Orientador: Dagmar Ruth Stach-Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T14:02:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_JulieteAparecidaFranciscoda_M.pdf: 1928631 bytes, checksum: b86edaf3408398f4a27c1c24171c8108 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A doença periodontal é caracterizada como um grupo de lesões que afetam os tecidos que rodeiam e suportam os dentes nos seus alvéolos. A placa bacteriana é seu agente etiológico principal, todavia inúmeras evidências sugerem que a doença periodontal não está simplesmente associada à colonização da cavidade oral por microrganismos patogênicos, mas à susceptibilidade ou resistência do hospedeiro, uma vez que, dependendo da resposta imune mediada a estes microrganismos poderá resultar ou não na destruição do tecido periodontal. Nos tecidos periodontais saudáveis, há um delicado equilíbrio entre os microrganismos encontrados na placa e a resposta do hospedeiro. Embora a resposta seja essencialmente protetora é influenciada por diversos fatores que podem gerar uma resposta imune exacerbada e deste modo, contribui para o agravamento das lesões e cronificação da doença periodontal. Entre os fatores de risco está o Diabetes Mellitus, caracterizado pela ineficiência na produção ou utilização inadequada de insulina pelo organismo, afetando o metabolismo de proteínas, carboidratos e gordura, resultando em severas desordens metabólicas. O objetivo inicial deste trabalho foi estudar o desenvolvimento da doença periodontal experimental em ratos sob influência do diabetes induzido por estreptozotocina (STZ), caracterizando as alterações morfológicas encontradas no tecido epitelial e conjuntivo, uma vez que, indivíduos diabéticos apresentam um retardo na capacidade de cicatrização. Os resultados obtidos confirmaram que os animais diabéticos tiveram cronificação da resposta inflamatória com aumento de células inflamatórias no tecido do periodonto, degradação maior e mais rápida de fibras colágenas, que levou ao acúmulo de fibras colágenas densas, aumentou aparentemente a quantidade de fibroblastos, aumentou a degradação de fibras reticulares que sustentam a membrana da basal, houve involução das papilas dérmicas e aumento da camada córnea. Uma vez que, nos animais diabéticos o processo fibrótico foi mais acentuado com o avanço da inflamação afetando a organização estrutural do tecido epitelial e conjuntivo, provavelmente devido ao aumento da degradação da matriz extracelular. Deste modo, efetuamos a avaliação das MMP2 e 9, também denominadas gelatinases, as quais entre outras atividades biológicas atuam na degradação proteolítica da matriz extracelular. Os resultados obtidos na quantificação da atividade enzimática das MMPs por zimografia mostrou que,a expressão das isoformas de MMP 2 foram significativamente menores nos animais diabéticos quando comparados aos animais normais durante todo decorrer do tempo experimental. Todavia, a atividade enzimática da MMP9 foi maior nos animais diabéticos. Estes dados foram confirmados pela imunofluorescência, uma vez que a MMP2 em animais normais foi expressa em vários tipos celulares como as células basais do epitélio, endotélio dos vasos, no tecido conjuntivo e algumas regiões entre fibras musculares. Todavia, em animais diabéticos sua expressão esteve mais limitada às células do epitélio e do tecido conjuntivo. Enquanto que, a expressão da MMP9 é mais evidente nos animais diabéticos. Entretanto, a análise da expressão da MMP2 por PCR quantitativo mostrou não haver diferença significativa entre os animais diabéticos e normais, todavia a expressão gênica da MMP9 apresentou expressão inversamente proporcional. Nos animais normais a sua expressão foi mínima na ausência do estimulo inflamatório e apresentou aumento no decorrer dos tempos experimentais. No animal diabético ocorreu o contrário, uma vez que, na ausência do estimulo inflamatório o nível de expressão da MMP9 foi elevado e durante a resposta inflamatória houve diminuição significativa da sua expressão. Estes dados sugerem que as MMP2 e MMP9 podem estar envolvidas na dinâmica da resposta do tecido periodontal atuando na degradação da matriz extracelular e resultam em diferentes padrões de fibrose nos animais normais e diabéticos / Abstract: The periodontal disease is characterized as a group of lesions that affect the tissues which surround and support the teeth in their correct places. The bacterial plaque is the major ethiological agent, and most evidences suggest the periodontal disease is not simply associated with oral cavity colonization by pathogenic microorganisms, but to host susceptibility or resistance to the disease, once that, the destruction of periodontal tissue can occur depending on the immune response activated by these microorganisms. In health periodontal tissues there is a slightly equilibrium between bacterial plaque microorganisms and host response. Although the immune response is essentially protective, ir s influenced by some factors which can develop an exacerbated immune response, and in this way, contributing to appearance of worse lesions and a periodontal disease more severe. The Diabetes Mellitus is one of many risk factors and is characterized by inefficient production of insulin or its inadequate utilization by the individual, affecting the protein, carbohydrate and lipids metabolisms, resulting in severe metabolic disorders. The aim of this project was to study the development of experimental periodontal disease in rats under influence of diabetes induced by streptozotocin (STZ), characterizing the morphological changes found in epithelial and connective tissues, considering that patients affected by this disease shows a delay in the healing capacities. Our results confirmed that the diabetic animaIs presented a chronic inflammatory response with an increase of inflammatory cells in the periodontal tissues, and higher and faster collagen fibers degradation occurred, causing their accumulation. Moreover, the amount of fibroblasts raised, the reticulin fibers that support the basal membrane were more destroyed, and finally there was an involution in dermic papillas and a comium layer thicker. In the diabetic animaIs, the fibrosis was more emphasized with the inflammation progression, affecting the structural organization of epithelial and connective tissues, probably due to the increase in extracellular matrix degradation. In this way, we evaluated the MMP 2 and 9, called gelatinases, which has a proteolytic activity in the extracellular matrix. The MMPs enzymatic activity quantification by zymography showed that, the MMP2 isoform expressions was significantly lower in diabetic animaIs when compared to controls, during alI the experimental time. However, the MMP9 enzymatic activity was higher in diabetic animaIs. These data were confirmed by immunoflorescence, because MMP2 in controls was expressed in more than one cellular type such as basal epithelial cells, endothelium cells, Cl»)J)ecÚve tjssues and some regions between musc1e fibers. Otherwise, in diabetic animaIs, its expression was limited to epithelial cells and connective tissue. The MMP2 expression in quantitative PCR showed no significant differences between diabetic and control animaIs, while MMP9 presented a genic expression inversely proportional. In controls, the MMP9 expression was minimal in lack of inflammatory stimulation and showed an increase during the experimental time. Otherwise, in the diabetic animaIs the MMP9 expression was higher, and during the inflammatory response, its expression decreased. These data suggest that MMP2 and MMP9 can be involved in dynamics of periodontal tissue response, acting in the extracellular matrix and resulting in different pattems of fibrosis in control and diabetic animaIs / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_luiz_eduardo_rilling_nova_cruz.pdf: 941247 bytes, checksum: b51c3277dc5892c9cf7c0ddc659e85c4 (MD5) Previous issue date: 2010-06-01 / The objective of the present study was the immunohistochemical evaluation of the proportion of mononuclear cells and the expression of MMP-2 and 9 on chronic periodontitis between smokers and non-smokers. From the 127 patients examined 31(16 non-smokers and 15 smokers) fulfill the inclusion criteria were included in the study. These patients underwent surgical procedures and 31 biopsies were collected and divided in two parts, one for histological preparation and the other for zymography. Each sample was histologically processed and exposed to monoclonal antibodies for B cells (anti-CD20), memory T cells (anti-CD45RO) and macrophages or monocytes (anti-CD68) detection. The samples showed a similar pattern, with connective tissue rich in inflammatory cells. The histometric analysis showed that the total amount of mononuclear inflammatory cells labeled did not differ significantly between smokers and non-smokers (p> 0.05). Evaluating each cell type separately, significant differences were not detected between groups (p> 0.05). When stratifying the samples into regions (coronal, middle and apical third) to evaluate the presence of individual cell types in each region significant differences between the groups were not detected (p> 0.05). The zymography of the samples suggested that the expression of MMP-2 and 9 showed no statistically significant differences between the two groups (p> 0.05). Thus, within the limits of this study, we can conclude that sites with chronic periodontitis in smokers and non-smokers did not differ in the amount of mononuclear inflammatory cells and in the expression of MMPs 2 and 9. / O estudo teve como objetivo a avaliação imunoistoquímica da proporção de células mononucleares e da expressão zimográfica da MMP-2 e 9 na periodontite crônica em fumantes e não-fumantes. Foram examinados 127 pacientes dos quais 31 preencheram os critérios de inclusão e foram inseridos no estudo, sendo 16 não-fumantes e 15 fumantes. Estes pacientes foram operados e 31 biópsias foram coletadas de área interproximal de dentes com bolsa periodontal >5mm e divididas longitudinalmente em duas partes, uma para análise histológica e outra para zimografia. As amostras foram processadas histologicamente e expostas aos anticorpos monoclonais para células B (anti-CD20), células T de memória (anti-CD45RO) e monócitos ou macrófagos (anti-CD68). De maneira geral, as amostras apresentaram padrão semelhante, com um tecido conjuntivo subjacente ao epitélio oral rico em células inflamatórias. A análise histométrica demonstrou que a quantidade total de células inflamatórias mononucleares marcadas não diferiu entre fumantes e não-fumantes (p>0,05). Ao avaliar cada tipo celular separadamente, também não foram detectadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos (p>0,05). Ao dividir as amostras em regiões (terço coronal, médio e apical) e avaliar a presença de cada tipo celular em cada uma das regiões também não foram detectadas diferenças estatísticas significantes entre os grupos (p>0,05). A avaliação das zimografias sugere que a expressão de MMP-2 e 9 não apresentaram diferenças estatisticamente significantes entre os dois grupos (p>0,05). Assim, dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que os sítios com periodontite crônica de fumantes e não-fumantes não diferem em relação à quantidade e localização de células inflamatórias mononucleares e na expressão de MMPs 2 e 9.

O objetivo desse estudo foi sintetizar e caracterizar um primer experimental contendo Nanopartículas (NLS) de Quitosana e avaliar algumas de suas propriedades. Foram utilizados 50 molares humanos os quais foram seccionados no sentido mesio-distal e oclusal. Esses foram polidos com lixas de diferentes granulações. Após foi realizada a síntese e caracterização de primers experimentais contendo nanopartículas de Quitosana. Os grupos experimentais foram determinados por um ensaio de atividade antimicrobiana e alocados da seguinte forma: 1) Sem aplicação de primer experimental, 2) Aplicação de um primer experimental contendo Clorexidina (CHX) 2% 3) Aplicação de um primer experimental de NLS Quitosana 2% 4) Aplicação de um primer experimental de NLS Quitosana 0,6% 5) Aplicação de um primer experimental de NLS Quitosana 0,4%. Os primers experimentais foram aplicados sobre a dentina sadia. Para a análise de Microtração, foi confeccionado um platô de resina composta Z350 (3M Dental Products, St, Paul, MN, EUA), onde foram realizadas secções para a confecção dos palitos. Foi realizada a caracterização dos primers experimentais por meio de espalhamento de luz dinâmica e o ensaio da atividade de MMPs por meio de Zimografia in situ. Para a analise de Microtração foi utilizada a análise de variância (ANOVA) \"one way\" (p=0,9054). Para a análise de Zimografia in situ foi utilizada ANOVA seguido do teste de Holm-Sidak (p<0,05). A caracterização das NLS de Quitosana demonstrou sua estabilidade em todos os tempos analisados. No ensaio de atividade antimicobriana foi observado concentração de 0,4% para CIM e 0,6% para CBM. Na Resistência a Microtração, não foi observada diferença estatística entre os grupos experimentais (p=0,9054). O ensaio de Zimografia in situ mostrou que o primer experimental contendo Quitosana 2% apresentou maior atividade de inativação de MMPs comparado com os demais grupos experimentais (p<0,05). O primer experimental contendo NLS de Quitosana possui atividade antimicrobiana, não altera a resistência adesiva e possui efeito de inativação de MMPs presentes na dentina / The objective of this study was to synthesize and characterize an experimental primer containing Chitosan Nanoparticles (NLS) and to evaluate some of its properties. Fifity human molars were used which were sectioned mesio-distally and occlusally. These were polished with sandpaper of different granulations. After the synthesis and characterization of experimental primers containing chitosan nanoparticles were performed. The experimental groups were determined by an antimicrobial activity assay and were allocated as follows: 1) Without application of experimental primer 2) Application of an experimental primer containing Chlorhexidine (CHX) 2% 3) Application of an experimental primer of NLS Chitosan 2 % 4) Application of an experimental primer of NLS Chitosan 0.6% 5) Application of an experimental primer of NLS Chitosan 0.4%. The experimental primers were applied on the dentin sound. A composite resin plateau Z350 (3M Dental Products, St, Paul, MN, USA) was used for the analysis of Microtration, where sections were made for making the toothpicks. Characterization of the experimental primers was carried out by means of dynamic light scattering and the assay of MMP activity by means of Zimography in situ. The analysis of variance (ANOVA) \"one way\" (p = 0.9054) was used for the analysis of Microtraction. For the analysis of Zimography in situ was used ANOVA followed by the Holm-Sidak test (p <0.05). The characterization of the NLS of Chitosan demonstrated its stability at all times analyzed. In the antimycobrian activity assay, a concentration of 0.4% for MIC and 0.6% for CBM was observed. In the Microtensile Strength, no statistical difference was observed between the experimental groups (p = 0.9054). The in situ Zimography assay showed that the experimental primer containing Chitosan 2% presented higher inactivation activity of MMPs compared to the other experimental groups (p <0.05). The experimental primer containing Chitosan NLS has antimicrobial activity, does not alter the adhesive resistance and has an inactivation effect of MMPs present in dentin

As metaloproteinases são abundantes em venenos de serpentes. Estas enzimas são homólogas às de mamíferos, encontradas em níveis elevados em inflamações articulares. Neste estudo avaliou-se a capacidade da BaP1, induzir: i) a inflamação e incapacitação articulares e a participação do TNF-<font face=\"symbol\">a e PGE2 nesses efeitos e ii) a ativação de macrófagos em cultura e a natureza de sua interação com estas células. A BaP1 induziu aumento da permeabilidade vascular, liberação de TNF-<font face=\"symbol\">a, MMP-9 e PGE2 e acúmulo de leucócitos na cavidade articular e tecido sinovial. Ainda, induziu dor articular. O pré-tratamento dos animais com indometacina ou anti-TNF-<font face=\"symbol\">a reduziu a dor e o influxo leucocitário, induzidos pela BaP1. A BaP1 induziu a expressão de COX-2 e de TNF-<font face=\"symbol\">a e a liberação desta citocina, em macrófagos isolados. Nestas células detectou-se a internalização da BaP1. Em conclusão, a BaP1 induz inflamação e nocicepção articulares, dependentes de TNF-<font face=\"symbol\">a e PGE2. A COX-2 deve estar envolvida na liberação de PGE2 e os macrófagos são alvos importantes para as ações dessa metaloproteinase. / Metalloproteinases are major enzymes in snake venoms showing high grade of homology with mammal matrix metalloproteinases, present in high levels in inflamed joints. In this study we examined the ability of BaP1, to induce: i) inflammation and hypernociception in rat articular joints and participation of TNF-<font face=\"symbol\">a and PGE2 in these effects, and ii) activation of cultured macrophages. BaP1 increased vascular permeability, induced release of TNF-<font face=\"symbol\">a, PGE2 and pro-MMP-9 in joint cavities, and leucocyte influx into joint cavities and synovial tissues. Moreover, BaP1 induced articular hypernociception. Treatment of animals with indomethacin or antiserum anti-TNF-<font face=\"symbol\">a significantly reduced hypernociception and leukocyte influx induced by BaP1. Incubation of macrophages with BaP1 caused expression of TNF-<font face=\"symbol\">a and COX-2 as well as TNF-<font face=\"symbol\">a release. In conclusion, BaP1 induces inflammation and hypernociception in articular joints. These effects are dependent on PGE2 and TNF-<font face=\"symbol\">a. COX-2 may contribute for BaP1-induced PGE2 release and macrophages are key targets for BaP1 induced effects.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-18Bitstream added on 2014-06-13T18:41:15Z : No. of bitstreams: 1 pereira_ac_dr_sjc.pdf: 1357256 bytes, checksum: 54a1d7a83941d8216e3415116e38ca6e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Para que ocorra a invasão das células epiteliais neoplásicas é necessário o rompimento da membrana basal, sendo que este processo depende, em grande parte, da ação enzimática realizada pela metaloproteinase-9 (MMP-9). O objetivo deste trabalho foi testar a hipótese que variações no gene da MMP-9 influenciam as características clínicas e histopatológicas do carcinoma espinocelular. Noventa e quatro camundongos hairless foram submetidos à carcinogênese química (DMBA 0,5%) induzida em pele, durante 16 semanas. Na 17ª semana, os animais foram sacrificados e as lesões fotografadas e avaliadas clinicamente (com relação ao tamanho e à presença de ulceração). As lesões foram então biopsiadas e fixadas em formaldeído 10%, para posterior avaliação histopatológica (padrão de invasão, estágio de invasão e diferenciação celular). No momento da biópsia, foi retirado 0,5 cm da cauda de cada animal, para extração do DNA e avaliação da presença de polimorfismos de repetição CA no promotor do gene da MMP-9. Foi utilizado o teste qui-quadrado (p<0,05) para avaliar a associação dos alelos e dos genótipos com as características clínicas e histopatológicas. Verificou-se uma associação entre o alelo com 25 repetições e o grau moderado de diferenciação celular. Concluiu-se que a presença de maior número de repetições CA no gene da MMP-9 pode estar relacionada com a redução na diferenciação celular do carcinoma espinocelular induzido quimicamente na pele de camundongos hairless. / The metalloproteinase-9 (MMP-9) is an important enzyme during the basement membrane degradation, an essential step for cancer invasion. The aim of this study was to test the hypothesis that the CA repeat polymorphism in the MMP-9 gene promoter interferes on clinical and histopathological features of the squamous cell carcinoma. Ninety-four hairless mice were submitted to chemically induced skin carcinogenesis (DMBA 0,5%), once a week, during 16 weeks. At 17 th week, the animals were photographed and the lesions were clinically evaluated (for size and ulceration presence). Then, the lesions were biopsed and, after the routine laboratorial processing, the histopathological evaluation (stage of invasion, pattern of invasion and differentiation grade) was performed. At the biopsy, 0.5cm of each animal tail was collected for DNA extraction and evaluation of the CA repeat polymorphism in the MMP-9 gene promoter. The data was analyzed by chi-square test to evaluate whether the MMP-9 alleles or genotypes were associated with clinical and histopathological features. There was an association of the allele with 25 CA repeats with moderately differentiated lesions. The data suggest that the MMP-9 gene polymorphism is related to the reduction on histological differentiation in squamous cell carcinoma induced by DMBA in hairless mice skin.

Orientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Maria Luiza Nunes Mamede Rosa / Banca: Robson Frederico Cunha / Banca: Isabela Almeida Pordeus / Banca: Ronaldo Célio Mariano / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade das glândulas salivares, a mineralização dental e a participação da metaloproteinase de matriz (MMP-9) nesta mineralização em filhotes de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) tratadas ou não com atenolol. Ratas SHR e normotensas Wistar foram tratadas com atenolol (100mg/Kg/dia, via oral) durante os períodos de prenhez e lactação. Os grupos controle receberam o mesmo volume de água sem atenolol. O fluxo salivar, induzido por nitrato de pilocarpina, a concentração de proteínas (método de Lowry), a atividade da amilase (método cinético a 405 nm), o peso das glândulas salivares (parótidas, submandibulares e sublinguais), a microdureza do esmalte e da dentina de incisivos e molares e a expressão da MMP-9 (imonuperoxidase) no tecido dental foram comparados entre filhotes de ratas SHR e Wistar tratadas ou não com atenolol. Os resultados obtidos foram submetidos ao teste estatístico mais adequado, paramétrico (ANOVA ou test t de Student's) ou não paramétrico (Kruskal-Wallis), sendo consideradas significativas as diferenças quando p<0,05. Filhotes SHR apresentaram menor fluxo salivar e concentração de proteínas do que filhotes Wistar, mas a atividade da amilase não foi diferente entre os grupos. O peso das glândulas salivares foi semelhante entre filhotes SHR e Wistar...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of the present study was analyzed the salivary activity, the dental mineralization and the role of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) on this mineralization, in pups (30 days) of spontaneously hypertensive rats (SHR) treated, or not treated, with atenolol. Female SHR and normotensive Wistar rats were treated during pregnancy and lactation periods with Atenolol 100mg/Kg/day by oral administration. For the control group, the animals received the same water volume without the drug. The salivary flow rate (stimulated by pilocarpine injection), the protein concentration (Lowry method), salivary amylase activity (kinetic method at 405 nm), the weight of salivary glands (parotid, submandibular and sublingual), the enamel and dentin microhardness of incisors and molars teeth and the matrix metalloproteinase-9 (MMP-9, gelatinase B) localization (imunoperoxidase) in dental tissue were compared between SHR and Wistar pups of female rats treated or not with atenolol. The results were analyzed by parametric (ANOVA or Student’s tests) or non-parametric (Kruskal-Wallis) tests (p<0,05). The salivary flow rate and salivary protein concentration were reduced in SHR pups. There was no alteration in amylase activity between groups. The salivary glands’ weight was not different between SHR and Wistar pups either. Decreased enamel and dentin microhardness were observed in incisors and molar teeth of SHR pups. No alterations in MMP-9 positive staining were observed in predentin and odontoblasts of both groups, however the density of stained ameloblasts cells and external enamel surface were higher in incisors teeth of SHR pups. Atenolol-treated SHR and Wistar rats’ pups showed decrease in submandibular gland weight, in saliva’s flow rate and protein concentration, but no alteration in amylase activity. Atenolol increased enamel and dentin microhardness of incisors teeth of SHR and...(Complete abstract, click electronic address below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Embora a resistência ao anoikis seja considerada um importante processo envolvido no fenótipo maligno, a relação causal entre transformação neoplásica e crescimento independente de ancoragem continua indefinida. Para estudar essa correlação, foi desenvolvido em nosso laboratório um modelo experimental de transformação maligna de melanócitos murinos, em que melanócitos melan-a foram submetidos a ciclos seqüenciais de bloqueio de ancoragem. Ao longo deste processo, foram estabelecidas tanto linhagens celulares correspondendo a fases intermediárias da progressão tumoral como linhagens de melanoma, as quais são progressivamente resistentes ao anoikis e representam fases distintas da progressão tumoral. Análises de expressão gênica mostraram aumento da expressão de Timp1 nas linhagens de melanoma quando comparadas à linhagem parental de melanócitos. Ainda que descrita como inibidora de MMPs, essa proteína foi recentemente associada à resistência ao anoikis em células epiteliais de mama humana. Deste modo foram analisadas neste trabalho: 1) a relação entre expressão de Timp1 e aquisição do fenótipo resistente ao anoikis e 2) a possível regulação epigenética da expressão de Timp1 por metilação de DNA neste modelo. Enquanto células melan-a expressam baixos níveis de Timp1, todas as linhagens derivadas desta expressam níveis elevados desta proteína. O tratamento dos melanócitos melan-a com o agente desmetilante 5-aza-2’-deoxicitidina resultou em aumento significativo da expressão de Timp1. De fato, a análise pelo ensaio Methylation sensitive-Single Nucleotide Primer Extension (Ms-SNuPE) mostrou aumento progressivo na desmetilação do gene Timp1 em paralelo a sua crescente expressão ao longo da transformação maligna. A superexpressão de Timp1 em células melan-a resultou no aumento da sobrevivência das mesmas em condições independentes de ancoragem, mas foi incapaz de transformá-las. Além disso, o tempo de latência para o aparecimento de tumores foi menor para células de melanoma transfectadas com Timp1, indicando que esta molécula pode estar associada com a agressividade do tumor. Esses resultados mostram aumento da expressão de Timp1 durante a transformação maligna, em decorrência da desmetilação gênica progressiva, associado ao aumento da resistência ao anoikis, mas não à aquisição de um fenótipo maligno transformado. / Although anoikis resistance has been considered a hallmark of malignant phenotype, the causal relation between neoplastic transformation and anchorageindependent growth remains undefined. We developed an experimental model of murine melanocyte malignant transformation, where a murine melanocyte lineage (melan-a) was submitted to sequential cycles of substrate adhesion blockade. Cells corresponding to intermediate phases of tumor progression and melanoma cell lines were established and show progressive anoikis-resistance. Gene expression analysis showed up-regulation of Timp1 in all melan-a-derived lineages. Treatment with a demethylating agent resulted in marked expression of Timp1 in melan-a melanocytes. In fact, Ms-SNuPE analysis showed increased demethylation in Timp1 gene in parallel with its expression along malignant transformation. Although described as a MMP inhibitor, this protein has been recently associated with apoptosis resistance in human breast epithelial cells. Melan-a cells overexpressing the Timp1 gene showed increased survival in anchorage-independent conditions, but were unable to form tumors in vivo, whereas Timp1-overexpressing melanoma cells showed reduced latency time for tumor appearance. Our results show an increment in Timp1 expression along carcinogenesis, possibly associated to a progressive gene demethylation, which is causally related with an increase in anoikis-resistance but not with the acquisition, by itself, of a fully transformed malignant phenotype. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-17Bitstream added on 2014-06-13T18:57:06Z : No. of bitstreams: 1 aquino_sg_me_arafo.pdf: 704637 bytes, checksum: 57b6c6c83912b4a76a076f13dbd3ee7a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A progressão da doença periodontal é marcada pela excessiva produção de citocinas que, por sua vez, promove o aumento de outros mediadores inflamatórios, entre os quais, de metaloproteinases de matriz (MMPs). MMP-13 é uma colagenase de regulação complexa que tem sido relacionada à degradação da matriz extracelular (ECM) e à reabsorção óssea em diversas condições inflamatórias, incluindo doença periodontal e artrite reumatóide. A regulação da expressão gênica requer a ativação de várias vias de sinalização através da interação de receptores celulares específicos a estímulos externos, como antígenos bacterianos e citocinas derivadas do hospedeiro. A complexidade da rede de citocinas estabelecida durante a progressão da doença periodontal depende das vias de sinalização ativadas, as quais são influenciadas pela natureza do estímulo extracelular. Considerando o papel fundamental das vias de sinalização no controle da expressão gênica de citocinas e a relevante atividade de MMP-13 na doença periodontal, este estudo avaliou a expressão de MMP-13 e as vias de sinalização ativadas durante o curso de dois modelos de doença periodontal induzida experimentalmente. A expressão de MMP-13 nos níveis de RNA mensageiro (mRNA) e proteína foram avaliados por RT-PCR e Western Blot, respectivamente. A cinética de ativação das vias de sinalização intracelular relacionadas à expressão de mediadores inflamatórios também foi verificada por Western Blot. Estes achados foram relacionados à severidade da reação inflamatória determinada por estereometria. Dois modelos experimentais foram usados: injeção de LPS e colocação de ligadura. Injeções de LPS de Eschericia coli foram realizadas na região palatina de molares superiores 2 vezes por semana (30 μg por aplicação). Ligaduras foram colocadas na região cervical dos primeiros molares inferiores. / The hallmark of destructive periodontal disease progression is the overproduction of cytokines which promotes the increased expression of other inflammatory mediators such as, MMPs. MMP-13 is a collagenase of complex gene regulation that has been implicated on ECM degradation and bone resorption in several inflammatory conditions, including periodontal disease and rheumatoid arthritis. Regulation of gene expression requires the activation of several signaling pathways through receptor-ligand binding of external stimuli represented by bacterial antigens and/or host-derived cytokines. The complexity of the cytokine network established during periodontal disease progression results from the signaling pathways activated, which are determined by the nature of external stimuli. Thus, considering the fundamental role of signaling pathways on regulation of cytokine gene expression and the relevant role of MMP-13 in periodontal disease, this study evaluated the expression of MMP-13 and the signaling pathways activated during the course of two experimentallyinduced periodontal disease models. Expression of MMP-13 at mRNA and protein levels was evaluated by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western Blot, respectively. The activation kinetics of some signaling pathways that are related to the expression of inflammatory mediators was also verified by Western Blot. The two experimental models used were: LPS injections and placement of ligatures. Bi-weekly injections of Eschericia coli LPS were done into the palatal aspect of upper molars (30 μg per injection). Ligatures were placed at the cervical portion of both lower first molars. The control animals received injections of PBS vehicle on the palatal gingiva of upper molars, whereas no ligatures were placed on the lower molars.

Orientador: Adriana Aigotti Haberbeck Brandão / Co-orientador: Ana Sueli Rodrigues Cavalcante / Banca: Ana Lia Anbinder / Banca: Camila Porto de Deco / Banca : Estela Kaminagakura Tango / Banca : Márcia Sampaio Campos / Resumo: Desordens orais potencialmente malignas como a Queilite Actínica (QA) e neoplasias malignas como os Carcinomas Epidermoides (CE) apresentam comportamentos biológicos variáveis em função de diversos fatores teciduais que levam a desregulação do metabolismo celular. As Metaloproteinases de Matriz (MMP), endopeptidases responsáveis pela degradação dos componentes da matriz extracelular, podem estar relacionadas com o comportamento biológico dos carcinomas. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão imuno-histoquímica da MMP-2 e da MMP-9 e dos Inibidores Teciduais de Metaloproteinases (TIMP) 1 e 2 na QA e nos CE de lábio e de língua e relacionar os resultados com as características histopatológicas das lesões com uma possível relação entre a QA e o CE de lábio. Para tanto, neste estudo foram analisados 35 casos de QA em lábio inferior, 32 casos de CE primário em lábio inferior e 34 casos de CE primário em língua, todos com diagnóstico clínico e histopatológico, do Ambulatório da Disciplina de Propedêutica Estomatológica e da Disciplina de Patologia Bucal, da Faculdade de Odontologia do Instituto de Ciência e Tecnologia, São José dos Campos - UNESP, respectivamente. O grupo controle contou com 16 casos, sem alteração clínica ou histopatológica no tecido epitelial e sem inflamação, provenientes de biópsias realizadas na mesma instituição para confirmação do diagnóstico de hiperplasia fibrosa ou mucocele.Os resultados foram submetidos à análise estatística. Pode-se observar que, em nossas amostras de QA e de CE de lábio e de língua, a MMP-2 e seu regulador, a TIMP-2, encontra-se subexpressa, assim como a MMP-9 e seu inibidor, a TIMP-1. A expressão de MMP-9 não mostrou diferença estatisticamente significativa entre os casos de QA e de CE, no entanto não se pode negar o claro aumento de expressão de MMP-9 nas lesões de QA quando estas são comparadas as lesões ao grupo controle. Portanto.... / Abstract: Potentially malignant oral disorders as actinic cheilitis (QA) and neoplastic as squamous cell carcinomas (EC) of the lip and tongue, exhibit biological behavior that varies with several factors, such as genetic changes that lead to dysregulation of cellular metabolism. The aim of this study was to evaluate the expression of matrix metalloproteinases (MMPs) 2 and 9 and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP) 1 and 2, using the technique of immunohistochemistry. MMPs are responsible for endopeptidase degradation of the extracellular matrix. Was investigated in QA and CE lip and tongue, the presence and activity of these proteolytic enzymes and a possible relationship between that and the transition from QA to EC lip; besides trying to relate the results with pathologic features and compare the found between the groups. For both the study included 35 cases of QA in the lower lip, 32 CE primary lip and 34 CE of tongue with clinical and histopathological diagnosis of Ambulatory Discipline Propedeutics Stomatological and Oral Pathology, Faculty of Dentistry Institute Science and Technology, São José dos Campos - UNESP, respectively. The control group was consisted of 16 patients without clinical or histopathological changes in the epithelial tissue and without inflammation; this material came from biopsies performed to confirm the diagnosis of other pathologies, such as fibrous hyperplasia and mucocele. The data collected in the morphometric were analyzed and subjected to statistical analysis. The study concluded that both MMP-2 as their regulator TIMP-2 are low expression in our samples of Actinic cheilitis, lip squamous cell carcinoma and squamous cell carcinoma of tongue, and that MMP-9 its main inhibitor, TIMP-1 also are understated in all our samples and that although statistically not significant, the expression of MMP-9 was found in AK lesions when compared to the control group..... / Doutor

Orientador: César Rogério Pucci / Banca: Adriana Bona Matos / Banca: Paulo Francisco César / Banca: Eduardo Bresciani / Banca: Sérgio Eduardo de Paiva Gonçalves / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de soluções de clorexidina e de própolis e da simulação de pressão pulpar na resistência de união entre resina e dentina. Para isto, foram obtidos segmentos coronários de 120 dentes humanos. Metade das amostras foram conectadas a um dispositivo de simulação de pressão pulpar, cuja altura foi ajustada para 15 cm de água. Foi realizado condicionamento com ácido fosfórico 37% por 15 s, lavagem e secagem com papel absorvente. Em seguida, foram divididas em 3 grupos, de acordo com a solução aplicada por 30 s: GC(Grupo Controle - nenhuma solução), CLX (Digluconato de Clorexidina 0,2%), PA (Extrato de própolis aquoso). Aplicou-se o adesivo (Single Bond Universal) e resina composta (Filtek Z250) em todos as amostras. Os grupos foram subdivididos de acordo com o tipo de envelhecimento: I (Corte Imediato), C (15000 ciclos térmicos). As amostras foram cortadas em palitos e submetidas ao teste de microtração. Os dados obtidos de resistência de união (MPa) foram submetidos ao teste de ANOVA 3 fatores. Para o fator Solução, não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,46), mas sim para os fatores Pressão Pulpar (p=0,00) e Envelhecimento (p=0,00), além das interações entre os fatores Solução e Pressão Pulpar (p= 0,00), Pressão Pulpar e Envelhecimento (p=0,00) e entre os três fatores (p=0,03). Os resultados do teste de Tukey para o fator Pressão Pulpar foram: CPP (com pressão pulpar): 29,19a, SPP (sem pressão pulpar): 32,98b; e para o fator Envelhecimento foram: C (ciclados): 28,12a, I (imediato): 34,05b. Concluiu-se que as soluções de clorexidina e de própolis não interferiram na resistência de união; e que a simulação de pressão pulpar e a termociclagem diminuíram os valores de resistência de união da resina à dentina / Abstract: his study aimed to assess the influence of chlorhexidine and propolis solutions and simulated pulpal pressure on the bond strength between resin and dentin. To do so, crown segments of 120 human teeth were obtained. Half of the samples were connected to a pulp pressure simulation device, adjusted to 15 cm H2O. Conditioning was accomplished with 37% phosphoric acid for 15 seconds, washing and drying with absorbing paper. Then, samples were split into 3 groups, according to the solution applied for 30 s: GC (Control group - no solution), CLX (Chlorhexidine digluconate 0.2%), PA (Aqueous propolis extract). Single Bond Universal adhesive and composite resin (Filtek Z250) were applied in all samples. Groups were subdivided according to the aging process: I (Immediate cut) and T (15000 thermal cycles). Samples were cut into beams and went through microtensile bonding tests. Bond strength data (MPa) were analyzed by three-way ANOVA. For the factor Solution, there was no statistically significant difference among the groups (p = 0.46), but was found difference for the factors Pulpal Pressure (p=0.00), Aging (p=0.00), and interaction between Solution and Pulpal Pressure (p=0.00), Pulpal Pressure and Aging (p=0.00) and between the 3 factors (p=0.03). The results from Tukey's test for Pulpal Pressure factor were: SPP (simulated pulpal pressure): 29,19a, NPP (no pulpal pressure): 32,98b; and for the factor Aging were: T (thermal cycling): 28,12a, I (immediate): 34,05b. It was concluded that chlorhexidine and propolis solutions have not interfered in the bond strength; but simulated pulpal pressure and termal cycling reduced the dentin bond strength / Doutor