Células transformadas de E.coli DH5-&#945; expressando a proteína verde fluorescente (GFPuv, pico de excitação e emissão de 394nm e 509nm) foram submetidas a extração pelo método de partição de três fases (TPP) e o extrato obtido purificado por cromatografia de interação hidrofóbica (HIC). O objetivo principal deste trabalho foi estudar a termoestabilidade da GFPuv extraída, para avaliar a sua possível utilização como indicador biológico econômico, de resposta rápida e precisa para processos térmicos de esterilização utilizando o calor úmido. A estabilidade térmica da proteína foi estudada em diferentes soluções-tampão (acetato, fosfato e tris-HCI 10mM) no intervalo de valor de pH de 5,O a 9,0 e, em temperaturas entre 75&#176; e 95&#176;C. Os parâmetros de resistência térmica determinados foram: o tempo de redução decimal (Valor D - min), valor z (&#176;C), coeficiente Q10 e valor de energia de ativação (kcal/mol). A termoestabilidade da GFPuv, expressa em valor D, mostrou correlação linear para valores de pH &#8805; 5,50, em tampão acetato. Em tampão fosfato, para valores de pH &#8805; 7,50 a estabilidade térmica da proteína foi independente do valor de pH da solução. Em tampão tris-HCI, o valor D mostrou-se inconstante ao aumento do valor de pH da solução. No intervalo de temperatura estudada, em tampão acetato a GFPuv apresentou melhor termoestabilidade (Ea de 19,27 kcal/mol) do que em tampão fosfato (Ea de 26,18 kcal/mol ao valor de pH 6,S) e em tampão tris-HCI (Ea 28,19 kcallmol ao valor de pH 7,0). Em tampão acetato e tris-HCI ao valor de pH 7,0, a termoestabilidade da proteína mostrou-se equivalente. Entretanto, em tampão fosfato aos valores de pH 7,5 e 8,0 e em tampão tris-HCI aos valores de pH 8,0 e 8,5 a GFPuv apresentou menor estabilidade térmica A GFPuv apresenta potencialidade para ser utilizada como indicador biológico em processos térmicos que utilizam calor úmido às temperaturas inferiores a 100°C. / Transformed cells of Escheríchía coli DH5-&#945; expressing recombinant green fluorescent protein (GFPuv, excitation and emission peaks at 394nm and 509nm), were subjected to the three-phase partitioning (TPP) method and the release extracts were eluted through methyl HIC column with a buffer solution (10 mM Tris-HCI, 10mM EDTA, pH=8.0). The purpose of this work was to study the thermal stability of the TPP-extracted recombinant protein, GFPuv, to determine its utility as a quick, accurate and economical biological indicator for moist heat-treatments. The thermal stability of the extracted GFPuv was studied in different buffer solutions (acetate, phosphate and tris-HCI 10mM) in the range of pH between 5.0 and 9.0 and at temperature between 75-95°C. The thermal resistance parameters determinated were: decimal reduction times (D-values, min), z-value (&#1776C), Q<sub<10 coefficient and Activation Energy (Ea, Kcal/mol). The thermal stability of GFPuv, expressed in D-values, showed linear correlation for pH &#8805; 5.50 in acetate buffer. In phosphate buffer, for pH &#8805; 7.50 the thermal stability was independent of pH value. In tris-HCI buffer the D-value was shown variable with the increase of pH value. In the studied temperature range, the acetate buffer at pH 6.0 presented better thermal stability for GFPuv (Ea 19.27kcal/mol) than phosphate (Ea 26.18 kcal/mol at pH 6.5) and tris-HCI buffer (Ea 28.19 kcal/mol at pH 7.0). In acetate and tris-HCI buffers at pH 7.0, GFPuv showed equivalent thermal stability. However, GFPuv showed lower thermal stability in phosphate buffer at pH 7.5 and 8.0 and in tris-HCI buffer at pH 8.0 and 8.5. The TPP-extracted GFPuv has great potential to be applied as a biological indicator in moist heat processes at temperatures below 100°C.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-18T14:56:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoEpidemiologicaGenotipica.pdf: 2006227 bytes, checksum: 29730c9982b04cd3d56cbf0c52947d27 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-11-08T14:22:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoEpidemiologicaGenotipica.pdf: 2006227 bytes, checksum: 29730c9982b04cd3d56cbf0c52947d27 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-08T14:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoEpidemiologicaGenotipica.pdf: 2006227 bytes, checksum: 29730c9982b04cd3d56cbf0c52947d27 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A criptococose é uma infecção fúngica causada por uma levedura encapsulada do gênero Cryptococcus que afeta tanto humanos quanto animais, sendo considerada como uma infecção oportunista normalmente associada à imunodepressão. Trata-se de uma das infecções fúngicas humanas de significativa morbidade e mortalidade tanto em indivíduos imunocomprometidos quanto em imunocompetentes, e manifesta-se principalmente sob a forma de meningoencefalite. O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização epidemiológica, genotípica e fenotípica da criptococose em uma unidade de referência no estado do Pará. A população alvo foi composta pelos pacientes atendidos no Hospital Universitário João de Barros Barreto/UFPA, de janeiro de 2010 a dezembro de 2011 com diagnóstico de criptococose confirmado laboratorialmente. Os dados pessoais, clínicos e laboratoriais foram coletados a partir da revisão dos prontuários do arquivo médico do HUJBB e os isolados foram identificados e caracterizados morfológica e bioquimicamente. O tipo sexuado e o genótipo foram identificados através de PCR utilizando iniciadores específicos. No período de janeiro de 2010 a dezembro de 2011 foram identificados 59 casos de criptococose. A maioria dos pacientes eram homens (36/59, 61%), com idade entre 5 a 70 anos, média de 30,8 anos. A faixa etária que predominou foi de 34 a 43 anos (39% dos casos). Os principais sinais e sintomas apresentados por eles foram cefaleia (85,5%), vômito (80%) e febre (76,4%). Todas as crianças (6/6) eram HIV negativas, tendo como agente causador o C. gattii (31,6%); já em adultos 71,1% das infecções eram causadas por C. neoformans, sendo a maioria HIV positivo. Os casos de óbito e de recidivas foram mais elevados entre os pacientes infectados por C. neoformans e a presença de sequelas foi mais frequente entre os pacientes infectados por C. gattii. Todos os isolados eram MAT α e houve a predominância de dois tipos moleculares: VNI (64,4%) e VGII (35,6%). Este estudo reforça que o estado do Pará é endêmico para a infecção por Cryptococcus spp., cuja forma de apresentação clinica principal, a meningoencefalite determina elevadas taxas de morbi-mortalidade. / Cryptococcosis is a fungal infection caused by an encapsulated yeast Cryptococcus genus that affects both humans and animals, and is considered as an opportunistic infection commonly associated with immunosuppression. This is one of human fungal infections cause significant morbidity and mortality in both immunocompetent and in immunocompromised individuals and appears mainly in the form of meningoencephalitis. The aim of this study was to characterize epidemiological, genotypic and phenotypic cryptococcosis in a reference unit in the state of Pará. The target population was composed of patients treated at the University Hospital João de Barros Barreto/UFPA, January 2010 to December 2011 with laboratory confirmed diagnosis of cryptococcosis. Personal, clinical and laboratory data were collected from a review of medical records file HUJBB and the isolates were identified and characterized morphologically and biochemically. The type sexed and genotype were identified by PCR using specific primers. From January 2010 to December 2011 were identified 59 cases of cryptococcosis. Most patients were men (36/59, 61%), aged 5-70 years, mean 30.8 years. The predominant age group was 34-43 years (39% of cases). The main signs and symptoms presented by them were headache (85.5%), vomiting (80%) and fever (76.4%). All children (6/6) were HIV negative, and as the causative agent C. gattii (31.6%), while in adults 71.1% of infections were caused by C. neoformans, most HIV positive. The cases of death and recurrence were higher among patients infected with C. neoformans and the presence of sequelae was more frequent among patients infected with C. gattii. All isolates were MAT α and there was a predominance of two molecular types: VNI (64.4%) and VGII (35.6%). This study reinforces that the state of Pará is endemic to infection by Cryptococcus spp., Whose main clinical presentation, meningoencephalitis determines high rates of morbidity and mortality.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-04-16T19:57:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_QualidadeBacteriologicaAgua.pdf: 3321901 bytes, checksum: 8d67b7242ebd3d0bd2e31aada1886d97 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-04-17T14:45:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_QualidadeBacteriologicaAgua.pdf: 3321901 bytes, checksum: 8d67b7242ebd3d0bd2e31aada1886d97 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-17T14:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_QualidadeBacteriologicaAgua.pdf: 3321901 bytes, checksum: 8d67b7242ebd3d0bd2e31aada1886d97 (MD5) Previous issue date: 2006 / O saneamento ambiental é um dos mais importantes meios de prevenção de doenças, mas infelizmente não é uma realidade em todos os setores da população, gerando uma situação preocupante para os profissionais de Saúde Pública. A problemática relativa à saúde e meio ambiente mostra-se particularmente importante para a região norte do Brasil, onde pessoas habitam as margens de rios e igarapés com carência ou até mesmo, ausência de infra-estrutura de saneamento, estando expostas a possíveis riscos de contaminação. Neste estudo, de caráter descritivo exploratório, utilizou-se métodos quali-quantitativos, visando diagnóstico bacteriológico da água consumida pelos ribeirinhos habitantes da região insular, mais especificamente nas ilhas de Paulo da Cunha (Ilha Grande) e Murutucu na zona rural do município de Belém-Pa. Foram coletadas 96 amostras de água armazenada nas residências e 80 amostras de água superficial em dez pontos localizados ao entorno das ilhas. Foi avaliado o número de Coliformes termotolerantes e Contagem Padrão de Bactérias Heterotróficas na água armazenada para consumo, assim como Coliformes termotolerantes Estreptococos/Enterococos fecais e enteropatógenos bacterianos na água superficial. Na Ilha Grande os resultados revelam concentrações que variaram de 25 a 3600, 15 a 420 e 15 a 420, para coformes termotolerantes, Estreptococos e Enterococos fecais, respectivamente, em relação à ilha Murutucu estes valores variaram de 540 a 2600, 44 a 680 e 44 a 448, respectivamente para os mesmos indicadores. A presença de Salmonella spp foi observada em 27,5% na Ilha Grande e 12,5% na Ilha de Murutucu. Foi verificado que 58,7% e 66% das amostras de água de consumo nas Ilhas Grande e Murutucu, respectivamente foram consideradas impróprias para consumo, com presença de coliformes termotolerantes. Em relação a bactérias heterotróficas, 41,3% na Ilha Grande e 15% na Ilha de Murutucu possuíam mais de 500 UFC/ml. Considerando-se os resultados obtidos no presente trabalho verificamos que a água utilizada nas zonas rurais pode funcionar como um fator de risco à saúde dos seres humanos que a utilizam. / The ambient sanitation is one of the most important ways of prevention of illnesses, but unhappyly it is not a reality in all the sectors of the population, generating a preoccupying situation for the professionals of Public Health. Problematic relative to the health and the environment reveals particularly important for the brazilian north region, where people inhabit the edges of rivers and igarapés with lack or even though, infrastructure of sanitation absence, being displayed to possible risks of contamination. In this study, of expedition descriptive character, were used quali-quantitative methods, aiming at bacteriological diagnostics of the water consumed for the marginal inhabitants of the region of the islands, more specifically in the islands of Paulo da Cunha (Grande island) and Murutucu in the agricultural zone of the city of Belém-Pará. 96 water samples stored in the residences and 80 superficial water samples had been collected in ten points located surrounding area of the islands. It was evaluated the number of Termotolerants Coliforms and Standard Counting of Heterotrofics Bacteria in the water stored for consumption, as well as Termotolerants coliforms, fecals Estreptococos/Enterococos and bacterial enteropathogens in the superficial water. In the Grande island the results disclose concentrations that had varied of 25 to 3600, 15 to 420 and 15 to 420, for termotolerants Coliforms, fecals Estreptococos and Enterococos, respectively, in relation to the Murutucu island these values had varied of 540 to 2600, 44 to 680 and 44 to 448, respectively for the same pointers. The presence of Salmonella spp was observed in 27,5% in Grande island and 12.5% in the Murutucu island. It was verified that 58.7% and 66%, of the water samples of consumption in the islands Grande and Murutucu, had been respectively considered improper for consumption, with presence of termotolerants coliforms. In relation to heterotrofics bacteria, 41.3% in Grande island e 15% in the Murutucu island had 500 more than UFC/mL. Considering itself the results gotten in the present work verify that the water used in the agricultural zones can function as a factor of risk to the human health that use it.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-01-29T20:31:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_UtilizacaoIndicadoresBiologicos.pdf: 926466 bytes, checksum: 4395d8ba6aced356eb8c8b3eca155106 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-01-31T15:54:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_UtilizacaoIndicadoresBiologicos.pdf: 926466 bytes, checksum: 4395d8ba6aced356eb8c8b3eca155106 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-31T15:54:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_UtilizacaoIndicadoresBiologicos.pdf: 926466 bytes, checksum: 4395d8ba6aced356eb8c8b3eca155106 (MD5) Previous issue date: 2006 / Belém, a capital do estado do Pará, possui uma posição geográfica privilegiada devido a uma vasta rede hidrográfica que permite a entrada de marés vinda da baía do Guajará e do rio Guamá. Estes são importantes ecossistemas aquáticos para a região. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a qualidade da água da baía do Guajará e do rio Guamá através de análises microbiológicas e da utilização de peixes como biomarcadores. Durante o estudo foram feitas quatro coletas durante quatro períodos: intermediário chuvoso (dezembro/04), chuvoso (março/05), intermediário seco (junho/05) e seco (setembro/05). Foram coletadas 100ml de água superficial em quatro pontos localizados na baía do Guajará (porto do Arapari, Ver -o – Peso, igarapé do Una e ilha da Barra) e três pontos no rio Guamá (Linhão, igarapé do Tucunduba e porto da Palha). A análise microbiológica foi feita de acordo com a descrição da 20ª edição do Standard Methods for the Examination of Water and Wasterwater (APHA, 1998). Para a analise de biomarcadores foram feitas pescarias experimentais e capturados um total de 36 peixes da espécie Brachyplatystoma rousseauxii. Após a coleta foi feita análise histológica do fígado. Os resultados das análises microbiológicas demonstraram que em seis pontos de coleta as concentrações de coliformes totais e termotolerantes foram maiores durante os períodos intermediário chuvoso e chuvoso, sendo que o ponto localizado na ilha da Barra apresentou baixa concentração desses indicadores sanitários durante os quatro períodos de coleta. A água da baía do Guajará e do rio Guamá de acordo com a portaria do CONAMA Nº 357/ 2005 são águas pertencentes a classe três, no entanto elas apresentaram níveis de coliformes totais e termotolerantes acima do limite estabelecido para esta classe de água, com exceção do ponto localizado na ilha da Barra. A análise microbiológica sugere que a água da baía do Guajará e do rio Guamá apresenta altos índices de contaminação fecal. Em relação a análise dos fígados da espécie Brachyplatystoma rousseauxii os resultados demonstram que nos locais de lançamentos de efluentes houve uma variação no número de indivíduos com alterações do tecido hepático, sendo encontrados 24 peixes com alterações. O igarapé do Una foi o local com maior número de peixes com fígados alterados. Os resultados encontrados neste trabalho sugerem que o ambiente da baía do Guajará e do rio Guamá encontram-se em início de degradação devido ao excesso de despejo de efluente doméstico e industrial que representam um risco para o equilíbrio das comunidades aquáticas. / Belém, of Pará has a hight hydrographic system, in this way is possible the entrance of tides come from Guajará’s bay and of Guamá river. These are important aquatics ecosystems to the region. The purpose of these research is to evaluate the quality of water from Guajará’s bay and Guamá river, through of mycrobiologics and biomarkers analysis. During the research were made four collects in four period: intermediate rainy( December/ 04), rainy( March/05), intermediate dry (June/ 05) and dry (September/ 05). Sample 100 ml of surface-water were collected in four places in Guajará’s bay ( Arapari’s harbor, Ver-O-Peso, Una´s River and Barra’s Island) and three places in Guamá’s river ( Linhão, Tucunduba river, and Palha’s harbor). The mycrobiologic analysis was done accordance with the description of 20th edition of standard methods for the examination of water and wastewater (APHA, 1998). To the analysis of biomarkers was captured Brachyplatystoma rousseauxii specie. After of collect we did analysis histological analysis of livers. The result of the microbiological analysis showed that in six places of the collect the concentration of total coliforms and termotolerants were higher during the intermediate rainy period. During the four period of collect, Barra’s island showed a less concentration of these domestic polution. In accordance with law CONAMA 357/2005, the water of Guajará’s bay and Guamá river belong to class three, but they have more total colifoms and termotolerants than is determinate to this water´s class, however the in Barra’s island was the exception. The microbiological analysis showed a high fecal contamination in the Guajará’s bay and Guamá river. The result of analysis in the livers of Brachyplatystoma rousseauxii specie showed variations in hepatic tissue of some this fishes collected in places where the effluents are threw, we met 24 fishes with alteration. The Una’s river had more fishes with alteration than others. The result of this studies showed that the environment of Guajará’s bay and the Guamá river are in a initial degradation, because a lot of domestics and industrial effluents are throw in this waters. It affects the balance of aquatics community.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-12T12:43:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_PerfilEpidemiologicoDemografico.pdf: 797086 bytes, checksum: 6371b7060d39911bf8d74c591d4c2938 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-14T16:41:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_PerfilEpidemiologicoDemografico.pdf: 797086 bytes, checksum: 6371b7060d39911bf8d74c591d4c2938 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-14T16:41:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_PerfilEpidemiologicoDemografico.pdf: 797086 bytes, checksum: 6371b7060d39911bf8d74c591d4c2938 (MD5) Previous issue date: 2006 / O Vírus da imunodeficiência humana 1 (HIV-1), agente etiológico responsável pela pandemia de Sida/Aids, apresenta ampla distribuição geográfica. No Brasil, segundo país em número de notificações nas Américas, o número de indivíduos registrados com a doença alcançou 371.827 casos desde o início da epidemia até 2005. O presente trabalho teve como objetivo principal realizar a caracterização epidemiológica – demográfica (sexo e faixa etária), clínica (estágio clínico, tratamento e rogas utilizadas) e laboratorial (contagens de linfócitos T CD4+/CD8+ e carga viral plasmática no primeiro atendimento) – de portadores do HIV-1 e/ou pacientes com Sida/Aids na população de Belém do Pará. Foram selecionados 1.266 pacientes provenientes da Unidade de Referência Especializada em Doenças Infecciosas e Parasitárias Especiais (URE-DIPE), cujas amostras foram encaminhadas ao Laboratório de Virologia da Universidade Federal do Pará para realização dos testes laboratoriais referidos acima. Os principais resultados revelaram uma prevalência de infecção pelo HIV-1 na faixa etária mais jovem da população (13-30 anos e 30-49 anos), o uso preferencial de triploterapia (três drogas combinadas) e duploterapia (duas drogas combinadas) para o tratamento, bem como a resposta imunológica dos indivíduos portadores do HIV-1 e/ou com Sida/Aids da população de Belém entre os anos de 1998 e 2002. / The Virus of human imunodeficiency 1 (HIV-1), responsible etiological agent for the pandemic of Sida/Aids, presents wide geographical distribution. In Brazil, according to country in number of notifications in America, the number of individuals registered with the disease reached 371.827 cases since the beginning of the epidemic up to 2005. The present work had as main objective to accomplish the epidemic characterization - demographic (sex and age group), clinic (clinical apprenticeship, treatment and used drugs) and laboratorial (countings of linphocytes T CD4+/CD8+ and load plasmatic viral in the first service) - of carriers of the HIV-1 and/or patients with Sida/Aids in the population of Belem of Para. 1.266 patients were selected coming of the Unit of Reference Specialized in Infectious and Parasitic Diseases Special (URE-DIPE), whose samples had been directed to the Laboratory of Virology of the Federal University of Para for accomplishment of the related laboratorial tests above. The main results revealed a prevalence of infection for the HIV-1 in the age group more youth of the population (13-30 years and 30-49 years), the preferential use of triploterapia (three combined drugs) and duploterapy (two combined drugs) for the treatment, as well as the immunological reply of the individuals bearers of the HIV-1 and/or with Sida/Aids of the population of Belem among the years of 1998 and 2002.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:25:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 patricia kott.pdf: 7658177 bytes, checksum: ad9ad7831fb8596c7e55d3b1f0eee117 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Paracoccidioides brasiliensis is a thermo-dimorphic human pathogenic fungus that lives at 23&#148;C in the mycelium phase (infecting phase) and at 37&#148;C in the yeast phase (parasite phase). In attempt to survive, the cell wall of fungi can change its composition and/or structure in response to environmental stress by compensatory mechanisms. The molecules involved in these mechanisms are possible target for the development of effective antifungal agents. In P. brasiliensis, the main components of the cell wall are glucans and chitin polymers. These polymers make a primary barrier that is responsible for the structural integrity and form of the cell wall. In this work the behavior of P. brasiliensis was evaluated against stress conditions with the aim of study, for the first time, the mechanisms used by this fungus in the maintenance of the cell wall integrity. Our results shown that P. brasiliensis yeast cells are sensitive to cell wall stressors calcofluor white (CFW), congo red (CR), SDS, KCl, NaCl and sorbitol. There was an increase in the PbFKS1 transcripts expression and in the content of cell wall &#946;- 1,3-glicana after treatment with all stressor agents. After treatment with SDS and KCl the PbGFA1 transcripts expression and the cell wall GlcNAc residues also increased. The transcript expression of PbGEL3 was also evaluated being increased after treatment with CFW, NaCl and sorbitol. Thus we showed that these molecules are involved in the maintenance of the cell wall against stress conditions. Apart from these analyses we obtained the active recombinant protein PbFks1pc. Through the anti-PbFks1pc antibody we performed immunocitolocalization assays. These experiments revealed the localization of PbFks1p in regions of apical growth in the mycelium phase and in the cell surface in yeast phase. / Paracoccidioides brasiliensis &#138; um fungo patog&#137;nico e termodim&#130;rfico que se apresenta na forma de mic&#138;lio a 23&#148;C (forma infectante) e na forma de levedura a 37&#148;C (forma parasit&#128;ria). A parede celular de fungos &#138; capaz de alterar sua composi&#131; o e at&#138; mesmo sua estrutura em resposta a condi&#131;&#149;es ambientais de estresse atrav&#138;s de mecanismos compensat&#130;rios. As prote&#133;nas envolvidas nestes mecanismos s o poss&#133;veis alvos para o desenvolvimento de agentes antif&#136;ngicos espec&#133;ficos. Em P. brasiliensis, os principais pol&#133;meros que constituem a parede celular s o glicanas e quitina. Estes pol&#133;meros formam uma barreira prim&#128;ria que &#138; respons&#128;vel pela integridade estrutural e forma da parede celular. Neste trabalho, o comportamento de P. brasiliensis diante de situa&#131;&#149;es de estresse foi investigado com o intuito de estudar, pela primeira vez, os mecanismos utilizados por este fungo na manuten&#131; o da integridade da parede celular. Nossos resultados mostram que c&#138;lulas leveduriformes de P. brasiliensis s o sens&#133;veis aos agentes estressores da parede celular calcofluor white (CFW), congo red (CR), SDS, NaCl, KCl e sorbitol. Houve um aumento na express o de transcritos de PbFKS1 e no conte&#136;do do pol&#133;mero de &#946;-1,3-glicana na parede celular ap&#130;s tratamento com todos os agentes estressores. Ap&#130;s tratamento com SDS e KCl a express o de transcritos de PbGFA1 assim como o conte&#136;do de res&#133;duos de GlcNAc na parede celular tamb&#138;m aumentaram. A express o dos transcritos de PbGEL3 tamb&#138;m foi avaliada estando aumentada ap&#130;s tratamento com CFW, NaCl e sorbitol. Desta forma, mostramos que estas mol&#138;culas est o envolvidas na manuten&#131; o da parede celular diante de situa&#131;&#149;es de estresse. Al&#138;m destas an&#128;lises, a prote&#133;na recombinante PbFks1pc ativa foi obtida. Atrav&#138;s do anticorpo anti-PbFks1pc realizamos ensaios de imunocitolocaliza&#131; o. Estes experimentos revelaram a presen&#131;a de PbFks1p em regi&#149;es de crescimento apical no mic&#138;lio e na superf&#133;cie celular em c&#138;lulas leveduriformes.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-11-10T16:51:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoSanitariaAgua.pdf: 8775706 bytes, checksum: e71348719f40fedb3d237f4b01cb39f4 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-11-11T13:28:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoSanitariaAgua.pdf: 8775706 bytes, checksum: e71348719f40fedb3d237f4b01cb39f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-11T13:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoSanitariaAgua.pdf: 8775706 bytes, checksum: e71348719f40fedb3d237f4b01cb39f4 (MD5) Previous issue date: 2011 / O cultivo de espécies de ostras do gênero Crassostrea está em expansão no nordeste do estado do Pará, Brasil. Este estudo analisa a qualidade sanitária das ostras e da água em que são cultivadas nos municípios de São Caetano de Odivelas e Curuçá. As coletas foram realizadas mensalmente entre junho de 2009 e maio de 2010. As amostras de águas foram coletadas nas marés enchente e vazante, e cerca de 15 ostras foram obtidos a cada mês durante a maré vazante. Concentrações de coliformes foram determinadas usando a Técnica de Fermentação de Tubos Múltiplos, seguida pela identificação bioquímica das bactérias e determinação do perfil de suscetibilidade de Escherichia coli isoladas a partir de amostras de águas e ostras. A média geométrica das concentrações de coliformes termotolerantes na água foi de 119 mL MPN/100 em São Caetano de Odivelas e 163,21 MPN/100 mL em Curuçá, valores bem acima do limite de 43 mL MPN/100 estabelecido pelo Conselho Nacional do Meio Ambiente Brasileiro (CONAMA). Como a legislação brasileira relacionada à qualidade sanitária dos moluscos bivalves destina-se apenas ao produto processado, foi adotada a legislação da União Europeia, que classifica as ostras para o consumo cru em três classes sanitárias. Em São Caetano de Odivelas, apenas duas das amostras coletadas durante este estudo foram atribuídas para a classe A, sete amostras para a classe B e três amostras para a classe C. Enquanto em Curuçá três amostras foram atribuídas à classe A, sete amostras para a classe C e duas amostras para a classe C. Os resultados sugerem a necessidade de medidas mitigatórias para garantir a qualidade sanitária das ostras, tais como a aplicação de métodos de depuração. / The cultivation of oyster species of the genus Crassostrea is expanding in the northeast of the Brazilian state of Pará. This study analyzes the sanitary quality of the oysters and the water in which they are cultivated in the local municipality of São Caetano de Odivelas and Curuçá. Samples were collected monthly between June, 2009, and May, 2010. Water samples were collected from the flood and the ebb tides, and approximately 15 oysters were obtained each month. Coliform concentrations were determined using the multiple-tube fermentation technique, followed by the biochemical identification of the bacteria and determination the susceptibility profile of Escherichia coli isolated from oysters and water samples. The geometric mean concentration of thermotolerant coliforms in the water was 119 MPN/100 mL in São Caetano de Odivelas and 163,21 MPN/100 mL in Curuçá, well above the limit of 43 MPN/100 mL established by the Brazilian National Environment Council (CONAMA). As Brazilian legislation on the sanitary quality of bivalve mollusks covers only the processed product, the European Union legislation, which assigns oysters for raw consumption to three sanitary classes, was adopted for the evaluation of the results of the present study. In São Caetano de Odivelas only two of the samples collected during this study were assigned to class A, seven samples to class B and three samples to class C. While in Curuçá three samples were assigned to class A, seven samples to class C and two samples to class C. The results suggest the need for mitigation measures to ensure the health quality of the oysters, such as the application of methods of depuration.

Células transformadas de E.coli DH5-&#945; expressando a proteína verde fluorescente (GFPuv, pico de excitação e emissão de 394nm e 509nm) foram submetidas a extração pelo método de partição de três fases (TPP) e o extrato obtido purificado por cromatografia de interação hidrofóbica (HIC). O objetivo principal deste trabalho foi estudar a termoestabilidade da GFPuv extraída, para avaliar a sua possível utilização como indicador biológico econômico, de resposta rápida e precisa para processos térmicos de esterilização utilizando o calor úmido. A estabilidade térmica da proteína foi estudada em diferentes soluções-tampão (acetato, fosfato e tris-HCI 10mM) no intervalo de valor de pH de 5,O a 9,0 e, em temperaturas entre 75&#176; e 95&#176;C. Os parâmetros de resistência térmica determinados foram: o tempo de redução decimal (Valor D - min), valor z (&#176;C), coeficiente Q10 e valor de energia de ativação (kcal/mol). A termoestabilidade da GFPuv, expressa em valor D, mostrou correlação linear para valores de pH &#8805; 5,50, em tampão acetato. Em tampão fosfato, para valores de pH &#8805; 7,50 a estabilidade térmica da proteína foi independente do valor de pH da solução. Em tampão tris-HCI, o valor D mostrou-se inconstante ao aumento do valor de pH da solução. No intervalo de temperatura estudada, em tampão acetato a GFPuv apresentou melhor termoestabilidade (Ea de 19,27 kcal/mol) do que em tampão fosfato (Ea de 26,18 kcal/mol ao valor de pH 6,S) e em tampão tris-HCI (Ea 28,19 kcallmol ao valor de pH 7,0). Em tampão acetato e tris-HCI ao valor de pH 7,0, a termoestabilidade da proteína mostrou-se equivalente. Entretanto, em tampão fosfato aos valores de pH 7,5 e 8,0 e em tampão tris-HCI aos valores de pH 8,0 e 8,5 a GFPuv apresentou menor estabilidade térmica A GFPuv apresenta potencialidade para ser utilizada como indicador biológico em processos térmicos que utilizam calor úmido às temperaturas inferiores a 100°C. / Transformed cells of Escheríchía coli DH5-&#945; expressing recombinant green fluorescent protein (GFPuv, excitation and emission peaks at 394nm and 509nm), were subjected to the three-phase partitioning (TPP) method and the release extracts were eluted through methyl HIC column with a buffer solution (10 mM Tris-HCI, 10mM EDTA, pH=8.0). The purpose of this work was to study the thermal stability of the TPP-extracted recombinant protein, GFPuv, to determine its utility as a quick, accurate and economical biological indicator for moist heat-treatments. The thermal stability of the extracted GFPuv was studied in different buffer solutions (acetate, phosphate and tris-HCI 10mM) in the range of pH between 5.0 and 9.0 and at temperature between 75-95°C. The thermal resistance parameters determinated were: decimal reduction times (D-values, min), z-value (&#1776C), Q<sub<10 coefficient and Activation Energy (Ea, Kcal/mol). The thermal stability of GFPuv, expressed in D-values, showed linear correlation for pH &#8805; 5.50 in acetate buffer. In phosphate buffer, for pH &#8805; 7.50 the thermal stability was independent of pH value. In tris-HCI buffer the D-value was shown variable with the increase of pH value. In the studied temperature range, the acetate buffer at pH 6.0 presented better thermal stability for GFPuv (Ea 19.27kcal/mol) than phosphate (Ea 26.18 kcal/mol at pH 6.5) and tris-HCI buffer (Ea 28.19 kcal/mol at pH 7.0). In acetate and tris-HCI buffers at pH 7.0, GFPuv showed equivalent thermal stability. However, GFPuv showed lower thermal stability in phosphate buffer at pH 7.5 and 8.0 and in tris-HCI buffer at pH 8.0 and 8.5. The TPP-extracted GFPuv has great potential to be applied as a biological indicator in moist heat processes at temperatures below 100°C.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3024.pdf: 4531108 bytes, checksum: 1e95a8ef5ff0d05c05375d174d890b9e (MD5) Previous issue date: 2010-04-22 / Universidade Federal de Minas Gerais / Fungi are known as one of the most promising sources of unprecedent bioactive compounds, however, marine derived fungi are still very poorly studied. These microorganisms present high percentages of active metabolites and they are commonly isolated from marine invertebrates. At this study, the associated microbiota of the marine sponge Dragmacidon reticulatum was investigated in order to know the microbial diversity and explore the biotechnological potential of those strains for the production of bioactive secondary metabolites. Fragments from D. reticulatum were incubated on Petri dishes with different growth media. Forty five strains were isolated, although only 40 presented satisfactory growth for the preservation and production of extracts. From these, 32 strains were analysed for their genetic polymorphism through the ARDRA method that showed 24 different ribotypes. Extracts produced from the growing media of the 40 strains were evaluated for their cytotoxic and/or antimicrobial activity. From those, 22 presented biological activities in at least one of the bioassays, and had their chemical profiles evaluated in HPLC-UV-MS. Considering only the different ribotypes, 20 strains were selected by the biological activity of their extracts and were submitted to molecular identification. These isolates were attributed to the Aspergillus, Penicillium, Cladosporium, Myrmecridium, Microphaeropsis, Sporidesmium and Westerdykella genera. One strain was identified as actinobacteria from the Streptomyces sp. genus, and had its extract investigated, because the marine derived actinobacteria are also potential sources of bioactive compounds. The isolation of the unprecedented compounds _,_-dehydrocurvularin, the I-6, O-2 and JKL-4, produced by the fungus Penicillium decaturense, demonstrated the effectiveness of the screening procedures used in strain selection as producers of metabolites of biotechnical interest, and the need of more studies with this strain and the other strains selected in this study (Streptomyces sp., Westerdykella sp. and Sporidesmium sp.). The results confirmed the biotechnological potential presented by marine derived fungi. / Os fungos são conhecidos como uma das fontes mais promissoras de compostos bioativos inéditos, no entanto, fungos derivados do ambiente marinho ainda são pouco estudados. Estes microrganismos apresentam altas porcentagens de metabólitos ativos e são comumente isolados de invertebrados marinhos. No presente estudo, a esponja marinha Dragmacidon reticulatum foi selecionada para ter sua microbiota associada investigada, de maneira a conhecer a diversidade de microrganismos associados a esta esponja e explorar o potencial biotecnológico destas linhagens para a produção de metabólitos secundários bioativos. Fragmentos da esponja D. reticulatum foram incubados em placas de Petri contendo diferentes meios de crescimento. Foram isoladas 45 linhagens, das quais 40 apresentaram crescimento satisfatório para preservação e produção de extratos. Destas, 32 foram avaliadas quanto ao seu polimorfismo genético por meio do método ARDRA. Os resultados da avaliação da diversidade genética permitiram identificar 24 ribotipos distintos das linhagens microbianas isoladas. Extratos produzidos a partir do cultivo das 40 linhagens isoladas foram avaliados quanto à sua atividade citotóxica e/ou antimicrobiana. Destes, 22 apresentaram atividade biológica em pelo menos um dos bioensaios, e tiveram seu perfil químico avaliados em CLAE-UV-EM. Considerando apenas os ribotipos distintos, 20 linhagens foram selecionadas pela atividade biológica de seus extratos e foram submetidas à identificação molecular. Estes isolados foram atribuídos aos gêneros Aspergillus, Penicillium, Cladosporium, Myrmecridium, Microphaeropsis, Sporidesmium e Westerdykella. Uma das linhagens foi identificada como uma actinobactéria do gênero Streptomyces sp., e teve seu extrato investigado, pois actinobactérias derivadas do ambiente marinho também são fontes potenciais de compostos bioativos. O isolamento da _,_- dehidrocurvularina e dos compostos I-6, O-2 e JKL-4 inéditos na literatura, a partir do fungo Penicillium decaturense, evidenciou a efetividade da seleção das linhagens como produtoras de metabólitos de interesse biotecnológico e a necessidade de continuidade dos estudos deste isolado e das outras linhagens selecionadas neste estudo (Streptomyces sp., Westerdykella sp. e Sporidesmium sp.). Os resultados confirmam o potencial biotecnológico apresentado por fungos derivados do ambiente marinho.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01 - capa_abstract.pdf: 113068 bytes, checksum: ac8d58045328d0ccbe13706fe9c3dede (MD5) Previous issue date: 2008-09-12 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The heavy oil (10 20ºAPI) is more than half of world oil reserves, there are predictions that in 2025 are the main source of oil in the world. The difficulties in exploration this kind of oil are associated with unfavorable characteristics such as density and viscosity (100 to 10.000 cP). With the need to improve the utilization of reservoir - in view of the relatively low levels of efficiency of traditional techniques - it has expanded the research to develop new techniques for recovery, especially Microbialy Enhanced Oil Recovery (MEOR). In the recovery of oil contained in sand-pack columns, two dimensionless variables are reported as important: the capillary number and ratio of viscosity. As the increases capillary number, the residual oil decreases. This can be achieved by reducing the interfacial tension between the fluid of residual oil. Several authors have reported the tensions interfaciais ultra between biosurfactant and hydrocarbons, including heavy oil. In the present work, tested the hypothesis that the biosurfactant produced on condition of reservoir, by two isolates of Bacillus subtilis from the collection of culture of the Laboratório de Biotecnologia e Biodiversidade para o Meio Ambiente (LBBMA / DMB / UFV), are capable to remove heavy oil in sand-pack columns. Initially, the isolates of Bacillus subtilis LBBMA 155 and Bacillus subtilis subsp. spizizenii LBBMA 258 were evaluated as to the growth and biosurfactant production in response to temperature and salinity. A central composite rotatable design (CCRD) was used, with temperature and salinity being independent variable. The results were analyzed using Response Surface Methodology (RSM) and showed that the those isolates were able of growth and biosurfactant production of under anaerobic conditions. The growth was influenced by temperature and biosurfactant production was influenced by temperature and salinity. After that, the biosurfactant produced by those isolates, alone or mixed, were analyzed as the ability to remove heavy oil trapped in sand-pack columms. The injection of three volumes of porous extract biossurfactante (EB) produced by Bacillus subtilis LBBMA 155 and Bacillus subtilis subsp. spizizenii LBBMA 258 removed 13.55% and 17.42%, respectively, from residual oil (14 ºAPI). The mixed of extracts from biosurfactant produced by those two isolates showed intermediate values of DMC and recovery of residual oil reported for each. Summarize, the extracts from biosurfactant (EB) produced under anaerobic conditions by Bacillus subtilis LBBMA 155 e Bacillus subtilis subsp. spizizenii LBBM 258 are effective in recovery heavy oil nuclei of the sand-pack columms and have potencial for use Microbialy Enhanced Oil Recovery. / Os óleos pesados (10-20 ºAPI) constituem mais da metade das reservas mundiais de petróleo, havendo previsões de que em 2025 sejam a principal fonte de petróleo no mundo. As dificuldades na exploração desse tipo de óleo estão associadas a características desfavoráveis, como densidade e viscosidade (100 a 10000 cP). Com a necessidade de melhorar o aproveitamento dos reservatórios tendo em vista os níveis relativamente baixos de eficiência das técnicas tradicionais tem-se ampliado as pesquisas para o desenvolvimento de novas técnicas de recuperação, destacando-se a recuperação avançada de petróleo melhorada por microrganismos (Microbially enhanced oil recovery MEOR). Na recuperação de óleos contidos em meios porosos, duas variáveis adimensionais são relatadas como importantes: o número capilar e a razão de viscosidade. À medida que o número capilar aumenta, o óleo residual decresce. Isso pode ser obtido por meio da redução da tensão interfacial entre o fluido de arraste e o óleo residual. Diversos autores têm reportado a obtenção de tensões interfaciais ultrabaixas entre biossurfactantes e hidrocarbonetos, incluindo o óleo pesado. Neste trabalho, testou-se a hipótese de que os biossurfactantes produzidos, em condição de reservatório, por dois isolados de Bacillus subtilis pertencentes à Coleção de Culturas do Laboratório de Biotecnologia e Biodiversidade para o Meio Ambiente (LBBMA/DMB/UFV), são capazes de mobilizar óleo pesado em sistemas porosos de areia. Inicialmente, os isolados de Bacillus subtilis LBBMA 155 e BacilIus subtilis spizizenii LBBMA 258 foram avaliados quanto ao crescimento e produção de biossurfactante em resposta a variações de temperatura e salinidade. Para tanto, foi empregada a Metodologia de Superfície de Resposta (MSR) através do delineamento experimental Composto Central Rotacional (DCCR), e observou-se que esses isolados foram capazes de produzir biossurfactantes em anaerobiose, sendo o crescimento influenciado pela temperatura e a produção de biossurfactante influenciada pela temperatura e pela salinidade. Posteriormente, os biossurfactantes produzidos por esses isolados, sozinhos ou em misturas, foram avaliados quanto à capacidade de mobilização de óleo pesado retido em núcleos porosos de areia. A injeção de três volumes porosos do extrato de biossurfactante (EB) produzidos por Bacillus subtilis LBBMA 155 e Bacillus subtilis subsp. spizizenii LBBMA 258 removeram 13,55% e 17,42%, respectivamente, de petróleo residual (14 ºAPI). A mistura dos extratos de biossurfactantes produzidos por esses dois isolados mostrou valores intermediários de DMC e recuperação de petróleo residual reportados para cada um. Sinteticamente, os extratos de biossurfactantes (EB) produzidos em anaerobiose por B. subtilis LBBMA 155 e B. subtilis subsp. spizizenii LBBMA 258 são efetivos na mobilização de óleo pesado em núcleos porosos de areia e possuem potencial de utilização na recuperação avançada de petróleo melhorada por microrganismos.