Orientador : Oswaldo Garcia Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T15:20:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Novo_MariaTeresaMarques_M.pdf: 3770876 bytes, checksum: e759cfa99a47f8a9dc0e976ada11184e (MD5) Previous issue date: 1993 / Mestrado / Genetica de Microorganismos / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Claudio de Oliveira / Resumo: Embora a ictiofauna Neotropical seja considerada a mais diversa do mundo, apenas 12,2% das espécies de peixes tiveram cariótipos descritos. A dificuldade de se obter preparações cromossômicas de boa qualidade para algumas espécies de peixes Neotropicais ainda é um dos grandes desafios na área de Citogenética, principalmente para peixes de pequeno e grande porte. Uma alternativa é uso de metodologias indiretas, tais como cultura de células, amplamente utilizada e estabelecida em mamíferos, entretanto para peixes ainda é pouco empregada pela dificuldade de padronização da técnica de isolamento e manutenção das culturas celulares. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma metodologia de cultura de células aderentes para obtenção de cromossomos mitóticos em peixes neotropicais, estabelecendo linhagens celulares de diferentes espécies e a determinação de suas características citogenéticas. Seis espécies de peixes Neotropicais da ordem Characiformes foram utilizadas para obtenção das culturas primárias, desenvolvimento e criopreservação das linhagens celulares e analise citogeneticamente. Para obtenção das linhagens, células de tecido muscular foram isoladas usando enzimas proteolíticas. As células isoladas foram cultivadas em frascos ou placas tratadas com um filme à base de gelatina e mantidas à 27,5ºC, 5% CO2 em meio completo (DMEM+soro fetal bovino+antibióticos+antimicóticos). Quando as células cobriram toda a superfície do substrato, elas foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although Neotropical ichthyofauna is considered the most diverse in the world, only 12.2% had karyotypes described. The difficulty of obtaining good quality chromosome preparations for some Neotropical fish species is still one of the major challenges in the area of cytogenetics, especially for small and large fish. An alternative is the use of indirect methodologies, such as cell culture, widely used and established in mammals, however for fish is still little used for the difficulty of standardization of the technique of isolation and maintenance of cell culture. Thus, the present study aimed to develop a methodology for adherent cell culture to obtain mitotic chromosomes in Neotropical fish, establishmenting cell lines of different species and the cytogenetic characteristics of these lines. Six species of Neotropical fish of the order Characiformes were used to obtain primary cell, development and cryopreservation of the cell lines and cytogenetic analysis. To obtain the cell lines, muscle tissue were isolated using proteolytic enzymes. The isolated cells were cultured in flasks or plates treated with a gelatin-based film and maintained at 27.5 °C, 5% CO2 in complete medium (DMEM + fetal bovine serum + antibiotics + antimycotics). When the cells covered almost all surface of the substrate, they were transferred to new flasks to obtain chromosome preparations and cryopreservation. The chromosome preparations of the cell lines were performed in different passages in the spec... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Antônio Orlando Di Mauro / Coorientador: Sandra Helena Unêda-Trevisoli / Banca: Luís Fernando Alliprandini / Banca: Vanoli Fronza / Banca: Gustavo Vitti Moro / Banca: João Carlos de Oliveira / Resumo: Atualmente, a soja destaca-se como a mais importante oleaginosa cultivada no mundo. Os investimentos em pesquisa levaram à "tropicalização" da soja, permitindo, pela primeira vez na história, que o grão fosse plantado com sucesso, em regiões de baixas latitudes, entre o Trópico de Capricórnio e a linha do Equador. Em função disso tem-se buscado o desenvolvimento de genótipos com ampla adaptabilidade, o que implica em uma baixa interação genótipo x ambiente. O entendimento do tipo de interação permite um melhor posicionamento e indicação de regiões de plantio da cultivar em questão facilitando o trabalho do melhorista. A presença desse fenômeno pode acarretar uma redução da produtividade global de uma área para a qual se faça uma indicação geral de uma dada cultivar. Por outro lado, pode-se tirar proveito de sua existência usando-se procedimentos estatísticos que identifiquem o padrão dessa interação, e gerem informações que possibilitem o agrupamento de locais em zonas dentro das quais a magnitude da interação não seja significativa, permitindo indicações específicas de cultivares para tais zonas. O uso de ferramentas moleculares tem se apresentado como uma opção para seleção de características com base no genótipo e eliminando assim o efeito do ambiente na expressão da característica em questão. O melhoramento assistido por marcadores moleculares tem sido tema de inúmeros trabalhos de seleção assistida, cujos resultados variam de concretos e positivos a controversos e pouco significativos em termos de ganhos genéticos, econômicos e eficiência, quando comparados com a seleção fenotípica. Os capítulos seguintes permitem apresentar resultados de metodologias moleculares e convencionais aplicadas em um programa de melhoramento para seleção de genótipos superiores de soja. / Abstract: Nowadays, soybean highlights as the most important oilseed cultivated in the world. The investments in research led to soybean "tropicalization", allowing, for the first time in history, that the grain was seeded with success, in low latitudes, between the tropic of Capricorn and the Equator. Due to this, researchers have tried to develop wide adaptability genotypes, which implies in a low genotype x environment interaction. The comprehension of the type of interaction allows a better placement and indications of cultivar planting regions, facilitating the breeder's work. The presence of this phenomenon may result in a global productivity decrease of an area that make up an overall indication of a given cultivar. On the other hand, it is possible to take advantage of their existence using statistical procedures to identify the pattern of this interaction, and generate information that allow the grouping of local areas within which the magnitude of the interaction is not significant. Specific cultivar indication for these zones. The use o molecular tools have shown as an option for characteristics selection base on genotype and then eliminating the environment effect in the expression of the characteristic in question. The molecular marker-assisted breeding has been the subject of numerous works assisted selection, whose results varies from concrete and positive to controversial and little significant in terms of genetic gains, and economic efficiency compared to phenotypic selection. The following chapters present results provide molecular and conventional methodologies applied in a breeding program for superior genotypes selection. / Doutor

O presente trabalho teve como objetivo avaliar novilhos resultantes da seleção genética de diferentes linhagens da raça Canchim (5/8 Charolês, 3/8 Zebu), recriados a pasto e terminados em confinamento, em relação ao consumo alimentar, desempenho, emissão de metano entérico, características de carcaça e cortes cárneos. O experimento foi desenvolvido na Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, unidade Pecuária Sudeste, São Carlos/SP. Foram utilizados 46 novilhos da raça Canchim (15 meses, 291 kg de peso vivo), 13 pertencentes a linhagem antiga, 20 a linhagem nova e 13 provenientes do acasalamento entre estas linhagens. A linhagem antiga é mantida como rebanho fechado desde 1953 e foi formada com base em 53 touros Charoleses importados da França, já a linhagem nova teve origem a partir de 1990 com a utilização de touros Charoleses de diferentes origens (Argentina, Brasil, Estados Unidos, França, Inglaterra), e a partir de 1998, com o acasalamento entre as duas linhagens formou-se a linhagem cruzada. Durante a recria a pasto (165 dias), os animais foram alojados em uma área de pastagem (Panicum maximum cv. Tanzânia), onde o manejo adotado foi o de pastejo rotacionado com lotação variável, para as medidas de desempenho foram executadas pesagens a cada 33 dias, e a mensuração da emissão de metano entérico através da técnica do gás traçador hexafluoreto de enxofre realizada em 12 animais da linhagem antiga e 12 da nova. No período de terminação em confinamento, os animais foram dispostos em 4 baias e receberam alimentação ad libitum durante 105 dias, o ganho de peso foi medido a cada 28 dias e para a mensuração de emissão de metano os mesmos animais avaliados a pasto, tiveram acesso ao sistema automatizado GreenFeed®. No momento do abate, foram coletadas informações sobre o peso de carcaça quente, e após 24 horas de resfriamento em câmara fria, o peso da carcaça fria, do traseiro especial, dianteiro e ponta de agulha e na desossa os pesos individuais dos cortes cárneos comerciais. A linhagem nova mostrou-se superior a antiga no período de recria nas variáveis de ganho médio diário, conversão e eficiência alimentar, não se diferenciando dos cruzados. Durante a terminação em confinamento, foi observado o mesmo em relação ao ganho médio diário, já em relação ao consumo, a linhagem nova e os cruzados apresentaram maiores ingestões de alimento comparados à linhagem antiga, enquanto a conversão alimentar dos animais cruzados apresentou maior valor comparados às das linhagens. Na recria a pasto, para se obter maiores ganhos de peso, melhor conversão alimentar e eficiência alimentar, devem ser utilizados animais resultantes de processos de seleção genética. A seleção genética para características de desempenho produtivo não garante animais com menores emissões de metano em condições de pastejo. Nos animais em fase de terminação em confinamento, o maior ganho de peso, melhor conversão alimentar e melhor acabamento de carcaça são obtidos através da utilização de animais resultantes de processos de seleção genética. O mesmo tipo de seleção para características de desempenho produtivo em confinamento leva a maiores consumos diários de alimento e consequentemente a maiores emissões de metano diárias. / The objective of this study was to evaluate steers resulting from the genetic selection of different Canchim (5/8 Charolais, 3/8 Zebu) lineages, rearing to pasture and finished in feedlot, in relation to feed intake, performance, enteric methane emission, carcass traits and retail cuts. The experiment was carried out at the Brazilian Agricultural Research Corporation (Embrapa), Southeast Livestock, São Carlos / SP. A total of 46 Canchim steers (15 months, 291 kg live weight) were used, 13 from the ancient lineage, 20 from the new lineage and 13 from the mating between these lineages. The ancient lineage is kept as a closed herd since 1953 and was formed by 53 Charolais bulls imported from France. The new lineage originated from 1990 with the use of Charolais bulls from different origins (Argentina, Brazil, the United States, France, England), and from 1998 the crossed lineage was formed with the mating between the two lineages. During grazing (165 days), the animals were housed in an pasture area (Panicum maximum cv. Tanzania), where the management used was rotational grazing with variable stocking, for the performance measures were performed weighing every 33 days, and the measurement of the enteric methane emission through the sulfur hexafluoride tracer gas technique was performed in 12 animals of the ancient and 12 of the new lineage. In feedlot the animals were housed in 4 pens and fed ad libitum for 105 days. The weight gain was measured every 28 days and as for the measurement of methane emission the same animals evaluated on pasture had access to the GreenFeed® automated system. Information on the hot carcass weight was collected at the time of slaughter and after 24 hours of cooling in the cold chamber, the weights of the cold carcass, of the special hind, fore and spare ribs, and the individual weights of the retail cuts in boning. The new lineage was superior to the ancient one in the rearing period in the variables of average daily gain, conversion and feed efficiency, not differing from the animals crossed. During feedlot, it was observed the same in relation to the average daily gain, already in relation to intake, the new lineage and the crossbreeds presented higher feed intakes compared to the ancient lineage while the feed conversion of the crossed animals presented higher value compared with the new and ancient lineages. In pasture recreating, in order to obtain greater weight gains, better feed conversion and feed efficiency, animals resulting from genetic selection processes must be used. Genetic selection for performance traits does not guarantee animals with lower methane emissions under grazing conditions. For feedlot animals, the highest weight gain, better feed conversion and better carcass finishing are obtained through the use of animals resulting from genetic selection processes. The same type of selection for traits of performance in feedlot leads to higher daily feed intake and consequently to higher daily methane emissions.

A identificação de leveduras por métodos moleculares e bioquímicos teve um grande impacto na sistemática e, devido aos resultados recentes este grupo sofreu alterações taxonômicas. A linhagem de levedura IZ-987 tem sido utilizada na fermentação de caldo de cana-de-açúcar para a obtenção de aguardente no Departamento de Agroindústria, Alimentos e Nutrição da ESALQ/USP. Esta linhagem, catalogada como Saccharomyces cerevisiae, não produz H2S durante o processo fermentativo e apresenta a capacidade de flocular em fermentação. A análise anterior de diversidade genética por marcadores de RAPD demonstrou existir um distanciamento elevado entre esta linhagem e S. cerevisiae. O presente trabalho teve então por objetivo avaliar a diversidade genética entre a linhagem IZ-987, e as linhagens PE-2 e IZ-259 utilizadas como leveduras padrões pertencentes à espécie Saccharomyces cerevisiae e a levedura CR-1 como padrão de Saccharomyces bayanus, por meio das características morfológicas, fisiológicas e bioquímicas, e também por meio de marcadores de RAPD, cariotipagem e análise da seqüência das regiões ITS1 e ITS2 (Internal Transcript Subunit). Os métodos mostraram-se eficientes na diferenciação das linhagens, pois as limitações de um método puderam ser complementadas por outro. A análise morfológica mostrou que a linhagem IZ-987 não apresenta similaridade com as linhagens padrões. Os testes fisiológicos e bioquímicos apresentaram maior similaridade entre as linhagens em estudo não sendo suficiente para identificar com segurança o gênero e a espécie. As análises de diversidade genética por marcadores de RAPD e cariotipagem demonstraram que existe um distanciamento elevado entre IZ-987 e os padrões de S. cerevisiae. A análise da seqüência das regiões ITS1 e ITS2 (incluindo a subunidade 5,8 S do RNA ribossomal) da linhagem IZ-987, mostrou similaridade (>96%) com a espécie Pichia anomala. / Identification of yeast by biochemical and molecular method has changed the systematic of this group. The strain IZ-987 has been used in Department of Agroindustry, Food and Nutrition, ESALQ/USP, Piracicaba/SP for alcohol production from sugarcane. This strain, which flocculates and is not able to produce H2S during fermentation, was previously identified by classical methodology as Saccharomyces cerevisiae. In previous work, RAPD analysis showed a low level of similarity between the IZ-987 and other of S. cerevisiae strains. The aim of the present work was to examines the genetic variability among the IZ-987 strain, S. cerevisae (IZ-259 and PE-2 strains) and S. bayanus (strain CR-1) by nutritional requirements, biochemical, physiological and morphological traits as well as RAPD markers. ITS (Internal Transcript Subunit) sequencing was used in further characterization of the IZ-987 strain. The methodologies used in the present analysis were able to distinguish the strains, since that the limitation observed in one was complemented by other technique. The morphological and molecular analysis distinguished the IZ-987 strain from those of Saccharomyces genera. However, physiological and biochemical evaluation show similarity among the evaluated strains. Therefore, the results were not able to define the specie or genera of the IZ-987 strain. The sequencing of ITS-1, ITS-2 and 5.8S rDNA of the IZ-987 strain and analysis by BLASTn (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) showed similarity (>96%) of this strain with Pichia anomala.

Orientador: Luis Vitor Silva do Sacramento / Resumo: Objetivo: este trabalho teve como objetivo caracterizar as linhagens de pimentas cabacinha e dedo-de-moça amarela, determinando os teores de compostos primários e secundários, atividade antioxidante e o perfil dos compostos fenólicos. Métodos: Para realização do estudo foram utilizadas dez linhagens de pimentas, sendo cinco linhagens de pimenta cabacinha (CB1204; CB1505; CB1517; CB1531 e CB1541) e cinco de pimenta dedo-de-moça amarela (DM1404; DM1427; DM1433; DM1439 e DM1441), obtidas pelo método de melhoramento genético descendente de uma única semente (Single Seed Descente-SSD) a partir de dois acessos do Banco Ativo de Germoplasma de Capsicum – BAG. As características físico-química dos frutos foram realizados de acordo com as metodologias estabelecidas pela Association of Official Analytical Chemistry (2008). Para caracterização bioquímica, foram realizadas análises de compostos fenólicos, flavonoides, carotenoides totais e açúcares redutores usando a técnica espectrofotométrica, com a metodologia específica para cada composto, utilizando a curva de calibração padrão para cada composto, com leituras de absorbâncias em comprimento de onda de 750, 425, 453 e 540 nm, respectivamente. A atividade antioxidante foi determinada pela técnica espectrofotométrica, utilizando as metodologias de captura do radical DPPH, HOCl/OCl- e taurina cloramina com leituras de absorbâncias em 734, 655 e 655 nm, respectivamente, expressos em médias de IC50. O perfil de compostos fenólicos foi ava... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-06-22Bitstream added on 2014-06-13T19:48:26Z : No. of bitstreams: 1 jesus_cr_me_botfca.pdf: 133340 bytes, checksum: 2ef846e0764b0f283ae46df3c1f9091c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Para a geração de híbridos comerciais de porte baixo visando à colheita mecanizada em condições de safra é necessário a obtenção de linhagens. O presente trabalho teve como objetivo avaliar 111 linhagens de mamona, obtidas da População FCA Planta Baixa selecionadas para porte baixo. O trabalho foi desenvolvido no município de São Manuel - SP na Fazenda Experimental São Manuel, da Faculdade de Ciências Agronômicas, no Campus de Botucatu - UNESP. Estas linhagens foram avaliadas entre os meses de outubro de 2003 a setembro de 2004 utilizando-se o delineamento experimental de blocos ao acaso, com área útil da parcela de 3,0 m2, espaçamento entre linhas 0,60 m e 0,50 m entre plantas. As 111 linhagens foram divididas em quatro experimentos: 30 linhagens em três experimentos com quatro repetições e 21 linhagens em um experimento com duas repetições. Após o completo desenvolvimento das plantas, avaliou-se a altura de 10 plantas por parcela (m) desde a superfície do solo até o ápice do racemo mais alto, bem como foram tomados dados de peso dos grãos em kg.ha -1, corrigidos por covariância para estande ideal de 10 plantas por parcela e teor de água de 10%. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância. Os quadrados médios não foram significativos a 5% de probabilidade para a característica altura de plantas, indicando que não houve variação genética para este parâmetro. Os quadrados médios das análises de variância para a característica produtividade de grãos foram significativos, indicando existir variabilidade para a característica em nível de 5% de probabilidade. Para a característica altura de plantas, a média das linhagens e amplitude de variação entre os quatro experimentos foi de 1,20 m com amplitude de 0,33 a 1,68 m ou plantas anãs a baixas... / For the generation of commercial hybrids with short height seeking to automated harvest in crop conditions, it's necessary the obtaining of lineages. The present work had as objective to evaluate 111 castor bean lineages, obtained from FCA short height plant population selected for low size. The work was developed in São Manuel municipal district, São Paulo State, in the Experimental Farm belonging to University of Agronomic Sciences, Botucatu Campus - UNESP. These lineages were appraised between October, 2003 and September, 2004, by using randomized complete blocks experimental design, with plot useful area of 3,0 m2, spacing between lines of 0,60 m and 0,50 m between plants. The 111 lineages were divided into four experiments: 30 lineages in three experiments with four replications and 21 lineages in one experiment with two replications. After plants complete development, the height of ten of them was evaluated, in each plot (m), from the soil surface to the apex of the highest bunch, as well as data of grain weight were taken, in kg ha-1, corrected by covariance for ideal stand of 10 plants per plot and water content of 10%. The obtained data were submitted to variance analysis. Medium squares were not significant to 5% of probability for the characteristic plant height, indicating that there was not genetic variation for this parameter. The medium squares from the variance analyses for the characteristic grains yield were significant, indicating the existence of genetic variability for this characteristic with 5% of probability. For the characteristic plant height, the average of the lineages and variation width among the four experiments was about 1,20 m with range from 0,33 to 1,68 m or dwarfish to short plants... (Complete abstract, click eletronic address below)

Orientador: Norberto da Silva / Coorientador: Maurício Dutra Zanotto / Banca: Rumy Goto / Banca: Aniello Antonio Cutolo Filho / Resumo: O presente trabalho tem por objetivo avaliar a capacidade de combinação de linhagens tropicais e testadores com introgressão de germoplasma temperado para a produção de híbridos de milho doce adaptados as condições brasileiras. Foram obtidos vinte e dois híbridos topcrosses originários dos cruzamentos de onze linhagens tropicais de milho super doce em cruzamento com dois testadores super doce que apresentavam introgressão de germoplasma temperado. As linhagens tropicais foram obtidas por meio de seis gerações de endogamia e seleção, após a incorporação do gene shrunken-2 em seis diferentes populações de milhos brasileiros amiláceos, utilizando o método de retrocruzamento parcial. Os dois testadores utilizados denominados de 106 e 107 foram constituídos pela mistura equitativa de sementes de vinte e duas linhagens S3 obtidas a partir de dois híbridos simples comerciais diferentes, de origem asiática tropical, com introgressão de germoplasma temperado. Os vinte e dois híbridos topcrosses, juntamente com as testemunhas comerciais 'Tropical Plus®' (Syngenta) e 'AF-428®' (Sakata Seed Sudamerica), os testadores temperados 106 e 107, bem como o híbrido entre as populações originais de 106 e 107 em equilíbrio (S0), totalizando 27 tratamentos, foram avaliados em duas épocas de cultivo, primavera e verão com semeadura em outubro de 2012 e janeiro de 2013, respectivamente. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso com três repetições. Foram avaliadas as seguintes características agronômicas: número de dias para florescimento feminino, altura de planta, altura de espiga e porcentagem de acamamento. Após a colheita foi avaliada a produção total com ... / Abstract: This study aims to evaluate the combining ability of tropical lines and testers with introgression of temperate germplasm for the production of sweet corn hybrids adapted to Brazilian conditions. Twenty-two topcrosses hybrids originated from crosses of eleven super sweet tropical corn lines crossed with two super sweet testers who had temperate germplasm introgression were obtained. The tropical strains were obtained through six generations of inbreeding and selection after the incorporation of the shrunken-2 gene in six different populations of Brazilian amylaceous corn, using the method of partial backcross. The two testers used, called 106 and 107, were made by equal mixture of seeds of lines S3 obtained from two different commercial single cross hybrids, of tropical Asian origin, with temperate germplasm introgression. The twenty-two topcrosses hybrids, along with the commercial controls 'Tropical Plus®' (Syngenta) and 'AF-428®' (Sakata Seed Sudamerica), temperate testers 106 and 107, as well as the hybrid between the original populations of 106 and 107 in equilibrium (S0), totaling 27 treatments were evaluated in two cropping seasons, spring and summer, with sowing in October 2012 and January 2013, respectively. The experimental design was the randomized block design with three repetitions. The following agronomic traits were evaluated: number days to female flowering, plant height, ear height, and plant lodging percentage. After harvesting, total production with straw, straw percentage, total production without straw, commercial production without straw and straw cover were assessed. In the commercial ones, ear length without straw, ear diameter without straw, number of rows of kernels per ear, filling ... / Mestre

As células estreladas hepáticas (HSCs) são a principal fonte de componentes de matriz extracelular em doenças crônicas do fígado e, por esta razão, exercem um papel fundamental no desenvolvimento e na manutenção da fibrose hepática. Os nucleotídeos e nucleosídeos são moléculas sinalizadoras que regulam diversos processos no fígado e têm um importante papel na patogênese da fibrose hepática. As ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotídeo pirofosfatase fosfodiesterases (E-NPPs), ecto-5’-nucleotidase (eNT/CD73) e a fosfatase alcalina tecido inespecífica (TNALP) são enzimas localizadas na superfície celular que regulam a concentração dos nucleotídeos no meio extracelular e, desse modo, modulam os efeitos biológicos mediados por eles via ativação dos receptores P1 e P2. Assim, neste estudo nós comparamos o metabolismo extracelular de nucleotídeos e o nível transcricional das ectoenzimas em HSCs quiescentes e ativadas usando uma linhagem de células estreladas hepáticas murina GRX. Estas células expressam o fenótipo miofibroblástico em meio basal e o tratamento com retinol ou indometacina induz a mudança das células GRX para o fenótipo quiescente das HSCs. Os dois fenótipos das células GRX expressam as NTPDase3 e 5, NPP1, 2 e 3, ecto-5’- nucleotidase e TNALP. Entretanto, apenas as HSCs ativadas expressam a NTPDase6. Nas HSCs quiescentes, a hidrólise de nucleosídeos trifosfatados foi significativamente mais alta e foi correlacionada com o aumento na expressão do mRNA da Entpd3 e ENPP3. Os nucleosídeos difosfatados foram hidrolisados de maneira similar pelos dois fenótipos das células GRX e esta atividade foi associada com o aumento da expressão do mRNA da Entpd5 nas células quiescentes e com a expressão da Entpd6 apenas nas HSCs ativadas. A atividade AMPásica foi maior nas células quiescentes do que nas células ativadas e foi relacionada com o aumento da atividade e da expressão do mRNA da ecto-5’-nucleotidase. O tratamento com retinol também envolve a ativação transcricional da TNALP. Para analisar o papel fisiológico da eNT/CD73 nas HSCs, o mRNA e a expressão desta proteína foram reduzidos nas células GRX utilizando a técnica de RNAi. O knockdown da eNT/CD73 aumentou a expressão do mRNA da TNALP e do colágeno I e alterou a adesão e a migração celular através de um mecanismo independente da hidrólise de nucleotídeos. Nós também avaliamos o efeito da adenosina na regulação de marcadores de ativação das HSCs. Este nucleosídeo diminuiu a proliferação, a migração, a transcrição de colágeno I e das metaloproteinases 2 e 9 e diminuiu a transcrição da eNT/CD73. As diferenças na atividade e expressão das ectonucleotidases entre os dois fenótipos das células GRX sugerem que estas enzimas modulam a concentração de nucleotídeos/nucleosídeos e geram efeitos distintos na sinalização purinérgica nos dois fenótipos e podem ser importantes alvos na regulação das funções das HSCs. / Hepatic stellate cells (HSC) are recognized as a primary cellular source of matrix components in chronic liver disease and, therefore, play a critical role in the development and maintenance of liver fibrosis. Nucleotides and nucleosides are signaling molecules that regulate a variety of activities within the liver and play a role in the pathogenesis of hepatic fibrosis. Ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterases (E-NPPs), ecto- 5’-nucleotidase (eNT/CD73) and tissue non-specific alkaline phosphatase (TNALP) are enzymes that are located at the cell surface and regulate the concentration of extracellular nucleotides, thereby modulating their biological effects by the activation of P1 and P2 receptors. Thus, in the study we compared the extracellular metabolism of nucleotides and transcriptional levels of ectoenzymes in activated and quiescent HSC of the mouse hepatic stellate cell line GRX. This cell line expresses a myofibroblast phenotype in basal medium and both retinol and indomethacin treatment induced a phenotypic change of GRX cells to quiescent HSC. Two phenotypes of GRX cells expressed NTPDase3 and 5, NPP1, 2 and 3, ecto-5’-nucleotidase/CD73 and TNALP. However, only activated HSC expressed NTPDase6. In quiescent HSC, the hydrolysis of triphosphonucleosides was significantly higher and was related to an increase in Entpd3 and ENPP3 mRNA expression. The diphosphonucleosides were hydrolyzed at a similar rate by two phenotypes of GRX cells and this hydrolysis was associated with an up-regulation of Entpd5 mRNA expression in quiescent-like HSC, whilst Entpd6 mRNA expression was observed only in activated HSC. The AMPase activity in quiescent HSC was higher than myofibroblasts and was related to an increase in ecto-5’-nucleotidase activity and its mRNA expression. The treatment with retinol also involves transcriptional activation of TNALP. To analyze the biological significance of eNT/CD73 in HSC, the expression of eNT/CD73 mRNA and protein was reduced in GRX cell line using the technique of RNAi. ENTCD73 knockdown leads to an increase in mRNA expression of TNALP and collagen I, and a clear alteration of cell adhesion and migration by a mechanism not dependent of changes in nucleotide metabolism. We also tested the effect of adenosine on the regulation of activation markers of in HSCs. This nucleotide decreased proliferation, migration, transcription of collagen I and matrix metalloproteinases 2 e 9 and increased transcription of eNT/CD73. The differential ectonucleotidases activities and expressions in two phenotypes of GRX cells suggest that these enzymes modulate the concentration of nucleotides/nucleosides and affect purinergic signaling differently in the two phenotypes and may play a role in the regulation of HSC functions.

Orientador: Luciano Hauschild / Coorientador: Paulo Henrique Reis Furtado Campos / Banca: Alex Sandro Campos Maia / Banca: Urbano dos Santos Ruiz / Resumo: Objetivou-se com esse estudo avaliar o sistema de alimentação sequencial como uma ferramenta para atenuar os efeitos do estresse cíclico por calor em suínos de duas linhagens genéticas nas fases de crescimento e terminação. Oitenta suínos machos castrados de 22kg (± 2,5) PV foram distribuídos em um delineamento experimental inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3x2 (3 programas de alimentação e 2 linhagens genéticas; 3 PA e 2 LG) sendo o animal a unidade experimental. Os PA foram: Controle (CON), alta-gordura/baixa-proteína bruta (AG/BP) e Alimentação Sequencial [SEQ, de 1800 às 1000 h dieta controle (Tempo-Período 1, TP1) e de 1000 às 1800 h dieta AG/BP (TP2)]. A temperatura foi 22.3 ± 0.4ºC para TP1 e 30.2 ± 0.5ºC para TP2. A duração do período experimental foi de 84 dias subdividido em três fases: crescimento 1 (0 a 20 dias), crescimento 2 (21 a 48 dias) e terminação (49 a 83 dias). O consumo de ração foi registrado em tempo real pelo sistema automático de alimentação (AIPF). Os animais foram pesados no início e no término de cada fase experimental e nos dias 0, 35 e 75 foi mensurada a composição corporal. Houve interação entre LG e Tempo-Período (TP) para consumo médio de ração (CMR) por hora (P < 0,05). A 22ºC o CMR não se diferiu entre linhagens (P > 0,05) contudo, a 30ºC foi maior para linha B (P < 0,05). Houve interação (P < 0,05) entre PA e LG para custo energético de ganho de massa magra. De 35 a 75 dias, SEQ apresentou similar custo para ganho de massa magr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed at evaluating the sequential feeding system as a tool to attenuate the effects of cyclic heat stress in two genetics of growing-finishing pigs. Eighty 22kg (± 2.5) BW barrows were assigned in a completely randomized experimental design, in factorial scheme 3x2 (3 feeding programs and 2 genetic lines; 3FP and 2GL) being the animal the experimental unit. The FP were: Control (CON), high-fat/low-crude protein (HF/LP) and Sequential Feeding [SEQ, from 1800 to 1000 h control diet (Time-Period 1, TP1) and from 1000 to 1800 h HF/LP diet (TP2)]. The temperature was 22.3 ± 0.4ºC for TP1 and 30.2 ± 0.5ºC for TP2. The experimental period lasted 84 days subdivided into three phases, growing 1 (0 to 20d), growing 2 (21 to 48d), and finishing phase (49 to 83d). Feed intake was recorded using Automated Feeder System. Pigs were weighed at beginning and end of each experimental phase and on days 0, 35 and 75 were measured the body composition. There was interaction between GL and time-period (TP) for average feed intake (AFI) per hour (P < 0.05). At 22ºC the AFI did not differ between lines (P > 0.05), but at 30ºC the line B pigs had higher values than line A (P < 0.05). There was interaction (P < 0.05) between FP and GL for energy cost of lean gain. From 35 to 75d, SEQ had similar energy cost of lean gain for line A compared to CON (P > 0.05). However, for both lines, SEQ had higher the energy cost of lean than CON (P < 0.05). In growing 1 e 2 there was not difference (P > 0... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre