to evaluate the humoral and cellular response. The technique of real-time PCR was used to evaluate the mRNA expression of TNF - α , IL - 1β and TLRs 2 , 4 , 9 . In this experiment, it was concluded that the increase in IgG production and increased mRNA expression of TNF- α and TLRs 2,4 and 9 may be associated with a lower chance of lesions in animals inoculated with a strain of low virulence of C.pseudotuberculosis. The levels of IFN -  were associated with clinical progression of the disease in MQD group.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T18:39:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Italaney Fehlberg.pdf: 1641383 bytes, checksum: 5783529c67edcfba0dd7902fb837f098 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T18:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Italaney Fehlberg.pdf: 1641383 bytes, checksum: 5783529c67edcfba0dd7902fb837f098 (MD5) / CAPES; FAPEX / Infecções por Corynebacterium pseudotuberculosis, com alta prevalência na Bahia, e Mycobacterium spp., sem dados oficiais de ocorrência neste estado, podem resultar na formação de lesão granulomatosa, tanto em linfonodos superficiais quanto em órgãos internos. Isto pode gerar confusão no diagnóstico clínico de linfadenite caseosa e tuberculose nestes animais, mas que em decorrência da alta prevalência desta primeira acabam sendo diagnosticados clinicamente como linfadenite caseosa. Para estimar a ocorrência destas infecções como causadoras de hipertrofia nos linfonodos superficiais de caprinos é que o presente estudo foi realizado. Mil seiscentos e trinta e nove caprinos de cinco municípios do semi-árido baiano foram examinados quanto à presença destas lesões externas e dos 59 animais (3,6%) que as apresentavam, amostras de sangue total e do conteúdo dos abscessos foram coletadas. O sangue foi destinado para a realização do ELISA indireto anti-Corynebacterium pseudotuberculosis e os materiais de 56 abscessos foram destinados para a cultura de Corynebacterium e extração dos DNAs para identificação direta dos patógenos por PCR. A cultura detectou Corynebacterium pseudotuberculosis em 40 (71,4%) abscessos, enquanto o mPCR detectou em 41(73,2%). Mycobacterium spp. não foi identificado pela técnica molecular em nenhuma das amostras avaliadas. A sorologia para C. pseudotuberculosis identificou 42 (71,2%) dos 59 caprinos como positivos para linfadenite caseosa. Assim, a infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis foi responsável pelas hipertrofias superficiais em mais de 71% dos caprinos avaliados pela cultura, sorologia e PCR, confirmando o diagnóstico clínico de linfadenite caseosa nestes animais. Exames adicionais são requeridos para garantir que a tuberculose não ocorre nos caprinos destes municípios da Bahia. / Salvador

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-25Bitstream added on 2014-11-10T11:57:43Z : No. of bitstreams: 1 000741914_20151231.pdf: 202931 bytes, checksum: b09a175d62ec19f75595646ea61ffda5 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-01-04T10:26:18Z: 000741914_20151231.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-04T10:28:14Z : No. of bitstreams: 1 000741914.pdf: 1231278 bytes, checksum: 31828ab93cfccd06f552bc041efb2c26 (MD5) / A linfadenite infecciosa em suínos representa uma das afecções mais preocupantes na criação de suínos em todo mundo, causada por patógenos de origem bacteriana, geralmente diagnosticada na linha de abate. Acarreta prejuízos econômicos com a condenação total ou parcial das carcaças, bem como reflexos em saúde pública, devido ao potencial zoonótico dos agentes causais. O presente estudo investigou a ocorrência e as principais espécies do gênero Mycobacterium, assim como marcadores de virulência plasmidial em linhagens de Rhodococcus equi (R. equi) isoladas de linfonodos e das fezes de suínos de abatedouros do interior do estado de São Paulo, com e sem linfadenite. Foram examinados 150 linfonodos (50 mesentéricos, 50 mediastínicos e 50 submandibulares) com lesões, 150linfonodos (50 mesentéricos, 50 mediastínicos e 50 submandibulares) sem lesões aparentes e 150 fezes de suínos, provenientes de animais destinados ao abate, em dois frigoríficos do interior do estado de São Paulo. As amostras de linfonodos e fezes foram submetidas ao cultivo microbiológico simultaneamente nos meios de ágar acrescido de sangue bovino (5%) desfibrinado, e meios seletivos de CAZ-NB, TCP e TVP para R. equi, e Stonebrink–Lesslie e Lowenstein-Jensen para micobactérias. As colônias sugestivas de R. equi e positivas no teste de CAMP, foram enviadas ao Japão para detecção de linhagens VapA ou VapB, associadas a virulência. As linhagens sugestivas no cultivo microbiano para o gênero Mycobacterium foram submetidas a caracterização de espécies por PCR pela técnica de PRA. Foram identificados nos linfonodos de suínos com lesões 48 (32,0%) linhagens de Mycobacterium spp.e 6 (4,0%) Rhodococcus equi. Nos linfonodos de suínos sem lesões foram identificados 11 (7,3%) isolados de Mycobacterium spp.e nenhuma linhagem de R. equi. Nas fezes foram identificadas 40 (26,6%) linhagens de Rhodococcus equi e ... / The infectious lymphadenitis represents one of the most important diseases in pigs worldwide caused by bacterium, usually diagnosed on the slaughterhouses.The disease leads to economic losses due to total or partial condemnation of carcasses, as well as public health concern due to the zoonotic potential of microorganisms. The present study investigated the occurrence and the main species of the genus Mycobacterium as well as virulence markers of plasmid in Rhodococcus equi (R. equi) strains isolated from lymph nodes and feces from pigs of slaughterhouses in the state of São Paulo, with and without lymphadenitis. Were sampled 150 lymph nodes (50 mesenteric, 50 mediastinal and 50 submandibular) with lesions, 150 lymph nodes (50 mesenteric, 50 mediastinal and 50 submandibular) without visible lesions, and 150 feces from pigs of slaughterhouses of state of São Paulo, Brazil. The lymph nodes samples and feces were subjected to microbiological culture simultaneously indefibrinated bovine blood agar (5%), selective media of CAZ-NB, TCP, TVP for R. equi, and Stonebrink-Lesslie, and Lowenstein-Jensen for mycobacteria . The suggestive colonies of R. equi and positive to CAMP test were sent to Japan for evaluation of plasmid profile (VapA or VapB). The suggestive of Mycobacterium sp. were subjected to polymerase chain reaction (PCR) – based species identification using restriction enzyme pattern analysis (PRA). Among lymph nodes of pigs with lesions, 48 (32.0%) Mycobacterium spp. and 6 (4.0%) R. equi strains were identified. In the lymph nodes of pigs without lesions were identified 11 (7.3%) Mycobacterium spp. and none R. equi strain. From the fecal samples, 40 (26.6%) R. equi and 2 (1.3%) Mycobacterium spp. isolates were identified. From 48 Mycobcterium isolates from pigs with lesions, 37 (77.0%) were identified by PRA as M. avium type 1, and 11 (23.0%) M. avium type 2. Among limph nodes with lesions wer ...

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-26Bitstream added on 2014-08-13T18:00:34Z : No. of bitstreams: 1 000758216_20150101.pdf: 141794 bytes, checksum: d8e36aef70fd4460b266e3a5ebd9bc48 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:44Z: 000758216_20150101.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:45Z : No. of bitstreams: 1 000758216.pdf: 846120 bytes, checksum: d23712a096437d329d378bcdbdf158e4 (MD5) / A carne suína é a fonte de proteína de origem animal mais consumida no mundo, tendo o Brasil como o quarto maior produtor e exportador. A brucelose é uma das mais importantes e amplamente distribuidas zoonoses mundial. A prevenção da brucelose humana depende do controle da doença nos animais. O diagnóstico definitivo é o isolamento da bactéria, porém técnicas de biologia molecular permitem a detecção do agente e diferenciação em espécies e biótipos reduzindo o tempo necessário para o diagnóstico final. Os programas de controle e erradicação utilizam os testes sorológicos para o diagnóstico da doença existindo, no entanto, variação quanto ao tipo de teste utilizado de acordo com diferentes países e pesquisadores. No Brasil relatos de soropositividade para brucelose em suínos variam de zero a 100% de acordo com a região, amostragem e metodologia utilizada, porém estudos da enfermidade em suideos com lesões de linfadenite não são encontrados. Este trabalho pretende descrever a situação epidemiológica da brucelose em suínos no Brasil, avaliar os meios de cultura ágar Brucella, CITA e Farrell para isolamento desta bactéria e detectar a presença do agente em linfonodos de suínos e javalis, com linfadenite, abatidos em frigoríficos no estado de São Paulo, e destinados ao consumo humano / Pork is the most consumed source of animal protein in worldwide. Brucellosis is one of the most important and worldwide distributed zoonosis. The prevention of human brucellosis depends on controlling the disease in animals. The bacteria isolation is the standard technique but new molecular methods allow the detection and differentiation the agent in species and biotypes reducing the time required for the final diagnosis. The control and eradication programs are based in serological tests for the diagnosis, however, variation in these tests according to different countries and researchers are common. In Brazil reports for seropositivity in swine range from zero to 100% depending on region, sampling and methodology, but studies of the disease in suidae with lymphadenitis are not found. This study aims to describe the epidemiological situation of brucellosis in pigs in Brazil and evaluate Brucella agar, CITA and Farrell culture media for isolation of the bacteria and to detect the presence of the agent in lymph nodes of pigs and boars with lymphadenitis slaughtered in the state of São Paulo and sent for human consumption

Orientador: Raghuvir Krishnaswamy Arni / Banca: Ljubica Tasic / Banca: Marcos Roberto de Mattos Fontes / Banca: Fábio Rogério de Moraes / Banca: Lisandra Marques Gava Borges / Resumo: Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis), é uma bactéria gram positiva anaeróbia facultativa, pleomórfica, que não esporula, não forma cápsula, e que apresenta 2 biotipos ou biovares, sendo o biovar equi capaz de infectar preferencialmente equinos, enquanto o biótipo denominado ovis acomete pequenos ruminantes. Esta bactéria faz parte do grupo CMNR (Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia e Rhodococcus), que demonstra grande importância veterinária e médica, uma vez que estes micro-organismos comumente infectam animais, podendo infectar o homem, causando perdas econômicas pela ineficácia ou alto custo de terapias existentes. Um exemplo seria a linfadenite caseosa (LC) causada por C. pseudotuberculosis, que afeta particularmente a pecuária de caprinos e ovinos, com a condenação da carcaça e redução da produção de lã e de carne. A transmissão da doença e contágio dos animais é direta, muitas vezes através da alimentação e ingestão de água em local contaminado por animais doentes. Essa doença possui incidência na pecuária mundial, principalmente de caprinos e ovinos, havendo registros de ocorrência no Brasil, Europa, Oriente Médio, Austrália, Nova Zelândia, África do Sul, Canadá e Estados Unidos e mesmo com todos os avanços tecnológicos, ainda não há métodos de prevenção totalmente eficazes, como vacinas e medicamentos, tampouco para o tratamento de animais infectados, que geralmente são de custo elevado, por longos períodos e sem a garantia de cura ou de... / Abstract: Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis), is a gram-positive, facultative anaerobe, pleomorphic, non-sporulating bacterium with two biotopes or biovars, being the biovar equi capable of infecting horses, whereas the biotype called ovis infects small ruminants. It is part of the CMNR group (Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia and Rhodococcus), which demonstrates great veterinary and medical importance, since these common microorganisms infect animals and can infect humans, causing economic losses due to the inefficiency or high cost of existing therapies. An example is a caseous lymphadenitis (LC) caused by C. pseudotuberculosis, which particularly affects the goats and sheep livestock, with carcass condemnation and reduction of wool and meat production. The transmission of disease and the contagion of animals is direct, often through feeding and drinking water in places contaminated by sick animals. This disease has an incidence in the world livestock, mainly of goats and sheep, with occurrence records in Brazil, Europe, the Middle East, Australia, New Zealand, South Africa, Canada and the United States and even with all technological advances, still there are no totally effective prevention methods, such as vaccines and medications, nor for the treatment of infected animals, which are usually of a high cost, for long periods and without guarantee of cure or exemption from recurrence of LC. In this way, faster and easier techniques for the detection of ... / Doutor

Submitted by Renorbio (renorbioba@ufba.br) on 2018-04-25T17:41:58Z No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Maria da Conceição Aquino de Sá.pdf: 3251110 bytes, checksum: f7580c2d7b59b8cd7c2c1409212927e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2018-05-04T14:16:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Maria da Conceição Aquino de Sá.pdf: 3251110 bytes, checksum: f7580c2d7b59b8cd7c2c1409212927e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-04T14:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese de Doutorado - Maria da Conceição Aquino de Sá.pdf: 3251110 bytes, checksum: f7580c2d7b59b8cd7c2c1409212927e0 (MD5) / FUNDACAO DE AMPARO A PESQUISA DO ESTADO DA BAHIA - EDITAL 013/2014 Programa De Bolsas De Mestrado e Doutorado / A procura por produtos da caprino-ovinocultura é frequente e contribui para aumentar a economia mundial, por isso é necessário produzir em larga escala e com qualidade para atender à demanda da população. Entretanto, diversos fatores na criação desses animais ainda necessitam melhorar, principalmente na área sanitária, na qual muitas doenças acometem o rebanho, dentre elas, a Linfadenite Caseosa, doença causada por Corynebacterium pseudotuberculosis, uma bactéria que apresenta sua toxicidade através de genes de virulência, assim como pela produção de biofilme, que protege a bactéria de ambientes hostis. Dessa forma, estudos sobre esse patógeno são necessários, a exemplo do sequenciamento genômico, na busca de conhecer genes para análises de biomoléculas e com isso compreender melhor a sua antigenicidade e imunogenicidade com o objetivo de melhorar a especificidade e sensibilidade de testes sorológicos, utilizados como prevenção da doença no rebanho. Além disso, é essencial entender o mecanismo de patogenicidade desta bactéria no hospedeiro e suas formas de defesa no sistema imunológico do animal. Assim, no presente estudo, foram caracterizados os genomas de quatro cepas de C. pseudotuberculosis, comparando as cepas produtoras (OVI2C, CAPJ4) e não produtoras (OVI03, CAP3W) de biofilme. As cepas foram extraídas para produção de antígenos somáticos e de superfícies. A partir de estudos prévios com immunoblotting, foram escolhidas as cepas de origem caprina (CAPJ4 e CAP3W) para o estudo in vivo com dezoito caprinos da raça Canindé, divididos em três grupos experimentais, um grupo controle e dois grupos infectados com cepas de C. pseudotuberculosis, para avaliar a patogenia clinicamente, realizando hemograma, além de outras análises sorológicas através do ensaio de ELISA e Western Blotting. Também foi realizada a cultura de células sanguíneas para o estudo da imunidade celular com IFN- e cultivo de células mononucleares do sangue periférico para observar a modulação da expressão de proteínas do sistema GTPases, Rab 5 e Rab 7. Após esses estudos, observou-se que os genes contidos no genoma das cepas de C. pseudotuberculosis possuem similaridade, mostrando que eles são altamente conservados. A extração das bactérias resultou em antígenos de superfície F3, que apresentaram reatividade no immunoblotting frente aos soros de ovinos experimentalmente infectados. De todos os antígenos, os de origem caprina, apresentaram melhor antigenicidade. No experimento in vivo, após a infecção dos animais, foram realizadas outras colheitas de sangue e foi possível observar que a cepa produtora de biofilme é mais resistente, causando danos maiores aos animais. Para as condições de infecção experimental, os valores do hemograma estão dentro dos parâmetros. Na análise sorológica os caprinos infectados experimentalmente responderam à exposição primária, o que contribui para o aumento da imunoglobulina IgG. A produção de IFN-  também foi observada. Foi verificado que as cepas de C. pseudotuberculosis produtora e não produtora de biofilme podem alterar a expressão de proteínas Rab 5 e Rab 7 em macrófagos derivados de células mononucleares do sangue periférico cultivados in vitro. Esses resultados forneceram informações importantes para a produção de testes diagnósticos, com maior acurácia. / The consumption of sheep and goat products is frequent and increases the values of world economy, so it is necessary to produce large scale and quality to meet the demand of population. However, several factors in the breeding of these animals still have to improve, especially in sanitary area, where many diseases affect the cattle, among them, Caseous Lymphadenitis, caused by Corynebacterium pseudotuberculosis, a bacterium that presents its toxicity through virulence genes, also by production of biofilm that protects the bacteria from hostile environments. Thus, studies of this pathogen are necessary, such as genomic sequencing, in search to know antigenic genes for biomolecule analysis and with this to understand better its antigenicity and immunogenicity, to be possible improve the specificity and sensitivity of serological tests, that are used as prevention of disease in the herd. Besides, it is essential to understand the mechanism of pathogenicity of this bacterium in host and its forms of defense against the animals immune system. At the present study, the genomes of four strains of C. pseudotuberculosis were characterized, comparing the biofilm producing (OVI2C, CAPJ4) and non-producing (OVI03, CAP3W) strains. These strains were extracted for production of somatic and surfaces antigens. From previous studies with immunoblottingting, strains of goat origin (CAPJ4 and CAP3W) were chosen for in vivo study with 18 Canindé goats, divided into three experimental groups, one control group and two groups infected with strains of C. pseudotuberculosis, to evaluate clinically the pathogenesis and through hemogram, in addition to other serological tests as ELISA assay and Western Blotting. Also was performed blood cell culture for the study of cellular immunity with IFN-, as culture of peripheral blood mononuclear cells to observe the modulation of expression of GTPases, Rab 5 and Rab 7 system proteins. After these studies, it was observed that the genes contained in the genome of the strains of C. pseudotuberculosis are genetically homogeneous, showing that they are highly conserved. The extraction of bacteria resulted in F3 surface antigens, that showed reactivity in immunoblottingting against sera from experimentally infected sheep. Of all antigens, those of goat origin had better antigenicity. At the in vivo experiment, after the infection of animals, other blood samples were collected and it was possible to observe that the biofilm producing strain is more resistant, causing greater damages to animals. For the conditions of experimental infection, blood count values are between normal limits. In the serological analysis, the experimentally infected goats responded to primary exposure, which contributes to increase of immunoglobulin IgG. The production of IFN- was also observed. In conclusion, it was observed that strains of C. pseudotuberculosis producing and not producing biofilm can modify the expression of Rab proteins in macrophages derived from mononuclear cells of peripheral blood cultivated in vitro. These results provided important information for production of diagnostic tests, with greater accuracy.

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