Florações de cianobactérias tóxicas em corpos dágua doce usados como fonte para o consumo humano, recreação e irrigação são freqüentes nos dias de hoje devido à eutrofização destes ambientes. O monitoramento de linhagens tóxicas é importante para a prevenção dos efeitos adversos causados por suas toxinas na saúde de humanos e animais. Métodos rápidos e sensíveis para a detecção precoce das cianobactérias tóxicas em estações de tratamento de água e em programas de monitoramento de mananciais são de fundamental interesse para a prevenção desses efeitos. Atualmente, contagem de células, identificação de cianobactérias por microscopia óptica e análises químicas ou imunológicas das toxinas são usadas nos monitoramentos. Em anos recentes, métodos moleculares estão sendo desenvolvidos e propostos para o diagnóstico rápido e sensível da presença de cianobactérias tóxicas em diversos ambientes. Este estudo teve por objetivo implementar uma metodologia capaz de acessar e quantificar as cianobactérias do gênero Microcystis na Praia dos Namorados, no reservatório de Salto Grande, Americana, SP, local cujo uso recreacional é bastante intenso e florações de cianobactérias são freqüentemente observadas. Simultaneamente, buscou-se detectar o potencial de produção de microcistinas desses organismos. A técnica de PCR Quantitativa em Tempo Real (qPCR) foi empregada com essa finalidade e dois conjuntos de oligonucleotídeos LUX foram desenvolvidos tendo como alvo dois genes distintos. Seqüências de cpcBA-IGS do operon da ficocianina (PC) foram obtidas para sete linhagens de cianobactérias brasileiras, as quais foram alinhadas com outras seqüências existentes em banco de dados público, e permitiram o desenho dos iniciadores de qPCR QPCF/QPCR, capazes de amplificar fragmentos de 144 pb. Da mesma forma, outras 11 sequências inéditas foram obtidas para uma região do domínio da N-methyltransferase do gene da sintetase de microcistinas (mcyA) e permitiram o desenvolvimento dos iniciadores QmcyANMTF/ QmcyA-NMTR, capazes de amplificar fragmentos de 154 pb. Ambos os conjuntos foram marcados uma única vez com os fluoróforos FAM (QPCF/QPCR) ou JOE (QmcyA-NMTF/QmcyA-NMTR). Curvas de calibração para ambos os genes foram estabelecidas com regressão linear simples usando os valores de Ct (número de ciclos da qPCR em que a fluorescência atinge um limiar fixo pré-determinado) e concentrações conhecidas de DNA gênomico (em número de células equivalente) da Microcystis sp. NPLJ-4 (produtora de microcistina). As diluições utilizadas para o estabelecimento dessas curvas variaram de 1:10 a 1:10-5 e as concentrações de DNA foram correlacionadas com o respectivo número de células na amostra, obtido pela técnica de Utermöhl em laboratório certificado, como metodologia independente. Para PC e mcyA, as equações de regressão foram y = 43,977 - 1,8097Ln(x) (R2 = 0,99, p<0,05) e y = 42,932 - 1,8449Ln(x) (R2 = 0,99, p<0,05), respectivamente, sendo y = Ct com limiar de fluorescência fixo avaliado em 0,03 e x = quantidade de DNA na amostra em concentrações conhecidas (dada como log do número de células equivalente). Para ambos os genes analisados, o limite de detecção foi de 100 células por reação. Eficiências de 79 e 76% foram alcançadas nas amplificações para PC e mcyA, respectivamente. Posteriormente, essa metodologia foi aplicada a duas outras linhagens isoladas de Microcystis e em amostras ambientais de água, que foram coletadas sempre no mesmo ponto (Praia dos Namorados), em quatro períodos distintos (dez 06, abr 07, set 07 e nov 07). Genótipos PC (em número de células mL-1) foram quantificados pela técnica de qPCR em todas as amostras analisadas. Porém, genótipos mcy puderam ser determinados apenas em M. aeruginosa NPJB1 (0,5%) e na amostra referente à primeira coleta (2,7%). Os resultados de número de células em todas as análises feitas usando a técnica de Utermöhl foram superiores aos obtidos pela qPCR. A comparação entre as médias dos valores de quantificações gerados por Utermöhl e qPCR (PC) mostrou diferença significativa (Teste t de Student, p <0,05). Nas amostras ambientais, com exceção da primeira coleta, a presença de outros gêneros de cianobactérias cocóides, como Radiocystis e Sphaerocavum, foi observada, e suas distinções não foram possíveis nas observações microscópicas após a disrupção das colônias. Estudos adicionais realizados com a região cpcBA-IGS desses outros gêneros mostraram 96% de identidade com Microcystis, e seqüências IGS bastante similares. Assim, existe a possibilidade de que os iniciadores desenhados neste estudo estejam também amplificando esses dois gêneros de cianobactérias. Em adição, a contagem em microscópio pode ter superestimado os resultados, enquanto que a técnica de qPCR mostrou baixa eficiência de amplificação. O ensaio imunológico ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) identificou a produção de microcistinas dos tipos LR, RR ou YR em todas as amostras com concentrações maiores que 0,1 g L-1, com exceção da M. aeruginosa NPCD1 (não produtora de microcistinas). Os resultados obtidos neste estudo indicam que o número de células de Microcystis, estimado pela técnica de qPCR pode ser usado para o monitoramento ambiental na Praia dos Namorados, em atendimento à Portaria MS 518. Além disso, demonstram que é possível inferir a proporção de genótipos mcyA a partir da determinação de genótipos PC. Contudo, a validação dessa técnica requer maiores estudos, incluindo a utilização de mais gêneros de cianobactérias e análises de outros reservatórios brasileiros, para melhor avaliar sua confiabilidade para uso no monitoramento ambiental. Para fins de monitoramento em larga escala, a técnica de qPCR mostrou-se mais viável economicamente em relação à contagem de células por microscopia, devido a sua maior capacidade de processamento (18 amostras dia-1) / Toxic cyanobacterial blooms in freshwater bodies used as a source for human consumption, recreation and irrigation are frequent nowadays due to the eutrofication of these environments. The monitoring of toxic strains is important for the prevention of the side effects caused by their toxins in human and animal health. Rapid and sensitive methods for early detection of toxic cyanobacteria in water treatment stations and aquatic monitoring programs are essential for the prevention of these effects. Currently, cells counting, cyanobacterial identification using optical microscopy and chemical or immunological analyses of the toxins are applied for monitoring purposes. In recent years, molecular approaches are being developed and proposed for rapid and sensitive diagnosis of the presence of toxic cyanobacteria in several environments.This study aimed to implement a methodology capable of access and quantify Microcystis cyanobacterial genus at the Praia dos Namorados, in the Salto Grande reservoir, Americana, SP, where recreation is very intense and cyanobacterial blooms are frequently observed. Simultaneously, it was searched to detect the potential for microcystins production by these organisms. The Real Time Quantitative PCR (qPCR) technique was employed for these purpose and two sets of LUX primers were developed to target two distinct genes. Sequences of cpcBA-IGS of the phycocyanin operon (PC) were obtained for seven Brazilian cyanobacterial strains, which were aligned with other existing public database sequences, and allowed to design the qPCR QPCF/QPCR primers, able to amplify fragments of 144 bp. In the same way, 11 novel sequences were obtained from a region of the N-methyltransferase domain of the microcystin sinthetase gene (mcyA) and allowed the development of QmcyANMTF/ QmcyA-NMTR primers, able to amplify fragments of 154 bp. Both primer sets were labeled only once with FAM (QPCF/QPCR) or JOE (QmcyA-NMTF/QmcyA-NMTR) fluorophors. Standard curves for both genes were established with simple linear regression using the Ct values (the PCR cycle numbers at which the fluorescence reaches a predetermined threshold level) and known Microcystis sp. NPLJ-4 (microcystin producer) genomic DNA concentrations (in cell number equivalents). The dilutions used for the establishment of these curves ranged from 1:10 to 1:10-5 and the DNA concentrations were correlated with the respective cell numbers of the sample, obtained by Utermöhl technique in a certified laboratory, as an independent methodology. For PC and mcyA, the regression equations were y = 43.977 - 1.8097Ln(x) (R2 = 0.99, p<0,05) and y= 42.932 - 1.8449Ln(x) (R2 = 0.99, p<0,05), respectively, where y is the Ct at the set fluorescence threshold level (0.03) and x is the amount of known DNA concentrations in the sample (given as log cell number equivalents). For both analyzed genes, the detection limit was 100 cells per reaction. Efficiencies of 79 and 76% were achieved for PC and mcyA amplifications, respectively. Subsequently, this methodology was applied to two other isolated Microcystis strains and to environmental water samples, which were collected always in the same location (Praia dos Namorados), in four different periods (Dez 06, Apr 07, Set 07 and Nov 07). PC genotypes (in cell numbers mL-1) were quantified by the qPCR technique in all analyzed samples. However, mcy genotypes could be determined only in M. aeruginosa NPJB1 (0.5%) and in the first collected sample (2.7%). The results of cell numbers in all the analyses performed using Utermöhl technique were superior then those obtained by qPCR. The comparison between the average quantification values generated by Utermöhl and qPCR (PC) showed significant difference (Test t of Student, p<0,05). In the environmental samples, except for the first one collected, the presence of other cocoid cyanobacterial genera, such as Radiocystis and Sphaerocavum, was observed, and their distinctions were not possible by microscope observation after colonies disruption. Further studies carried out with the cpcBA-IGS region of these other genera showed 96% of identity with Microcystis, and very similar IGS sequences. Then, there is a possibility that the primers designed in this study are also amplifying these two cyanobacterial genera. In addition, microscopic cells counting may have overestimated the results, whereas qPCR technique showed low efficiency of amplification. The ELISA immunological assay (\"Enzyme-Linked Immunosorbent Assay\") identified the LR, RR or YR microcystins types in all samples analysed with concentrations higher than 0.1 mg L-1, with exception of M. aeruginosa NPCD1 (no microcystin producer). The results obtained in this study suggest that Microcystis cell numbers estimated by qPCR technique can be used for the environmental monitoring of the Praia dos Namorados, in attendance to the MS 518 regulation. Furthermore, they demonstrate that it is possible to infer the mcyA genotypes proportion from the PC genotypes determination. However, further studies are required for the validation of this technique, including the use of more cyanobacterial genera and other Brazilian reservoirs analyses, to better evaluate the reliability for its use in the environmental monitoring. For large scale monitoring, the qPCR technique is more economically viable when compared to the microscopic cells counting, due to its large processing capacity (18 samples day-1)

As algas vermelhas, filo Rhodophyta, representam uma das maiores e mais antigas linhagens de organismos eucarióticos. Dentre as Rhodophyta, o gênero Laurencia J.V. Lamouroux (Ceramiales) é um dos mais completos do ponto de vista químico, pois consiste no maior produtor de metabólitos secundários e assim, destaca-se como uma fonte fascinante de novos produtos naturais, biologicamente ativos. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial farmacológico dos extratos das espécies de Laurencia frente às atividades biológicas, assim como a análise da composição bioquímica e identificação de seus constituintes químicos. As espécies utilizadas foram L. aldingensis (LA), L. catarinensis (LC), L. dendroidea (LD), L.intricata (LI). Adicionalmente L. translúcida (LT), Palisada flagellifera (PF), P.perforata (PP) e uma variante pigmentar de LD (LDV) foram utilizadas para comparação. Para o desenvolvimento das atividades propostas foram utilizados extratos fracionados obtidos sucessivamente através dos solventes hexano (EH), clorofórmio (EC), metanol (EM), água (EA) e também extrato aquoso bruto (EAB). A análise de proteínas foi feita com os métodos de Bradford, Ácido bicinconínico (BCA) e absorção na luz UV a 280 nm. Destes, o método de Bradford mostrou-se o mais adequado Na dosagem de ficobilinas, a ficoeritrina se apresentou em maior quantidade em todas as espécies testadas em relação à ficocianina e aloficocianina. O ensaio para avaliação da atividade antimicrobiana usando vários patógenos foi feito por microdiluição em placa seguindo a NCCLS e as concentrações inibitórias mínimas (CIM) foram obtidas espectrofotometricamente. Em bactérias, LA-EH foi bactericida contra P. aeruginosa a uma concentração de 62,8 &mu;g.mL-1 e os extratos LA-EM e LC-EH tiveram uma ação bacteriostática forte contra S. pneumoniae nas concentrações de 51,1 e 85,1 &mu;g.mL-1, respectivamente. No ensaio antifúngico, LA-EH e LA-EC foram fungicidas contra C.parapsilosis a 49,0 e 57,8 &mu;g.mL-1, respectivamente. O ensaio antioxidante foi feito usando-se o método com DPPH, em que os EC apresentaram-se como os melhores extratos possuidores de moléculas capazes de doar prótons. Para o teste anticolinesterásico foi feito o ensaio qualitativo em CCD e ensaio quantitativo em microplaca pelo método de Ellman que puderam demonstrar a atividade inibidora da AChE sendo menor que 50 % , mesmo para concentrações de 600 &mu;g.mL-1. O perfil foi muito semelhante em todos os extratos testados no qual os EH e EC foram os mais ativos e os EM possivelmente deram um falso positivo, enquanto os extratos EA e EAB tiveram atividades baixas. No ensaio contra o fitopatógeno causador da antracnose no mamão, Colletotrichum gloesporioides, os resultados mostram que LC-EH e LD-EH são os mais ativos, com IC50 de 70 e 40 &mu;g.mL-1, respectivamente. Para o ensaio citotóxico contra células de mamíferos está sendo desenvolvido um modelo em que se utilizam células MES-SA e sua correspondente mutante (MES-SA/Dx5) multiresistente a drogas. O modelo proposto é bastante promissor e, do screening inicial sugere-se uma investigação mais detalhada em LD-EH e LT-EH cujos IC50 foram de 91 &mu;g.mL-1 e 16 &mu;g.mL-1, respectivamente, contra MES-SA. Uma investigação química de cada uma das frações dos extratos das espécies LA, LC, LD e LI foi realizada utilizando-se o CG-EM. Para identificação das substâncias foi utilizada a biblioteca do equipamento e literatura disponível através da comparação dos espectros de massas, tempo de retenção e Índice de Kovat´s. Os resultados obtidos neste estudo apresentaram potencial que justifica dar continuidade na busca de novas moléculas ou grupo de moléculas capazes de serem usadas em terapias sem a toxidez das substâncias sintetizadas quimicamente. / The Red Algae, phylum Rhodophyta, represent one of the largest and oldest lineages of eukaryotic organism. From the chemical standpoint, the Laurencia J.V. Lamouroux (Ceramiales) has been identified as one of the most complete and diverse genus within this specific group. The members of this genus have been identified, for instance, as the largest producers of secondary metabolites known to the Rhodophyta. Thus, it is not surprising that these specific species are currently under intense scrutiny with regard to their potential as new sources of natural products for medical and biotechnological applications. The primary aim of this study is to start a systematic investigation on the identification and characterization of novel Laurencia natural products showing desirable pharmacological and biomedical properties. The species used in this research are L. aldingensis (LA), L. catarinensis (LC), L. dendroidea(LD), L. intricate (LI). In addition, L. translucida (LT), Palisada flagellifera(PF), P.perforata (PP) and a pigment variant of LD (LDV) were included for comparison. Specifically, algal extracts were obtained through the sequential fractionation of dried algae samples with hexane (EH), chloroform (EC), methanol (EM), water (EA), and a single, crude, aqueous extracts (EAB). Protein content was performed using the Bradford, bicinchoninic acid assay (BCA) and the 280 nm uv quantification methods. The Bradford method was identified to be more appropriate for quantification. The analysis of phycobilins revealed that phycoerythrin was the major pigment in all species tested. Extracts were assayed for antimicrobial activity following the NCCLS microdilution tests and the minimum inhibitory concentration (MICs) obtained spectrophotometrically. Antimicrobial activity was explored using a variety of model biological targets (i.e. pathogens). To this end, microdilutions were used following the classical NCCLS and a minimal inhibitory concentration (MIC) protocol was performed on basis of electronic spectroscopy measurements. With respect to our findings on antibacterial activity, the LA-EH extract was bactericidal against the P. aeruginosa concentration of 62.8 &mu;g.mL-1 extracts and LA-EM and LC-EH had a strong bacteriostatic action against S. pneumoniae at concentrations of 51.1 and 85,1 &mu;g.mL-1, respectively. In the antifungal assay, LA-EH and LA-EC were fungicides against C. parapsilosis to 49.0 and 57.8 &mu;g.mL-1, respectively. The antioxidant assay was tested using the method with DPPH, in which the EC presented them as possessing the finest extracts of molecules capable of donating protons. And for the anticholinesterase test was done in the qualitative assay and quantitative assay on TLC plate by the Ellman method that could demonstrate the inhibitory activity of AChE less than 50 % for concentrations of 600 &mu;g.mL-1. The profile was similar for all extracts in which the EH and EC were the most active and possibly EM gave a false positive, while the EA and EAB extracts had very low activity. In the trial against the pathogen Colletotrichum Gloesporioides that causes papaya anthracnose the results show that LC-EH and LD-EH are the most active with IC50 of 70 and 40 &mu;g.mL-1, respectively. To perform the cytotoxicity assay against mammalian cells a model that is under development was proposed in which use cells MES-SA and its corresponding mutant (MES-SA/Dx5) multi-drug resistant. The proposed model is quite promising and the initial screening we propose a more detailed investigation of LD-EH and LT-EH whose IC50 were 91 &mu;g.mL-1 and 16 &mu;g.mL-1, respectively, against MES-SA cells. The LA, LC, LD and LI extract compounds were analyzed by GC-MS and the identification was performed using the library data and literature by comparing the mass spectra, retention time and index Kovat\'s. The study conducted here is likely to draw directions and help in the search for new molecules or group of molecules capable of being used in therapy without the toxicity of chemically synthesized compounds.

Submitted by MAIARA STEFANINI BORGES null (borges.maiara@iq.unesp.br) on 2016-03-22T21:06:41Z No. of bitstreams: 1 MAIARA STEFANINI BORGES.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-23T13:30:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 borges_ms_me_araiq.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-23T13:30:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 borges_ms_me_araiq.pdf: 2921643 bytes, checksum: 71bed0595a70fef8c32665cc82adc905 (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Micro-organismos endofíticos, geralmente fungos e bactérias, vivem sistematicamente no interior das plantas sem causar, aparentemente, danos a seus hospedeiros. Fungos endofíticos representam um importante grupo de fungos com potencial fármaco e biotecnológico e podem ser isolados de diversas plantas medicinais. A espécie vegetal Eugenia jambolana Lam. tem sido intensamente explorada química e biologicamente devido a seus usos populares e por apresentar diversas atividades biológicas. Logo, o estudo de fungos endofíticos, associados a esse espécie vegetal, apresenta-se como uma estratégia promissora na obtenção e identificação de substâncias potencialmente bioativas. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo principal a avaliação química do fungo endofítico Saccharicola sp. isolado de Eugenia jambolana Lam. Este endófito foi cultivado em pequena escala nos meio de cultura liquido (MDB) e sólido (Milho) e em escala ampliada no meio Czapek. O caldo foi separado dos micélios após 28 dias (meios líquidos) e 21 dias (meio sólido) por filtração e o filtrado foi submetido à partição líquido/líquido com AcOEt fornecendo, após a evaporação do solvente, os respectivos extratos brutos. Os extratos foram avaliados frente a produção metabólica por CCDC, CLAE-DAD e RMN de 1H e também avaliados frente aos ensaios biológicos. Portanto para os extratos MDB, Milho Fr.CH3CN, Milho Fr. aquosa e Milho Fr.Hexânica, foram realizados ensaios antifúngico, antioxidante e anticolinesterásico, onde estes extratos demonstraram ser promissores. O extrato obtido em escala ampliada (Czapek) foi fracionado em cartucho SPE (extração em fase sólida), resultando em seis frações (Ss.C.Fr1- Ss.C.Fr6). Do estudo da fração Ss.C.Fr1 foi possível o isolamento de uma substância o Ácido fusárico (1) e a fração Ss.C.Fr3 resultou no isolamento de 6,7 dihidroxi- 4,6 dimetil octanoato de metila (2), substância inédita. O extrato obtido em escala reduzida (Milho Fr.CH3CN) foi submetido a fracionamento em coluna de sílica gel de fase reversa (C18), resultando em oito frações (Ss.M. CH3CN Fr1 - Ss.M. CH3CN Fr8). O estudo da fração Ss.M. CH3CN Fr5 resultou no isolamento da substância 4-hidroximeleina (3). O estudo da fração Milho Fr.Aquosa-XAD resultou no isolamento de duas substâncias Timidina (4) e Adenosina (5). Portanto, o estudo químico com o fungo endofítico Saccharicola sp. resultou no isolamento de cinco substâncias puras. Sendo assim, este trabalho visou isolar substâncias potencialmente bioativas através da investigação dos extratos e frações de Saccharicola sp.. / Endophytic microorganisms, often bacteria and fungi systematically live within the plant without apparent harm their hosts. Endophytic fungi represent an important group of fungi with biotechnological potential and may be isolated from various medicinal plants. The plant species Eugenia jambolana Lam. has been intensively explored chemically and biologically due to its popular uses and it has several biological activities. Thus, the study of endophytic fungi associated with this plant species, presents itself as a promising strategy in obtaining or identifying potentially bioactive substances. Within this context, this study aimed to evaluate the chemical endophytic fungus Saccharicola sp. isolated from Eugenia jambolana Lam., encoded as Ej-c04. This endophyte was cultivated on a small scale to a liquid culture medium PDB solid Corn and enlarged scale for the Czapek medium. The broth was separated from the mycelium after 28 days (liquid media) and 21 days (solid medium) by filtration and the filtrate was subjected to liquid / liquid partition with ethyl acetate providing after evaporation of the solvent, their crude extracts. The extracts were evaluated against metabolic production by TLC, CLAE-DAD and 1H NMR also evaluated and compared to the bioassay. So for MDB extracts, Fr.CH3CN Corn, aqueous Fr. Corn and Corn Fr.Hexânica, tests were performed antifungal, antioxidant and anticholinesterase where these extracts have shown promise.The extract obtained in enlarged scale (Czapek) was fractionated on SPE cartridge (solid phase extraction), resulting in six fractions (Ss.C.Fr1- Ss.C.Fr6). From Ss.C.Fr1 fraction was possible to isolate a substance fusaric acid (1) and Ss.C.Fr3 fraction resulted in the isolation of (2E, 4E) - 6,7 dihydroxy-4,6-dimethyl octanoate (2) novel substance. The extract obtained in small scale (Corn Fr.CH3CN) was subjected to fractionation column of silica gel reversed phase (C18) resulting in eight fractions (Ss.M. CH3CN- Fr1 - CH3CN Ss.M. Fr8). The study fraction Ss.M. CH3CN Fr5 resulted in the isolation of 4-hidroximeleina substance (3). The study of fraction Corn Fr. Aqueous -XAD resulted in the isolation of two substances Thymidine (4), adenosine (5). Therefore the chemical study of the endophytic fungus Saccharicola sp. resulted in the isolation of five pure substances Thus, this study aimed to isolate potentially bioactive substances through the investigation of extracts and fractions of Saccharicola sp..

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseAQLS.pdf: 12035597 bytes, checksum: 9708ca94fb3128572883e445067600b8 (MD5) Previous issue date: 2007-12-11 / The plant Murraya paniculata is native in Asia where its root barks have produced the contraceptive and hormonal alkaloid yuehchukene. In Brazilian specimens no alkaloid was detected. This had inspired new researches about the microorganisms that interact with it in Brazil, including the present work. Therefore, 1711 endophytic microorganisms were isolated from four host plants, in São Paulo State, and the seasonal colonization indexes, the microbial frequencies and the specificities of the identified groups per tissues (microhabitats) were verified. Among the obtained endophytes, 1061 were filamentous fungi and 650 were bacteria, with 62% and 38% of frequency and 33% and 20% of colonization index, respectively. The colonization indexes of the bacteria in comparison to the of fungi were lower in all gatherings and hosts, principally for leaves that, had shown the bigger frequency for the fungi and the smaller for the bacteria. Fungi were clustered in 20 morphological groups, 15 identified to genus level and five unknown, including two Mycelia sterilia. The recognized genera were Fusarium, Colletotrichum and its teleomorphs Giberella and Glomerella respectively, Trichoderma, Phomopsis, Paecilomyces, Penicillium, Aspergillus, Epicoccum, Pestalotiopsis, Alternaria, Xylaria, Nigrospora and Guignardia and the unknown were named A-E groups. The more frequent genera were rich in diversity, according to morphological and molecular data. A more diversity of fungi genera were verified in the winter (17) and a less in the spring (9) as the endophytic fungi were smaller in quantity in the summer (44.7%) and greater in the autumn (77.7%). From a sample of 59 isolates and six fungi as prototypes genomic DNAs were obtained and their ITS-1 regions were sequenced. The unknown strain B (Fed) had sequenced its 5.8s and ITS-2 regions. 21 species were identified by their ITS-1 regions and two others were hypothesized as novelty: one Trichoderma and the Fed that all morphological and chemotaxonomic studies appoint as a new species. Trichoderma associated to M. paniculata were in majority from barks and had showed great diversity of species (9). It was evaluated too the potential of the endophytes from host for bioactive metabolite production. The more promising groups for extracellular substances were the fungi Penicillium, with bactericidal and antiprotozoal actions, Pestalotiopsis, active against Candida, and Trichoderma, with fungicidal and bactericidal activities. For Fed it was noted its intracellular metabolites as strong bactericidal and its volatiles as anti-fungi. By looking for the active principles of those microorganisms, from Penicillium citrinum the citrinin and an undetermined alkaloid were obtained and from Trichoderma koningii 13 metabolites, including four koninginins related to those biological activities observed were identified. From Fed-3, 10 substances were obtained, seven fixed and three volatile, including a novel manosil guaiane type sesquiterpene and the new, as natural substances, 3-Hydroxy-5-phenylmethyl- (3S,5R)-b10-O-tetrahydrofuran-2-one and chloroacetonitrile. The chloroacetonitrile was suggested as the active principle of the Fed s volatiles. This work was important to reveal the diversity of the endophytes from Brasilian M. paniculata, the high variability of their more frequent genera, two possible novel species and the potential of them to produce bioactive and new metabolites. This work is hoped to contribute for understanding the endophytic microorganism biodiversity as well as their chemical and biotechnological potential. / A planta Murraya paniculata é de origem asiática e em seu continente de origem foi isolado, das cascas das raízes, o alcalóide yuehchukeno que apresenta atividade anticoncepcional e hormonal. Em espécimes brasileiros nenhum alcalóide foi detectado, o que inspirou novas pesquisas envolvendo o estudo dos microrganismos que interagem com esta, incluindo o presente trabalho. Assim, foram isolados 1.711 microrganismos endofíticos de quatro hospedeiras, no estado de São Paulo, verificando-se os índices de colonização sazonal, a freqüência e a especificidade dos grupos identificados por tecidos (micro-habitat). Dos isolados, 1.061 eram fungos filamentosos e 650 eram bactérias, com freqüências de 62% e 38% e índices de colonização de 33% e 20%, respectivamente. Os menores índices de colonização foram observados para as bactérias em todas as coletas, principalmente nas folhas que apresentaram a maior freqüência para os fungos. Os fungos endofíticos foram classificados em 20 grupos morfológicos, 15 identificados ao nível de gênero e cinco desconhecidos, sendo dois Micelia sterilia. Os gêneros identificados foram Fusarium, Colletotrichum e seus telemorfos Giberella e Glomerella rescpectivamente, Trichoderma, Phomopsis, Paecilomyces, Penicillium, Aspergillus, Epicoccum, Pestalotiopsis, Alternaria, Xylaria, Nigrospora e Guignardia e os não identificados foram denominados como grupos A-E. Foi também detectada grande diversidade dentro dos gêneros mais freqüentes, pela morfologia e por marcadores moleculares. Foi verificada maior diversidade de gêneros de fungos no inverno (17) que na primavera (9). A população de fungos endofíticos foi menor no verão (44,7%) em contraste com o outono (77,7%). De uma amostragem de 59 isolados e seis controles foram extraídos os DNAs genômicos e seqüenciadas as regiões ITS-1. Para a linhagem indeterminada B (Fed) foi sequenciada a região 5,8s e a ITS-2. Foram identificadas 21 espécies pela região ITS-1 e detectadas duas possíveis espécies novas: uma de Trichoderma e o Fed cujos estudos morfológicos e quimiotaxonômicos apóiam esta hipótese. Os Trichoderma associados a M. paniculata foram isolados principalmente das cascas e apresentaram 9 espécies, sendo uma indeterminada. Foi também avaliado o potencial para produção de substâncias bioativas de endófitos. Os grupos mais promissores para a produção de substâncias extracelulares foram os dos fungos Penicillium com ação bactericida e anti-protozoária, Pestalotiopsis candicida e Trichoderma fungicida e bactericida. Fed com substâncias intracelulares de forte ação bactericida e de voláteis fungicidas. Buscou-se ainda o isolamento dos princípios ativos tendo sido isolados de Penicillium citrinum a citrinina e um alcalóide indeterminado, de Trichoderma koningii 13 substâncias, das quais quatro koningininas relacionadas às atividades biológicas detectadas. De Fed-3 foram identificadas 10 substâncias, sete fixas e três voláteis, incluindo um sesquiterpeno guaiano manosilado inédito e as substâncias 3-Hidróxi- 5-fenilmetil-(3S,5R)-b10-O-tetrahidrofuran-2-ona e cloroacetonitrila, isoladas pela primeira vez de fonte natural. A esta última é sugerida a ação fungicida dos voláteis. Esta pesquisa foi oportuna ao revelar a diversidade de microrganismos associados à hospedeira, a alta variabilidade entre e dentre os gêneros, incluindo duas possíveis novas espécies, e o potencial na produção de moléculas bioativas e inéditas. Espera-se ter contribuído para o conhecimento da biodiversidade dos microrganismos endofíticos e do potencial químico e biotecnológicos que eles representam.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5859.pdf: 8428715 bytes, checksum: 1818210d95744ce8daf3a59dda0bf966 (MD5) Previous issue date: 2014-03-21 / Financiadora de Estudos e Projetos / Marine microorganisms are living beings with extraordinary abilities, once they have developed physiological and metabolic capabilities that allow them to survive in an environment filled with adverse conditions, such as high pressure, excessive salinity and extreme temperatures. Thus, these living beings have great potential for the production of metabolites which normally cannot be produced by soil bacteria. The overall objective of this study was to elucidate the metabolite profile of the bacterium Streptomyces cebimarensis SS99BA-2 isolated from marine sediment in São Sebastião, a city located in the northern coast of São Paulo State, using the LC-SPE/NMR hyphenated technology. Ethyl acetate and butanol extracts of bacterial fermentation broths showed, respectively, biological activity against Escherichia coli and Candida albicans, and cytotoxic activity against tumour cells SF-295 (central nervous system). The optimization of the chromatographic conditions, together with the optimization of parameters for SPE retention, and for NMR acquisition and processing, led to the identification of at least eight known substances. This strategy did not require bench isolation methods, from very small amounts, approximately 3 mg, of crude extracts and permited to identify: maltol, 5-hydroximaltol, 4-hydroxibenzoic acid, N-acetyltyramine, isomaltol, 3-(N)-propanesulfonic acid, dehydroxinocardamine and nocardamine. In addition, six new compounds were isolated, including four belonging to a rare class of pyrazin-2(1H)-onic secondary metabolites named: giovaninone A, giovaninone B, giovaninone C and giovaninone D, and two belonging to an extremely cytotoxic class of antitumor phosphated polyketides: thomasicine A and thomasicine B. The results show that the LC-SPE/NMR coupling technology is extremely useful in the natural products field, since organic compounds can be identified in a rapid, safe and reproductible way. Moreover, it can be observed that the chemistry of marine microorganisms is still very little explored and reveal a promising field in the obtaining of potential candidates for pharmaceuticals, since these organisms are able to be cultivated in large scale through the use of bioreactors. / Micro-organismos marinhos são seres com habilidades extraordinárias, uma vez que apresentam características fisiológicas e metabólicas que lhes permitem sobreviver num ambiente repleto de condições adversas, como alta pressão, salinidade excessiva e temperaturas extremas. Muitos deles também apresentam um grande potencial para a produção de metabólitos que normalmente não podem ser produzidos por bactérias terrestres. Diante disso, o objetivo geral do presente estudo foi elucidar o perfil metabólico de uma linhagem de bactéria isolada de sedimento marinho em São Sebastião, litoral norte do estado de São Paulo, Streptomyces cebimarensis SS99BA-2, utilizando a técnica hifenada LC-SPE/NMR. Extratos de acetato de etila e butanólicos dos caldos fermentativos dessa bactéria apresentaram, respectivamente, atividade biológica contra Escherichia coli e Candida albicans e atividade citotóxica contra células tumorais SF-295 (sistema nervoso central). A otimização da separação cromatográfica, somada à otimização dos parâmetros de retenção por SPE e de aquisição e processamento de RMN, levou à identificação de pelo menos oito substâncias conhecidas sem a necessidade de isolamento de bancada a partir de quantidades muito pequenas, aproximadamente 3 mg, de extratos brutos: maltol, 5-hidróximaltol, ácido 4-hidróxibenzóico, isomaltol, N-acetiltiramina, ácido 3-(N-morfolino)-propanossulfónico, dehidróxinocardamine e nocardamine, além de seis compostos inéditos na literatura, sendo quatro pertencentes à uma classe rara de metabólitos secundários pirazin-2(1H)-ônicos: giovaninona A, giovaninona B, giovaninona C e giovaninona D e dois pertencentes à uma classe de policetídeos fosfatados antitumorais com potencial citotóxico: thomasicina A e thomasicina B. Os resultados mostram que a técnica hifenada LC-SPE/NMR é extremamente valiosa na área de produtos naturais, uma vez que substâncias orgânicas podem ser identificadas de forma rápida, segura e reprodutível. Além disso, verifica-se que a química de micro-organismos marinhos ainda é muito pouco explorada e revela um campo promissor na obtenção de possíveis candidatos a fármacos, uma vez que esses organismos são passíveis de cultivos em larga escala através do uso de bioreatores.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2027.pdf: 10143285 bytes, checksum: fd172e3d0d0149c5a14f335d7f813025 (MD5) Previous issue date: 2008-02-14 / Financiadora de Estudos e Projetos / This work describes the use of the high performance liquid cromatography (HPLC) technic coupled to the mass spectrometry technique for the analysis of fungal extracts, and the main purpose was the detection of meroterpens produced by P. Brasilianum. The fungal species P. Brasilianum was cultivated in a variety of artificial culture media: rice, wheat, maize, rice broth, solid decanted from rice broth and liquid medium Czapeck. In all the culture media tested the fungus presented a very good development, and also, the ions related to the meroterpens in study were detected in all the fungal extracts produced by these cultivations, except in Czapeck medium. The atmospheric pressure chemical ionization (APCI) was compared to the electrospray ionization, for the meroterpens analysis, and the result obtained was a great increase in detection power for this class of compounds, with the use of APCI. The P. brasilianum fungus was cultivated in Czapeck medium in the presence of Pinus taeda resin, alizarin, oleanolic, benzoic, salicylic, 2,5-dihydroxybenzoic, 2,6-dihydroxy-4-methyl-benzoic, 3,5-dinitrosalicylic, 3,5-dinitrobenzoic and ferulic acids, and 2 ,4 ,6 -trihydroxyacetophenone. The presence of these exogenous aditives modified the fungal metabolic profile, because the cromatographic profiles of the extracts produced showed a differentiation, in comparation to the fungal extract without aditive. Only the fungal extract produced in the presence of ferulic acid presented the meroterpens PSP-3 and PSP-8. The fungal extracts produced without any aditive also did not present meroterpens. / Este trabalho descreve o uso da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) acoplada com a técnica de espectrometria de massas para análise de extratos fúngicos, visando principalmente a detecção de meroterpenos, produzidos por P. brasilianum. A espécie fúngica P. brasilianum foi cultivada em diversos meios de cultura artificiais: arroz, trigo, milho, caldo de arroz, filtrado do caldo de arroz e meio líquido Czapeck. Em todos os meios de cultivo testados o fungo apresentou um ótimo crescimento, e também, em todos os extratos fúngicos produzidos através destes cultivos foram detectados íons relacionados aos meroterpenos de interesse, exceto no meio Czapeck. A técnica de ionização química a pressão atmosférica (APCI) foi comparada com a de electrospray, para a análise destes meroterpenos, e o resultado obtido foi um aumento significativo no poder de detecção desta classe de compostos com o uso de APCI. O fungo P. brasilianum foi cultivado em meio Czapeck, na presença de resina de Pinus taeda, alizarina, ácidos oleanólico, benzóico, salicílico, 2,5-dihidroxibenzóico, 2,6-dihidroxi-4-metilbenzóico, 3,5-dinitrosalicílico, 3,5-dinitrobenzóico e ferúlico, e a 2 ,4 ,6 -trihidroxiacetofenona. A presença destes aditivos exógenos modificou o perfil metabólico do fungo, pois os perfis cromatográficos dos extratos produzidos se diferenciaram em relação ao extrato fúngico sem nenhum aditivo. Somente o extrato fúngico produzido na presença de ácido ferúlico apresentou os meroterpenos PSP-3 e PSP-8. Os extratos fúngicos produzidos na ausência de aditivos também não apresentaram meroterpenos.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2881.pdf: 3532657 bytes, checksum: 5670ee3071139d4a77feaf760225b2f8 (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Universidade Federal de Minas Gerais / Studies about interaction between microorganisms and plants are focused mainly in the vegetal tissues like roots, steam and leaves. Fruits are a right target for microorganism attacks. Nevertheless, endophytic microorganisms isolated from fruits, seems to be not so explored in chemical point of view. Thus, in this work, it was developed the chemical study about the metabolism referred to endophytic microorganisms from edible fruits, commonly consumed in Brazil: banana, pear, apple and guava fruit. Through HPLC/UV analysis, it were realized and compared, the isolated microorganisms metabolic development, in different media cultures. It was included the media with the proper host fruits. The indolic alkaloid n-acetiltryptamine was isolated from a extract of the bacteria associated to the pear fruit (BP1). From the extracts of guava fruit endophytic fungus, Cladosporium uredinicola (FG1), it were isolated four new depsides in literature: 3-hidroxi-2,5-dimetilfenil 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoate (D1), 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenil 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoate(D2), 3-hidroxi-2,5- dimetilfenil 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi-2,4-dimetilbenzoate (D3) e 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenil 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6- hidroxi-2,4-dimetilbenzoate (D4). The identification of these metabolites was performed according to the respective data from RMN 1 D and 2D, and MS of high and low resolution. It was checked the MIC intervals of D1, D3 and D4 against five tested bacteria. It was realized the bactericide activity of D1 in a concentration of 25&#956;g/mL against Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis. It was also verified the photosynthesis inhibitory activity of depsides D1 and D3 produced by the fungus. The fungus C.uredinicola, showed a great depsides production ability. However, this production showed signifcants alterations when fenolic substrates were given to the fungus, in a usual culture media. The estimative of D3 and D4 production curve was also established. The LC-MS/MS technique use, allowed the selective depsides D3 and D4 detection in guava fruit extract, in low concentration ranges. / Estudos envolvendo a interação entre micro-organismos e plantas enfocam predominantemente tecidos vegetais como raízes, caules e folhas. Embora os frutos sejam alvos fáceis de ataques microbianos, micro-organismos endofíticos de frutos parecem não ser tão explorados do ponto de vista químico. Sendo assim, neste trabalho, buscou-se enfatizar o estudo químico do metabolismo referente à microbiota endofítica de frutos comestíves popularmente consumidos no Brasil, a banana, a pêra, a maçã e a goiaba. Através de análises por HPLC/UV, foram verificados e comparados os desenvolvimentos metabólicos, em diferentes meios de cultura, dos micro-organismos isolados, incluindo àqueles constituídos com as próprias frutas hospedeiras. Foi isolado o alcalóide indólico Nacetiltriptamina a partir de um extrato da bactéria associada à pêra (BP1). Dos extratos do fungo Cladosporium uredinicola (FG1), associado à goiaba, foram isolados quatro novos depsídeos na literatura: 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,5- dimetilfenila (D1), 2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenila (D2), 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi-2,4-dimetilbenzoato de 3- hidroxi-2,5-dimetilfenila (D3) e 3-[(2,4-diidroxi-3,6-dimetilbenzoatoil)oxi]-6-hidroxi- 2,4-dimetilbenzoato de 3-hidroxi-2,4,5-trimetilfenila (D4). A identificação destes metabólitos foi realizada de acordo com os respectivos dados de RMN 1 D e 2D e EM de alta e baixa resolução. Foram verificados os intervalos de MIC para D1, D3 e D4, frente a cinco bactérias testadas, destacando-se a atividade bactericida de D1, a 25&#956;g/mL, contra Pseudomonas aeruginosa e Bacillus subtilis. Verificou-se também a atividade inibitória da fotossíntese de D1 e D3. Contudo, o fungo C.uredinicola, mostrou-se como um potente produtor de depsídeos. Esta produção mostrou significativas alterações quando compostos fenólicos foram administrados ao fungo junto ao meio de cultura usual de crescimento. Foi também estabelecida a estimativa da curva de produção para os metabólitos D3 e D4 produzidos pelo fungo. A utilização da técnica LC-MS/MS permitiu a detecção seletiva dos depsídeos D3 e D4 em extrato da fruta goiaba em baixas faixas de concentração.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, Programa de Pós-Graduação em Ciências Florestais, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-08-28T22:13:37Z No. of bitstreams: 1 2018_MarceloFontanadaSilveira.pdf: 3385271 bytes, checksum: b191ac30caef53d7fbe3dcc38e016154 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-09-04T22:14:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_MarceloFontanadaSilveira.pdf: 3385271 bytes, checksum: b191ac30caef53d7fbe3dcc38e016154 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T22:14:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_MarceloFontanadaSilveira.pdf: 3385271 bytes, checksum: b191ac30caef53d7fbe3dcc38e016154 (MD5) Previous issue date: 2018-08-28 / Este trabalho avaliou a influência dos metabólitos secundários das espécies de madeiras da Caatinga Pterodon abruptus, Diptychandra aurantiaca, Terminalia fagifolia, Machaerium acutifolium e Aspidosperma multiflorum, na resistência ao ataque de quatro fungos apodrecedores: Trametes versicolor, Pycnoporus sanguineus, Gloeophyllum trabeum e Gloeophyllum striatum. As espécies de madeira foram submetidas ao ensaio de apodrecimento acelerado em laboratório de acordo com ASTM D 2017/05. Em relação ao ataque dos quatro fungos, as espécies Pterodon abruptus e Diptychandra aurantiaca foram classificadas como altamente resistentes e a espécie Machaerium acutifolium foi classificada como resistente. Terminalia fagifolia foi classificada como altamente resistente aos fungos P. sanguineus, G. trabeum e G. striatum, e resistente ao T. versicolor. Aspidosperma multiflorum foi resistente aos fungos de podridão branca e moderadamente resistente aos fungos de podridão parda. De cada espécie madeireira foram obtidos metabólitos secundários pela maceração com metanol, seguida da separação em quatro extratos em razão da polaridade dos solventes utilizados: nhexano, diclorometano, acetato de etila e 1-butanol. Esses extratos foram utilizados para avaliar seu potencial antifúngico em testes de inibição por difusão em placas de Petri. Este teste apresentou resultados semelhantes ao alcançados nos testes de apodrecimento acelerado para todas as espécies, com exceção da T. fagifolia. Quanto aos metabólitos secundários, os compostos presentes no extrato metanólico bruto e extrato hexânico apresentaram maior atividade antifúngica. O estudo se mostrou útil para avaliação de metabólitos secundários com potencial antifúngico em cada um dos extratos de diferentes polaridades. / This work evaluated the influence of secondary metabolites of the Caatinga wood species Pterodon abruptus, Diptychandra aurantiaca, Terminalia fagifolia, Machaerium acutifolium and Aspidosperma multiflorum, on the resistance against four wood decaying fungi Trametes versicolor, Pycnoporus sanguineus, Gloeophyllum trabeum and Gloeophyllum striatum. The wood species were submitted to the laboratory accelerated rotting test in accordance with ASTM D 2017/05. In relation to the attack of the four wood decaying fungi, the species Pterodon abruptus and Diptychandra aurantiaca were classified as highly resistant and the specie Machaerium acutifolium was classified as resistant. Terminalia fagifolia was classified as highly resistant to fungi P. sanguineus, G. trabeum and G. striatum, and resistant to T. versicolor. Aspidosperma multiflorum was resistant to white rot fungi and moderately resistant to brown rot fungi. From each species, secondary metabolites were obtained by maceration in methanol, followed by separation in four extracts due to the polarity of the solvents used: nhexane, dichloromethane, ethyl acetate and 1-butanol. These extracts were used to evaluate their antifungal potential on Petri dishes diffusion inhibition tests. This test presented similar results to those obtained in laboratory accelerated rotting test for all species, except for T. fagifolia. For the secondary metabolites, the compounds present in the crude methanolic extract and hexane extract presented higher antifungal activity. The test proved to be useful for the evaluation of secondary metabolites in each one of separated extracts with antifungal potential.

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências Ambientais da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Ciências Ambientais. / Calea L. é um gênero pertencente à família Asteraceae, tribo Heliantheae Cass., subtribo Melampodiinae Less., que contém aproximadamente 125 espécies, muitas delas encontradas no Brasil. Vários compostos químicos já foram isolados de espécies deste gênero e alguns destes compostos apresentam atividades biológicas. Destaca-se a ocorrência de lactonas sesquiterpênicas em várias espécies. As atividades biológicas relatadas para este gênero são: leishmanicida, tripanocida, antitumoral, anti-hipertensiva, antifúngica, anti-inflamatória, entre outras. Calea pinnatifida (R. Br.) Less., conhecida popularmente como “quebra-tudo”, “cipó-cruz” e “aruca”, é uma planta utilizada na medicina popular para problemas digestivos, amebíase e giardíase. Alguns compostos já foram isolados de C. pinnatifida como cromenos, poliacetilenos e lactonas sesquiterpênicas. Tendo em vista a importância da espécie e seu uso na medicina popular, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a influência dos fatores ambientais na produção de metabólitos secundários desta espécie. Para tanto, as folhas de C. pinnatifida foram coletadas em duas altitudes diferentes, a 25 m e 800 m e em duas estações do ano, verão e inverno. Para avaliação do perfil cromatográfico, foram realizadas cromatografias em camada delgada e em camada delgada de alta eficiência. Foi realizada a análise do solo para ambas altitudes na coleta de fevereiro/2016. O perfil cromatográfico da coleta do verão apresentou variações qualitativas como presença e ausência de compostos químicos e variações em suas concentrações, comparando as duas altitudes. O perfil cromatográfico da coleta do inverno apresentou variações qualitativas como ausência e presença de compostos químicos em ambas altitudes e quantitativas determinadas estatisticamente. A análise do solo apresentou variações significativas nos macronutrientes fósforo, potássio e magnésio e nos micronutrientes cobre, zinco, ferro e manganês. Portanto, pode-se concluir que fatores como altitude, nutrientes do solo, temperatura e radiação solar influenciam o perfil de metabólitos secundários de C. pinnatifida.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / There are several factors that affect the productive potential of crops, among them the incidence of weeds. Chemical control is the predominant method used for weed control because it is more efficient, but when used incorrectly, leaves serious consequences to living and the environment. The use of metabolites produced by fungi with potential herbicide is presented as a good alternative to reduce impacts of synthetic herbicides to the environment. For this, the optimization of production is needed to ensure the viability of the process. The objective of this work was to produce a herbicide by submerged fermentation with effect on the species of Cucumis sativus var. visconsin (cucumber) and Sorghum bicolor (sorghum) and to carry out the chemical characterization of the compounds present in the fermentation broth by gas chromatography. This study was conducted in bioprocess laboratory and in a greenhouse at the Federal University of Santa Maria. The preparation of the pre-inoculum with Phoma sp. was performed by cultivation on shaker under orbital agitation of 120 rpm and 28°C for 5 days. The variables studied in the submerged stirred thank bioreactor were stirring rate (40, 50, and 60 rpm) and aeration (1, 2 and 3 L.min-1 ) for 7 days, when biomass was separated and . After every seven days, was performed to separate the biomass and the fermentation broth containing the phytotoxin. To assess the potential herbicidal some the bioassays used to determine the effectiveness of bioherbicide were tests in pre-emergence, post-emergence and in a detached leaves of Cucumis sativus var species. wisconsin (cucumber) and Sorghum bicolor (sorghum). The results of the bioassays indicate that metabolites produced by Phoma sp. have herbicidal effect on the studied species. The greatest potential herbicide found in both trials was in T3 for the species Cucumis sativus and T4 for Sorghum bicolor. The bioherbicide showed showed 100% inhibition of germination of both species in the pre-emergence tests. From detached leaves tests was verified yellowish lesions in Cucumis sativus and necrotic lesions on leaves of Sorghum bicolor. For the post-emergence test, it was observed a variation of the phytotoxicity from 25 to 66% for the species Cucumis sativus and from 32 to 58% by Sorghum bicolor. The evaluation of plant height, green dry and matter mass there was little difference among the treatments, but it was essential for selecting the best treatment. The application of secondary metabolites produced by submerged fermentation of Phoma sp. present action herbicide pre-emergence, post-emergence and detached leaves of Cucumis sativus and Sorghum bicolor and can become alternative in the future for weed control. / Existem diversos fatores que interferem no potencial produtivo das culturas agrícolas, dentre eles, destaca-se a incidência de plantas daninhas em meio aos cultivos. Entre os métodos de controle disponíveis, predomina o controle químico por ser mais eficiente, porém quando utilizados de maneira incorreta, traz consequências graves aos seres vivos e ao meio ambiente. O uso de metabólitos produzidos por fungos com potencial herbicida, apresenta-se como uma boa alternativa para redução dos impactos causados pelos herbicidas sintéticos ao meio ambiente. Para isso, a otimização de sua produção é indispensável para garantir a viabilidade do processo. O objetivo desse trabalho foi produzir um herbicida por fermentação submersa com efeito sobre as espécies de Cucumis sativus var. wisconsin (pepino) e Sorghum bicolor (sorgo) e caracterização química dos compostos presentes no meio fermentado, por cromatografia gasosa. O presente trabalho foi conduzido no Laboratório de Bioprocessos e em casa de vegetação da Universidade Federal de Santa Maria. O preparo do pré-inoculo com Phoma sp. foi realizado através de cultivo em Shaker sob agitação de 120 rpm e 28°C, durante 5 dias, foram otimizadas as condições de agitação (40, 50 e 60 rpm) e aeração (1, 2 e 3 L.min-1) em biorreator para fermentação submersa, sendo que após cada fermentação de sete dias, era realizada a separação da biomassa do caldo fermentado contendo a fitotoxina. Para a avaliação do potencial herbicida foram realizados alguns bioensaios, como testes em pré-emergência, pós-emergência e em folha destacada com as espécies Cucumis sativus var. wisconsin (pepino) e Sorghum bicolor (sorgo). Os resultados encontrados nos bioensaios, indicam que os metabólitos produzidos por Phoma sp. possuem efeito herbicida sobre as espécies avaliadas. O maior potencial herbicida encontrado em ambos os ensaios realizados, foi no T3 para a espécie Cucumis sativus e T4 para Sorghum bicolor, sendo que no teste de germinação todos os tratamentos, com exceção da testemunha apresentaram inibição de 100% da germinação de ambas as espécies, já no teste em folhas destacadas, a maioria dos tratamentos provocaram lesões amareladas em Cucumis sativus ou lesões necrosadas em folhas de Sorghum bicolor. Para o teste em pós-emergência, foram observados uma variação da fitotoxidade de 25 a 66%, para a espécie de Cucumis sativus e de 32 a 58% em Sorghum bicolor. Já para a avaliação de altura de plantas, MV e MS, houve pouca diferença entre os tratamentos avaliados, porém estas características foram indispensáveis para a seleção do melhor tratamento. A aplicação dos metabólitos secundários produzidos por fermentação submersa de Phoma sp. apresentam ação herbicida em pré-emergência, pós-emergência e em folhas destacadas de Cucumis sativus e Sorghum bicolor, podendo tornar-se uma alternativa no futuro para o controle de plantas daninhas.