Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4529_1.pdf: 1434211 bytes, checksum: e8fb4067a658398a644838212b020513 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / No Brasil, o uso popular de plantas com propriedades curativas é uma prática secular deixada como herança pelos índios, negros e europeus e largamente utilizada na Região Nordeste. Lippia sidoides Cham. (Verbenaceae), freqüente na caatinga nordestina, é utilizada no tratamento de infecções da cavidade oral e da vagina, por apresentar forte atividade antimicrobiana contra fungos e bactérias. Candidíase vaginal é uma das infecções mais comuns do trato genital feminino. Com o objetivo de encontrar alternativa para o tratamento desta patologia, extratos etanólico e hidroalcoólico de Lippia sidoides Cham. foram testados frente a isolados clínicos de Candida spp, obtidos de secreção vaginal. O teste de atividade antifúngica foi realizado pelo método de difusão em disco de papel, a uma concentração de 2.000 μg/disco (triplicata) e o extrato mais ativo foi selecionado. Como padrão de comparação utilizou-se Fluconazol a 25 μg/disco. A concentração mínima inibitória (CMI) para as linhagens de Candida spp, que apresentaram halos de inibição iguais ou superiores a 14 mm de diâmetro no teste de difusão em disco, foi determinada pelo método de diluições seriadas em meio sólido. Foi avaliada a toxicidade aguda do extrato selecionado, determinando-se a DL50, em camundongos albinos Swiss fêmeas (Mus musculus) por via intraperitoneal. O creme de aplicação vaginal à base de Lippia sidoides Cham. foi elaborado pelo método de fusão. A eficácia do produto acabado foi avaliada qualitativamente, frente a duas linhagens de Candida spp, pelas técnicas do poço em camada dupla (well) e do ágar spot test. Foram realizadas técnicas de caracterização que permitem detectar a presença ou ausência de diferentes classes de compostos, análises cromatográficas e bioautograma do extrato selecionado. Das linhagens de Candida spp estudadas, 71% foram identificadas como Candida albicans. O extrato etanólico bruto pilular das folhas de Lippia sidoides Cham. foi selecionado, por apresentar os melhores resultados no teste de difusão em disco, havendo inibido todas as linhagens de Candida spp testadas, com halos entre 12 e 20 mm de diâmetro, enquanto que com o fluconazol, oito não foram inibidas; 16 apresentaram halos entre 11 e 20 mm de diâmetro; seis, de 21 a 30 mm e 15, acima de 31 mm. A CMI foi de 250 μg/mL para todas as linhagens. A DL50 foi de 1.329,19 mg/Kg de peso corpóreo. A produção da forma farmacêutica plástica creme vaginal à base de Lippia sidoides Cham. apresentou-se viável em escala piloto. O creme inibiu as duas linhagens testadas, com halos de 12,33 a 21 mm de diâmetro. A análise fitoquímica do extrato estudado revelou a presença de fenóis, flavonóis e xantonas, entre outros. A análise cromatográfica revelou a presença do Timol no extrato estudado, cuja atividade anti-Candida foi comprovada pelo bioautograma. Considerando-se que o antifúngico utilizado como padrão é um produto puro, com reconhecida ação anti-Candida, pode-se concluir que o extrato etanólico bruto pilular de folhas de Lippia sidoides oferece uma alternativa promissora no tratamento da candidíase vaginal

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Com o objetivo de preservar as propriedades e otimizar o encapsulamento do Ãleo essencial de Lippia sidoides (OELS), foi preparado nanopartÃculas de quitosana e goma carregadas com OELS via spray-drying, usando gomas nativas da regiÃo do Nordeste brasileiro. As gomas foram extraÃdas dos exsudatos das Ãrvores da Anacardium Occidentale (goma do cajueiro), Sterculia striata (goma do chichÃ) e Anadenanthera macrocarpa (goma do angico). As nanopartÃculas foram caracterizadas por espectroscopia na regiÃo do infravermelho (FTIR) e na regiÃo do UV/VIS, tamanho de partÃculas e potencial zeta, anÃlise tÃrmica (TGA/DSC), e cromatografia gasosa (GC-MS). O espectro do FTIR mostrou as principais bandas da quitosana e das gomas, em 1550 e em 1647 cm-1. Observou-se diferentes propriedades nas nanopartÃculas em funÃÃo do tipo de matriz utilizada. As partÃculas produzidas apresentaram tamanho de 17 a 800 nm, onde a matriz de goma do cajueiro produziu as partÃculas maiores, e a matriz de goma do chichà as partÃculas menores. O potencial zeta variou de -40 mV a +30 mV, onde houve maior variaÃÃo quando utilizou-se a matriz com goma do chichÃ. A anÃlise tÃrmica evidenciou os eventos de perda de massa para as amostras, onde atà 200 ÂC as amostras perdem no mÃximo 20% da sua massa inicial. O encapsulamento do OELS variou entre 6 e 16 %, onde as matrizes com goma do cajueiro e do chichà apresentaram os maiores valores. As amostras com goma do cajueiro apresentaram boa estabilidade de encapsulamento apÃs 12 meses, onde o teor de Ãleo encapsulado nÃo se alterou. A anÃlise por cromatografia gasosa mostrou que o Ãleo encapsulado nÃo apresentou em sua composiÃÃo diferenÃa significativa à do Ãleo inicial, encapsulando os principais componentes. A liberaÃÃo do OELS pelas matrizes foi relativamente lenta, onde entre 60 e 100% do Ãleo foi liberado em 48 horas. O estudo cinÃtico da liberaÃÃo do OELS indicou que a liberaÃÃo segue o modelo de Higuchi, com a liberaÃÃo pelas amostras variando entre fenÃmenos fickianos e nÃo-fickianos. / Aiming to preserve the properties and optimize the encapsulation of the Lippia sidoides essential oil (LSEO), this work reports on the preparation of chitosan-gum nanoparticles loaded with LSEO by spray-drying, using gums extracted from native trees of northeast of Brazil. The gums used were extracted from exudates of Anacardium Occidentale tree (Cashew gum), Sterculia striata trees (Chichà gum) and Anadenanthera macrocarpa trees (Angico gum). Samples were characterized by FTIR and UV/VIS spectroscopy, particle size and zeta potential, thermal analysis (TGA/DSC) and gas chromatography (GC-MS). The FTIR spectrum showed the main bands of chitosan and gums, in 1550 and 1647 cm-1. Particle sizes ranged from 17 nm to 800 nm, where the angico gum matrix presented the smallest sizes and cashew gum matrix the larger sizes. The zeta potential varied from -40 mV +30 mV, where chichà gum matrix presented the biggest variation. Thermal analysis showed the events of mass loss for the samples, where up to 200 C there are a maximum of 20% mass lost compared to the initial mass. The encapsulation of LSEO ranged between 6 and 16%, where the cashew gum and chichà gum matrixes presented the highest values. Cashew gum samples showed good encapsulation stability after 12 months, where the encapsulated oil content has not changed. The encapsulated oil did not present significant difference in its composition to the initial oil, encapsulating the key components. The release of LSEO from the matrixes was relatively slow, where between 60 and 100% of the oil was released in 48 hours. The kinetic study of LSEO release indicated that the release followed the Higuchi model, with the release by the samples varying between fickians and non-fickians phenomena.

Strawberry cultivation presents as limiting problem the phytosanitary management, which, associated with the residues of the toxic fungicides, the resistance of pathogens and the fragility of the fruit during transport and storage, make the commercialization of this product a challenge. The identification and development of new products with antifungal action, such as essential oils (EOs), is a promising alternative. Therefore, the present study addresses: the in vitro antifungal activity of three essential oils, Eucalyptus staigeriana, Lippia sidoides and Pimenta pseudocaryophyllus; the chemical composition and the mode of action of the EO with the highest potential and its in vivo activity when associated with carboxymethylcellulose (CMC), as well as its effects on the sensory quality and postharvest of strawberries. In chapters two, three and four, the studies were directed to Colletotrichum acutatum, Rhizopus stolonifer and Botrytis cinerea, respectively. In the last chapter, the antifungal activity of a commercial, alternative formulation with low toxicity was evaluated against the same three pathogens. Among the EOs evaluated, the one from L. sidoides presented the best antifungal activity, with the predominance of thymol in its composition, causing morphological alterations in the pathogens. in vivo, the strawberries treated with CMC associated to the EO presented a reduction in the severity of the diseases and improvements in the physicochemical properties with little alteration in the sensory quality of the fruit. The commercial formulation also presented a potential for the control, in vitro and in vivo, of the main postharvest strawberry-deteriorating fungi. / A cultura do morangueiro tem como problemática limitante o manejo fitossanitário, o que associado aos resíduos dos fungicidas tóxicos, à resistência dos patógenos e à fragilidade dos frutos durante o transporte e armazenamento, tornam a comercialização deste produto um desafio. A identificação e o desenvolvimento de novos produtos com ação antifúngica, como óleos essenciais (OEs), é uma alternativa promissora. Assim, o presente estudo discute: a atividade antifúngica in vitro de três óleos essenciais, Eucalyptus staigeriana, Lippia sidoides e Pimenta pseudocaryophyllus; a composição química e o modo de ação do OE de maior potencial e sua atividade in vivo quando associado com carboximetilcelulose (CMC), assim como seus efeitos na qualidade sensorial e pós-colheita dos morangos. Nos capítulos dois, três e quatro os estudos foram direcionados para Colletotrichum acutatum, Rhizopus stolonifer e Botrytis cinerea, respectivamente. No último capítulo avaliou-se a atividade antifúngica de uma formulação comercial, alternativa e de baixa toxidez contra os mesmos três patógenos. Dentre os OEs avaliados, o de L. sidoides apresentou melhor atividade antifúngica, com a predominância do timol em sua composição, causando alterações morfológicas nos patógenos. in vivo, os morangos tratados com CMC associado ao OE apresentaram redução na severidade das doenças e melhorias nas propriedades físico-químicas com pouca alteração na qualidade sensorial da fruta. A formulação comercial também apresentou potencial de controle, in vitro e in vivo, dos principais fungos deteriorantes pós-coheita do morango.

L ippia sidoides Cham. is a plant indicated to integrate the Brazilian phytotherapy program of SUS; this species is characterized by its antimicrobial activity due to its amounts of thymol and carvacrol. Other constituents that contribute for this activity are flavonoids and naphtochinones. Aiming to optimize the use of simple galenic preparations obtained from this plant as antimicrobial agent, as well as to find a extraction procedure with environmental friendly characteristics and with good yields, we evaluated seven different extracts. Maceration, extraction by soxhlet, ultrasound-assisted extraction, microwave-assisted extraction and supercritical fluid extraction were compared in relation to the yield of dry extract, time and solvent consumption and antibacterial activity. The extract obtained by soxhlet was more profitable (26.3%), whereas the extract obtained by maceration spent more solvent and also time (30240 min and 2300 ml, respectively). The ultrassonic extraction by bath and horn, one of 130W and another of 750W, furnish extracts with intermediate values in time and solvent consumption (60 min e 125-250 ml), and not presented any advantages in extraction considering the evaluated parameters. The extract obtained by supercritical fluid extraction used CO2 and showed lower values of minimal inhibitory concentration for all bacterial strains tested and in generally it was superior to the other methods against both Gram-negative as Gram-positives. The characterization of the extract with the lowest MIC values was performed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), allowing the identification of thymol, carvacrol as major components. Additionally, thymol acetate, Z-cariophyllene, Ecariophyllene, germacrene D and cariophyllene oxide, as well as trace constituents were identified. The supercritical fluid extraction (SFE) performed at 50° C and 150 bar also proved be superior in selectivity for the extraction of the active substances. / Lippia sidoides Cham. é uma das espécies indicada para integrar o programa de fitoterapia no SUS, e se caracteriza pela atividade antimicrobiana, atribuída aos elevados teores de timol e carvacrol em suas folhas. Outros constituintes que contribuem para esta atividade são flavonóides e naftoquinonas. Objetivando a otimização da atividade antimicrobiana de preparações galênicas simples obtidas a partir desta planta, bem como a busca por um método extrativo menos poluente e ao mesmo tempo rentável, foram preparados extratos por sete diferentes métodos. Maceração, percolação a quente, extração por banho e sonda de ultrassom, extração por microondas e extração por fluído supercrítico foram avaliados em relação ao rendimento de extrato seco, consumo de tempo e solvente bem como quanto à atividade antimicrobiana. O extrato obtido por percolação a quente foi o mais rentável (26,3%) enquanto que o método que consumiu maior tempo e solvente foi a maceração (30240 min e 2300 ml, respectivamente). A extração ultrassônica por banho e aquela utilizando sondas, uma de 130W e outra de 750W, apresentaram valores intermediários quanto ao consumo de tempo e solvente (60 min e 125-250 ml), sendo que não apresentaram nenhuma vantagem considerandose os parâmetros avaliados. No ensaio da atividade antimicrobiana, o extrato obtido por fluído supercrítico apresentou valores de concentração inibitória mínima (CIM) menores para as bactérias testadas, tanto contra Gram-positivos, quanto contra Gram-negativos. A caracterização química do extrato com os menores valores de CIM foi realizada através de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), e permitiu a identificação de timol e carvacrol como compostos majoritários além de acetato de timol, Z-cariofileno, E-cariofileno, germacreno D e óxido de cariofileno, bem como outros constituintes traço. A extração por fluído supercrítico utilizando CO2 foi feita a 50°C e 150 bar e mostrou-se superior na seletividade de extração dos compostos ativos. Palavras-chave: Lippia sidoides Cham.; métodos extrativos; atividade antibacteriana.

Óleos essenciais (OEs) constituem misturas complexas de várias moléculas voláteis hidrofóbicas produzidas pelo metabolismo secundário de plantas. Eles são empregados em diversos setores industriais, como por exemplo, o farmacêutico, alimentício, cosmético, agricultura e pecuária, em virtude de suas comprovadas ações bactericida, virucida, fungicida, antiparasitária, inseticida, analgésica, sedativa, anti-inflamatória, espasmolitica e anestésica local. Também têm sido utilizados na proteção de alimentos (como antioxidantes e conservantes), e incorporados em embalagens ativas. Os OEs podem apresentar problemas de instabilidade quando expostos ao calor, umidade, oxigênio e luminosidade. A reduzida solubilidade em água e sua elevada volatilidade são outras limitações para seu uso. A microencapsulação e nanoencapsulação dos OEs são estratégias viáveis e eficientes à proteção e modulação da liberação dos compostos bioativos, promovendo o aumento da estabilidade físico-química, proteção contra fatores ambientais, redução da volatilidade, aumento da solubilidade, biodisponibilidade, atividade biológica, redução da toxicidade, entre outros. A encapsulação em carreadores lipídicos micro e nanoestruturados tem recebido significativa atenção nos setores farmacêutico e alimentício, em face de várias vantagens, como baixa toxicidade, facilidade de escalonamento, baixo custo de produção e capacidade de encapsular compostos hidrofílicos e lipofílicos. Este trabalho teve como objetivo estudar a formação e secagem de sistemas lipídicos micro e/ou nanoestruturados contendo óleo essencial de Lippia sidoides, empregando diferentes processos tecnológicos e avaliar a influência destes nas propriedades apresentadas pelo produto líquido e seco obtido (propriedades físico-químicas, estabilidade, atividade antimicrobiana e retenção do timol, composto ativo majoritário no OE). Os resultados mostraram que a composição das formulações, as condições e o processo de secagem tiveram efeitos significativos nas propriedades físico-químicas e na estabilidade do produto, além de influenciarem também a retenção de timol. Este trabalho permitiu obter informações relevantes sobre os processos de secagem das formulações lipídicas por spray drying e liofilização e também sobre as características apresentadas pelos pós obtidos / Essential oils (EOs) are complex mixtures of various volatile molecules (hydrophobic) produced by the plants secondary metabolism. Essential oils have high importance in various industrial sectors, such as pharmaceutical, food, cosmetic, health, agriculture and livestock; mainly due to its proved biological activity as bactericidal, virucidal, fungicidal, antiparasitic, insecticidal, analgesic, sedative, anti-inflammatory, spasmolytic and local anesthetic activities. Essential oils have also been used in food protection (as antioxidants and preservatives), and embedded in active food packaging. It is also characteristic of EOs present problems of instability when exposed to heat, moisture, oxygen and light. The reduced water solubility and high volatility are another limitation for the use of EOs. The micro and nanoencapsulation technologies of EOs arises as a viable and effective solution, increasing the product physicochemical stability, furnishing protection against environmental factors, reducing volatility, modulate the release, increasing bioavailability, reducing toxicity, among others. Encapsulation in lipid carriers has received significant attention in the pharmaceutical and food sectors, mainly due to the several attributed advantages such as low toxicity, capability to encapsulate hydrophilic and lipophilic compounds, low production costs and easy scale up. The objective of this work was to study the formation and drying of micro and/or nanostructured lipid systems loaded with essential oil of Lippia sidoides using different technological processes and to evaluate their influence on the properties presented by the liquid and dry product obtained (physicochemical properties, stability, antimicrobial activity and retention of thymol, major active compound in EO). The results showed that the composition of the formulations, the conditions and the drying process had significant effects on the physicochemical properties and the stability of the product, besides also influencing the retention of thymol. This work allowed to obtain relevant information on the drying processes of the lipid formulations by spray and freeze drying and also on the characteristics presented by the obtained powders

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A periodontite se configura como um grave problema de saÃde pÃblica no mundo, sendo um importante fator de risco para doenÃas cardiovasculares contribuindo de sobremaneira na perda de dentes em adultos. BactÃrias periodontopatogÃnicas e fatores do hospedeiro sÃo necessÃrios para o desenvolvimento e progressÃo desta patologia. Os produtos naturais podem constituir uma nova alternativa de tratamento, sendo descrito a eficÃcia de colutÃrios a base de Ãleo essencial pelo nosso grupo. O objetivo do presente estudo foi investigar os mecanismos envolvidos no efeito de gÃis a base de produtos naturais e seus derivados na doenÃa periodontal experimental (DPE): gel elaborado a partir do Ãleo essencial de Alecrim pimenta (Lippia sidoides 0,5%) (GAl ), associado (GAA) ou nÃo ao gel do extrato da Aroeira (Myracrodruon urundeuva 5%); (GAr), gel elaborado a partir de carvacrol 300Âg/g (GCa), associado (GCC) ou nÃo ao gel de Chalconas DimÃricas 600Âg/g (GCh); comparando seus efeitos com a doxiciclina, controle positivo (GDX). A DPE foi induzida passando-se fio de nÃilon 3.0 em torno do segundo molar superior esquerdo de ratos Wistar machos, permanecendo durante 11dias. Os gÃis foram aplicados topicamente na regiÃo gengival imediatamente apÃs a induÃÃo da doenÃa e trÃs vezes ao dia durante 11 dias. Os parÃmetros avaliados foram: Ãndice de perda Ãssea (IPO), anÃlise microbiolÃgica, histopatolÃgica, dosagem de citocinas (TNF-α; IL-1β), mieloperoxidase (MPO) por ELISA e variaÃÃo da massa corpÃrea. Tanto o GAA e o GCC reduziram o IPO comparavelmente à doxiciclina. Na anÃlise histopatolÃgica, o periodonto dos animais tratados com GAA e GCC mostrou a preservaÃÃo do osso alveolar, cemento e das fibras colÃgeno, alÃm de mostrar a reduÃÃo do infiltrado inflamatÃrio gengival. A inibiÃÃo da infiltraÃÃo neutrofÃlica foi confirmada atravÃs da MPO. A dosagem de citocinas mostrou que o GAA reduziu os nÃveis de TNF-α e IL-1β no tecido gengival no 11 dia. Todos os gÃis inibiram o crescimento de bactÃrias caracterÃsticas da periodontite e promoveram um aumento na massa corpÃrea em relaÃÃo ao grupo veÃculo. Esses resultados mostram que os gÃis testados possuem importante atividade na DPE, sugerindo a relevÃncia de testes clÃnicos destes fitofÃrmacos no tratamento da doenÃa periodontal / Periodontitis is a chronic inflammatory disease in which alveolar bone resorption and cementum associated with collagen fibers destruction are important events. It configures as a serious problem of public health in the world, being an important risk factor for cardiovascular diseases and to teeth loss in adults. Bacteria and host factors are necessary to the development of this pathology. The natural products can constitute a new alternative of treatment, being described to be effective as a natural mouthrinse by our research group. The objective of the present study was to investigate the mechanisms involved on the effect of gels based on natural products and its derivatives in the experimental periodontal disease (EPD): gel elaborated from the essential oil of Alecrim pimenta 0.5% (GAl) (Lippia sidoides), associated (GAA) or not to the gel of the extract of the Aroeira 5% (GAr) (Myracrodruon urundeuva); gel elaborated from carvacrol 300Âg/g (GCa), associate (GCC) or not to the gel of Dimeric Chalcones 600Âg/g (GCh); comparing its effects with the doxycycline, used as positive control (GDX). Periodontitis was induced by a nylon thread ligature surgically placed around the cervix of the second left maxillary molars of male Wistar rats. Animals were treated with locally applied gels in the gingival region immediately after the EPD induction three times a day during 11 days. The parameters analysed were alveolar bone loss, histopathologic and microbiological analysis, myeloperoxidase (MPO); levels of TNF-α and IL-1β (by ELISA) and body mass variation. GAA and GCC reduced the alveolar bone loss similar to GDX. Histopatologically, the periodontium of animals treated with GAA and GCC showed preservation of alveolar bone, cementum and collagen fibers of periodontal ligament and reduced neutrophilic and mononuclear cell infiltrate. The effect on neutrophilic infiltrate was confirmed by MPO. There was a significant reduction of TNF-α and IL-1β levels in the group treated with GAA compared to the vehicle group. All natural gels inhibited the growth of bacteria involved in periodontitis and were able to increased body mass compared to vehicle group. These results support clinical trials of these phytochemicals in the treatment of periodontal disease

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-10-05T13:55:43Z No. of bitstreams: 1 joaosuendermoreira.pdf: 2727096 bytes, checksum: 15959d5ff7f375e41f8c2bc20e5308fe (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-10-05T13:58:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 joaosuendermoreira.pdf: 2727096 bytes, checksum: 15959d5ff7f375e41f8c2bc20e5308fe (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T13:58:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 joaosuendermoreira.pdf: 2727096 bytes, checksum: 15959d5ff7f375e41f8c2bc20e5308fe (MD5) Previous issue date: 2009-03-12 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Um dos principais problemas mundiais na agricultura está diretamente relacionado às enormes perdas na produção causada por fungos fitopatogenicos, onde sua infecção nas culturas se dá desde o plantio até a pós- colheita. O fungo Botrytis cinerea, causador do mofo cinzento em mais de 200 espécies de plantas é um grande problema no agronegócio em todo o mundo. O uso de fungicidas é o principal método de controle em plantas, enquanto os resultados obtidos de imediato e a facilidade de aplicação justificam o seu uso. No entanto, o uso contínuo de fungicidas pode promover a seleção de fungos resistentes além de causar a contaminação de ecossistemas. Com o objetivo de encontrar uma solução para esse problema, diversos estudos tem se concentrado na busca de novas alternativas de controle, como por exemplo, as proteínas de plantas com atividades antifúngicas (AFPs). Nesse sentido, uma seleção de peptídeos antimicrobianos de flores, folhas e sementes de espécies do gênero Lippia bem como o isolamento de peptídeos antifúngicos de flores de Lippia sidoides foi o objetivo desse trabalho. Neste trabalho, a purificação e identificação de dois novos peptídeos de aproximadamente 10 kDa e 15 kDa de flores de Alecrim-pimenta (Lippia sidoides) foi descrito. As flores de L. sidoides, depois de secadas em estufa a 25o por cinco dias, foram submetidas à extração de proteínas com solução de HCl 0,1% e NaCl 0,6M, seguido por precipitação com sulfato de amônia (100%). Após a precipitação, o extrato foi dialisado contra água destilada (cut off 1,0 kDa) e liofilizado. A fração rica foi aplicada em cromatografia hidrofóbica Octyl-sepharose, seguida por cromatografia de fase-reversa de HPLC (Vydac C18-TP). Bioensaios com EB, e fração PR in vitro indicaram a inibição do crescimento do fungo Botrytis cinerea. As sequências N-terminal, obtidas por degradação de Edman, seguidas por alinhamento indicam que esses dois peptídeos podem ser classificados com proteínas R NBS-LRR. Esta descoberta pode contribuir, futuramente, para o desenvolvimento de produtos biotecnológicos como drogas antifúngicas e plantas transgênicas com resistência elevada a fungos patogênicos. / One of the major global issues in agriculture could be directly related to the severe production crop losses caused by phytopathogenic fungi, especially when infection affects post-harvest cultures. In this view, the fungus Botrytis cinerea is able to cause gray mold in more than 200 species of plants, being considered a major problem for the agribusiness. The use of fungicides is a primary fungi control method in plants, due to velocity and facility of application. However, the continuous use of fungicides may promote the selection of resistant fungi and also the ecosystems contamination. Aiming to find different solutions to this problem, several studies have focused on the search for new alternatives to fungi control, such as plant proteins with antifungal activities (AFPs). In this view, a selection of antimicrobial peptides from flowers, leaves and seeds from Lippia genus and further isolation of antifungal peptides from Lippia sidoides flowers was focused in this work. In this work, the purification and identification of two novel peptides of approximately 10 kDa and 15 kDa from flowers of rosemary-pepper (L. sidoides) was described. L. sidoides flowers were oven dried at 25 oC for 5 days, following protein extraction with a solution containing 0.1% HCl 0.6 M NaCl, and further ammonium sulfate precipitation (100%). After precipitation the extract was dialyzed against distilled water (cut off 1.0 kDa) and lyophilized. The rich fraction was applied onto an Octyl-Sepharose hydrophobic chromatography, followed by HPLC reversed-phase chromatography (Vydac C18-TP). Bioassays using crude extract and in vitro PR fraction indicated the inhibition of Botrytis cinerea growth. N-termini sequences, obtained by the Edman degradation, followed by alignment indicate that these two peptides can be classified as NBS-LRR R proteins. This discovery may help in a near future to the development of biotechnology products such as antifungal drugs and transgenic plants with enhanced resistance to fungal pathogens.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-05-12T20:06:08Z No. of bitstreams: 1 TatianePenha.pdf: 1070731 bytes, checksum: 317d377ddfce7d741b49eecde3cf7ec4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T20:06:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TatianePenha.pdf: 1070731 bytes, checksum: 317d377ddfce7d741b49eecde3cf7ec4 (MD5) Previous issue date: 2016-10-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / The tick Rhipicephalus microplus, found in tropical and subtropical regions, has caused great harm to the Brazilian livestock. The damage caused by this tick the Brazilian livestock exceeds three billion dollars. Verbenaceae Lippia genus, especially the species L. sidoides and L. gracilis, have been reported with potential activity in larvae and R. microplus females. Therefore, the aim of this study was to evaluate the acaricide activity of L. sidoides and L. gracilis essential oils and its major compounds thymol and carvacrol and characterize morphological changes in ovaries of R. microplus females from lethal concentrations 50 (LC50) and 75% (LC75) of the study population. After selection of the genotypes (LGRA-106, LGRA-201, LSDI-102 and LSDI-103), groups of 10 engorged females were subjected to the immersion test in essential oils at different concentrations and DMSO 3% was used for the control. After seven days, the ticks were dissected in phosphate buffer solution and the ovaries were fixed in 2.5% glutaraldehyde for a period of 24 hours. The tissues were dehydrated and embedded in plastic molds Leica resin for histological analysis. The results visualization and characterization of the ovary and the different stages of development of oocytes. In the control group, treated with 3% DMSO, changes in the tissues have not been verified. In groups treated with the L. gracillis oils and L. sidoides oils, vacuolization was observed in oocytes II, III, IV and V, cell membrane disintegration in oocytes II, III, IV and V, with complete morphological deformation of oocytes IV and V. The major compounds, thymol and carvacrol seem to be actively working on these changes. The results showed activity of the different genotypes of the essential oils and their major compounds in larvae and females of R. microplus and allowed to elucidate the mechanism of action of the same in the oogenesis of the females, leading to believe that the compounds tested are promising for the development of acaricide products. / O carrapato Rhipicephalus microplus, encontrado em regiões tropicais e subtropicais, ocasionam mais de três bilhões de dólares à pecuária brasileira. Óleos essenciais de Verbenáceas do gênero Lippia, especialmente Lippia sidoides e Lippia gracilis, têm sido descritos com potencial atividade carrapaticida e interferindo na reprodução de diferentes espécies de carrapatos. O objetivo desse trabalho foi avaliar a atividade carrapaticida dos óleos essenciais de L. sidoides e L. gracilis e seus compostos majoritários timol e carvacrol, selecionando os genótipos que apresentam maiores atividades contra o carrapato bovino e caracterizar as alterações morfológicas dos ovários de fêmeas de R. microplus a partir das concentrações letais para 50 (CL50) e 75% (CL 75) da população estudada. Após a seleção dos genótipos (LGRA-106, LGRA-201, LSDI-102 e LSDI-103, grupos de 10 fêmeas ingurgitadas foram submetidas ao teste de imersão em óleos essenciais em diferentes concentrações e para o controle foi utilizado DMSO 3%. Após sete dias, as fêmeas foram dissecadas em solução tampão fosfato e os ovários foram fixados em glutaraldeído 2,5% por um período de 24 horas. Os tecidos foram desidratados e incluídos em moldes plásticos de resina Leica para análise histológica. Os resultados permitiram a visualização e caracterização do ovário e dos diferentes estágios de desenvolvimento dos ovócitos. No grupo controle (DMSO 3%), não foram verificadas alterações nos tecidos. Nos grupos tratados com os óleos de L. gracillis e L. sidoides foram observadas vacuolizações de ovócitos II, III, IV e V, desintegração de membrana plasmática em ovócitos II, III, IV e V, com completa deformidade morfológica de ovócitos IV e V. Os compostos majoritários, timol e carvacrol parecem estar atuando ativamente nessas alterações. Os resultados obtidos mostraram atividade dos diferentes genótipos dos óleos essenciais e seus compostos majoritários em larvas e fêmeas de R. microplus e permitiu elucidar o mecanismo de ação dos mesmos na oogêse das fêmeas, levando a crer que os compostos testados são promissores para o desenvolvimento de produtos carrapaticidas.

Orientadores: Fernando Antonio Cabral, Losiane Cristina Paviani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-23T09:13:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Diniz_TabataTayaraGarmus_M.pdf: 2219524 bytes, checksum: d534ef54252dcca6946c4b832f819e43 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Esse trabalho objetivou, através da combinação de processos de extração, a obtenção de extratos naturais a partir de folhas de pitanga (Eugenia uniflora L.) e de folhas de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.). Os extratos foram obtidos por extração sequencial em leito fixo a 60 ºC e 400 bar, primeiro por extração com dióxido de carbono supercrítico (scCO2), seguido por extração com etanol em uma segunda etapa e por último, extração com água (terceira etapa). Curvas de extração (rendimento de extrato em função da massa de solvente) foram obtidas no intuito de se avaliar o desempenho da extração quanto ao rendimento em função do tipo de solvente. Todos os extratos foram avaliados quanto ao teor de fenóis e flavonoides totais e a fração volátil obtida na primeira etapa com scCO2 foi avaliada quanto ao seu perfil químico por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (GC-EM). Para efeito de comparação, mais dois tipos de extratos etanólicos e aquosos foram obtidos: 1) Extratos em etapa única a partir das folhas, com etanol e com água em leito fixo a 60 °C e 400 bar sem prévia extração com scCO2 e 2) Extratos convencionais utilizando um sistema a baixa pressão e 60 ºC. A análise dos resultados mostrou que o caráter do solvente empregado influenciou significativamente no processo de obtenção dos extratos, pois o rendimento apresentou tendência de aumento com o aumento da polaridade do solvente, sendo os extratos aquosos os de maior rendimento, seguidos dos etanólicos e por último os supercríticos. O estudo apontou o processo de extração sequencial (em três etapas) como o mais eficaz em termos de rendimento global de extração e de fenóis e flavonoides totais para Eugenia uniflora. O extrato obtido com etanol (60 ºC e 400 bar) após extração supercrítica e o extrato obtido com scCO2 apresentaram as maiores concentrações de fenóis e flavonoides totais, respectivamente, dentre todos os extratos obtidos das folhas de E. uniflora L. Na matriz Lippia sidoides Cham., o processo de extração etanólica a 60 ºC e 400 bar em etapa única permitiu obter extratos mais concentrados em fenóis e flavonóis e o melhor rendimento de flavonoides totais. Os resultados para o rendimento de compostos fenólicos do alecrim-pimenta aponta a extração sequencial como a mais eficiente. A influência da extração supercrítica prévia foi diferente dependendo da matriz vegetal estudada. O scCO2 como primeiro solvente de extração permitiu obter extratos etanólicos e aquosos mais concentrados em compostos fenólicos para pitanga / Abstract: The objective of this study was to obtain natural extracts from leaves of pitanga (Eugenia uniflora L.) and pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.) with the combination of different sequential extraction techniques. The extracts were obtained by sequential extraction in fixed bed (60 °C and 400 bar), first by extraction with supercritical carbon dioxide (scCO2), followed by extraction with ethanol in a second step and finally extracted with water in a third step. Extraction curves (yield of extracts by the mass of solvent) were obtained in order to evaluate the performance of the extraction yield due to the type of solvent. All extracts were evaluated for their content of total phenols and flavonoids and the more volatile fraction obtained in the first step with scCO2 was evaluated for its chemical profile by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). For comparison, two types of ethanol and aqueous extracts were obtained: 1) single-step extracts from the leaves with ethanol and water in the fixed bed at 60 °C and 400 bar without prior extraction with scCO2 and 2) extracts using a conventional low pressure system and 60 °C. The results showed that the nature of the solvent employed strongly influenced the process of obtaining extracts, as the yield showed a tendency to increase with increasing polarity of the solvent. The aqueous extracts showed the highest yield, followed by ethanol and finally the supercritical The study pointed out the process of sequential extraction (three-step) as the most effective in terms of global extraction yield and total phenols and flavonoids for Eugenia uniflora. The extract obtained with ethanol (60 °C and 400 bar) after supercritical extraction and the extract obtained with scCO2 were those with the highest concentrations of total phenols and flavonoids, respectively, among all the extracts obtained from the leaves of E. uniflora L. At Lippia sidoides Cham. matrix, the process of single-step ethanolic extraction at 60 °C and 400 bar obtained more concentrated yields in phenols and flavonols and the best yield of total flavonoids. The results for the yield of phenolic compounds from pepper-rosmarin indicate the sequential extraction as the most efficient process. The influence of prior supercritical extraction was different according to plant matrix studied. The scCO2 as the first extraction step yielded ethanolic and aqueous extracts more concentrated in phenolic compounds for E. uniflora / Mestrado / Engenharia de Alimentos / Mestra em Engenharia de Alimentos

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.) is a medicinal and aromatic plant, native Northeast Region of Brazil, which has an essential oil widely used for its properties as bactericide, fungicide, molluscicide, and larvicide. This paper aimed to characterize and evaluate the performance of accessions of pepper-rosmarin (Lippia sidoides Cham.) native to various States of the Northeast Region, kept in Germplasm Bank at São Cristóvão, Sergipe, Brazil. The first chapter presents the general introduction, the literature review on genetic resources and sustainability of agroecosystems, origin, ethnobotany, and germplasm characterization (morphological, agronomic and chemical). The second chapter presents and discusses the data on the morphological and agronomic characterization of accessions of pepper-rosmarin cultivated in field with seedlings from stem cuttings, using a randomized complete block design with two replications. The evaluated variables were: plant height, fresh and dry matter from leaves and stem, width and length of leaves, color of leaves and stem, crown shape, and content and yield of essential oil. Results showed morphological differences among accessions for color of stem, crown shape, plant height, width and length of leaves and ratio length/width of leaves. For agronomic variables, there were significant differences for content and yield of essential oil with the best and worst performance for accessions LSID-005 and LSID-105, respectively. Third chapter presents the data on performance evaluation of pepper-rosmarin, during two years of field cultivation, for the variables: plant height, fresh and dry matter of stem and leaves, content and yield of essential oil, and the content of chemical components of the essential oil. The higher averages found for content (7,68 %) and yield (56,46 mL plant- 1) essential oil were produced by the accession LSID-105, in 2005, and by LSID-102, in 2006, respectively. The higher averages for content of thymol (90,82 %) and carvacrol (56,05 %) were obtained from the accessions LSID-003 and LSID-104, respectively, both in 2006. The accession LSID-104, native to Sergipe State, presented carvacrol as major chemical component. All the other accessions presented thymol as major chemical component. All the accessions, in both years, presented phenotypical variability for all the evaluated variables, except for content of terpil-4-ol. Fourth chapter presents the evaluation of influence of dry and rainy seasons on the performance of accessions of pepper-rosmarin, using the variables: plant height, dry matter of leaves, content and yield of essential oil and content of chemical components of the essential oil. For the majority of the studied accessions, the thymol content was higher during the rainy season. LSID-102 accession presented high yield of essential oil (56,46 mL plant- 1) and thymol content between 47,97 % and 64,95 %. LSID-003 accession yielded 10,06 mL plant-1 of essential oil amd thymol content of 90,02 %. LSID-104 accession presented high content of carvacrol (54,68%) and low content of thymol (7,88 %). Fifth chapter presents the evaluation of the influence of leaves dehydration (at 40 °C for 5 days) on the content of essential oil and its chemical components of 11 accessions of pepper-rosmarin harvested during dry and rainy season. Generally, drying of leaves modified the content of most of the chemical constituents. In relation of the major iv chemical constituents, drying modified thymol content, but did not modified the carvacrol content of the essential oil of the pepper-rosmarin accessions. / Alecrim-pimenta (Líppia sidoides Cham.) é uma planta medicinal e aromática, nativa do Nordeste do Brasil, cujo óleo essencial é utilizado em virtude de suas propriedades bactericida, fungicida, moluscida e larvicida. Este trabalho visou caracterizar e avaliar o comportamento de acessos de alecrim-pimenta (Lippia sidoides Cham.), de vários Estados do Nordeste do Brasil, mantidos em Banco Ativo de Germoplasma em São Cristóvão. No primeiro capítulo, apresentou-se a introdução geral do trabalho, o referencial teórico sobre recursos genéticos e sustentabilidade de agroecossistemas, a origem, os aspectos botânicos e de uso de alecrim-pimenta, a conservação de recursos genéticos e a caracterização de germoplasma (caracterização morfológica, agronômica e química). O segundo capítulo consistiu da caracterização morfológica e agronômica de acessos de alecrim-pimenta cultivados em campo, utilizando-se delineamento experimental em blocos ao acaso com duas repetições. Foram avaliadas as variáveis: altura de planta, massa fresca e seca de folha e caule, largura e comprimento de folha, cor de folha, formato de copa, teor e rendimento de óleo essencial. Os resultados mostraram diferenças morfológicas nos acessos para as variáveis: cor de caule, formato de copa, altura de planta, comprimento e largura de folha e relação comprimento/largura de folha. Para as características agronômicas, foram evidenciadas diferenças significativas para teor e rendimento óleo essencial, sendo o acesso LSID-005 o mais promissor e o acesso LSID-105 o menos promissor. No terceiro capítulo estudou-se o comportamento de acessos de alecrim-pimenta em dois anos de cultivo, e foram avaliadas as variáveis: altura de planta, massa fresca de caule e folha, teor, rendimento e teores dos constituintes químicos do óleo essencial. As maiores médias encontradas para os caracteres teor e rendimento de óleo essencial foram do acesso LSID-105, com 7,68 % no ano de 2005, e do acesso LSID-102, com 56,46 mL planta-1 no ano de 2006, respectivamente. As maiores médias de timol e de carvacrol foram encontradas no acesso LSID-003, com 90,82 % e do acesso LSID-104, com 56,05 % respectivamente, ambos no ano de 2006. O acesso LSID-104, oriundo do Estado de Sergipe, apresentou como constituinte químico majoritário o carvacrol. Os demais acessos têm o timol como constituinte químico majoritário. Todos os acessos, nos dois anos de cultivo, apresentaram variabilidade fenotípica para todas as variáveis analisadas, exceto para teor de terpil 4-ol. No quarto capítulo, avaliou-se a influência das épocas seca e chuvosa no comportamento de acessos de alecrim-pimenta, avaliandose as variáveis: massa fresca e seca de folha, teor e rendimento do óleo essencial e os teores dos constituintes químicos do óleo essencial. Observou-se que, para a maioria dos acessos de alecrim-pimenta estudados, o teor de timol é maior na época chuvosa do que na seca. O acesso LSID-102 apresentou alto rendimento de óleo essencial, porém com teor de timol entre 47,97 % e 64,95 %. O acesso LSID-003 apresentou rendimento de óleo essencial de 10,06 mL planta-1 e teor de timol de 90,02 % e, o acesso LSID-104 apresentou alto teor de carvacrol (média de 54,68 %) e baixo teor de timol (média de 7,88 %). No quinto capítulo, estudou-se a influência da secagem das folhas no óleo essencial de acessos de alecrim-pimenta. Testou-se a influência da secagem das folhas a 40º C por cinco dias em 11 acessos de alecrim-pimenta, colhidas nas estações seca e chuvosa. Avaliaram-se o teor de óleo essencial e os teores dos constituintes químicos no ii óleo essencial. A secagem proporcionou redução de teor de óleo essencial de alecrimpimenta quando colhido na estação seca. Em geral, a secagem alterou os teores da maioria dos constituintes químicos. Em relação aos constituintes químicos majoritários, a secagem alterou o teor de timol, mas não alterou o teor de carvacrol do óleo essencial de acessos de alecrim-pimenta.