Made available in DSpace on 2014-12-17T15:34:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ManoelPN_DISSERT.pdf: 1337463 bytes, checksum: aaed50bece00427adf0672e0a99b898a (MD5) Previous issue date: 2012-06-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / We analyzed the quality of raw milk from eight dairy farms in Rio Grande do Norte stored in a cooling tank , in order to evaluate methods for determining somatic cell counts (SCC). The Somaticell? kit and a portable Direct Cell Counter (DCC) were compared with each other and with the MilkoScanTM FT+ (FOSS Denmark), which uses Fourier Transform Infrared (FTIR) spectroscopy). Direct cell counter data were processed for somatic cell scores (log-transformed somatic cell count) and analyzed with the SAS?, statistical package , Statistical Analysis System, (SAS, INSTITUTE, 1998). Comparison of means and correlation of somatic cell scores were conducted using Pearson s correlation coefficient and the Tukey Test at 1 %. No significant difference was observed for comparison of means. The correlation between somatic cell scores was significant, that is, 0.907 and 0.876 between the MilkoScanTM FT+ and the Somaticell? kit and Direct Cell Count (DCC) respectively, and 0.943 between the Somaticell? kit and Direct Cell Count (DCC). The methods can be recommended for monitoring the quality of raw milk kept in a cooling tank in the production unit / A qualidade do leite cru mantido em tanque de resfriamento de oito propriedades do Rio Grande do Norte foi analisada, com o objetivo de avaliar m?todos para determina??o da contagem de c?lulas som?ticas (CCS). Foram usados o kit Somaticell? e o equipamento port?til Direct Cell Counter (DCC), sendo comparados entre si e com o MilkoScanTM FT+ (FOSS Denmark) que usa a metodologia do Infravermelho com Transformada de Fourier (IVTF). Os dados de CCS foram transformados para escore de c?lulas som?ticas ECS log (CCS) e analisados pelo pacote estat?stico SAS? Statical Analisys System, (SAS, INSTITUTE, 1998). Foram feitas a compara??o das m?dias e a correla??o dos escores de c?lulas som?ticas por meio do coeficiente de correla??o de Pearson, sendo aplicado o Teste de Tukey a 1%. N?o foi observada diferen?a significativa para a compara??o das m?dias. A correla??o entre os escores de c?lulas som?ticas foi significativa, sendo de 0,907 e 0,876 entre o MilkoScanTM FT+ e o kit Somaticell? e o Direct Cell Count (DCC) respectivamente, e de 0,943 entre o kit Somaticell? e o Direct Cell Count (DCC). Os m?todos avaliados podem ser recomendados para o monitoramento da qualidade do leite cru refrigerado mantido em tanque de resfriamento em n?vel de unidade produtiva

The objective was to evaluate the effect of the type of milking and the environment in the quality of raw milk by identification the Somatic Cell Count - CCS in samples obtained from farms in the mesoregion of south goiano and correlate it with the different types of milk, and the milk components: fat, protein, lactose and total solids (ST). Furthermore, we sought to diagnose the prevalence of subclinical mastitis by CCS, evaluate the correlation between CCS and milking type with antimicrobial residues, and check the influence of season, temperature and humidity index (THI) and Equivalent Temperature Index (ITE) on the CCS. The research developed in farms with different types of milking, being divided into manual and mechanical milking. The datas were collected from January 2011 to December 2013, and in each property was collected a monthly sample in the expansion tank, a total of 8242 samples, which were later sent for analysis. The diagnosis of the milk quality held by electronic count of somatic cells, for the FossomaticTM® and the levels of the components were analyzed using the MilkoscanTM FT®, the detection of antibiotic residues was performed using the Delvotest-P and meteorological data were obtained from the National Institute of Meteorology - INMET in Catalão-GO station. Among the variables type of it milks and subclinical mastitis, there was dependent relationship (p <0.05). The milking mechanics was the one with a higher prevalence of subclinical mastitis with 58% (910) of the samples presented CCS> 300.000 cells/mL. Among the variables type of milking and CCS advocated by Instruction n°62/2011 (BRASIL, 2011), there was a significant relationship (p <0.05). Only 19,53% (1610) of the samples had CCS > 500.000 cells/mL. According to the statistical analysis, there was a positive correlation between CCS and fat and ST, however, there was a negative correlation between the CCS and the protein and lactose contents. The type of milking and the somatic cell count did not affect the presence or absence of antimicrobial residues. During the rainy season has become a CCS elevation compared to the dry season, but there was no correlation between CCS and environmental indices (ITE and ITU). Regarding environmental indices can be seen that with the increase of the ITU occurred a decrease in fat and an increase in ST and lactose. It can be concluded that the type of manual milking showed the lowest prevalence of subclinical mastitis in relation to milking and with elevated CCS is a reduction in the concentrations of protein and lactose and an increase in fat and total solids in the raw milk. / Objetivou-se avaliar o efeito do tipo de ordenha e do ambiente na qualidade do leite cru por meio da identificação da Contagem de Células Somáticas - CCS nas amostras obtidas das propriedades rurais da mesorregião do sul goiano e correlacioná-las com os diferentes tipos de ordenha, bem como os componentes do leite: gordura, proteína, lactose e sólidos totais (ST). Ademais, buscou-se também diagnosticar a prevalência da mastite subclínica por meio da CCS, avaliar a correlação entre CCS e tipo de ordenha com os resíduos de antimicrobianos, verificar a influência do período do ano, Índice de Temperatura e Umidade (ITU) e Índice de Temperatura Equivalente (ITE) sobre a CCS. A pesquisa desenvolveu-se em fazendas com diferentes tipos de ordenha, sendo essas divididas em ordenha manual e mecânica. O trabalho de campo foi realizado de janeiro de 2011 a dezembro de 2013, sendo que em cada propriedade foi coletada uma amostra mensal no tanque de expansão, perfazendo um total de 8242 amostras, que posteriormente, foram enviadas para análise. O diagnóstico da qualidade do leite realizou-se por meio da CCS, pelo aparelho FossomaticTM®, os teores dos componentes foram analisados utilizando-se o MilkoscanTM FT®, a detecção de resíduos de antimicrobianos foi realizada através do Delvotest-P e os dados meteorológicos foram obtidos do Instituto Nacional de Meteorologia- INMET na estação de Catalão-GO. Entre as variáveis tipo de ordenha e mastite subclínica, houve relação de dependência (p<0,05). A ordenha mecânica foi a que obteve maior prevalência de mastite subclínica, 58% (910) com CCS > 300.000 células/mL. Entre as variáveis tipo de ordenha e a CCS preconizada pela Instrução Normativa n°62/2011 (BRASIL, 2011), houve relação significativa (p<0,05). Apenas 19,53% (1610) apresentaram CCS > 500.000 células/mL. De acordo com a análise estatística, existiu correlação positiva entre a CCS e o teor de gordura e ST, porém houve uma correlação negativa entre a CCS e os teores de proteína e lactose. O tipo de ordenha e a contagem de células somáticas não interferiram na presença ou ausência de resíduos de antimicrobianos. No período da chuva tem-se uma elevação de CCS se comparado ao período da seca, porém não houve correlação entre CCS e os índices ambientais (ITE e ITU). Em relação aos índices ambientais pode-se observar que com a elevação do ITU ocorreu uma redução nos teores de gordura e ST e um aumento no teor de lactose. Pode-se concluir que o tipo de ordenha manual obteve a menor prevalência de mastite subclínica em relação à ordenha mecânica e com a elevação da CCS tem-se uma redução nas concentrações dos teores de proteína e lactose e um aumento nos teores de gordura e sólidos totais do leite cru. / Mestre em Ciências Veterinárias

Os objetivos do presente estudo foram os de verificar a validade do método de reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para detectar e quantificar o Staphylococcus aureus em amostras de leite conservadas com bronopol oriundas de quartos mamários bovinos subclinicamente infectados, e de avaliar os efeitos da presença e da quantidade de células da bactéria sobre a contagem de células somáticas (CCS), a composição do leite (lactose, gordura, proteína bruta, proteína verdadeira e caseína), e a produção de leite de quartos mamários bovinos subclinicamente infectados pelo patógeno. Para a quantificação do S. aureus e das células somáticas bovinas por meio do qPCR, foi utilizado leite cru bovino para o preparo dos padrões como meio de diluição da inoculação seriada de células somáticas e do S. aureus ATCC 29213, e construídas as equações log10UFC = 37,86 23,54 log10CtSAU e log10CCS = 49,3 - 34,0 log10CtBMCB, com base nos resultados obtidos pelas metodologias de referência para cada procedimento. Para testar a equivalência dessas equações aos respectivos métodos de referência, determinar a sensibilidade e especificidade analíticas e a repetibilidade do método proposto, foram coletadas amostras de leite dos quartos mamários de 60 animais de 2 rebanhos leiteiros da região de Pirassununga dos quais se determinou previamente a ocorrência de casos subclínicos de mastite por S. aureus. Dos quartos mamários também foram mensuradas as produções e coletadas amostras de leite para análise de composição, diagnóstico da mastite, e determinação da sensibilidade e especificidade diagnósticas do procedimento de qPCR estabelecido no estudo. Cada amostra foi submetida à análise de composição, CCS, cultura microbiológica, contagem em placas do S. aureus, processadas para a extração do DNA genômico bovino e do S. aureus, e submetida à reação de qPCR. Para análise da concordância entre os resultados obtidos pelos métodos de referência para o diagnóstico da mastite por S. aureus e o de qPCR foi utilizado o teste Kappa. Para avaliação da equivalência das contagens obtidas pelos métodos de referência do S. aureus e de células somáticas bovinas, foi utilizado o teste das diferenças de Bland-Altman. Para a identificação do efeito da infecção subclínica pelo S. aureus sobre a composição e produção de leite do quarto mamário afetado foi utilizada a análise da variância num delineamento em parcelas subdivididas em faixas. Para estimar o grau de relação entre as contagens de S. aureus, a CCS, produção e composição do leite produzido pelo quarto mamário afetado foi utilizado o coeficiente de correlação de Pearson. A correlação entre os resultados de contagem de células somáticas bovinas determinados pelos métodos de rotina e de qPCR para a quantificação de células somáticas apresentou coeficiente r = - 0,978 (P < 0,001). A correlação entre os resultados da contagem do S. aureus ATCC 29213 determinados pelos métodos de rotina e de qPCR para a quantificação do patógeno apresentou coeficiente r = - 0,989 (P < 0,001). A especificidade analítica do qPCR para a detecção do S. aureus em amostras de leite frente a Escherichia coli, Enterococcus sp., Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, os estafilococos coagulase-negativa, e as espécies coagulase-positiva Staphylococcus hyicus e Staphylococcus intermedius foi de 100%. O método de qPCR aplicado à detecção de Staphylococcus aureus ATCC 29213 em amostras de leite é replicável e apresentou sensibilidade analítica com limite de detecção para a faixa de 10 UFC/mL à 4,2 x 106 UFC/mL. Em amostras de leite conservadas com bronopol provenientes de quartos mamários subclinicamente infectados, o S. aureus pôde ser detectado, mas não pôde ser quantificado pelo método de qPCR. Nessas amostras, a CCS pôde ser determinada de forma equivalente ao método de rotina. A CCS independe da contagem de S. aureus viáveis, mas foi observada correlação linear e negativa entre o número total de células do patógeno e a CCS. A mastite subclínica pelo S. aureus aumentou a CCS nos quartos mamários, mas não alterou a composição do leite. A doença diminuiu a produção de leite e de gordura dos quartos mamários anteriores acometidos pela infeção, mas não se observou efeito da interação entre o posicionamento da glândula e a infecção sobre a produção de leite. Houve correlação entre as concentrações de lactose (r = 0,42; P = 0,0051), de gordura (r = 0,46; P = 0,0016), de produção de gordura (r = 0,49; P = 0,001), e de leite com produção ajustada para o teor de 3,5% de gordura (r = 0,41; P = 0,006), e o número de S. aureus presentes na amostra de leite. / The objectives of this study were to verify the validity of the real-time polymerase chain reaction (qPCR) to detect and quantify Staphylococcus aureus in bronopol-preserved milk samples from subclinically infected mammary quarters, and to assess the effects of the presence and amount of the pathogen on the somatic cell count (SCC), the composition of milk and milk yield of bovine mammary quarters subclinically infected by the pathogen. In order to quantify S. aureus and bovine somatic cells through qPCR, raw bovine milk was used as a means of serial inoculation media of somatic cells and S. aureus ATCC 29213. From that, equations based on the reference methods for each procedure were built, log10UFC = 37,86 23,54 log10CtSAU and log10CCS = 49,3 - 34,0 log10CtBMCB, respectively. To test their equivalence with the reference methods, determine the analytical sensitivity and specificity, and repeatability of the proposed method, milk was sampled from quarters of 60 animals from two dairy herds in Pirassununga, where subclinical S. aureus mastitis cases had been previously diagnosed. Also, quarter milk yield had been measured and samples collected for milk composition analysis, diagnosis of mastitis, sensitivity and specificity of the procedure established in the study had been determined. Each sample was subjected to composition analysis, SCC, microbiological culture, plate counting of S. aureus, DNA extraction, and subjected to qPCR reaction. Agreement between results from reference methods and qPCR for the diagnosis of mastitis by S. aureus was assessed by Kappa test. Equivalence between S. aureus, SCC scores obtained by reference and qPCR was assessed with Bland-Altman procedures. The effect of S. aureus subclinical infection on milk composition and milk yield of affected quarters was measured using a strip plot design. To estimate the degree of relationship between the counts of S. aureus, SCC, yield and composition of the milk from affected quarters was assessed by the Pearson Correlation. Correlation between SCC determined by routine methods and qPCR was r = - 0.978 (P <0.001). Correlation between S. aureus ATCC 29213 determined by routine methods and qPCR was r = - 0.989 (P <0.001). Analytical specificity of qPCR to detect S. aureus in milk samples against Escherichia coli, Enterococcus sp., Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, coagulase-negative staphylococci and coagulase-positive species, Staphylococcus hyicus and Staphylococcus intermedius was 100%. The use of the qPCR to detect S. aureus ATCC 29213 in milk samples is replicable. Analytical sensitivity detection limit of the method ranged from 10 CFU/mL to 4.2 x 106 CFU/mL. S. aureus could be detected, but not quantified by qPCR in bronopol-conserved milk samples from subclinically infected quarters. In these samples, SCC could be determined by qPCR as it had been done by routine method. SCC was not dependent on S. aureus viable cells, but a negative linear correlation between the total number of cells of the pathogen and SCC was observed. S. aureus subclinical mastitis increased quarters SCC, but did not change milk composition. The disease decreased quarter milk and fat yield, but no interaction effect was observed between the gland positioning and S. aureus subclinical infection on milk production. Correlations between lactose (r = 0.42, P = 0.0051), fat (r = 0.46, P = 0.0016), fat yield (r = 0.49, P = 0.001), and 3.5% fat adjusted milk yield (r = 0.41, P = 0.006), and the number of S. aureus present in the milk sample were observed.

A mastite subclínica (MS) é a doença mais prevalente em rebanhos leiteiros e pode ser identificada pela contagem de células somáticas (CCS) individual das vacas. A partir disso, indicadores podem ser calculados como, por exemplo, prevalência e incidência. A prevalência diz respeito à proporção do rebanho infectada em determinado momento, enquanto que a incidência estima a taxa de novas infecções intramamárias ao longo do tempo. Altos valores de prevalência e incidência acabam resultando em elevada CCS do tanque de resfriamento (CCST), que por consequência leva a penalizações oriundas dos programas de pagamento por qualidade do leite (PPQL). Desta forma, estimar os valores atuais de prevalência e incidência de MS relacionados com valores futuros de CCST e as perdas financeiras oriundas dos PPQLs se torna importante para estimular a melhoria da qualidade do leite produzido no Brasil. Portando, o objetivo deste trabalho é estimar os indicadores epidemiológicos de MS em rebanhos leiteiros brasileiros, além prever a CCST relacionando-a as perdas financeiras devidas ao PPQL. Para isso, foram utilizados dois bancos de dados, sendo o primeiro com dados de CCS individual de vacas para estimação da prevalência e incidência de MS, e o segundo com dados de CCST para a previsão e cálculo de perdas financeiras devido ao PPQL. Como análise estatística, foi utilizado o modelo linear generalizado misto para comparar a prevalência e incidência de MS entre anos, regiões, tamanho de rebanhos e categorias de número de testes enviados durante o período de estudo, além de modelos de séries temporais para previsão da CCST e regressão linear múltipla para prever a probabilidade de mudança de classe de pagamento por qualidade do leite do PPQL. Os resultados encontrados indicam que, ambos, prevalência e incidência de MS permaneceram elevados e com leve tendência de aumento ao longo dos anos estudados, sendo que não houve diferenças entre regiões e tamanho de rebanhos. Por outro lado, rebanhos que realizaram mais testes ao longo do período estudado apresentaram menor prevalência, mostrando a importância da análise rotineira de CCS individual. Para CCST, os valores tem se mantido altos nos recentes anos e sem tendência de melhora. A probabilidade de mudança de classe foi fortemente afetada pela média e desvio padrão de CCST para as classes 1 e 2 (1.000 a 200.000 e 201.000 a 400.000 céls/mL, respectivamente). Os modelos de séries temporais indicaram que em algum ponto do ano, as fazendas não podiam permanecer na sua classe atual do PPQL e acumulavam perdas financeiras. Por fim, este estudo permite concluir que prevalência e incidência de MS estão elevadas e não melhoram ao longo dos anos, sendo que isto acaba elevando os valores de CCST. Além disso, existem perdas financeiras em todas as classes do PPQL, mostrando que os produtores não tem sido eficientes em captar a bonificação máxima dos PPQLs. Por isso, o desenvolvimento de programas de qualidade do leite deve ser uma prioridade em busca da melhoria da qualidade do leite de rebanhos brasileiros. / Subclinical mastitis (SM) is the most prevalent disease in dairy herds and can be identified by individual somatic cell counts (SCC) of cows. From this, indicators can be calculated as, for example, prevalence and incidence. Prevalence refers to the number of infected cows in a herd at a given time, while the incidence estimates the rate of new intramammary infections over time. High prevalence and incidence values result in high bulk tank SCC (BTSCC), which consequently leads to penalties from payment programs based on milk quality (PPBMQ). In this way, estimating current values of prevalence and incidence of SM related to future values of BTSCC and financial losses from PPBMQs becomes important to stimulate the improvement of the quality of milk produced in Brazil. Therefore, the objective of this study is to estimate the epidemiological indicators of SM in Brazilian dairy herds, besides to predicting the BTSCC and relating it to the financial losses due to the PPBMQ. For this, two databases were used, the first one with individual SCC data from cows to estimate the prevalence and incidence of SM, and the second with BTSCC data for prediction and calculation of financial losses due to PPBMQ. For statistical analysis, the mixed generalized linear model was used to compare the prevalence and incidence of SM between years, regions, herd size and number of test-day categories sent during the studied period, as well as time series models for prediction of BTSCC and multiple linear regressions to predict the probability of changing the current payment class for milk quality. The results indicate that both prevalence and incidence of SM remained high and with a slight tendency to increase over the years studied, and there were no differences between regions and herd sizes. On the other hand, herds that performed more test-day during the studied period presented a lower prevalence, showing the importance of the routine analysis of individual SCC. For BTSCC, values have remained high in recent years and no trend for improvement. The probability of class change was strongly affected by the mean and standard deviation of BTSCC for classes 1 and 2 (1,000 to 200,000 and 201,000 to 400,000 cells/mL, respectively). Time series models indicated that at some point of the year, farms could not remain in their current class and accumulated financial losses due to PPBMQ. Finally, this study allows to conclude that the prevalence and incidence of SM are high and do not improve over the years, and this ends up increasing the BTSCC values. In addition, there are financial losses in all classes of PPBMQ, showing that producers have not been efficient in capturing the maximum PPBMQs bonus. Therefore, the development of milk quality programs should be a priority in order to improve the quality of milk from Brazilian herds.

A avaliação das modificações no proteinograma do leite tem sido utilizada como meio de diagnóstico das mamites dos bovinos, pois, em decorrência dos processos inflamatórios na glândula mamária, ocorrem alterações, tanto na concentração dos componentes protéicos do leite, como também, surgimento de compostos protéicos não elaborados no processo de secreção láctea. A técnica de fracionamento protéico por eletroforese em gel de poliacrilamida mostrou-se eficiente na detecção de pequenas quantidades de proteínas em fluídos orgânicos. As características das proteínas do leite de vacas sadias, e a avaliação de possíveis fatores de variabilidade foram determinadas em 139 amostras de leite de vacas. Os animais foram, inicialmente, submetidos a exame clínico geral e do úbere, complementado por exames físico-químicos, celulares e microbiológicos do leite, complementares ao diagnóstico das mamites. Do conjunto das amostras, 97 eram de vacas sadias, em plena lactação, sendo utilizadas para estabelecer valores padrões dos constituintes do leite de vacas sadias e avaliar a influência racial - Jersey e Gir; e do número de lactações - animais em primeira lactação, duas ou três lactações e, quatro ou mais lactações sobre o proteinograma lácteo. Além do mais a amostragem serviu de base para a avaliação da fase da lactação sobre o quadro protéico e, permitiram a formação de grupos experimentais para avaliação da influência do número de células somáticas, do isolamento bacteriano e do estado de saúde do úbere no proteinograma lácteo, obtido por eletroforese em gel de poliacrilamida. Os resultados demonstraram influência significativa de fatores raciais no teor de proteína total do soro lácteo, e de suas frações imunoglobulínica, &alpha;1-antitripsina, &beta;-lactoglobulina, bem como de um conjunto de proteínas do soro lácteo separadas, mas não identificadas; influência do número de lactações no teor de albumina de origem plasmática, imunoglobulinas, &beta;-lactoglobulina e &alpha;-lactoalbumina. A fase da lactação influenciou de forma significativa os teores de proteína total do leite, assim como nas frações protéicas do soro lácteo de vacas sadias, variações evidentes na fase colostral da lactação. O número de células somáticas influenciou o proteinograma do leite, apenas nas amostras com mais de 1.500.000 células somáticas/ml. Não foi demonstrada a influência significativa do isolamento bacteriano no proteinograma lácteo de vacas. Entretanto, observou-se significativa influência da mamite no proteinograma do leite de vacas, agindo, principalmente, nas proteínas não sintetizadas no ciclo fisiológico de secreção da glândula mamária. / The evaluation of the modifications in milk proteinogram is used as a diagnostic tool for bovine mastitis, once the inflammation of the mammary glands leads to changes in the concentration of milk proteic components, as well as the appearance of proteic components that are not elaborated in the milk secretion process. The technique of protein fractioning by electrophoresis in polyacrylamide gel is effective in detecting small amounts of proteins in organic fluids. The features of milk proteins of healthy cows and the evaluation of possible variability factors were determined in 139 cow milk samples. Animals were first submitted to general clinical examination and udder examination, and to physical-chemical, cellular and microbiological milk tests, complementary to mastitis diagnosis. Of the total samples, 97 were from healthy cows in full lactation, used to establish reference values for the components of healthy cow milk and to evaluate the influence of breed - Jersey and Gir, and number of lactations - first, two or three lactations, and four or more lactations on milk proteinogram. Additionally, sampling was useful as a base for the formation of experimental groups for evaluation of the influence of the number of somatic cells, bacterial isolation and health condition of the udder on milk proteinogram obtained by electrophoresis in polyacrylamide gel. Results showed a significant influence of breed related factors on the level of total protein and its fractions immunoglobulinic, &alpha;1-antitripsin, &beta;-lactoglobulin in whey, as well as on the level of a group of separated but not identified whey proteins; influence of the number of lactations on the level of albumin of plasmatic origin, immunoglobulins, &beta;-lactoglobulin and &alpha;-lactoalbumin. The lactation phase influenced the levels of milk serum protein significantly, as well as the proteic fractions of healthy cow milk serum, variation evident in the colostrum phase of lactation. The number of somatic cells influenced milk proteinogram only in samples with more than 1,500,000 somatic cells. No significant influence of bacterial isolation on milk proteinogram was demonstrated. However, a significant influence of mastitis on the proteinogram of cow milk was observed, affecting mostly those proteins not synthetized in the physiologic cycle of mammary gland secretion.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Juliana Dias Martins.pdf: 1294689 bytes, checksum: c255ebaebb32633087fe7f7d358cd8e8 (MD5) Previous issue date: 2012-03-02 / The bovine mastitis consists of an inflammation of the mammary gland, with acute to chronic evolution, which occurs when an infectious agent attacks the mammary gland. It is characterized by physical, chemical and sensory alterations of the milk, caused by microorganisms that invade the mammary gland and cause pathological changes in the glandular tissue. Mastitis can be classified according to the form of presentation as clinical or subclinical. Several symptoms are observed in the clinical form of the disease such as the secretion of milk with lumps, pus or watery aspect, and edemaciated stiff and febrile teats and udder. On the other hand, no symptoms can be observed in the mammary gland and milk in subclinical cases. Mastitis is a major cause of economic losses in dairy cattle farms, mainly due to reduced milk production, changes in the composition and increased somatic cell count (CCS). The objective of this study was to evaluate the prevalence of the main bacteria that cause (clinical and subclinical) bovine mastitis, and to check the sensitivity to various antimicrobial agents of clinical mastitis. The agents most frequently isolated from clinical mastitis were Streptococcus uberis and Staphylococcus aureus and the antibiogram demonstrated greater sensitivity and efficacy of the active principles linezolid, amikacin, gentamicin and imipenen regarding the isolated agents. In subclinical mastitis Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis and Staphylococcus sp. Were the agents most frequently identified and that determined the highest mean values of CCS. The average CCS of cows with subclinical mastitis was approximately 743 x 103 cs/mL. The study was conducted in eight dairy farms in the State of Goiás. The results were obtained by frequency analysis. In conclusion, that the results emphasize the importance of assessing the sensitivity profile of microorganisms that cause clinical mastitis in each herd studied allowing greater precision in medication prescription for future cases of clinical mastitis and for dry cow therapy. The use of other techniques such as real time PCR is also important for the detection of the main microorganisms causin subclinical mastitis, which can be indicated as a routine method, due to its specificity, providing a precise bacteriological diagnosis. / A mastite bovina constitui-se num processo inflamatório da glândula mamária, com evolução aguda a crônica; ocorre quando um agente infeccioso agride a glândula mamária. Caracteriza-se por alterações físicas, químicas e sensoriais do leite, provocadas por microrganismo que invadem a glândula mamária e provocam modificações patológicas no tecido glandular. A mastite pode ser classificada quanto à forma de apresentação, em clínica ou subclínica. A forma clínica observa-se vários sintomas como secreção de leite com grumos, pus ou de aspecto aquoso, tetos e úbere apresentando edemaciados, rígidos e febris. Na forma subclínica os sinais na glândula mamária e no leite são inaparentes. A mastite constitui uma das principais causas de perdas econômicas nas explorações de bovinos leiteiros, devido principalmente à redução na produção de leite, alterações na composição e aumento da contagem de células somáticas (CCS). Objetivou-se neste trabalho, avaliar a prevalência das principais bactérias causadoras da mastite bovina (clínica e subclínica), e verificar o perfil de sensibilidade dos agentes a diversos antimicrobianos da mastite clínica. Os agentes mais isolados da mastite clínica foram Streptococcus uberis e Staphylococcus aureus e o antibiograma demonstrou uma maior eficácia dos principios ativos linezolid, amikacina, gentamicina e imipenene, frente aos agentes isolados. Na mastite subclínica Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Staphylococcus sp foram os agentes mais frequentemente identificados e que determinaram maiores valores médios de CCS. A CCS média dos rebanhos com mastite subclínica foi de aproximadamente 743 x 103cel/mL. O estudo foi realizado em oito propriedades leiteiras, localizadas no Estado de Goiás. Os resultados encontrados foram analizados pela análise de frequência. Conclui-se que os resultados obtidos ressaltam a importância da avaliação do perfil de sensibilidade de microrganismos causadores de mastite clínica em cada rebanho estudado, possibilitando maior precisão na prescrição medicamentosa para os futuros casos de mastite clínica e a terapia da vaca seca. É importante também a utilização de outras técnicas como a de PCR em tempo real para a detecção dos principais microrganismos causadores de mastite subclínica, a qual pode ser indicada como método a ser utilizado na rotina, devido a sua especificidade, fornecendo um diagnóstico bacteriológico preciso.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-01-06T15:41:52Z No. of bitstreams: 2 Tese - ELIANE RESENDE COSTA CAVALCANTE - 2014.pdf: 1330525 bytes, checksum: 06bfbc633270e31f60054dbcdf6fc1b9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T08:14:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - ELIANE RESENDE COSTA CAVALCANTE - 2014.pdf: 1330525 bytes, checksum: 06bfbc633270e31f60054dbcdf6fc1b9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-07T08:14:57Z (GMT). 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This work was developed with the aim of outlining the socioeconomic profile of the milk producers and the production at the micro-region of Pires do Rio (GO); assessing the impact of IN62/2011 on production systems, making a parallel with the rules through the hygienic quality indicators of health, somatic cell count (SCC) and total bacterial count (TBC) and compositional quality indicators, analyzing the quality of milk and socio- economic-cultural profile of these producers. The data used are came from analyzes previously conducted and the results belong to the file of the Lab Milk Food Research Centre, School of Veterinary and Animal Science, Federal University of Goiás. A structured questionnaire was administered to 86 milk producers of micro-Pires do Rio, on issues regarding socioeconomic information, the use of management techniques related to milk quality and the adequacy of the properties with respect to IN62/2011 resolution SSC and TBC data referring to the period 2011-2012 were tabulated Statistical analysis of the data was used as the experimental unit the milk tank (individual) from which the samples were collected. The date were subjected to non-parametric Kruskal-Wallis test to compare the median values of SCC and TBC of each issue related to milk production in the properties. Significance level of 5% was adopted. Statiscal analyzes were performed using the R software, version 3.0.3. Milk is the main economic activity of the properties,the herds were predominantly of crossbred Girolando, and there was a good technological level in production by the use of mechanical milking machines and tanks expansion. Among the milking procedures, wefound the use of pre - soak in the preparation of the udder. Cows were placed in any order in relation to mastitis and it is preventive treatment of mastitis in dry cows. Operational procedures for cleaning milking equipment are conducted. The results showed that producers are well informed,were of the resolution governing the quality of milk. The degree of impact of IN 62 on their properties was high, due to investments made by the milk producers. Their satisfaction with dairy farming was verified because of their desire to expansion. Higher amounts of fat and protein were observed in the rainy season. Acording to the regulations of the 62/2011 normative, there was significant improvement on milk quality in properties of micro-Pires do Rio-(GO). / O estado de Goiás é um dos principais produtores de leite do país, sendo a mesorregião sul a principal produtora e dentre as microrregiões destaca-se a microrregião de Pires do Rio. A obtenção do leite de boa qualidade depende do primeiro elo da cadeia que é o produtor. O presente estudo foi desenvolvido com o objetivo de traçar o perfil socioeconômico dos produtores e da qualidade do leite da Microrregião de Pires do Rio (GO), fazendo um paralelo com a Instrução Normativa 62/2011 por meio dos indicadores de qualidade microbiológica,da contagem de células somáticas (CCS) e da contagem bacteriana total (CBT) e dos indicadores de qualidade composicional. Os dados utilizados são provenientes de análises realizadas pelo Laboratório do Leite do Centro de Pesquisa em Alimentos da Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás. Um questionário estruturado foi aplicado a 86 produtores de leite da microrregião de Pires do Rio, contendo questões relativas a informações socioeconômicas, ao emprego de técnicas de manejo relacionadas à qualidade do leite e à adequação das propriedades em relação a Normativa 62/2011. Foram tabulados os dados de CCS e CBT e da composição centesimal, referentes ao período de 2011 à 2012. Os dados foram submetidos ao teste não paramétrico de Kruskal-Wellis para comparação dos valores medianos de CCS e CBT de cada fator relacionado à produção de leite nas propriedades. Foi adotado o nível de significância de 5%. As análises estatísticas foram realizadas empregando o software R (livre) versão 3.0.3. As propriedades leiteiras estudadas adequam-se ao estabelecido pela IN 62 para CCS e CBT, independente da pecuária ser a principal atividade econômica, do nível de satisfação dos produtores, do sistema de produção e do conhecimento destes sobre as normas brasileiras de qualidade do leite. Os produtores entrevistados na sua maioria são os responsáveis pela produção do leite, são casados e com idade até 60 anos e nível médio e superior de escolaridade. Os rebanhos são predominantemente da raça Girolando, as propriedades apresentam bom nível tecnológico de produção utilizam de ordenhadeira mecânica e tanque de expansão individual. Dentre os procedimentos de ordenha, os produtores utilizam a pré-imersão e pós-imersão dos tetos. As vacas são colocadas em alguma ordem de ordenha em relação à mastite e os produtores adotam o tratamento preventivo de mastite em vacas secas. Além dos procedimentos operacionais de limpeza do equipamento de ordenha. Os produtores de leite têm conhecimento da Instrução Normativa que rege a qualidade do leite e manifestam satisfação com a pecuária leiteira em razão do desejo de ampliação. Em função dos ditames da normativa 62/2011, houve melhoria significativa na qualidade do leite das propriedades da Microrregião de Pires do Rio (GO).

O trabalho teve como objetivo avaliar a eficiência do sistema de resfriamento adiabático evaporativo (SRAE), acionado em diferentes horários, em instalação do tipo free-stall e a interação entre o ambiente e a ocorrência de mastite bem como seus reflexos nas respostas produtivas, fisiológicas e comportamentais de vacas em lactação. Foram utilizadas 28 vacas em lactação, multíparas, das raças Holandesa Preta e Branca e Parda Suíça, com produção média diária de 23 kg de leite/animal por dia distribuídas em um delineamento inteiramente casualisado. O período experimental de 56 dias teve início em 20 de janeiro de 2003. Os tratamentos foram: controle (sem SRAE); Dia (SRAE acionado das 7 às 19 h); Noite (SRAE acionado das 19 às 7 h) e 24 horas (SRAE acionado durante 24h). Os equipamentos foram acionados toda vez que a temperatura atingiu 22ºC. A temperatura de bulbo seco (TBS), umidade relativa do ar (UR) e a temperatura de globo negro (TGN) foram mensuradas ao longo das 24 horas. A freqüência respiratória (FR), a temperatura retal (TR) e temperatura do pelame (TP) foram tomadas duas vezes por semana às 7, 13 e 21 h. A ordenha foi realizada às 7 e às 19 h. Amostragens semanais de leite e sangue foram realizadas para análise da composição do leite (gordura, proteína, lactose e contagem de células somáticas) e determinações hormonais de cortisol, tiroxina (T4) e triiodotironina (T3). Para análise comportamental foram observadas, semanalmente, as atividades (ingestão de água, alimento, ruminação e ócio, em pé ou deitada) de cinco animais de cada tratamento, por um período de 24 horas, em intervalos de 10 minutos. Para avaliação da ocorrência de mastite clínica e subclínica foram feitos exames semanais de TAMIS (caneca de fundo preto) e California Mastitis Test (CMT). Foram colhidas amostras de leite de todos os quartos para identificação microbiológica dos agentes causais da mastite. A climatização do free-stall utilizado no tratamento dia conseguiu manter a temperatura dentro da faixa de termoneutralidade até as 12 h, mas a partir da 17 h a TBS do tratamento dia foi significativamente maior que o tratamento controle e 24 horas. As TGN, UR e ITU permaneceram acima da termoneutralidade. Foi observada uma correlação linear positiva entre a temperatura retal e as TP. Nos animais do tratamento controle os níveis de cortisol encontravam-se acima dos níveis normais. O consumo de matéria seca dos animais submetidos ao tratamento noite foi maior (P<0,05), entretanto, isso não refletiu na produção de leite. Os animais do tratamento controle e 24 horas permaneceram o menor tempo se alimentando, gastaram mais tempo em ócio, e levaram menos tempo ruminando. Na fase pré-experimental a maior freqüência de isolamento bacteriano foi para Staphylococcus coagulase negativa. No tratamento noite e dia, houve uma diminuição na proporção de casos positivos de mastite subclínica da fase pré-experimental em relação à última semana da fase experimental. Na última semana da fase experimental houve uma diminuição de Staphylococcus coagulase negativa e aumento da ocorrência de Corynebacterium sp. / The purpose of this research was to compare the efficiency of three different schedule for using an adiabatic evaporative cooling with misting system (AEC) in a free-stall and its influence on the occurrence of clinical and sub clinical mastitis, as well as, on the physiological and milk production parameters on lactating cows. A total of 28 Brown Swiss and Holstein multiparous cows were random allocated in four groups. At starting of the experiment the daily average of milk production was 23 kg per animal. The overall experimental period was of 56 days, starting from January 20th. Treatments were: control group (without AEC); Day (AEC turned on from 7 to 19 h); Night (AEC turned on from 19 to 7 h) and 24 h (AEC turned on during 24h). Every time the temperature reached 22ºC the AEC automatically start functioning. The dry bulb temperature (DBT), relative humidity (RH) and black globe temperature (BGT) were measuread hourly inside and outside of facilities through a period of 24 hours. The respiratory frequency (RF), rectal temperature (RT) and skin temperature (ST) were registered twice a week at 7, 13 e 21 h. The milking was performed at 7 and 19 h. The samples of milk and blood were weekly taken to be performed the milk composition analyses (fat %, protein %, lactose %, somatic cell counts) as well as to hormonal analyses of cortisol, thyroxin (T4) e triiodothyronine(T3) levels. To be performed the behavior analyses five animals, from each group, were weekly observed, each 10 minutes during a 24h period, in respect to the following activities: water and food ingestion, ruminating, and time in resting on foot or lying. The results of the strip cup and California Mastitis Test (CMT) were weekly registered to evaluate the occurrence of clinical and subclinical mastitis. Milk samples were aseptically collected from the quarters of all animals to be submitted to microbiological examination to etiologic mastitis microorganisms identification. The free-stall cooling used in the day group kept the temperature under the thermoneutrality range till 12 h, however from 17 h in the day group the DBT was statistically higher than in control and 24 h groups. It was detected significant difference among the groups (P<0.05) in respect to the following parameters: BGT, RH e temperature-humidity index (THI) that was higher than the thermoneutrality range. It was observed a positive linear correlation between rectal temperature and PT. The cortisol levels among the control group animals were higher than the normal values. In spite of the dry matter consume by the animals of night group were higher (P<005), the same was not observed in respect of milk production. The animals of the control group stayed less time eating stayed longer lazily and less time ruminating. Staphylococcus coagulase negative was the most commonly isolate before the experimental period It was observed a reduction on subclinical mastits frequency in the animals of day and night groups when compared to the last week of the experimental period. It was observed a reduction on Staphylococcus coagulase negative frequency and increased Corynebacterium sp occurrence in the last week of the experimental period.

O Brasil possui o maior rebanho bovino comercial do mundo com sua produção baseada, predominantemente, em animais de origem zebuína (Bos indicus), com níveis do potencial genético de produção inferiores aos animais Bos taurus. Com a possibilidade de emprego de técnicas de genética molecular, a seleção de indivíduos melhoradores para acasalamento e multiplicação repercutem nos índices de produtividade e produção. A utilização de melhores métodos de estudo da variação genética no nível mole cular representa benefícios especialmente nos casos de resistência a doenças, já que essas características apresentam baixa herdabilidade e são afetadas pelo ambiente. O estudo da genética molecular visando o aumento da saúde da glândula mamária de bovinos apresenta a vantagem de poder selecionar animais em idades precoces, antes da produção, para ambos os sexos e, no caso dos machos reprodutores, sem a necessidade de aguardar por informações da saúde da glândula mamária observada somente na descendência dos animais. Para identificar genes com responsabilidade de conferir resistência à mastite bovina, a doença mais importante da bovinocultura, foram realizados diversos experimentos que envolveram um gene do complexo principal de histocompatibilidade (MHC &#150; Major Histocompatibility Complex). Os experimentos com o gene BoLA-DRB3, do MHC, permitiram identificar um alelo novo, desenvolver uma técnica mais eficiente de genotipagem de animais e verificar a distribuição dos alelos em animais da raça Gir Leiteira. Foram também construídas biliotecas de cDNA utilizando a metodologia de ORESTES e tecido de glândula mamária de animais europeus e zebuínos infectados com Staphylococcus aureus . 6.481 sequências expressas (ESTs), obtidas por meio da metodologia de ORESTES, foram depositadas em bases públicas como o GenBank (http://www.ncbi.nih.nlm.gov/) e TIGR (http://www.tigr.org), sendo 5.950 provenientes de animais Bos indicus, o que significou um aumento de vinte vezes no volume de informações disponíveis sobre o transcriptoma de bovinos zebuínos ao tempo deste estudo. / Brazil is the largest cattle commercial herd in the world, mainly based in zebu (Bos indicus) with lower genetic potential than taurus-derived animals. Molecular genetics brought the possibility of better selection of animals for breeding, which increases production levels. The use of molecular methods for studying genetic variation is especially advantageous for disease resistance because of low herdability and envir onment effects. Selection by means of molecular genetics in dairy cattle can be done before production, for males and females. To identify genes responsible for conferring resistance to Mastitis, the most important cattle disease, we studied one gene from the MHC (Major Histocompatibility Complex). The experiments with this MHC gene (BoLA-DRB3) identified a new allele in cattle, developed a genotyping technique, and estimate allelic frequencies for Dairy Gir cows (Bos indicus). CDNA libraries from mammary gland tissues infected with Staphylococcus aureus were also constructed and characterized. 6,481 ESTs (Expressed Sequence Tags) were deposited in GenBank (http://www.ncbi.nih.nlm.gov/) and TIGR (http://www.tigr.org), being 5,950 from Bos indicus cows, which increased by 20-fold the volume of sequence data from the zebu transcriptome, at the time when this study was conducted.

O objetivo do estudo foi avaliar os efeitos da contagem de células somáticas (CCS) sobre características físico-químicas (pH, acidez, composição, cor), microbiológicas, índices de proteólise e lipólise, formação de compostos de Maillard, viscosidade aparente e frações protéicas do leite integral obtido pelo processamento direto de temperatura ultra alta (UAT). O leite cru foi avaliado quanto ao nível de células somáticas (CS) e características físicoquímicas. As amostras de leite foram colhidas em usina de beneficiamento de leite UAT no Estado de São Paulo. O leite cru foi submetido à pasteurização rápida e foi efetuada a esterilização industrial do leite por processo UAT direto, seguido do envase do produto. As análises no leite UAT foram realizadas nos dias 8, 30, 60, 90 e 120 após a fabricação. Quinze lotes de leite UAT foram avaliados para verificar a correlação entre a CCS e as variáveis estudadas. Adicionalmente, os lotes foram categorizados em grupos de baixa, intermediária e alta CCS. No leite cru, houve correlação negativa (r= -0,54, P=0,04) entre CCS e níveis de &alpha;S2 e ß-caseína. No leite UAT, o aumento da CCS foi acompanhado de uma diminuição dos níveis de &alpha;s1-caseína (r= -0,56, P=0,03) e ß-caseína (r= -0,56, P=0,03) aos 8 dias de armazenamento. No 60º dia após a fabricação a CCS foi correlacionada à diminuição de &alpha;S2-caseína (r= -0,69, P=0,005). A CCS exerceu efeito significativo (P=0,02) sobre o componente a*, com maiores (P=0,02) valores para o grupo de alta CCS em relação ao de CCS intermediária, e sobre a ß-caseína (P=0,02), com menores (P=0,03) concentrações no grupo de alta CCS comparado ao de CCS baixa. Os valores de pH, L*, proteína verdadeira e caseína apresentaram diminuição significativa ao longo do armazenamento. Contrariamente, a acidez, o componente a*, os ácidos graxos livres, a viscosidade e a proteólise aumentaram significativamente. A quantidade de caseína em relação à proteína verdadeira foi negativamente correlacionada à CCS no 120º dia de armazenamento. Observou-se redução significativa nas concentrações de frações protéicas durante o armazenamento, com exceção da &alpha;S2-caseína. A CCS no leite cru utilizado para a fabricação de leite UAT pode prejudicar a qualidade do produto por possíveis alterações decorrentes da proteólise no final da vida de prateleira. / The aim of this study was to evaluate the effects of somatic cell counts (SCC) on physicochemical characteristics (pH, acidity, composition, color), microbiology, proteolysis and lipolysis indexes, Maillard compound formation, apparent viscosity and protein fractions of whole milk obtained by direct ultra high temperature (UHT) process. The raw milk was analyzed for somatic cell (SC) levels and physico-chemical characteristics. Milk samples were collected in a dairy plant in São Paulo State. Raw milk was submitted to HT-ST pasteurization and industrial sterilization was taken by direct UHT process, followed by the packing. UHT milk analyses were conducted on days 8, 30, 60, 90 and 120 of storage. Fifteen batches of UHT milk were evaluated for correlations between SCC and the parameters studied. Additionally, UHT milks were categorized in selected groups of low, intermediate and high SCC. Raw milk presented a negative correlation (r= -0.54, P=0.04) between CSS and levels of &alpha;S2 and ß-casein. In UHT milk, SCC increase was followed by a reduction of &alpha;S1-casein (r= -0.56, P=0.03) and ß-casein (r= -0.56, P=0.03) concentrations on the 8th day of storage. On 60th day of storage, SCC was correlated with the reduction (r= -0.69, P=0.005) on &alpha;S2-casein concentration. SCC had significant effect on component a* (P=0.02), which values were higher (P=0.02) on high SCC group compared to the intermediate SCC group, and on ß-casein (P=0.02), with lower (P=0.03) concentrations in high SCC group than in low SCC group. Values of pH, L*, true protein and casein presented significant reduction during storage. Conversely, acidity, component a*, free fatty acids, viscosity and proteolysis increased significantly. Casein in relation to true protein was negatively correlated with SCC on 120th day of storage. It was observed a significant reduction on protein fractions concentrations in UHT milk during storage, except for &alpha;S2-casein. SCC in raw milk used for UHT milk production may prejudice the quality of the product through alterations caused by proteolysis in the end of shelf life.