Apesar de apenas 10% dos indivíduos infectados por Mycobacterium tuberculosis desenvolverem tuberculose, essa doença causa a morte de milhares de pessoas anualmente. Sabendo que o background genético do hospedeiro está relacionado com suscetibilidade/resistência à infecção por M. tuberculosis, nosso grupo vem avaliando diferenças na resposta imunológica entre camundongos C57BL/6 resistentes e BALB/c suscetíveis. No presente estudo, nós nos propusemos a avaliar populações de macrófagos M1 e M2 em animais com capacidade diferente de elaborar resposta imune celular nessa infecção. Animais C57BL/6, que elaboram resposta imune celular de maior magnitude, e BALB/c foram infectados com M. tuberculosis, e avaliados aos 30 e 70 dias de infecção. Observamos maior porcentagem de células CD11b+Ly-6C+, que caracterizam monócitos inflamatórios, no pulmão de animais BALB/c com 70 dias de infecção comparada à porcentagem detectada em animais C57BL/6 com mesmo período de infecção. Houve correlação positiva significativa entre número de bacilos e expressão gênica para iNOS aos 30 dias de infecção comparando ambas as linhagens. Ao contrário da nossa hipótese inicial, observamos maior porcentagem de células CD11b+F4/80+CD206+, que caracteriza o fenótipo de macrófagos M2, no pulmão de animais C57BL/6 com 70 dias de infecção comparada à porcentagem detectada em animais BALB/c com mesmo período de infecção, havendo correlação inversa significativa de células CD11b+F4/80+CD206+ e número de bacilos aos 70 dias de infecção. Não houve diferença na análise funcional de macrófagos M1 e M2 obtidos a partir de precursores da medula óssea, comparando as duas linhagens de camundongos. Dessa forma, experimentos com o propósito de estudar a função dessas células in vivo serão conduzidos para avaliar se os macrófagos M2 participam da resposta protetora que auxilia na eliminação dos bacilos ou na resposta protetora que auxilia no reparo tecidual do hospedeiro. / Despite only 10% of individuals infected with Mycobacterium tuberculosis develop tuberculosis, this disease causes millions of deaths annually. We know that the host genetic background is associated with susceptibility/resistance to M. tuberculosis-infection. Therefore, our group has studied differences in the immunologic response between resistant C57BL/6 mice and susceptible BALB/c mice. In the present study, our aim was to evaluate populations of M1 and M2 macrophages in mice that generate different magnitude of cellular immune response in this infection. C57BL/6 mice, which elaborate a higher immune cellular response, and BALB/c mice were infected with M. tuberculosis, and evaluated 30 and 70 days post infection. We observed higher percentage of CD11b+Ly-6C+ cells, which characterize inflammatory monocytes, in the lung of BALB/c mice with 70 days of infection compared to the percentage detected in C57BL/6 animals in the same period of infection. There was a significant positive correlation between CFU number and iNOS genic expression comparing both mouse strains 30 days post infection. On the contrary to our initial hypothesis, we observed higher percentage of CD11b+F4/80+CD206+ cells, which characterize M2 macrophage phenotype, in the lung of Day 70-infected C57BL/6 animals compared with the percentage detected in BALB/c mice at the same time of infection. There was a significant inverse correlation between CD11b+F4/80+CD206+ cells and bacillus number at 70 days post infection. There was no difference in the functional analysis of M1 and M2 macrophages obtained from precursors of bone marrow, comparing both mouse strains. Therefore, experimental assays with the aim to study whether M2 macrophages contribute for the protective immune response that induce bacillus clearance or contribute to the protective immune response that promote host tissue repair will be performed in an attempt to understand better the role of these cells in the M. tuberculosis-infection.

Apesar de apenas 10% dos indivíduos infectados por Mycobacterium tuberculosis desenvolverem tuberculose, essa doença causa a morte de milhares de pessoas anualmente. Sabendo que o background genético do hospedeiro está relacionado com suscetibilidade/resistência à infecção por M. tuberculosis, nosso grupo vem avaliando diferenças na resposta imunológica entre camundongos C57BL/6 resistentes e BALB/c suscetíveis. No presente estudo, nós nos propusemos a avaliar populações de macrófagos M1 e M2 em animais com capacidade diferente de elaborar resposta imune celular nessa infecção. Animais C57BL/6, que elaboram resposta imune celular de maior magnitude, e BALB/c foram infectados com M. tuberculosis, e avaliados aos 30 e 70 dias de infecção. Observamos maior porcentagem de células CD11b+Ly-6C+, que caracterizam monócitos inflamatórios, no pulmão de animais BALB/c com 70 dias de infecção comparada à porcentagem detectada em animais C57BL/6 com mesmo período de infecção. Houve correlação positiva significativa entre número de bacilos e expressão gênica para iNOS aos 30 dias de infecção comparando ambas as linhagens. Ao contrário da nossa hipótese inicial, observamos maior porcentagem de células CD11b+F4/80+CD206+, que caracteriza o fenótipo de macrófagos M2, no pulmão de animais C57BL/6 com 70 dias de infecção comparada à porcentagem detectada em animais BALB/c com mesmo período de infecção, havendo correlação inversa significativa de células CD11b+F4/80+CD206+ e número de bacilos aos 70 dias de infecção. Não houve diferença na análise funcional de macrófagos M1 e M2 obtidos a partir de precursores da medula óssea, comparando as duas linhagens de camundongos. Dessa forma, experimentos com o propósito de estudar a função dessas células in vivo serão conduzidos para avaliar se os macrófagos M2 participam da resposta protetora que auxilia na eliminação dos bacilos ou na resposta protetora que auxilia no reparo tecidual do hospedeiro. / Despite only 10% of individuals infected with Mycobacterium tuberculosis develop tuberculosis, this disease causes millions of deaths annually. We know that the host genetic background is associated with susceptibility/resistance to M. tuberculosis-infection. Therefore, our group has studied differences in the immunologic response between resistant C57BL/6 mice and susceptible BALB/c mice. In the present study, our aim was to evaluate populations of M1 and M2 macrophages in mice that generate different magnitude of cellular immune response in this infection. C57BL/6 mice, which elaborate a higher immune cellular response, and BALB/c mice were infected with M. tuberculosis, and evaluated 30 and 70 days post infection. We observed higher percentage of CD11b+Ly-6C+ cells, which characterize inflammatory monocytes, in the lung of BALB/c mice with 70 days of infection compared to the percentage detected in C57BL/6 animals in the same period of infection. There was a significant positive correlation between CFU number and iNOS genic expression comparing both mouse strains 30 days post infection. On the contrary to our initial hypothesis, we observed higher percentage of CD11b+F4/80+CD206+ cells, which characterize M2 macrophage phenotype, in the lung of Day 70-infected C57BL/6 animals compared with the percentage detected in BALB/c mice at the same time of infection. There was a significant inverse correlation between CD11b+F4/80+CD206+ cells and bacillus number at 70 days post infection. There was no difference in the functional analysis of M1 and M2 macrophages obtained from precursors of bone marrow, comparing both mouse strains. Therefore, experimental assays with the aim to study whether M2 macrophages contribute for the protective immune response that induce bacillus clearance or contribute to the protective immune response that promote host tissue repair will be performed in an attempt to understand better the role of these cells in the M. tuberculosis-infection.

Utilizando modelo de coinflamação tuberculose e alergia (TB/OVA), nosso grupo mostrou que camundongos BALB/c coinflamados apresentaram diminuição significativa no número de bacilos, associada com diminuição no infiltrado granulomatoso no pulmão, aumento na produção de leucotrieno B4 e no número de células CD8+, quando comparados ao grupo infectado com Mycobacterium tuberculosis (TB). No presente estudo, nosso objetivo foi avaliar os mecanismos envolvidos na restrição ao crescimento dos bacilos nos animais do grupo TB/OVA. Quatro estratégias foram usadas: I) Para avaliar o papel dos linfócitos CD8+ no modelo TB/OVA, foram utilizados camundongos deficientes para a molécula CD8 (CD8KO). Foi observado que não houve diferenças significativas no crescimento do bacilo no pulmão dos animais CD8KO-TB/OVA e WT-TB/OVA. No entanto, nos pulmões dos animais WT-TB/OVA houve maior crescimento de bacilos em relação aos animais WT-TB, diferente do previamente observado com os animais TB/OVA da linhagem BALB/c. Para avaliar o papel dos leucotrienos foram usadas as seguintes estratégias: II). Camundongos da linhagem 129Sv tratados com MK886, inibidor da enzima 5-lipoxigenase (5LO), envolvida na síntese de mediadores lipídicos; III) animais 129Sv, deficientes para a expressão da 5LO (5LOKO). Foi observado que o tratamento com MK886 não afetou o número de bacilos no pulmão do grupo coinflamado TB/OVA quando comparado ao grupo TB/OVA. Além disso, diferente do que foi previamente observado em animais BALB/c, os animais 129Sv coinflamados foram mais susceptíveis que os animais 129Sv infectados. Do contrário, animais 5LOKO-TB/OVA foram mais resistentes que os camundongos WT-TB/OVA. Para avaliar se alterações no infiltrado granulomatoso estavam relacionadas com o infiltrado de macrófagos no pulmão, usamos a quarta estratégia: IV) quantificação das populações de macrófagos M1 e M2. Foi observado que os animais TB/OVA apresentaram aumento da população de macrófagos M2 no pulmão, enquanto a população de macrófagos M1 manteve-se inalterada comparado-se ao grupo apenas infectado. A diminuição no crescimento de bacilos nos animais TB/OVA foi dependente dos macrófagos M2, pois animais deficientes para a expressão do receptor de IL-33 submetidos ao protocolo de coinflamação tiveram diminuição da população de macrófagos M2, e foram susceptíveis à infecção. Esses resultados mostram que a diminuição no crescimento de bacilos nos animais coinflamados TB/OVA é dependente do aumento da população de macrófagos M2. / Using model of coinfection allergy and tuberculosis (TB / OVA), our group showed that coinfected BALB/c showed a significant decrease in the number of bacilli, associated with a decrease in granulomatous infiltrate the lung, increased production of leukotriene B4 and the number of cells CD8+, compared to the group infected with Mycobacterium tuberculosis (TB). To evaluate the mechanisms involved in reducing the growth of bacilli in group TB/OVA, were used four strategies: I) To assess the role of CD8+ lymphocytes in model TB/OVA, we used mice deficient for the molecule CD8 (CD8KO).We was observed that the number of bacilli in the lungs of animals in the group CD8KO-TB/OVA and WT-TB/OVA was similar. However, the lungs of animals WT-TB/OVA growth of bacillus was higher compared to WT animals, TB, unlike what was previously observed with background genetic BALB/c. To evaluate the role of leukotrienes, we use the following strategies: II) strain 129Sv mice treated with MK886, an inhibitor of the enzyme 5-lipoxygenase (5LO), involved in the synthesis of lipid mediators, III) 129Sv animals deficient for the expression of 5LO (5LOKO). We observed that treatment with MK886 did not affect the number of bacilli in the lung of the coinfected group TB/OVA. Moreover, unlike what was previously observed in animals BALB/c mice, coinfected 129Sv were more susceptible than the animals infected 129Sv. On the contrary, 5LOKO-TB/OVA animals were more resistant than mice WT-TB/OVA. To assess whether changes in granulomatous infiltrates were related to macrophages, we use the fourth strategy: IV) quantification of macrophage populations M1 and M2. We observed that M2 population in animals TB/OVA showed increased lung. The decrease in bacilli growth of animals TB/OVA was dependent on macrophage M2, since animals deficient for the expression of IL-33 protocol submitted to coinfected protocol had decreased macrophage population M2, and were susceptible to infection. These results show that the reduction in growth of bacilli in coinfected animals TB/OVA is dependent increase in macrophage population M2.

Utilizando modelo de coinflamação tuberculose e alergia (TB/OVA), nosso grupo mostrou que camundongos BALB/c coinflamados apresentaram diminuição significativa no número de bacilos, associada com diminuição no infiltrado granulomatoso no pulmão, aumento na produção de leucotrieno B4 e no número de células CD8+, quando comparados ao grupo infectado com Mycobacterium tuberculosis (TB). No presente estudo, nosso objetivo foi avaliar os mecanismos envolvidos na restrição ao crescimento dos bacilos nos animais do grupo TB/OVA. Quatro estratégias foram usadas: I) Para avaliar o papel dos linfócitos CD8+ no modelo TB/OVA, foram utilizados camundongos deficientes para a molécula CD8 (CD8KO). Foi observado que não houve diferenças significativas no crescimento do bacilo no pulmão dos animais CD8KO-TB/OVA e WT-TB/OVA. No entanto, nos pulmões dos animais WT-TB/OVA houve maior crescimento de bacilos em relação aos animais WT-TB, diferente do previamente observado com os animais TB/OVA da linhagem BALB/c. Para avaliar o papel dos leucotrienos foram usadas as seguintes estratégias: II). Camundongos da linhagem 129Sv tratados com MK886, inibidor da enzima 5-lipoxigenase (5LO), envolvida na síntese de mediadores lipídicos; III) animais 129Sv, deficientes para a expressão da 5LO (5LOKO). Foi observado que o tratamento com MK886 não afetou o número de bacilos no pulmão do grupo coinflamado TB/OVA quando comparado ao grupo TB/OVA. Além disso, diferente do que foi previamente observado em animais BALB/c, os animais 129Sv coinflamados foram mais susceptíveis que os animais 129Sv infectados. Do contrário, animais 5LOKO-TB/OVA foram mais resistentes que os camundongos WT-TB/OVA. Para avaliar se alterações no infiltrado granulomatoso estavam relacionadas com o infiltrado de macrófagos no pulmão, usamos a quarta estratégia: IV) quantificação das populações de macrófagos M1 e M2. Foi observado que os animais TB/OVA apresentaram aumento da população de macrófagos M2 no pulmão, enquanto a população de macrófagos M1 manteve-se inalterada comparado-se ao grupo apenas infectado. A diminuição no crescimento de bacilos nos animais TB/OVA foi dependente dos macrófagos M2, pois animais deficientes para a expressão do receptor de IL-33 submetidos ao protocolo de coinflamação tiveram diminuição da população de macrófagos M2, e foram susceptíveis à infecção. Esses resultados mostram que a diminuição no crescimento de bacilos nos animais coinflamados TB/OVA é dependente do aumento da população de macrófagos M2. / Using model of coinfection allergy and tuberculosis (TB / OVA), our group showed that coinfected BALB/c showed a significant decrease in the number of bacilli, associated with a decrease in granulomatous infiltrate the lung, increased production of leukotriene B4 and the number of cells CD8+, compared to the group infected with Mycobacterium tuberculosis (TB). To evaluate the mechanisms involved in reducing the growth of bacilli in group TB/OVA, were used four strategies: I) To assess the role of CD8+ lymphocytes in model TB/OVA, we used mice deficient for the molecule CD8 (CD8KO).We was observed that the number of bacilli in the lungs of animals in the group CD8KO-TB/OVA and WT-TB/OVA was similar. However, the lungs of animals WT-TB/OVA growth of bacillus was higher compared to WT animals, TB, unlike what was previously observed with background genetic BALB/c. To evaluate the role of leukotrienes, we use the following strategies: II) strain 129Sv mice treated with MK886, an inhibitor of the enzyme 5-lipoxygenase (5LO), involved in the synthesis of lipid mediators, III) 129Sv animals deficient for the expression of 5LO (5LOKO). We observed that treatment with MK886 did not affect the number of bacilli in the lung of the coinfected group TB/OVA. Moreover, unlike what was previously observed in animals BALB/c mice, coinfected 129Sv were more susceptible than the animals infected 129Sv. On the contrary, 5LOKO-TB/OVA animals were more resistant than mice WT-TB/OVA. To assess whether changes in granulomatous infiltrates were related to macrophages, we use the fourth strategy: IV) quantification of macrophage populations M1 and M2. We observed that M2 population in animals TB/OVA showed increased lung. The decrease in bacilli growth of animals TB/OVA was dependent on macrophage M2, since animals deficient for the expression of IL-33 protocol submitted to coinfected protocol had decreased macrophage population M2, and were susceptible to infection. These results show that the reduction in growth of bacilli in coinfected animals TB/OVA is dependent increase in macrophage population M2.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-18T13:08:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PolarizacaoRespostaMacrofagos.pdf: 4956070 bytes, checksum: dfbd8d87407fefda3b4ce020c4b6ec2f (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-11-07T16:22:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PolarizacaoRespostaMacrofagos.pdf: 4956070 bytes, checksum: dfbd8d87407fefda3b4ce020c4b6ec2f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-07T16:22:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PolarizacaoRespostaMacrofagos.pdf: 4956070 bytes, checksum: dfbd8d87407fefda3b4ce020c4b6ec2f (MD5) Previous issue date: 2016 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A hanseníase é uma doença espectral na qual o bacilo provoca alteração no ambiente tecidual e modificações no curso da resposta imunológica no espectro da doença. Os macrófagos são uma das principais células que participam da resposta contra o M. leprae sofrendo processo de diferenciação, modificando seu comportamento e polarizando a resposta entre a via clássica composta pelos macrófagos M1 que produzem mediadores pró-inflamatórios e a via alternativa conhecida como via reparadora tendo como representante os macrófagos M2 e seus subtipos que produzem citocinas anti-inflamatórias. Na doença de hansen, pouco são os estudos que abordaram os caminhos da polarização no espectro da doença. Neste contexto, no intuito de compreender melhor o comportamento da célula nas formas polares da doença, o presente estudo investigou os caminhos da polarização de resposta dos macrófagos e suas possíveis implicações na doença de hansen. Ao todo, foram utilizados 33 blocos com fragmentos de lesão de pele de pacientes com diagnóstico confirmado para a doença segundo os critérios de Ridley e Jopling. Na distribuição dos casos, 17 fizeram parte do grupo tuberculóide e 16 do grupo virchowiano. Para a investigação dos marcadores, CD68, CD163, Arginase 1, iNOS, STAT3, FGF b, TGF-β e das citocinas, IL-10, IL-13, IL-22 em lesões de pele, o método imunoistoquímico foi utilizado. De acordo com os dados obtidos, os resultados mostraram diferença estatística significante dentre os grupos estudados sendo que a expressão de CD68, CD163, enzimas, fatores de crescimento, STAT3 e de citocinas foram maiores na forma virchowiana quando comparadas a tuberculóide. Nas análises de correlação, foi observado a existência de sinergismo de reposta entre as citocinas anti-inflamatórias, fatores de crescimento, CD163 e arginase 1 na forma virchowiana da doença. No contexto da reposta da iNOS, no pólo suscetível da doença, o estudo sinaliza para uma nova abordagem envolvendo o comportamento da iNOS, STAT3 e IL-22 sendo que nesta nova relação, na doença de hansen, foi observada a correlação positiva estatisticamente significante entre os marcadores na forma virchowiana. Dessa forma, o presente estudo conclui que os marcadores que compõe a resposta dos macrófagos M1 e M2, surgem como alternativa para o maior entendimento da resposta imunológica inata, nas formas polares da doença reforçando o papel das citocinas, enzimas e receptores na resposta microbicida, de reparo e de supressão na forma virchowiana da doença. / Leprosy is a disease that causes changes in the tissue and in the course of the immune response. Macrophages are one of the main cells which participating in the response against M. leprae. These cells undergo a differentiation process, modifying their behavior and polarizing the response between the classical pathway, composed of M1 macrophages that produce pro-inflammatory mediators and the alternative pathway known as restorative pathway having as representative M2 macrophages and their subtypes that produce anti-inflammatory cytokines. In Hansen's disease, there are few studies that discuss the ways of polarization in the spectrum of the disease. In order to understand the behavior of the cell in the polar form soft he disease, this study investigated the ways of macrophage response polarization and its possible implications for Hansen's disease. We used 33 blocks with skin fragments of patients with confirmed diagnosis for the disease according to the Ridley and Jopling criteria. The distribution of cases: 17 were tuberculoid and 16 lepromatous. The immunohistochemical method was used for the investigation of the markers CD68, CD163, arginase 1, iNOS, STAT3, FGF b, TGF-β and cytokines, IL-10, IL-13, IL-22 in skin lesions. The results showed a statistically significant difference among the groups and the expression of CD68, CD163, enzymes, growth factors, cytokines and STAT3 were higher in lepromatous forms when compared tuberculoid form. In the correlation analysis, it was observed the synergism between the response of anti-inflammatory cytokines, growth factors, arginase 1 and CD163 in lepromatous form. In the context of iNOS response in susceptible pole of the disease, the study points to a new approach involving iNOS, STAT3 and IL-22 behavior and this new relationship in Hansen's disease, a statistically significant positive correlation was observed between the markers in the lepromatous form. This study concludes: the markers that compose the response of M1 and M2 macrophages are an alternative for a better understanding of innate immune response, in polar forms of the disease increasing the role of cytokines, enzymes, and receptors in the microbicidal response, repair and suppression in the lepromatous form of the disease.

Submitted by Daniella Santos (daniella.santos@ufma.br) on 2017-08-29T16:11:39Z No. of bitstreams: 1 MayaraSilva.pdf: 2720807 bytes, checksum: 1a7eeabdd7df89c4b7c0690e8136cb51 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T16:11:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MayaraSilva.pdf: 2720807 bytes, checksum: 1a7eeabdd7df89c4b7c0690e8136cb51 (MD5) Previous issue date: 2017-03-28 / CNPq / CAPES / FAPEMA / There is an increasing interest to find new products with therapeutic potential to the treatment of leishmaniasis, due the high toxicity and resistance of the majority of available treatments. Our aim was to formulate, characterise and evaluate the antiLeishmania amazonensis activity of babassu loaded poly(lactic-co-glycolic acid) – PLGA microparticles. The PLGA microparticles were loaded with the aqueous extract of babassu mesocarp (MMP) and evaluated for size, zeta potential, drug content, encapsulation efficiency in comparison to unloaded microparticles (CMP). The antiLeishmania effect was evaluated to promastigotes forms or to amastigotes in Balb/c macrophage cells infected with Leishmania amazonensis. Following macrophage treatment with MMP the percent of infected cells was determined by Giemsa staining and compared with cells treated with CMP or with free babassu extract (MESO). To find the potential mechanisms of the activity of MMPs, TNF -α, IL-6, IL-10, hydrogen peroxide, arginase and accumulated nitrite in the culture supernatants of the treated and untreated cells were also measured by ELISA, and by colorimetric assays, respectivelly. The size range of the microparticles was between 3 and 6,4 μm with an average zeta potential of −25 mV and encapsulation efficiency of 45%. The antiLeishmania activity of babassu-loaded microparticles was 10-fold higher than MESO. MMP showed an overall bioavailability and hence were more effective in eliminating intracellular parasites than the other formulations. Babassu microparticles also reduced the ex vivo parasite infectivity and this effect seems to be directly related to a polarization of macrophages to the M1 phenotype with an increased production of nitric oxide, hydrogen peroxide and TNF-α. Interestingly, this overexpression of TNF-α didn’t impair cell viability, suggesting the anti-apoptotic effects of the MMP in infected macrophages. These findings indicate that babassu load microparticles may be useful for targeting for new drugs, due to the immunomodulatory effects of polarization to M1 macrophages, infected with L. amazonensis, and further provide motivations for future studies on human cels in vitro and in animal models of leishmaniasis in vivo. / A bioprospecção de produtos com potencial terapêutico no tratamento da leishmaniose tem despertado crescente interesse, pois as drogas atualmente utilizadas apresentam elevada toxicidade e, muitas vezes, os protozoários são resistentes, sobretudo nos tratamentos prolongados. Na perspectiva de desenvolver uma nova formulação com ação anti-Leishmania avaliou-se a atividade do extrato aquoso do mesocarpo de babaçu (Attalea speciosa Mart) encapsulado em micropartículas biodegradáveis de PLGA [poly(lactic-co-glycolic acid]. Inicialmente, foi realizado o estudo morfométrico e funcional das micropartículas. Em seguida foi avaliada a atividade anti-Leishmania por ação sobre as formas promastigotas, comparando os efeitos das micropartículas de PLGA carregadas com extrato do mesocarpo de babaçu (MMP) com o extrato livre (Meso) e com micropartículas sem o mesocarpo, utilizadas como controle negativo (CMP). Também avaliamos os efeitos de MMP em culturas de macrófagos peritoneais, de camundongos Balb/c, infectados ou não com formas amastigotas de Leishmania amazonensis. Os seguintes parâmetros foram investigados nos sobrenadantes das culturas de macrófagos: quantificação das citocinas IL-10, IL-6 e TNF-α por ELISA, detecção de peróxido de hidrogênio, óxido nítrico e atividade da arginase. Foi determinada a taxa de infecção e o percentual de células infectadas. O mesocarpo de babaçu apresentou forteinteração com antígenos de L. amazonensis. A caracterização das micropartículas mostrou que as MMP apresentaram diâmetro e potencial zeta compatíveis com as micropartículas controle (CMP) e a eficiencia de encapsulamento do extrato foi de 45%. As MMPs foram mais ativamente fagocitadas do que o extrato de babaçu livre, ocasionando aumento de 25% no índice fagocítico, após 24 horas de incubação. Além de baixa toxicidade para macrófagos peritoneais, o encapsulamento do mesocarpo de babaçu potenciou em quase 10 vezes a ação anti-Leishmania para as formas promastigotas de Leishmania amazonensis, quando comparado ao extrato livre. O tratamento com MMP reduziu o número de amastigotas e a taxa de infecção de macrófagos peritoneais, possivelmente por seu efeito imunomodulador na polarização de macrófagos para o fenótipo M1, resultando no aumento de TNF-α e óxido nítrico e na inibição da produção de IL-10. Concluímos que o microencapsulamento do mesocarpo de babaçu melhorou a ação anti-Leishmania do extrato, mas manteve o seu efeito imunomodulador o que contribuiu para o melhor efeito tanto sobre os protozoários como para as células infectadas, evitando a morte das células por necrose ou apoptose. Os dados em conjunto indicam que as micropartículas MMP podem ser fortes candidatas ao desenvolvimento de novos produtos, devido aos seus efeitos imunomoduladores na polarização de macrófagos infectados com L. amazonensis para um perfil M1 e, adicionalmente, estimulam novos estudos quanto ao seus efeitos sobre células humanas in vitro e em modelo animal da leishmaniose in vivo.

O carcinoma espinocelular oral (CECO) corresponde a aproximadamente 95% das neoplasias malignas que acometem a cavidade oral. Os fatores de risco clássicos incluem o tabagismo e etilismo; no entanto, as disfunções do sistema imune em decorrência do envelhecimento (imunossenescência) na patogênese do CECO são muito pouco estudados. Análises comparativas vêm sendo feitas para melhor caracterização do perfil de pacientes jovens e idosos acometidos pelo CECO, o qual permanece ainda controverso. Vários estudos têm mostrado que os macrófagos associados ao tumor (MATs) no CECO de pacientes idosos exibem um fenótipo M2 (pró-tumoral), com propriedades moduladoras do estroma vascular, promovendo a angiogênese. No entanto, considerando a imunossenescência, não se sabe o perfil de MATs e seus efeitos na angiogenese no CECO afetando pacientes jovens. Assim, este estudo analisou por meio da técnica imunoistoquímica, a frequência e localização de MATs em correlação com a angiogênese, no CECO, afetando pacientes jovens e idosos. Cinquenta e sete biópsias de CECO divididos em 3 grupos (I: <40 anos [n=17]; II: 40-65 anos [n=20]; III: >65 anos [n=20]) foram selecionados para compor o estudo, sendo classificados morfologicamente seguindo às recomendações da OMS (2017). Os grupos I, II e III foram comparados quanto à imunoexpressão de CD68 e CD163 para análise de MATs e de CD34 (vasos sanguíneos) e D2-40 (vasos linfáticos) para avaliação da densidade microvascular (DMV), área microvascular (AMV) e área vascular total (AVT). A análise imunoistoquímica evidenciou similar expressão de CD68 e CD163 nos três grupos (p>0,05). A avaliação da DMV, AMV e AVT sanguínea e linfática também exibiu padrões similares, com predominância significativa (p<0.05) de vasos sanguíneos, nos três grupos analisados. Não houve correlação significativa quando avaliados marcadores macrofágicos e angiogênicos. Nossos resultados mostram um similar perfil de MATs e angiogênese quando comparados os três grupos estudados, sugerindo participação de mecanismos moleculares do microambiente tumoral na manutenção da predominância de macrófagos M2 e vasos sanguíneos no CECO afetando pacientes jovens e idosos / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) corresponds to approximately 95% of all cases of oral cavity malignancies. The classic risk factors include smoking and alcoholism; however, immune system dysfunctions due to aging (immunoscencence) in OSCC pathogenesis are poorly studied. Comparative analyzes have been made to better characterize the profile of young and old patients affected by the OSCC, which remains controversial. Several studies have shown that tumor-associated macrophages (TAMs) in OSCC of elderly patients exhibit a pro-tumoral M2 phenotype, with vascular stroma modulating properties, promoting angiogenesis. However, considering immunoscencence, the profile of TAMs and their effects on angiogenesis in OSCC affecting young patients is unknown. Thus, this study analyzed by immunohistochemical technique, the frequency and location of TAMs in correlation with angiogenesis in OSCC affecting young and elderly patients. Fiftyseven biopsies were divided into three groups (I: <40 years [n=17]; II: 40-65 years [n=20]; III: > 65 years [n=20]) and selected to compose this study, being classified morphologically following WHO (2017) recommendations. Groups I, II and III were compared for immunoexpression of CD68 and CD163 for analysis of TAMs, and CD34 (blood vessels) and D2-40 (lymphatic vessels) for evaluation of microvessel density (MVD), microvascular area (MVA) and total vascular area (TVA). Immunohistochemical analysis showed similar expression of CD68 and CD163 in the three groups (p>0.05). The evaluation of blood and lymphatic MVD, MVA and TVA also showed similar patterns, with a significant predominance (p<0.05) of blood vessels in the three groups analyzed. There was no significant correlation when evaluating macrophage and angiogenic markers. Our results show a similar profile of TAMs and angiogenesis when compared to the three groups studied, suggesting participation of molecular mechanisms of the tumor microenvironment in the maintenance of M2-polarized macrophages and blood vessels in OSCC affecting young and elderly patients