A própolis é um material resinoso coletado pelas abelhas de diversas partes das plantas como brotos, folhas jovens e exsudatos. É utilizado para embalsamar animais que tenham morrido dentro da colmeia, vedar as paredes e conferir proteção frente a doenças. O emprego desse produto natural com finalidade medicinal remonta a antiguidade, tendo iniciado junto com antigas civilizações como a Egípcia, Grega e Romana e perduram até os dias atuais com ampla utilização em múltiplas finalidades terapêuticas médicas e veterinárias. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial antifúngico, a capacidade de remover e inibir biofilmes de espécies de Candida não-albicans de diferentes tipos de própolis e analisar a composição química da própolis obtida do Rio Grande do Sul (RS). Foram realizadas macerações e extrações sequenciais com solventes em ordem crescente de polaridade a fim de purificar os extratos. Em seguida foi feita a determinação da atividade antifúngica pelo método da microdiluição em caldo e o ensaio de remoção e inibição de biofilmes através de teste em corpo de prova (utilizando cateter como material teste). Após, foi realizada a análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS. De modo geral, os extratos e frações de própolis vermelha e própolis nativa do RS demonstraram forte atividade anti-Candida frente às leveduras testadas e significativa capacidade de remoção de seu biofilme aderido em cateteres, como corpo de prova. A própolis verde apresentou baixo espectro de ação antifúngica. A análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS levou ao isolamento dos flavonoides pinocembrina, pinostrobina e pinostrobina chalcona. Os resultados evidenciam o potencial da própolis nativa do RS e da própolis vermelha para o desenvolvimento de novos agentes antifúngicos e desinfetantes contra Candida não-albicans. / Propolis is a resinous material collected by bees from various plant parts such as buds, young leaves and exudates. It is used to embalm animals that have died inside the hive, seal the walls and confer protection against the disease. The use of this natural product with medicinal purposes dates back to antiquity, having started with ancient civilizations as the Egyptian, Greek and Roman, and lasted to the present day with extensive use in multiple medical and veterinary therapeutic purposes. The aim of this study was to evaluate the antifungal potential, the ability to remove and inhibit biofilms of Candida non-albicans of different types of propolis and analyze the chemical composition of propolis obtained from Rio Grande do Sul (RS). Maceration and sequential extractions with solvents in order of increasing polarity were performed to purify the extracts. Then the antifungal activity was determined by the method of broth microdilution testing and removal and inhibition of biofilms through test of body of proof (catheter using as test material). After, the chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis obtained in RS was performed. In general, the extracts and fractions of propolis of RS demonstrated strong anti-Candida activity across the tested yeasts and significant capacity removal of biofilm attached in catheter, as test body. The green propolis had low action spectrum antifungal. Chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis native to RS led to the isolation of the flavonoids pinocembrin, chalcone pinostrobin and pinostrobin. The results show the potential of the RS native propolis and red propolis for the development of new antifungal agents and disinfectants against non-albicans Candida.

Introdução: Pneumonias causadas por Staphylococcus aureus meticilina resistentes (Methicillin resistant Staphylococcus aureus - MRSA) estão associadas com uma alta mortalidade em pacientes internados em Centros de Terapia Intensiva (CTI). Não é incomum que ocorra falha no tratamento de pneumonia por MRSA com vancomicina. Alguns estudos têm mostrado que há uma relação entre mortalidade em infecções por MRSA e concentrações inibitórias mínimas (CIM) elevadas para vancomicina por Etest®, apesar dos isolados serem sensíveis à vancomicina (CIM ≤2μg/mL), conforme o Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar as CIMs para vancomicina em pacientes com diagnóstico de pneumonia por MRSA, descrever a relação entre a CIM da vancomicina obtido por Etest® e microdiluição em caldo com mortalidade em 30 dias em pacientes com pneumonia por MRSA internados em um hospital terciário, acadêmico, no sul do Brasil. Métodos: Estudo prospectivo de coorte. Foram incluídos todos os pacientes com pneumonia adquirida no hospital (hospital adquired pneumonia - HAP) e pneumonia associada à ventilação (ventilator associated pneumonia - VAP) por MRSA entre Junho de 2009 e Dezembro de 2011. A CIM da vancomicina do primeiro isolado do trato respiratório foi determinado por Etest® e microdiluição em caldo. As variáveis selecionadas para serem analisadas incluíram idade, sexo, comorbidades, dosagem sérica de vancomicina, escore APACHE II (Acute Physiological and Chronic Health Evaluation II) e a presença do accessory gene regulator II (agr II). O desfecho principal foi morte em 30 dias. Resultados: Foram incluídos 85 pacientes. A mortalidade em 30 dias foi de 42,4%. Em sessenta e oito pacientes (80,1%) as CIMs da vancomicina obtidos por Etest® foram menores ou iguais a 1,0μg/mL, enquanto todas as CIMs (N=85) obtidas por microdiluição em caldo foram ≤1,0μg/mL. Não houve correlação entre as CIMs por Etest® e microdiluição em caldo com morte em 30 dias. Quarenta e seis isolados de MRSA (54,1%) foram positivos para o locus agr II. A média da vancomicina sérica foi 20,7μg/mL (12,0 – 29,0) e a média do escore APACHE II foi 23,0 (17,5 – 29,0). O escore APACHE II foi relacionado com mortalidade em 30 dias. Conclusões: As CIMs da vancomicina obtidas por Etest® e microdiluição em caldo não foram associadas com altos níveis de mortalidade em pacientes com pneumonia grave por MRSA. / Background: Pneumonias due to methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) are associated with significant mortality in Intensive Care Units (ICU) patients. Vancomycin treatment failure in MRSA pneumonia patients is not uncommon. Some reports found a link between high mortality in MRSA infections and higher vancomycin minimum inhibitory concentrations (MICs) by Etest®, despite the susceptibility of the isolates (MIC ≤2,0μg/mL), according to the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Objectives: The purpose of this study was evaluate vancomycin MICs in patients with MRSA pneumonia, describe the relationship between vancomycin MIC generated by Etest® and broth microdilution with 30-day mortality in MRSA pneumonia patients. Methods: We conducted a prospective cohort study. All patients with MRSA hospital acquired pneumonia (HAP) and ventilator-associated pneumonia (VAP) admitted in ICU between June 2009 and December 2011 were included. Vancomycin MIC for the first isolate of the respiratory tract was determined by Etest® and broth microdilution. The variables selected for the analysis included age, sex, comorbid conditions, vancomycin serum trough concentration, APACHE II (Acute Physiological and Chronic Health Evaluation II) score and the presence of the accessory gene regulator II (agr II). The primary outcome was mortality at 30-day. Results: Eithy five patients were included. All case mortality at the 30-day was 42.4%. Sixty eight of the patients (80.1%) of the vancomycin MICs generated by Etest® were equal or below 1.0μg/mL. While all MICs generated by broth microdilution were ≤1.0μg/mL. MICs generated by Etest® and broth microdilution were not associated with 30-day mortality. Forty six isolates of MRSA (54.1%) from patients were positive for agr II. The median serum vancomycin was 20.7μg/mL (12.0 – 29.0) and the median APACHE II score was 23.0 (17.5 – 29.0). The APACHE II score was related to 30-day mortality. Conclusions: Vancomycin MICs by Etest® and broth microdilution were not associated with higher mortality leves in patients with severe MRSA pneumonia.

Introdução: Pneumonias causadas por Staphylococcus aureus meticilina resistentes (Methicillin resistant Staphylococcus aureus - MRSA) estão associadas com uma alta mortalidade em pacientes internados em Centros de Terapia Intensiva (CTI). Não é incomum que ocorra falha no tratamento de pneumonia por MRSA com vancomicina. Alguns estudos têm mostrado que há uma relação entre mortalidade em infecções por MRSA e concentrações inibitórias mínimas (CIM) elevadas para vancomicina por Etest®, apesar dos isolados serem sensíveis à vancomicina (CIM ≤2μg/mL), conforme o Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar as CIMs para vancomicina em pacientes com diagnóstico de pneumonia por MRSA, descrever a relação entre a CIM da vancomicina obtido por Etest® e microdiluição em caldo com mortalidade em 30 dias em pacientes com pneumonia por MRSA internados em um hospital terciário, acadêmico, no sul do Brasil. Métodos: Estudo prospectivo de coorte. Foram incluídos todos os pacientes com pneumonia adquirida no hospital (hospital adquired pneumonia - HAP) e pneumonia associada à ventilação (ventilator associated pneumonia - VAP) por MRSA entre Junho de 2009 e Dezembro de 2011. A CIM da vancomicina do primeiro isolado do trato respiratório foi determinado por Etest® e microdiluição em caldo. As variáveis selecionadas para serem analisadas incluíram idade, sexo, comorbidades, dosagem sérica de vancomicina, escore APACHE II (Acute Physiological and Chronic Health Evaluation II) e a presença do accessory gene regulator II (agr II). O desfecho principal foi morte em 30 dias. Resultados: Foram incluídos 85 pacientes. A mortalidade em 30 dias foi de 42,4%. Em sessenta e oito pacientes (80,1%) as CIMs da vancomicina obtidos por Etest® foram menores ou iguais a 1,0μg/mL, enquanto todas as CIMs (N=85) obtidas por microdiluição em caldo foram ≤1,0μg/mL. Não houve correlação entre as CIMs por Etest® e microdiluição em caldo com morte em 30 dias. Quarenta e seis isolados de MRSA (54,1%) foram positivos para o locus agr II. A média da vancomicina sérica foi 20,7μg/mL (12,0 – 29,0) e a média do escore APACHE II foi 23,0 (17,5 – 29,0). O escore APACHE II foi relacionado com mortalidade em 30 dias. Conclusões: As CIMs da vancomicina obtidas por Etest® e microdiluição em caldo não foram associadas com altos níveis de mortalidade em pacientes com pneumonia grave por MRSA. / Background: Pneumonias due to methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) are associated with significant mortality in Intensive Care Units (ICU) patients. Vancomycin treatment failure in MRSA pneumonia patients is not uncommon. Some reports found a link between high mortality in MRSA infections and higher vancomycin minimum inhibitory concentrations (MICs) by Etest®, despite the susceptibility of the isolates (MIC ≤2,0μg/mL), according to the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Objectives: The purpose of this study was evaluate vancomycin MICs in patients with MRSA pneumonia, describe the relationship between vancomycin MIC generated by Etest® and broth microdilution with 30-day mortality in MRSA pneumonia patients. Methods: We conducted a prospective cohort study. All patients with MRSA hospital acquired pneumonia (HAP) and ventilator-associated pneumonia (VAP) admitted in ICU between June 2009 and December 2011 were included. Vancomycin MIC for the first isolate of the respiratory tract was determined by Etest® and broth microdilution. The variables selected for the analysis included age, sex, comorbid conditions, vancomycin serum trough concentration, APACHE II (Acute Physiological and Chronic Health Evaluation II) score and the presence of the accessory gene regulator II (agr II). The primary outcome was mortality at 30-day. Results: Eithy five patients were included. All case mortality at the 30-day was 42.4%. Sixty eight of the patients (80.1%) of the vancomycin MICs generated by Etest® were equal or below 1.0μg/mL. While all MICs generated by broth microdilution were ≤1.0μg/mL. MICs generated by Etest® and broth microdilution were not associated with 30-day mortality. Forty six isolates of MRSA (54.1%) from patients were positive for agr II. The median serum vancomycin was 20.7μg/mL (12.0 – 29.0) and the median APACHE II score was 23.0 (17.5 – 29.0). The APACHE II score was related to 30-day mortality. Conclusions: Vancomycin MICs by Etest® and broth microdilution were not associated with higher mortality leves in patients with severe MRSA pneumonia.

A própolis é um material resinoso coletado pelas abelhas de diversas partes das plantas como brotos, folhas jovens e exsudatos. É utilizado para embalsamar animais que tenham morrido dentro da colmeia, vedar as paredes e conferir proteção frente a doenças. O emprego desse produto natural com finalidade medicinal remonta a antiguidade, tendo iniciado junto com antigas civilizações como a Egípcia, Grega e Romana e perduram até os dias atuais com ampla utilização em múltiplas finalidades terapêuticas médicas e veterinárias. O objetivo desse trabalho foi avaliar o potencial antifúngico, a capacidade de remover e inibir biofilmes de espécies de Candida não-albicans de diferentes tipos de própolis e analisar a composição química da própolis obtida do Rio Grande do Sul (RS). Foram realizadas macerações e extrações sequenciais com solventes em ordem crescente de polaridade a fim de purificar os extratos. Em seguida foi feita a determinação da atividade antifúngica pelo método da microdiluição em caldo e o ensaio de remoção e inibição de biofilmes através de teste em corpo de prova (utilizando cateter como material teste). Após, foi realizada a análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS. De modo geral, os extratos e frações de própolis vermelha e própolis nativa do RS demonstraram forte atividade anti-Candida frente às leveduras testadas e significativa capacidade de remoção de seu biofilme aderido em cateteres, como corpo de prova. A própolis verde apresentou baixo espectro de ação antifúngica. A análise química da fração diclorometano de própolis obtida do RS levou ao isolamento dos flavonoides pinocembrina, pinostrobina e pinostrobina chalcona. Os resultados evidenciam o potencial da própolis nativa do RS e da própolis vermelha para o desenvolvimento de novos agentes antifúngicos e desinfetantes contra Candida não-albicans. / Propolis is a resinous material collected by bees from various plant parts such as buds, young leaves and exudates. It is used to embalm animals that have died inside the hive, seal the walls and confer protection against the disease. The use of this natural product with medicinal purposes dates back to antiquity, having started with ancient civilizations as the Egyptian, Greek and Roman, and lasted to the present day with extensive use in multiple medical and veterinary therapeutic purposes. The aim of this study was to evaluate the antifungal potential, the ability to remove and inhibit biofilms of Candida non-albicans of different types of propolis and analyze the chemical composition of propolis obtained from Rio Grande do Sul (RS). Maceration and sequential extractions with solvents in order of increasing polarity were performed to purify the extracts. Then the antifungal activity was determined by the method of broth microdilution testing and removal and inhibition of biofilms through test of body of proof (catheter using as test material). After, the chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis obtained in RS was performed. In general, the extracts and fractions of propolis of RS demonstrated strong anti-Candida activity across the tested yeasts and significant capacity removal of biofilm attached in catheter, as test body. The green propolis had low action spectrum antifungal. Chemical analysis of the dichloromethane fraction of propolis native to RS led to the isolation of the flavonoids pinocembrin, chalcone pinostrobin and pinostrobin. The results show the potential of the RS native propolis and red propolis for the development of new antifungal agents and disinfectants against non-albicans Candida.

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2018-03-05T14:57:33Z No. of bitstreams: 2 Camila_Santana2017.pdf: 541138 bytes, checksum: 853f9769c196d162cfb57486117ffe0d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-05T14:57:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Camila_Santana2017.pdf: 541138 bytes, checksum: 853f9769c196d162cfb57486117ffe0d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-05-29 / The products of secondary plant metabolism have aroused great economic interest in their chemical diversity and biological activities. The objective of this work was to determine the chemical composition of Myrcia oblongata extracts, to evaluate the antioxidant potential of these extracts, to test the antimicrobial activity against eleven standard microorganisms and ten serotypes of Salmonella spp. Of poultry origin, as well as to evaluate the potential mortality of extracts and essential oil on Alphitobius diaperinus. Saponins, steroids, triterpenoids, tannins and flavonoids have been identified. The extracts presented activity for all microorganisms tested, except for the methanolic extract that did not show activity for P. mirabilis and S. Enteritidis. The hexane extract, ethyl acetate and acetone have antioxidant activity. The essential oil and extracts of hexane, ethanolic, methanolic and ethyl acetate showed high mortality rates on A. diaperinus larvae. For adults, the best results were obtained for essential oil, with a mortality greater than 80%. The results point to the importance of studies to understand the potential and action of plant extracts and essential oils, aiming at reducing the impacts caused by the extensive use of antimicrobials and synthetic antioxidants and by the undue use of chemical substances for pest control. / Os produtos do metabolismo secundário das plantas têm despertado grande interesse econômico pela sua diversidade química e atividades biológicas. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi determinar a composição química dos extratos vegetais de Myrcia oblongata, avaliar o potencial antioxidante destes extratos, testar a atividade antimicrobiana frente a onze microrganismos padrões e dez sorotipos de Salmonella spp. de origem avícola, bem como avaliar o potencial de mortalidade dos extratos e óleo essencial sobre Alphitobius diaperinus. Foram identificados saponinas, esteróides, triterpenóides, taninos e flavonóides. Os extratos apresentaram atividade para todos os microrganismos testados, com exceção do extrato metanólico que não demonstrou atividade para P. mirabilis e S. Enteritidis. O extrato hexânico, acetato de etila e acetona possuem atividade antioxidante. O óleo essencial e os extratos de hexano, etanólico, metanólico e de acetato de etila apresentaram elevados índices de mortalidade sobre a larva de A. diaperinus. Para os adultos os melhores resultados foram obtidos para o óleo essencial, com mortalidade superior a 80%. Os resultados direcionam a importância de estudos para compreender o potencial e a ação de extratos vegetais e óleos essenciais, visando à diminuição de impactos causados pelo uso extensivo de antimicrobianos e antioxidantes sintéticos e pelo uso indevido de substâncias químicas para o controle de pragas.

In many vertebrate and invertebrate species mediators of innate immunity include antimicrobial peptides (AMPs) such as peptide fragments of histones and other proteins with previously ascribed different functions. Shark AMPs have not been described and this research examines the antibacterial activity of nurse shark (Ginglymostoma cirratum) peripheral blood leukocyte lysates. Screening of lysates prepared by homogenizing unstimulated peripheral blood leukocytes identified muramidase (lysozyme-like) and non-muramidase antibacterial activity. Lysates were tested for lysozyme using the lysoplate assays, and antibacterial (AB) activity was assayed for by a microdilution growth assay that was developed using Planococcus citreus as the target bacterium. Fractionation of crude lysates by ion exchange and affinity chromatography was followed by a combination of SDS-PAGE with LC/MS-MS and/or N-terminal sequence analysis of low molecular weight protein bands (kDa). This yielded several peptides with amino acid sequence similarity to lysozyme, ubiquitin, hemoglobin, human histones H2A, H2B and H4 and to antibacterial histone fragments of the catfish and the Asian toad. Not all peptide sequences corresponded to peptides potentially antibacterial. The correlation of a specific protein band in active lysate fractions was accomplished by employing the acid-urea gel overlay assays in which AB activity was seen as zones of growth inhibition on a lawn of P. citreus at a position corresponding to that of the putative AB protein band. This study is the first to describe putative AMPs in the shark and their potential role in innate immunity.

Nos últimos anos, várias espécies de fungos, até então conhecidos como saprófitas do ambiente, têm emergido como importantes patógenos na prática clínica, associados muitas vezes com a resistência aos antimicrobianos disponíveis comercialmente. Dessa forma, o conhecimento de aspectos relacionados à patogenicidade desses micro-organismos, como a formação de biofilme, assim como o perfil de susceptibilidade aos antifúngicos e a novas alternativas terapêuticas faz-se necessário. Uma importante tecnologia neste contexto é a utilização de sistemas nanoestruturados a partir de polímeros biodegradáveis para a veiculação de fármacos. Este trabalho visa verificar em isolados fúngicos emergentes a expressão fenotípica de biofilme através do teste em microplaca de poliestireno e o perfil de susceptibilidade frente a antifúngicos na forma livre e incorporados em sistemas nanoestruturados, através da técnica de microdiluição em caldo. Foram selecionados para o estudo 82 isolados fúngicos potencialmente patogênicos, sendo 26 oriundos do ambiente e 56 procedentes de espécimes clínicos. Quanto à capacidade de formação de biofilme verificou-se que 68 (82,9%) isolados produziram biofilme pelo teste da microplaca, sendo 38 classificados como fortes, 17 como moderados e 13 como fracos produtores. Além disso, observou-se que os isolados clínicos apresentaram maior capacidade de formação de biofilme do que os isolados ambientais. Não houve correlação entre a produção de biofilme e a susceptibilidade aos antifúngicos testados nas células planctônicas. De um modo geral, os fungos foram sensíveis à maioria dos antifúngicos testados neste trabalho. Entretanto, o fluconazol apresentou baixa atividade (CIM≥64μg/mL) para 45% dos isolados avaliados. Com o intuito de investigar o efeito de cetoconazol e de fluconazol associados a nanoestruturas sobre os diferentes fungos apresentados no estudo, também foram desenvolvidas nanocápsulas de poli-ɛ-caprolactona contendo estes fármacos. Análises físico-químicas das nanoestruturas revelaram tamanho médio de partícula variando de 206 nm para as nanocápsulas de cetoconazol (CN) e de 211 nm para as nanocápsulas de fluconazol (FN). Ambas as formulações apresentaram características homogêneas e demonstraram estruturas monodispersas. A eficiência de encapsulação do cetoconazol e do fluconazol nas formulações foi de 86,35 e de 80,5%, respectivamente. Os diversos gêneros investigados parecem se comportar de maneira diferente quando expostos às nanoestruturas dos dois fármacos em estudo, sugerindo que as espécies de Candida poderiam apresentar uma maior susceptibilidade in vitro frente a estas nanoestruturas quando comparadas à forma livre dos antifúngicos em questão. Os resultados obtidos demonstram a potencialidade destas formulações para a veiculação de cetoconazol e fluconazol. Como perspectivas, sugere-se a realização de estudos adicionais para evidenciar o efeito in vitro das nanopartículas sobre os diferentes fungos de importância clínica e ambiental. / In recent years, several fungal species known as environmental saprophytes have emerged as important pathogens in clinical practice, often associated with antimicrobial resistance commercially available. Thus, the knowledge of aspects related to these pathogenic micro-organisms, such as biofilm formation, as well as the profile of susceptibility to antifungal agents and new therapeutic options is necessary. An important technology in this context is the use of nanostructured materials from biodegradable polymers for the placement of drugs. This work aims to examine the emerging fungal isolates in the phenotypic expression of biofilm through the test on polystyrene microplate and the susceptibility profile to antifungals front in the free trade and in the nanostructured systems by the broth microdilution method. In this study, 82 potentially pathogenic fungal isolates were selected, being the 26 from environment originating and the 56 from the clinical specimens. Regarding the ability of biofilm formation was found that 68 (82,9%) isolates produced biofilm by the microplate assay. The isolates were classified as 38 strong, 17 moderate and 13 weak biofilm producers. Moreover, it was noted that clinical isolates showed greater capability for the biofilm formation than the environmental isolates. There was no correlation between the biofilm production and the susceptibility to antifungal agents tested in planktonic cells. In general, the fungi were susceptible of the majority of the antifungal agents tested in this study. However, the fluconazole showed low activity (MIC≥64μg/mL) for 45% of the isolates. In order to investigate the effect of the ketoconazole and the fluconazole associated with nanostructures against different fungi contained in the study, polymeric nanocapsules have also been developed containing these drugs. Physicochemical analyzes showed an average size of nanostructures ranging from 206 nm for the nanocapsules of ketoconazole (CN), and 211 nm for the fluconazole (FN). The formulations showed homogeneous characteristics and demonstrated monodisperse structures. The encapsulation efficiency of ketoconazole and fluconazole in the formulations was 86,35 and 80,5%, respectively. The diverse genera investigated appear to behave differently when exposed to the nanostructures of the two drugs have being studied, suggesting that Candida species could exhibit a greater sensitivity to these nanostructures compared to the free form of antifungal concerned. The results demonstrate the potential of the formulations for the delivery of fluconazole and ketoconazole. As perspectives, we suggest further studies to demonstrate the in vitro effect of the nanoparticles against different fungi from the clinical and the environmental importance.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pythiosis is a chronic disease that affects humans, other mammals and birds. It is caused by the aquatic oomycete Pythium insidiosum. Pythiosis progresses rapidly and can become life threatening if not treated in the early stages. The absence of ergosterol in the cell wall of this oomycete prevents the treatment of pythiosis with antifungal therapy because most antifungal drugs act by inhibiting the synthesis of ergosterol. Members of the genus Pythium are known to be susceptible to some antimicrobial of the tetracycline, macrolide, aminoglycoside and chloramphenicol classes. This study aimed to evaluate the in vitro susceptibility of isolates of P. insidiosum to the aminoglycosides gentamicin, neomycin, paromomycin and streptomycin and to the minocycline derivative tigecycline. The susceptibility tests were carried out with 24 P. insidiosum isolates using the broth microdilution method in accordance with Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) document M38-A2. The minimum inhibitory concentration (MIC) values for gentamicin, neomycin, paromomycin and streptomycin ranged from 32 to 64 mg/L, and the minimal fungicidal concentration (MFC) values ranged from 32 to 128 mg/L. Tigecycline had a good inhibitory activity, with values of mic MIC (0.25-2 mg/L) and MFC (1-8 mg/L) values. The observed in vitro susceptibility to tigecycline makes this drug a good option for future in vivo assays investigating options of treatment of pythiosis. / Pitiose é uma doença crônica que afeta humanos, outros mamíferos e pássaros. O seu agente etiológico é um oomiceto aquático denominado Pythium insidiosum. A Pitiose evolui rapidamente e pode se tornar fatal se não tratada nos primeiros estágios. A ausência de ergosterol na parede da célula deste oomiceto impede o tratamento de pitiose com terapia antifúngica, pois a maioria das drogas antifúngicas atua sobre a síntese de ergosterol. Os membros do gênero Pythium são conhecidos por serem susceptíveis a alguns antimicrobianos do grupo das tetraciclinas, macrolídeos, aminoglicosídeos e cloranfenicol. Este estudo teve como objetivo avaliar a susceptibilidade in vitro de isolados de P. insidiosum frente aos aminoglicosídeos gentamicina, neomicina, paromomicina e estreptomicina e ao derivado da minociclina denominado de tigeciclina. Os testes de susceptibilidade foram realizados com 24 isolados de P. insidiosum, utilizando o método de microdiluição em caldo, de acordo com o documento M38- A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Os valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) de gentamicina, neomicina, paromomicina e estreptomicina variaram de 32 a 64 mg/L, e os valores de concentração fungicida mínima (CFM) variaram de 32 a 128 mg/l. Tigeciclina apresentou boa atividade inibitória, com valores de CIM (0,25-2 mg/L) e CFM (1-8 mg/L). A susceptibilidade à tigeciclina observada in vitro faz deste fármaco uma boa opção em futuros ensaios e in vivo, investigando o tratamento da pitiose.

Submitted by LARISSA SPÓSITO null (lari_sposito@hotmail.com) on 2017-07-27T13:11:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação versão final encaminhada pós- PDF.pdf: 2246283 bytes, checksum: 9ebe4c751ba29fc9cf4495fdb7288e5e (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-31T18:31:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sposito_l_me_arafcf.pdf: 2393152 bytes, checksum: cd33f70c4383729bdf5dc49ce9d3375f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T18:31:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sposito_l_me_arafcf.pdf: 2393152 bytes, checksum: cd33f70c4383729bdf5dc49ce9d3375f (MD5) Previous issue date: 2017-06-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O uso de produtos naturais na terapêutica convencional vem ganhando destaque nos últimos anos com relação a atividade antimicrobiana devido à alta taxa de efeitos tóxicos e ao excessivo crescimento do número de cepas multirresistentes aos antimicrobianos convencionais empregados na prática. Entre as novas triagens terapêuticas frente às afecções bacterianas, as infecções causadas pelo Helicobacter pylori merecem atenção especial, uma vez que estão diretamente relacionadas com quadros clínicos severos, como a gastrite crônica, úlcera péptica e câncer gástrico. A Casearia sylvestris Swartz é uma planta popularmente conhecida como guaçatonga ou erva-de-bugre, utilizada na medicina popular no tratamento de transtornos gástricos que nos últimos anos vem despertando interesse na comunidade científica, por suas importantes propriedades com potencial terapêutico como atividade anti-inflamatório, antiofídico, cicatrizante, citotóxica em linhagens de células tumorais e principalmente antiulcerogênica. Neste contexto, uma excelente alternativa para o aprimoramento dos parâmetros biodisponíveis dos extratos vegetais muito utilizada na atualidade é a incorporação destes em sistemas nanotecnológicos de liberação de fármaco para que o produto ativo tenha uma melhor ação. Deste modo, o presente trabalho teve por objetivo avaliar o potencial biológico antibacteriano in vitro do extrato etanólico, extrato aquoso, fração e subfrações das folhas de Casearia sylvestris Swartz, incorporar em um sistema de liberação de fármacos os derivados mais ativos e a partir dos resultados realizar o experimento in vivo contra a cepa ATCC 43504 de H. pylori. Os extratos foram preparados por infusão e maceração. Para as análises biológicas utilizamos a técnica de microdiluição para determinar a concentração inibitória mínima e o biofilme formado. O estudo foi desenvolvido aplicando-se metodologias in vitro e in vivo para elucidar o perfil antibacteriano pretendido, obtendo-se resultados satisfatórios, deixando esse estudo mais interessante, já que a literatura mostra que a C.sylvestris tem perfil anti-ulcerogênico. A partir desses resultados pudemos concluir que os derivados de C. sylvestris apresentaram estatisticamente atividades antibacterianas tanto in vitro como in vivo, sendo que a maioria dos derivados vegetais com exceção dos extratos aquosos, fração 1 e 3 e a subfração 17, tiveram alguma atividade frente ao micro-organismo. Essa atividade provavelmente esta relacionada aos diterpenos clerodânicos que estão em abundância nos derivados da C. sylvestris. A incorporação no sistema nanoestruturado não potencializou a atividade dos derivados vegetais como esperado na maioria dos teste, isto talvez seja pelo fato de a composição dos derivados vegetais e do sistema não serem compatíveis quimicamente. Desde que a literatura mostrou a atividade antiulcerogênica dos derivados vegetais da C. sylvestris, eles podem ser utilizados tanto na cicatrização das lesões como também para a erradicação do H. pylori. / The use of natural products in conventional therapeutics has been gaining highlight in recent years relative to the antimicrobial activity due to the high rate of toxic effects and the excessive growth of the number of multiresistant strains to he conventional antimicrobials used in practice. Among the new therapeutic screenings for bacterial diseases, infections caused by Helicobacter pylori deserve special attention, since they are directly related to severe clinical conditions, such as chronic gastritis, peptic ulcer and gastric cancer. Casearia sylvestris Swartz is a plant popularly known as guaçatonga or erva-de-bugre, used in popular medicine to the treatment of gastric disorders that in recent years has gained the interest of the scientific community due to its important properties with therapeutic potential as an anti-inflammatory, antiofidic, healing, cytotoxicity against tumor cells and mainly antiulcerogenic. In this context, an excellent alternative for the improvement of the bioavailability parameters of the vegetal extracts that is used today is the incorporation of these in nanotechnological systems of drug release so that the active product has a better action. Thus, the aim of this study was to evaluate the in vitro antibacterial potential of the ethanolic extract, aqueous extract, fraction and subfractions of the leaves of Casearia sylvestris Swartz, and incorporate into a drug delivery system the most active derivatives and from these results carry out the in vivo experiment against the H. pylori ATCC strain. The extracts were prepared by infusion and maceration. For the biological analyzes we use the microdilution technique to determine the minimum inhibitory concentration and the formed biofilm. The study was developed applying in vitro and in vivo methodologies to elucidate the antibacterial profile. From the results, we can conclude that the C. sylvestris derivatives showed statistically antibacterial activities both in vitro and in vivo. Most of the vegetal derivatives with the exception of aqueous extracts, fractions 1 and 3 and subfraction 17, had some activity against to the microorganism. This activity is probably related to clerodan diterpenes that are abundant in C. sylvestris derivatives. The incorporation into the nanostructured system did not potentiate the activity of the vegetable derivatives as expected in most tests, this is perhaps due to the fact that the composition of the plant derivatives and the system are not chemically compatible. Since the literature shows an antiulcerogenic activity of C. sylvestris derivatives, they could be used both for wound healing and for H. pylori eradication.

Nos últimos anos, várias espécies de fungos, até então conhecidos como saprófitas do ambiente, têm emergido como importantes patógenos na prática clínica, associados muitas vezes com a resistência aos antimicrobianos disponíveis comercialmente. Dessa forma, o conhecimento de aspectos relacionados à patogenicidade desses micro-organismos, como a formação de biofilme, assim como o perfil de susceptibilidade aos antifúngicos e a novas alternativas terapêuticas faz-se necessário. Uma importante tecnologia neste contexto é a utilização de sistemas nanoestruturados a partir de polímeros biodegradáveis para a veiculação de fármacos. Este trabalho visa verificar em isolados fúngicos emergentes a expressão fenotípica de biofilme através do teste em microplaca de poliestireno e o perfil de susceptibilidade frente a antifúngicos na forma livre e incorporados em sistemas nanoestruturados, através da técnica de microdiluição em caldo. Foram selecionados para o estudo 82 isolados fúngicos potencialmente patogênicos, sendo 26 oriundos do ambiente e 56 procedentes de espécimes clínicos. Quanto à capacidade de formação de biofilme verificou-se que 68 (82,9%) isolados produziram biofilme pelo teste da microplaca, sendo 38 classificados como fortes, 17 como moderados e 13 como fracos produtores. Além disso, observou-se que os isolados clínicos apresentaram maior capacidade de formação de biofilme do que os isolados ambientais. Não houve correlação entre a produção de biofilme e a susceptibilidade aos antifúngicos testados nas células planctônicas. De um modo geral, os fungos foram sensíveis à maioria dos antifúngicos testados neste trabalho. Entretanto, o fluconazol apresentou baixa atividade (CIM≥64μg/mL) para 45% dos isolados avaliados. Com o intuito de investigar o efeito de cetoconazol e de fluconazol associados a nanoestruturas sobre os diferentes fungos apresentados no estudo, também foram desenvolvidas nanocápsulas de poli-ɛ-caprolactona contendo estes fármacos. Análises físico-químicas das nanoestruturas revelaram tamanho médio de partícula variando de 206 nm para as nanocápsulas de cetoconazol (CN) e de 211 nm para as nanocápsulas de fluconazol (FN). Ambas as formulações apresentaram características homogêneas e demonstraram estruturas monodispersas. A eficiência de encapsulação do cetoconazol e do fluconazol nas formulações foi de 86,35 e de 80,5%, respectivamente. Os diversos gêneros investigados parecem se comportar de maneira diferente quando expostos às nanoestruturas dos dois fármacos em estudo, sugerindo que as espécies de Candida poderiam apresentar uma maior susceptibilidade in vitro frente a estas nanoestruturas quando comparadas à forma livre dos antifúngicos em questão. Os resultados obtidos demonstram a potencialidade destas formulações para a veiculação de cetoconazol e fluconazol. Como perspectivas, sugere-se a realização de estudos adicionais para evidenciar o efeito in vitro das nanopartículas sobre os diferentes fungos de importância clínica e ambiental. / In recent years, several fungal species known as environmental saprophytes have emerged as important pathogens in clinical practice, often associated with antimicrobial resistance commercially available. Thus, the knowledge of aspects related to these pathogenic micro-organisms, such as biofilm formation, as well as the profile of susceptibility to antifungal agents and new therapeutic options is necessary. An important technology in this context is the use of nanostructured materials from biodegradable polymers for the placement of drugs. This work aims to examine the emerging fungal isolates in the phenotypic expression of biofilm through the test on polystyrene microplate and the susceptibility profile to antifungals front in the free trade and in the nanostructured systems by the broth microdilution method. In this study, 82 potentially pathogenic fungal isolates were selected, being the 26 from environment originating and the 56 from the clinical specimens. Regarding the ability of biofilm formation was found that 68 (82,9%) isolates produced biofilm by the microplate assay. The isolates were classified as 38 strong, 17 moderate and 13 weak biofilm producers. Moreover, it was noted that clinical isolates showed greater capability for the biofilm formation than the environmental isolates. There was no correlation between the biofilm production and the susceptibility to antifungal agents tested in planktonic cells. In general, the fungi were susceptible of the majority of the antifungal agents tested in this study. However, the fluconazole showed low activity (MIC≥64μg/mL) for 45% of the isolates. In order to investigate the effect of the ketoconazole and the fluconazole associated with nanostructures against different fungi contained in the study, polymeric nanocapsules have also been developed containing these drugs. Physicochemical analyzes showed an average size of nanostructures ranging from 206 nm for the nanocapsules of ketoconazole (CN), and 211 nm for the fluconazole (FN). The formulations showed homogeneous characteristics and demonstrated monodisperse structures. The encapsulation efficiency of ketoconazole and fluconazole in the formulations was 86,35 and 80,5%, respectively. The diverse genera investigated appear to behave differently when exposed to the nanostructures of the two drugs have being studied, suggesting that Candida species could exhibit a greater sensitivity to these nanostructures compared to the free form of antifungal concerned. The results demonstrate the potential of the formulations for the delivery of fluconazole and ketoconazole. As perspectives, we suggest further studies to demonstrate the in vitro effect of the nanoparticles against different fungi from the clinical and the environmental importance.