A FDA tem incentivado a indústria farmacêutica a implantar no seu sistema de controle de qualidade métodos rápidos para avaliação do produto durante seu processo de produção e/ou na sua forma final para comercialização. Na indústria farmacêutica, o doseamento microbiológico é amplamente utilizado pelo setor de Controle de Qualidade com objetivo de avaliar a eficácia e segurança do medicamento produzido, principalmente no que diz respeito a produção de antibióticos. No caso desses, a aplicabilidade de métodos rápidos é de suma importância a fim de se obter uma avaliação rápida e confiável do produto, garantindo assim a comercialização de medicamentos com a qualidade e segurança necessárias para o sucesso do tratamento terapêutico. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar método para doseamento microbiológico de nistatina, com leitura cinética em microplaca, perfeitamente intercambiável com o método tradicional de difusão em ágar, porém com redução do tempo de execução e de liberação do resultado final. Os parâmetros definidos para este ensaio foram: utilização de inóculo com 5% de Candida albicans (ATCC 10231), meio de cultura líquido, tempos de 48 horas para crescimento do micro-organismo e 8 horas para leitura das micro-placas, , temperatura de análise de 30 °C e absorbância de 630 nM. Os parâmetros avaliados no processo de validação, de acordo com os códigos oficiais vigentes, demonstraram que o método é sensível, robusto, linear (r = 0,97332), precisão (repetibilidade: 96 %, DPR= 6 % / precisão intermediária: 97 %; DPR = 7 %) e exato ( 97 %, DPR = 7 %). Em comparação ao método de difusão em ágar tradicional, o método desenvolvido demonstrou a mesma eficiência do método já utilizado, contemplando todos os parâmetros do processo de validação, com a vantagem de ser realizado em menor tempo e com o uso reduzido de material de análise, como meio de cultura, padrão e amostra. Em função disso, pode-se concluir que o método desenvolvido e validado além de representar uma tendência mundial, por ser efetuado de modo rápido, eficaz e econômico, é perfeitamente aplicável a rotina laboratorial. / The FDA have been encouraging the pharmaceutical industry to deploy in their system of quality control a rapid method for assessment of the product during its production process and/or in their final form for sale. In the pharmaceutical industry, the microbiological assay is widely used by the Quality Control sector to evaluate the efficacy and safety of the product produced, especially as regards the production of antibiotics. In such case, the applicability of rapid methods is very important in order to obtain a rapid and reliable evaluation of the product, thus ensuring the marketing of medicinal products with the quality and security necessary for the success of therapeutic treatment. The aim of this study was to develop and validate an method for the microbiological assay of Nystatin with kinetic micro-plate reading, perfectly interchangeable with the traditional method of agar diffusion, but with reduced time for implementation and release of the final result. The parameters set for this assay were using 5 % inoculum of Candida albicans (ATCC 10231), liquid culture medium, time of 48 hours for growth of micro-organisms and 8 hours for reading the micro-plate temperature analysis of 30 °C and absorbance of 630 nM. The parameters evaluated in the validation process, according to the current official codes, shows that the method is sensitive, robust, linear (r = 0,97332), precision (repeatability: 96 %, RDS = 6 % / inter-day precision = 97 %, RSD = 7%) and accurate (97 %, RDS = 7%). Compared to the traditional method of diffusion in agar, the developed method demonstrated the same efficiency of the method already used, covering all parameters of the validation process, with the advantage of being performed in less time and with reduced use of material for analysis, as the culture medium and standard sample. As a result, it can be concluded that the method developed and validated besides representing a global trend, being made fast, effective and economical way, is perfectly applicable to routine clinical practice.

Foram comparados procedimentos laboratoriais diretos e indiretos aplicados ao diagnóstico da brucelose canina causada por Brucella canis. Foram examinados 196 cães, os quais foram classificados em infectados, suspeitos e não infectados, de acordo com resultados obtidos no cultivo microbiológico em amostras de sangue, sêmen e swab vaginal, no exame clínico e de acordo com dados epidemiológicos. Os resultados obtidos nos exames laboratoriais foram correlacionados com os resultados dos exames clínicos. As técnicas laboratoriais empregadas foram soroaglutinação rápida (SAR), soroaglutinação rápida com emprego do 2-mercaptoetanol (SAR-2ME), imunodifusão em gel de ágar (IDGA), cultivo microbiológico e PCR em amostras de sangue, sêmen e swab vaginal. Foram observados 41,83% de positivos pela SAR, 14,28% pela SAR-2ME, 28,14% pela IDGA, 32,14% pela hemocultura, 19,6% pelo cultivo microbiológico de sêmen, 4,82% pelo cultivo microbiológico de swab vaginal, 33,16% pela PCR em sangue, 33,33% pela PCR em sêmen e 26,89% pela PCR em swab vaginal. Os valores de sensibilidade das provas de SAR, SAR-2ME, IDGA, PCR em sangue e PCR em swab vaginal foram respectivamente de 81,25%; 42,18%; 75%; 89,06% e 54%. A especificidade dos métodos de SAR, SAR-2ME, IDGA, PCR em sangue e PCR em swab vaginal foram respectivamente de 81,25%; 100%; 100%; 97,21% e 97,14%. Nos cães machos, as proporções de resultados positivos diagnosticados pelo cultivo microbiológico de sêmen foram semelhantes às observadas pelos demais métodos de diagnóstico utilizados. As proporções de resultados positivos obtidos pelas técnicas de SAR, SAR-2ME, IDGA, hemocultura, PCR em sangue e cultivo de swab vaginal foram maiores dentre os animais que apresentaram sinais clínicos sugestivos de brucelose. Não houve associação entre a presença de sinais clínicos de brucelose e resultados positivos pelo cultivo microbiológico de sêmen e PCR em amostras de sêmen e swab vaginal. / Nine laboratory tests used for Brucella canis infection diagnosis in 196 dogs were evaluated: rapid slide agglutination test (RSAT), 2-mercaptoetanol rapid slide agglutination test (2ME-RSAT), agar gel immunediffusion test (AGID), microbiological culture of blood, semen and vaginal swab and PCR in blood, semen and vaginal swab samples. The results of the laboratorial tests used were compared to the results of clinical examination. A total of 41,83% of positives were detected by rapid slide agglutination test, 14,28% by 2-mercaptoetanol rapid slide agglutination test, 28,14% by agar gel immunediffusion test, 32,14% by blood culture, 19,6% by culture of semen, 4,82% by vaginal swab culture, 33,16% by PCR in blood samples, 33,33% by PCR in semen and 26,89% by PCR in vaginal swab samples. The sensitivity of RSAT, 2ME-RSAT, IDGA, PCR in blood and vaginal swab samples was respectively 81,25%; 42,18%; 75%; 89,06% and 54%. The specificity of RSAT, 2ME-RSAT, IDGA, PCR in blood and vaginal swab samples was respectively: 81,25%; 100%; 100%; 97,21% e 97,14%. In male dogs, the proportion of positive results detected by microbiological culture of semen was similar to the proportion of positive results detected by RSAT, AGID and blood culture, but the proportion was lower than that detected by PCR in semen. A higher proportion of positives were detected by RSAT, 2ME-RSAT, AGID, blood culture, PCR in blood samples and culture of vaginal swab, in animals presenting clinical signs of brucellosis. No association was observed between the presence of clinical signs of brucellosis and positive results by culture of sêmen and PCR in semen and vaginal swab samples.

Diversos estudos têm demonstrado que a pesquisa de microrganismos em águas de esgoto representa um importante parâmetro de avaliação e caracterização de possíveis agentes patogênicos circulantes numa determinada população e suas possíveis implicações à saúde pública. O presente trabalho teve por objetivos pesquisar nas águas de esgoto da cidade de São Paulo a ocorrência do protozóario emergente, Cryptosporidium spp, comparando-se duas técnicas de concentração, uma vez que não existem estudos relacionados a presença deste patógeno neste município, e determinar à presença de Salmonella spp e seus sorotipos nestas amostras. Para isto foram realizadas coletas semanais nos períodos de Julho à Dezembro de 1998, sendo doze realizadas em uma estação elevatória e doze em um córrego receptor de esgoto no município de São Paulo, aonde foi também determinada a poluição de origem fecal através da densidade de E.coli. Para determinação dos oocistos de Cryptosporidium as amostras foram concentradas por “floculação e precipitação do carbonato de cálcio" (Vesey et alii, 1993) e através da técnica da “membrana filtrante" (Aldom et alii, 1995) com posterior identificação e confirmação por imunofluorescência direta e contraste de fase, respectivamente. A determinação de Salmonella foi realizada segundo “Stantard Methods of Water and Wastewater 19th ed.". Para a determinação de coliformes totais e E. coli utilizou-se a técnica de tubos múltiplos, empregando substrato cromogênico e fluorogênico (Colilert 18, Iddex). Os resultados obtidos da análise de 24 amostras indicaram que 100% destas foram positivas tanto para a presença dos oocistos de Cryptosporidium sp quanto para o isolamento de Salmonella sp. O número de oocistos detectados variou de 0 a 1.200 e de 0 a 1.400 oocistos/L nas amostras de águas de esgoto e córrego respectivamente. Foram isoladas um total de 221cepas de Salmonella. Entre os sorotipos prevalentes encontrados estão S. panama, S. agona, S.infantis, S.hadar, S.onakan e S.braenderup. Os resultados verificaram a circulação de Salmonella spp e Cryptosporidium spp no meio ambiente estudado em São Paulo, podendo se constituir em importante fonte de disseminação destes patógenos no meio aquático e na comunidade. / A lot of studies have shown the value on researching in sewage several pathogenic microorganisms to determine possible enteropathogens that are present in communities and the risks for public health. The aims of this study were to determine the occurrence and the levels of Cryptosporidium spp and Salmonella spp in sewage and wastewater in São Paulo since there is no recent studies of this pathogens in sewage of this city. A total of twenty four samples were collected weekly from July to December of 1998 in an effluent sewage station (12) and a river (12) that receives a domestic discharge of São Paulo city. The detection of Cryptosporidium oocysts was made using two procedures for concentration by flocculation (Vesey et alii, 1993) and by membrane filtration (Aldom & Chagla, 1995), and oocysts were identified by direct immunofluorescence assay and the presence was confirmed by phase contrast microscopy. Salmonella isolation was made using membrane filtration method (Martins, 1979). The results showed the occurrence of Cryptosporidium sp and Salmonella spp in 100% of samples. A total of 221 strains of Salmonella were isolated and among the prevalent serotypes were detected S. panama, S. agona, S.infantis, S.hadar, S.onakan e S.braenderup. The presence of Salmonella and Cryptosporidium in environmental samples studied in São Paulo can represent a possible source for dissemination of these pathogens in aquatic evironment and community.

O uso do Cateter Venoso Central (CVC) viabiliza a assistência de alta complexidade aos pacientes críticos. Contudo, as infecções desses cateteres demonstram uma associação com a migração dos microrganismos da pele do local de inserção até a ponta do cateter. A utilização de novas tecnologias para reduzir a colonização cutânea no sítio de inserção do cateter reforça a questão da antissepsia cutânea e a sugestão do curativo adequado a esta região. As recomendações do Centers for Disease Control and Prevention (CDC) apontam como uma opção de curativo o uso da cobertura de filme transparente de poliuretano (FTP) que protege e facilita a visualização do sítio de inserção. Contudo, o uso do curativo gel de clorexidina (CGCHX), vem apresentado uma resposta superior na prevenção dessas colonizações e infecções. Diante do exposto, propôs-se identificar por meio de um estudo de corte transversal prospectivo, os microrganismos presentes no swab de pele após o uso do CGCHX e do FTP, no momento da retirada do CVC. Fizeram parte do estudo um total de 92 pacientes, destes 45 pacientes em uso do CGCHX e 47 utilizaram FTP, em ambos os grupos, a faixa etária foi em média 60 anos, declararam-se brancos e não houve diferença significativa entre o número de homens e mulheres. A escolha do sítio de inserção preferencial foi a veia jugular interna direita. Houve o crescimento em 13 amostras de Swabs no grupo do CGCHX os microrganismos encontrados foram Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Morganella morganii, Enterobater cloacae, Staphylococcus aereus e Staphylococcus epidermidis. O Staphylococcus aereus apresentou resistência a oxacilina, o que podemos sugerir a possibilidade de uma cepa MRSA. Quanto ao FTP foram seis amostras positivas com o crescimento de Serratia marcescens, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus haemolyticus. A presença da Klebsiella pneumoniae sensível somente a amicacina sugere a possibilidade da cepa Klebsiella pneumoniae carbapenemas (KPC). Apesar dos achados evidenciarem um número maior de crescimento bacteriano no curativo gel de CHX, este estudo pode contribuir para o olhar e desenvolvimento de novos trabalhos para a nossa população, levando em consideração nosso clima e tipo de pele, como também a importância de medidas educativas permanentes no treinamento da equipe de saúde nos centros onde as novas tecnologias são implementadas / The use of Central Venous Catheter (CVC) enables the high complexity assistance to critically ill patients. However, these catheters infections show an association with the migration of skin microorganisms from the insertion site to the tip of the catheter. The use of new technologies to reduce skin colonization on the catheter insertion site reinforces the issue of skin disinfection and use of suitable dressing to this region. The recommendations from the Centers for Disease Control and Prevention (CDC) show the use of coverages with transparent polyurethane film (TPF) as an option of dressing, which protects and facilitates the visualization of the insertion site. However, the use of chlorhexidine gel dressing (CGD) has presented a higher response in preventing these colonizations and infections. Given the above, this study aimed to identify the microorganisms present on the skin swab after using the CGD and TPF at the time of removal of the CVC from a prospective cross-sectional study. The total of participants were 92 patients, 45 of them were using CGD and 47 were using FTP. In both groups, the average age was 60 years, white, and there was no significant difference between the number of men and women. The choice of preferred insertion site was the right internal jugular vein. There was growth in 13 samples Swabs in the CGD group. Microorganisms found were Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Morganella morganii, Enterobater cloacae, Staphylococcus aereus and Staphylococcus epidermidis. Staphylococcus aereus showed resistance to oxacillin, which can suggest the possibility of a MRSA strain. Related to the FTP group, there were six positive samples with the growth of Serratia marcescens, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus haemolyticus. The presence of Klebsiella pneumoniae sensitive only to amikacin suggests the possibility of Klebsiellapneumoniaecarbapenemase strain (KPC). Despite findings showing a greater number of bacterial growth in the chlorhexidine gel dressing, this study may contribute to the development of new studies for population, taking into account the climate and skin type, as well as the importance of educational measures for the training of health team in centers where new technologies are implemented

Introdução: O risco à saúde humana ocasionado pela contaminação biológica de águas captadas para abastecimento público é realçado pela ocorrência de surtos de doenças associadas aos protozoários Giardia e Cryptosporidium, que possuem baixas doses infecciosas e alta capacidade de sobrevivência no ambiente, além de serem capazes de resistir ao processo tradicional de desinfecção da água (cloração). Partindo-se da hipótese de que há um risco elevado de infecção por estes protozoários pela ingestão de água tratada por métodos convencionais e que fazem uso de mananciais superficiais impactados por contaminação biológica, resultando num possível incremento da incidência de diarréias, este estudo se propôs a verificar a ocorrência destes protozoários em águas captadas para abastecimento público no município de Cajamar-SP, caracterizar sua patogenicidade e avaliar o risco associado ao seu consumo através da água tratada. Métodos: Foram coletadas 48 amostras do ribeirão dos Cristais no ponto de captação da estação de tratamento de água, semanalmente, durante 12 meses (de 16/05/2013 a 21/05/2014). A detecção e a análise da concentração dos protozoários foram realizadas de acordo com Método 1623.1 da United States Environmental Protection Agency e a extração e caracterização dos espécies/genótipos de Giardia e Cryptosporidium foi realizada através metodologias moleculares e seqüenciamento. O risco de infecção pela ingestão de cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium presentes na água tratada foi calculado usando a ferramenta da Avaliação Quantitativa do Risco Microbiológico, a partir dos dados de concentração dos patógenos obtidos pelo Método 1623.1, eficiência de remoção dos (oo)cistos durante o processo convencional de tratamento da água, modelo dose-resposta e taxa de ingestão diária de água para indivíduos menores de 5 anos e maiores de 21 anos. Resultados: Cistos de Giardia foram detectados em 83,3% das amostras (40/48), com concentrações variando desde o limite de detecção (<0,1) até 8,6 cistos/L. Oocistos de Cryptosporidium foram etectados em 37,5% das amostras (18/48), com concentrações variando desde o limite de detecção (<0,1) até 2 oocistos/L. As espécies/genótipos encontrados (Giardia intestinalis A e B e Cryptosporidium parvum e hominis) são característicos de contaminação antrópica e são frequentemente identificados em estudos epidemiológicos como responsáveis por surtos. A estimativa do risco anual de infecção por Giardia foi de 3,3x10-3 (IC95% 4,6x10-3) para crianças e de 11,5x10-3 (IC95% 13,3x10-3) para adultos, enquanto o risco por Cryptosporidium foi de 1,1x10-3 (IC95% 1,7x10-3) para crianças e de 3,9x10-3 (IC95% 5,0x10-3) para adultos. O incremento da incidência de diarréias foi observado no cenário de estudo após um acidente que resultou em transbordamento de esgotos não tratados no manancial, coincidindo com o aumento na detecção de (oo)cistos. Conclusão: Os resultados evidenciaram que a vulnerabilidade do ribeirão dos Cristais a contaminações biológicas pode culminar em um risco elevado de infecção e adoecimento por Giardia e Cryptosporidium através da ingestão de água tratada. Portanto, o caso é preocupante, tanto do ponto de vista do tratamento e abastecimento de água potável, quanto da degradação e contaminação do manancial, evidenciando a necessidade de se estabelecer medidas de intervenção direcionadas a promover a qualidade da água e garantir sua segurança / Introduction: The risk to human health caused by biological contamination of source water from public water supply is highlighted by the occurrence of outbreaks associated with the protozoa Giardia and Cryptosporidium, which have low infectious doses and high capacity of survival in the environment, besides being capable of withstanding traditional process for water disinfection (chlorination). Considering that there is a high risk of infection by these protozoa through drinking water treated with conventional methods uptaked from surface waters impacted by biological contamination, resulting in a possible increase in the incidence of diarrhea, this study aimed to verify the occurrence of these protozoa in waters collected for public supply in Cajamar-SP, characterize their pathogenicity and evaluate the risk associated with its consumption. Methods: Forty eight samples were collected in ribeirão dos Cristais, at uptake point of the water treatment plant, weekly, for 12 months (from 05/16/2013 to 05/21/2014). The detection and quantification of protozoa were carried out according to the United States Environmental Protection Agency Method 1623.1, and the extraction and characterization of species/genotypes of iardia and Cryptosporidium were performed through molecular methods and sequencing. The risk of infection by ingestion of Giardia and Cryptosporidium (oo)cysts present in the treated water were calculated using the Quantitative Microbial Risk Assessment tool, based on the concentration data of pathogens obtained by the Method 1623.1, removal efficiency of (oo) cysts in the conventional process of water treatment, dose-response model and rate of daily water intake for individuals under the age of 5 years and over 21 years. Results: Giardia cysts were detected in 83.3% of the samples (40/48), with concentrations ranging rom the detection limit (<0.1) to 8.6 cysts/L. Cryptosporidium oocysts were detected in 7.5% of the samples (18/48), with concentrations ranging from the detection limit (<0.1) to 2 oocysts/L. The species/genotypes found (Giardia intestinalis A and B and Cryptosporidium parvum and hominis) are characteristic of anthropogenic contamination and are often identified in epidemiological studies as being responsible for outbreaks. The estimated annual risk of infection by Giardia was 3,3x10-3 (95% CI 4,6x10-3) for children and 11,5x10-3 (95% CI 13,3x10-3) for adults, while the risk for Cryptosporidium was 1,1x10-3 (95% CI 1,7x10-3) for children and 3,9x10-3 (95% CI 5,0x10-3) for adults. The increase in the incidence of diarrhea was observed in the study scenario after an accident that resulted in an overflow of untreated sewage that reached the reservoir, coinciding with an increase in the detection of the (oo)cysts. Conclusion: The results showed that the vulnerability of the ribeirão dos Cristais to biological contamination may result in a high risk of infection and illness by Giardia and Cryptosporidium through the drinking water consumption. Therefore, the case is of concern, both from the point of view of the treatment and supply of drinking water, as well as to the degradation and contamination of the water source, highlighting the need to establish intervention measures aimed at promoting water quality and ensure its safety

As tetraciclinas são encontradas no mercado sob várias formas farmacêuticas, sendo provenientes de diversos laboratórios farmacêuticos. Com o objetivo de avaliar a qualidade destes medicamentos, foram realizados os ensaios de dissolução in vitro e determinação quantitativa. Um total de 38 amostras de cápsulas de cloridrato de tetraciclina, fosfato de tetraciclina e cloridrato de oxitetraciclina e drágea de cloridrato de doxiciclina, englobando 12 fabricantes, foram analisadas. A dissolução do princípio ativo foi determinada para todas as amostras, conforme o método recomendado pela USP XXIII. Das amostras, duas foram reprovadas e outras quatro foram aprovadas após o reteste. A variação dos valores individuais obtidos no ensaio de dissolução para cada amostra, foi significativa, apresentando coeficiente de variação de até 14,2 %. A determinação quantitativa através do método microbiológico turbidimétrico empregando Staphylococcus aureus ATCC 29737, resultou em duas amostras de um mesmo fabricante com potência muito abaixo do limite especificado de 90 a 125 % do valor rotulado, com 55.5 e 68,7 %. Estudo comparativo desta metodologia com o método de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi realizado. Para isto, o método da USP XXIII foi escolhida após o ensaio preliminar, seguido de determinação dos parâmetros de validação e adequação do método. O sistema cromatográfico estabelecido consistiu de coluna de fase reversa SYMMETRYTM C8 e fase móvel composta de oxalato de amônio 0,09 M, dimetilformamida e fosfato dibásico de amônio 0.18 M (64:32:4.7) com pH entre 7,6 e 7.7. Os resultados para determinação de cloridrato de tetraciclina confirmaram os valores obtidos no ensaio microbiológico, sendo reprovadas duas amostras. O teor máximo encontrado de 4-epianidrotetraciclina foi de 0,5 %, abaixo do limite de 3 % especificado na USP XXIII. Na comparação entre os dois métodos, foram observados resultados sempre superiores para o método microbiológico. A análise estatística destes resultados mostrou diferença significativa entre as médias das determinações obtidas a partir de cada método. / Tetracyclines are avaiable under several pharmaceutical forms and manufactured by different laboratories. Aiming at the evalution of the quality of these medicines, assays of in vitro dissolution and quantitative determination have been performed in 38 samples of tetracycline hydrochloride and phosphate and oxytetracycline hydrochloride capsules and docycycline hydrochloride coated tablet taken from 12 manufactures. The range of dissolution of the substance was determined in all the samples, according to the method recommended by USP XXIII. On the whole, only two of samples were rejected and all the others approved without restrictions, except four of them, wich required a retest. The evaluation of the individual values obtained in the assay of dissolution in each sample was significant, with a variation coefficient of up to 14.2%. The quantitative determination through the turbidimetric microbiological method employing Staphylococcus aureus ATCC 29737, resulted in two samples of tetracycline hydrochloride from the same manufatures with potency of 55.5 % and 68.7 % below the specified limit from 90 % to 125 % the labeled value. A comparative study of this method and the HPLC one was then performed. The USP XXIII method was chosen after a preliminary assay, followed by the determination of its validation parameters and system suitability. The established chromatographic method employed reversed phase column SYMMETRYTM C8 (octylsilane chemically bounded to totally porous sílica particles) and mobile phase consisting of ammonium oxalate 0.09 M, dimethyformamide and dibasic ammonium phosphate 0.18 M (63.9:32:4.7) adjusted to pH 7.6-7.7. The results confirmed the values obtained in the microbiological assay. When this method (HPLC) was used for the determination of 4-epianidrotetracycline, a maximum of 0.5 % was found, below the limit of 3% specified in the USP XXIII. The comparison between both methods reavealed constant superior results in the microbiological one, and the difference between the averages of the determinations from the methods was meaningful.

Foram comparados procedimentos laboratoriais diretos e indiretos aplicados ao diagnóstico da brucelose canina causada por Brucella canis. Foram examinados 196 cães, os quais foram classificados em infectados, suspeitos e não infectados, de acordo com resultados obtidos no cultivo microbiológico em amostras de sangue, sêmen e swab vaginal, no exame clínico e de acordo com dados epidemiológicos. Os resultados obtidos nos exames laboratoriais foram correlacionados com os resultados dos exames clínicos. As técnicas laboratoriais empregadas foram soroaglutinação rápida (SAR), soroaglutinação rápida com emprego do 2-mercaptoetanol (SAR-2ME), imunodifusão em gel de ágar (IDGA), cultivo microbiológico e PCR em amostras de sangue, sêmen e swab vaginal. Foram observados 41,83% de positivos pela SAR, 14,28% pela SAR-2ME, 28,14% pela IDGA, 32,14% pela hemocultura, 19,6% pelo cultivo microbiológico de sêmen, 4,82% pelo cultivo microbiológico de swab vaginal, 33,16% pela PCR em sangue, 33,33% pela PCR em sêmen e 26,89% pela PCR em swab vaginal. Os valores de sensibilidade das provas de SAR, SAR-2ME, IDGA, PCR em sangue e PCR em swab vaginal foram respectivamente de 81,25%; 42,18%; 75%; 89,06% e 54%. A especificidade dos métodos de SAR, SAR-2ME, IDGA, PCR em sangue e PCR em swab vaginal foram respectivamente de 81,25%; 100%; 100%; 97,21% e 97,14%. Nos cães machos, as proporções de resultados positivos diagnosticados pelo cultivo microbiológico de sêmen foram semelhantes às observadas pelos demais métodos de diagnóstico utilizados. As proporções de resultados positivos obtidos pelas técnicas de SAR, SAR-2ME, IDGA, hemocultura, PCR em sangue e cultivo de swab vaginal foram maiores dentre os animais que apresentaram sinais clínicos sugestivos de brucelose. Não houve associação entre a presença de sinais clínicos de brucelose e resultados positivos pelo cultivo microbiológico de sêmen e PCR em amostras de sêmen e swab vaginal. / Nine laboratory tests used for Brucella canis infection diagnosis in 196 dogs were evaluated: rapid slide agglutination test (RSAT), 2-mercaptoetanol rapid slide agglutination test (2ME-RSAT), agar gel immunediffusion test (AGID), microbiological culture of blood, semen and vaginal swab and PCR in blood, semen and vaginal swab samples. The results of the laboratorial tests used were compared to the results of clinical examination. A total of 41,83% of positives were detected by rapid slide agglutination test, 14,28% by 2-mercaptoetanol rapid slide agglutination test, 28,14% by agar gel immunediffusion test, 32,14% by blood culture, 19,6% by culture of semen, 4,82% by vaginal swab culture, 33,16% by PCR in blood samples, 33,33% by PCR in semen and 26,89% by PCR in vaginal swab samples. The sensitivity of RSAT, 2ME-RSAT, IDGA, PCR in blood and vaginal swab samples was respectively 81,25%; 42,18%; 75%; 89,06% and 54%. The specificity of RSAT, 2ME-RSAT, IDGA, PCR in blood and vaginal swab samples was respectively: 81,25%; 100%; 100%; 97,21% e 97,14%. In male dogs, the proportion of positive results detected by microbiological culture of semen was similar to the proportion of positive results detected by RSAT, AGID and blood culture, but the proportion was lower than that detected by PCR in semen. A higher proportion of positives were detected by RSAT, 2ME-RSAT, AGID, blood culture, PCR in blood samples and culture of vaginal swab, in animals presenting clinical signs of brucellosis. No association was observed between the presence of clinical signs of brucellosis and positive results by culture of sêmen and PCR in semen and vaginal swab samples.

Introdução: O risco à saúde humana ocasionado pela contaminação biológica de águas captadas para abastecimento público é realçado pela ocorrência de surtos de doenças associadas aos protozoários Giardia e Cryptosporidium, que possuem baixas doses infecciosas e alta capacidade de sobrevivência no ambiente, além de serem capazes de resistir ao processo tradicional de desinfecção da água (cloração). Partindo-se da hipótese de que há um risco elevado de infecção por estes protozoários pela ingestão de água tratada por métodos convencionais e que fazem uso de mananciais superficiais impactados por contaminação biológica, resultando num possível incremento da incidência de diarréias, este estudo se propôs a verificar a ocorrência destes protozoários em águas captadas para abastecimento público no município de Cajamar-SP, caracterizar sua patogenicidade e avaliar o risco associado ao seu consumo através da água tratada. Métodos: Foram coletadas 48 amostras do ribeirão dos Cristais no ponto de captação da estação de tratamento de água, semanalmente, durante 12 meses (de 16/05/2013 a 21/05/2014). A detecção e a análise da concentração dos protozoários foram realizadas de acordo com Método 1623.1 da United States Environmental Protection Agency e a extração e caracterização dos espécies/genótipos de Giardia e Cryptosporidium foi realizada através metodologias moleculares e seqüenciamento. O risco de infecção pela ingestão de cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium presentes na água tratada foi calculado usando a ferramenta da Avaliação Quantitativa do Risco Microbiológico, a partir dos dados de concentração dos patógenos obtidos pelo Método 1623.1, eficiência de remoção dos (oo)cistos durante o processo convencional de tratamento da água, modelo dose-resposta e taxa de ingestão diária de água para indivíduos menores de 5 anos e maiores de 21 anos. Resultados: Cistos de Giardia foram detectados em 83,3% das amostras (40/48), com concentrações variando desde o limite de detecção (<0,1) até 8,6 cistos/L. Oocistos de Cryptosporidium foram etectados em 37,5% das amostras (18/48), com concentrações variando desde o limite de detecção (<0,1) até 2 oocistos/L. As espécies/genótipos encontrados (Giardia intestinalis A e B e Cryptosporidium parvum e hominis) são característicos de contaminação antrópica e são frequentemente identificados em estudos epidemiológicos como responsáveis por surtos. A estimativa do risco anual de infecção por Giardia foi de 3,3x10-3 (IC95% 4,6x10-3) para crianças e de 11,5x10-3 (IC95% 13,3x10-3) para adultos, enquanto o risco por Cryptosporidium foi de 1,1x10-3 (IC95% 1,7x10-3) para crianças e de 3,9x10-3 (IC95% 5,0x10-3) para adultos. O incremento da incidência de diarréias foi observado no cenário de estudo após um acidente que resultou em transbordamento de esgotos não tratados no manancial, coincidindo com o aumento na detecção de (oo)cistos. Conclusão: Os resultados evidenciaram que a vulnerabilidade do ribeirão dos Cristais a contaminações biológicas pode culminar em um risco elevado de infecção e adoecimento por Giardia e Cryptosporidium através da ingestão de água tratada. Portanto, o caso é preocupante, tanto do ponto de vista do tratamento e abastecimento de água potável, quanto da degradação e contaminação do manancial, evidenciando a necessidade de se estabelecer medidas de intervenção direcionadas a promover a qualidade da água e garantir sua segurança / Introduction: The risk to human health caused by biological contamination of source water from public water supply is highlighted by the occurrence of outbreaks associated with the protozoa Giardia and Cryptosporidium, which have low infectious doses and high capacity of survival in the environment, besides being capable of withstanding traditional process for water disinfection (chlorination). Considering that there is a high risk of infection by these protozoa through drinking water treated with conventional methods uptaked from surface waters impacted by biological contamination, resulting in a possible increase in the incidence of diarrhea, this study aimed to verify the occurrence of these protozoa in waters collected for public supply in Cajamar-SP, characterize their pathogenicity and evaluate the risk associated with its consumption. Methods: Forty eight samples were collected in ribeirão dos Cristais, at uptake point of the water treatment plant, weekly, for 12 months (from 05/16/2013 to 05/21/2014). The detection and quantification of protozoa were carried out according to the United States Environmental Protection Agency Method 1623.1, and the extraction and characterization of species/genotypes of iardia and Cryptosporidium were performed through molecular methods and sequencing. The risk of infection by ingestion of Giardia and Cryptosporidium (oo)cysts present in the treated water were calculated using the Quantitative Microbial Risk Assessment tool, based on the concentration data of pathogens obtained by the Method 1623.1, removal efficiency of (oo) cysts in the conventional process of water treatment, dose-response model and rate of daily water intake for individuals under the age of 5 years and over 21 years. Results: Giardia cysts were detected in 83.3% of the samples (40/48), with concentrations ranging rom the detection limit (<0.1) to 8.6 cysts/L. Cryptosporidium oocysts were detected in 7.5% of the samples (18/48), with concentrations ranging from the detection limit (<0.1) to 2 oocysts/L. The species/genotypes found (Giardia intestinalis A and B and Cryptosporidium parvum and hominis) are characteristic of anthropogenic contamination and are often identified in epidemiological studies as being responsible for outbreaks. The estimated annual risk of infection by Giardia was 3,3x10-3 (95% CI 4,6x10-3) for children and 11,5x10-3 (95% CI 13,3x10-3) for adults, while the risk for Cryptosporidium was 1,1x10-3 (95% CI 1,7x10-3) for children and 3,9x10-3 (95% CI 5,0x10-3) for adults. The increase in the incidence of diarrhea was observed in the study scenario after an accident that resulted in an overflow of untreated sewage that reached the reservoir, coinciding with an increase in the detection of the (oo)cysts. Conclusion: The results showed that the vulnerability of the ribeirão dos Cristais to biological contamination may result in a high risk of infection and illness by Giardia and Cryptosporidium through the drinking water consumption. Therefore, the case is of concern, both from the point of view of the treatment and supply of drinking water, as well as to the degradation and contamination of the water source, highlighting the need to establish intervention measures aimed at promoting water quality and ensure its safety

As tetraciclinas são encontradas no mercado sob várias formas farmacêuticas, sendo provenientes de diversos laboratórios farmacêuticos. Com o objetivo de avaliar a qualidade destes medicamentos, foram realizados os ensaios de dissolução in vitro e determinação quantitativa. Um total de 38 amostras de cápsulas de cloridrato de tetraciclina, fosfato de tetraciclina e cloridrato de oxitetraciclina e drágea de cloridrato de doxiciclina, englobando 12 fabricantes, foram analisadas. A dissolução do princípio ativo foi determinada para todas as amostras, conforme o método recomendado pela USP XXIII. Das amostras, duas foram reprovadas e outras quatro foram aprovadas após o reteste. A variação dos valores individuais obtidos no ensaio de dissolução para cada amostra, foi significativa, apresentando coeficiente de variação de até 14,2 %. A determinação quantitativa através do método microbiológico turbidimétrico empregando Staphylococcus aureus ATCC 29737, resultou em duas amostras de um mesmo fabricante com potência muito abaixo do limite especificado de 90 a 125 % do valor rotulado, com 55.5 e 68,7 %. Estudo comparativo desta metodologia com o método de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi realizado. Para isto, o método da USP XXIII foi escolhida após o ensaio preliminar, seguido de determinação dos parâmetros de validação e adequação do método. O sistema cromatográfico estabelecido consistiu de coluna de fase reversa SYMMETRYTM C8 e fase móvel composta de oxalato de amônio 0,09 M, dimetilformamida e fosfato dibásico de amônio 0.18 M (64:32:4.7) com pH entre 7,6 e 7.7. Os resultados para determinação de cloridrato de tetraciclina confirmaram os valores obtidos no ensaio microbiológico, sendo reprovadas duas amostras. O teor máximo encontrado de 4-epianidrotetraciclina foi de 0,5 %, abaixo do limite de 3 % especificado na USP XXIII. Na comparação entre os dois métodos, foram observados resultados sempre superiores para o método microbiológico. A análise estatística destes resultados mostrou diferença significativa entre as médias das determinações obtidas a partir de cada método. / Tetracyclines are avaiable under several pharmaceutical forms and manufactured by different laboratories. Aiming at the evalution of the quality of these medicines, assays of in vitro dissolution and quantitative determination have been performed in 38 samples of tetracycline hydrochloride and phosphate and oxytetracycline hydrochloride capsules and docycycline hydrochloride coated tablet taken from 12 manufactures. The range of dissolution of the substance was determined in all the samples, according to the method recommended by USP XXIII. On the whole, only two of samples were rejected and all the others approved without restrictions, except four of them, wich required a retest. The evaluation of the individual values obtained in the assay of dissolution in each sample was significant, with a variation coefficient of up to 14.2%. The quantitative determination through the turbidimetric microbiological method employing Staphylococcus aureus ATCC 29737, resulted in two samples of tetracycline hydrochloride from the same manufatures with potency of 55.5 % and 68.7 % below the specified limit from 90 % to 125 % the labeled value. A comparative study of this method and the HPLC one was then performed. The USP XXIII method was chosen after a preliminary assay, followed by the determination of its validation parameters and system suitability. The established chromatographic method employed reversed phase column SYMMETRYTM C8 (octylsilane chemically bounded to totally porous sílica particles) and mobile phase consisting of ammonium oxalate 0.09 M, dimethyformamide and dibasic ammonium phosphate 0.18 M (63.9:32:4.7) adjusted to pH 7.6-7.7. The results confirmed the values obtained in the microbiological assay. When this method (HPLC) was used for the determination of 4-epianidrotetracycline, a maximum of 0.5 % was found, below the limit of 3% specified in the USP XXIII. The comparison between both methods reavealed constant superior results in the microbiological one, and the difference between the averages of the determinations from the methods was meaningful.

Diversos estudos têm demonstrado que a pesquisa de microrganismos em águas de esgoto representa um importante parâmetro de avaliação e caracterização de possíveis agentes patogênicos circulantes numa determinada população e suas possíveis implicações à saúde pública. O presente trabalho teve por objetivos pesquisar nas águas de esgoto da cidade de São Paulo a ocorrência do protozóario emergente, Cryptosporidium spp, comparando-se duas técnicas de concentração, uma vez que não existem estudos relacionados a presença deste patógeno neste município, e determinar à presença de Salmonella spp e seus sorotipos nestas amostras. Para isto foram realizadas coletas semanais nos períodos de Julho à Dezembro de 1998, sendo doze realizadas em uma estação elevatória e doze em um córrego receptor de esgoto no município de São Paulo, aonde foi também determinada a poluição de origem fecal através da densidade de E.coli. Para determinação dos oocistos de Cryptosporidium as amostras foram concentradas por “floculação e precipitação do carbonato de cálcio” (Vesey et alii, 1993) e através da técnica da “membrana filtrante” (Aldom et alii, 1995) com posterior identificação e confirmação por imunofluorescência direta e contraste de fase, respectivamente. A determinação de Salmonella foi realizada segundo “Stantard Methods of Water and Wastewater 19th ed.”. Para a determinação de coliformes totais e E. coli utilizou-se a técnica de tubos múltiplos, empregando substrato cromogênico e fluorogênico (Colilert 18, Iddex). Os resultados obtidos da análise de 24 amostras indicaram que 100% destas foram positivas tanto para a presença dos oocistos de Cryptosporidium sp quanto para o isolamento de Salmonella sp. O número de oocistos detectados variou de 0 a 1.200 e de 0 a 1.400 oocistos/L nas amostras de águas de esgoto e córrego respectivamente. Foram isoladas um total de 221cepas de Salmonella. Entre os sorotipos prevalentes encontrados estão S. panama, S. agona, S.infantis, S.hadar, S.onakan e S.braenderup. Os resultados verificaram a circulação de Salmonella spp e Cryptosporidium spp no meio ambiente estudado em São Paulo, podendo se constituir em importante fonte de disseminação destes patógenos no meio aquático e na comunidade. / A lot of studies have shown the value on researching in sewage several pathogenic microorganisms to determine possible enteropathogens that are present in communities and the risks for public health. The aims of this study were to determine the occurrence and the levels of Cryptosporidium spp and Salmonella spp in sewage and wastewater in São Paulo since there is no recent studies of this pathogens in sewage of this city. A total of twenty four samples were collected weekly from July to December of 1998 in an effluent sewage station (12) and a river (12) that receives a domestic discharge of São Paulo city. The detection of Cryptosporidium oocysts was made using two procedures for concentration by flocculation (Vesey et alii, 1993) and by membrane filtration (Aldom & Chagla, 1995), and oocysts were identified by direct immunofluorescence assay and the presence was confirmed by phase contrast microscopy. Salmonella isolation was made using membrane filtration method (Martins, 1979). The results showed the occurrence of Cryptosporidium sp and Salmonella spp in 100% of samples. A total of 221 strains of Salmonella were isolated and among the prevalent serotypes were detected S. panama, S. agona, S.infantis, S.hadar, S.onakan e S.braenderup. The presence of Salmonella and Cryptosporidium in environmental samples studied in São Paulo can represent a possible source for dissemination of these pathogens in aquatic evironment and community.