BEZERRA, F. T. G. Efeito da cilostamida e das metades foliculares no bloqueio da retomada da meiose e no nível de AMPc em oócitos bovinos. 2014. 67 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2014. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:05:58Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_ftgbezerra.pdf: 1009970 bytes, checksum: c13e81b55e7bd82edc9f4a494ecdb1ba (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:06:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_ftgbezerra.pdf: 1009970 bytes, checksum: c13e81b55e7bd82edc9f4a494ecdb1ba (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T14:06:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_ftgbezerra.pdf: 1009970 bytes, checksum: c13e81b55e7bd82edc9f4a494ecdb1ba (MD5) Previous issue date: 2014 / The aims of this study were (1) to evaluate the effects of cilostamide and follicular hemisections on the blockage of in vitro oocyte meiotic resumption in bovine cumulus oocyte complexs (COCs), (2) to investigate the reversibility of cilostamide effect on meiotic resumption, and (3) to quantify the levels of cAMP in COCs, denuded oocytes (DO) and cumulus cells (CC) after culturing COCs in presence of cilostamide and follicular hemisections. To this end, bovine oocytes were subjected to a pre-maturation period of 12 h in medium containing 10 µM cilostamide, follicular hemisections or combination of both and,then, submitted to in vitro maturation. To evaluate the reversibility of cilostamide effect, at the end of this culture period, COCs were washed and placed in maturation medium without cilostamide for 12, 14, 16, 18, 20, 22 and 24 hours. To investigate the levels of cAMPc, COCs subject to pre-maturation for 6 h were used to measure the levels of cAMP. After 12 hours of culture, groups COCs were fixed to assess chromatin configuration and meiotic rogression. The results showed that COCs cultured in presence of cilostamide and follicular hemisections had significantly higher percentages of oocytes at germinal vesicle stage (94%), after a period of 12 h of pre-maturation, than COCs cultured in other treatments. After blocking treatment, 75% of oocytes reached metaphase II after 16 h of maturation, emphasizing that the treatment is not toxic to oocytes. Moreover, oocytes cultured in medium containing cilostamide and follicular hemisctions had significantly higher levels of cAMP when compared to other treatments. It is concluded that cilostamide and follicular hemisections interact and promotes the maintenance of oocytes at germinal vesicle stage by increasing the levels cAMP in cultured COCs. / Os objetivos deste estudo foram: (1) avaliar os efeitos da cilostamida e das metades foliculares sobre o bloqueio da retomada da meiose de oócitos in vitro no complexo cumulus oócito bovinos (COC) , (2) investigar a reversibilidade do efeito da cilostamida na retomada da meiose, e (3) quantificar os níveis de AMPc em COCs, oócitos desnudos (OD) e células do cumulus (CC) após o cultivo de COCs na presença de cilostamida e metades foliculares. Para este fim, os oócitos de bovino foram submetidos a um período de pré-maturação de 12 h em meio contendo 10 μM cilostamida, metades foliculares ou combinação de ambos e, em seguida, submetidos a maturação in vitro. Para avaliar a reversibilidade do efeito da cilostamida, no final deste período de cultura, COC foram lavados e colocados em meio de maturação, sem cilostamida por 12, 14, 16, 18, 20, 22 e 24 horas. Para avaliar os níveis de AMPc, COCs submetidos a pré-maturação por 6 h foram utilizados para a quantificação do nível de AMPc. Após 12 horas de cultivo, grupos de COCs foram fixados para avaliar a configuração da cromatina e progressão da meiose. Os resultados mostraram que COCs cultivados em presença de cilostamida e metades foliculares apresentaram percentuais significativamente maiores de oócitos em vesícula germinativa (94%), depois de um período de 12 h de pré-maturação, do que COCs cultivados em outros tratamentos. Após o bloqueio, 75% dos oócitos atingiram metáfase II após 16 horas de maturação, enfatizando que o tratamento não é tóxico para os oócitos. Além disso, os oócitos cultivados em meio contendo cilostamida e metades foliculares tinham níveis significativamente mais elevados de AMPc quando comparado com outros tratamentos. Concluiu-se que a cilostamida e metades foliculares interagem e promovem a manutenção de oócitos no estágio de vesícula germinativa, aumentando os níveis de AMPc em COCs cultivados.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-22Bitstream added on 2014-06-13T19:24:30Z : No. of bitstreams: 1 matsui_rh_dr_sjc.pdf: 1190234 bytes, checksum: a233dece1e7c318b5a61db2b0af9469f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho visa identificar e evidenciar a curva de crescimento em animais utilizados em pesquisa laboratorial. Em muitos casos a idade biológica se torna fundamental para resultados precisos e confiáveis, em especial na ortodontia, pois a maturação óssea é avaliada por meio de radiografias, e as mudanças observadas indicam em qual estágio se encontra o indivíduo. A idade cronológica sem dúvida é a mais utilizada, sendo observada mesmo antes do nascimento, durante a gestação e até os últimos dias de vida deste indivíduo. Contudo a idade cronológica em alguns casos não evidencia a exatidão da fase de maturação; um dos métodos utilizados é a avaliação da maturação das vértebras cervicais. A método que foi utilizada na avaliação das alterações das vértebras em animais foi a mesma que os autores utilizam em humanos. Sendo assim, esse trabalho tem como objetivo principal a identificação da idade óssea em animais para limitar a distribuição dos mesmos, contribuindo com a eficiência nos experimentos quando a idade e fase do desenvolvimento pode influenciar nos resultados das pesquisas. Os 35 ratos Wistar foram observados por um período de 160 dias, iniciando pelo 22º dia (desmame), com cortes transversais periódicos para pesagem, medição do comprimento e radiografias digitais obtidas com os animais imobilizados por anestésicos. As imagens radiográficas das vértebras cervicais (C2 e C3) foram sumetidas a densitometria ótica e mensuradas por meio de um programa de computador. As variáveis foram submetidas à análise estatística individual e relacionadas entre si obtendo resultados significantes para o crescimento (p<0,001). O grupo masculino apresenta médias significantes maiores que as do grupo feminino em todas as avaliações realizadas (p<0,001). Para a densidade houve aumento conforme... / The aim of this study was to identify and evidence the growth curve of animals used for laboratorial research purposes. The biological age is important for precise and reliable results, especially in orthodontics, since radiographs are used to evaluate the bone maturation and the stage in which is the patient according to the changes that are observed. The chronological age is certainly the most utilized, been observed even before birth, during pregnancy until the person's last days of life. However, the chronological age, in some cases, does not evidence exactly the maturation phase. Thus, the evaluation of bone age or maturation of cervical vertebras is a commonly used method.The methodology used for the evaluation of the vertebral alterations in animals was the same that used in humans. Therefore, the main objective of this study was the identification of the bone age in animals to limit indiscriminate use, contributing with the experiences efficiency when the age and development phase can influence the research results. The 35 Wistar rats were observed for a period of 260 days, beginning in the 22nd day (weaning). Periodical transversal cuts for weight analysis, length measurement and digital radiographs were taken with the animals immobilized by anesthetics. The radiographic images of cervical vertebras (C2 and C3) were submitted to optical densitometry and measured by computer software. The variables were submitted to individual and each other related statistical analysis. The results were significant for growth (p< 0.001). The male group showed significantly higher mediums, than that showed by the female group in all evaluations. Conclusion: There exist a growth outbreak and the growth curves of weight and length, and the alterations... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-23Bitstream added on 2014-06-13T19:05:15Z : No. of bitstreams: 1 tanaka_jlo_dr_sjc.pdf: 558609 bytes, checksum: 1a9708d0868c302c9eb6ce91dd43cc01 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As alterações anatômicas das vértebras cervicais têm sido empregadas na análise de maturação óssea em Ortodontia e Ortopedia Funcional dos Maxilares. Como essas mudanças são sutis, o objetivo neste estudo foi desenvolver e avaliar um método de análise de maturação óssea empregando-se medidas dessas estruturas. Foram utilizados 246 pares de radiografias cefalométricas laterais e de mão/punho, 135 de indivíduos do sexo feminino e 111 do masculino, divididos em 5 grupos segundo a Curva de Crescimento de Mercadante. Nas radiografias cefalométricas laterais, 15 razões foram obtidas das vértebras C2, C3 e C4, utilizando o programa Radiocef 4.0®. A média de cada razão foi comparada entre os grupos por meio das análises ANOVA e Tukey, que apontaram 10 razões como as que melhor diferem cada fase e que foram utilizadas na criação do novo método. Neste método, denominado Maturação por Razões em Vértebras Cervicais (MRVC), a maturação óssea é classificada em 7 estágios a partir dos resultados das 10 razões. Para sua validação, utilizou-se outra amostra de 58 pares de radiografias cefalométricas laterais e de mão/punho, 28 do sexo feminino e 30 do masculino, submetidas à avaliação de 4 examinadores por três métodos: Curva de Crescimento, Hassel e Farman e método MRVC. Os resultados apontaram melhor desempenho intra e inter-examinadores para a Curva de Crescimento e desempenho semelhante entre o método MRVC e o de Hassel e Farman. Por outro lado, o método MRVC proporcionou resultados próximos ao da Curva de Crescimento na determinação da maturação óssea do indivíduo em relação ao pico do surto de crescimento puberal. Concluiu-se que foi possível criar um método de análise de maturação óssea por medidas das vértebras cervicais em radiografias cefalométricas laterais com eficácia comparável à da Curva de Crescimento. / Anatomic alterations of the cervical vertebrae have been used on the assessment of bone maturation in Orthodontic/Functional orthopedics. Since these changes are subtle, our aim was to create and analyze a method for the assessment of skeletal maturation using measurements of the cervical vertebrae. Two hundred and forty six pairs of lateral cephalometric and hand/wrist radiographs (135 male and 111 female) were used on this study. The sample was separated in 5 groups according to the stage of Mercadante’s Pubertal Growth Curve. Fifteen ratios were calculated with the measurements of C2, C3 and C4 vertebrae. The mean for each ratio was compared among the groups with the ANOVA and Tukey tests, which indicated 10 ratios that better distinguish each stage. These ratios were used on the development of the method Maturation by Ratios on Cervical Vertebrae (MRCV). This method ranks the maturation in 7 stages based on the results of the ratios. For the validation of the method, four examiners assessed 58 pairs of lateral cephalometric and hand/wrist radiographs using 3 methods: Pubertal Growth Curve, Hassel and Farman and MRCV. Better intra and inter-examiner performance were observed for Pubertal Growth Curve method, while the performance with Hassel and Farman and MRCV were almost the same. However, the results for MRCV were close to the Pubertal Growth Curve on the determination of skeletal maturation related to the peak of the pubertal growth. Based on the results, we concluded that it was possible to create a method for skeletal maturation assessment with measurements of the cervical vertebrae in lateral cephalometric radiographs with efficacy comparable to the Pubertal Growth Curve’s.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:48:15Z : No. of bitstreams: 1 000823514.pdf: 2797022 bytes, checksum: 686ce471a499a4791606aed083907c81 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Sementes apresentam diversos comportamentos de tolerância à dessecação e longevidade após a dispersão, quando um metabolismo reduzido ou desligado proporcionaria maior sucesso no armazenamento. Esses comportamentos podem ser agrupados em categorias que facilitam o uso de técnicas para conservação em bancos de germoplasma, ou ainda, considerados como um gradiente de respostas entre sementes de diferentes espécies. Uma recente abordagem é de que esses diferentes comportamentos residiriam no estádio de maturidade no qual as sementes se desprendem da planta mãe, sendo sementes sensíveis à dessecação as dispersas em uma fase muito imatura. Entretanto, as variações do metabolismo durante o processo de maturação e suas consequências na viabilidade das sementes após a dispersão são ainda pouco abordadas. O objetivo desta tese foi avaliar as alterações do perfil metabólico primário, de carboidratos e ácidos graxos, durante a maturação e contextualizá-las na contribuição para a longevidade, utilizando sementes de Poincianella pluviosa como modelo de estudo. O período de maturação dessas sementes é extenso e maior do que sua viabilidade no ambiente. Sementes imaturas são capazes de produzir plântulas e resistir à secagem bem cedo na maturação. A maturação dessas sementes é caracterizada pela diminuição do metabolismo energético primário concomitante à produção de antioxidantes via metabolismo secundário e acúmulo de compostos osmoprotetores, e os últimos meses da maturação são essenciais para grande aumento de vigor. Esses resultados foram comparados às sementes de Caesalpinia echinata, demostrando que baixas temperaturas de armazenamento elevam a longevidade dessas sementes, indicando a presença de um metabolismo reduzido após a dispersão. Ambas apresentam mecanismos antioxidantes, embora não pareçam suficientes para controlar processos oxidativos durante o armazenamento. Diferenças na ... / Seeds present different behaviors with respect to desiccation tolerance and storability after shedding, when a lower or switch-off metabolism provide greater success in storage. These behaviors can consist in categories that facilitate the use of techniques for conservation in germplasm banks, or even considered as a gradient among seeds of different species. A recent approach is that these different behaviors reside in the mature stage in which seeds are shed from the mother plant, being sensitive to desiccation seeds dispersed in a very immature stage. However, variations of the metabolism during maturation process and its consequences on seed viability after dispersion are still not well understood. The aim of this thesis was to evaluate the changes in the profile of the primary metabolism, carbohydrates and fatty acids during maturation and contextualize them to contribute to storability, using seeds of Poincianella pluviosa as model. The maturation period of these seeds is extensive and larger than its viability under environmental conditions. This process is characterized by a decrease of the primary energetic metabolism concomitant with the production of antioxidants via secondary metabolism and an accumulation of osmoprotectant compounds, wherein the last months of maturation are essential for large increase of seed vigor. These results were compared to seeds of Caesalpinia echinata, showing that low temperatures of storage increase these seeds storability, suggesting the presence of a reduced metabolism after dispersion. Both present antioxidant mechanisms, although not seem enough to control oxidation processes during storage. Differences on the extension of maturation between the two species can explain the storability of these seeds after shedding, when an advance in maturation would provide a greater reduction of primary energy metabolism / CNPq: 478298/11 / FAPESP: 05/04139-7

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2015-11-19T17:18:56Z No. of bitstreams: 1 2015_LauraVanessaMourãoGulart.pdf: 1266298 bytes, checksum: cfa73ee576ff7b692bad82afcbbcaa82 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-12-30T14:37:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LauraVanessaMourãoGulart.pdf: 1266298 bytes, checksum: cfa73ee576ff7b692bad82afcbbcaa82 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-30T14:37:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LauraVanessaMourãoGulart.pdf: 1266298 bytes, checksum: cfa73ee576ff7b692bad82afcbbcaa82 (MD5) / A produção de embriões in vitro é uma biotécnica importante para a reprodução e constitui-se como ferramenta valiosa para estudos de interações de gametas e/ou embriões e, com isso, torna-se cada vez mais excelente modelo não somente para averiguações sobre aspectos sanitários, como também relacionados a processos tóxicos e interações presentes no ambiente in vitro. O objetivo deste estudo foi testar e analisar o efeito dos diferentes meios de maturação oocitária in vitro (MEMB e MEMO) associados ou não FSH em concentrações de 1 e 10ng/ml, sobre a produção de blastocistos bovinos e a expressão de genes relacionados a competência e metabolismo embrionário (GLUT1, GLUT4, PDH, G6PDH, GAPDH, COX2, CDX, HSP70, BAX e BCL2). Em todos os experimentos, oócitos foram obtidos de abatedouro, coletados de vacas adultas e maturados em meio controle (TCM199) e meios testes (MEMO, MEMO+1FSH, MEMO+10FSH, MEMB, MEMB+1FSH, MEMB+10FSH). No Experimento 1, os oócitos foram fertilizados e cultivados até o estágio de blastocisto, avaliando e correlacionando a adição de FSH com 1ng/mL ou 10ng/mL nos meios MEMB e MEMO. No experimento 2, avaliou-se a expressão dos genes GLUT1, GLUT4, PDH, G6PDH, GAPDH, COX2, CDX, HSP70, BAX e BCL2 em embriões oriundos da maturação em meios diferentes suplementados ou não com FSH (1 ou 10ng/mL). No experimento 1, os resultados demonstraram que a dose de FSH 10ng/mL no meio MEMO+10FSH diminui a produção de embriões; e nos meios MEMO e MEMO+1FSH a produção de embriões é a mesma. Nos meios MEMB com 1FSH e 10FSH não houve diferença na produção de embriões. Já no meio MEMB sem FSH a produção de embriões foi igual ao do grupo controle TCM199. A expressão de GLUT4, GLUT1, PDH, COX2 e BAX em embriões maturados em meios de maturação controle e nos grupos de meios definidos não foi diferente. O gene G6PDH foi expresso em baixa abundância nos meios TCM199, MEMB+FSH e MEMO. Nos meios MEMB e MEMO+FSH ocorre um aumento do gene G6PDH, sendo estes semelhantes. A abundância de GAPDH nos meios TCM199 e MEMB+FSH é menor; e nos meios MEMB, MEMO e MEMO+FSH é maior. Nos genes HSP70 não há significância entre MEMB e MEMB+FSH, e sim entre MEMO e MEMO+FSH. Nos genes CDX apenas o MEMB esta elevado, o MEMO não é detectado, e no MEMO+FSH foi pouco expresso. Em relação ao BCL2 o TCM199 foi o mais abundantemente expresso e semelhante aos meios MEMO e MEMO+FSH. Já com os meios MEMB e MEMB+FSH são poucos expressos. Concluiu-se que a produção de embriões no meio MEMO foi menor que nos outros tratamentos; e o meio MEMB produz a mesma taxa de embriões que o grupo controle. A adição de FSH aos meios de maturação diminui a produção de embriões no MEMB, e leva, na maioria das vezes baixa expressão de marcadores de competência. / The production of in vitro embryos is an important biotechnical technique for reproduction and it constitutes a valuable tool for studies of interactions of gametes and / or embryos and, therefore, it becomes increasingly an excellent model not only for check ups concerning sanitary aspects, but also when it is related to toxic processes and actual interactions in the in vitro environment. The objective of this study was to test and analyze the effect of different oocyte maturation mediums in vitro (MEMB and MEMO) either associated or not FSH at concentrations of 1 and 10 ng / ml, on the production of bovine blastocysts and the expression of genes related to competence and embryonic metabolism (GLUT1, GLUT4, PDH, G6PDH, GAPDH, COX2, CDX, HSP70, BAX and BCL2). In all experiments, oocytes were obtained from a slaughterhouse, collected from adult cows and matured in control medium (TCM199) and medium tests (MEMO MEMO + 1FSH, MEMO + 10FSH, MEMB, MEMB + 1FSH, MEMB + 10FSH). In Experiment 1, the oocytes were fertilized and cultured up to the blastocyst stage, assessing and correlating the addition of FSH with 1 ng / ml or 10 ng / mL in MEMB and MEMO mediums. In experiment 2, the expression of GLUT1 gene, GLUT4, PDH, G6PDH, GAPDH, COX2, CDX, HSP70, BAX and BCL2 was evaluated in embryos from maturation in different medium either supplemented or not with FSH (1 or 10 ng / mL) . In experiment 1, the results demonstrated that the FSH dose of 10 ng / ml in the medium MEMO + 10FSH decreases the production of embryos; and in the mediums MEMO and MEMO + 1FSH the production of embryos is the same. In the MEMB medium with 1FSH and 10FSH there was no difference in embryo production. But in the MEMB medium without FSH, the embryo production was the same as the one in the TCM199 control group. The expression of GLUT4, GLUT1, PDH, COX2 and BAX in embryos matured in control maturation medium and defined medium groups was no different. The G6PDH gene was expressed in low abundance in TCM199 MB + FSH and MEMO mediums. In the MEMB and MEM + FSH mediums, an increase of the G6PDH gene happens, and they are similar. The abundance of GAPDH in TCM199 and MEMB + FSH mediums is lower; and in the MEMB, MEMO and MEMO + FSH mediums is higher. In the HSP70 genes there is no significance between MEMB and MEMB + FSH, but there is some difference between MEMO and MEMO + FSH. In the CDX genes, only the MEMB is high, MEMO is not detected, and the MEMO + FSH was little expressed. Concerning the BCL2, the TCM199 was the most expressed and it was similar to the MEMO and MEMO + FSH mediums. But with the MEMB and MEMB + FSH mediums, they are little expressed. It was concluded that the production of embryos in the MEM medium was lower than the other treatments; and the MEMB medium produces the same rate of embryos than that of the control group. The addition of FSH to the maturation mediums decreases the production of embryos in the MEMB and leads in most cases to low expression of competence markers.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-13Bitstream added on 2014-06-13T19:49:24Z : No. of bitstreams: 1 giovannetti_n_me_rcla.pdf: 864791 bytes, checksum: c1c1f60c2d1f290e11d35aaadb9b1a51 (MD5) / O presente trabalho teve como objetivo investigar as variações que ocorrem nos ovários do camarão Macrobrachium olfersi durante a época reprodutiva, por meio de análises morfohistológicas em nível macro e microscópico. As fêmeas em período reprodutivo foram capturadas no Rio Ribeira de Iguape, litoral sul do estado de São Paulo, Brasil. As observações macroscópicas permitiram a determinação de três fases de maturação gonadal: a) em desenvolvimento (ED), onde os ovários apresentaram coloração variando de verde claro à verde oliva, estando apoiados na parte posterior do estômago encobrindo toda esta região, b) desenvolvido (DE), com coloração verde escura e preenchendo toda a cavidade cefalotorácica dorsal e c) desovado (DV), com coloração pardo-amarelada e tamanho menor em relação as demais fases, estando apoiado somente sobre o hepatopâncreas. A análise histológica permitiu classificar os ovócitos em estágios que variam de I a V de acordo com o tamanho, o aspecto citoplasmático, a observação da vesícula germinal e a granulação do vitelo. Verificou-se que na fase de maturação dos ovários designada como ED, observou-se a presença de ovócitos do estágio I ao IV, na fase DE encontraram-se, somente, ovócitos do estágio V e na fase DV, foi observado ovócitos dos estágios I a III. Os resultados do presente estudo demonstraram todas as fases do ciclo vitelogênico de M. olfersi durante a época reprodutiva. Sendo detectados cinco estágios celulares durante as três fases de desenvolvimento gonadal, porém em quantidades variadas / The present study had the objective to investigate the modifications in Macrobrachium olfersi prawns ovaries during reproductive season through macro and microscopic morphological analysis. The females were captured in Ribeira de Iguape River (south coast of São Paulo, Brazil). By macroscopic observation three gonadal maturation phases could be determined: a) in maturation/in development (ID), ovaries that present a coloration that varies from light green to olive green; b) developed/mature (DE), presenting dark green color and c) totally spawned (SP), presenting yellowish brown color and smaler than in the other phases, being located on the hepatopancreas. By histological analysis oocytes could be classified in stages I to V according to the size; the cytoplasmatic aspect; the germinal vesicle and the yolk granulation. It was found that on the maturation phase of the ovaries known as ID, was observed the presence of oocytes from stage I to IV, at the DE phase, was founding only oocytes of stage V and at the DV phase, was observed oocytes of stages I to III. The results of this study showed all phases of the vitellogenic cycle of M. olfersi during the reproductive season. Being detected five cellular stages during the three phases of gonadal development, but in varying amounts

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-20Bitstream added on 2014-06-13T20:59:29Z : No. of bitstreams: 1 crocomo_lf_me_botfmvz.pdf: 25649116 bytes, checksum: 05169c2ff45ce468070cb0f57b50ab2f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo visou avaliar e comparar a eficiência e reversibilidade da inibição meiótica promovida pela roscovitina e ciclohexemida nos COCs de ovinos cultivados in vitro, assim como analisar o efeitos desses inibidores da meiose sobre a ultraestrutura dos COCs e expansão das células do cumulus. Para isto, COCs grau 1 e 2 recuperados de ovários de ovelhas, obtidos em frigoríficos, foram cultivados, por 24 horas a 38,5ºC e atmosfera com 5% de CO2, em meio de maturação constituído por TCM 199 suplementado com 0,1UI/mL de FSH; 0,1UI/mL de LH; 0,3mM de piruvato; 75µg/mL de penicilina/estreptomicina; 10% SFB e 100µM/mL de cisteamina (Grupo Controle) acrescido de 100μM de roscovitina ou 1μg/mL de ciclohexemida (Grupos Tratamentos). Para retomada e progressão da maturação nuclear, os COCs foram cultivados por mais 22 horas em meio de maturação livre de inibidores da meiose, nas mesmas condições acima descritas. Após 24 e 46 horas de cultivo in vitro, os COCs foram avaliados quanto à expansão das células cumulus em estereomicroscópio, quanto à maturação nuclear em microscópio de fluorescência e quanto à maturação citoplasmática, em microscópio eletrônico de transmissão. Foi constatado adequado bloqueio meiótico em 53,07% e 89,67% dos COCs tratados com roscovitina e ciclohexemida, respectivamente. Em ambos os tratamentos, o bloqueio meiótico foi reversível, com aproximadamente 60% dos oócitos em MII ao final de 46 horas de cultivo in vitro. No entanto, o tratamento com roscovitina inibiu de maneira irreversível a expansão do cumulus em aproximadamente 90% dos COCs e também afetou a ultraestrutura oocitária. Em contrapartida, no tratamento com ciclohexemida, 84,23% dos COCs apresentaram expansão total do cumulus ao final de 46 horas de cultivo in vitro, e houve adequada progressão da maturação citoplasmática, o que denota que a ciclohexemida confirmou a hipótese proposta no presente estudo / This study aimed to evaluate and compare the efficiency and reversibility of meiotic inhibition promoted bv roscovitine and cycloheximide in ovine COCs in vitro cultured, as well as, to assess the effects of these inhibitors on the ultrastructure of COCs and on the cumulus cells expansion. To this, grades I and II COCs recovered from ovines ovaries, obtained from slaughterhouse, were cultured, for 24 hours at 38.5ºC in a 5% CO2 humidified air atmosphere, in a specific maturation medium consisting of TCM 199 supplemented with 0,1UI/mL FSH, 0,1UI/mL LH, 1µg/mL estradiol, 0,3mM sodium pyruvate, 75µg/mL penicillin/ streptomycin, 10% FBS and 100µM/mL cysteamine (Control Group) plus 100 μM roscovitine or 1μg/ml cycloheximide (Treatment Groups). For the resumption and progression of nuclear maturation, COCs were cultured for another 22 hours in maturation medium free of meiosis inhibitors in the same conditions (as described before). After 24 and 46 hours of in vitro culture, COCs were evaluated according to cumulus cells expansion under stereomicroscope, to nuclear maturation under fluorescence microscope and to cytoplasmic maturation under electronic transmission microscope. There was adequate meiotic arrest in 53,07% and 89,67% of COCs treated with roscovitine and cycloheximide, respectively. In both treatments, the meiotic arrest was reversible, with approximately 60% MII oocytes at the end of 46 hours of in vitro culture. However, treatment with roscovitine irreversibly inhibited the cumulus expansion by approximately 90% of COCs and also affected the ultrastructure of COC. In contrast, in the treatment with cycloheximide, 84,23% of COCs showed total cumulus expansion at the end of 46 hours of in vitro culture, and there was adequate progression of cytoplasmic maturation, which indicates that the cycloheximide confirmed the hypothesis proposed in this study

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da suplementação do meio com diferentes fontes de macromoléculas, com bloqueadores da meiose e com antioxidantes durante o transporte de oócitos bovinos por 6 horas sobre: 1) progressão da maturação nuclear; 2) maturação citoplasmática e 3) competência no desenvolvimento e criotolerância dos embriões produzidos. Para tanto, o meio de transporte de oócitos foi suplementado com bloqueadores da meiose (forscolina e IBMX; Experimento 1) ou com diferentes tipos de macromoléculas (SFB ou BSA; Experimento 2), sendo que estes tratamentos ainda receberam ou não a suplementação com antioxidantes (mistura de cisteína, cisteamina e catalase). Os oócitos foram incubados em incubadora portátil (Minitub®) para simulação de transporte. Posteriormente, foram submetidos à maturação in vitro (MIV) em incubadora a 5% de CO2 em ar até completar 24h e, em seguida, foram fecundados e os prováveis zigotos foram cultivados in vitro durante 7 dias. Foi feito um grupo controle adicional no experimento I: MIV em incubadora com 10% de SFB por 24h. No experimento II foram feitos dois grupos controle adicionais MIV em incubadora com 10% de SFB por 24h sem e com antioxidantes (cisteína, cisteamina e catalase). Nos experimentos 1 e 2 foi avaliada a cinética da maturação nuclear e a maturação citoplasmática (através do posicionamento de mitocôndrias, do potencial de membrana mitocondrial e do conteúdo intracelular de espécies reativas do oxigênio) após o transpor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the effects of supplementation of the medium with different sources of macromolecules with blockers of meiosis and antioxidants during transport of bovine oocytes for 6 hours on: 1) progression of nuclear maturation; 2) cytoplasmic maturation and 3) competence in the development and cryotolerance of embryos produced. Therefore, the medium of transport oocytes was supplemented with blocking of meiosis (forskolin and IBMX; Experiment 1) or with different types of macromolecules (FCS or BSA; Experiment 2), and these treatments yet received or not antioxidant supplementation (mixture of cysteine, cysteamine and catalase). Oocytes were incubated in a portable incubator (Minitub®) for transport simulation. Posteriorly were submitted in vitro maturation (IVM) in incubator at 5% CO2 in air until to complete 24 hours and then were fertilized and presumptive zygotes were cultured in vitro for 7 days. Has been made an additional control group in the experiment I: MIV incubator with 10% FCS for 24 hours (Control). In the second experiment were performed two additional control groups: IVM incubator with 10% FCS for 24 hours (Control); and IVM in an incubator with 10% FCS and antioxidants (cysteine, cysteamine and catalase) for 24 hours (Contr+Atx). In Experiments 1 and 2 were evaluated after nuclear maturation kinetics and cytoplasmic maturation (made by positioning mitochondria, the mitochondrial membrane potential and intracellular content of ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Claudio José Barbedo / Coorientador: Rita de Cássia Leone Figueiredo-Ribeiro / Coorientador: Danilo da Cruz Centeno / Banca: Claudio Barbedo / Banca: Antônio Salatino / Banca: Marcia Regina Braga / Banca: Luiz Fernando Rolim de Almeida / Banca: Gisela Ferreira / Resumo: Sementes apresentam diversos comportamentos de tolerância à dessecação e longevidade após a dispersão, quando um metabolismo reduzido ou desligado proporcionaria maior sucesso no armazenamento. Esses comportamentos podem ser agrupados em categorias que facilitam o uso de técnicas para conservação em bancos de germoplasma, ou ainda, considerados como um gradiente de respostas entre sementes de diferentes espécies. Uma recente abordagem é de que esses diferentes comportamentos residiriam no estádio de maturidade no qual as sementes se desprendem da planta mãe, sendo sementes sensíveis à dessecação as dispersas em uma fase muito imatura. Entretanto, as variações do metabolismo durante o processo de maturação e suas consequências na viabilidade das sementes após a dispersão são ainda pouco abordadas. O objetivo desta tese foi avaliar as alterações do perfil metabólico primário, de carboidratos e ácidos graxos, durante a maturação e contextualizá-las na contribuição para a longevidade, utilizando sementes de Poincianella pluviosa como modelo de estudo. O período de maturação dessas sementes é extenso e maior do que sua viabilidade no ambiente. Sementes imaturas são capazes de produzir plântulas e resistir à secagem bem cedo na maturação. A maturação dessas sementes é caracterizada pela diminuição do metabolismo energético primário concomitante à produção de antioxidantes via metabolismo secundário e acúmulo de compostos osmoprotetores, e os últimos meses da maturação são essenciais para grande aumento de vigor. Esses resultados foram comparados às sementes de Caesalpinia echinata, demostrando que baixas temperaturas de armazenamento elevam a longevidade dessas sementes, indicando a presença de um metabolismo reduzido após a dispersão. Ambas apresentam mecanismos antioxidantes, embora não pareçam suficientes para controlar processos oxidativos durante o armazenamento. Diferenças na ... / Abstract: Seeds present different behaviors with respect to desiccation tolerance and storability after shedding, when a lower or switch-off metabolism provide greater success in storage. These behaviors can consist in categories that facilitate the use of techniques for conservation in germplasm banks, or even considered as a gradient among seeds of different species. A recent approach is that these different behaviors reside in the mature stage in which seeds are shed from the mother plant, being sensitive to desiccation seeds dispersed in a very immature stage. However, variations of the metabolism during maturation process and its consequences on seed viability after dispersion are still not well understood. The aim of this thesis was to evaluate the changes in the profile of the primary metabolism, carbohydrates and fatty acids during maturation and contextualize them to contribute to storability, using seeds of Poincianella pluviosa as model. The maturation period of these seeds is extensive and larger than its viability under environmental conditions. This process is characterized by a decrease of the primary energetic metabolism concomitant with the production of antioxidants via secondary metabolism and an accumulation of osmoprotectant compounds, wherein the last months of maturation are essential for large increase of seed vigor. These results were compared to seeds of Caesalpinia echinata, showing that low temperatures of storage increase these seeds storability, suggesting the presence of a reduced metabolism after dispersion. Both present antioxidant mechanisms, although not seem enough to control oxidation processes during storage. Differences on the extension of maturation between the two species can explain the storability of these seeds after shedding, when an advance in maturation would provide a greater reduction of primary energy metabolism / Doutor

Orientador: Anthony César de Souza Castilho / Resumo: A superestimulação ovariana é uma das biotecnologias utilizadas com objetivo de aumentar o potencial reprodutivo de fêmeas com alto valor econômico através da obtenção de múltiplas ovulações e tem sido amplamente empregada na espécie bovina. O conhecimento da dinâmica folicular permitiu o desenvolvimento de diversos protocolos hormonais capazes de regular o desenvolvimento folicular, o momento e o número de ovulações produzidas. As duas gonadotrofinas mais utilizadas para induzir o crescimento de múltiplos folículos durante esses protocolos são o hormônio folículo-estimulante (FSH) e a gonadotrofina coriônica equina (eCG); e ambos têm se mostrado eficazes. Sabe-se que a utilização da superestimulação ovariana utilizando FSH provoca mudanças positivas nos complexos cumulus-oócito (CCOs) e que a utilização do eCG no final do tratamento superestimulatório aumenta a resposta ovulatória, a ocorrência de estro, as concentrações de progesterona e as taxas de prenhes em programas de inseminação artificial (IA). Deste modo, o uso desses protocolos parece alterar o microambiente folicular e consequentemente a competência dos CCOs que se desenvolvem nele. Dentre os vários fatores presentes nesse microambiente estão as vesículas extracelulares (VEs; incluindo os exossomos), que carregam diversas moléculas como mRNA e microRNAs (miRNAs). Diante disso, o presente estudo visou avaliar o efeito da superestimulação ovariana com FSH ou FSH combinado a eCG, sobre a expressão gênica de embriões ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ovarian superestimulation is a biotecnology used to increase the reproductive potential of females with high economic value by obtaining multiple ovulations and has been widely used in cattle. The follicular dynamics knowledge allows the development of numerous hormonal protocols able to regulate follicular development, the moment and the number of ovulations produced. Two most used gonadotrophins to induce the growth of multiple follicles during these protocols are follicle stimulating hormone (FSH) and chorionic gonadotropin equine (eCG) and both have proven effective. It is known that the ovarian superstimulation using FSH causes positives changes in cumulus-oocyte complexes (COCs) and the use of eCG at the end of superstimulatory treatment increases the ovulatory response, the oestrus occurrence, progesterone concentrations and pregnancy rates in artificial insemination (AI). Thus, these protocols seems to alter the follicular microenvironment and therefore the competence of COCs that development it. Among the several factors presents in this microenvironment are the extracellular vesicles (EVs; including the exosomes), that carry different molecules such mRNA and microRNA (miRNAs). Therefore, this study aimed to assess the effects of ovarian superstimulation with FSH or FSH combined with eCG on embryo gene expression produced from COCs recovered from superstimulated cows. Additionally, it was checked if the exosomes presents in follicular fluid from these cows, when adde... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre