Orientador: Carlos Frederico de Oliveira Graeff / Banca: Rodrigo Cardoso de Oliveira / Banca: Luiz Carlos da Silva Filho / O Programa de Pós Graduação em Ciência e Tecnologia de Materiais, PosMat, tem caráter institucional e integra as atividades de pesquisa em materiais de diversos campi / Resumo: Por mais de 40 anos, a melanina tem despertado cada vez mais atenção como um material funcional para dispositivos orgânicos como células solares, transistores, sensores, engenharia de teorias, baterias, dispositivos de memória e drug delivery. As melaninas apresentam uma combinação de propriedades físico-químicas únicas com sua biocompatibilidade intrínseca que inspira seu uso em aplicações bioeletrônicas. Contudo, sua aplicação em dispositivos orgânicos é limitada devido a sua baixa solubilidade na maioria dos solventes. Assim, neste trabalho, buscamos obter derivados solúveis de melanina a partir de uma abordagem sintética alternativa utilizando diferentes pressões (4 a 8 atm) oxigênio molecular como agente oxidante em água ou DMSO. Espectroscopia UV-Vis, FTIR, RMN e XPS foram utilizados para caracterizão, tendo como referência os materiais obtidos a partir das rotas sintéticas tradidionais. A utilização da pressão de oxigênio acelerou o processo sintético em ambos os casos e foi possível obter uma alta proporção DHICA/DHI. A principal diferença é a obtenção em meio aquoso de um material solúvel em água sem nenhuma funcionalização exótica, enquanto que em solvente orgânico o derivado da melanina, funcionalizado com grupos sulfonatos, apresenta solubilidade em DMSO, DMF e N-metil-2-pirrolidona. Um mecanismo reacional baseado na elavada natureza oxidante do meio sintético, incluindo na decomposição do H2O2 pelo oxigênio é proposto para explicar as alterações estruturais observadas / Abstract: For over 40 years, melanin has been focus of increasing attention as a promissing functional material for organic devices like solar cells, transitors, sensors, tissue engineering, charge storage, memory devices and drug, delivery. Melanins present a combination of unique physical-chemical properties with its intrinsic biocompatibility inspire its use in bioelectronics applications. However, their applicability in organic devices is limited due to its low solubility in most solvents. Thus, in this work, we aim to achieve soluble derivatives of melanin from an alternative synthetic approach using different oxygen pressures (4 to 8 atm) as an oxidizing agent in water on DMSO. UV-Vis spectroscopy, FTIR, RMN and XPS was used to characterize the material using conventional synthesized melanin as a reference. The use of oxygen pressure accelerated the synthetic process and in both cases it was possible o obtain a high DHICA/DHI ratio. The main difference is obtained in aqueous medium a water soluble material without any exotic functionalization, while in organic solvent we have a functionalization with sulfonate group with solubility in DMSO, DMF and N-methyl-2-pyrrolidone. A reaction mechinism based on the higher oxidative nature of the reation medium including oxigen-induced decomposition of H2O2 is proposed to explain the structural changes observed / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-18Bitstream added on 2014-06-13T21:00:47Z : No. of bitstreams: 1 xavier_php_me_bauru.pdf: 1141916 bytes, checksum: e501ac7e99e0860ba4a7bb528e003322 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A síntese DMSO foi proposta a cerca de seis anos e o resultado mais importante foi o fato da melanina obtida ser solúvel em DMSO o que permitiu a produção de filmes finos de alta qualidade. Para tal fim, a L-Dopa foi utilizada como reagente principal, em sínteses onde se variou: a concentração de perióxido de benzoíla e a concentração de água no DMSO. A síntese em água foi realizada para fins de comparação. A síntese em DMSO apresentou-se mais lenta em comparação a síntese de melanina em água através dos resultados obtidos pela técnica UV-Vis. O peróxiso de benzoíla tem influência significativa na síntese, agindo diretamente na oxidação do DMSO e na oxidação da L-Dopa. Teste de solubilidade com diferentes solventes foi realizado nas amostras de H2O-melanina, DMSO-melanina recém sintetizada e DMSO-melanina envelhecida com tempo de estocagem de quatro anos. Os solventes utilizados foram; água, DMSO, DMF, THF, acetonitrila e acetato de etila. Os resultados mostraram a insolubilidade da H2O-melanina e da DMSO-melanina envelhecida em todos os solventes e somente a solubilidade da DMSO-melanina recém sintetizada no solvente DMSO foi observada. Indicando novamente que as amostras possuem estruturas diferentes e que a DMSO-melanina sofre alterações estruturais quando exposta no ar. Nos espectros da FTIR, grupos sulfonados só foram observados na DMSO-melanina recém sintetizada, que desapareceram nas amostras envelhecidas, e que não estão presentes na H2O-melanina. Ou seja, os grupos sulfonados responsáveis pela solubilidade da DMSO-melanina com o passar do tempo sofrem degradação e saem da estrutura da DMSO-melanina, explicando assim a insolubilidade da amostra de DMSO-melanina envelhecida. O mesmo foi observado para os espectros de 13C RMN. Para entender esse processo de degradação utilizamos o NaOH2 cuja a ação é a retirada dos grupos... / Synthesis in DMSO was proposed about six year and the most important result was the fact that it is soluble in DMSO which allowed the production of thin films of high quality. To this end, the L-Dopa was used as primary reagent in primary reagent in syntheses where varied: the concentration of benzoyl peroxide and water concentration in DMSO. The synthesis was carried out in water for comparison purposes. The synthesis presented in DMSO is slower than the synthesis of melanin in water for analysis of the results obtained with the technique of UV-vis. When we analyzed the effect of the concentration of benzoyl peroxide in the synthesis, we found that the concentration of 0.5 moles of benzoyl peroxide gave summary more efficient to malanin in DMSO. Benzoyl peroxide has significant influence on the synthesis, acting directly on the oxidation of DMSO and the oxidation of L-Dopa. Solubility test was carried out with different solvents in the samples of H2O-melanin, DMSO-melanin newly synthesized and old DMSO-melanin with storage time of four years. The solvents used were: water, DMSO, DMF, THF, acetonitrile and ethyl acetate. The results showed the insolubility of H2O-melanin and old DMSO-metanin in all solvents and only the solubility of newly synthesized DMSO-melanin in the solvent DMSO was observed. Indicating again that the samples have different structures and that the DMSO-melanin undergoes structural changes when exposed to air. In FTIR, sulphonated groups were only observed in DMSO-melanin newly synthesized, which disappeared in the old samples, which are not present in the H2O-melanin. That is, the sulfonated groups responsible for the solubility in DMSO-melanin suffer degradation over the time and leave the structure of DMSO-melanin, thus explaining the insolubility of old DMSO-melanin. A chemical model was proposed, using tools... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-24Bitstream added on 2014-06-13T18:41:23Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_rcr_dr_araiq.pdf: 2969131 bytes, checksum: 2ec7f5373394bf23e94222f4356154f3 (MD5) / Outros / Do fungo Aspergillus nidulans foi isolado um mutante que apresenta producao aumentada do pigmento melanina. Este pigmento, formado pela polimerizacao oxidativa de compostos fenolicos e/ou indolicos, pode estar presente na parede celular ou no meio de cultura. Embora nao seja essencial para o crescimento dos fungos, a melanizacao parece aumentar a capacidade de sobrevivencia das especies em condicoes desfavoraveis, fornecendo protecao contra radiacao UV, altas temperaturas, enzimas hidroliticas, metais pesados e agentes oxidantes. A obtencao deste pigmento, na forma pura, tem despertado interesse biotecnologico devido a sua utilizacao em formulacoes cosmeticas, principalmente pela sua propriedade fotoprotetora e antioxidante. Tendo em vista o potencial farmacologico do pigmento melanina, este trabalho tem como objetivos fazer a caracterizacao estrutural e funcional do pigmento extraido do fungo A. nidulans. Os resultados de espectrometria de massas indicam que a estrutura da melanina do fungo A. nidulans e composta de duas grandes unidades, representadas pelos fragmentos de massas moleculares igual a 573 e 550, com grupamentos diidroxindol e aneis pirrolicos substituidos. Os ensaios de citotoxicidade mostram que a melanina extraida do fungo A. nidulans nao causa danos significativos aos componentes celulares, tanto antes como pos metabolizacao. Os ensaios de mutagenicidade sugerem que a melanina nao apresenta propriedades mutagenicas para as linhagens TA 97a, TA 98, TA 100 e TA 102 de Salmonella thyphimurium. No teste antimicrobiano, observase que a melanina do fungo nao apresenta potencial como antibacteriano frente a Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Enterococcus faecalis, quando comparadas com as substancias de referencia, ampicilina e cloranfenicol. Quanto... / A mutant that presents increased production of the melanin pigment was isolated from the Aspergillus nidulans fungus. This pigment, formed by the oxidative polymerization of phenolic and/or indolic compounds, can be present in the cellular wall or culture medium. Although it is not essential for the fungal growth, melanization seems to increase the survival capacity of the species in unfavorable conditions, supplying protections against UV radiation, high temperatures, hydrolytic enzymes, heavy metals and oxidants agents. The attainment of this pigment, in its pure form, has taken biotechnological interest due to its use in cosmetic formulations, mainly for its photoprotector and antioxidant property .Considering the pharmacological potential of the melanin pigment, this study aims to make the structural and functional characterization of the pigment extracted from A. nidulans fungus. The results of mass spectrometry indicate that the melanin structure of the A. nidulans fungus is composed of two large units, represented by the fragments of molecular mass equal to 573 and 550, with dihydroxyindole groups and substituted pyrrolic rings. The cytotoxicity assays have shown that the melanin extracted from the A. nidulans fungus does not cause significant damages to the cellular components, before and after metabolization. The mutagenicity assays suggest that the melanin does not present mutagenic properties for the strains TA 97a, TA 98, TA 100 and TA 102 of Salmonella thyphimurium. In the antimicrobial test, it is observed that the fungal melanin does not present antibacterial potential facing Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis and Escherichia coli, when compared to the reference substances, ampicilin and cloranphenicol. Regarding the immunomodulatory activity, it was verified that the melanin does not stimulate NO release... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Carlos Frederico de Oliveira Graeff / Banca: Monica Alonso Cotta / Banca: Fenelon Martinho Lima Pontes / Resumo: A síntese DMSO foi proposta a cerca de seis anos e o resultado mais importante foi o fato da melanina obtida ser solúvel em DMSO o que permitiu a produção de filmes finos de alta qualidade. Para tal fim, a L-Dopa foi utilizada como reagente principal, em sínteses onde se variou: a concentração de perióxido de benzoíla e a concentração de água no DMSO. A síntese em água foi realizada para fins de comparação. A síntese em DMSO apresentou-se mais lenta em comparação a síntese de melanina em água através dos resultados obtidos pela técnica UV-Vis. O peróxiso de benzoíla tem influência significativa na síntese, agindo diretamente na oxidação do DMSO e na oxidação da L-Dopa. Teste de solubilidade com diferentes solventes foi realizado nas amostras de H2O-melanina, DMSO-melanina recém sintetizada e DMSO-melanina envelhecida com tempo de estocagem de quatro anos. Os solventes utilizados foram; água, DMSO, DMF, THF, acetonitrila e acetato de etila. Os resultados mostraram a insolubilidade da H2O-melanina e da DMSO-melanina envelhecida em todos os solventes e somente a solubilidade da DMSO-melanina recém sintetizada no solvente DMSO foi observada. Indicando novamente que as amostras possuem estruturas diferentes e que a DMSO-melanina sofre alterações estruturais quando exposta no ar. Nos espectros da FTIR, grupos sulfonados só foram observados na DMSO-melanina recém sintetizada, que desapareceram nas amostras envelhecidas, e que não estão presentes na H2O-melanina. Ou seja, os grupos sulfonados responsáveis pela solubilidade da DMSO-melanina com o passar do tempo sofrem degradação e saem da estrutura da DMSO-melanina, explicando assim a insolubilidade da amostra de DMSO-melanina envelhecida. O mesmo foi observado para os espectros de 13C RMN. Para entender esse processo de degradação utilizamos o NaOH2 cuja a ação é a retirada dos grupos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Synthesis in DMSO was proposed about six year and the most important result was the fact that it is soluble in DMSO which allowed the production of thin films of high quality. To this end, the L-Dopa was used as primary reagent in primary reagent in syntheses where varied: the concentration of benzoyl peroxide and water concentration in DMSO. The synthesis was carried out in water for comparison purposes. The synthesis presented in DMSO is slower than the synthesis of melanin in water for analysis of the results obtained with the technique of UV-vis. When we analyzed the effect of the concentration of benzoyl peroxide in the synthesis, we found that the concentration of 0.5 moles of benzoyl peroxide gave summary more efficient to malanin in DMSO. Benzoyl peroxide has significant influence on the synthesis, acting directly on the oxidation of DMSO and the oxidation of L-Dopa. Solubility test was carried out with different solvents in the samples of H2O-melanin, DMSO-melanin newly synthesized and old DMSO-melanin with storage time of four years. The solvents used were: water, DMSO, DMF, THF, acetonitrile and ethyl acetate. The results showed the insolubility of H2O-melanin and old DMSO-metanin in all solvents and only the solubility of newly synthesized DMSO-melanin in the solvent DMSO was observed. Indicating again that the samples have different structures and that the DMSO-melanin undergoes structural changes when exposed to air. In FTIR, sulphonated groups were only observed in DMSO-melanin newly synthesized, which disappeared in the old samples, which are not present in the H2O-melanin. That is, the sulfonated groups responsible for the solubility in DMSO-melanin suffer degradation over the time and leave the structure of DMSO-melanin, thus explaining the insolubility of old DMSO-melanin. A chemical model was proposed, using tools... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sandra Regina Pombeiro Sponchiado / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Valdecir Farias Ximenes / Banca: Jairo Kenupp Bastos / Dagmar Ruth Stach Machado / Resumo: Do fungo Aspergillus nidulans foi isolado um mutante que apresenta producao aumentada do pigmento melanina. Este pigmento, formado pela polimerizacao oxidativa de compostos fenolicos e/ou indolicos, pode estar presente na parede celular ou no meio de cultura. Embora nao seja essencial para o crescimento dos fungos, a melanizacao parece aumentar a capacidade de sobrevivencia das especies em condicoes desfavoraveis, fornecendo protecao contra radiacao UV, altas temperaturas, enzimas hidroliticas, metais pesados e agentes oxidantes. A obtencao deste pigmento, na forma pura, tem despertado interesse biotecnologico devido a sua utilizacao em formulacoes cosmeticas, principalmente pela sua propriedade fotoprotetora e antioxidante. Tendo em vista o potencial farmacologico do pigmento melanina, este trabalho tem como objetivos fazer a caracterizacao estrutural e funcional do pigmento extraido do fungo A. nidulans. Os resultados de espectrometria de massas indicam que a estrutura da melanina do fungo A. nidulans e composta de duas grandes unidades, representadas pelos fragmentos de massas moleculares igual a 573 e 550, com grupamentos diidroxindol e aneis pirrolicos substituidos. Os ensaios de citotoxicidade mostram que a melanina extraida do fungo A. nidulans nao causa danos significativos aos componentes celulares, tanto antes como pos metabolizacao. Os ensaios de mutagenicidade sugerem que a melanina nao apresenta propriedades mutagenicas para as linhagens TA 97a, TA 98, TA 100 e TA 102 de Salmonella thyphimurium. No teste antimicrobiano, observase que a melanina do fungo nao apresenta potencial como antibacteriano frente a Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Enterococcus faecalis, quando comparadas com as substancias de referencia, ampicilina e cloranfenicol. Quanto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A mutant that presents increased production of the melanin pigment was isolated from the Aspergillus nidulans fungus. This pigment, formed by the oxidative polymerization of phenolic and/or indolic compounds, can be present in the cellular wall or culture medium. Although it is not essential for the fungal growth, melanization seems to increase the survival capacity of the species in unfavorable conditions, supplying protections against UV radiation, high temperatures, hydrolytic enzymes, heavy metals and oxidants agents. The attainment of this pigment, in its pure form, has taken biotechnological interest due to its use in cosmetic formulations, mainly for its photoprotector and antioxidant property .Considering the pharmacological potential of the melanin pigment, this study aims to make the structural and functional characterization of the pigment extracted from A. nidulans fungus. The results of mass spectrometry indicate that the melanin structure of the A. nidulans fungus is composed of two large units, represented by the fragments of molecular mass equal to 573 and 550, with dihydroxyindole groups and substituted pyrrolic rings. The cytotoxicity assays have shown that the melanin extracted from the A. nidulans fungus does not cause significant damages to the cellular components, before and after metabolization. The mutagenicity assays suggest that the melanin does not present mutagenic properties for the strains TA 97a, TA 98, TA 100 and TA 102 of Salmonella thyphimurium. In the antimicrobial test, it is observed that the fungal melanin does not present antibacterial potential facing Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis and Escherichia coli, when compared to the reference substances, ampicilin and cloranphenicol. Regarding the immunomodulatory activity, it was verified that the melanin does not stimulate NO release... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientadora : Prof. Glaucia Regina Martinez / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 12/02/2010 / Bibliografia: 65-74 / Área de concentração: Bioquímica / Resumo / Resumo: O melanoma e um tipo de cancer bastante relevante ja que as opcoes de tratamento eficazes sao limitadas. A presenca da melanina protege os individuos de pele escura contra os efeitos da radiacao solar, a principal causa de formacao do melanoma pela geracao de especies reativas de oxigenio (ROS). Porem, a melanina tambem pode ter um papel duplo, que e a de gerar especies reativas durante sua sintese que podem prejudicar a celula. Portanto, o objetivo deste trabalho foi a avaliacao das caracteristicas de morte celular causadas por uma ROS, o oxigenio singlete (1O2), nas celulas de melanoma murino B16-F10 com e sem estimulo para producao de melanina e nas celulas de melanocito murino Melan-a. O estimulo para a sintese de melanina foi obtido incubando-se as celulas por 48 horas com meio RPMI 1640 enriquecido com 400 ƒÊmol/L de L-tirosina e 10 mmol/L de cloreto de amonio. A concentracao de melanina aumentou em mais de nove vezes nas celulas B16-F10 e as celulas Melan-a tiveram aumento de menos de duas vezes. Foi utilizado o endoperoxido DHPNO2 10 mmol/L por 2 horas para a geracao de 1O2. Essa condicao causou queda na viabilidade avaliada pelo metodo do MTT para 78,0% nas celulas B16-F10, 70,2% nas B16-F10 estimuladas (B16-F10 Y) e 79,3% nas Melan-a. O ensaio foi feito apos 24 horas do inicio do tratamento com DHPNO2 e a viabilidade caiu para 49,7% nas B16-F10, 53,3% nas B16- F10 Y e 72,5% nas Melan-a. A avaliacao da morte celular utilizando laranja de acridina e brometo de etidio mostrou que apos o tratamento por 2 horas, somente as celulas B16- F10 tiveram aumento significativo na quantidade de celulas em apoptose, e as B16-F10 Y tiveram leve queda na quantidade de celulas viaveis, com tendencia ao aumento de celulas em apoptose. As celulas Melan-a nao tiveram diferenca entre os tratamentos. A liberacao do citocromo c foi determinada por HPLC e mostrou-se que apos 2 horas, as celulas B16-F10 tratadas com 1O2 tiveram mais citocromo c liberado para o citoplasma comparado com o controle. Nos demais grupos, nao houve alteracao com o tratamento. Porem, as celulas controle com mais melanina tiveram maior liberacao de citocromo comparado com o controle das celulas nao estimuladas, mostrando que as celulas estavam sofrendo algum dano inerente da sintese de melanina. A analise da fragmentacao do DNA apos 2 e 24 horas mostrou que nao houve aparecimento de quebras caracteristicas de apoptose pelo tratamento com 1O2 em nenhum dos grupos testados. As celulas B16-F10 Y controle apresentaram DNA fragmentado inespecificamente, representado como um arraste no gel de agarose, que nao foi alterado pelo tratamento. A razao entre ADP e ATP foi quantificada para avaliar o estado energetico da celula, que pode refletir algumas caracteristicas de morte. Nenhuma das celulas teve diferenca estatistica apos o tratamento de 2 horas com 1O2, mas foi observado que as razoes ADP/ATP das celulas controle B16-F10 com e sem estimulo apresentaram valores acima do valor considerado para celulas viaveis/proliferativas. Os resultados da celula Melan-a foram bem proximos dos valores ditos normais. O fluxo de calcio tambem foi avaliado e o 1O2 foi capaz de liberar calcio das reservas intracelulares para o citoplasma nas celulas B16-F10, sendo que nas celulas estimuladas, o aumento do calcio citoplasmatico foi menor, indicando a possivel recaptacao do calcio pela melanina. As celulas Melan-a nao sofreram grandes alteracoes na quantidade de calcio liberado para o citoplasma. Nao houve diferenca na liberacao de AIF em nenhuma das celulas. Em conjunto, os resultados mostram que a sintese da melanina estimulada pela suplementacao do meio foi deleteria as celulas, pois causou fragmentacao no DNA, liberacao de citocromo c e aumentou a razao ADP/ATP para valores considerados de celula em apoptose. Por outro lado, a presenca da melanina parece ter protegido as celulas da acao do 1O2, pois alguns resultados indicam uma tendencia de melhora dos parametros avaliados. / Abstract: Melanoma is a relevant type of cancer since the options for efficient treatment are limited. The presence of melanin protects the dark-skinned people against the effects of solar radiation, the main cause for melanoma development by the generation of reactive species of oxygen (ROS). However, melanin may also have a role on the generation of reactive species during its synthesis, which may harm the cell. So, the objective of this work was the evaluation of the characteristics of cell death caused by a ROS, the singlet oxygen (1O2) on murine melanoma cells B16-F10 with or without stimulation for synthesis of melanin and on murine melanocytes cells Melan-a. The stimulus for the synthesis of melanin was obtained treating the cells for 48 hours with medium RPMI 1640 supplemented with 400 ìmol/L of L-Tyrosine and 10 mmol/L of ammonium chloride. The concentration of melanin increased more than nine times in the B16-F10 cells and the Melan-a cells increase was almost twice the amount of the control. It was used the endoperoxide DHPNO2 10 mmol/L for 2 hours for the generation of 1O2. This condition caused the decrease in the viability determined by the method of MTT to 78% in B16-F10, 70,2% in B16-F10 that were stimulated (B16-F10 Y) and 79,3% in Melana cells. The test was performed after 24 hours from the beginning of the treatment with DHPNO2 and the viability decreased to 49,7% in B16-F10, 53,3% in B16-F10 Y and 72,5 % in Melan-a. The evaluation of cell death using acridine orange and ethidium bromide showed that after the two-hour treatment, only the B16-F10 cells had a significant increase of the number of apoptotic cells, and the B16-F10 Y cells had a slight decrease of the amount of viable cells, with the tendency of the increase of apoptotic cells. Melan-a cells did not show difference among the treatments. The release of cytochrome c was determined by HPLC and it showed that after two hours, B16-F10 cells had more cytochrome c released to the cytoplasm compared to the control. There was not any alteration for other groups of cells with the treatment. However, the control cells that had more melanin showed increased cytochrome c release compared to the control of the not-stimulated cells, demonstrating that the previous cells were suffering some kind of damage from the melanin synthesis. The analysis of DNA fragmentation revealed the absence of typical apoptosis fragmentation in any of the groups. B16-F10 Y control cells displayed unspecific DNA damage observed as a smear in the agarose gel, which was not altered by 1O2 treatment. The same result was observed after the treatment for 2 and 24 hours. The ratio between ADP and ATP was quantified to evaluate the energetic state of the cell, which may reflect some characteristics of cell death. None of the cells showed results statistically significant after the two-hour treatment 1O2, but it was shown that the values of ADP/ATP ratio of the B16-F10 control cells with and without stimulation were above of the threshold accepted for viable/proliferative cells. The results of Melan-a cells were very close to the values considered normal. The calcium flux was also evaluated and it was evidenced that 1O2 was capable of releasing calcium from the intracellular stores to the cytoplasm in B16- F10 cells, and the release of calcium was lower in B16-F10 Y, indicating the possibility of the binding of the metal to melanin. The Melan-a cells did not showed much increase in the quantities of calcium released to the cytoplasm. There was no difference in the release of AIF in any group. Over all, the results support that the synthesis of melanin that was stimulated by the supplementation of the medium was deleterious to the cells, since it caused DNA fragmentation, release of cytochrome c and increase of the ratio ADP/ATP to values of cells in apoptosis. On the other hand, the presence of melanin seemed to protect the cells against the action of 1O2, because some results indicate a tendency of improvement in the parameters evaluated.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2007. / Submitted by Rafael Barcelos Santos (rafabarcelosdf@hotmail.com) on 2011-06-30T18:34:21Z No. of bitstreams: 1 2007_YannaKarladeMedeirosNobrega.pdf: 579781 bytes, checksum: 9bbb338dba79606d079de33ad6822337 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(tempestade_b@hotmail.com) on 2011-07-03T21:39:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_YannaKarladeMedeirosNobrega.pdf: 579781 bytes, checksum: 9bbb338dba79606d079de33ad6822337 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-03T21:39:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_YannaKarladeMedeirosNobrega.pdf: 579781 bytes, checksum: 9bbb338dba79606d079de33ad6822337 (MD5) / A Cromomicose é uma micose crônica, supurativa e granulomatosa, que tem distribuição cosmopolita. O Fonsecaea pedrosoi é o principal agente etiológico da cromomicose no mundo. A infecção inicia-se a partir de um trauma com a implantação no tecido subcutâneo de conídios e fragmentos de hifas do fungo, causando a lesão inicial. No hospedeiro essas estruturas do fungo se diferenciam em células escleróticas, estabelecendo a doença. Em função da importância do estabelecimento de uma resposta imune celular eficiente através da interação entre as células do sistema imunológico com os componentes da parede celular dos fungos, que são capazes de promover a ativação destas, o objetivo do presente trabalho foi analisar a influência das frações da parede celular do Fonsecaea pedrosoi na ativação dos fagócitos peritoneais obtidos de camundongos. Nossos resultados revelaram que após 4 horas da inoculação das preparações houve a migração predominante de neutrófilos, e com 72 horas a migração de macrófagos. As frações F2 e o fungo inativado estimularam a migração de linfócitos B predominantemente e os fagócitos de 4 horas produziram óxido nítrico espontaneamente. A fração F1 induziu uma alta produção de IL-12 nas células que migraram após 72 horas da inoculação das frações. O fungo inativado e a fração F2 induziram a produção de IL-10. A estimulação prévia das células com a fração F2 diminuiu o índice de fagocitose e aumentou a produção de IL-10. Nossos resultados sugerem que a fração F2 modula a resposta imunológica para Th2 enquanto que a fração F1 modula a resposta imunológica para Th1 na cromomicose. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chromoblastomycosis is a chronic suppurative granulomatous mycosis that exists all around the world. The Fonsecaea pedrosoi is the most frequent etiologic agent in the world. The infection begins with a trauma and the implantation of conidia or hyphae fragments in the subcutaneous tissue producing the initial lesion. Inside the host, a fungus structure differentiates into sclerotic forms allowing the establishment of the disease. Considering the importance of the establishment of an efficient immune cellular response, through the interaction between the cells of the immunologic system with the components of the fungus wall, the objective of the present work was to analyze the influence of the fractions from the Fonsecaea pedrosoi cellular wall in the activation of murine peritoneal phagocytes extracted from mice. Our result demonstrates that after 4 hours after of the inoculation of the solutions the migration was constituted predominantly by neutrophils, and after 72 hours predominantly by macrophages. The F2 fractions and the inactive fungus stimulate predominantly the migration of B lymphocytes and the four hours phagocytes produced spontaneously nitric oxide. The F1 fraction induced the high production of IL-12 in the cells that migrated after 72 hours of the fractions inoculation. The inactive fungus and the F2 fraction induced the IL-10 production. Cells previously stimulated with the F2 fraction resulted in a decreased phagocytosis index and increased the IL-10 production. Our results suggest that, in chromoblastomycosis, the F2 fraction modulates the immunological Th2 type response while the F1 fraction modulates the immunological Th1 type response.

Orientador: Marilia Junqueira Caldas / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Fisica Gleb Wataghin / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:05:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Galvao_DouglasSoares_D.pdf: 5310628 bytes, checksum: 37f35636edd00e03da7f32f0bdf54c55 (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: As melaninas constituem uma classe de pigmentos biológicos com função básica de fotoproteção e com características de semicondutor amorfo. Embora a estrutura e composição destes pigmentos não estejam bem caracterizados, não restam duvidas de que a 5,6,indolquina (IQ) é o monômero mais abundante. Neste trabalho nós estudamos a estrutura eletrônicas da melanina, com base em modelos de polímeros de IQ. Nós utilizamos o método de Hückel Simplificado (HS) para a investigação das propriedades eletrônicas de cadeias poliméricas, finitas e infinitas (no limite de Bloch), ordenadas e com a presença de desordem. Os dados obtidos através da utilização de métodos mais sofisticados (MNDO e INDO) para os monômeros e dínamos de IQ validam as conclusões obtidas com o HS. O modelo que aqui propomos para a estrutura eletrônica das melaninas explica satisfatoriamente a maioria dos dados experimentais disponíveis sobre este material (paramagnetismo, propriedades óticas, etc.), bem como parece confirmar a hipótese da existência de um mecanismo de defesa celular baseado na captura eletrônica de radicais livres (potencialmente citotóxicos) / Abstract: Melanin¿s form a class of biological pigments which presents photoprotection as its basic function and amorphous semiconductor features. Though the structure and composition of these pigments are not well characterized, there is no doubt 5,6,indolquinone (lQ) is the most important monomer related to them. In this work we have studied the electronic structure of the melanin¿s, based on models of IQ polymers. We have used Hückel Theory (HT) to investigate the electronic properties of finite and infinite (in Bloch's limit), ordered and disordered, polymeric chains. Data obtained from the utilization of more sophisticated methods (MNDO and INDO) for IQ monomers and dimmers are in good agreement with the conclusions we had drawn from HT calculations. The model we present here for the electronic structure of melanin¿s is able to explain the major part of available experimental data about this material (paramagnetism, optical properties, etc.); it also seems to confirm the hypothesis of the existence of a cellular defense mechanism, based or the electronic capture of (potentially citotoxic) free radicals / Doutorado / Física / Doutor em Ciências

Orientador : Paulo Anna Bobbio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-15T02:09:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Imasato_Hidetake_M.pdf: 3044252 bytes, checksum: 1c40edbd492a8092a4e6b719ffa6380a (MD5) Previous issue date: 1979 / Resumo: Foram preparadas melanoidinas usando-se frutose nas concentrações 1,25 e 2,50 M e glicina 0,66 e 1,32 M, nos pH 3,0 e 6,0 e nas temperaturas 70,0, 80,0 e 90,0ºC. As melanoidinas obtidas a pH 3,0, insolúveis em água, foram isoladas por filtração e aquelas a pH 6,0, solúveis, por diálise através de uma membrana de celofane. Dos produtos purificados foram feitas as análises elementares e obtido os espectros infravermelho. Nas melanoidinas solúveis foram determinados os pesos moleculares e os grupos presentes na molécula. Esses dados aliados a identificação de alguns produtos da degradação oxidativa permitiram sugerir algumas estruturas características, a saber: cetona e álcool a, ß-insaturados, ß-e ?-dicetonas e diálcoois e ß-e ?-hidroxicetona / Abstract: Melanoidins were prepared using 1.25 and 2.50 M fructose, and 0.66 and 1.32 M glycine at pH's of 3.0, and 6.0 and at temperatures of 70.0, 80.0, and 90.0ºC. The melanoidins obtained at pH 3.0 were unsoluble in water and were isolated by fi1tration. Those obtained at pH 6.0 were water soluble and were purified by dialysis using a cellophane membrane. Infrared spectra and elementary analysis were obtained for the isolated melanoidins. The functional groups and the molecular weights of the soluble melanoidins were determined. These collected data, together with the products identified from oxidative degradation led to suggestions of some possible structures for soluble melanoidins. The structures proposed are:a, ß-unsaturated ketone and alcohol, ß- and ?-diketones and dialcohols, and ß- and ?-hydroxy-ketones / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Tecnologias Química e Biológica, 2016. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Foram disponibilizados Resumo e Abstract. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-20T11:32:54Z No. of bitstreams: 1 2016_DiegoArantesTeixeiraPires_Parcial.pdf: 408452 bytes, checksum: a5e35ad32a95997f5762b792a670e41e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-02T11:54:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_DiegoArantesTeixeiraPires_Parcial.pdf: 408452 bytes, checksum: a5e35ad32a95997f5762b792a670e41e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-02T11:54:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_DiegoArantesTeixeiraPires_Parcial.pdf: 408452 bytes, checksum: a5e35ad32a95997f5762b792a670e41e (MD5) / A tirosinase é uma enzima oxidase que contém cobre no sítio ativo e pode ser encontrada em plantas, fungos e animais. Em animais, a tirosinase está diretamente envolvida na biossíntese da melanina, sendo que a produção anormal deste pigmento pode levar a uma série de problemas dermatológicos, como hiperpigmentação, hipopigmentação, age spot, melasma, câncer de pele, dentre outros. Por esses motivos, a busca por novos inibidores e ativadores dessa enzima é de grande interesse para a medicina, indústria alimentícia e também para a agricultura. Nesse sentido, estudar o modo de interação de novos inibidores e ativadores com a tirosinase é de fundamental importância para o planejamento de novas drogas mais eficientes. Esse estudo de interação ligante-enzima é feito principalmente por Ressonância Magnética Nuclear (RMN), envolvendo análises de variações de deslocamento químico, tempos de relaxação, coeficientes de difusão e técnicas como STD e INPHARMA, além de Química Computacional. Neste trabalho, novos compostos foram sintetizados e suas caracterizações feitas por infravermelho, espectrometria de massa e RMN. Após testes biológicos, alguns desses compostos foram selecionados para estudos de interação com a tirosinase por RMN, bem como por cálculos mecânico-quânticos e de docking molecular. Os resultados alcançados permitem vislumbrar os modos de interação de ligantes com essa enzima, dando um passo fundamental para o desenho racional de novos fármacos. / Tyrosinase is an oxidase enzyme that contains copper in the active site and it can be found in plants, fungi and animals. In animals, tyrosinase is directly involved in the biosynthesis of melanin. Abnormal production of this pigment can lead to many dermatologic problems, such as hyperpigmentation, hypopigmentation, age spot, melasma, skin cancer, among others. For this reason, there is a special interest in finding new inhibitors and activators of this enzyme. Thereby, the study of the interactions mode of new inhibitors and activators with tyrosinase is very important for the planning of new and more powerful drugs. This study can be primarily done by Nuclear Magnetic Resonance (NMR) by analyzing chemical shift changes, relaxation times, diffusion coefficients and techniques such as STD and INPHARMA, among others. In this work, new compounds were characterized and studied by IR, mass spectrometry, NMR and theoretical calculations. After biological tests, some of these compounds have been selected for studying the interaction with tyrosinase by NMR and theoretical calculations. The results allow us to come up with the binding modes of ligands interaction with the enzyme, giving a key step in the rational design of new drugs.