A pele dos anfíbios, assim como de outros animais, atua como primeira proteção contra agentes patogênicos. A comunidade microbiológica ali residente é composta de algumas espécies de bactérias, e estas, possuem ação antifúngica contra patógenos conhecidos, inclusive Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), o suposto agente principal de declínios de populações de anfíbios em diversas partes do mundo. Uma vez que as variáveis químicas e físicas de um ecossistema influenciam o crescimento, sobrevivência e atividade metabólica dos microorganismos, a microbiota cutânea que atua como barreira de proteção nos anfíbios contra agente infecciosos, provavelmente é afetada quando determinados parâmetros ecofisiológicos são alterados em ambientes florestais fragmentados, modulando assim a vulnerabilidade das populações de anfíbios aos agentes patogênicos. Nossa pesquisa esteve focada na caracterização das comunidades microbianas residentes da pele dos anfíbios em dois contextos de paisagem: fragmento e área contínua. Os parâmetros utilizados para essas análises foram a densidade microbiana e a riqueza de morfotipos de colônias bacterianas. O potencial inibitório do crescimento de patógenos também foi testado em ensaios do tipo cross-strak. As diferenças de densidade e riqueza microbiana entre as paisagens e a presença de táxons típicos de ambiente, apontam para o ambiente como um componente importante na determinação dos perfis das comunidades microbianas dos anfíbios estudados. Essas mudanças são muito provavelmente conseqüências, mas para o entendimento da extensão e natureza de tais conseqüências são necessários estudos adicionais. / The skin of amphibians, as well as that of other animals, acts as a first protection barrier against pathogens. The microbial community resident in the amphibian skin is composed of some species of bacteria that may have antibacterial or antifungal action against known pathogens, including Batrachochytrium dendrobatidis, the alleged principal agent Tleading to declines of amphibian populations around the world. Because the chemical and physical variables of the landscape influence the growth, survival and metabolic activity of microorganisms, the function of skin as a protective barrier against infectious agents in amphibians, is likely affected by parameters that are altered in fragmented forest habitats. Thus, it is important to understand how environmental conditions affect the skin microbiota of amphibians, and the possible induced changes on vulnerability of amphibians to pathogens. Our research aimed to characterize the microbial communities living skin of amphibians in two contexts of landscape: fragment and continuous area. The parameters used for this analysis were density and richness of microbial morphotypes of bacterial colonies. The potential inhibition of pathogen growth was also evaluated using a cross-streak test, and some taxa in these communities were identified using international protocols. The observed differences in microbial density and richness across landscapes, and the presence of bacterial taxa typical of given environments, point out to the role of environmental change as an important component determining the profiles of microbial communities living on the skin of amphibians. These changes are very likely consequential, but understanding the scope and nature of consequences require additional study.

A microbiota normal exerce função protetora na superfície ocular, competindo por nutrientes e secretando substâncias com propriedades bactericidas, o que dificulta a invasão de patógenos. Animais diabéticos apresentam diferentes alterações ceratoconjuntivais, tais como maior concentração de glicose no filme lacrimal, menor quantidade e qualidade da lágrima e diminuição da sensibilidade corneal, diferenças clinicamente relevantes que podem alterar essa microbiota. Traumas oculares também podem apresentar tal alteração por promoverem a quebra da barreira de proteção da superfície ocular. A correta identificação do agente etiológico, além de proporcionar um tratamento eficiente em alterações oculares, direciona a antibioticoterapia profilática tópica nos casos cirúrgicos e evita o uso abusivo de antibióticos, o que pode levar a destruição da microbiota normal da superfície ocular, facilitando assim o crescimento de bactérias e fungos patogênicos. Com o intuito de minimizar as complicações pós-operatórias das cirurgias intra-oculares, como as facectomias, freqüentemente realizadas nos cães diabéticos por serem predispostos a apresentarem catarata, este estudo visou avaliar a prevalência dos principais microrganismos da microbiota conjuntival de cães diabéticos. Foram avaliadas as microbiotas conjuntivais de 29 cães diabéticos, atendidos no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, totalizando 58 olhos. Estes, não estavam utilizando qualquer medicação tópica e não apresentavam alterações oculares ou doença sistêmica infecciosa que pudesse interferir nos resultados. As amostras foram colhidas do saco conjuntival com auxilio de zaragatoas, cuidando para que não houvesse contaminação pelo contato com pálpebras e cílios. As amostras foram inoculadas em meio enriquecedor Brain Heart Infusion (BHI) e caldo Sabouraud-dextrose e semeados em ágar sangue, MacConkey e Sabouraud-dextrose com cloranfenicol. Os microrganismos foram identificados por suas características morfológicas na bacterioscopia, pela coloração de gram e pelas características macro e microscópicas das colônias, além de testes bioquímicos. Houve maior prevalência de Staphylococcus (32,79%), principalmente coagulase negativos, que são os mais freqüentemente isolados nas infecções oculares: S. klosii, S. simulans, S. capitis, S. pasteuri, S. saprophyticus, S. haemolyticus. Também foram isolados Bacillus sp. (11,48%), S. intermedius (6,56%), Streptococcus sp (1,64%) e alguns fungos, como Cladosporium sp e Candida parapsilosis. Não houve crescimento de microrganismos gram negativos, anaeróbios estritos ou facultativos. Sugere-se que os resultados encontrados se relacionam diretamente às alterações ceratoconjuntivais dos animais analisados, local do exame, clima e diferentes raças. Sabendo-se que cães diabéticos são prováveis candidatos à facectomia, intervenção que promove quebra da barreira de proteção da superfície ocular e que existem microrganismos potencialmente patogênicos na conjuntiva destes animais, sugere-se análise da microbiota ocular antes da intervenção cirúrgica, para uso profilático de agentes antimicrobianos. / Normal ocular flora avoids infection depriving investor microorganisms of nutrients and by the secretion of bactericidal substances. Diabetic animals usually develop keratoconjunctival abnormalities, such as the higher concentration of glucose in the tear film; qualitative and quantitative tear deficiency and a decrease of the cornea sensitivity, what probably changes their conjunctival flora either. The same alteration may happen after ocular traumas, when the ocular barrier of protection is discontinued. The identification of agent etiology allows the efficient treatment of ocular infections, the prophylactic prescription of antibiotics before surgery and avoids destruction of normal ocular flora or multiplication of pathogens. Aiming to minimize complications on intraocular surgeries, such as facectomies, frequently realized in DM dogs for its predisposition to develop cataract, this study evaluated the prevalence of microorganisms in their conjunctival flora. The conjunctival flora of 29 diabetic dogs (58 eyes), attended at the Ophthalmology Service, of the Veterinary Hospital of the Veterinary College University of São Paulo were evaluated. These dogs werent using any kind of eyedrops, didnt present any ocular or systemic disease other than diabetes mellitus, what could change the results. Samples were taken with sterile swabs from the conjunctival sac and inoculated on Brain Heart Infusion (BHI) and Sabouraud-dextrose broth, then sown in blood agar, MacConkey and Sabouraud-dextrose-cloranfenicol. Contamination was avoided during procedure not touching the swab on eyelid or eyelashes. Microorganisms were identified by their morphological aspects at bacterioscopy, gram staining, macro and microscopy characteristics of the colonies and by biochemical tests. Staphylococcus presented the higher prevalence (32,79%), mostly the coagulase negative ones (S. klosii, S. simulans, S. capitis, S. pasteuri, S. saprophyticus, S. haemolyticus), which are frequently isolated from ocular infections. Either isolated, were Bacillus sp. (11,48%), S. intermedius (6,56%), Streptococcus sp (1,64%) and some fungus, such as Cladosporium sp and Candida parapsilosis. Gram negative bacteria, anaerobic stricts or facultative were not identified during the study. We suppose that these results are strictly correlated to keratoconjunctival alterations in DM dogs, procedure, weather and breed. We conclude that, as DM dogs presents potential pathogens on its conjunctiva and are probable candidates to cataract surgery, which discontinues the ocular barrier of protection, we suggest the identification of the agent etiology before surgery and the proper use of antibiotic before and after any intraocular intervention.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-04-26T11:00:34Z No. of bitstreams: 1 marjorieraquelanaribasarmiento.pdf: 1120912 bytes, checksum: 6a8973bd4e76f20aac92a1cf055a09e0 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-05-02T00:49:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 marjorieraquelanaribasarmiento.pdf: 1120912 bytes, checksum: 6a8973bd4e76f20aac92a1cf055a09e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T00:49:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marjorieraquelanaribasarmiento.pdf: 1120912 bytes, checksum: 6a8973bd4e76f20aac92a1cf055a09e0 (MD5) Previous issue date: 2016-01-20 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A obesidade é uma doença de grande impacto para saúde pública e está relacionada com alterações na fisiologia, com reflexo no intestino, sobretudo do ponto de vista ecológico. Nestas condições, alterações na estrutura da comunidade microbiana podem ocorrer, mas pouco se sabe sobre suas implicações no fenômeno da resistência aos antimicrobianos, que atualmente figura como uma grande ameaça à medicina moderna. É aceito que a microbiota intestinal atue como reservatório de genes de resistência. Por outro lado, a exposição a diferentes xenobióticos pode alterar a composição da microbiota e atuar como agente de pressão seletiva no intestino, selecionando bactérias resistentes. Considerando as alterações no estilo de vida, dieta e microbiota que acontecem em pacientes com excesso de peso, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a ocorrência de marcadores genéticos representativos do resistoma clínico no metagenoma intestinal de indivíduos eutróficos, com sobrepeso e obesos, sem história de antibioticoterapia recente. Foram avaliados 72 pacientes classificados em eutróficos, com sobrepeso e obesos, de acordo com o IMC. Medidas antropométricas, avaliação sócio-demográfica e nutricional dos pacientes foi realizada. Reação em cadeia da polimerase (PCR) convencional a partir do DNA metagenômico fecal extraído foi utilizada para avaliar a presença de 59 genes de resistência pertencentes a diferentes famílias de antibióticos. A densidade de diferentes grupos bacterianos foi avaliada por hibridização fluorescente in situ (FISH). Do total de genes pesquisados, foram detectados 27 tipos de genes, dos quais 17 genes de resistência são compartilhados entre os três grupos (eutróficos, com sobrepeso e obeso), o que indica a presença de um núcleo comum no resistoma formado principalmente por genes de resistência a tetraciclinas e beta-lactâmicos. Além disso, o grupo com obesidade que apresentou maior quantidade de genes detectados e variedade de genes (176:26), em comparação com o grupo sobrepeso (145:21) e o grupo eutrófico (132:0). A análise da densidade bacteriana mostrou principalmente a presença de bastonetes Gram negativos anaeróbios, seguido por bastonetes Gram negativos e cocos Gram positivos, os quais estiveram aumentados no grupo obeso, especialmente para Escherichia coli e Acinetobacter. Foi calculada a proporção de genes de resistência em comparação com as espécies bacterianas, mostrando uma maior probabilidade do surgimento de genes de resistência para o grupo dos bastonetes Gram negativos. Foi realizado o análise de correlação (Odds Ratio) entre os genes de resistência o IMC, ingesta calórica, consumo de xenobióticos, e uso de edulcorantes, e uma correlaçao positiva entre o surgimento dos genes de resistência e esses fatores foi observada. Os resultados sugerem que fatores relacionados ao excesso de peso como o IMC, dieta e a exposição a diferentes xenobióticos afetam a composição da microbiota intestinal, permitindo uma maior probabilidade da ocorrência de marcadores genéticos de resistência a drogas antimicrobianas no metagenoma fecal. / Obesity is a disease of great impact to public health and is related to changes in physiology, reflected in the gut, especially from an ecological point of view. Under these conditions, changes in microbial community structure may occur, but little is known about its implications in the antimicrobial resistance phenomenon, which currently ranks as a major threat to modern medicine. It is accepted that the intestinal microbiota acts as resistance genes reservoir. Moreover, exposure to different xenobiotics can change the composition of the microbiota and act as an agent of selective pressure in the intestine selecting resistant bacteria. Considering the changes in lifestyle, diet and microbiota that happen in overweight patients, the objective of this research was to evaluate the occurrence of genetic markers representative of the clinical resistoma in the gut metagenome of normal weight, overweight and obese individuals, with no history of recent antibiotic therapy. 72 patients were evaluated and classified as normal weight, overweight and obese according to BMI. Also, anthropometric, sociodemographic and nutrition evaluation of patients was performed. Conventional polymerase chain reaction (PCR) from the fecal metagenomic DNA extracted was used to assess the presence of 59 resistance genes belonging to different families of antibiotics. The density of different bacterial groups was assessed by fluorescence in situ hybridization (FISH). Of the total surveyed genes were detected 27 types of genes, of which 17 resistance genes are shared among the three groups (normal weight, overweight and obese), which indicates the presence of a common core in resistoma mainly made up of genes that confere resistance to tetracyclines and beta-lactams. Moreover, the obese group presents the highest amount of detected genes and variety of genes (176:26), compared to the overweight (145:21) and eutrophic group (132:0). The bacterial density analysis showed mainly the presence of Gram negative anaerobes, followed by Gram negative rods and Gram positive cocci, which were increased in the obese group, particularly Escherichia coli and Acinetobacter baumannii. Also, was calculated the ratio of resistance genes in comparison with the bacterial species showing more likely the emergence of resistance genes for the group of Gram negative rods. We performed the correlation analysis (odds ratio) between resistance genes BMI, caloric intake, consumption of xenobiotics, and use of sweeteners, and a positive correlation between the emergence of resistance genes and these factors was observed. The results suggest that factors related to overweight as BMI, diet and exposure to different xenobiotics affect the composition of the intestinal tract, allowing for a greater likelihood of genetic markers of antimicrobial drug resistance in fecal metagenome.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-05T20:11:33Z No. of bitstreams: 1 thaisoliveiradepaula.pdf: 2273561 bytes, checksum: 4f5aa492b38202c3543127af1e67af1e (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-07T15:46:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thaisoliveiradepaula.pdf: 2273561 bytes, checksum: 4f5aa492b38202c3543127af1e67af1e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T15:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thaisoliveiradepaula.pdf: 2273561 bytes, checksum: 4f5aa492b38202c3543127af1e67af1e (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A obesidade nos dias atuais é considerada uma pandemia, acometendo pessoas de todas as idades, sexo e raça. É uma doença que cursa com um estado inflamatório crônico de baixo grau, de causa multifatorial, associada a complicações metabólicas de alta morbimortalidade que geram elevados custos ao sistema de saúde. A microbiota intestinal possui grande importância no desenvolvimento da função intestinal. Estudos recentes têm associados à microbiota intestina humana ao desenvolvimento e manutenção da obesidade envolvendo vários mecanismos distintos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a diversidade bacteriana no ecossistema intestinal de indivíduos obesos, com sobrepeso e eutróficos e correlacionar o perfil microbiano com o perfil nutricional e bioquímico destes pacientes. Foram avaliados 72 indivíduos classificados em eutróficos (n=24), com sobrepeso (n=24) e obesos (n=24), de acordo com o IMC. Medidas antropométricas, avaliação sociodemográfica e nutricional dos pacientes foram realizadas. Dos 72 indivíduos amostrados 63,9% pertence ao sexo feminino e 36,1% ao masculino, com uma média de idade de 39,6 anos, representativo de indivíduos adultos. A densidade de diferentes grupos bacterianos foi avaliada por hibridização fluorescente in situ (FISH) e análises de fingerprint foram realizadas pelo método de PCR-Eletroforese em Gel com Gradiente Desnaturante (DGGE) utilizando os iniciadores para o domínio Bactéria. Os resultados da FISH mostraram uma densidade relativa menor no grupo de obesos, comparado aos eutróficos, na maioria dos grupos bacterianos estudados, porém a razão Firmicutes/Bacteroidetes encontra-se aumentada nos obesos em relação aos eutróficos. A MIH dos indivíduos com sobrepeso mostrou estar em um processo de transição, indo ao encontro à microbiota de pessoas obesas. A análise de PCR-DGGE mostrou uma maior similaridade da MIH entre os grupos com sobrepeso e obeso. Indivíduos do mesmo grupo tenderam a se agrupar mais próximo, mesmo em clusters diferentes. As análises de correlação (spearman) entre os grupos bacterianos e paramêtros bioquímicos e antropométricos dos indivíduos mostrou uma correlação negativa moderada entre colesterol total e colesterol LDL e alguns grupos bacterianos, porém essa correlação só foi percebida no grupo de eutróficos, sugerindo que a MIH se comporta de maneira diferente dependendo do tipo de ambiente intestinal. A análise de correlação (odds ratio) entre razão Firmicutes/Bacteroidetes alterada (razão >1), com os índices IMC (>25), glicose (>100 mg/dL) e colesterol séricos (>200 mg/dL) mostraram uma correlação positiva, sugerindo que esses fatores que estão fortemente associados ao processo de obesidade, podem afetar a composição da MIH, de maneira a propiciar um ambiente que privilegie um aumento de Firmicutes. / Nowadays obesity is considered a pandemic, affecting people of all ages, gender and ethnicity. It is a chronic disease that leads to a chronic low-grade inflammatory state, with multifactorial cause, associated with metabolic complications with high morbimortality which generates high costs to the health care system. There is a great importance related to the gut microbiota and its functional development. Recent studies have associated gut microbiota to obesity development and maintenance, involving different mechanisms. This study objective was to evaluate the bacterial diversity in gut ecosystem between obese, overweight and eutrophic people, besides correlating microbial profile and nutricional-biochemical profile in each patient. 72 patients have been evaluated and classified as eutrophic (n=24), overweight (n=24) or obese (n=24) according to BMI. Anthropometric measurements, socio-demographic and nutricional evaluation have been carried out. . From these 72 patients 63% are female and 36,1% male, with a mean age of 39,61 years, representative of adults individuals. The density of different bacterial groups has been evaluated using Fluorescence in situ hybridization (FISH) and Fingerprint Analyze have been made with PCR- Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) using initiators to the domain Bacteria. Though the results from FISH showed that the ratio Firmicutes/Bacteroidetes is greater in obeses than eutrophics, they showed a reduced relative density in obese. The overweights gut microbiota is still at the process of transition to meet obese people’s microbiota. PCR-DGGE Analysis showed more similarity of Human Gut Microbiota(HGM) between the groups with overweight and obese, and who is in the same group tends to group together next to, even on different clusters. Correlation analysis (spearman) between bacterial groups and Anthropometric-Biochemical from these individuals showed a moderate negative correlation between total cholesterol and LDL-cholesterol and some bacterial groups, but this correlation was just realized in eutrophic group, suggesting the HGM behas in a different way according to intestinal environment. Correlation analysis (odds ratio) between ratio Firmicutes / Bacteroidetes changed (ratio>1), with the BMI index (>25), glucose (>100 mg/dL) and serum cholesterol (>200 mg/dL) showed a positive correlation suggesting that these factors, which are related with the obese process, can affect the composition of Human Gut Microbiota, increasing positively Firmicutis.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2018-07-16T10:54:06Z No. of bitstreams: 1 wernervieiravieira.pdf: 1818667 bytes, checksum: 0f98b1d90ebb147a1e61c2d9e940ea8b (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-09-03T16:16:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 wernervieiravieira.pdf: 1818667 bytes, checksum: 0f98b1d90ebb147a1e61c2d9e940ea8b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-03T16:16:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 wernervieiravieira.pdf: 1818667 bytes, checksum: 0f98b1d90ebb147a1e61c2d9e940ea8b (MD5) Previous issue date: 2018-04-13 / De acordo com a OMS, em 2014, 39% da população adulta mundial estava acima do peso e 13% foram diagnosticados com obesidade. A tuberculose (TB) é a segunda principal causa de morte por doenças infecciosas em todo o mundo. Estudos têm demonstrado que a obesidade ou o excesso de peso estão relacionados à diminuição do risco de desenvolver TB ativa. Além disso, demonstrou-se que as pessoas com alto índice de massa corporal têm níveis sistêmicos elevados da maioria das citocinas pró-inflamatórias e diminuição dos níveis de citocinas anti-inflamatórias. Além disso, tanto os humanos obesos quanto os camundongos têm uma composição microbiana que é significativamente diferente dos grupos eutróficos, considerados magros, e podem ser corresponsáveis pelo surgimento da obesidade. Reconhece-se agora que a microbiota intestinal mantém uma interação complexa e recíproca com o sistema imune do hospedeiro. Assim, o objetivo deste estudo é avaliar se a obesidade promove alterações fisiológicas em camundongos infectados com BCG, com foco nas mudanças da microbiota intestinal. Para isso foram utilizados camundongos C57/BL6 alimentados com dieta hiperlipídica ou padrão. Os camundongos foram infectados ou não com M. bovis BCG. Após 24, 48 ou 72h de infecção os camundongos foram eutanasiados em câmara de gás carbônico (CO2). As amostras fecais foram coletadas diariamente após a infecção para identificação da composição da estrutura microbiana intestinal. Um lavado pleural foi realizado e os leucócitos pleurais foram montados em laminas para análise de corpúsculos lipídicos (CL) e o sobrenadante desse lavado foi utilizado para análise das citocinas. Além disso, a porção final do intestino foi coletada para análise histológica. As gorduras retroperitoneal e perigonadal foram retiradas para pesagem. Após 16 semanas, os camundongos alimentados com dieta hiperlipídica apresentaram-se obesos. Nós avaliamos que a infecção induziu a biogênese de corpúsculos lipídicos em ambos os camundongos eutróficos ou obesos. Além disso, camundongos obesos 72hs pós-infecção mostraram um aumento significativo no número de corpúsculos lipídicos, quando comparado aos camundongos eutróficos. Além disso, observamos que a infecção induziu um aumento na síntese de KC e TNF-α, e a obesidade não conseguiu alterar esses níveis. Em relação a IL-10, notamos uma redução nos níveis de síntese nos camundongos obesos com 72hs de infecção quando comparados aos camundongos eutróficos. Além disso, demonstramos que os camundongos obesos apresentaram um perfil estrutural da microbiota intestinal diferente quando comparado aos eutróficos. Nos camundongos eutróficos, a infecção por M. bovis BCG modificou rapidamente a estrutura da comunidade microbiana, apresentando variações em 24, 48 e 72h. Observamos que a obesidade atrasou a mudança de estrutura da microbiota intestinal. Além disso, mudanças menores foram observadas com 24 e 48 horas após a infecção, no entanto, mudanças visíveis ocorreram após 72h de infecção. Além disso, um aumento da área de infiltrados inflamatórios intestinais em resposta a infecção foi observada no grupo obeso. Assim, sugerimos que a obesidade influencia o curso da infecção, modulando a biogênese de corpúsculos lipídicos, síntese de citocinas, infiltrados inflamatórios intestinais e composição estrutural de microbiota intestinal. Além disso, o possível efeito protetor da obesidade no desenvolvimento da tuberculose pode ocorrer de outras formas, pela resistência frente à mudança estrutural da microbiota intestinal e pela consequente estimulação do sistema imunológico. / Tuberculosis (TB) is the second leading cause of death from infectious diseases worldwide. According to WHO, by 2014, 39% of world's adult population were overweight and 13% were diagnosed with obesity. Studies have shown that obesity or overweight are related to a decreased risk of developing active TB. In addition, people with a high body mass index have been shown to have elevated systemic proinflammatory cytokine levels and decreased levels of anti-inflammatory cytokines. In addition, both obese humans and mice have a microbial composition that is significantly different from eutrophic groups, considered lean, and may be co-responsible for the emergence of obesity. It is now recognized that the intestinal microbiota maintains a complex and reciprocal interaction with the host immune system. Thus, the objective of this study is to evaluate whether obesity promotes physiological changes in mice infected with BCG, focusing on changes in the intestinal microbiota. C57/BL6 mice fed a standard or hyperlipidic diets were used. Mice were infected or not with M. bovis BCG. After 24, 48 or 72h of infection the mice were euthanized in a carbon dioxide chamber (CO2). Fecal samples were collected daily after infection to identify the composition of the intestinal microbial structure. Pleural lavage was performed and pleural leukocytes were mounted on laminae for analysis of lipid bodies (LB) and the supernatant of this lavage was used for cytokine analysis. In addition, the final portion of the intestine was collected for histological analysis. Retroperitoneal and perigonadal fats were removed for weighing. After 16 weeks, the mice fed a hyperlipid diet were obese. We evaluated that the infection induced the biogenesis of lipidic corpuscles in both eutrophic and obese mice. Moreover, obese mice 72h after infection showed a significant increase in lipid bodies as compared to eutrophic mice. In addition, we observed that the infection induced an increase in the synthesis of KC and TNF-α, and obesity failed to change these levels. Regarding IL-10, we observed a reduction in the synthesis levels in obese mice with 72h of infection when compared to eutrophic mice. Moreover, we demonstrated that the obese mice presented a structural profile of the intestinal microbiota different when compared to the eutrophic In the eutrophic mice, M. bovis BCG infection rapidly modified the structure of the microbial community, showing variations in 24, 48 and 72 hours. We observed that obesity delayed the change in the structure of the intestinal microbiota. In addition, minor changes were observed at 24 and 48 hours post infection, however, visible changes occurred after 72h of infection. In addition, an increase in the area of inflammatory bowel infiltrates in response to infection was observed in the obese group. Thus, we suggest that obesity influences the course of infection by modulating biogenesis of lipid bodies, cytokine synthesis, intestinal inflammatory infiltrates and structural composition of intestinal microbiota. Moreover, the possible protective effect of obesity on the development of tuberculosis may occur in other ways, by resistance to the structural change of the intestinal microbiota and by the consequent stimulation of the immune system.

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T21:44:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zambon_RenataAlvaresBagarolli_D.pdf: 7972972 bytes, checksum: 0c4feccde8df219c21aef1c3e8740fc0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A obesidade é caracterizada por processo inflamatório crônico e resistência à insulina (RI), os quais são responsáveis por grande parte de suas doenças associadas. Sabe-se que diversas moléculas do sistema imune inato estão associadas à RI e obesidade, destacando-se o receptor toll-like-receptor 4 (TLR4). Sua via de sinalização está ativada na obesidade, devido à presença aumentada na circulação de seu principal ligante, lipopolissacarídeo (LPS). Acredita-se que esta endotoxemia metabólica seja causada por alterações na microbiota e na permeabilidade intestinais, o que torna o intestino e as bactérias que o habitam, grandes alvos para o tratamento da obesidade. O objetivo deste presente trabalho foi avaliar os efeitos dos probióticos (PB) na sensibilidade à insulina e na sinalização de TLR4 em tecidos insulino-sensíveis, além de verificar suas possíveis ações na microbiota intestinal. Dessa forma, camundongos Swiss foram divididos em 4 grupos: controles (C), controles tratados com PB (C+PB), obesos (DIO) e obesos tratados com PB (DIO+PB). O tratamento teve a duração de 5 semanas. O uso de PB em animais obesos proporcionou grandes melhoras nos parâmetros fisiológicos e moleculares de RI, além de atenuar a ativação da via de sinalização do TLR4, provavelmente pela redução dos níveis circulantes de LPS. O grupo DIO+PB ainda mostrou mudanças positivas na distribuição dos filos de bactérias intestinais e menor permeabilidade intestinal, quando comparado com o grupo DIO. Analisando o hipotálamo, observou-se que o uso de PB nesse modelo de obesidade regulou de forma favorável os mecanismos centrais de controle da fome, bem como alguns parâmetros de inflamação. Assim, conclui-se que a regulação da microbiota intestinal promovida pela administração de probióticos pode trazer benefícios no controle da obesidade, por reduzir ou atenuar mecanismos moleculares de resistência à insulina / Abstract: Obesity is the main risk factor to the development of insulin resistance and type 2 diabetes. The common basis among these events is an inflammatory process characterized by the activation of toll-like receptor 4 (TLR4) by its main ligand lipopolysaccharide, LPS. Its concentration is higher in obese people and it is believed that changes in composition of the gut microbiota and epithelial functions may play a role in the inflammation associated with obesity. The aim of the study was to evaluate the effects of probiotic on the insulin sensitivity, TLR4 signaling, intestinal permeability and microbiota composition in diet-induced obese mice. Male adult Swiss mice composed randomly 2 groups: chow diet (CTL) and high-fat diet by 5 consecutive weeks (DIO). During these 5 weeks, some mice of the DIO and CTL groups received daily a pool of probiotics. The DIO animals that received probiotic presented an expressive improvement in their glucose tolerance test, fasting glucose and in parallel a significant increase in the phosphorylation levels of insulin induced IR, IRS1 and Akt in muscle, liver and adipose tissue. There was a relevant reduction in the TLR4-Myd88 interaction, IKK? and JNK phosphorylation and iNOS expression in DIO mice treated with probiotic. This treatment also improved the expression of ileal tight-junctions proteins (ZO-1, Occludin), decreased LPS portal levels and the concentrations of bacteria of the phylum Firmicutes (associated with obesity) in feces. Analyzing the hypothalamus, it was observed that the use of probiotics in this model of obesity favorably regulated central mechanisms of food intake, as well as some inflammation parameters. In conclusion, our results show that probiotics, through their effects on intestinal permeability and microbiota composition, can improve insulin sensitivity and signaling of DIO mice, reducing their inflammation and suggesting potential beneficial effects in the treatment of insulin resistance and type 2 diabetes / Doutorado / Medicina Experimental / Doutora em Ciências

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:59:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3171_1.pdf: 22717723 bytes, checksum: 8a550993a0f8b4233cd20e8fb872b10f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A desnutrição neonatal, mesmo após um período de recuperação nutricional, é capaz de comprometer os mecanismos de defesa no organismo adulto. Isto se deve ao fato de que o período neonatal corresponde a uma fase de grande vulnerabilidade, em decorrência da formação dos diversos sistemas orgânicos. Assim sendo, o objetivo dessa pesquisa foi estudar o processo de alveolite dentária em seus aspectos bacteriológicos e histológicos relacionandoos com o desenvolvimento de bacteremia em ratos adultos desnutridos no período neonatal. Foram utilizados 40 ratos, machos, Wistar, amamentados por mães que receberam dieta durante a lactação contendo 17% de caseína, grupo nutrido (N) ou 8% de caseína, grupo desnutrido (DN). Após o desmame, os animais foram recuperados com dieta padrão, Labina® contendo 23% de proteínas mistas até o final do experimento. Depois de 90 dias, estes animais foram submetidos à extração do incisivo superior direito e indução da alveolite, os quais permitiram obter os seguintes resultados: antes e depois da extração evidenciou-se menor crescimento bacteriano dado por unidade formadora de colônia (UFC) na região perialveolar de incisivos superiores direito dos animais desnutridos, tal fato ocorreu de forma inversa após a alveolite, onde se constatou uma maior quantidade de UFC nestes animais. O percentual de hemoculturas positivas obtido após a alveolite foi maior nos animais desnutridos. Com relação à osteocalcina, houve redução da mesma no grupo N-28 e aumento no grupo DN-28; a disponibilidade do cálcio iônico foi maior nos animais nutridos e o processo de cicatrização alveolar apresentou também um maior desenvolvimento nestes animais. Pode-se assim concluir que, a desnutrição neonatal foi capaz de provocar uma diminuição na resposta imunológica dos animais, promovendo alterações perceptíveis em suas defesas contra os agentes infecciosos ainda no organismo adulto. Estas alterações foram evidenciadas na composição da microbiota pertencente à região peri-alveolar e no desenvolvimento de bacteremia, comprovando através deste, a existência de uma relação direta entre doenças bucais e sistêmicas. Outrossim, foi observado retardo no processo de cicatrização alveolar com modificações nos níveis de osteocalcina e do cálcio iônico

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3857_1.pdf: 1902205 bytes, checksum: 88c8bef9ccf2c4cc9e3401ad370083f7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivo: Analisou-se a influência da desnutrição neonatal DN em parâmetros imunes de 36 ratos Wistar machos adultos jovens (60 dias), treinados ou não e submetidos ao estresse de contenção EC. Métodos: Nos grupos nutridos (caseína 17%) e desnutridos (8%) foram avaliados leucócitos totais (hemocitômetro) e diferenciais (esfregaço sanguíneo); hemoglobina (cianometemoglobina); hematócrito (micro-hematócrito); hemácias (hemocitômetro); óxido nítrico (reação de Griess); taxa de fagocitose (percentual de macrófagos que englobaram o fungo), microbiota oral MO e peso corporal PC. Os grupos treinos realizaram um TFM em esteira (60min./dia, 5 dias/semana, durante 8 semanas). No EC, o animal foi contido em cano PVC (24 cm de comprimento x 8 cm de diâmetro) durante 40 minutos pós - TFM (24horas). Utilizou-se o teste t Student pareado, não pareado e ANOVA (p<0,05), com média e desvio padrão. Resultados: No artigo: O efeito do treinamento físico moderado e da desnutrição precoce sobre a microbiota oral normal de ratos adultos , o TFM e a DN reduziram a MO e alteraram o padrão bacteriano nos desnutridos. No Artigo: Adaptação leucocitária, hematimétrica e morfológica ao treinamento físico moderado de ratos desnutridos precocemente , o TFM parece ter causado adaptação fisiológica a partir da 1ª semana no PC e nas células sanguíneas no desnutrido treino DT. No Artigo: A influência da desnutrição neonatal na produção de óxido nítrico, taxa de fagocitose, resposta leucocitária e hematimétrica de ratos treinados e submetidos ao estresse de contenção , o TFM e a recuperação nutricional atenuaram as repercussões causadas pela DN e o EC no DT

Inflammatory bowel disease (IBD) is a growing disorder with unknown etiology. However, increasing evidence strongly highlights the role of gut microbiota with possible involvement of microbial plasmidome in the inflammatory process. Although the composition of the gut microbiota has been extensively studied, important functional groups such as butyrate producers remain poorly characterized, particularly in pediatric IBD. Furthermore, evaluation of the gut plasmidome in healthy and IBD children is missing. In this study, we used molecular techniques involving quantitative PCR (qPCR) and next-generation sequencing of functional and 16S rRNA genes to analyze the level and composition of butyrate-producing microbes in mucosal washes collected from the right colon of healthy children and Crohn's disease (CD) patients during diagnostic colonoscopy. Also, we isolated and characterized the gut plasmidome from the right colon mucosal washes collected from pediatric non-IBD control, ulcerative colitis (UC), and CD subjects. Although no difference was observed in the total amount of butyrate producers that utilize the butyrate kinase (BUK) pathway for butyrate synthesis, butyrate producers that use the butyryl CoA:acetate CoA-transferase (BCoAT) pathway were decreased in CD patients with inflamed colon as compared to controls. This functional gene approach shows that pediatric CD is characterized by generalized decreased abundance of Eubacterium rectale and increased abundance of Faecalibacterium prausnitzii in patients with inflamed colon. Also, phylogenetic analysis highlighted 15 Operational Taxonomic Units (OTUs) as potential novel butyrate producers, five of which were decreased in CD patients. Using 16S rRNA sequencing approach validated the functional gene results and showed decreased abundance of Coprococcus in CD patients with inflamed colon. Furthermore, non-IBD plasmidome has higher level of genes involved in butyrate synthesis and regulation of different cellular processes and stress response. On the other hand, IBD plasmidome is enriched with antibiotic resistance genes and phage elements, and pediatric CD plasmidome in particular has higher abundance of the adenosine-5'-phosphosulfate reductase gene. Altogether, our study represents the first comprehensive description of gut butyrate producers and plasmidome of pediatric subjects that emphasize a characteristic dysbiosis of butyrate producers in pediatric CD and a potential link between the gut plasmidome and IBD pathogenesis.

Doctor of Philosophy / Department of Diagnostic Medicine/Pathobiology / Philip R. Hardwidge / Diarrheagenic Escherichia coli (E. coli) strains are common etiological agents of diarrhea. Diarrheagenic E. coli are classified into enterotoxigenic E. coli (ETEC), Shiga toxin-producing E. coli (STEC or enterohemorrhagic E. coli [EHEC]), enteropathogenic E. coli (EPEC), enteroinvasive E. coli (EIEC), enteroaggregative E. coli (EAEC), diffuse-adherent E. coli (DAEC), and adherent invasive E. coli (AIEC). In addition to encoding toxins that cause diarrhea, diarrheagenic E. coli have evolved numerous strategies to interfere with host defenses. In the first project, we identified an ETEC-secreted factor (ESF) that blocked TNF-induced NF-[kappa]B activation. One of the consequences of TNF-induced NF-[kappa]B activation is the production of pro-inflammatory cytokines that help to eliminate pathogens. Modulation of NF-[kappa]B signaling may promote ETEC colonization of the host small intestine. In this study, we fractionated ETEC supernatants and identified flagellin as necessary and sufficient for blocking the degradation of the NF-[kappa]B inhibitor I[kappa]B[alpha] in response to TNF[alpha]. In the second project, we attempted to identify an ETEC cAMP importer. ETEC diarrhea leads to cAMP release into the lumen of the small intestine. cAMP is a key secondary messenger that regulates ETEC adhesin expression. We hypothesized that a cAMP importer is present in ETEC, accounting for its hypersensitivity to extracellular cAMP. We used Tn5 transposome-mediated mutagenesis to construct a mutant library and screen for cAMP-hyporesponsive mutants. However, none of the 17,956 mutants we screened were cAMP-hyporesponsive. In the third project, we focused on gut microbiota and the T3SS effector NleH. We used the mouse-specific pathogen C. rodentium and transplanted performed microbiota between different mouse strains. We evaluated microbiota populations as a function of infection with WT and [Delta]nleH C. rodentium strains before and after microbiota transplantation. Microbiota transfer altered the resistance to WT C. rodentium infection in C57BL/10ScNJ mice and the NleH effector promoted host resistance to C. rodentium.