Orientador: Daniela Cardoso Umbelino Cavallini / Banca: Raquel Bedani / Banca: Kátia Sivieri / Resumo: As doenças inflamatórias intestinais (DII), entre elas a doença de Crohn (DC) e a retocolite ulcerativa idiopática (RCUI) compreendem um grupo de patologias que possuem como principal característica a inflamação da mucosa intestinal. Embora sua origem ainda não seja completamente conhecida, existe uma crescente evidência baseada em estudos recentes associando predisposição genética, composição da microbiota intestinal e sistema imunológico como fatores precursores para a iniciação e progressão dessas patologias. O uso de determinadas cepas probióticas vem sendo apontado como uma forma promissora de se reduzir o risco de doenças inflamatórias intestinais, mais precisamente da colite ulcerativa. Diversos mecanismos têm sido propostos para explicar os benefícios dos probióticos, indicando que algumas cepas bacterianas são capazes de modular positivamente a microbiota intestinal e o sistema imune, além de produzirem metabólitos com capacidade antiinflamatória. Como os efeitos e os mecanismos de ação envolvidos são cepa-específicos, é de extrema importância a realização de novos estudos para compreender as interações entre microbiota intestinal e hospedeiro, contribuindo para o entendimento do potencial terapêutico dos probióticos nas doenças relacionadas ao desequilíbrio da microbiota intestinal. O presente trabalho se propõe a investigar o efeito da ingestão diária de um produto à base de extrato aquoso de soja, fermentado com Enterococcus faecium CRL 183 e Lactobacillus helveticus 416 e com adição de Bifidobacterium longum ATCC 15707, na colite induzida quimicamente em ratos. A colite foi induzida, pela administração de dextran sulfato de sódio (DSS) a 4%, que foi dissolvido na água fornecida diariamente aos animais e administrado durante um período de sete dias. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em cinco grupos (n=10): Grupo C: Animais sadios que não receberam os produtos em estudo. ... / Abstract: Inflammatory bowel disease (IBD), including Crohn's disease (CD) and ulcerative colitis (UC), comprise a group of disorders and their main characteristic is an inflammation of the intestinal mucosa. Although its origin is not yet fully known, there is growing evidence linking genetics predisposition, composition of the intestinal microbiota and immune system factors as precursors for the initiation and progression of these pathologies. The use of certain probiotic microorganisms has been considered as promising way to reduce the risk of inflammatory bowel disease, specifically ulcerative colitis. Several mechanisms have been proposed to explain the benefits of probiotics, indicating that some bacterial strains are able to positively modulate the intestinal microbiota and the immune system, and produce metabolites with anti-inflammatory capacity. As the effects and the mechanisms involved are strain-specific, further studies are extremely important to understand the interactions between gut microbiota and host, contributing to the knowledge on therapeutic potential of probiotics in diseases related to dysbiosis. This current paper aims to bring together the various results and information based on scientific evidence that are related to probiotics and the inflammatory bowel disease, with emphasis on the possible mechanisms involved in this action. Furthermore, the effects of daily ingestion of a product based on an aqueous extract of soybean, fermented by Enterococcus faecium CRL 183 and Lactobacillus helveticus 416 with the addition of Bifidobacterium longum ATCC 15707, were also investigated on chemically induced colitis in rats. Colitis was induced by 4% dextran sulfate sodium (DSS), dissolved in the drinking water supplied to the animal, which was ingested daily for a period of seven days. The animals will then be assigned randomly to four groups (n=10): Group C: healthy animals that do not receive the products under study; Group CL: ... / Mestre

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Everlon Cid Rigobelo / Banca: Davi Rodrigo Rossato / Banca: Patrícia Amoroso de Andrade / Banca: Caroline Peters Pigatto de Nardi / Resumo: Escherichia coli de sorogrupo não- O157 produtora de Shiga toxina é reconhecida como causadora de sérias doenças em seres humanos. Entretanto, as pesquisas relacionadas à persistência das STEC não- O157 em solos agricultáveis são bastante limitadas. No presente estudo foi analisada a sobrevivência de E.coli genérica, E.coli portadora do gene eae e STEC não- O157 portadoras do gene stx1, stx2 e eae em dois solos agricultáveis, cultura de cana-de-açúcar e pastagem em duas situações diferentes, solos esterilizados por autoclavação e solo não autoclavado. As linhagens de E.coli foram inoculadas nos dois solos em ambas as situações em um sistema de microcosmo, o qual foi avaliado por 60 dias. Os resultados mostraram que todas as linhagens de E.coli foram recuperadas em menor número nos solos não autoclavados do que nos solos esterilizados por autoclavação. Também foi verificado que as linhagens STEC não- O157 sobreviveram por um período maior do que a linhagem de E.coli genérica no solo sob pastagem não autoclavado, no mínimo por 60 dias. Nós devemos prestar mais atenção ao longo período de sobrevivência das linhagens STEC não- O157 em solos de pastagem devido ao seu alto potencial de risco ao meio ambiente / Abstract: Shiga toxin producing Escherichia coli non- O157 serogroup has been recognized as cause of serious diseases in human. However, research on the persistence of STEC non- O157 in preharvest is limited. In the current study we analysed the survival behavior of generic E.coli, E.coli carrying eae gene and STEC non- O157 strain carrying stx1, stx2 and eae gene in two agricultural soils, sugar cane culture and grassland in two different situations autoclaved soil and non- autoclaved soil. The E.coli strains were inoculated in both soils in a microcosm system which was analysed for sixty days. Results showed that all E.coli strains were recovered in a smoller number in non- autoclaved soils than in the autoclaved soils. Also was verified that the STEC non- O157 strains survived longer than the generic E.coli strain in the non autoclaved grassland soil, at least for sixty days. We should pay more attention to the STEC non- O157 serogroup long survival in grassland soil and its potential environmental risk / Doutor

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-09-26T21:23:18Z No. of bitstreams: 1 2018_JanicedaCostaSilva.pdf: 2264839 bytes, checksum: d0ee6082c72d3d57e517e0118c7f6d70 (MD5) / Approved for entry into archive by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-10-08T19:54:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_JanicedaCostaSilva.pdf: 2264839 bytes, checksum: d0ee6082c72d3d57e517e0118c7f6d70 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-08T19:54:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_JanicedaCostaSilva.pdf: 2264839 bytes, checksum: d0ee6082c72d3d57e517e0118c7f6d70 (MD5) Previous issue date: 2018-10-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / Introdução: As estatinas são fármacos hipolipemiantes amplamente utilizados na redução do risco cardiovascular. Recentemente, foram relacionadas ao desenvolvimento de diabetes tipo 2 (DM2). A disbiose microbiana do intestino também está associada a anormalidades na homeostase da glicose, mas seu papel na hiperglicemia induzida pelas estatinas ainda não foi amplamente explorado. No presente estudo, nosso objetivo foi investigar se a modulação da microbiota intestinal com antibióticos poderia modificar a influência da terapia com atorvastatina (ATOR) ou pravastatina (PRAVA) sobre a homeostase da glicose em camundongos ob/ob, e se isso poderia associar-se à modificação da representação relativa de populações específicas de bactérias nas fezes destes animais. Métodos: Camundongos ob/ob com 13 semanas de idade, alimentados com dieta controle, foram tratados com veículo (n = 10), atorvastatina (ATOR) 80 mg/kg/d (n = 10) ou pravastatina (PRAVA) 80 mg/kg/d (n = 10), por 8 semanas. Durante as últimas 4 semanas de tratamento, cinco camundongos de 3 grupos também receberam uma combinação de antibióticos (ciprofloxacina 0,2 g/L e vancomicina 0,5 g/L, administradas na água potável) para promover a modulação da microbiota intestinal. Resultados: A terapia com ATOR reduz o peso corporal, na ausência e presença de antibióticos, enquanto a PRAVA e o co-tratamento com PRAVA e antibióticos não afetou o peso corporal. A ATOR aumentou significativamente a glicemia em jejum, e esse efeito foi revertido pela antibioticoterapia. Ao contrário, os camundongos tratados com PRAVA apresentaram glicemia em jejum ligeiramente reduzidos, que foram adicionalmente diminuídos por co-tratamento com antibióticos. Tanto a ATOR como a PRAVA diminuíram a concentração sérica das enzimas hepáticas, e este efeito não foi modificado pelo co-tratamento com antibióticos. No entanto, a diminuição induzida pela estatina no acúmulo de lipídios hepáticos foi parcialmente revertida pelo tratamento simultâneo com antibióticos. O tratamento com ATOR, mas não com PRAVA, reduziu a razão Firmicutes/Bacteroidetes, mas o co-tratamento com antibióticos e com ATOR reverteu parcialmente e promoveu uma expansão significativa de Akkermansia muciniphila em comparação com controle ou o tratamento com ATOR isoladamente. Conclusão: Nossos achados indicam que a modulação da microbiota intestinal com antibióticos em associação com o tratamento com ATOR pode melhorar o efeito diabetogênico desta estatina, e isso pode envolver a expansão da população de A. muciniphila no intestino. Isso sugere que a manipulação da microbiota intestinal pode ser um alvo para prevenir a hiperglicemia induzida pelas estatinas. / Background: Statins are lipid-lowering drugs widely used for cardiovascular risk reduction that are strongly linked to development of type 2 diabetes (T2D). Gut microbial dysbiosis is also associated with abnormalities in glucose homeostasis, but their role in statin-induced hyperglycemia was not largely explored. In the present study, we aimed to investigate whether gut microbiote modulation with antibiotics could affect glucose leves in response to atorvastatin (ATOR) and pravastatin (PRAVA) therapy in ob/ob mice, and wheter this was associated with altered relative representation of specific bacteria populations. Methods: Thirteen-week old male ob/ob mice fed a control diet were treated with vehicle (n=10), atorvastatin (ATOR) 80 mg/kg/d (n=10) or pravastatin (PRAVA) 80 mg/kg/d (n=10), for 8 weeks. During the last 4 weeks of treatment, five mice from 3 groups also received an antibiotic combination (ciprofloxacin 0.2 g/L and vancomycin 0.5 g/L in drinking water) to promote microbiota modulation. Results: ATOR therapy reduced body weight, which was not changed by co-treatment with antibiotics, whereas PRAVA and co-treatment with PRAVA and antibiotics did not affect weight gain. ATOR significantly increased fasting blood glucose levels, and this effect was reversed by antibiotic therapy. On the contrary, mice treated with PRAVA showed slightly decreased fasting blood glucose levels, which were further decreased by co-treatment with antibiotics. Both ATOR and PRAVA diminished serum liver enzyme levels, and this effect was not modified by co-treatment with antibiotics. However, statin-induced decrease in hepatic lipid accumulation was partially reversed by simultaneous treatment with antibiotics. ATOR but not PRAVA treatment reduced Bacteroidetes to Firmicutes ratio, but co-treatment with antibiotics and ATOR partially reversed it and promoted a significant expansion of Akkermansia muciniphila as compared to controls or treatment with ATOR alone. Conclusion: Our findings indicate that gut microbiote modulation with antibiotics in association with ATOR treatment can ameliorate the diabetogenic effect of this statin, and this may involve expansion of A. muciniphila population in the gut. This suggests that gut microbiote manipulation could be a target to prevent statin-induced hyperglycemia.

O armazenamento de saliva para avaliação da microbiota bucal muitas vezes é necessário, principalmente em estudos epidemiológicos. O objetivo desse estudo foi avaliar a viabilidade e a variabilidade da microbiota bucal, de amostras de saliva armazenadas em temperaturas de -20ºC e em nitrogênio liquido (N2L), após 3 e 10 meses. Uma alíquota de cada amostra de saliva estimulada, usando goma de mascar sem açúcar, foi processada em até 45 minutos após a sua coleta. As amostras foram armazenadas seguindo três métodos diferentes: no primeiro método, as amostras de saliva foram preparadas com glicerol 10% (G) e mantidas a -20ºC durante 8 horas e então armazenadas em botijão com N2L; no segundo foi utilizado o mesmo protocolo, porém, sem glicerol; no terceiro método as alíquotas foram preparadas com glicerol 10% e mantidas a -20ºC. Após semeadura das amostras e incubação o número de unidades formadoras de colônias (UFC) foi determinado e uma média de 30 colônias de cada amostra foi identificada por meio de provas bioquímicas. Não houve diferença significativa na contagem de UFC/mL das amostras processadas imediatamente após a coleta (2,1 x 107 UFC/mL) e após 3 meses de armazenamento em N2L (G) (4,5 x 106 UFC/mL), N2L (1,6 x 106 UFC/mL), e -20ºC (2,2 x 106 UFC/mL). Porém, após 10 meses de preservação em N2L (G) (4,5 x 105 UFC/mL), e N2L (2,3 x 105 UFC/mL), observou-se uma redução (p=0.0183) do número de UFC/mL em comparação com a avaliação inicial. Não houve diferença significativa no número de UFC nas amostras armazenadas com e sem crioprotetor. A determinação da variabilidade da microbiota bucal mostrou que as bactérias presentes nas amostras frescas dos gêneros Streptococcus, Staphylococcus e Bacillus mantiveram-se nos diferentes tempos de avaliação, mesmo que em diferentes concentrações. Baseado nos resultados obtidos pode-se sugerir que preservação de saliva a -20ºC e a -196ºC, são métodos de armazenamento eficazes, para avaliação da microbiota bucal, por um período de 3 e 10 meses. / Saliva storage for oral microbiota evaluation often is required, especially in epidemiologic studies. The aim of the present study was to assess the effects of different storage methods upon viability and the variability of the oral microbiota in saliva samples. One aliquot of each saliva sample was processed until 45 minutes after collection. Saliva was stimulated using chewing gum sugar free. The samples were storage following three different methods: in the first method, aliquots of saliva were mixed with glycerol 10% (G) and maintained at -20ºC for 8 hours and then stored in N2L; the second followed the same protocol without glycerol; and in the third method aliquots were prepared with glycerol 10% and maintained at -20ºC. From each sample the number as the colony-forming units (CFU/mL) was determined and 30 colonies were chosen and cells were identified by biochemical assays. There was not statistically significant difference on the number of CFU/mL of samples processed immediately after de collection and after 3 months as storage. However, after 10 months of storage in N2L, there was a decrease in the number of CFU/mL (p=0.0183) in comparison with the initial evaluation, and the number of CFU/mL in the samples stored with and without glycerol did not showed statistically significant difference. Although in different percentages of cell number, the oral microbiota variability evaluation showed that Streptococcus, Staphylococcus and Bacillus were maintained in the different times of evaluation. Based on our results, it is possible to suggest that the preservation of saliva in -20ºC and -196ºC are efficient storage methods for oral microbiota evaluation for a period of 3 and 10 months.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-14T18:34:35Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 15960 bytes, checksum: 22ee3932280023d16d2680dc9bd07ef9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T18:34:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 15960 bytes, checksum: 22ee3932280023d16d2680dc9bd07ef9 (MD5) Previous issue date: 2005-02-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bacteriocinas são peptídeos antimicrobianos que têm sido propostos como alternativa aos antibióticos utilizados na nutrição de ruminantes como promotores de crescimento. Streptococcus bovis HC5, uma bactéria isolada do rúmen de bovinos, produz uma bacteriocina (bovicina HC5) com amplo espectro de atividade. Estudos anteriores demonstraram que esta bacteriocina inibiu a produção in vitro de amônia por culturas puras de bactérias do rúmen, porém, seus efeitos sobre a produção de amônia com culturas mistas não foram testados. Amostras de líquido de rúmen foram coletadas a partir de bovinos fistulados e alimentados com silagem de cana-de-açúcar e 10% de concentrado. Amostras de microrganismos ruminais contendo células lavadas e ressuspendidas em meio mineral anaeróbio (DO 600nm de aproximadamente 1,6), foram capazes de desaminar triptona em concentrações de até 32 g/l. Entretanto, quando a concentração de triptona no meio foi menor que 2 g/l, a quantidade de proteína microbiana após 24 horas de incubação a 39o C diminuiu em até 60%. A atividade específica de produção de amônia na suspensão de células lavadas e incubadas com 16 g/l de triptona obedeceu à cinética de primeira ordem em função do tempo até aproximadamente 10 horas de incubação. Quando células de S. bovis HC5 foram adicionadas na suspensão de microrganismos, a produção de amônia diminuiu. Quando o inóculo de S. bovis HC5 foi de 10% a produção de amônia e a atividade específica de produção de amônia diminuiram em 51% e 39%, respectivamente. Esse nível de inibição foi similar ao efeito da monensina (5 M). Quando o extrato livre de células de bovicina HC5 foi adicionado à suspensão de células contendo microrganismos ruminais a atividade de desaminação foi inibida. A produção de amônia diminuiu em aproximadamente 41% quando a concentração de bovicina HC5 foi de 40 AU/ml. Amostras de microrganismos ruminais que foram transferidas sucessivamente (50% de inóculo, v/v) em meio básico contendo triptona mantiveram os níveis de produção de amônia por quatro transferências. A adição de bovicina HC5 (12,5 AU/ml) ou monensina (5 M) em cada transferência diminuiu a produção de amônia. O nível de inibição variou de 27% a 53% para bovicina HC5 e 20% a 66% para monensina, quando comparado aos tratamentos controle. A inoculação de S. bovis HC5 (5% de inóculo, v/v) no primeiro dia de transferência, ao meio contendo a suspensão de células também inibiu a produção de amônia, porém, os níveis de inibição foram menores do que aqueles obtidos com o extrato celular. Esses resultados indicam que a bovicina HC5 pode inibir a produção de amônia em culturas mistas de microrganismos ruminais e possui potencial para ser utilizado na diminuição da produção de amônia in vivo. / Bacteriocins are antimicrobial peptides that have been suggested as an alternative to antibiotics used in ruminant nutrition for growth promotion. Streptococcus bovis HC5, a bacterium isolated from the bovine rumen, produces a bacteriocin (bovicin HC5) with a broad spectrum of activity. This bacteriocin has been previously shown to inhibit ammonia production by hyper-ammonia producing bacteria in vitro, but its effect on ammonia production in ruminal fluid had not been tested. When ruminal fluid samples were collected from fistulated cows fed sugarcane silage and 10 % concentrate, the washed cell suspensions (DO 600 nm of approximately 1,6) deaminated tryptone even at concentrations as high as 32 g/l. However, if the tryptone concentration was less than 2 g/l there was a decrease in microbial cell protein after 24h of incubation at 39oC. The specific activity of ammonia production by washed cell suspensions incubated with 16 g/l tryptone followed a first order kinetics for up to 10 h of incubation. If S. bovis HC5 cells were added to the cell suspensions, ammonia production decreased. When the level of S. bovis HC5 inoculum was 10 %, ammonia production and the specific activity xiof ammonia production decreased 51 % and 39 %, respectively. This level of inhibition was similar to the effect of monensina (5 μM). When increasing amounts of the bovicin HC5 cell-free extracts were added to cell suspensions containing rumen microorganisms, the deamination activity decreased. Ammonia production was inhibited approximately 41 % when the concentration of bovicin HC5 extract was 40 AU/ml. Samples of rumen microorganisms that were transferred successively (50 % inoculum, v/v) into basal media containing tryptone maintained the level of ammonia production for at least four transfers. The addition of bovicin HC5 (12,5 AU/ml) or monensina (5 μM) to each transfer, decreased ammonia production. The level of inhibition varied from 27 % to 53 % for bovicin HC5 and 20 % to 66 % to monensina, when compared to control treatments. Addition of S. bovis HC5 cells (5 % inoculum, v/v) to the cell suspensions during the first transfer also inhibited ammonia production thereafter, but the level of inhibition was not as great as the cell-free extract. These results indicate that bovicin HC5 can inhibit ammonia production by mixed cultures of rumen microorganisms and could have potential application for decreasing ammonia production in vivo.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-12-22T09:42:58Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1498464 bytes, checksum: 94219f2b91c3d1b40c02bfce0274ee08 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-22T09:42:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1498464 bytes, checksum: 94219f2b91c3d1b40c02bfce0274ee08 (MD5) Previous issue date: 2017-08-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O leite humano (LH) tem a função de fornecer nutrientes e outras substâncias responsáveis pela defesa do organismo contra ameaças externas nos primeiros meses de vida. A sua microbiota tem sido estudada e durante um tempo acreditou-se que os micro-organismos a presença de micro-organismos nessa matriz fosse consequência da contaminação devido a manipulação inadequada. Posteriormente, admitiu-se que os micro-organismos fazem parte da composição natural do leite e que desempenham várias funções no organismo. Por diversos motivos, alguns recém- nascidos não podem consumir o leite produzido pelas próprias mães e a alternativa é o leite depositado em bancos de leite. Para eliminar micro-organismos patogênicos, o leite recebido nos bancos é pasteurizado, com isso também são eliminadas bactérias benéficas. O presente estudo teve como objetivo identificar, caracterizar fenotipicamente e selecionar bactérias com potencial para uso em bancos de leite humano. Foram coletadas amostras de leite de 11 voluntárias em cinco períodos da lactação (5, 15, 30, 60 e 90 dias após o parto) e a partir delas, isoladas colônias crescidas em meios de cultura específicos. Para agrupar os micro-organismos, extraiu-se o DNA total de cada amostra e realizou-se REP-PCR. Um representante de cada grupo foi identificado. Para os testes fenotípicos, as estirpes anteriormente identificadas foram avaliadas quanto a aspectos de segurança, como capacidade de produção da hemolisina, atividade da enzima gelatinase, suceptibilidade a antibióticos e verificação da forma isomérica do ácido lático produzido. A funcionalidade foi verificada por meio de teste de resistência ao suco gástrico e a sais biliares e antagonismo a patógenos indicadores. As culturas foram liofilizadas e novamente avaliadas. Após a formação de 74 grupos, foram identificadas duas espécies: Enterococcus faecalis (presentes em todas as fases da lactação) e Lactobacillus fermentum (presente no leite maduro de duas mães). Todas as estirpes resistiram ao processo de liofilização e foram classificadas como não β-hemolíticas, gelatinase negativas, resistentes ao suco gástrico e a sais biliares e com capacidade de antagonizar patógenos. Nenhum isolado foi sensível a todos antibióticos testados, porém, a sensibilidade de alguns aumentou após a secagem. Todos produziram ácido lático nas duas forma isoméricas. O isolado identificado com E. faecalis com a numeração 106 produziu L(+)-ácido lático em maior proporção independentemente de ser liofilizado ou não. Com os resultados obtidos não é possível indicar nenhuma das estirpes estudadas para uso imediato. O entendimento do real papel dessas bactérias no leite humano é necessário para que esses isolados possam ser considerados probióticos e possam ser reincorporados ao leite de BLH. / Human milk (HM) has the function of providing nutrients and other substances responsible for defending the body against external threats in the first months of life. Their microbiota has been studied and for a while it was believed that the microorganisms the presence of microorganisms in this matrix was a consequence of contamination due to improper handling. Subsequently, it was recognized that micro- organisms form part of the natural composition of milk and perform functions in the body. For various reasons, some newborns can not consume the milk produced by the mothers themselves and the alternative is milk deposited in milk banks (HMB). To eliminate pathogenic microorganisms, the milk received at the banks is pasteurized, thereby also eliminating beneficial bacteria. The present study aimed to identify, characterize phenotypically and select bacteria with potential for use in HMB. Milk samples were collected from 11 volunteers in five lactation periods (5, 15, 30, 60 and 90 days postpartum) and from them isolated colonies grown in specific culture media. To group the microorganisms, the total DNA was extracted from each sample and REP-PCR was performed. One representative from each group was identified. For the phenotypic tests, the previously identified strains were evaluated for safety aspects such as hemolysin production capacity, activity of the enzyme gelatinase, susceptibility to antibiotics and verification of the isomeric form of lactic acid produced. The functionality was verified through resistance test to gastric juice and to bile salts and antagonism to indicator pathogens. The cultures were lyophilized and retested. After the formation of 74 groups, two species were identified: Enterococcus faecalis (present in all stages of lactation) and Lactobacillus fermentum (present in mature milk of two mothers). All strains resisted the lyophilization process and were classified as non-β- hemolytic, gelatinase negative, resistant to gastric juice and bile salts and capable of antagonizing pathogens. No isolates were sensitive to all antibiotics tested, however, the sensitivity of some increased after drying. All produced lactic acid in the two isomeric forms. The isolate identified with E. faecalis with the number 106 produced L(+)- lactic acid to a greater extent regardless of whether it is lyophilized or not. With the results obtained, it is not possible to indicate any of the strains studied for immediate use. Understanding the true role of these bacteria in human milk is necessary so that these isolates can be considered as probiotics and can be reincorporated into BLH milk.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-12-14T12:19:11Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1235897 bytes, checksum: f2460434ba89d7ba6f3d522b8c83ff75 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-14T12:19:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1235897 bytes, checksum: f2460434ba89d7ba6f3d522b8c83ff75 (MD5) Previous issue date: 2014-12-11 / A ingestão de probióticos tem sido relatada como sendo um dos métodos mais amplamente utilizados para modular a microbiota intestinal. Curiosamente, o diabetes mellitus tipo 2 tem sido associado à disbiose e uma das possíveis vias de reestabelecer a microbiota intestinal saudável é por meio da ingestão regular de probióticos, os quais vem se destacando na indústria alimentícia. Assim, o objetivo deste estudo foi, primeiramente, desenvolver um leite fermentado de origem caprina, saborizado com suco de uva, contendo probióticos e, posteriormente, avaliar o seu efeito metabólico em diabéticos. Leites fermentados contendo ou não bactérias probióticas (Lactobacillus acidophilus La-5 e Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB-12) foram submetidos a analises físico-químicas, microbiológicas, sensoriais, além da caracterização nutricional do produto, incluindo atividade antioxidante. O teor de compostos fenólicos totais e atividade antioxidante do leite fermentado contendo probióticos foi maior (p < 0,01) do que o leite fermentado convencional. Observou-se uma maior perda da viabilidade celular para L. acidophilus do que para o B. animalis. No entanto, a viabilidade de todas as bactérias foi adequada (> 106 UFC/ mL) até o 28o dia de armazenamento a 4 oC. Ambos os leites fermentados analisados apresentaram boas características sensoriais, não havendo diferença (p > 0,05) entre os mesmos. Um estudo duplo-cego, randomizado e placebo-controlado, incluindo 50 indivíduos diabéticos, foi desenvolvido posteriormente. Os diabéticos foram divididos em dois grupos, recebendo 120 mL/dia de uma das bebidas durante 6 semanas. Medidas antropométricas, de composição corporal, coleta de sangue e amostras fecais foram obtidos no início e ao final do estudo. A ingestão de leite fermentado contendo probióticos promoveu uma redução (p ≤ 0,05) nos níveis de frutosamina e uma tendência à redução (p = 0,07) nos níveis de hemoglobina glicada. Em ambos os grupos foram observados reduções significativas nos níveis de TNF-α e resistina e a concentração fecal de ácido acético aumentou ao final do estudo, enquanto os níveis de IL-10 foi reduzida (p < 0,001) apenas no grupo controle. Houve diferença significativa entre os grupos em relação às alterações de HbA1c, colesterol total e lipoproteína de baixa densidade. Não houve alterações (p > 0,05) na capacidade antioxidante total e F2-isoprostano. Este estudo desenvolveu uma bebida funcional com boa qualidade em termos de sobrevivência de bactérias e características sensoriais e nutricionais. A ingestão regular da bebida contendo probióticos melhorou o controle glicêmico em diabéticos, no entanto, a ingestão de leite fermentado caprino saborizado com suco de uva, esteve envolvido com outras alterações metabólicas. / The administration of probiotics and prebiotics has been reported to be one of the most widely used approaches to modulate intestinal microbiota. Interestingly, type 2 diabetes has been associated with dysbiosis and one of the possible routes for restore a healthy gut microbiota is by the regular ingestion of probiotics, which has been highlighted in the food industry. The present study aimed, first, to develop a flavored fermented goat milk containing probiotics and assess their metabolic effect in diabetics. Fermented milk with or without probiotic bacteria (Lactobacillus acidophilus La-5 and Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB-12) were subjected to physicochemical, microbiological and sensory analysis, besides the nutritional characterization of the product, including antioxidant activity. Total phenolic contents and antioxidant activity of probiotic flavored fermented milk were significantly higher (p < 0.01) than conventional fermented milk. A higher loss in cell viability was observed for L. acidophilus than for the B. animalis. However, the viability of all bacteria was adequate (> 106 cfu/mL) until day 28 of storage. The fermented milk showed good sensory characteristics and no significant sensory preference among the fermented milks was found. A double-blind, randomized, placebo-controlled study including 50 diabetic patients, was developed later. The subjects were divided into two groups, receiving 120 mL/ day one of the fermented milks for 6 weeks. Anthropometric measurements, body composition, fasting blood and faecal samples were taken at baseline and after 6 weeks of intervention. The study demonstrated a significant decrease in fructosamine levels (p ≤ 0.05) and haemoglobin A1c tended to be lower (p = 0.07) in probiotic group. TNF- α and resistin were significantly reduced and faecal acetic acid was increased in both groups after the end of trial, while IL-10 was reduced (p < 0.001) only in the control group. There was a significant difference between groups concerning mean changes of HbA1c, total cholesterol and low-density lipoprotein. No significant changes (p > 0.05) from baseline were detected in plasma total antioxidant status and F2-isoprostane. This study developed a beverage of good quality, in terms of survival of bacteria and sensory and nutritional characteristics. Probiotic flavored fermented milk consumption improved the glycemic control in diabetic subjetcs, however, the intake of flavored fermented goat milk was involved with others metabolic changes.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Nutrição, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:14:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 329288.pdf: 855366 bytes, checksum: 98a111364bb239c4d91d15e649c92823 (MD5) Previous issue date: 2014 / Introdução: A microbiota intestinal refere-se aos micro-organismos que reside no trato gastrointestinal, sendo colonizada por bactérias que habitam permanentemente e temporariamente este órgão. Além dos fatores comumente envolvidos nas disfunções metabólicas presentes no indivíduo obeso, a microbiota intestinal pode estar relacionada com a patogênese e a progressão da obesidade. Na obesidade o acúmulo do tecido adiposo acarreta alterações na homeostase glicêmica e no perfil lipídico. Alterações dessas vias metabólicas pela obesidade podem estar relacionadas com a microbiota intestinal. Objetivo: Avaliar as concentrações fecais de Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., pH fecal e parâmetros metabólicos em mulheres com obesidade mórbida e comparar com as mulheres eutróficas, como também associar as concentrações de Bifidobacterium spp. e Lactobacillus spp com os parâmetros metabólicos, em mulheres com obesidade mórbida. Métodos: Estudo transversal realizado em 19 mulheres com obesidade mórbida no pré-operatório da cirurgia bariátrica e em 13 mulheres eutróficas. Foram realizadas coleta de fezes, para determinação dos gêneros Bifidobacterium spp, Lactobacillus spp. e pH fecal, coleta de sangue pra determinação dos parâmetros lipídicos e glicêmicos, coleta de dados clínicos e avaliação do estado nutricional. Para todos os testes estatísticos realizado, foi adotado o nível de significância de p<0,05. Resultados: As concentrações fecais de Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp. e pH fecal não apresentaram diferenças significativas entre os grupos de estudo. As concentrações plasmáticas de HDL-c, VLDL-c, triacilglicerol, hemoglobina glicada, insulina e HOMA-IR, apresentaram diferença significativa entre os grupos de estudo (p<0,05). Não houve associação das concentrações de Bifidobacterium spp. e Lactobacillus spp. com os parâmetros glicêmicos e lipídicos, em mulheres com obesidade mórbida. Conclusão: As concentrações de Bifidobacterium spp. e Lactobacillus spp são similares nos grupos estudados, como também não houve associação dessas bactérias com os parâmetros metabólicos. Resultados esses com possível influência do período de acompanhamento e orientações nutricionais, que antecedem a indicação da cirurgia Não obstante, o presente estudo confere subsidio para a continuidade de estudos longitudinais que avaliem intervenções. Palavras-chave: Microbiota intestinal; parâmetro glicêmico; perfil lipídico; obesidade mórbida.<br> / Abstract: Background: The gut microbiota consists in the colony of microorganisms that reside in the gastrointestinal tract, being colonized by bacteria that inhabit permanently and temporarily this organ In addition to the common factors involved in metabolic dysfunctions in obese individual, the gut microbiota may be related to the pathogenesis and progression of obesity. In obesity, the accumulation of adipose tissue leads to changes in glucose homeostasis and lipid profile. Abnormalities in these metabolic pathways triggered by obesity may be related to the gut microbiota. Objectives: Evaluate the concentrations feacal of Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp., fecal pH and metabolic parameters in obese women and compared with non-obese women. Associate these concentrations of Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp with metabolic parameters in women with morbid obesity. Methods: Cross-sectional study with 19 women with morbid obesity in preoperative bariatric surgery and 13 normal-weight women. Stool samples were collected to determine Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp. and fecal pH, as well as blood samples for determination of lipid and glycemic parameters. Clinical data collection and evaluation of nutritional status were also performed. For all statistical tests performed, a significance level of p <0.05 was adopted. Results: Fecal concentrations of Bifidobacterium spp., Lactobacillus spp. and fecal pH were not significantly different between the study groups. Plasma concentrations of HDL-C, VLDL-C, triacylglycerol, glycated hemoglobin, insulin and HOMA-IR showed a significant difference between the study groups (p <0.05). There was no association between concentrations of Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp. with glycemic and lipid parameters in women with morbid obesity. Conclusion: The concentrations of Bifidobacterium spp. and Lactobacillus spp are similar in the groups studied, there was also no association of these bacteria with metabolic parameters. These results with possible influence of the period of monitoring and nutritional guidelines, prior to surgical indication Nevertheless, this study provides subsidy for the continuity of longitudinal studies to evaluate interventions.

O guaraná (Paullinia cupana) é uma planta nativa da América do Sul, e suas sementes tem sido utilizadas por tribos amazônicas desde antes da colonização. O extrato de guaraná é consumido popularmente nos dias de hoje, entretanto pouco se sabe sobre a relação desse extrato com a microbiota intestinal. A microbiota possui um papel central na absorção de nutrientes da dieta e na regulação do metabolismo energético, sendo modificada na obesidade. A microbiota intestinal também é afetada pelo consumo de compostos vegetais, sendo muitas vezes regulada positivamente por dietas ricas em polifenóis. Todavia, o consumo de extratos vegetais pode gerar um desfecho tóxico, assim como alterações negativas na microbiota. O efeito de extratos ricos em compostos secundários deve ser estudado individualmente. Nesse trabalho avaliamos as alterações no ecossistema intestinal causadas pelo extrato comercial de sementes do Guaraná em animais saudáveis e no contexto da obesidade.Induzimos a obesidade em animais através de uma dieta que mimetiza a dieta ocidental, caracterizada por uma maior quantidade de gordura, sal e açúcar refinado, e uma menor quantidade de fibras. Os animais também foram submetidos ao tratamento com um extrato comercial de Guaraná, cafeína ou salina. A disbiose intestinal foi medida no conteúdo cecal através da amplificação e sequenciamento da porção ribossomal 16S. Também foi medida a atividade enzimática no fígado, rins e intestino delgado, assim como a quantidade de citocinas proinflamatórias no soro. A dieta obesogênica gerou um aumento no ganho de peso e no acúmulo de gordura dos animais comparada com a dieta Chow. Tanto o Guaraná quanto a cafeína não foram capazes de reverter o ganho de peso e o acúmulo de gordura. Também observamos a diminuição da atividade da enzima CAT no rim nos animais que receberam guaraná, independente da dieta. A dieta obesogênica induziu alterações na microbiota intestinal semelhantes às da obesidade, diminuindo a proporção de Bacteroidetes sobre Firmicutes, aumentando o gênero Mucispirilum e diminuindo os gêneros Lactobacillus e Bifidobacterium. Os tratamentos com guaraná e cafeína na dieta Chow diminuíram a proporção B/F, assim como o gênero Bifidobacterium. Observamos um aumento no filo Proteobacteria nos animais do grupo controle obeso. Esse aumento foi revertido pelo tratamento com guaraná. Analisando os gráficos de clusterização e landscape, observamos uma maior distância entre a microbiota dos animais que receberam dietas diferentes do que a dos animais que receberam tratamentos diferentes. Os tratamentos com guaraná ou cafeína modificaram o ecossistema intestinal, mas sem a capacidade de diminuir o acúmulo de gordura ou o ganho de peso. A maior alteração na microbiota foi devido à dieta obesogênica e não aos tratamentos, mostrando que os efeitos anti-obesogênicos do guaraná observados em outros estudos provavelmente não são via microbiota intestinal. / Guarana (Paullinia cupana) is a plant native of South America, and its seedshave been used by Amazonian tribes since before colonization. Guarana extract is consumed popularly today, however little is known about the interactions of this extract with the intestinal microbiota. The gut microbiota plays a central role in the absorption of nutrients from the diet and in the regulation of energy metabolism, being altered in obesity. The intestinal microbiota is also affected by the consumption of plant metabolites and is often regulated positively by diets rich in polyphenols. However, the consumption of plant extracts can generate a toxic outcome, as well as negative changes in the microbiota. Therefore, the effect of plant extracts should be studied individually. In this work, we evaluated the changes in the intestinal ecosystem caused by the administration of a commercial extract of Guaraná seeds in healthy animals and in the context of obesity. We induced obesity in animals through a diet that mimics the western diet, characterized by a higher amount of fat, salt and refined sugar, and a smaller amount of fiber. The animals were also treated with a commercial extract of Guarana, caffeine or saline. Intestinal dysbiosis was evaluated by cecal content, amplification and sequencing of the 16S ribosomal portion. The antioxidant enzymatic activity of the liver, kidney and small intestine was measured as well as the concentration of pro-inflammatory cytokines in the serum. The obesogenic diet increased the weight gain and fat accumulation of the animals compared to the Chow diet. Both Guarana and caffeine were unable to reverse weight gain and fat accumulation. We observed a lower activity of the Glutathione Peroxidase enzyme in the kidney and small intestine in the animals that received obesogenic diet compared to the Chow diet, regardless of the treatment. We also observed the decrease of Catalase enzyme activity in the kidney of animals that received Guarana, regardless of diet. The obesogenic diet induced changes in the intestinal microbiota similar to other works in literature, reducing the proportion of Bacteroidetes/Firmicutes (B/F), increasing the genus Mucispirilum and decreasing the genera Lactobacillus and Bifidobacterium. Guarana and caffeine treatments in the Chow diet decreased the B/F ratio, thus the Bifidobacterium genus. We observed an increase in the phylum Proteobacteria, in the animals of the Obese Control group. This increase in the phylum Proteobacteria, was reversed by the treatment with Guaraná. Analyzing the phylogenetic proximity charts and landscape, we observed a greater distance between the animals that received different diets than animals that received different treatments. Treatments with guarana or caffeine modified the intestinal ecosystem, but without the ability to decrease fat accumulation or weight gain. The major change in the microbiota was due to the obesogenic diet and not to the treatments, showing that the antiobese effects of guarana observed in other studies probably are not via intestinal microbiota.

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:28:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-14. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:33:48Z : No. of bitstreams: 1 000855099.pdf: 2014211 bytes, checksum: a9a888733e55b0a07c793c08d14149ba (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A aquicultura brasileira apresenta-se como atividade comercial em franca ascensão e, dentre as espécies nativas, o pacu, Piaractus mesopotamicus, destaca-se como uma das mais cultivadas nas regiões Sul, Sudeste e Centro Oeste do Brasil. Contudo, à semelhança do que ocorre com as demais espécies de interesse comercial, a produção do pacu enfrenta problemas ao longo do processo produtivo, tais como a alta densidade populacional utilizada, fornecimento incorreto de rações e estresse, que resultam em redução da produtividade e aumento na taxa de mortalidade. Uma das estratégias estudadas para melhorar o manejo alimentar em peixes consiste na utilização da privação alimentar por tempo determinado com a finalidade de promover compensação do crescimento, durante o período de realimentação. Entretanto, informações relacionadas às respostas fisiológicas, de modulação celular e de possíveis alterações na microbiota intestinal provocada por este tipo de manejo ainda são discordantes. A compreensão destas informações é necessária para o desenvolvimento de estratégias que minimizem o estresse ocasionado pela privação alimentar. Diante do exposto, a proposta deste trabalho foi avaliar o impacto do jejum prolongado, seguido de curto período de realimentação, sobre os parâmetros fisiológicos, expressão de genes relacionados ao processo de crescimento e estresse, prevalência de determinados grupos bacterianos na mucosa e conteúdo intestinal, além da clonagem, identificação e validação de genes de referência para normalização de dados de expressão gênica em estudos com pacus. Os resultados obtidos demonstraram que o pacu apresenta grande capacidade de mobilização das reservas endógenas, porém a recuperação das mesmas é mais rápida em peixes de menor tamanho. O presente estudo apresenta as primeiras comparações experimentais para validação de genes de referência para o pacu. Os genes clonados... / The Brazilian aquaculture is as a commercial activity on the rise. Among the native species, pacu, Piaractus mesopotamicus, stands out as one of the most reared in the southern, central and northeastern Brazil. However, similar to what occurs with other commercial species, the production of pacu experience problems during the production process, such as high population density used, incorrect food supply and stress, resulting in reduced productivity and increased mortality. One of the strategies investigated to improve the management of fish feeding is the use of dietary restrictions for a certain time to promote growth compensation during the refeeding period. However, information related to physiological responses and cell modulations caused by this type of management are still unknown. Understanding this information is necessary for the development of strategies to minimize the stress caused by food restriction. The purpose of this study was to evaluate the impact of prolonged fasting, followed by short refeeding on the physiological parameters, gene expression related to growth and stress, the prevalence of certain bacterial groups in the mucosa and intestinal content and cloning, identification and validation of reference genes for normalization of gene expression data in studies with pacu. The results showed that the pacu has great capacity for mobilization of endogenous reserves, but their recovery is faster in smaller fish. This study presents the first experimental comparisons for validation of reference genes for pacu. Cloned, sequenced and validated genes will be used in future studies of gene expression with this species. In addition, this study provides the first information about the changes in intestinal microbiota in pacu. The use of qPCR for the detection and quantification of specific bacterial groups proved to be an important tool for assessing changes in bacterial communities in the mucosa and intestinal contents of fish / CNPq: 153589/2011-6