Conídios são estruturas especializadas, produzidas assexuadamente pelo micélio de muitas espécies de ascomicetos. A produção dos conídios requer o controle espacial e temporal da expressão gênica e a formação de estruturas específicas durante o desenvolvimento. Os conídios estão envolvidos na reprodução, dispersão e persistência ambiental dos fungos. Em espécies patogênicas como Aspergillus fumigatus e Metarhizium anisopliae, os conídios também são responsáveis pela infecção do hospedeiro. Um dos principais fatores ambientais capazes de matar e / ou danificar os conídios é a radiação solar. Os dímeros de pirimidina ciclobutano (CPDs) são os principais fotoprodutos do DNA induzidos pela radiação UVB. Os principais objetivos deste trabalho foram: (1) estimar as frequências de CPDs em conídios expostos a doses subletais de radiação UVB, (2) correlacionar a frequência de CPDs com a cinética de germinação dos conídios, (3) comparar a frequência de CPDs em conídios selvagens com a frequência em conídios mutantes para a pigmentação, (4) identificar genes diferencialmente expressos durante as fases da conidiogênese de A. fumigatus e (5) identificar genes modulados pela radiação UVB em micélio jovem de A. fumigatus. Conídios de M. anisopliae, A. nidulans e A. fumigatus foram expostos à irradiância de 1000 mW m-2 de UVB por 15, 30, 60 e 90 min. As doses totais ao final das exposições foram 0,9, 1,8, 3,6 e 5,4 kJ m-2. O aumento na frequência de CPDs foi linear e diretamente proporcional à dose, com 0,215, 0,455, 0,803 e 1,628 CPDs 10 kb-1 induzidos pelas doses de 0,9, 1,8, 3,6 e 5,4 kJ m-2 em A. fumigatus, 0,037, 0,077, 0,142 e 0,202 CPDs 10 kb-1 em A. nidulans e 0,041, 0,085, 0,155 e 0,255 CPDs 10 kb-1 em M. anisopliae. A frequência de CPDs no mutante albino de M. anisopliae (0,552 10 kb-1) foi aproximadamente dez vezes maior do que na linhagem selvagem (0.057 10 kb-1) após exposição à dose de 1,8 kJ m-2. Esta é a primeira evidência direta de que a pigmentação dos conídios protege o DNA contra os danos induzidos pela radiação UVB. Microarranjos genômicos de DNA foram utilizados para comparar os transcriptomas de micélios com 20 h (início da conidiogênese), 24 h (fase intermediária) e 25 h (fase final) com o transcriptoma de micélio jovem. Foram identificados 34 genes diferencialmente expressos (7 com aumento e 27 com diminuição) com 20 h de desenvolvimento, 101 genes (12 com aumento e 89 com diminuição) com 24 h e 76 genes (oito com aumento e 68 com diminuição) com 25 h. Alguns genes que apresentaram aumento na expressão (stuA e o gene da scytalone dehydratase) já haviam sido associados com fases específicas da conidiogênese, entretanto a maioria dos genes que apresentou aumento na expressão não tem função conhecida. A análise de transcriptomas com microarranjos de DNA também foi utilizada para identificar genes com expressão modulada por exposições à radiação UVB (1,8 kJ m-2) em micélio jovem de A. fumigatus. Foram identificados 101 genes diferencialmente expressos ao final da exposição à radiação UVB (51 genes com aumento e 50 com redução). O gene radc apresentou o maior aumento na expressão (aproximadamente 16 ×). A maioria dos genes com aumento na expressão não possui função conhecida. Foram identificados 418 genes diferencialmente expressos 30 min após o termino da exposição (51 genes com aumento e 367 com redução na expressão). / Conidia are specialized structures produced asexually during mycelia growth of many ascomycete species. The process of conidiation involves temporal and spatial regulation of gene expression, cell specialization, intercellular communication, and formation of specific structures during fungal growth. Conidia are responsible for the reproduction, dispersal and environmental persistence of many fungal species. In pathogenic species like Aspergillus fumigatus and Metarhizium anisopliae, conidia are also responsible for host infection. One of the main environmental factors that can kill and/or damage conidia is solar UV radiation. Cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs) are the major DNA photoproducts induced by UVB. The principal goals of the present study were to: (1) estimate the frequency of CPDs induced by sublethal doses of UVB radiation in conidial DNA of three selected ascomycetes, (2) examine correlation of CPD frequencies with germination speed, and (3) estimate the protective effect of the wild-type green conidial pigmentation on DNA in M. anisopliae var. anisopliae, (4) identify differentially expressed genes during the different phases of A. fumigatus conidiogenesis and (5) identify genes regulated by UVB radiation in A. fumigatus young mycelia. A. fumigatus, A. nidulans, and M. anisopliae conidia were exposed to 1000 mW m-2 UV irradiance for 15, 30, 60 and 90 min. Total Quaite-weighted doses were 0.9, 1.8, 3.6 and 5.4 kJ m-2, respectively. The frequencies of dimers were linear and directly proportional to the doses, with 0.215, 0.455, 0.803 and 1.628 CPDs 10 kb-1 detected at the doses of 0.9, 1.8, 3.6 and 5.4 kJ m-2 in A. fumigatus, 0.037, 0.077, 0.142 and 0.202 CPDs 10 kb-1 in A. nidulans, and 0.041, 0.085, 0.155 and 0.255 CPDs 10 kb-1 in M. anisopliae. The frequency of dimers in the M. anisopliae albino mutant DWR 180 (0.552 10 kb-1) was approximately ten times higher than of the wild-type ARSEF 23 strain (0.057 10 kb-1) after exposure to doses of 1.8 kJ m-2. DNA microarrays carrying sequence of 11,000 genes of A. fumigatus were used to compare transcriptomes of 20 h-old mycelia (initial phase of the conidiogenesis), 24 h (intermediate phase) e 25 h (final phase) with young mycelia transcriptome. Thirty-four genes displayed a statistically significant difference in expression (7 with increase and 27 with decrease mRNA expression) in 20 h-old mycelia, 101 genes (12 with increase and 89 with decrease) in 24 h-old mycelia and 76 genes (8 with increase and 68 with decrease) in 25 h-old mycelia. Some overexpressed genes (stuA ad the scytalone dehydratase gene) were previously related to specific phases of conidiogenesis but the function of most of them is unknown. Transcriptome analysis using microarrays was also used to identify genes modulated by exposures to UVB radiation (1,8 kJ m-2) in A. fumigatus young mycelia. One hundred and one differentially expressed genes were identified at the end of the exposure to UVB radiation (51 genes with increase and 50 with decrease). The radc gene displayed the higher increase in expression (approximately 16 ×). The function of most of the overexpressed genes is unknown. Four hundred and eighteen differentially expressed genes were identified 30 min after the end of exposure (51 genes with increase and 367 with decrease in expression).

O aumento significativo de micoses decorrentes do crescimento do número de indivíduos imunocomprometidos, da emergência de novas espécies de fungos patogênicos e do surgimento de patógenos resistentes aos antifúngicos atualmente utilizados é um sério problema de saúde pública. Nesse contexto, é extremamente desejável o desenvolvimento de novas técnicas para o controle de fungos. A TFD (terapia fotodinâmica), inicialmente desenvolvida como uma alternativa terapêutica para o câncer, é um processo que envolve a administração de um fotossensibilizador que se acumula preferencialmente nas células-alvo e que pode ser ativado por exposições à luz. A ativação do fotossensibilizador leva à formação de espécies reativas de oxigênio que são capazes de danificar lipídios, proteínas e ácidos nucléicos, provocando a morte da célula. A TFDA (terapia fotodinâmica antimicrobiana) pode ser utilizada tanto para o controle de micoses localizadas como para a eliminação de espécies patogênicas de fungos do ambiente. Neste estudo, foi avaliada a atividade fotossensibilizadora e foram testados parâmetros funcionais como concentração do fotossensibilizador (1 a 400 g mL-1); tempo de pré-incubação com o fotossensibilizador (0 a 60 min.); doses (90 e 180 kJ m-2) e intensidade de luz visível (50 W m-2) para a fotossensibilização de: (1) fotossensibilizadores comerciais atualmente utilizados na TFDA, como o azul de metileno (MB) e o azul de ortotoluidina (TBO), e (2) complexos nitrosilos de rutênio. Os experimentos foram conduzidos com conídios dos fungos-modelo Metarhizium anisopliae e Aspergillus nidulans. Tanto o MB como o TBO, na presença da luz, foram capazes de inativar os conídios das duas espécies de fungos. A inativação foi próxima de 100%, para ambas as espécies, quando a combinação apropriada (concentração do fotossensibilizador e tempo de exposição à luz) foi utilizada. Nenhum dos dois corantes, na ausência da luz, inativou os conídios das duas espécies. O tempo de pré-incubação com os fotossensibilizadores (MB e TBO) não foi um parâmetro determinante para a eficiência da fotoinativação dos conídios. De maneira geral, a inativação dos conídios foi maior nas fotossensibilizações com MB e TBO por 60 min do que nas por 30 min. Os conídios verdes e amarelos foram mais tolerantes à fotossensibilização com MB e TBO do que os conídios brancos e violetas, indicando que a pigmentação dos conídios influencia na fotoinativação. O nitrosilo de rutênio [Ru(NH.NHq)(tpy)NO](PF6)3 não foi capaz de inativar os conídios de nenhuma das espécies, em nenhuma das condições avaliadas. A fotoinativação dos conídios de M. anisopliae com MB e TBO não ocorreu quando a fotossensibilização foi conduzida em meio de cultura líquido PDB. / The significative increase of mycoses resulting from the growing number of immunocompromised individuals, from the emerging of new species of pathogenic fungi, and from the emerging of pathogens resistant to the antimycotics used nowadays is a serious public health problem. In such scenario, the development of new fungal control techniques is highly desirable. Initially developed as a therapeutical alternative for cancer, PDT (photodynamic therapy) is a process that involves the use of a photosensitizer that preferrably accumulates in the target-cells and that can be light-activated. The activation of the photosensitizer leads to the generation of reactive oxygen species that damage lypids, proteins, and DNA, and kills the cell. APDT (antimicrobial photodynamic therapy) can be used to control localized infections as well as to kill pathogenic fungi in the environment. In this study, we evaluated the photoinactivation by MB (methylene blue), TBO (toluidine blue), and nitrosyl ruthenium complexes in Metarhizium anisopliae and Aspergillus nidulans conidia. We also tested parameters such as photosensitizer concentration (1 to 400 g mL-1), pré-incubation time with the photosensitizer (0 to 60 min.), light doses (90 and 180 kJ m-2), and visible light irradiance (50 W m-2). Both MB and TBO photoinactivated the conidia of the two species of fungi. Inactivation was close to 100% for both species when the appropriate combination between photosensitizer concentration and light exposure time was used. None of the two dyes in the dark inactivated the conidia of the two species. Pre-incubation time with the photosensitizers (MB and TBO) was not a determinant parameter for photoinactivation efficiency. Conidia inactivation was higher in photosensibilizations with MB and TBO for 60 min than in those for 30 min. Green and yellow conidia were more tolerant to photosensibilization than mutants with white and violet conidia, indicating that conidia pigmentation influences photosensibilization. Nitrosyl ruthenium [Ru(NH.NHq)(tpy)NO](PF6)3 was not capable to photoinactivate conidia of any of the species, in any of the evaluated conditions. M. anisopliae conidia photoinactivation with MB and TBO did not occur when photosensibilization was conducted in PDB media.

Made available in DSpace on 2016-12-23T14:37:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Larrissa Bernardino Moro.pdf: 381207 bytes, checksum: 5b08b4099b28c73e3fab34be979d1512 (MD5) Previous issue date: 2009-12-10 / O Brasil é o primeiro produtor mundial e terceiro exportador de mamão Carica papaya L., com destaque para o Estado do Espírito Santo que responde a 70% da exportação. As condições climáticas necessárias ao desenvolvimento do mamoeiro são altamente favoráveis para a ocorrência de problemas fitossanitários, sendo a espécie Tetranychus urticae (KOCH, 1836) (Acari: Tetranychidae) uma das pragas-chave, infestando o mamoeiro durante todo o ano. Este ácaro tem sido controlado por agrotóxicos, mas o uso em larga escala destes produtos pode levar ao rápido desenvolvimento de resistência, além de serem danosos ao ambiente. A utilização de cultivares resistentes e de fungos entomopatogênicos são alternativas de controle para esta praga, reduzindo os riscos de resistência do ácaro a acaricidas e a toxicidade ao ambiente. Este trabalho avalia o desenvolvimento e reprodução de T. urticae em cultivares de mamão e verifica se essas cultivares interferem na patogenicidade de Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae e Lecanicillium longisporum. Foram utilizados quatro cultivares de mamão, dois do grupo Formosa (Tainung 01 e Calimosa) e dois do grupo Solo (Golden e Sunrise). Para iniciar o bioensaio foi transferida uma fêmea fertilizada de T. urticae ao disco de folhas e a mesma foi retirada após um período de 12 horas, deixando um ovo por disco, que foi avaliado a cada 12h, registrando-se o período de incubação, duração do estágio de imaturo, longevidade e fecundidade dos adultos e viabilidade desses estágios. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade. Para o bioensaio com fungos entomopatogênicos foram utilizadas fêmeas adultas de T. urticae provenientes da criação sobre feijão-de-porco Canavalia ensiformis (L.) e ácaros que permaneceram sobre folhas das cultivares de mamão por pelo menos uma geração. Foram transferidas dez fêmeas para as placas de Petri com disco de folha de C. ensiformis ou de C. papaya com a face abaxial voltada para cima sobre uma camada de algodão hidrófilo umedecida. Em seguida, os ácaros foram pulverizados com suspensões de conídios em Torre de Potter, utilizando-se volume de 5 mL de suspensão 5x107 conídios.mL-1. As suspensões de conídios foram preparadas a partir das formulações comerciais (Boveril® B. bassiana; Metarril® M. anisopliae; Vertirril® L. longisporum). Foi avaliada a mortalidade corrigida e confirmada. A duração do período de ovo na variedade Tainung 01 foi menor (4,0 dias) em relação às outras variedades. O mesmo ocorreu para a duração dos estágios de larva, protoninfa e período ovo-adulto entre as variedades analisadas, sendo maior para as variedades Calimosa, Sunrise e Golden. Esses resultados indicam que as variedades de mamão, Tainung 01, Calimosa, Sunrise e Golden são bons hospedeiros para T. urticae com destaque para Tainung 01, pois esta apresentou menor duração aos estágios de ovo, larva, protoninfa e período ovo-adulto. Os resultados indicaram que os fungos entomopatogênicos comerciais são promissores para o controle de T. urticae em mamoeiro. Testes de estimativa da CL50 e bioensaios em semi-campo e campo são necessários para a adoção desta tática de controle microbiano / Brazil is the worlds largest producer and third exporter of Papaya Carica papaya L., especially the state of Espírito Santo, which accounts for about 70% of exports. Climatic conditions necessary to the development of papaya are also highly favorable for the occurrence of phytosanitary problems, and the species Tetranychus urticae (Koch, 1836) (Acari: Tetranychidae) one of the key pest, infesting papaya plant throughout the year. This mite has been controlled by pesticides, but the widespread use of these products can lead to rapid development of resistance, besides being harmful to the environment. The use of resistant cultivars and entomopathogenic fungi are alternatives to control this pest, reducing the risk of mite resistance to acaricides and also the toxicity to the environment. The study was conducted to evaluate the development and reproduction of T. urticae in papaya cultivars and to verify if these cultivars interfere with the pathogenicity of Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae and Lecanicillium longisporum. Were assayed four varieties of papaya, two of the group "Formosa" (Tainung 01 and Calimosa) and two from the "Solo" (Golden and Sunrise). To initiate the bioassay, it was transferred a fertilized female T. urticae to a leaf dish and the female was removed after a period of 12 hours, leaving one egg per disc, that was evaluated every 12 hours recording the incubation period, length of immature stage, longevity and fecundity of adults and viability of these stages. Data were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey test at 5% probability. For the bioassay with entomopathogenic fungi were used adult females of T. urticae from the rearing of jack bean Canavalia ensiformis (L.) and mites that remained on leaves of cultivars of papaya for at least a generation. Ten females were transferred to Petri dishes with leaf disk of C. ensiformis or C. papaya with the abaxial side up on a layer of cotton wool moistened. After that mites were sprayed with conidial suspension in a Potter Tower, using a volume of 5 mL of inoculum suspension 5x107 conidia.mL-1. Conidial suspensions were prepared from the commercial formulations (Boveril ® B. bassiana, Metarril ® M. anisopliae; Vertirril ® L. longisporum). We evaluated the mortality corrected and confirmed. The duration of the egg in the variety Tainung 01 was smaller (4.0 days) than to the other varieties. The same occurred for the duration of the larval stages, protonymph and egg-adult period between the varieties analyzed, being higher for varieties Calimosa, Sunrise and Golden. These results indicate that the varieties of papaya, Tainung 01, Calimosa, Sunrise and Golden are good hosts for T. urticae, especially Tainung 01, which showed a shorter duration of the egg, larva, protonymph and egg-adult period. The results also indicate that the fungi are promising for commercial control of T. urticae in papaya. Tests of estimation of the CL50 bioassays and in semi-field and field are required to use this tactic of microbial control

O aumento significativo de micoses decorrentes do crescimento do número de indivíduos imunocomprometidos, da emergência de novas espécies de fungos patogênicos e do surgimento de patógenos resistentes aos antifúngicos atualmente utilizados é um sério problema de saúde pública. Nesse contexto, é extremamente desejável o desenvolvimento de novas técnicas para o controle de fungos. A TFD (terapia fotodinâmica), inicialmente desenvolvida como uma alternativa terapêutica para o câncer, é um processo que envolve a administração de um fotossensibilizador que se acumula preferencialmente nas células-alvo e que pode ser ativado por exposições à luz. A ativação do fotossensibilizador leva à formação de espécies reativas de oxigênio que são capazes de danificar lipídios, proteínas e ácidos nucléicos, provocando a morte da célula. A TFDA (terapia fotodinâmica antimicrobiana) pode ser utilizada tanto para o controle de micoses localizadas como para a eliminação de espécies patogênicas de fungos do ambiente. Neste estudo, foi avaliada a atividade fotossensibilizadora e foram testados parâmetros funcionais como concentração do fotossensibilizador (1 a 400 g mL-1); tempo de pré-incubação com o fotossensibilizador (0 a 60 min.); doses (90 e 180 kJ m-2) e intensidade de luz visível (50 W m-2) para a fotossensibilização de: (1) fotossensibilizadores comerciais atualmente utilizados na TFDA, como o azul de metileno (MB) e o azul de ortotoluidina (TBO), e (2) complexos nitrosilos de rutênio. Os experimentos foram conduzidos com conídios dos fungos-modelo Metarhizium anisopliae e Aspergillus nidulans. Tanto o MB como o TBO, na presença da luz, foram capazes de inativar os conídios das duas espécies de fungos. A inativação foi próxima de 100%, para ambas as espécies, quando a combinação apropriada (concentração do fotossensibilizador e tempo de exposição à luz) foi utilizada. Nenhum dos dois corantes, na ausência da luz, inativou os conídios das duas espécies. O tempo de pré-incubação com os fotossensibilizadores (MB e TBO) não foi um parâmetro determinante para a eficiência da fotoinativação dos conídios. De maneira geral, a inativação dos conídios foi maior nas fotossensibilizações com MB e TBO por 60 min do que nas por 30 min. Os conídios verdes e amarelos foram mais tolerantes à fotossensibilização com MB e TBO do que os conídios brancos e violetas, indicando que a pigmentação dos conídios influencia na fotoinativação. O nitrosilo de rutênio [Ru(NH.NHq)(tpy)NO](PF6)3 não foi capaz de inativar os conídios de nenhuma das espécies, em nenhuma das condições avaliadas. A fotoinativação dos conídios de M. anisopliae com MB e TBO não ocorreu quando a fotossensibilização foi conduzida em meio de cultura líquido PDB. / The significative increase of mycoses resulting from the growing number of immunocompromised individuals, from the emerging of new species of pathogenic fungi, and from the emerging of pathogens resistant to the antimycotics used nowadays is a serious public health problem. In such scenario, the development of new fungal control techniques is highly desirable. Initially developed as a therapeutical alternative for cancer, PDT (photodynamic therapy) is a process that involves the use of a photosensitizer that preferrably accumulates in the target-cells and that can be light-activated. The activation of the photosensitizer leads to the generation of reactive oxygen species that damage lypids, proteins, and DNA, and kills the cell. APDT (antimicrobial photodynamic therapy) can be used to control localized infections as well as to kill pathogenic fungi in the environment. In this study, we evaluated the photoinactivation by MB (methylene blue), TBO (toluidine blue), and nitrosyl ruthenium complexes in Metarhizium anisopliae and Aspergillus nidulans conidia. We also tested parameters such as photosensitizer concentration (1 to 400 g mL-1), pré-incubation time with the photosensitizer (0 to 60 min.), light doses (90 and 180 kJ m-2), and visible light irradiance (50 W m-2). Both MB and TBO photoinactivated the conidia of the two species of fungi. Inactivation was close to 100% for both species when the appropriate combination between photosensitizer concentration and light exposure time was used. None of the two dyes in the dark inactivated the conidia of the two species. Pre-incubation time with the photosensitizers (MB and TBO) was not a determinant parameter for photoinactivation efficiency. Conidia inactivation was higher in photosensibilizations with MB and TBO for 60 min than in those for 30 min. Green and yellow conidia were more tolerant to photosensibilization than mutants with white and violet conidia, indicating that conidia pigmentation influences photosensibilization. Nitrosyl ruthenium [Ru(NH.NHq)(tpy)NO](PF6)3 was not capable to photoinactivate conidia of any of the species, in any of the evaluated conditions. M. anisopliae conidia photoinactivation with MB and TBO did not occur when photosensibilization was conducted in PDB media.

Conídios são estruturas especializadas, produzidas assexuadamente pelo micélio de muitas espécies de ascomicetos. A produção dos conídios requer o controle espacial e temporal da expressão gênica e a formação de estruturas específicas durante o desenvolvimento. Os conídios estão envolvidos na reprodução, dispersão e persistência ambiental dos fungos. Em espécies patogênicas como Aspergillus fumigatus e Metarhizium anisopliae, os conídios também são responsáveis pela infecção do hospedeiro. Um dos principais fatores ambientais capazes de matar e / ou danificar os conídios é a radiação solar. Os dímeros de pirimidina ciclobutano (CPDs) são os principais fotoprodutos do DNA induzidos pela radiação UVB. Os principais objetivos deste trabalho foram: (1) estimar as frequências de CPDs em conídios expostos a doses subletais de radiação UVB, (2) correlacionar a frequência de CPDs com a cinética de germinação dos conídios, (3) comparar a frequência de CPDs em conídios selvagens com a frequência em conídios mutantes para a pigmentação, (4) identificar genes diferencialmente expressos durante as fases da conidiogênese de A. fumigatus e (5) identificar genes modulados pela radiação UVB em micélio jovem de A. fumigatus. Conídios de M. anisopliae, A. nidulans e A. fumigatus foram expostos à irradiância de 1000 mW m-2 de UVB por 15, 30, 60 e 90 min. As doses totais ao final das exposições foram 0,9, 1,8, 3,6 e 5,4 kJ m-2. O aumento na frequência de CPDs foi linear e diretamente proporcional à dose, com 0,215, 0,455, 0,803 e 1,628 CPDs 10 kb-1 induzidos pelas doses de 0,9, 1,8, 3,6 e 5,4 kJ m-2 em A. fumigatus, 0,037, 0,077, 0,142 e 0,202 CPDs 10 kb-1 em A. nidulans e 0,041, 0,085, 0,155 e 0,255 CPDs 10 kb-1 em M. anisopliae. A frequência de CPDs no mutante albino de M. anisopliae (0,552 10 kb-1) foi aproximadamente dez vezes maior do que na linhagem selvagem (0.057 10 kb-1) após exposição à dose de 1,8 kJ m-2. Esta é a primeira evidência direta de que a pigmentação dos conídios protege o DNA contra os danos induzidos pela radiação UVB. Microarranjos genômicos de DNA foram utilizados para comparar os transcriptomas de micélios com 20 h (início da conidiogênese), 24 h (fase intermediária) e 25 h (fase final) com o transcriptoma de micélio jovem. Foram identificados 34 genes diferencialmente expressos (7 com aumento e 27 com diminuição) com 20 h de desenvolvimento, 101 genes (12 com aumento e 89 com diminuição) com 24 h e 76 genes (oito com aumento e 68 com diminuição) com 25 h. Alguns genes que apresentaram aumento na expressão (stuA e o gene da scytalone dehydratase) já haviam sido associados com fases específicas da conidiogênese, entretanto a maioria dos genes que apresentou aumento na expressão não tem função conhecida. A análise de transcriptomas com microarranjos de DNA também foi utilizada para identificar genes com expressão modulada por exposições à radiação UVB (1,8 kJ m-2) em micélio jovem de A. fumigatus. Foram identificados 101 genes diferencialmente expressos ao final da exposição à radiação UVB (51 genes com aumento e 50 com redução). O gene radc apresentou o maior aumento na expressão (aproximadamente 16 ×). A maioria dos genes com aumento na expressão não possui função conhecida. Foram identificados 418 genes diferencialmente expressos 30 min após o termino da exposição (51 genes com aumento e 367 com redução na expressão). / Conidia are specialized structures produced asexually during mycelia growth of many ascomycete species. The process of conidiation involves temporal and spatial regulation of gene expression, cell specialization, intercellular communication, and formation of specific structures during fungal growth. Conidia are responsible for the reproduction, dispersal and environmental persistence of many fungal species. In pathogenic species like Aspergillus fumigatus and Metarhizium anisopliae, conidia are also responsible for host infection. One of the main environmental factors that can kill and/or damage conidia is solar UV radiation. Cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs) are the major DNA photoproducts induced by UVB. The principal goals of the present study were to: (1) estimate the frequency of CPDs induced by sublethal doses of UVB radiation in conidial DNA of three selected ascomycetes, (2) examine correlation of CPD frequencies with germination speed, and (3) estimate the protective effect of the wild-type green conidial pigmentation on DNA in M. anisopliae var. anisopliae, (4) identify differentially expressed genes during the different phases of A. fumigatus conidiogenesis and (5) identify genes regulated by UVB radiation in A. fumigatus young mycelia. A. fumigatus, A. nidulans, and M. anisopliae conidia were exposed to 1000 mW m-2 UV irradiance for 15, 30, 60 and 90 min. Total Quaite-weighted doses were 0.9, 1.8, 3.6 and 5.4 kJ m-2, respectively. The frequencies of dimers were linear and directly proportional to the doses, with 0.215, 0.455, 0.803 and 1.628 CPDs 10 kb-1 detected at the doses of 0.9, 1.8, 3.6 and 5.4 kJ m-2 in A. fumigatus, 0.037, 0.077, 0.142 and 0.202 CPDs 10 kb-1 in A. nidulans, and 0.041, 0.085, 0.155 and 0.255 CPDs 10 kb-1 in M. anisopliae. The frequency of dimers in the M. anisopliae albino mutant DWR 180 (0.552 10 kb-1) was approximately ten times higher than of the wild-type ARSEF 23 strain (0.057 10 kb-1) after exposure to doses of 1.8 kJ m-2. DNA microarrays carrying sequence of 11,000 genes of A. fumigatus were used to compare transcriptomes of 20 h-old mycelia (initial phase of the conidiogenesis), 24 h (intermediate phase) e 25 h (final phase) with young mycelia transcriptome. Thirty-four genes displayed a statistically significant difference in expression (7 with increase and 27 with decrease mRNA expression) in 20 h-old mycelia, 101 genes (12 with increase and 89 with decrease) in 24 h-old mycelia and 76 genes (8 with increase and 68 with decrease) in 25 h-old mycelia. Some overexpressed genes (stuA ad the scytalone dehydratase gene) were previously related to specific phases of conidiogenesis but the function of most of them is unknown. Transcriptome analysis using microarrays was also used to identify genes modulated by exposures to UVB radiation (1,8 kJ m-2) in A. fumigatus young mycelia. One hundred and one differentially expressed genes were identified at the end of the exposure to UVB radiation (51 genes with increase and 50 with decrease). The radc gene displayed the higher increase in expression (approximately 16 ×). The function of most of the overexpressed genes is unknown. Four hundred and eighteen differentially expressed genes were identified 30 min after the end of exposure (51 genes with increase and 367 with decrease in expression).

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-04-26T19:53:52Z No. of bitstreams: 1 2012 - Simone Quinelato Bezerra.pdf: 1703088 bytes, checksum: c39ad4f0bc5fb8b05085a7e4684060b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T19:53:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012 - Simone Quinelato Bezerra.pdf: 1703088 bytes, checksum: c39ad4f0bc5fb8b05085a7e4684060b9 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / FAPERJ / Aiming to decrease the chemicals acaricide use and their damages, new alternatives for ticks control has been studied. Metarhizium anisopliae s.l. is one of the most studied fungi in agricultural pest management programs, since it has great acaricide potential. Therefore, this study aimed to characterize molecular and morphologically, as well as evaluate the virulent potential of 30 M. anisopliae s.l. isolates from different geographical regions, hosts or substrates allowing the selection of virulent isolates in order to be further investigated for field programs of microbial control of pests. Initially, the analyses of morphological characterizations of the isolates were made to confirm their identification. Each isolate had its conidial potential production evaluated. The colonies studied showed morphological characteristics consistent with those described in the literature. The colonies diameter varied between 29.66 mm and 51.33 mm among isolates. There was both length and width variation in the conidia and phialides in the same isolate, as well as the presence of grouped and solitary phialides. The conidial production potential was variable among isolates, but both conidial size and colonies diameter did not influence the conidial production; isolates with low conidial production showed similar colony size in comparison to isolates with high potential. In a second stage of the study, the virulence of these isolates was evaluated to Rhipicephalus microplus larvae treated with one of the four different conidial concentrations (105, 106, 107 or 108 conidia.mL-1). The lethal action of Brazilian M. anisopliae s.l isolates to R. microplus larvae were confirmaded with high mortality among the isolates, which in general was proportional to the conidia concentration of the treatments. Most isolates killed larvae population with 107 conidia.mL-1 concentration, however the most virulent isolates presented lethal concentration of 106 conidia.mL-1 with main percentages of mortality nearly 100% at day 20 after treatment. In addition, the genetic variability of these isolates was performed to evaluate their relationship with other species of Metarhizium sp. through RFLP-PCR analysis and ITS1-5.8S-ITS2 rDNA sequencing. No specificity pattern was observed when isolates from the same region, host or substrate were grouped. Low genetic variability was observed among isolates, which were basically grouped into two groups. The CG 344 isolate was shown to be genetically distant from the remaining Brazilian isolates studied, but according to the ?GenBank? sequences comparison, it was related to the Metarhizium genus. It is suggested that this variation occured owing the lack of procedures that could generated morphological and molecular changes, which probably contribute to this low genetic variability. The present study allowed the detection of M. anisopliae s.l. isolates with highly virulence to R. microplus larvae, that may be considered potential biocontrol agents for this tick species, emphasizing the importance of molecular tools for identification and characterization of fungal isolates, ensuring the product quality, their success implement and the environmental track of the fungi at field biological control programs. / Na tentativa de diminuir a utiliza??o de produtos qu?micos e os danos por eles causados, novas alternativas para o controle de carrapatos vem sendo estudadas. O fungo Metarhizium anisopliae ? um dos mais estudados em programas agropecu?rios de manejo de pragas, pois apresenta grande potencial acaricida. Baseado nisso, o presente estudo objetivou a caracteriza??o morfol?gica, molecular e a avalia??o da virul?ncia de 30 isolados brasileiros de M. anisopliae s.l. provenientes de diferentes regi?es geogr?ficas, hospedeiros ou substratos, com a finalidade de selecionar isolados mais virulentos para utiliza??o em futuros programas de biocontrole de carrapatos. Inicialmente os isolados foram caracterizados morfologicamente para confirma??o de sua identifica??o, tamb?m sendo avaliado o potencial de produ??o de con?dios de cada isolado. As col?nias estudadas apresentaram caracter?sticas morfol?gicas compat?veis com as descritas na literatura. O tamanho das col?nias variou entre 29,66 mm e 51,33 mm de di?metro. Houve varia??o no comprimento e na largura de con?dios e fi?lides num mesmo isolado, assim como a presen?a de fi?lides agrupadas e solit?rias. O potencial de produ??o de con?dios foi vari?vel entre os isolados, por?m tanto o tamanho dos con?dios quanto o di?metro das col?nias n?o influenciaram a produ??o de con?dios. Numa segunda etapa do estudo, foi avaliada a virul?ncia destes isolados sobre larvas de Rhipicephalus microplus tratadas com uma das quatro diferentes concentra??es de con?dios (105, 106, 107 ou 108 con?dios/mL). Foi confirmada a a??o letal dos isolados brasileiros de M. anisopliae s.l. sobre larvas de R. microplus, geralmente ocorrendo de forma diretamente proporcional a concentra??o conidial dos tratamentos. A maioria dos isolados ocasionou a morte de metade da popula??o de larvas com a concentra??o de 107 con?dios/mL; os isolados mais virulentos apresentaram esta concentra??o letal com 106 con?dios/mL, com percentuais m?dios de mortalidade de larvas pr?ximos de 100% ao 20? dia ap?s tratamento. Al?m disso, buscou-se avaliar a variabilidade gen?tica destes isolados e sua rela??o com outras esp?cies do g?nero Metarhizium atrav?s da an?lise de RFLP-PCR e do sequenciamento da regi?o ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA. N?o foi observado um padr?o de especificidade para o agrupamento entre isolados oriundos de mesma regi?o, hospedeiro ou substrato. Foi observada variabilidade gen?tica entre os isolados que basicamente se agruparam em dois grupos. O isolado CG 344 mostrou-se geneticamente distante de todos os outros, mas de acordo com a compara??o com sequ?ncias obtidas do ?GenBank? mostrou-se relacionado ao g?nero Metarhizium. Esta varia??o pode ser devido ao fato deste isolado ter sido poupado de processos que gerassem altera??es morfol?gicas e moleculares, o que possivelmente contribuiu para a pequena variabilidade gen?tica obsevada. O presente estudo possibilitou a detec??o de isolados brasileiros de M. anisopliae s.l. com elevada virul?ncia para larvas de R. microplus, podendo ser considerados potenciais agentes no biocontrole desta esp?cie de carrapato, ressaltando a import?ncia da utiliza??o de ferramentas moleculares para identifica??o e caracteriza??o destes isolados, contribuindo para a qualidade do produto, o sucesso de sua aplica??o e o monitoramento de um isolado introduzido no ambiente com finalidade de controle biol?gico.

Laboratory bioassay was used to determine the pathogenicity of nine isolates of fungi of the genera Metarhizium, Beauveria and Clonostachys to the parasitic mite, Varroa destructor. All nine isolates were pathogenic to V. destructor with Metarhizuim anisopliae UAMH 9198, Clonostachys rosea UAMH 9161 and Beauveria bassiana GHA being the most pathogenic within their respective species. Metarhizium anisopliae UAMH 9198 was more lethal to V. destructor than B. bassiana GHA and C. rosea UAMH 9161 with LC50 values of 1.6 x 10(5), 9.6 x 10(6) and 5.4 x 10(6) conidia/mL, respectively. Metarhizium anisopliae and B. bassiana significantly affected brood and adult honey bee survivorship and their immune responses. They were lethal to the bees with LC50s of 3.70 x 10(6) and 2.62 x 10()5 conidia/mL, respectively. The effect of temperature and thymol on conidia germination, production and colony growth of the fungal isolates was determined. Temperature significantly affected conidia germination, production and colony growth (P < 0.05) but thymol did not. Efficacy of the two most promising isolates (M. anisopliae UAMH 9198 and B. bassiana GHA) as potential bio-control agents against V. destructor in hives was evaluated. Fungal inocula were applied as dry formulation, with corn flour as carrier, using dispenser tray and dusting applications. Treatments were either applied alone or in combination with thymol to determine any synergistic effects. All treatments significantly increased mite mortality (P < 0.05), however, the mite control efficacy varied between fungal treatments and application methods. Combined treatments of fungi and thymol caused significantly higher mite mortality than single fungal treatments, which showed control levels of ≤61%. Significant differences in mite mortality were found between the two delivery methods with the differences depending on the fungal isolate. The results suggest that M. anisopliae UAMH 9198 would be a more effective bio-control agent for the management of V. destructor in honey bee colonies than the other isolates tested when dispensed continuously in hives using delivery methods such as a dispenser tray. However, future research is needed to improve delivery methods and investigate the effect of carriers used in the formulation on the efficacy of such entomopathogenic fungi. / Ontario Ministry of Agriculture and Food (OMAF), University of Guelph

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-13Bitstream added on 2014-06-13T19:37:23Z : No. of bitstreams: 1 dalpogetto_mhfa_me_botfca.pdf: 18196299 bytes, checksum: ea89d33ee01e71be451e6bab9eb9abe0 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial de controle de alguns produtos comerciais de fungos entomopatogênicos disponíveis no mercado, bem como o desenvolvimento dos fungos Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae e Lecanicillium longisporum sobre ninfas de Glycaspis brimblecombei (Hemiptera: Psyllidae). Para tanto, foram realizados ensaios em laboratório com pulverização de suspensões fúngicas de 1 x 104, 1 x 105, 1 x 106, 1 x 107 e 1 x 108 conídios/mL dos bioinseticidas Boveril WP, Toyobo e Mycotrol (B. bassiana), Metarril WP e Toyobo (M. anisopliae) e Vertirril WP (L. longisporum) nas ninfas do inseto. Nos bioensaios de semicampo estes produtos foram aplicados na forma pulverizada e polvilhada sobre mudas infestadas por ninfas de G. brimblecombei. As avaliações para o bioensaio de laboratório foram realizadas aos um, três, cinco e sete dias após a pulverização, enquanto no ensaio de semicampo as avaliações foram realizadas apenas sete dias após a aplicação dos produtos. O desenvolvimento dos fungos sobre os insetos foi avaliado mediante a observação dos insetos em microscópio óptico a 0, 24, 48, 72 e 148 horas após a aplicação dos fungos. No bioensaio de laboratório os produtos que apresentaram as maiores mortalidades na maior concentração foram L. longisporum (Vertirril WP), B. bassiana (Mycotrol e Boveril WP) e M. anisopliae (Metarril WP), com mortalidades acima de 70%. As maiores porcentagens de mortalidade confirmada foram observadas para os tratamentos com maior porcentual de mortalidade total, destacando-se o produto Mycotrol que obteve 70% dos indivíduos esporulados nas concentrações de 1 x 106, 1 x 107 e 1 x 108 conídios/mL. Em semicampo os produtos M. anisopliae (Metarril WP) aplicado em pulverização e M. anisopliae e B. bassiana (Toyobo) aplicados em polvilhamento apresentaram eficiência em torno de 70%. Na avaliação do ciclo... / This study aimed to evaluate the potential control of some commercial entomopathogenic fungi products available in the market and the development of Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae and Lecanicillium longisporum on nymphs of Glycaspis brimblecombei. The insecticides Boveril WP, Toyobo and Mycotrol (B. bassiana), Metarril and Toyobo WP (M. anisopliae) and Vertirril WP (L. longisporum) were tested in laboratory spraying fungal suspensions with 1 x 104, 1 x 105, 1 x 106, 1 x 107 and 1 x 108 conidia/mL on insect nymphs. In the semi field bioassays, these products were used in dust and sprayed forms on plants infested by nymphs of G. brimblecombei. The evaluations in laboratory bioassay were made at one, tree, five and seven days after spraying, and semi field test the assessments were carried out seven days after products application. The fungi development on insects was evaluated by observing of nymphs in optical microscope at 0, 24, 48, 72 and 148 hours after application. In laboratory bioassay the bioinsecticides had highest mortality in highest concentration were L. longisporum (Vertirril WP), B. bassiana (Mycotrol and Boveril WP) and M. anisopliae (Metarril WP), with mortality rates above 70%. The highest percentages of confirmed mortality were obtained in most effective treatments, especially to Mycotrol which obtained 70% of individuals sporulated at concentrations of 1 x 106, 1 x 107 and 1 x 108 conidia/mL. In semi field bioassay, M. anisopliae (Metarril WP) applied in spraying and M. anisopliae and B. bassiana (Toyobo) applied... (Complete abstract click electronic access below)

O carrapato Rhipicephalus microplus é o principal ectoparasita de bovinos. O controle de R. microplus baseia-se principalmente no uso de acaricidas químicos, o que contribuiu para o problema emergente da seleção de populações de carrapatos resistentes. Portanto, há a necessidade do desenvolvimento de métodos mais eficientes/sustentáveis de controle, como o controle biológico utilizando fungos acaropatogênicos. A eficácia do fungo Metarhizium anisopliae de forma isolada ou em associação com acaricida químico para controle do carrapato bovino já foi evidenciada em condições de campo utilizando uma cepa de carrapatos resistente à acaricidas. No entanto, pouco se sabe sobre os mecanismos moleculares de R. microplus envolvidos na sua interação com M. anisopliae e com acaricidas. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta de larvas de R. microplus expostas ao fungo, ao acaricida e à associação de ambos. Primeiramente foi realizado um estudo para determinar a metodologia mais indicada para avaliar o efeito in vitro do fungo M. anisopliae sobre larvas de R. microplus. Para isso, comparamos o Teste de Pacote de Larvas modificado (TPL) e o Teste de Imersão de Larvas (TIL). Os valores de tempo letal mediano (TL50) obtido na maior concentração de M. anisopliae (108conídios/mL) foram 24,8 e 9,2 dias para o TPL e TIL, respectivamente. A mortalidade após 21 dias foi de 38% e 98% para o TPL e TIL respectivamente, na mesma concentração. O TIL demonstrou ser o teste mais indicado a ser utilizado, sendo, portanto, escolhido para realização dos experimentos futuros. Em seguida foi realizado um estudo para comparar a suscetibilidade de diferentes isolados de R. microplus ao fungo M. anisopliae. Foram avaliados 67 isolados de campo. Para tanto, as larvas de R. microplus foram imersas em uma suspensão de M. anisopliae (108conídios/mL) durante 5 min. Os tempos letais medianos (TL50) variaram de 2,6 a 24,9 dias A mortalidade observada no 15º dia após o tratamento variou de 26,3 a 100% nas amostras testadas. Esses resultados demonstraram que as populações de campo de R. microplus apresentam uma alta variação em sua suscetibilidade a M. anisopliae. Por fim, foi realizada uma análise transcricional (RNAseq) de larvas de R. microplus expostas a M. anisopliae, cipermetrina, associação de ambos e do controle (não-tratado). A análise dos transcritos dos quatro grupos gerou um total de 507.792 sequências com um tamanho total de 303.160.891 pb. Foram encontrados 31 genes diferencialmente expressos no grupo controle quando comparado com M. anisopliae, 39 com cipermetrina e 73 com M. anisopliae + cipermetrina. M. anisopliae e o grupo da associação apresentaram 81 genes diferencialmente expressos e M. anisopliae e cipermetrina, 46. Houve 177 genes diferencialmente expressos ao comparar M. anisopliae + cipermetrina com larvas expostas à cipermetrina Os resultados deste estudo demonstraram que a associação M. anisopliae + cipermetrina aumentou a expressão de genes relacionados a resposta à agressão, provavelmente pelo fato da associação provocar uma agressão maior ao carrapato e este responder de forma mais rápida, levando à superexpressão de genes de defesa. As descobertas deste estudo fornecem informações sobre as vias e mecanismos moleculares de R. microplus ativados em resposta à interação de M. anisopliae e a acaricida. Além disso, esses estudos estabelecem as bases para pesquisas futuras sobre genes-chave que controlam a suscetibilidade de R. microplus a M. anisopliae. O sinergismo evidenciado em nossos estudos comprova a ideia de que o controle integrado, utilizando o controle biológico com o controle químico é uma opção tanto para o controle de cepas de carrapatos resistentes à acaricidas, quanto para um controle mais rápido de cepas de carrapatos que não apresentam resistência ou que apresentem resistência intermediária. / The tick Rhipicephalus microplus is the major cattle ectoparasite. The control of R. microplus is based mainly on the use of chemical acaricides, which contributed to the emerging problem of the selection of tick populations resistant to acaricides. Therefore, there is a need for the development of more efficient/sustainable methods of control, such as biological control using acari pathogenic fungi. The effectiveness of the fungus Metarhizium anisopliae alone or in association with chemical acaricide to control the bovine tick has already been evidenced under field conditions using an acaricide resistant tick strain. However, to date, little is known about the molecular pathways of R. microplus involved with its interaction with M. anisopliae and with acaricides. Thus, the aim of the present study is to evaluate the response of R. microplus larvae exposed to the fungus, the acaricide and the association of both. Firstly, a study was carried out to determine the most appropriate methodology to evaluate the in vitro effect of the fungus M. anisopliae on larvae of R. microplus tick. For this, we compared the Modified Larval Packet Test (LPT) and the Larval Immersion Test (LIT). The values of lethal time (LT50) obtained in the highest concentration of M. anisopliae (108conidia / mL) were 24.8 and 9.2 days for LPT and LIT, respectively. Mortality after 21 days was 38% and 98% for LPT and LIT, respectively, at the same concentration. The LIT proved to be the most indicated test to be used and was therefore chosen to carry out the following experiments Then, a study was performed to compare the susceptibility of different R. microplus isolates to M. anisopliae fungus. Sixty-seven field isolates were evaluated. For this, R. microplus larvae were immersed in a suspension of M. anisopliae (108conidia/mL) for 5 min. Lethal times (LT50) ranged from 2.6 to 24.9 days. Mortality observed on the 15th day after treatment ranged from 26.3 to 100% in the tested samples. These results demonstrated that R. microplus field populations showed a high variation in their susceptibility to M. anisopliae. Finally, a RNAseq analysis of R. microplus larvae exposed to M. anisopliae, cypermethrin, association of both or untreated (control) was performed. Analysis of the transcripts of the four groups generated a total of 507,792 sequences with a total length of 303,160,891 bp. We found 31 differentially expressed genes in the control group when compared to M. anisopliae, 39 with cypermethrin and 73 with M. anisopliae + cypermethrin. M. anisopliae and the association group had 81 differentially expressed genes and M. anisopliae and cypermethrin, 46 There were 177 differentially expressed genes when comparing M. anisopliae + cypermethrin with cypermethrin exposed larvae. The results of this study demonstrated that the association of M. anisopliae + cypermethrin increased the expression of genes related to response to aggression, possibly because the M. anisopliae + cypermethrin association causes a greater aggression to the tick and, then it could respond quickly, leading to overexpression of defense genes. The findings of this study provide information on the pathways and molecular mechanisms of R. microplus in response to the interaction of M. anisopliae and acaricides. In addition, these studies establish the basis for future research on key genes that control the susceptibility of R. microplus to M. anisopliae. The synergism evidenced in our studies confirms the idea that integrated control using biological control and chemical control is an option both for the control of acaricide resistant tick strains and for a faster control of tick strains that do not show resistance or exhibit intermediate resistance.

Orientador: João Cláudio Thoméo / Coorientador: Fernanda Perpétua Casciatori / Banca: Vanildo Luiz Del Bianchi / Banca: Fabio Bentes Freire / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo principal o desenvolvimento de um biorreator de bandeja capaz de produzir esporos do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae. Para esse fim, foi utilizado um biorreator de bandeja para a produção de esporos, que por sua vez foi avaliada em função da carga de substrato empregada. As variações de temperatura no biorreator foram simuladas e observadas experimentalmente. Para o desenvolvimento do biorreator, inicialmente foram realizados ensaios em embalagens plásticas contendo 10g e 500g de substrato, de modo a avaliar como o aumento da carga de meio fermentativo poderia influenciar na produção de esporos. Nestes ensaios, foram medidas as temperaturas no centro geométrico das embalagens e a elevação de temperatura foi relacionada à produção de esporos. Realizou - se uma análise de área superficial do arroz tipo 1 e da quirera de arroz para avaliar a interferência desta propriedade na produção de esporos. A partir dos resultados em embalagens plásticas foram realizados experimentos em um biorreator de 40 cm de comprimento, 29 cm de largura por 12 cm de altura, escoando ar sobre as partículas no sentido da maior dimensão. Foram empregadas cargas de 1, 2 e 3kg de arroz tipo 1, correspondente à altura de leito de 2, 4 e 6 cm, respectivamente, e 1 kg de quirera, correspondendo a 2 cm de altura. A temperatura nas posições de entrada e saída de ar e no meio geométrico do meio de cultivo foram medidas ao longo dos ensaios. A fermentação nas embalagens plásticas e no biorreator foram realizadas a 28oC. Para estimar a geração de calor metabólico do meio de cultivo, foram coletados dados de consumo de O2 e liberação de CO2 durante o período de incubação. Para tal, foi realizada a fermentação em um biorreator de leito empacotado cilíndrico, sendo os gases provenientes do leito e conduzidos a um analisador de... / Abstract: This study aimed to develop a bioreactor tray capable of producing spores of the fungus Metarhizium anisopliae entomopathogenic. To this end, we used a tray bioreactor for the production of spores, which in turn was evaluated according to the employed substrate load. Temperature variations in the bioreactor were simulated and observed experimentally. For the development of bioreactor assays were carried out in plastic bags containing substrate 10g and 500g in order to evaluate how increasing fermentative medium loading could influence the production of spores. In these tests we measured the temperature at the geometric center of the packages and the temperature rise was related to spore production performed -. A surface area analysis of rice Type 1 and broken rice to evaluate the interference at this property in the production of spores. From the results in plastic containers experiments were performed in a bioreactor of 40 cm long, 29 cm wide by 12 cm, air flowing onto the particles in the direction of the largest dimension. Loads were applied to 1, 2 and 3 kg of rice type 1, corresponding to the bed height of 2, 4 and 6 cm, respectively, and 1 kg of grits, corresponding to 2 cm. The temperature at the inlet position and the air outlet and the geometric mean of the culture medium were measured throughout the tests. Fermentation in plastic packaging and the bioreactor were carried out at 28 C. To estimate the generation of metabolic heat of culture medium were collected consumption data The O2 and CO2 release during the incubation period. To this end, the fermentation was performed in a bioreactor cylindrical packed bed, and the gases from the bed and driven to a gas analyzer. A onedimensional mathematical model capable of predicting the temperature profile and fungal growth during the process at any position of the bioreactor is proposed. The experimental results in plastic ... / Mestre