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Produção e caracterização de celulases secretadas por Streptomyces sp. isolado de processo de compostagem

Salamoni, Sabrina Pinto January 2005 (has links)
Para determinar as variáveis morfogênicas, estruturais e o fluxo de tecidos os tratamentos foram duas intensidades (baixa e moderada) e dois métodos de pastejo (pastejo com lotação contínua e rotacionada). No experimento 1 o bastão graduado apresentou a melhor correlação com a massa de forragem (r2=0,65). No 2 as melhores correlações foram obtidas quando avaliadas as faixas de pós-pastejo para o disco medidor (r2=0,47) e as de pré-pastejo para o bastão graduado (r2=0,36). Para as variáveis morfogênicas e estruturais as intensidades de pastejo foram responsáveis por diferenças na taxa de elongação de folhas (intensidade baixa resultou em maior taxa de elongação) e nas características estruturais (intensidade baixa resultou em menor densidade de perfilhos, maior comprimento e número de folhas vivas). Os métodos de pastejo influenciaram as características morfogênicas (lotação contínua resultou em maior taxa de elongação de folhas, maior taxa de surgimento e tempo de vida das folhas no ciclo de observação I) e estruturais (lotação contínua resultou em maior densidade de perfilhos); bem como foi obtida interação com as intensidades e com os ciclos de avaliação. O fluxo de crescimento (favorecido por lotação rotacionada a baixa intensidade) e de senescência (favorecido por lotação contínua a baixa intensidade) foram afetados pelos tratamentos, enquanto que o fluxo de consumo não foi alterado pelos tratamentos.
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Produção e caracterização de celulases secretadas por Streptomyces sp. isolado de processo de compostagem

Salamoni, Sabrina Pinto January 2005 (has links)
Para determinar as variáveis morfogênicas, estruturais e o fluxo de tecidos os tratamentos foram duas intensidades (baixa e moderada) e dois métodos de pastejo (pastejo com lotação contínua e rotacionada). No experimento 1 o bastão graduado apresentou a melhor correlação com a massa de forragem (r2=0,65). No 2 as melhores correlações foram obtidas quando avaliadas as faixas de pós-pastejo para o disco medidor (r2=0,47) e as de pré-pastejo para o bastão graduado (r2=0,36). Para as variáveis morfogênicas e estruturais as intensidades de pastejo foram responsáveis por diferenças na taxa de elongação de folhas (intensidade baixa resultou em maior taxa de elongação) e nas características estruturais (intensidade baixa resultou em menor densidade de perfilhos, maior comprimento e número de folhas vivas). Os métodos de pastejo influenciaram as características morfogênicas (lotação contínua resultou em maior taxa de elongação de folhas, maior taxa de surgimento e tempo de vida das folhas no ciclo de observação I) e estruturais (lotação contínua resultou em maior densidade de perfilhos); bem como foi obtida interação com as intensidades e com os ciclos de avaliação. O fluxo de crescimento (favorecido por lotação rotacionada a baixa intensidade) e de senescência (favorecido por lotação contínua a baixa intensidade) foram afetados pelos tratamentos, enquanto que o fluxo de consumo não foi alterado pelos tratamentos.
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Análise do gene codificante da enzima Beta-Glucosidase na Levedura Dekkera bruxellensis

Torres, Rochane Regina Neves Baptista 31 January 2012 (has links)
Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-03-13T13:17:33Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Biblioteca.pdf: 708752 bytes, checksum: df7cba1e43069bfc51896d1a153c8993 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T13:17:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Biblioteca.pdf: 708752 bytes, checksum: df7cba1e43069bfc51896d1a153c8993 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / O bagaço da cana-de-açúcar é constituído por celulose, hemicelulose e lignina. A celulose, quando hidrolisada, é transformada em celobiose que por sua vez pode ser hidrolisada em duas moléculas de glicose. A enzima ß-glucosidase é a proteína responsável pela hidrolise de celobiose em glicose. Entretanto, o bagaço é, na maioria das vezes, queimado para a produção de energia elétrica para ser utilizada no processo industrial não sendo utilizado para a produção de etanol. Por ter um crescimento mais rápido do que a levedura Saccharomyces cerevisiae em condições industriais de fermentação alcoólica apresentando uma maior resistências a altas concentrações de etanol, altas temperaturas e baixo pH têm feito da Dekkera bruxellensis alvo de pesquisas e melhoramentos genéticos. O presente trabalho teve como objetivo identificar e analisar in silico o gene codificante da ß-glucosidase no genoma da levedura D. bruxellensis através das ferramentas de bioinformática. Os resultados mostraram que a partir do alinhamento BLASTp, uma seqüência curta da levedura D. bruxellensis apresentou similaridade com seqüências codificantes para a enzima ß-glucosidase de espécies da divisão ascomiceto. A seqüência da espécie Kluyveromyces marxianus obteve o maior percentual de similaridade com a seqüência de D. bruxellensis. Foram identificados no alinhamento múltiplo, através de conhecimento prévio da literatura, os resíduos do sitio ativo da enzima ß-glucosidase presentes na seqüência de D. bruxellensis mostrando ser sítios bastante conservados
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Análise do gene codificante da enzima Beta-Glucosidase na Levedura Dekkera bruxellensis

TORRES, Rochane Regina Neves Baptista January 2012 (has links)
Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-10T16:51:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-RochaneTorres.pdf: 692913 bytes, checksum: 7cd4864091015b6ca287e445f2eb5c7a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T16:51:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-RochaneTorres.pdf: 692913 bytes, checksum: 7cd4864091015b6ca287e445f2eb5c7a (MD5) Previous issue date: 2012 / O bagaço da cana-de-açúcar é constituído por celulose, hemicelulose e lignina. A celulose, quando hidrolisada, é transformada em celobiose que por sua vez pode ser hidrolisada em duas moléculas de glicose. A enzima ß-glucosidase é a proteína responsável pela hidrolise de celobiose em glicose. Entretanto, o bagaço é, na maioria das vezes, queimado para a produção de energia elétrica para ser utilizada no processo industrial não sendo utilizado para a produção de etanol. Por ter um crescimento mais rápido do que a levedura Saccharomyces cerevisiae em condições industriais de fermentação alcoólica apresentando uma maior resistências a altas concentrações de etanol, altas temperaturas e baixo pH têm feito da Dekkera bruxellensis alvo de pesquisas e melhoramentos genéticos. O presente trabalho teve como objetivo identificar e analisar in silico o gene codificante da ß-glucosidase no genoma da levedura D. bruxellensis através das ferramentas de bioinformática. Os resultados mostraram que a partir do alinhamento BLASTp, uma seqüência curta da levedura D. bruxellensis apresentou similaridade com seqüências codificantes para a enzima ß-glucosidase de espécies da divisão ascomiceto. A seqüência da espécie Kluyveromyces marxianus obteve o maior percentual de similaridade com a seqüência de D. bruxellensis. Foram identificados no alinhamento múltiplo, através de conhecimento prévio da literatura, os resíduos do sitio ativo da enzima ß-glucosidase presentes na seqüência de D. bruxellensis mostrando ser sítios bastante conservados. / Bagasse of cane sugar is composed of cellulose, hemicellulose and lignin. Cellulose, when hydrolyzed, is transformed into cellobiose which can be hydrolyzed to two glucose molecules. The enzyme ß-glucosidase is the protein responsible for the hydrolysis of cellobiose to glucose. However, the bagasse is, in most cases, burned to produce electricity to be used in the industrial process and it is not used for ethanol production. Due to have a faster growth than Saccharomyces cerevisiae yeast in industrial fermentation conditions and presenting a greater resistance to high concentrations of ethanol, low pH and high temperatures have made the Dekkera bruxellensis subject of research and genetic manipulations. This study aimed to identify and analyze in silico gene encoding ß-glucosidase in the D. bruxellensis yeast genome through the computational tools of bioinformatics. The results showed that in the blastp alignment, a short sequence of D. bruxellensis yeast showed similarity with sequences coding for the ß-glucosidase enzyme in the ascomycete division species. The Kluyveromyces marxianus sequence had the highest percentage in similarity with D. bruxellensis sequence. The multiple alignment tool was able to identify, using prior knowledge of the literature, the active site residues of the ß-glucosidase enzyme in the sequence of D. bruxellensis. Sites showed to be very conserved.
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Resistência antimicrobiana de Staphylococcus aureus isolados de produtos de origem animal

VASCONCELOS, Cristiane de Melo 31 August 2018 (has links)
Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-10-19T13:53:41Z No. of bitstreams: 1 Cristiane de Melo Vasconcelos.pdf: 745658 bytes, checksum: f6e135c1790e48a3d88b17616bf80d1d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-19T13:53:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiane de Melo Vasconcelos.pdf: 745658 bytes, checksum: f6e135c1790e48a3d88b17616bf80d1d (MD5) Previous issue date: 2018-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Staphylococcus aureus is a commensal microorganism of the skin and mucous membranes of animals and humans and is considered an opportunistic agent responsible for food poisoning. Another threat to public health relates to its antimicrobial resistance capacity, which has been detected in isolated strains of various animal products and is associated with the indiscriminate use of antimicrobial agents in animal production, which warns of the transmission of this microorganism through food. The objective of this study was to investigate the occurrence of antimicrobial resistant Staphylococcus aureus in handmade coalho cheese, beef ground and pork and chicken meat. From each animal product, 3 market samples were acquired in Pernambuco, Brazil, which were submitted to microbiological analysis for coagulase positive Staphylococcus and S. aureus counts. S. aureus strains were isolated, submitted to the antimicrobial susceptibility test to nine antimicrobials used in the human and veterinary clinics, and the antimicrobial multiresistance was then evaluated and the Multiple Antimicrobial Resistance (MAR) index was calculated. Contamination in all types of products was verified by S. coagulase positive, with an equal count for S. aureus, ranging from 2.4 x 103 CFU/g in the pork meat to 2.2 x 106 CFU/g in chicken meat. Among the isolated strains, 37.5% (45/120) were confirmed as S. aureus, with the highest occurrence in pork with 63% (19/45) and handmade coalho cheese with 37% (14/45), followed by ground beef with 33% (10/45) and chicken meat with 6.7% (2/45). Regarding antimicrobial resistance, pork meat, followed by handmade coalho cheese and chicken meat had the highest number of resistant strains. There was a higher resistance to tetracycline, with 33.3% (15/45) of S. aureus strains, followed by penicillin G with 24.4% (11/45), erythromycin with 8.8% (4/45), clindamycin with 6.6% (3/45) and cefoxitin with 2.2% (1/45), with 4 (8.8%) strains considered multidrug-resistant (MDR), 3 (6.6%) MLSc (constitutive resistance to macrolide, lincosamide and streptogramin), 1 (2.2%) MRSA (methicillin-resistant S. aureus) and 17 (37.7%) from potential sources of high-risk contamination, with MAR index ≥ 0.2. There was no resistance to gentamicin, ciprofloxacin, chloramphenicol and sulfazotrim. It is concluded that the products of animal origin analyzed showed contamination by S. aureus and may be reservoirs of strains resistant to antimicrobials, representing a potential risk to the health of the population. / Staphylococcus aureus é um microrganismo comensal da pele e de membranas mucosas de animais e de seres humanos, sendo considerado um agente oportunista e responsável por intoxicação alimentar. Uma outra ameaça à saúde pública relaciona-se à sua capacidade de resistência antimicrobiana, que tem sido detectada em cepas isoladas de diversos produtos de origem animal e associa-se ao uso indiscriminado de agentes antimicrobianos na produção animal, o que alerta sobre o monitoramento da transmissão deste microrganismo através de alimentos. Objetivou-se com o presente estudo pesquisar a ocorrência de Staphylococcus aureus resistentes a antimicrobianos em queijo de coalho artesanal, carne moída bovina e carnes suína e de frango. De cada produto de origem animal, foram adquiridas 3 amostras de minimercados em Pernambuco, Brasil, que foram submetidas à análise microbiológica para contagem de Staphylococcus coagulase positiva e de S. aureus. Cepas de S. aureus foram isoladas, submetidas ao teste de susceptibilidade antimicrobiana a nove antimicrobianos utilizados nas clínicas humana e veterinária e, posteriormente, avaliou-se a multirresistência antimicrobiana e calculou-se o índice de Múltipla Resistência Antimicrobiana (MAR). Verificou-se contaminação em todos os tipos de produtos por S. coagulase positiva, com igual contagem para S. aureus, variando de 2,4 x 103 UFC/g na carne suína a 2,2 x 106 UFC/g na carne de frango. Entre as cepas isoladas, 37,5% (45/120) foram confirmadas como S. aureus, em maior ocorrência na carne suína com 63% (19/45) e no queijo de coalho artesanal com 37% (14/45), seguidos da carne moída bovina com 33% (10/45) e da carne de frango com 6,7% (2/45). Quanto à resistência antimicrobiana, a carne suína, seguida do queijo de coalho e da carne de frango apresentaram o maior número de cepas resistentes. Houve maior resistência à tetraciclina, com 33,3% (15/45) das cepas de S. aureus, seguida por penicilina G com 24,4% (11/45), eritromicina com 8,8% (4/45), clindamicina com 6,6% (3/45) e cefoxitina com 2,2% (1/45), sendo 4 (8,8%) cepas consideradas multidrogarresistentes (MDR), 3 (6,6%) MLSc (resistência constitutiva aos macrolídeos, lincosamidas e estreptogramina), 1 (2,2%) MRSA (S. aureus resistente à meticilina) e 17 (37,7%) provenientes de potenciais fontes de contaminação de alto risco, com índice MAR ≥ 0,2. Não houve resistência à gentamicina, ciprofloxacina, cloranfenicol e sulfazotrim. Conclui-se que os produtos de origem animal analisados apresentaram contaminação por S. aureus e podem ser reservatórios de cepas resistentes a antimicrobianos, representando um potencial risco à saúde da população.
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Perfil proteômico de Acinetobacter junii cultivada em petróleo e diesel

Souza Neto, Júlio Nino de 25 February 2015 (has links)
Submitted by Gábia Leite (gabya.leite@gmail.com) on 2016-06-24T13:30:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação -Júlio Nino de Souza Neto.pdf: 35170831 bytes, checksum: d166c9fe0bd603a43f8d552548c23421 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-07-05T15:20:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação -Júlio Nino de Souza Neto.pdf: 35170831 bytes, checksum: d166c9fe0bd603a43f8d552548c23421 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-07-05T15:26:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação -Júlio Nino de Souza Neto.pdf: 35170831 bytes, checksum: d166c9fe0bd603a43f8d552548c23421 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T15:26:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação -Júlio Nino de Souza Neto.pdf: 35170831 bytes, checksum: d166c9fe0bd603a43f8d552548c23421 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Natural environment has suffered high accumulations of pollutants which not only affect the soil, groundwater, rivers, lakes, water courses and air, but also human health due to forming of unhealthy conditions. Among the many effects when crude oil and derivates spill, the released xenobiotics to environment make worrisome because of its enviromental persistence and harmful effects to life. One solution to this problem is bioremediation, a tool that uses microorganisms for biochemical degradation of these compounds, transforming them into less or non-toxic substances. In this context, a previous study isolated the bacteria A. junii SB132 from macrophytes of the Negro River bank located by the port of Manaus and confirmed its identity by morphology and 16S gene sequencing. Biodegradation tests performed in laboratory have confirmed the ability of this bacteria to degrade oil and diesel fuel. Therefore, the aim of this research was to identify proteins of A. junii SB132 related in degradation pathways of the crude oil and diesel fuel. Ribosomal proteins, phenotypic, bacterial morphology, sensitivity profile to antibiotics and plasmid profile analysis were obtained. Proteins extracted from bacterial grown in crude oil, diesel fuel and yeast extract, 1.3% respectively, were used for 2-DE gels and similar and differential proteins were identified by using mass spectrometry and database at NCBI. The identity bacterial was confirmed and the plasmid profile was taken. These data revealed that the bacteria studied in this research is the really A. junii specie and that this had plasmids with size ranging 94.000pb to 5.000pb. Identified putative proteins were related to cellular processes, such as degradation of xenobiotic compounds, biosynthesis of molecules, DNA repair and protection, membrane transport proteins, cell signaling and transcription factors. / O ambiente natural vem sofrendo elevados acúmulos de poluentes os quais não somente prejudicam o solo, as águas subterrâneas, rios, lagos, vias pluviais e o ar, mas também a saúde humana em virtude da formação de condições insalubres. Dentre os muitos efeitos, os derramamentos de petróleo e derivados acumulam no ambiente compostos xenobióticos que se tornam preocupantes pela sua persistência e seus efeitos nocivos à vida. Uma das soluções para esse problema é a biorremediação, uma ferramenta que utiliza microrganismos para degradação bioquímica desses compostos, transformando-os em substâncias menos, ou não tóxicas. Neste contexto, um estudo prévio isolou a bactéria A. junii SB132 de macrófitas do Rio Negro no porto de Manaus e confirmou sua identificação por morfologia e sequenciamento do gene 16S. Testes de biodegradação realizados em laboratório confirmaram a capacidade de esta bactéria degradar petróleo e diesel. O objetivo desta pesquisa foi identificar proteínas de A. junii SB132 envolvidas com vias de degradação de petróleo e diesel. Foram feitas análises de identificação usando proteínas ribossomais e análises fenotípicas como morfologia da bacteriana, perfil de sensibilidade a antibióticos e perfil plasmidial. A partir das proteínas extraídas de bactérias cultivadas em petróleo bruto 1,3%, diesel 1,3% e extrato de levedura 1,3%, foram feitos géis 2-DE e proteínas de spots similares e diferenciais foram identificadas por análise em espectrometria de massa e banco de dados no NCBI. A confirmação da identidade bacteriana foi obtida, bem como o perfil plasmidial. Estes dados revelaram que de fato a bactéria estudada nesta pesquisa é a A. junii e que esta possui plasmídeos com tamanhos de variam de 94.000pb a 5.000pb. As proteínas putativas identificadas estavam relacionadas a processos celulares como degradação de compostos xenobióticos, biossíntese de moléculas, reparo e proteção do DNA, proteínas transportadoras de membrana, sinalização celular e fatores de transcrição.
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Avaliação da qualidade microbiológica de alimentos com a utilização de metodologias convencionais e do sistema simplate. / Utilization of conventional methodologies and simplate system for microbiological quality evaluation of foods.

Silva, Maria Cecília da 04 July 2002 (has links)
Com a finalidade de se avaliar a correlação entre o sistema SimPlate e metodologias convencionais na análise microbiológica de alimentos, dezoito alimentos (nove de origem vegetal e nove de origem animal) foram analisados para contagem total de mesófilos aeróbios, bolores e leveduras e coliformes totais e fecais. Os resultados das análises microbiológicas foram comparados através do teste F, tendo havido diferença significativa (p<0,05) entre os métodos. As médias foram submetidas ao teste t-Student (p<0,05); para a contagem total de mesófilos aeróbios apenas em dois dos quinze alimentos considerados, maçã e beterraba, as metodologias convencional e SimPlate não diferiram entre si; para bolores e leveduras as metodologias não diferiram em quatro dos treze alimentos considerados, lingüiça, peixe, cheiro-verde e beterraba, e para coliformes totais, em seis dos doze alimentos considerados, carne suína, frango, lingüiça, leite cru, pêra e tomate. Uma análise de regressão dos dados mostrou boa correlação entre os dados obtidos para coliformes totais, pela metodologia dos tubos múltiplos e o SimPlate (0,88) e os dados de mesófilos aeróbios, obtidos pelo PCA e o SimPlate (0,80) e baixa correlação entre os dados obtidos na determinação de bolores e leveduras pelo BDA e o SimPlate (0,69). / In order to evaluate correlation among SimPlate system and conventional methods for food microbiological analysis, eighteen foods (nine from vegetable origin and nine from animal origin) were analyzed for mesophilic aerobic, yeasts and molds, total coliforms and fecal coliforms. Results of the three analysis were compared and significant differences (p<0,05) occurred among the majority of foods. For mesophilic aerobic counts, between the methodologies, PCA and SimPlate, difference were not significant in two of fifteen considered foods, apple and beetroot; for yeasts and molds, using acidify PDA and SimPlate, difference were not significant in four of thirteen considered foods, mixed sausage, fish, parsley and Welsh onion and beetroot; for total coliforms, using three-tube method and SimPlate, difference were not significant in six of twelve considered foods, raw pork, chicken, mixed sausage, raw milk, pear and tomato. Regression analysis of data showed correlation coefficients like, 0,88 for three-tube method and SimPlate; 0,80 between PCA and SimPlate and 0,69, between acidify PDA and SimPlate.
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Avaliação da qualidade microbiológica de alimentos com a utilização de metodologias convencionais e do sistema simplate. / Utilization of conventional methodologies and simplate system for microbiological quality evaluation of foods.

Maria Cecília da Silva 04 July 2002 (has links)
Com a finalidade de se avaliar a correlação entre o sistema SimPlate e metodologias convencionais na análise microbiológica de alimentos, dezoito alimentos (nove de origem vegetal e nove de origem animal) foram analisados para contagem total de mesófilos aeróbios, bolores e leveduras e coliformes totais e fecais. Os resultados das análises microbiológicas foram comparados através do teste F, tendo havido diferença significativa (p<0,05) entre os métodos. As médias foram submetidas ao teste t-Student (p<0,05); para a contagem total de mesófilos aeróbios apenas em dois dos quinze alimentos considerados, maçã e beterraba, as metodologias convencional e SimPlate não diferiram entre si; para bolores e leveduras as metodologias não diferiram em quatro dos treze alimentos considerados, lingüiça, peixe, cheiro-verde e beterraba, e para coliformes totais, em seis dos doze alimentos considerados, carne suína, frango, lingüiça, leite cru, pêra e tomate. Uma análise de regressão dos dados mostrou boa correlação entre os dados obtidos para coliformes totais, pela metodologia dos tubos múltiplos e o SimPlate (0,88) e os dados de mesófilos aeróbios, obtidos pelo PCA e o SimPlate (0,80) e baixa correlação entre os dados obtidos na determinação de bolores e leveduras pelo BDA e o SimPlate (0,69). / In order to evaluate correlation among SimPlate system and conventional methods for food microbiological analysis, eighteen foods (nine from vegetable origin and nine from animal origin) were analyzed for mesophilic aerobic, yeasts and molds, total coliforms and fecal coliforms. Results of the three analysis were compared and significant differences (p<0,05) occurred among the majority of foods. For mesophilic aerobic counts, between the methodologies, PCA and SimPlate, difference were not significant in two of fifteen considered foods, apple and beetroot; for yeasts and molds, using acidify PDA and SimPlate, difference were not significant in four of thirteen considered foods, mixed sausage, fish, parsley and Welsh onion and beetroot; for total coliforms, using three-tube method and SimPlate, difference were not significant in six of twelve considered foods, raw pork, chicken, mixed sausage, raw milk, pear and tomato. Regression analysis of data showed correlation coefficients like, 0,88 for three-tube method and SimPlate; 0,80 between PCA and SimPlate and 0,69, between acidify PDA and SimPlate.
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Modulation of rhizosphere - associated microbiota by insect pest: a holobiont relationship / Modulação da microbiota - associada à rizosfera, por pragas de insetos: uma relação holobionte

Mondin, Márcia Leite 05 July 2019 (has links)
Currently, we observe a growing number of researches that seek to unravel the causes, effects and possible biotechnological uses of the rhizosphere microbiota communities modulation in the complex interactions between plants and soil. We also know that the attack of herbivorous insects is a factor of considerable damage to agriculture and that has well established evolutionary relationships in natural systems. The present work tried to test some hypotheses about the direct connection between the rhizosphere microbiota and the insect pest attack. Beginning from the point that plants have well- established defense mechanisms against insects, it was verified that the rhizosphere microbiota seems to contribute actively to this system and thus to establish holobionte relationships. We had broad access to communities of the fungi and bacterial domain, through the new generation sequencing for rRNA 16S gene, region V3, and intergenic region ITS amplicons on soil, semi-soil and, insect gut samples from pest insects with general behavior (Order: Lepidoptera). Our results from the data analysis to Illumina Miseq sequencing outputs and, additional experiments, resulted in three articles presented here in chapters. In the first chapter, we discuss the modulating effect from the pest insect attack (Spodoptera frugiperda), on the Arabidopsis thaliana microbiota rhizosphere, for different physiological plant\'s stages. As a result, it was possible to discuss the differences between the modulation in the structure of bacterial communities and the modulation in the structure of the fungal communities after the attack of herbivorous insects. In the second chapter, we highlight the difference in the modulation of the bacterial community structure for different plant families. We used seedlings of Arabidopsis thaliana, Zea mays Sh2, Faseolus vulgaris, Solano lycopersicum and, Beta vulgaris exposed to the attack of Trichoplusia ni for one week. The rhizosphere microbiota analysis for each host plant groups, suggests that the influence of the plant species should be considered on the bacteria rhizosphere communities modulation after the insect attack. Besides, specific plant species may be less susceptible to rhizosphere modulation by insect attack. Another highlight was the microbiota rhizosphere effect in the biomass loss for plants sown on transplanted semi-soil. Based on the phenotypic data, we suggest the rhizosphere microbiota modulation after the herbivore may be involved in the plant biomass inhibition on the next seedlings generation. Finally, in the third chapter, we explore the Trichoplusia ni gut microbiota modulation through the microbial load obtained in the restricted feeding. The T. ni larvae from the same original population were divided into three populations. Each population was fed individually and restrictively with leaves of A. thaliana, S. lycopersicum or artificial caloric diet. We accessed the gut microbiota in T. ni after three generations of restricted feeding, and we verified that the gut microbiota in caterpillars of general behavior, could be altered due the obtaining of microbial load through alimentary diet. This modulation may be related to the degradation of metabolites that may be harmful to insect homeostasis. The gut microbiota of each population can also directly influence the food preferences of successive generations. In summary, all our results presented in each one of the chapters are important points that can help to clarify the complex relationships between plants/insects/microorganisms and, contributing to a better understanding of this holobiont system. / Atualmente observamos um crescente número de pesquisas que buscam desvendar as causas, os efeitos e as possíveis utilizações biotecnológicas da modulação de comunidades da microbiota de rizosfera nas interações complexas entre plantas e solo. Sabemos também que o ataque de insetos herbívoros é um fator de considerável prejuízo para a agricultura e que tem relações evolutivas bem estabelecidas em sistemas naturais. O presente trabalho procurou testar algumas hipóteses a cerca da relação direta entre a microbiota de rizosfera e o ataque de insetos praga. Partindo do ponto de que plantas possuem mecanismos de defesa contra insetos, bem conhecidos, foi verificado que a microbiota de rizosfera parece contribuir ativamente para esse sistema, e assim estabelecer relações holobiontes. Tivemos um profundo acesso á comunidades do domínio bactéria e fungi, através da tecnologia de sequenciamento de nova geração para amplicons do gene RNAr 16S, região V3 e região intergênica ITS em amostras de solo, semi- solo e intestino de insetos praga (Ordem: Lepidoptera) de comportamento generalista. Nossos resultados, resultaram em três artigos aqui apresentados em capítulos. No primeiro capítulo é discutido o efeito modulador da herbívora da praga agrícola Spodoptera frugiperda na microbiota de rizosfera de Arabidopsis thaliana em diferentes estágios fisiológicos da planta. Como resultados foi possível perceber que o efeito na modulação da estrutura de comunidades de bactérias é diferente do efeito na modulação de comunidades de fungos após o ataque de insetos herbívoros. Os efeitos são diferentes tanto em abundância relativa quando na diversidade para cada um dos domínios de microrganismos estudados. No segundo capítulo destacamos a diferença na modulação da estrutura de comunidades de bactérias para diferentes famílias de plantas. Utilizamos mudas de A. thaliana, Zea mays Sh2, Phaseolus vulgaris, Solanum lycopersicum e Beta vulgaris, expostas ao ataque de Trichoplusia ni durante uma semana. As análises da microbiota de rizosfera de cada um dos grupos de plantas hospedeiras, sugere que a influência da espécie vegetal deve ser considerada na modulação das comunidades de bactérias da rizosfera após a herbívora. Adicionalmente, determinadas espécies de plantas podem ser menos susceptíveis a modulação da rizosfera pela herbívora. Outro destaque foi o efeito da modulação da microbiota de rizosfera, na perda de biomassa de plantas semeadas em semi-solo transplantado. Com base nos dados fenotípicos das diferentes espécies de plantas avaliadas, sugerimos que a modulação da microbiota de rizosfera após a herbívora, pode estar envolvida na inibição da produção de biomassa vegetal na geração seguinte de plântulas. Por fim, no terceiro capítulo exploramos a modulação na microbiota no intestino de larvas de Trichoplusia ni através da carga microbiana obtida na alimentação restrita. Larvas T. ni de mesma origem foram divididas em três populações. Cada população foi alimentada de forma específica e restrita com folhas de A. thaliana ou S. lycopersicum ou dieta artificial calórica. Acessamos a microbiota do intestino das larvas, após três gerações de alimentação restrita e verificamos que a microbiota intestinal em lagartas de comportamento generalista, pode ser alterada devido à obtenção de carga microbiana por via alimentar. Essa modulação pode estar relacionada a degradação de metabólitos que podem ser prejudiciais à homeostase dos insetos. A microbiota intestinal de cada população também pode influenciar diretamente as preferências alimentares de gerações sucessivas. Em resumo, todos os nossos resultados, apresentados em cada um dos capítulos a seguir, são chaves no conhecimento e podem ajudar a clarificar as complexas relações entre plantas, insetos e microrganismos. Contribuindo assim para um maior entendimento desse tipo de sistema holobionte.
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Impacto do lodo de esgoto na comunidade bacteriana do solo: avaliação por microarranjo de DNA

Val-Moraes, Silvana Pompéia do [UNESP] 31 March 2008 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-31Bitstream added on 2014-06-13T18:44:29Z : No. of bitstreams: 1 moraes_spv_dr_jabo.pdf: 948711 bytes, checksum: 46e44d8c0ba3f6d9eccf238a5207cfc2 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O lodo de esgoto tem sido utilizado como fertilizante orgânico em substituição ao fertilizante químico. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de lodo de esgoto, oriundo da Estação de Tratamento de Barueri em São Paulo, sobre a população bacteriana do solo através da análise de microarranjo de DNA. Os tratamentos foram sem adição e com adição de lodo de esgoto, sendo este adicionado em quantidades equivalentes a uma e a oito vezes a dose de Nitrogênio mineral recomendada para o cultivo de milho. As amostras de solo foram coletadas no Campo Experimental da Embrapa Meio Ambiente, em Jaguariúna (SP), em áreas que já vem sofrendo aplicações de lodo similar por 5 anos. As coletas foram feitas seis dias antes da aplicação do lodo, época referente ao final da primavera; e 67 dias após a aplicação do lodo, época referente ao final do verão e antecedente ao plantio do milho. Para a análise da comunidade bacteriana foi construído um microarranjo ambiental em lâmina de vidro contendo 1560 seqüências parciais do gene 16S rRNA de procariotos. Avaliaram-se também os teores totais P, Cu, Fe, Mn, Zn e S acumulados nos solos após a aplicação do lodo. A técnica de microarranjo foi eficiente para avaliar as alterações na comunidade bacteriana. E pode ser observada uma grande variação na população de bactéria, principalmente nos solos tratados com altas doses de lodo. / Sewage sludge has been used as organic fertilizers to replace in substitution chemical fertilizer. The objective of this study was to evaluate the effect of sewage sludge from the Station of Treatment of Barueri São Paulo State on the structure of the bacterial communities through DNA microarray analysis. The treatments were without addition sewage sludge and an N supply to one and eight times the dose of N recommended for mineral fertilization in maize. Soil samples were collected on Experimental Area of the Embrapa Environment, in Jaguariúna, São Paulo State, at the end of the spring, six days before sewage sludge application and at the end of the summer, 67 days after the treatment applications), before the maize plantation. In order to analyze bacterial communities it was constructed a glass slide microarray environmental with 1.560 partial sequences of the gene 16S rRNA from prokaryotes that have been the majority different and from bacteria. The total contents of Cu, Mn, Ni, Pb and Zn accumulated in the soil after sewage sludge application was evaluated through out chemical analyses. Great variation in the bacterial population was found, mainly in the soil treated with the higher dose of sewage sludge. The DNA microarray technique was efficient to evaluate the alterations on the bacterial communities.

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