Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-15T13:23:42Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_DaielleAraujoAgarryua.pdf: 1132186 bytes, checksum: 3379cc72a5bc22d01ddce8ebea0eb66a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T13:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_DaielleAraujoAgarryua.pdf: 1132186 bytes, checksum: 3379cc72a5bc22d01ddce8ebea0eb66a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2010-06-24 / Silver sulfadiazine (SDAg), the drug of choice for topical treatment of infected burns, possesses a broad spectrum of action and the incidence of resistance is considerably lower than with most antibiotics. In the presence of water SDAg undergoes a partial hydrolysis with formation of free sulfadiazine and silver, which has been previously shown to be photoreactive. This work presents as main objective evaluated the microbiological activity of SDAg associated with nanocapsules prepared from poly( -caprolactone), using capric and caprylic acid triglycerides and butyleneglicol cocoate as oily phase. The suspensions were prepared by interfacial deposition of pre-formed polymer and were characterized in term of SDAg contents, associated drug within the nanoparticles, pH, mean size of particles and zeta potentials of nanocapsules with SDAg, and evaluated the influence of the types of oils (capric and caprylic acid triglycerides and butyleneglicol cocoato) on nanocapsules physico-chemical caracterization. The microbial activity of SDAg nanocapsules were analyzed against microorganism Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) by the method of agar diffusion. The dosage technique of SDAg in HPLC was validated in all analyzed parameters and the results obtained met the specifications for linearity, precision, and accuracy. The suspension containing capric and caprylic acid triglycerides presented average size of 225 nm (±1,71), zeta potential of – 26 mV (±1,09) and pH values of 5,6. This sample showed an 100 % of drug entrapment. The values size particle of the suspension containing butyleneglicol cocoato was 221,4 nm (±2,3), zeta potential of – 27,9 mV (±1,7) and pH 5,7. Suspension with miglyol® SDAg contents were 77 % and 97,96%, determined by HPLC and microbiological assay, respectively, being higher when compared with suspension butyleneglicol cocoato, 38,5 % e 87,26 % demonstrating that the extraction of SDAg used is more efficient for the nanocapsules suspension with capric and caprylic acid triglycerides as oil core. Through the results, it is possible to conclude that the silver sulfadiazine nanocapsule suspensions are an alternative for the corporation in topical formulations. / Sulfadiazina de prata (SDAg), é o fármaco de escolha no tratamento tópico de infecções em queimaduras, possui um amplo espectro de ação e a incidência de resistência é consideravelmente menor do que a maioria dos antibióticos. Na presença de água a SDAg sofre hidrólise parcial com formação de sulfadiazina livre e prata, que tem mostrado ser previamente fotorreativa. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito anitimicrobiano da SDAg associada a nanocápsulas preparadas a partir de poli( -caprolactona), usando triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico e cocoato de butilenoglicol como fase oleosa. As suspensões foram preparadas pelo método de deposição interfacial de um polímero préformado e foram posteriormente caracterizadas através da determinação do teor de SDAg, taxas de associação, diâmetro médio das partículas, polidispersão e do potencial zeta das nanocápsulas contendo SDAg. Foi avaliada a influência dos óleos utilizados (Triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico ou cocoato de butilenoglicol) sobre a caracterização físicoquímica das nanocápsulas. A atividade antimicrobiana das nanocápsulas contendo SDAg foi analisada contra o microrganismo Pseudomonas aeruginosa(ATCC 27853) pelo método de difusão em ágar. A técnica de doseamento da SDAg por CLAE foi validada em todos os parâmetros analisados e os resultados atenderam as especificações de linearidade, precisão e exatidão. As suspensões contendo triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico apresentaram tamanho médio de 225 nm (±1,71), potencial zeta de - 26 mV (±1,09) e valores de pH de 5,6. Estas amostras apresentaram 100% de taxa de associação. Os valores do tamanho de partícula da suspensão contendo cocoato de butilenoglicol foram de 221,4 nm (±2,3), o potencial zeta foi – 27,9 (±1,7) e o pH 5,7. A suspensão preparada com triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico apresentou teor de SDAg de 77 % e 97,96 %, determinada por CLAE e ensaio microbiológico, respectivamente, sendo maior quando comparada com a suspensão preparada com cocoato de butilenoglicol, 38,5 % e 87,26 %, demonstrando que o processo de extração da SDAg utilizado é mais eficiente para a suspensão de nanocápsula com triglicerídeos de ácidos cáprico e caprílico como núcleo oleoso. Através dos resultados, pode-se concluir que as suspensões contendo nanocápsulas de sulfadiazina de prata podem ser uma alternativa para a incorporação em formulações de uso tópico.

A linfadenite caseosa é uma doença infectocontagiosas, de ocorrência mundial, que acomete caprinos e ovinos, caracterizada pela formação de abscessos em gânglios linfáticos superficiais, e alguns casos órgãos e linfonodos internos. É uma enfermidade causada pelo Corynebacterium pseudotuberculosis, responsável por grandes perdas econômicas na caprinocultura e ovinocultura. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um teste sorológico sensível e específico para detectar anticorpos anti-C. pseudotuberculosis em ovinos. Os animais foram classificados em dois grupos, com sintomatologia aparente para linfadenite caseosa (n=103) colhidos a campo, onde foram coletados amostras de soro e punção de linfonodos aumentados; e animais sem sintomatologia aparente (n=50) dos quais as amostras de soro e fragmentos de pulmão e linfonodo mediastínico foram colhidos em frigorífico. Em ambas as amostras a confirmação da presença e ausência da doença foi realizada através das provas de cultivo microbiológico e PCR, considerados nesse estudo como padrão para classificação dos animais. O resultado do cultivo microbiológico dos animais com sintomatologia aparente foi 53,5% (55/103) identificadas como C. pseudotuberculosis através de provas bioquímicas, e com a utilização da PCR, 46,5% (48/103) das amostras foram positivas para C. pseudotuberculosis. Com relação aos animais sem sintomatologia aparente, todas as amostras foram negativas no cultivo microbiológico e PCR (0/50). Na padronização do ELISA indireto foram utilizados 42 soros positivos e 43 soros negativos confirmados no cultivo microbiológico e PCR para linfadenite caseosa. A média de absorbância foi 1,88 com desvio padrão de 0,43, para as amostras positivas e, para as amostras negativas a média de 0,71 e desvio padrão 0,18. Dessa forma foram consideradas positivas, as amostras que apresentaram na reação de ELISA valor da DO> 1,1 e negativas de <1,1. A análise gráfica empregada no presente trabalho, curva ROC, permitiu encontrar o valor do ponto de corte associado à combinação dos parâmetros de sensibilidade e especificidade, assim, a acurácia do teste pôde descriminar indivíduos doentes de não doentes. A utilização de técnicas sorológicas no diagnóstico da linfadenite caseosa permitirá o controle epidemiológico da doença, porém não substitui o cultivo microbiológico, técnica considerada padrão ouro, e pode ser utilizada como teste de triagem ou mesmo na comercialização de animais, visto que a doença muitas vezes é de caráter inaparente, o que inviabiliza o diagnóstico clínico e microbiológico. / Caseous lymphadenitis is an infectious disease of worldwide occurrence that affects sheep and goats, characterized by the formation of abscesses in superficial lymph nodes, and sometimes internal organs and lymph nodes. It is caused by Corynebacterium pseudotuberculosis, responsible for great economic losses in goat and sheepproduction. This study aimed to develop a sensitive and specific serological test to detect anti- C. pseudotuberculosis in sheep. The animals were divided into two groups, the first one encompassing the ones with apparent caseous lymphadenitis symptoms (n = 103), where serum samples and puncture of enlarged lymph nodes were collected, and the second one with animals with no apparent symptoms (n = 50) of which samples (lung fragments, serum and and mediastinal lymph nodes) were inspected and harvested in the slaughterhouse. In both groups the presence and absence of the disease was carried through the evidence of microbiological culture and PCR, considered as the standard for the groups classification. Microbiological culture results of animals with apparent symptoms was 53.5% (55/103) identified as C. pseudotuberculosis by biochemical tests, and allied to PCR, 46.5% (48/103) of the samples were positive for C. pseudotuberculosis. Regarding animals without apparent symptoms, all samples were negative in microbiological culture and PCR (0/50). For the standardization of indirect ELISA we used 42 positive sera and 43 negative sera confirmed by microbiological culture and PCR for caseous lymphadenitis. The mean absorbance was 1.88 with standard deviation of 0.43 for the positive samples, and for negative samples the average was 0.71 and standard deviation 0.18. Thus we considered as positive, the samples with DO value > 1.1 and negative <1.1. The graphical analysis employed in this study, ROC curve, allowed us to find the cutoff value allied to the association of sensitivity and specificity parameters, thus the test accuracy was able to discriminate sick from not sick individuals. The use of serological techniques for the diagnosis of caseous lymphadenitis will allow the epidemiological control of the disease, but does not replace the microbiological culture, considered as the gold standard technique, and can be used as a screening test or animals trade, since the disease condition often is unapparent, which derails the clinical diagnosis and microbiological.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A água é um elemento fundamental para os seres vivos. A sua disponibilidade, com qualidade e em quantidade suficientes para o uso de um grupo humano, pode ser a diferença entre uma sociedade saudável ou não, quando a consideramos como um veículo de transmissão de doenças no momento em que não é tratada devidamente. A qualidade da água, primordial para a saúde humana, relaciona-se diretamente com a forma de uso e ocupação das áreas em uma bacia hidrográfica. Foi realizada uma relação do perfil sociocultural característicos do povo Yanomami e Yekuana com os resultados de análises de parâmetros físico-químicos e microbiológicos para avaliação da qualidade da água consumida pelas comunidades da Terra Indígena Yanomami localizadas na bacia hidrográficas do Rio Uraricoera. A avaliação físico-química foi feita pela determinação de temperatura, oxigênio dissolvido, nitrito, pH, turbidez, condutividade elétrica, potencial de oxirredução, turbidez e cor aparente. Para a avaliação microbiológica da água utilizou-se a técnica do substrato cromogênicofluorogênico para determinação de coliformes totais e E. coli, com a finalidade de verificar suas características e a relação com as doenças diarreicas agudas existentes nas comunidades e a cultura dos Yanomami e Yekuana. Verificou-se uma densidade elevada de coliformes totais e E. coli (valores entre 8,4 e 2.419,6 NMP) nas amostras de água provenientes do sistema de abastecimento das comunidades desta pesquisa, bem como valores elevados de turbidez (valores entre 1,4 e 19,7 UNT) e cor aparente (valores entre 19,1 e 74,9 uH). Os resultados comprovam que as amostras de água consumida nas comunidades indígenas não estão em conformidade com os padrões de potabilidade normatizados pelo Ministério da Saúde na Portaria n2914 em virtude da elevada densidade de coliformes totais e E. coli, patógenos de importância clínica e epidemiológica. Devido à escassez de pesquisa que contemplem a avaliação da qualidade da água consumida em comunidades indígenas, propôs-se diagnosticar a situação das doenças diarreicas agudas que acometem a população Yanomami e Yekuana reunindo informações que contribuam para o trabalho do Distrito Sanitário Especial Indígena Yanomami na oferta de água com qualidade e consequente melhoria de vida daqueles povos.

O ensaio turbidimétrico tem como princípio a redução da densidade óptica em suspensões microbianas, decorrente o incremento na concentração do antibiótico. No ensaio convencional trabalha-se com tubos de ensaio que demandam longo tempo para visualização da resposta. Assim, o método empregando microplacas com leitura cinética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizado. O objetivo deste trabalho é desenvolver o método de doseamento microbiológico de vancomicina empregando microplacas e modo de leitura cinético, assim como validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, exatidão e precisão. Adicionalmente foi contemplado desenvolvimento paralelo entre o método convencional e o cinético, de forma a permitir respaldo positivo quanto à validação. Sendo assim, através do estudo dos parâmetros de validação do método cinético, trabalhou-se em condições estabelecidas abrangendo curva-padrão de vancomicina com concentrações entre 0,6 e 1,0 &#181;g/mL, e emprego de meio de cultura caldo de caseína-soja inoculado com Bacillus subtilis (ATCC 6633) na proporção de 5%. Foram obtidos resultados satisfatórios em 5 horas de incubação. Conclui-se que o ensaio em microplacas permite avaliar, com vantagens, a atividade do antibiótico frente ao microrganismo-teste, permitindo facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultados. / The principle of the turbidimetric assay is to reduce the optical density of microbial suspensions, due to the increase in the concentration of antibiotic. In the conventional test works with tubes that require long time to display the answer. Thus, the method using microplates with kinetic reading for the dosage of antibiotics is of considerable interest, since it allows possible to reduce the amount of material and analysis time required and allows for testing of large numbers of samples simultaneously, with automated reading and calculating. The aim of this work is to develop the method of microbiological assay of vancomycin using microplates and kinetic reading mode, and to validate the method developed by evaluating the parameters of specificity and selectivity, linearity, linear range, accuracy and precision. Also included was the parallel development between the conventional method and the kinetic, to enable positive support for the validation. Thus, by studying the validation parameters of the kinetic method, worked under conditions laid down covering vancomycin standard curve with concentrations between 0.6 and 1.0 mg / mL, and soybean-casein broth inoculated with 5% of Bacillus subtilis (ATCC 6633). Satisfactory results were obtained with 5 hours incubation. In conclusion, the microplate assay allows to evaluate, with advantages, the activity of the antibiotic against the microorganism, allowing greater operational ease and rapidity of obtaining results.

Este estudo foi realizado com o objetivo de desenvolvimento e validação do método microbiológico rápido empregando a técnica de bioluminescência de Adenosina Trifosfato (ATP) como método alternativo para o teste de esterilidade. O ATP reage com o sistema enzimático luciferina/luciferase e gera um fóton de luz em presença de íons magnésio, reação que pode ser utilizada na detecção de microrganismos. A luz gerada na reação é medida por um dispositivo chamado luminômetro, que traduz o sinal em unidades relativas de luz (URL), metodologia altamente sensível que pode ser utilizada na análise de produtos estéreis com o objetivo de diminuição no tempo do ensaio. Enquanto a turbidez do meio de cultura só pode ser visualizada quando o contaminante chega à concentração de 106 UFC/ml, a tecnologia de bioluminescência de ATP pode detectar amostras com concentração em torno de 104 UFC. Foram empregados na validação dados obtidos a partir do método tradicional de esterilidade (técnica de filtração) realizado paralelamente ao método alternativo. As soluções parenterais utilizadas nos ensaios foram: solução fisiológica 0,9%; solução de dextrose 5%; ringer lactato; e solução de metronidazol 0,5%. As soluções-teste foram inoculadas intencionalmente com suspensões microbianas preparadas através da diluição de Bioballs&#174, com concentrações de 10 UFC/100 ml, 2 UFC/100 ml e 0,4 UFC/100 ml. Após a realização do teste convencional, as membranas resultantes do ensaio foram incubadas nos meios de cultura caldo caseína de soja e tioglicolato. Alíquotas destes meios foram retiradas após 96 horas de incubação para análise pelo método alternativo. Os seguintes microrganismos foram selecionados para o estudo: Staphylococcus aureus, Bacilus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Clostridium sporogenes, Aspergillus brasiliensis, Kocuria rosea e Micrococcus luteus. A análise dos resultados obtidos mostrou que o método alternativo é capaz de detectar os microrganismos testados. Quanto à sensibilidade, o método alternativo apresentou vantagem na concentração 2 UFC/100 ml, e equivalência nas outras concentrações. A não interferência dos diferentes produtos e meios nos resultados encontrados permite vislumbrar evidência de robustez do método. Adicionalmente, em relação ao tempo de resposta, o método alternativo demonstrou ser equivalente ao convencional (p-valor=0,43). / This study is being conducted with a goal of validating and developing the fast microbiological method of ATP bioluminescence, as an alternative method to the sterility test. The ATP reacts with the enzymatic system luciferin-luciferase and produces light in the presence of magnesium ions, this reaction can be used for microorganism\'s detection. The light generated in this reaction can be measured by a device called luminometer that translates the signal in relative light units (RLU). This methodology has high sensibility and it can be used in the sterile products analysis with the objective of reducing the time of the sample. While the turbidity of the culture medium it can be visualized just when the sample reaches a concentration of 106 UCF per mL, the bioluminescence assay can detect samples at concentrations around 104 UCF per mL. The both methods, conventional (filtration technique) and alternative were done in parallel and the result data were used in the validation study. It was used in the assay the next parenteral solutions: physiological solution 0,9%, metronidazole solution 0,5%, dextrose solution 5% and Ringer lactate. The test solutions were inoculated with the microorganism suspensions, prepared by the dilution of the Bioballs® with result concentrations of 10 CFU/100 mL, 2 FU/100 mL and 0,4 CFU/ mL. After the conventional test was performed, the result membranes were incubated in thioglicollate and soybean casein broth. After 96 hours of incubation, aliquots from the broth were taken to perform the analysis by the alternative method. The following microorganisms were selected to perform the validation study: Staphylococcus aureus, Bacilus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Clostridium sporogenes, Candida albicans, Aspergillus brasiliensis, Kocuria rosea and Micrococcus luteus. The analysis of results shows that the alternative method can detect the test microorganisms. Regarding of the sensibility, the alternative method shows advantage in the 2 CFU/mL inoculum concentration and equivalence in the other two concentrations. The method shows evidence of robustness because the results were not affected by the products or culture media used in the assay. Additionally concerning the detection time, the alternative method was established equivalent to the conventional method (p-value=0,43).

A gentamicina é um complexo antibiótico de largo espectro, produzido por actinomicetos do gênero Micromonospora e classificado entre os antibióticos aminoglicosídeos, utilizado no tratamento de infecções graves, devidas a microrganismos Gram-negativos. Alterações da sua atividade antimicrobiana, não demonstradas pelos ensaios químicos, podem ser avaliadas pelos ensaios microbiológicos. O objetivo deste trabalho foi comparar os delineamentos experimentais 5 x 1, 2 x 2 e 3 x 1, avaliando-se os parâmetros de validação de especificidade, linearidade, faixa ou intervalo, precisão e exatidão para cada delineamento experimental em diferentes níveis de concentração, apresentações e lotes. O plano de trabalho constituiu-se na realização de 81 ensaios (em 3 réplicas) de doseamento microbiológico de gentamicina. As concentrações das soluções empregadas foram preparadas numa faixa de 1,0 µg/mL a 5,0 µg/mL, diluídos em tampão fosfato 0,1 M pH 8,0. O meio utilizado foi o meio antibiótico no. 11, com Staphyloccocus epidermidis (ATCC 12228). Empregou-se 21 mL de meio como camada base e 4 mL de meio inoculado à 1% como camada superfície. As placas foram incubadas por 16-18 horas à 37 ± 1 °C. Os três delineamentos empregados apresentaram especificidade adequada para análise de creme dermatológico e solução injetável contendo sulfato de gentamicina. Também apresentaram exatidão e linearidade no intervalo avaliado. Os delineamentos não apresentaram diferença significativa quanto a precisão. Os resultados foram comparados através da determinação de índices de capacidade do sistema de medição. A análise estatística demonstrou que não há diferença significativa entre os resultados obtidos pelos delineamentos 5 x 1, 2 x 2 e 3 x 1, sendo equivalentes e intercambiáveis. / Gentamicin is a broad-spectrum antibiotic complex produced by actinomycetes belonging to Micromonospora genus and classified among aminoglycoside antibiotics, used in the treatment of serious infections derived from Gram-negative microorganisms. Alterations of their antimicrobial activity not shown in chemical assays can be evaluated through microbiological assays. The aim of this work was to compare 5 x 1, 2 x 2 and 3 x 1 experimental designs, evaluating validation parameters of specificity, linearity, range, precision, and accuracy for each experimental design in different levels of concentration, presentation, and lots. It consisted of 81 assays (in 3 replicas) of gentamicin microbiological dosage. The concentrations of the solutions used were employed in a range from 1.0 µg/ml to 5.0 µg/ml, diluted in phosphate buffer 0.1 M pH 8.0. Antibiotic medium number 11 was used, with Staphyloccocus epidermis (ATCC 12228)21ml of medium were used as base layer and 4 ml of medium inoculated at 1% were used as surface layer. The plates were incubated for 16-18 hours at 37 ± 1 ºC. The three designs employed showed adequate specificity for analysis of dermatological cream and injectable solution containing gentamicin sulphate. They also showed accuracy and linearity in the range evaluated, but not a significant difference concerning precision. The results were compared by means of the determination of the rates of measurement system capacity. The statistical analysis demonstrated that there is no significant difference among the results obtained.

Determina la calidad microbiológica de “jurel” y “choro” procedentes de treinta mercados de los distritos de San Juan de Lurigancho y de San Martín de Porres. Para ello, de cada puesto de mercado se toman muestras de “jurel” y “choro”, a las cuales se les realiza el recuento de aerobios mesófilos y recuento de Staphylococcus aureus según la metodología de ICMSF (2000); asimismo, se determina la numeración de Escherichia coli, la detección de Salmonella sp., Vibrio cholerae y Vibrio parahaemolyticus aplicando la metodología descrita en el FDA/BAM. Los resultados indican que el 56% del total de las muestras analizadas son consideradas “No aptas” para consumo humano; además, se observa que el 17% de las muestras de “jurel” y 63% de las muestras de “choro” superan los límites máximos permitidos establecidos para E. coli. Se aisla Salmonella sp. en el 7% de las muestras de “jurel” y el 20% de las muestras de “choro”. V. cholerae y V. parahaemolyticus no son detectadas en ninguna de las muestras analizadas. Se concluye que la mayor parte de las muestras de “choros” se consideran “No aptas” para consumo humano, constituyendo un riesgo para la salud de los consumidores. / Tesis

Vibrio parahaemolyticus (Vp) é uma bactéria naturalmente presente em regiões estuarinas, sendo a principal causa de gastrenterite de origem bacteriana associada a pescados, principalmente ostras cruas. Nesta pesquisa, foi desenvolvida uma avaliação quantitativa de risco para avaliar a probabilidade de Vp causar doença após o consumo de ostra crua, produzida e comercializada no Estado de São Paulo. O estudo incluiu a identificação e caracterização do perigo, a avaliação da exposição e a caracterização do risco. Um modelo matemático foi desenvolvido. Este modelo leva em consideração o comportamento de Vp em ostras na cadeia produtiva, em cada estação do ano, além da relação entre a dose de Vp ingerida e a probabilidade de desenvolver a doença. A avaliação da exposição foi desenvolvida em três etapas: cultivo, pós-coleta e consumo. Na etapa de cultivo foram considerados os fatores que influenciam a prevalência e o número de Vp em ostras no momento da coleta. Na etapa pós-coleta, foram descritas as práticas da indústria e foram considerados os fatores associados ao processamento, transporte e manipulação. Já na etapa de consumo foram considerados os fatores como a quantidade de ostras consumidas por porção, o peso médio por ostra consumida e a população de Vp patogênico no momento do consumo. O resultado do modelo quantitativo da avaliação da exposição foi, então, integrado ao modelo dose-resposta, Beta-Poisson, para se obter uma estimativa do risco. Esta estimativa expressa o impacto da exposição humana a Vp, sobre a saúde pública, associada ao consumo de ostras. A simulação de Monte Carlo foi utilizada para avaliar o efeito da variabilidade e incerteza das variáveis do modelo sobre a estimativa do risco. O modelo prediz uma probabilidade de ocorrência de doença de 4,6x10-4, por porção de ostra, consumida ao longo do ano. As variáveis que possuem maior influência sobre o risco de ocorrência de doença são a população de Vp em ostras no cultivo, a temperatura de transporte das ostras até o varejo e a porcentagem de Vp patogênico em ostra, no momento do seu consumo. O modelo evidencia que uma das maneiras de reduzir o risco de ocorrência de doença seria intervir nas condições de transporte de ostras até o varejo por meio da sua refrigeração. Com o modelo é possível identificar fatores e simular cenários para avaliar o comportamento de V. parahaemolytícus como um perigo microbiológico, ao longo da cadeia produtiva de ostra até o momento do seu consumo. Também é possível avaliar o impacto de medidas de intervenção na cadeia produtiva. As suposições adotadas limitam a aplicabilidade do modelo. Portanto, é necessário que o modelo seja validado, particularmente com relação ao número de casos de doença causados por Vp, cujos dados de vigilância epidemiológica inexistem no Brasil. / Vibrio parahaemolyticus (Vp) is naturally present in estuarine regions and is the main cause of gastroenteritis associated with the consumption of bivalve molluscan shellfish, specially raw oysters. In this research, a quantitative risk assessment was developed to evaluate the probability of Vp causing disease after consumption of raw oyster, produced and commercialized in the state of Sao Paulo. The study included the identification and characterization of the hazard, exposure assessment and risk characterization. A mathematical model was developed. This model takes into account the behavior of Vp in oysters in the productive chain, for each season of the year, besides the relationship between the number of cells of Vp ingested and the probability of developing the disease. The exposure assessment was done in three steps: farming, after harvesting and consumption. At the farming step, the factors that influence the prevalence and the population of Vp at the time of harvesting were considered. At the after harvesting step, the factors associated with transportation, handling and processing were considered. At the consumption step, factors related to the amount of oysters and the average weight per oyster consumed and the density of pathogenic Vp at the time of consumption were considered. Then, the quantitative model of exposure assessment was integrated to the dose-response model, BetaPoisson, in order to obtain a risk estimate. This calculation expresses the impact of the human exposure to Vp associated with the consumption of oysters on public health. The Monte Carlo simulation was used to evaluate the effect of variability and uncertainty of variables of the model in the risk estimation. The model predicts a probability of occurrence of the disease of 4,6x10-4 per serving of oyster consumed during one year. The variables showing the greatest influence on the risk of occurrence of disease are the density of Vp in oyster in the farming step, the temperature during transportation of oysters to the retail market and the percentage of pathogenic Vp strains in oysters,\' at the moment of consumption. The model indicates that the use of refrigeration during transportation of oysters to retail could reduce the risk of disease. The model allows the identification of factors and the simulation of scenarios in order to evaluate the behavior of V. parahaemolyticus, as a microbiologícal hazard, in the productive chain of oyster to the consumption. It is also possible to evaluate the impact of intervention measures in the productive chain. The assumptions Iimit the application of the model. Therefore, it is necessary to validate the model, particularly in relation to the number of cases of dísease caused by V. parahaemolyticus of which the data on epidemiologic surveillance do not exist in Brazil.

Orientador: Paola Castro Moraes / Resumo: As infecções causadas por organismos resistentes a múltiplos fármacos (multi-drug resistance – MDR) estão associadas à maior morbidade, mortalidade e aumento significativos nos custos com cuidados da saúde. Cocos Gram-positivos e bastonetes Gram-negativos são os grupos de bactérias mais frequentemente relacionadas a infecção do sítio cirúrgico em cães. Dentro do contexto de saúde única, é imperativo o aprimoramento contínuo de métodos de avaliação de contaminação e infecção bacteriana no ambiente hospitalar veterinário. O presente estudo objetivou avaliar o perfil de resistência de cocos Gram-positivos e bastonetes Gram-negativos isolados nas mãos do cirurgião, antes e após a desinquinação, no ambiente e sítio cirúrgico, durante o transoperatório de cirurgias limpas/limpas-contaminadas (G1;n=20) e cirurgias contaminadas (G2;n=10). Das 150 amostras coletadas, as do ambiente (n=30) foram obtidas pela exposição de placa com ágar Brain Heart Infusion na sala cirúrgica durante o procedimento, enquanto as do sítio cirúrgico (n=60) e as das mãos do cirurgião (n=60) foram coletadas por cotonete estéril e semeadas em ágar sangue e MacConkey. Todas as placas foram incubadas a 37ºC por 24h em estufa bacteriológica sob condições anaeróbias. Colônias sugestivas de cocos Grampositivos e bastonetes Gram-negativos foram submetidas a testes bioquímicos para identificação dos gêneros. Por fim, foi realizado o teste de susceptibilidade aos antimicrobianos por disco difusão em ágar Müller-Hinton... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Infections caused by multidrug-resistant (MDR) organisms are associated with increased morbidity, mortality and health care spending. Gram-positive cocci and Gram-negative bacilli are bacterial species frenquently related with surgical site infections in dogs. In the context of one health, become necessary the continuous improvement of evaluation methods of bacterial infection and contamination in the veterinary hospital environment. The present project aims to evaluate the antimicrobial profile of Gram-positive cocci and Gram-negative bacilli isolated of the surgical site and room during the intraoperative period and of the surgeon’s hands, before and after antisepsis. All samples were obtained during intraoperative of clean/cleancontaminated (G1) and contaminated surgery (G2). A total of 153 samples were collected, of which the environmental samples were obtained by exposure of Brain Heart Infusion agar plate in the surgical room during the procedure and samples from the surgical site and surgeon’s hands were collected by swabs and seeded on blood and Macconkey agar. The plates were incubated at 37ºC for 24h. Suggestive bacterial colonies for Gram-positive cocci and Gram-negative bacilli were submitted to biochemical test for genus differentiation. Finally, antimicrobial susceptibility testing was performed by disk diffusion method. Forty-three isolates with morphological and biochemical characteristics of Staphylococcus spp. and 13 of Gram-negative bacilli were obtained. W... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

[EN] Since the past two decades a new special interest in water works sector has become, related to the water quality safety quantification, and the new legislations will change in that direction, recommended by Wolrd Health Organization, with the Water Safety Plans. Microbiology is included in this safety, as logical. Generally, Microbiology present in drinking water is classified as no-resistent or as resistant to chemical disinfectants. The one that presents major risk to the systems is this second group. Since 1993, the main hazard over the water quality in the water supply systems from surface raw water is a protozoan, considered by World Health Organization, as the most dangerous emergent pathogen. Its name is cryptosporidium. It was the direct consequence of a waterborne outbreak that happened in Milwaukee, in April 1993, becoming more than four hundred thousand people ill, and almost one hundred people died, and the city was fully off. On the other hand, during more than fifty years, the "conventional treatment" has been the axis of drinking water production in most of the cities. In last years, more advanced treatments (membranes, electro-dialysis, etc) have been displacing conventional treatments. It is necessary to check if conventional treatments are capable to fight with these new hazards. So, in this scenario, it`s known that there is a new hazard and there're some classical treatments that, nobody knows exactly, its abilities against this hazard. In that point, this work, developing in detail a tool to quantify the risk for the operator making decision process, is interesting for water sector. This is a methodological tool able to quantify risk over the actual most important emergent pathogen, cryptosporidium, and applied in the most known, classical and extended treatment over the world, the conventional treatment In the first part of this Thesis a literature review is done, about emergent pathogens, the presence of cryptosporidium in raw water, the analysis reliability, and the quantification of elimination with different treatments. Then, models to calculate individual and social risk are reviewed. Models about investments in drinking water treatment plants are reviewed, too. In the second part of this Thesis, the model is developed, showing calculation structures and processes, as well as tools used in model making. The decision model making as a function of calculated risk is developed, too. The risk model is based on facility's simple on-line operational parameters. The results are the risk estimation for the served population, with the plant operating in this mode. The calculation process is done using Montecarlo simulation. The third part is an application to a case study, especially interesting and very illustrative. The model is applied into a real facility. With the results, it's possible to conclude interesting guidelines and policies about improving plant's operation mode. In the fourth part if this Thesis the general conclusions from the developed tasks are extracted, and also the future research ideas. The main conclusion of this Thesis is that conventional treatment is able to work as effective barrier against this hazard, but it is necessary to assess the risk of the plant while operating. Taking into account limitations of knowledge, risk estimation can get non tolerable levels. In that situation, the plant must make investments in the treatment o improving the operation, to get tolerable risk levels. It's quite probably that, if treatment parameter's on-line monitoring would have been integrated with a quantifying risk tool, like presented in this job, cryptosporidiosis waterborne outbreak in Milwaukee in 1993 due to water treatment plant's failure, may be, could be avoided or reduced. Finally, literature review references and the annexes. / [ES] En las últimas dos décadas se ha desarrollado un interés especial, en el sector de la potabilización del agua, relativo a la cuantificación de la seguridad de la calidad del agua suministrada. En líneas generales, la microbiología presente en el agua se diferencia en dos tipos: la no-resistente a desinfectantes químicos y la que sí lo es. La que presenta más riesgo a los sistemas, es precisamente, la del segundo grupo. Desde el año 1993, una especie del grupo de la microbiología resistente ha pasado a ser considerada la mayor amenaza sobre la calidad del agua de los abastecimientos que se alimentan de agua superficial. Se trata de un protozoo considerado por la Organización Mundial de la Salud como el patógeno emergente de más peligrosidad, llamado genéricamente cryptosporidium. Ello se debe a un brote epidemiológico que sucedió en Milwaukee (Wisconsin, Estados Unidos), en abril de 1993, enfermando a más de cuatrocientas mil personas, con casi un centenar de fallecidos y paralizando completamente la ciudad. Con lo cual, en este escenario, se sabe que existen nuevas amenazas en el agua bruta y que hay gran número de potabilizadoras de tratamiento convencional, de las que se desconocen sus capacidades frente a ellas. Precisamente por ello, este trabajo, consistente en desarrollar en detalle una metodología que permita cuantificar el riesgo para la toma de decisiones del operador, partiendo de parámetros operacionales de la planta potabilizadora, es interesante para el sector. En la primera parte de la tesis se realiza una revisión bibliográfica de la temática, de los patógenos emergentes, de la presencia del cryptosporidium en las aguas superficiales, de la fiabilidad del análisis de los mismos y de la cuantificación de la eliminación que la planta potabilizadora efectúa con diferentes tratamientos. Posteriormente se analizan los modelos que permiten estimar el riesgo individual y social por esta amenaza, y finalmente se revisan los modelos existentes de valoración de infraestructuras de potabilización. En la segunda parte de la Tesis, se desarrolla el modelo, presentando las estructuras y procesos de cálculo seguidos, así como las herramientas utilizadas en su construcción. Del modelo de riesgo desarrollado, partiendo de parámetros operacionales en línea de la planta potabilizadora, se obtiene como resultado la estimación del riesgo al que la planta está sometiendo a la población servida, funcionando en ese modo. Se ha desarrollado un proceso de cálculo en el que se utilizan técnicas de Montecarlo para la simulación. En la tercera parte se aplica un caso de estudio, especialmente interesante e ilustrativo. Se ha aplicado el modelo a una planta potabilizadora en servicio, obteniendo interesantes conclusiones y recomendaciones sobre cómo mejorar su modo de funcionamiento. En la cuarta parte de la tesis se extraen las conclusiones generales del trabajo desarrollado y las futuras líneas de investigación a seguir. Como principal conclusión del trabajo realizado, es que el tratamiento convencional de las potabilizadoras puede actuar de barrera efectiva frente a estas amenazas, pero es necesario evaluar en las plantas el riesgo de su modo de funcionamiento, pues aún con las limitaciones del conocimiento disponible, en la estimación del riesgo, se pueden alcanzar valores del mismo, no tolerables. En ese caso, en la planta deberán realizarse mejoras su instalación o en su operación para alcanzar unos niveles de riesgo tolerables. Muy probablemente, si la monitorización en línea del tratamiento hubiese estado integrada con una herramienta de cuantificación del riesgo como la que se desarrolla en el presente trabajo, el brote de cryptosporidiosis de Milwaukee en 1993, ocasionado por el fallo de una planta potabilizadora de tratamiento convencional, podría haberse evitado o, al menos, reducido en magnitud. Finalmente, se recogen las referencias bibliográficas y los ap / [CA] En les últimes dos dècades s'ha desenrotllat un interés especial en el sector la potabilització de l'aigua, relatiu a la quantificació de la seguretat de la qualitat de l'aigua subministrada i en eixe sentit s'espera precisament que canvien les pròximes legislacions nacionals per recomanacions de la Organització Mundial de la Salut, en el que es diu Plans de Seguretat de l'Aigua. Dins d'esta seguretat es considera inclosa la microbiologia present en l'aigua, com és lògic. És des de l'any 1993, quan canvia dràsticament el panorama en el sector. Això es deu a un brot epidemiològic que va succeir en Milwaukee, a l'abril de 1993, emmalaltint a més de quatrecentes mil persones, amb quasi un centenar de difunts i paralitzant completament la ciutat. De tota la potencial microbiología present en l'aigua, aquella que es considerava de major amenaça sobre la qualitat de l'aigua dels abastiments que s'alimenten d'aigua superficial, és un protozou considerat per la Organització Mundial de la Salut, com el patogen emergent de més perillositat, cridat genèricament cryptosporidium, que va ser el que va ocasionar el brot de Milwaukee de 1993. Amb tot això, és necessari veure si respecte a estes noves amenaces potencials com el cryptosporidium, els tractaments convencionals poden continuar sent capaços. És llavors quan este treball, consistent a desenrotllar en detall una metodologia que permeta quantificar el risc per a la presa de decisions de l'operador és interessant per al sector. Una ferramenta metodològica que siga capaç de quantificar el risc que se cern sobre el patogen emergent de més importància en l'actualitat. En la primera part del treball realitza una revisió bibliogràfica de la temàtica, dels patògens emergents, de la presència del cryptosporidium en les aigües superficials, de la fiabilitat de l'anàlisi dels mateixos i de la quantificació de l'eliminació que la planta potabilitzadora efectua amb diferents tractaments. Posteriorment s'analitzen els models que permeten estimar el risc individual i social per esta amenaça. A continuació es revisen els models existents de valoració d'infraestructures de potabilització. En la segona part del treball, es desenrotlla el model, presentant les estructures i processos de càlcul seguits, així com les ferramentes utilitzades en la seua construcció. També es desarolla el model de presa de decisions en funció del risc calculat. El model de risc, té com a començament sencills paràmetres operacionals de la planta potabilitzadora, obtenint com a resultat, l'estimació del risc que la planta està donant a la població, funcionant d'aquesta manera. Es desarrolla un procés de càlcul utilitzant tècniques de Montecarlo per a la simulació. En la tercera part s'aplica un cas d'estudi, especialment interessant i molt pròxim i il¿lustratiu. En la quarta part del treball s'extrauen les conclusions generals del treball desenrotllat i les futures línies d'investigació que s'ha de seguir. Com a principal conclusió del treball fet, és que el tractament convencional de las potabilitzadores hi pot fer-ne de barreta front a aquestes amenaçes, no obstant és necessari evaluar à les plantes el risc de funcionament, encara que amb les limitacions del coneiximent disponible en l'estimació del risc, es poden tindre valors de risc no tolerables. En eixe cas, à la planta es deuràn de fer-ne millores en la seua instal.lació ó en la seua operació fins a tindre uns nivels de risc tolerables. És molt probable que si la monitorització de la línia de tractament hi-haguera estat integrada amb una ferramenta de cuantificació del risc, com la desarrollada en el present treball, el brot de Milwaukee de 1993 ocasionat pel fallo de funcionament de la planta potabilitzadora, es podra haver evitat o reduït. Finalment, s'arrepleguen referències bibliogràfiques i apèndixs. / Macián Cervera, VJ. (2015). Desarrollo de una herramienta de análisis de riesgo microbiológico en plantas potabilizadoras de agua como soporte a la toma de decisiones de inversión y operación [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/58770 / TESIS