A eficácia do fungo filamentoso Metarhizium anisopliae para controle de carrapatos foi evidenciada em vários experimentos in vitro, entretanto, há poucos relatos de ensaios em condições de campo para demonstrar a real aplicação do controle biológico. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia de M. anisopliae no controle de Rhipicephalus microplus em condições de laboratório e de campo associado ou não a acaricidas químicos, utilizando bovinos. Inicialmente, foi avaliada a compatibilidade de M. anisopliae (cepa E6) em ensaio in vitro com cinco produtos comerciais contendo: amitraz, cipermetrina, clorpirifós e duas associações de piretróides sintéticos e organofosforados (PS+OF). Em geral os acaricidas apresentaram pouco efeito na viabilidade do fungo. Quando M. anisopliae foi associado ao amitraz e a clorpirifós, ocorreu diminuição na viabilidade em aproximadamente 63% e 67% a 48 e 96 horas após a mistura, respectivamente. A eficácia de M. anisopliae (cepa E6) também foi avaliada sobre uma cepa de R. microplus multiresistente a acaricidas. Foram realizados experimentos in vitro e em condições de campo, utilizando o fungo isoladamente ou em associação com um acaricida comercial de pulverização em bovinos infestados com a cepa Jaguar (de R. microplus resistente a carrapaticidas). Para os ensaios a campo, vinte bovinos foram divididos em quatro grupos (n = 5): (i) o grupo tratado com acaricida; (ii) o grupo tratado com o fungo, (iii) o grupo tratado com a associação de fungo + acaricida, e (iv) o grupo controle (não tratado). Os animais foram separados em piquetes com animais naturalmente infestados e também com infestação experimental com a cepa Jaguar. Em cada infestação foram utilizadas 20.000 larvas de R. microplus, aplicadas em três semanas a -21, -14 e -7 dias antes do primeiro tratamento e uma semana depois de cada tratamento. Os animais dos grupos tratados foram pulverizados com o fungo na concentração de 108 conídios/mL com intervalo de 21 a 28 dias sendo realizados sete tratamentos. Desde o primeiro tratamento até o final do experimento, os três grupos tratados, apresentaram nas contagens, número de carrapatos inferior ao grupo controle (P <0,05). Os grupos tratados com a suspensão de esporos de fungo ou com acaricida isoladamente apresentaram um controle semelhante, com um mínimo de 50% de eficácia e média de 75%. Mais significativo foi o tratamento com associação do fungo com o acaricida que resultou em eficácia de 91,7%, após o primeiro tratamento e acima de 98% após os outros seis tratamentos. Assim, fica aqui demonstrada a real aplicabilidade do uso do fungo M. anisopliae (Cepa E6) para controle de R. microplus resistentes a acaricida, em especial a sua associação com acaricidas. / The of the fungus Metarhizium anisopliae to control ticks has been shown in several in vitro experiments. However, there have been few reports of assays in field conditions in order to demonstrate the real applicability of the biological control. Thus aim of the present study was to evaluate the efficacy of M. anisopliae to control Rhipicephalus microplus under laboratory and field conditions. Firstly the compatibility of M. anisopliae (strain E6) to acaricides was tested in vitro using five commercial acaricides: amitraz, cypermethrin, chlorpyriphos and two associations of synthetic pyrethroid and organophosphate (SP+OP). In general, the acaricides only displayed mild effects on fungus viability. The lower fungal viability was with amitraz and chlorpyriphos, approximately 63% of fungus viability at 48 hours post-mixture and 67% at 96 hours, respectively. Secondly, the efficacy of M. anisopliae (strain E6) to control a multiacaricide-resistant strain of R. microplus (Jaguar) was evaluated, in vitro and under field conditions in tick infested bovines, using the fungus alone or in association with a commercial acaricide by manual spraying. The field experiment was conducted with twenty bovines divided into four groups (n = 5); (i) acaricide-treated group, (ii) fungus-treated group, (iii) fungus+acaricide group, and (iv) control non-treated group. Animals were allocated into highly infested paddocks and were also experimentally infested with 20.000 larvae of R. microplus in three weeks -21, -14, and -7 days before the first treatment and one week after each treatment. Animals in the treated groups were sprayed with M. anisopliae at a concentration of 108 conidia/mL at 21 or 28 days intervals (seven treatments). From the first treatment to the end of the experiment, the treated groups had lower tick infestation (P < 0.05). Groups treated with fungus suspension and acaricide alone, presented a similar efficacy, with minimal of 50% and 75% average. Importantly, the association of fungus and acaricide promoted a minimal percent of 91.7% tick-control after the first treatment and over 98% tick-control in the other six treatments. Thus in this work we demonstrate the real applicability of the use of M. anisopliae (strain E6) to control acaricide resistant ticks R. microplus in particular using the association of fungal spores and acaricides.

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é responsável por perdas econômicas substanciais na bovinocultura, acarretando o uso intensivo de acaricidas. Problemas com os resíduos químicos presentes na carne e no leite, o custo dos acaricidas e a seleção de populações de carrapato resistentes, têm estimulado o desenvolvimento de métodos de controle alternativos não-químicos. Muito esforço tem sido despendido para o desenvolvimento de uma vacina contra o carrapato, no entanto, seu desenvolvimento depende da identificação de moléculas e caracterização de seus papéis na fisiologia do carrapato. Nesse sentido, entender melhor os processos envolvidos no desenvolvimento embrionário pode ajudar na identificação de alvos para o controle desse ectoparasita. Foi sugerida previamente a participação da Tick Heme-binding Aspartic Proteinase (THAP), uma aspártico-endopeptidase dos ovos do carrapato, na degradação da vitelina. Neste trabalho, nós avaliamos a função fisiológica e as características bioquímicas adicionais dessa proteína. Para identificar os sítios e o perfil de transcrição do gene da THAP, o RNA total foi extraído de intestino, ovário e corpo gorduroso de fêmeas parcialmente e completamente ingurgitadas e de ovos, e analisado por PCR quantitativo. Esta análise revelou que o gene da THAP é transcrito nos três tecidos, porém maior quantidade de mRNA foi detectada no corpo gorduroso e intestino de fêmeas completamente ingurgitadas, onde o processo de vitelogênese já foi iniciado. Nos ovos, a transcrição do gene da THAP não foi detectada. Para investigar a presença da proteína nos tecidos e ovos foi realizado um westen-blot com soro anti-THAP, que revelou a presença, em pequena quantidade, da proteína na hemolinfa, no intestino e no corpo gorduroso. Maior concentração de proteína foi detectada no ovário de fêmeas completamente ingurgitadas e nos ovos durante todo o desenvolvimento embrionário. Também foi observado que a THAP é sintetizada na forma de pró-endopeptidase e depois do início da embriogênese é convertida à forma ativa por autoproteólise. Uma proteína recombinante (rTHAP) foi produzida pela clonagem da região codificadora no vetor de expressão pET43a e expressão em Escherichia coli. Depois da purificação, a rTHAP apresentou atividade enzimática sobre substrato sintético fluorogênico, sendo especificamente inibida por pepstatina A. Para investigar sua participação na degradação de vitelina (VT), VT purificadas de ovos coletados 1, 7 e 12 dias após a postura foram incubadas com a rTHAP em diferentes pH (3,5; 4,0; 4,5; e 5,0). A análise por SDS-PAGE mostrou que a rTHAP é capaz de hidrolisar VT purificada de ovos coletados 7 dias após a postura em pH 3,5 a 37 ºC. Esta atividade é sensível a heme e inibida por pepstatina A. VT purificadas de ovos coletados 1 e 12 dias após a postura não foram hidrolisadas e em outros pH a atividade da rTHAP não foi eficiente. Nossos resultados sugerem que a THAP é sintetizada principalmente em tecidos extra-ovarianos, estocada nos ovários e incorporada nos oócitos como pró-endopeptidase. Durante a embriogênese, a THAP é ativada a enzima na forma madura desenvolvendo papel no processamento da vitelina do carrapato. / Rhipicephalus (Boophilus) microplus is a one-host tick that causes losses to bovine herds, leading intensive use of chemical acaricides. Problems of chemical residues in meat and milk, costs of acaricides, and development of resistance by ticks, have long been recognized and have helped to stimulate interest in tick control by immunological methods. Major efforts have been made to develop vaccines against tick; however, its development still depends on the identification of tick molecules and characterization of their roles in arthropod physiology. In this sense, to understand the processes involved in embryonic development can help in the identification of additional targets to control this ectoparasite. Previously, an aspartic endopeptidase from tick eggs, named THAP (Tick Heme-binding Aspartic Proteinase), was suggested to be involved in vitellin degradation. In this work, we have investigated the physiological role and additional chemical features of this protein. To identify the site and profiles of the THAP transcription, total RNA extracted from midgut, ovary and fat body from partially and fully engorged females and from eggs was analyzed by qRT-PCR. This analysis showed that THAP mRNA was transcripted in these three tissues. However, highest levels of transcriptions were found in fat body and midgut of fully engorged vitellogenic females. In eggs, THAP mRNA transcription was not detected. In order to investigate the presence of THAP protein in the tissues and eggs, an immunoblot analysis was conducted with an anti-nTHAP serum. The THAP protein was detected in the haemolymph, midgut and fat body and, in higher quantity, in the ovary of fully engorged females, and it was present throughout embryo development. The protein is synthesized as a higher molecular mass form (pro-endopeptidase) and after the onset of embryogenesis THAP is converted into an active form by autocatalysis. A recombinant THAP (rTHAP) was produced through cloning in pET43a vector and expression in Escherichia coli. After the purification the rTHAP was active upon fluorogenic substrate in a reaction specifically inhibit by pepstatin A. To investigate rTHAP vitellin-degradation activity, vitellin (VT) purified from 1-, 7- and 12-day-old eggs were incubated with rTHAP in a range of pHs (3.5, 4.0, 4.5 and 5.0). SDS-PAGE analysis showed that rTHAP is able to hydrolyze VT from 7-day-old eggs in pH 3.5 at 37ºC in a reaction that is heme-sensitive and inhibited by pepstatin A. Vitellins from eggs collected on the 1st and 12th days after oviposition were not hydrolyzed and in other pHs rTHAP activity was not efficient. These results suggest that THAP is synthesized in ovary and extra-ovarian site, stocked in ovary and incorporated by vitellogenic oocytes with a pro-endopeptidase. During embryogenesis, THAP was actived to the mature enzyme and play a role in tick vitellin processing.

A eficácia do fungo filamentoso Metarhizium anisopliae para controle de carrapatos foi evidenciada em vários experimentos in vitro, entretanto, há poucos relatos de ensaios em condições de campo para demonstrar a real aplicação do controle biológico. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia de M. anisopliae no controle de Rhipicephalus microplus em condições de laboratório e de campo associado ou não a acaricidas químicos, utilizando bovinos. Inicialmente, foi avaliada a compatibilidade de M. anisopliae (cepa E6) em ensaio in vitro com cinco produtos comerciais contendo: amitraz, cipermetrina, clorpirifós e duas associações de piretróides sintéticos e organofosforados (PS+OF). Em geral os acaricidas apresentaram pouco efeito na viabilidade do fungo. Quando M. anisopliae foi associado ao amitraz e a clorpirifós, ocorreu diminuição na viabilidade em aproximadamente 63% e 67% a 48 e 96 horas após a mistura, respectivamente. A eficácia de M. anisopliae (cepa E6) também foi avaliada sobre uma cepa de R. microplus multiresistente a acaricidas. Foram realizados experimentos in vitro e em condições de campo, utilizando o fungo isoladamente ou em associação com um acaricida comercial de pulverização em bovinos infestados com a cepa Jaguar (de R. microplus resistente a carrapaticidas). Para os ensaios a campo, vinte bovinos foram divididos em quatro grupos (n = 5): (i) o grupo tratado com acaricida; (ii) o grupo tratado com o fungo, (iii) o grupo tratado com a associação de fungo + acaricida, e (iv) o grupo controle (não tratado). Os animais foram separados em piquetes com animais naturalmente infestados e também com infestação experimental com a cepa Jaguar. Em cada infestação foram utilizadas 20.000 larvas de R. microplus, aplicadas em três semanas a -21, -14 e -7 dias antes do primeiro tratamento e uma semana depois de cada tratamento. Os animais dos grupos tratados foram pulverizados com o fungo na concentração de 108 conídios/mL com intervalo de 21 a 28 dias sendo realizados sete tratamentos. Desde o primeiro tratamento até o final do experimento, os três grupos tratados, apresentaram nas contagens, número de carrapatos inferior ao grupo controle (P <0,05). Os grupos tratados com a suspensão de esporos de fungo ou com acaricida isoladamente apresentaram um controle semelhante, com um mínimo de 50% de eficácia e média de 75%. Mais significativo foi o tratamento com associação do fungo com o acaricida que resultou em eficácia de 91,7%, após o primeiro tratamento e acima de 98% após os outros seis tratamentos. Assim, fica aqui demonstrada a real aplicabilidade do uso do fungo M. anisopliae (Cepa E6) para controle de R. microplus resistentes a acaricida, em especial a sua associação com acaricidas. / The of the fungus Metarhizium anisopliae to control ticks has been shown in several in vitro experiments. However, there have been few reports of assays in field conditions in order to demonstrate the real applicability of the biological control. Thus aim of the present study was to evaluate the efficacy of M. anisopliae to control Rhipicephalus microplus under laboratory and field conditions. Firstly the compatibility of M. anisopliae (strain E6) to acaricides was tested in vitro using five commercial acaricides: amitraz, cypermethrin, chlorpyriphos and two associations of synthetic pyrethroid and organophosphate (SP+OP). In general, the acaricides only displayed mild effects on fungus viability. The lower fungal viability was with amitraz and chlorpyriphos, approximately 63% of fungus viability at 48 hours post-mixture and 67% at 96 hours, respectively. Secondly, the efficacy of M. anisopliae (strain E6) to control a multiacaricide-resistant strain of R. microplus (Jaguar) was evaluated, in vitro and under field conditions in tick infested bovines, using the fungus alone or in association with a commercial acaricide by manual spraying. The field experiment was conducted with twenty bovines divided into four groups (n = 5); (i) acaricide-treated group, (ii) fungus-treated group, (iii) fungus+acaricide group, and (iv) control non-treated group. Animals were allocated into highly infested paddocks and were also experimentally infested with 20.000 larvae of R. microplus in three weeks -21, -14, and -7 days before the first treatment and one week after each treatment. Animals in the treated groups were sprayed with M. anisopliae at a concentration of 108 conidia/mL at 21 or 28 days intervals (seven treatments). From the first treatment to the end of the experiment, the treated groups had lower tick infestation (P < 0.05). Groups treated with fungus suspension and acaricide alone, presented a similar efficacy, with minimal of 50% and 75% average. Importantly, the association of fungus and acaricide promoted a minimal percent of 91.7% tick-control after the first treatment and over 98% tick-control in the other six treatments. Thus in this work we demonstrate the real applicability of the use of M. anisopliae (strain E6) to control acaricide resistant ticks R. microplus in particular using the association of fungal spores and acaricides.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-24T13:06:56Z No. of bitstreams: 1 Ellen Carine Neves Valente.pdf: 314434 bytes, checksum: ac0a6866be98417967bd151237746424 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-24T13:06:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ellen Carine Neves Valente.pdf: 314434 bytes, checksum: ac0a6866be98417967bd151237746424 (MD5) Previous issue date: 2011-02-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Diatraea flavipennella (Box), is a pest of great economic importance to the cultivation of sugar cane in Northeast Brazil. The use of the larval parasitoid Cotesia flavipes (Cam) has not succeeded in controlling the D. flavipennella. The use of entomopathogenic fungi is a viable alternative within the context of integrated management of this pest. Thus, this study aimed to evaluate the effect of isolated URPE-3, URPE-4, URPE-18, URPE-22, and ESALQ 447 of Beauveria bassiana (Bals.) Vuilleman and PL43, E9, ESALQ 1189, URPE-11, and URPE-19 Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin on eggs of 24, 48, and 72 hours old and the 2nd-instar larvae of D. flavipennella in laboratory conditions. The eggs and larvae were sprayed with 1 mL of suspensions (1x107 conidia / mL) (treatment) and sterile distilled water over wetting agent Tween® 80 at 0.01% (control). Tests conducted on eggs of D. flavipennella consisted of four replications, each consisting of approximately 30 eggs. The experiments with caterpillars consisted of six replications, each consisting of seven larvae, totaling 42 larvae per treatment. Eggs and larvae were kept inside of growth chamber at 27 ± 1 ºC, 70 ± 10% RH and 12h photophase. The fungus M. anisopliae was more virulent to eggs, particularly the isolated URPE- 11, which provided 100% of infection in eggs of 24, 48, and 72 hours old, and the LC50 at 2.0x105 conidia. The isolates ESALQ 447 and ESALQ 1189 were more virulent to borer larvae, with mean survival values of 5.76 and 3.23 days, respectively. The LC50 for these isolates was estimated at 1.2 x107 conidia. The results suggest that the fungi M. anisopliae and B. bassiana are important for further evaluation in the applied integrated management of D. flavipennella contributing to the sustainability of sugarcane production in northeastern Brazil. / Diatraea flavipennella (Box), é uma praga de grande importância econômica para a cultura da cana-de-açúcar no nordeste do Brasil. O emprego do parasitóide larval Cotesia flavipes (Cam.) não tem sido suficiente no controle desta praga. O uso de fungos entomopatogênicos é uma alternativa viável dentro do contexto do manejo integrado dessa praga. Dessa forma, este estudo teve por objetivo avaliar o efeito dos isolados URPE-3, URPE-4, URPE-18, URPE-22 e ESALQ 447 de Beauveria bassiana (Bals.) Vuilleman e PL43, E9, ESALQ 1189, URPE-11 e URPE-19 de Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin sobre ovos de 24, 48 e 72 horas de idade e lagartas no 2º ínstar de D. flavipennella. Os ovos e lagartas foram pulverizados com 1mL das suspensões (1x107 conídios/mL) (tratamentos) e água destilada e esterilizada mais espalhante adesivo Tween® 80 a 0,01% (testemunha). Os ensaios realizados com ovos de D. flavipennella constaram de quatro repetições, sendo composta por aproximadamente 30 ovos cada. Os ensaios com as lagartas constaram de seis repetições, sendo cada uma composta por sete lagartas, totalizando 42 lagartas por tratamento. Ovos e lagartas foram mantidos em B.O.D. a 27 ± 1ºC; 70 ± 10% UR; 12h de fotofase. O fungo M. anisopliae foi mais virulento para os ovos, destacandose o isolado URPE-11, o qual proporcionou 100% de infecção nos ovos de 24, 48 e 72 horas de idade, sendo a CL50 estimada em 2,0x105 conídios/mL. Os isolados ESALQ 447 e ESALQ 1189 foram mais virulentos sobre lagartas da broca, apresentando valores médios de sobrevivência de 5,76 e 3,23 dias, respectivamente. A CL50 para estes isolados foi estimada em 1,2x107 conídios/mL. Os resultados indicam que os fungos M. anisopliae e B. bassiana são importantes para serem utilizados no Manejo Integrado de D. flavipennella contribuindo para a sustentabilidade da agricultura canavieira no nordeste do Brasil.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5103_1.pdf: 2655923 bytes, checksum: 4a8cd8dfda72129aa8308dbf088c4d10 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae var. anisopliae e Metarhizium flavoviride var. flavoviride são fungos entomopatogênicos com ação comprovada contra várias espécies, embora não tenham sido testados em Chrysomya albiceps, um díptero de importância na saúde pública. Assim, objetivou-se avaliar a ação de B. bassiana, M. anisopliae var. anisopliae e M. flavoviride var. flavoviride em ovos, larvas e adultos de C. albiceps, utilizando as concentrações 104, 105, 106, 107, 108 conídios.mL-1, considerando o percentual de eclosão de larvas, período de pré-pupa, pupa, percentual de emergência de adultos, ritmo de emergência, morte acumulativa, longevidade, período de postura e percentual de eclosão a partir de fêmeas infectadas. O comportamento dos fungos reisolados também foi avaliado através dos parâmetros biológicos: percentual de germinação, número de conídios, número e diâmetro de colônias, bem como a citologia no que se refere à descrição das estruturas vegetativas e reprodutivas. De acordo com a metodologia empregada, verificou-se que os três fungos apresentaram ação contra ovos, larvas e adultos de C. albiceps. Já em relação ao comportamento, foi observado que os fungos reisolados de larva apresentaram o melhor desempenho em relação ao controle e os aspectos citológicos não diferiram quando comparados ao controle. Esses resultados sugerem a possibilidade do emprego desses fungos no controle de C. albiceps

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5177_1.pdf: 1753890 bytes, checksum: e623c7879e68e115767606b99f16d884 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Metarhizium anisopliae var. anisopliae, Metarhizium flavoviride var. flavoviride e Beauveria bassiana têm ação comprovada contra diversas espécies de insetos. Os cupins podem ser infectados por esses fungos naturalmente. Avaliou-se a ação desses fungos sobre Nasutitermes coxipoensis em laboratório e quantificou-se a produção de conídios nos insetos mortos. A compatibilidade de M. anisopliae var. anisopliae reisolado de N. coxipoensis com os inseticidas fipronil, imidaclopride e ensossulfan foi determinada através dos parâmetros de germinação, crescimento colonial e esporulação. Foram determinadas doses infectivas por contato direto para cada um dos fungos e aplicadas nos bioensaios. A compatibilidade do reisolado com os inseticidas foi determinada testando-se cinco concentrações dos produtos. A análise dos resultados demonstrou que o método de inoculação por contato direto dos insetos com a cultura fúngica foi eficiente. M. anisopliae var. anisopliae apresentou maior virulência do que M. flavoviride var. flavoviride e B. bassiana. A maior produção de conídios sobre os cadáveres de N. coxipoensis foi observada em M. anisopliae var. anisopliae. O estudo da compatibilidade demonstrou que o produto fipronil foi considerado compatível nas concentrações 0,20&#956;g, 0,50&#956;g e 1,00&#956;g, e incompatível nas concentrações 2,00&#956;g e 5,00&#956;g e os produtos imidaclopride e endossulfan foram compatíveis, não tendo afetado os parâmetros analisados

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4415_1.pdf: 476089 bytes, checksum: bfff2f22f85990f6fb497864f0376cec (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2002 / Atualmente o método de maior interesse adotado para o controle de Boophilus microplus, carrapato de um só hospedeiro que acarreta prejuízos globais de milhões de dólares anuais, baseia-se na utilização de fungos entomopatogênicos, sendo Metarhizium anisopliae e Beauveria bassiana os mais utilizados. Este trabalho avaliou a compatibilidade química dos carrapaticidas Cipermetrina High Cis técnica 100 (CHC) e Amitraz sobre M. anisopliae var. acridum. No ensaio químico as concentrações utilizadas foram: 0,20&#956;g; 0,50&#956;g; 1,00&#956;g; 2,00&#956;g; 5,00&#956;g e 10,00&#956;g. Para cada tratamento foram utilizadas cinco repetições e um controle. Os parâmetros analisados foram, a germinação de conídios, o crescimento linear, a esporulação e a condição nuclear. Foi determinada, também a toxicidade. Os menores percentuais de germinação, 49,50%, 58,07% e 51,06% foram observados nos tratamentos com Amitraz nas concentrações 0,20&#956;g; 5,00&#956;g e 10,00&#956;g, respectivamente. O diâmetro da colônia foi afetado no terceiro dia de cultivo (66,67%) na concentração de 0,50&#956;g de CHC. O carrapaticida Amitraz no sexto dia de cultivo na concentração de 10,00&#956;g promoveu um menor percentual de esporulação (33,35%). M. anisopliae var. acridum não apresentou alterações citológicas quando crescido em meio com carrapaticidas. A toxicidade obtida de 46,98% no sexto dia de cultivo, segundo a metodologia utilizada determinou que o produto Amitraz na concentração de 10,00&#956;g é moderadamente tóxico para este fungo. Os resultados obtidos contribuirão para um emprego futuro do controle integrado do B. microplus utilizando-se carrapaticidas químicos e fungos entomopatogênicos

Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2017-01-26T14:49:44Z No. of bitstreams: 2 CAMILAROSSONI.pdf: 1294639 bytes, checksum: 538f9294b9d60404e90aa394ac241b9e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T14:49:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 CAMILAROSSONI.pdf: 1294639 bytes, checksum: 538f9294b9d60404e90aa394ac241b9e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Hymenoptera parasitoids have been reported as natural enemies, among these, the parasitoids Palmistichus elaeisis Delvare and Lasalle, 1993, Tetrastichus howardi (Olliff, 1893) and Trichospilus diatraeae Cherian and Margabandhu, 1942 (Hymenoptera: Eulophidae) are reported in the control of pests of agricultural importance, especially, Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae). Along with the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin, 1912 (Cordycipitaceae) and Metarhizium anisopliae (Metchnikoff, 1879) Sorokin, 1883 (Clavicipitaceae) these parasitoids can regulate insects populations after inundative and inoculative applications. Therefore, the objective of this study was to evaluate whether the entomopathogenic fungi B. bassiana and M. anisopliae detrimental to the development of these Eulophidae parasitoids and the survival of adult females. In the experiment I first work, females of each species of parasitoid were individualized in glass tubes, containing a contact surface of filter paper (3 cm wide × 3 cm length) treated with concentrations of 1 × 109con. mL-1, 5 × 109con. mL-1, 10 × 109con. mL-1 of products based on B. bassiana and M. anisopliae, and the daily and confirmed mortality were assessed. In the experiment II, the females of Eulophidae parasitoids were exposed to the same three concentrations of biopesticides for 48 hours. After exposure, five female parasitoids of each treatment were individualized in test tubes along with a pupa of D. saccharalis and the parasitism was allowed for 24 hours. In the second work, pupae of the host were exposed to parasitism by three females of each species of parasitoid for 72 h, after the parasitized pupae were placed individually, in glass tubes and capped with cotton, and inside each tube, It was inserted a contact surface treated with 1 mL of fungal suspension with concentrations of 1 × 109con. mL-1, 5 × 109con. mL-1, 10 × 109con. mL-1 of products based on B. bassiana and M. anisopliae and placed in a growth chamber (BOD). Finally, in the third work, pupae of D. saccharalis were individualized and inserted into pre-drilled holes in stalks of the sugarcane plant, were subsequently sprayed formulations of two entomopathogens separately at a concentration of 5.5 × 109 con. mL-1 and then the sugarcane plant was covered individually with a cage of fabric "voil", and later 102 parasitoids female per pupae was separately released. The parasitism was allowed for four days and after this period, the pupae were removed from the stalks and taken to the laboratory for evaluation of parasitism, emergence percentage, the duration of the life cycle, progeny and the sex ratio. In the first study it was concluded that the entomopathogenic fungi reduced the longevity of females of P. elaeisis and T. diatraeae with higher mortality for the species T. howardi. However, this fact did not influence the parasitism and the emergence of P. elaeisis, T. howardi and T. diatraeae in pupae of D. saccharalis. In the second work, the emergence of T. howardi and T. diatraeae was not compromised by entomopathogenic fungi. However the species P. elaeisis was affected, but the duration of the life cycle, the progeny of these parasitoids and sex ratio were not affected after exposure to entomopathogens inside the pupae. In the third work, the entomopathogenic fungi at a concentration of 5.5 × 109 con. mL-1 did not prevent the parasitism of pupae of D. saccharalis by Eulophidae parasitoids in sugarcane plants. In general, the fungi B. bassiana and M. anisopliae in the tested concentrations are compatible with the parasitoid P. elaeisis, T. howardi and T. diatraeae. / Himenópteros parasitoides têm sido relacionados como inimigos naturais, dentre esses, os parasitoides Palmistichus elaeisis Delvare e Lasalle, 1993, Tetrastichus howardi (Olliff, 1893) e Trichospilus diatraeae Cherian e Margabandhu, 1942 (Hymenoptera: Eulophidae) são relatados no controle de pragas de importância agrícola, especialmente, Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera:Crambidae). Juntamente com os fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin, 1912 (Cordycipitaceae) e Metarhizium anisopliae (Metchnikoff, 1879) Sorokin, 1883 (Clavicipitaceae) estes parasitoides podem regular populações de insetos após aplicações inundativas e inoculativas. Por isto, o objetivo deste trabalho foi avaliar se os fungos entomopatogênicos B. bassiana e M. Anisopliae prejudicam o desenvolvimento destes eulofídeos e a sobrevivência de fêmeas adultas. No primeiro trabalho experimento I, fêmeas de cada espécie de parasitoide foram individualizadas em tubos de vidro, contendo uma superfície de contato de papel filtro (3 cm de largura × 3 cm de comprimento) tratada com as concentrações de 1 × 109con. mL-1, 5 × 109con. mL-1, 10 × 109con. mL-1 dos produtos à base de B. bassiana e M. anisopliae , sendo as mortalidades diária e confirmada avaliadas. No experimento II, as fêmeas dos eulofídeos foram expostas as mesmas três concentrações dos bioinseticidas por 48 horas. Após a exposição, cinco fêmeas dos parasitoides de cada tratamento foram individualizadas em tubos de ensaio juntamente com uma pupa de D. saccharalis e o parasitismo foi permitido por 24 horas. No segundo trabalho, pupas do hospedeiro foram expostas ao parasitismo por três fêmeas de cada espécie de parasitoide por 72 h, depois, as pupas parasitadas foram acondicionadas, individualmente, em tubos de vidro e tampados com algodão, sendo que no interior de cada tubo, foi inserido uma superfície de contato tratada com 1 mL de suspensão fúngica nas concentrações de 1 × 109con. mL-1, 5 × 109con. mL-1, 10 × 109con. mL-1 dos produtos à base de B. bassiana e M. anisopliae e acondicionados em câmara climatizada (BOD). Por fim, no terceiro trabalho, pupas de D. saccharalis foram individualizadas e inseridas em orifícios pré-perfurados em um colmo amarrado na planta de cana-de-açúcar, posteriormente foram pulverizadas as formulações dos dois entomopatógenos separadamente na concentração de 5,5 × 109 con. mL-1 e então a touceira de cana foi coberta, individualmente, com uma gaiola de “voil”, sendo posteriormente liberadas 102 fêmeas dos parasitoides por pupa separadamente. O parasitismo foi permitido por quatro dias e, após esse período, as pupas foram retiradas dos colmos e levadas ao laboratório para avaliação da porcentagem de parasitismo, porcentagem de emergência, a duração do ciclo de vida, progênie e a razão sexual. No primeiro trabalho foi possível concluir que os fungos entomopatogênicos reduziram a longevidade de fêmeas de P. elaeisis e T. diatraeae com maior mortalidade para a espécie T. howardi. No entanto, este fato não influenciou o parasitismo e a emergência de P. elaeisis, T. howardi e T. diatraeae em pupas de D. saccharalis. No segundo trabalho, a emergência de T. howardi e T. diatraeae não foi comprometida pelos fungos entomopatogênicos, porém a espécie P. elaeisis foi afetada, no entanto, a duração do ciclo de vida, progênie e razão sexual destes parasitoides não foram afetadas após exposição aos entomopatógenos no interior das pupas. No terceiro trabalho, os fungos entomopatogênicos na concentração de 5,5 × 109 com. mL-1 não prejudicaram o parasitismo de pupas D. saccharalis pelos parasitoides da família Eulophidae em plantas de cana-de-açúcar. De maneira geral, os fungos B. bassiana e M. anisopliae nas concentrações testadas são compatíveis com os parasitoides P. elaeisis, T. howardi e T. diatraeae.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-24T15:20:41Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 490085 bytes, checksum: aee05299fbca9ca829816b7f973e717d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-24T15:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 490085 bytes, checksum: aee05299fbca9ca829816b7f973e717d (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A monocultura reduz o equilíbrio ambiental, o que favorece o surgimento de pragas. O uso de biopesticidas no controle biológico é uma alternativa eficiente, mas pode afetar inimigos naturais, o que tem motivado a busca de métodos seletivos aos organismos alvo. Insetos têm sistema imunológico para combater entomopatógenos, mas a tolerância e a dinâmica do sistema imune em vespas sociais são, ainda, pouco conhecidas. Vespas sociais são predadores importantes no controle biológico e estão em constante contato com organismos entomopatogênicos. O objetivo do trabalho foi caracterizar as células da hemolinfa de fêmeas adultas de Polybia platycephala Richards (Hymenoptera: Vespidae) e avaliar o impacto dos fungos Beauveria bassiana (isolado ESALQ PL 63) e Metarhizium anisopliae (isolado ESALQ E9) na sobrevivência e na resposta hemocitária desta vespa social. A descrição morfológica dos hemócitos foi realizada por meio de microscopia de luz. Alterações na sobrevivência e dinâmica hemocitária de P. platycephala foram estudadas em duas categorias: 1) diferentes concentrações de solução fúngica e 2) diferentes intervalos de tempo. Quatro tipos de hemócitos foram identificados durante a descrição da morfologia dessas células: prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos e oenocitóides. Os hemócitos de P. platycephala apresentaram o mesmo padrão morfológico de outras espécies da ordem Hymenoptera. Nas maiores concentrações de M. anisopliae no tratamento tópico (1 x 108 e 1 x 109 esporos/mL) reduziram a sobrevivência e o número de granulócitos e prohemócitos de P. platycephala. O fungo B. bassiana foi patogênico em todas as concentrações testadas por contato, diminuindo a sobrevivência e o número de granulócitos de P. platycephala. Nos tratamentos por ingestão, B. bassiana mostrou-se patogênico com 1 x 109 esporos/mL. Metarhizium anisopliae (isolado ESALQ E9) não reduziu a sobrevivência das vespas nas concentrações 1 x 106 e 1 x 107 esporos/mL, o que é importante para programas de manejo integrado de pragas. No entanto, o impacto negativo de B. bassiana (isolado ESALQ PL 63) em todas as concentrações testadas indica a incompatibilidade deste fungo com P. platycephala. / Monoculture reduces the environmental equilibrium, which favors the emergence of pests. The use of biopesticides in biological control is an effective alternative, but can affect natural enemies, which has motivated the search for selective methods to target organisms. Insects have immune system to defend against entomopathogen, but tolerance and the dynamics of the immune system in social wasps are still little known. Social wasps are important predators in biological control and are in constant contact with entomopathogenic organisms. The aim of the study was to identify and characterize the hemolymph cells of adult female Polybia platycephala Richards (Hymenoptera: Vespidae) and evaluate the impact of fungi Beauveria bassiana (isolated ESALQ PL 63) and Metarhizium anisopliae (isolated ESALQ E9) on survival and response hemocyte this social wasp. The morphological description of the hemocytes was performed by light microscopy. The dynamic changes in survival of P. platycephala hemocyte were studied in two categories: 1) different concentrations of fungal solution and 2) different time intervals. Four types of hemocytes were identified during the description of the morphology of these cells: prohemocytes, plasmatocytes, granulocytes and oenocytoids cells. The hemocytes of P. platycephala showed the same morphological pattern of other species of Hymenoptera. M. anisopliae high concentrations in the topical treatment (1 x 108 and 1 x 109 spores/ml) decreased survival and the number of granulocytes and prohemocytes P. platycephala. B. bassiana is pathogenic at all concentrations by contact, reducing the survival and the granulocyte number of P. platycephala. In the treatments if swallowed, B. bassiana was shown to be pathogenic to 1 x 109 spores/mL. Metarhizium anisopliae (isolated ESALQ E9) did not reduce the survival of wasps in low concentrations, which is important for integrated pest management programs. However, the negative impact of B. bassiana (isolated ESALQ 63) at all concentrations tested indicates incompatibility this fungus with P. platycephala.

The bluegrass billbug (Sphenophorus parvulus Gyllenhal) and hunting billbug (Sphenophorus venatus vestitus Chittenden) have become important pests of orchardgrass (Dactylis glomerata L.) grown in Virginia, causing 40 - 100% stand losses according to a 2005 survey of over 324 ha (800 ac) of orchardgrass. Their sheltered feeding habits combined with a lack of labeled insecticides for orchardgrass make billbug control extremely difficult for this crop. Over two seasons, orchardgrass fields were surveyed for paired feeding holes caused by feeding of the billbug spring adult. Simultaneously, barrier pitfall traps, a standard method for determining the presence of billbugs in orchardgrass, were used to trap billbug adults in the fields. A comparison of these methods using a Wilcoxon sign-ranked test found no significant differences in the time when paired feeding holes were first observed in fields and when billbug adults were first trapped, showing that the methods are equally satisfactory for determining the presence of billbugs in orchardgrass. In addition, temperature data from SkyBit E-Weather® service, which are currently used to alert growers and other interested parties of pertinent billbug activity in orchardgrass, was compared to data from a field-based weather data logger over the two seasons. A comparison of these data showed high coefficients of correlation, indicating a close relationship between these two degree-day collection methods. Therefore, the SkyBit system can continue to be used for the alert system. A field-border application of Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin strain F52 (Met-52), an entomopathogenic fungus, was evaluated against billbug adults as they enter orchardgrass fields in the spring. Randomized pairs of treated and untreated plots were placed along the edge of an orchardgrass field in studies over two seasons. Plots were monitored for billbug adults using barrier pitfall traps, and billbug adults were checked for Met-52 infection. The Met-52 proved unsatisfactory for controlling billbugs in this study. A field efficacy trial was used to evaluate several insecticides and Met-52 against billbug adults in orchardgrass over two seasons. A randomized complete block design, four insecticide treatments and an untreated control were used in each of two trials. Samples from each treatment plot were dissected and checked for billbug life stages and for injury to orchardgrass plants. In one trial, plants in the Sevin XLR Plus® treatment were found to have a significantly higher percentage of injury to the crowns than all other treatments except Mustang Max. No other significant differences were seen in this study. / Master of Science in Life Sciences