Orientador: Ana Maria Lima de Azevedo Espin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T06:25:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Geurgas_SilviaRodrigues_M.pdf: 3311301 bytes, checksum: de822dddb6c7d65ed9e0653e0c4ffece (MD5) Previous issue date: 1998 / Mestrado

Sítios arqueológicos, polimorfismos genéticos clássicos e marcadores moleculares (estes em menor quantidade) foram empregados nos últimos anos para o desenvolvimento de modelos de povoamento e investigação de rotas migratórias percorridas pelos primeiros habitantes do continente sul-americano. Apesar destes esforços, muitas incertezas relacionadas aos movimentos populacionais realizados pelos ancestrais dos índios contemporâneos na América do Sul ainda permanecem. Com o objetivo de estudar a estrutura populacional dos indígenas da Amazônia e contribuir para o melhor entendimento do povoamento deste continente, polimorfismos que definem os haplogrupos fundadores do DNA mitocondrial nativo-americano foram analisados em 308 indígenas pertencentes a 16 aldeias de 7 tribos da região central da Amazônia. A posição central ocupada por estas tribos no continente sul-americano faz com que sejam relevantes nas tentativas de reconstrução dos movimentos populacionais sul-americanos. Nesta região, existe particular interesse pela estrutura genética da tribo Tikúna, inicialmente tida como enigmática por se preservar como uma das únicas grandes tribos pouco miscigenadas da Amazônia central, e do grupo lingüístico Pano, que embora se distribua por grande extensão territorial, apresenta homogeneidades étnica, lingüística e cultural notáveis, razão pela qual as populações (tribos) deste grupo são consideradas como parte de uma mesma tribo. Oito aldeias Tikúna e seis aldeias de quatro tribos Pano (Katukina, Kaxináwa, Marúbo e Yaminawa) fazem parte deste estudo. Os resultados indicam que constituem populações realmente pouco miscigenadas, sendo a mistura inter-étnica feminina praticamente desprezível (0,32%). Foi encontrada heterogeneidade entre aldeias Tikúna, sendo observados dois grupos altamente homogêneos que diferem consideravelmente entre si. Em relação aos Pano, a homogeneidade lingüística e cultural deste grupo não se reflete em sua estrutura genética, visto que os níveis de heterogeneidade entre populações Pano são equivalentes ou até mesmo superiores aos observados entre populações de afiliação lingüística distintas. No geral, as mulheres indígenas da região central da Amazônia se apresentaram mais heterogêneas do que os homens, o que pode ser interpretado como maiores taxas migratórias femininas. Por meio de análises continentais foi observado que tanto a afiliação lingüística quanto a geografia exercem forte influência no padrão de variabilidade genética nas Américas. Quando apenas populações ameríndias são consideradas, a heterogeneidade é maior entre populações sul-americanas do que norte-americanas, o que estaria relacionado com maior atuação da deriva genética neste continente. Os dados corroboram a hipótese de que uma onda migratória principal seria responsável pelo povoamento das Américas. Ao longo deste movimento migratório, múltiplos efeitos do fundador teriam ocorrido até alcançar a América do Sul. Ao entrar na América do Sul, tal onda teria assumido rotas distintas direcionadas ao norte (acompanhando a costa Atlântica em direção ao leste do continente), ao sul (acompanhando a costa do Oceano Pacífico) e, possivelmente, em direção ao centro da Amazônia. Visto que as principais rotas migratórias foram necessariamente percorridas por membros de ambos os sexos, a análise de marcadores patrilineares seria pertinente para se testar esta rota em direção ao centro da Amazônia, bem como as duas rotas clássicas anteriormente propostas e aqui corroboradas. / Archeological sites, classical polymorphisms and molecular markers (in smaller amount) were employed during the last years to develop models regarding peopling and to investigate the routes followed by the first inhabitants of South America. In spite of these efforts, a great amount of uncertainties related to the populational movements performed by the ancestors of current Amerindians from South America still remains. Aiming to study the population structure of the indigenous people from Amazon and to contribute to a better understanding regarding South America peopling, polymorphisms defining the mitochondrial DNA founder haplogroups of Native-Americans were studied in 308 Amerindians pertaining to 16 villages of seven tribes from the central part of Amazon. The central position occupied by these tribes in South-American geography renders them special interest for attempts to reCOJ:\'lstruct the populational movements in this continent. In this central region, there is particular interest in the genetic structure of the Tikuna tribe, initially considered as an enigmatic tribe due to their preservation as one ofthe very few large and relatively pure tribes of Central Amazon. There is also interest in the Pano (linguistic) group that, in spite of being distributed through a really large area, still presents notable ethnic, Jinguistic and cultural homogeneities, which is the reason why the various populations (tribes) are considered as samples of a single tribe. Eight Tikuna villages along with six villages from four Pano tribes (Katukina, Kaxinawa, Marubo e Yaminawa) are part of this research. The results obtained indicate that the populations analyzed are actually weakly admixed, with an almost negligible female inter-ethnic admixture (0.32%). Heterogeneity was found among the Tikuna villages, identified in the form of two highly homogeneous groups that are remarkably different from each other. Regarding the Pano, the linguistic and cultural homogeneity is not reflected in this group\'s genetic structure, as can be seen by the high levels of heterogeneity found between the Pano populations, equal to or greater than the observed between other populations belonging to different languages. Overall, indigenous women from central Amazon are more structured than man, which can be interpreted as a higher female migration rate. Continental analysis revealed that both language and geography exert strong influence over the genetic diversity pattern found in America. When only Am~rindian populations are considered, it can be observed a higher level of heterogeneity in South America than in North America, which could be related to an increase in genetic drift in the former. Presented data corroborate the hypothesis of one major migration being responsible for America peopling. Multiple founder effects could have occurred along with this migratory movement until reaching South America. Following the entrance in this continent, such wave could have been split into different routes pointing to the north of part of South America (following the Atlantic Coast to the f\'astern part of the continent), to the south (along with the Pacific Coast) and possibly to the central part of Amazon. As long as the major migratory routes were essentially followed by members of both genders, the analysis of patrilinear markers would be pertinent to confirm or not such route pointing to the Central Amazon, as well as the two classical routes here corroborated.

Submitted by LUÍS LENIN VICENTE PEREIRA null (luislenin@gmail.com) on 2017-03-02T15:07:34Z No. of bitstreams: 1 Tese Luis Lenin Vicente Pereira.pdf: 2894913 bytes, checksum: 01d77fed0e0eb6b5cfb7979e52829667 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-08T13:17:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_llv_dr_sjrp.pdf: 2894913 bytes, checksum: 01d77fed0e0eb6b5cfb7979e52829667 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-08T13:17:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_llv_dr_sjrp.pdf: 2894913 bytes, checksum: 01d77fed0e0eb6b5cfb7979e52829667 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A subordem Heteroptera possui sete infraordens com aproximadamente 80 famílias. A maioria ocorre em todos os continentes (exceto Antártica) e algumas ilhas. Além dos Heteroptera terrestres, há os aquáticos e semi-aquáticos que são amplamente distribuídos, e surpreendem por sua capacidade de habitar uma extraordinária variedade de ecossistemas, sendo encontrados em habitats de água doce e marinho, e variada faixa de altitude entre 0 e 4.700 m. Estudos sobre aspectos ultraestruturais da espermatogênese e, especificamente, a estrutura do espermatozoide em Heteroptera ainda são escassos, por este motivo o objetivo do presente estudo foi o de analisá-los, por meio de cortes semifinos corados com azul de toluidina ou impregnados por íons prata, e cortes ultra-finos analisados em microscopia eletrônica de transmissão, utilizando testículos de machos adultos das famílias Belostomatidae, Gelastocoridae, Gerridae, Mesoveliidae, Notonectidae e Veliidae. Após a análise ultraestrutural da espermatogênese foi possível determinar que o padrão flagelar do axonema é de 9+9+2 para todas as espécies analisadas sendo, portanto, o padrão para essa subordem, as mitocôndrias durante a espermatogênese assumem diferentes morfologias, sendo que inicialmente as mitocôndrias se unem formando o complexo mitocondrial e, posteriormente, se divide em dois derivados mitocondriais que estão posicionados bilateralmente em relação ao axonema. Os derivados mitocondriais apresentaram tamanhos diferentes para as espécies B. amnigenus (Notonectidae) e R. c. crassifemur (Gerridae) e para as demais espécies o tamanho foi semelhante. As células germinativas possuem em seu citoplasma o acúmulo de um material denominado corpo cromatóide estando localizado próximo ao núcleo. Com relação ao comportamento nucleolar da espécie Martarega brasiliensis foi observado de um a quatro corpúsculos nucleolares em células de Prófase I comprovando uma grande atividade sintética das células nessa fase da divisão celular. Células em Metáfase I apresentaram regiões organizadoras nucleolares na região telomérica de um dos autossomos. Ainda, nessa espécie, foi possível observar, em Anáfase I, vários corpúsculos nucleolares persistindo até a fase de Telófase I. Todas as ultraestruturas descritas nas espécies analisadas foram semelhantes às descritas na literatura para Heteroptera, corroborando as características sinapomórficas dessa subordem sendo elas: a) a presença de duas pontes que ligam o material intertubular do axonema flagelar às cisternas achatadas que aderem aos lados internos dos derivados mitocondriais; b) padrão flagelar do axonema de 9+9+2 e c) ausência de corpos acessórios. / The suborder Heteroptera has seven infraorders with approximately 80 families. Most occur in all continents, except Antarctica and some islands. In addition to terrestrial Heteroptera, there are also widely distributed aquatic and semi-aquatic species. This suborder have adapted to live in an extraordinary variety of ecosystems as freshwater and marine habitats and at altitudes ranging from 0 m to 4,700 m. The research concerning the ultrastructural aspects of spermatogenesis is a large and growing field of study, however, in the case of Heteroptera, research is still scarce. For this reason, the aim of this study was to analyze the ultrastructures and spermatogenesis through semi-thin sections stained with toluidine blue or silver ions (Ag-NOR) and ultrathin sections examined in transmission electron microscopy, using testes of adult males ofthe following families: Belostomatidae, Gelastocoridae, Gerridae, Mesoveliidae, Notonectidae and Veliidae. After ultrastructural analysis of spermatogenesis, it was possible to determine that the flagellar pattern of the axoneme is 9+9+2 for all species, being therefore, the pattern for this suborder. As spermatogenesis progresses, the mitochondria begins to cluster and concentrate on only one side of the cell. Then, the mitochondria combine to form a single mitochondrial complex, which subsequently divides into two mitochondrial derivatives. They are positioned on opposite sides of the axoneme. The mitochondrial derivatives presented different sizes for the species B. amnigenus (Notonectidae) and R. c. crassifemur (Gerridae) and for the other species the size was similar. The germ cells have in their cytoplasm the accumulation of a material denominated the chromatoid body, being located near the nucleus. Regarding the nucleolar behavior, M. brasiliensis showed nucleus in prophase I composed by the nucleolus and nucleolar corpuscles that varied from one to four, emphasizing that this insect has great synthetic activity during meiosis. The analysis of cells in metaphase I, showed that M. brasiliensis presents nucleolar organizing region (NOR) in at least one autosome. Furthermore, was not observed the phenomenon of nucleolar persistence. All the ultrastructures described in the analyzed species were similar to those described in the literature for Heteroptera, corroborating the synapomorphic characteristics of this suborder, being them: a) two opposite bridges in the axoneme connect the flattened cisterns adherent to the internal side of each mitochondrial derivative to the intertubular material; b) flagellar pattern of the axoneme of 9+9+2; c) accessory bodies are absent all along the flagellum.

A análise do mtDNA vem sendo empregada, recentemente, em Ciência Forense, para identificação de indivíduos e resolução de casos criminais. Também vem sendo utilizada em estudos de genética de populações contribuindo com processos relacionados com o grau de miscigenação dos povos e com a ocupação dos diferentes continentes por populações humanas. O DNA mitocondrial está presente em inúmeras cópias por célula, é de origem materna e não sofre processos de recombinação, o que faz com que essa molécula seja uma poderosa ferramenta nesta área. A análise por mtDNA só é recomendada quando não existe mais fonte de DNA nuclear, ou quando este se encontra altamente degradado, como em amostras forenses. Um dos problemas encontrados é a interferência de artefatos durante as etapas pré e pós sequenciamento, na qual pode se obter uma seqüência de má qualidade. O presente estudo comparou e otimizou dez métodos de purificação de DNA mitocondrial, para amostras de restos mortais e in vivo, nas etapas pré e pós sequenciamento. A metodologia empregada consistiu em extrair o DNA da amostra biológica, amplificar por PCR, seqüenciar as referidas regiões do mtDNA das amostras selecionadas e analisar após eletroforese capilar. A enzima colagenase foi testada com o objetivo de avaliar sua eficiência na etapa de extração do DNA. Interligado a esta etapa, outro objetivo foi avaliar o grau de polimorfismo das regiões HVS-I e HVS-II do mtDNA em amostras da população do estado do Rio de Janeiro como forma de entender o fluxo gênico associado à formação da nossa população. Como conclusão, os melhores métodos de purificação utilizados foram o Centricon, seguido da purificação dos produtos amplificados pela resina da Amershan e dos produtos da reação de sequenciamento pela resina Sephadex. Houve baixa eficiência da enzima colagenase, indicando a presença de possíveis inibidores. Em relação ao banco de dados, foram encontrados 95 polimorfismos distintos na região HVS-I e 52 na região HVS-II. O polimorfismo mais freqüente na região HVS-I foi 16223 (74,5%), enquanto que na região HVS-II foi o 263 (60%). Foram encontrados 92 diferentes haplótipos na região HVS-I e 42 na região HVS-II. Podemos dizer que a população do Estado do Rio de Janeiro, via herança materna, é constituída, em maior parte, pelos africanos (50%), seguidos dos ameríndios (30%) com uma pequena participação dos europeus (21%), demonstrando a grande miscigenação do nosso estado. / Analysis of mtDNA has been employed, recently, in Forensic Science, for identification of peoples and solves criminal cases. So has been used in genetic populations studies and had contributed for understand of process related with degree of mixture people and with occupation of different continents by populations humans. Mitochondrial DNA is present in many copies by cell. It is maternal inheritance and not suffer recombination. So, this cell is powerful tool in this area. Analysis of mitochondrial DNA is recommend when not exist more nuclear DNA or it be degraded as in forensic samples. One of problems find are the artifact encountered during the phases before and after sequencing where can obtained the bad quality sequence. The present study compared and optimized methods of mitochondrial DNA purification to samples human remains and in vivo in phases before and after sequencing. The methodology of analysis by mitochondrial DNA consist in extract it of biological sample, amplify the regions HVS-I and HVS-II of control region, sequence the products amplified and analysis after electroforesis capilar. The colagenase was tested with objective of value its efficiency in phase DNA extraction. In relation that fase, other objective was value the degree polymorphisms in regions HVS-I and HVS-II of mtDNA in samples of population of Rio de Janeiro to contribute for understand of flow genetics associated to formation of our population. As conclusion, the best methods of purification used was Centricon, follow by purification of amplifications products by Amershan and purification od products sequencing by Sephadex. It had fall efficiency of colagenase indicate the presence of probable inhibitors. In relation of data base, was encountered 95 polymorfisms distincts in region HVS-I and 52 in region HVS-II. The polimorfism more often in region HVS-I was 16223 (74,5%), while in region HVS-II was 263 (60%). It was encountered 92 differents haplotypes in region HVS-I and 42 in region HVS-II. It had lower rates of heteroplasmy. We can said that the population of Rio de Janeiro state, by maternal inheritance, was determined, in more portion, by Africans (50%), follow by Amerindians (30%) with small portion of Europeans (21%), showing the bigger miscegenation of our state.

Dissertação de Mestrado, apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, para a obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / A deficiência da desidrogenase de acil-CoA de cadeia média (MCADD) é o mais comum defeito da oxidação de ácidos graxos. Esta doença é caracterizada bioquimicamente por níveis elevados de ácido octanoico (AO) em tecidos e fluidos corporais de pacientes acometidos por essa deficiência. Os principais sintomas incluem letargia, vômitos, hipoglicemia e paralisia cortical, podendo evoluir para coma e morte. Considerando-se que a fisiopatologia do dano cerebral apresentado por pacientes acometidos pela MCADD não está bem estabelecida, o objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade de enzimas mitocondriais em estruturas cerebrais de ratos submetidos à administração intracerebroventricular de AO. Ratos Wistar machos com 60 dias de vida foram divididos em dois grupos experimentais: grupo AO, cujos animais receberam uma administração intracerebroventricular de AO (1,66 μmol), e grupo controle, cujos animais receberam administração intracerebroventricular de líquido cefalorraquidiano artificial no mesmo volume. Uma hora após a administração, os animais sofreram eutanásia por decapitação e o córtex cerebral, o hipocampo, o estriado e o cerebelo foram retirados e limpos. Estas estruturas foram utilizadas para avaliar as atividades dos complexos I-IV da cadeia respiratória, bem como das enzimas creatina cinase (CK), citrato sintase (CS), succinato desidrogenase (SDH) e malato desidrogenase (MDH). Observou-se uma diminuição da atividade do complexo I da cadeia respiratória em estriado e hipocampo de ratos que receberam AO. Além disso, as atividades dos complexos II e II-III foram inibidas pela administração de AO em todas as estruturas cerebrais estudadas, enquanto que a atividade do complexo IV foi inibida em córtex cerebral, corpo estriado e cerebelo. Em adição, a atividade da SDH foi diminuída em córtex cerebral, estriado e cerebelo de animais do grupo AO. Por outro lado, a atividade da MDH encountrou-se aumentada apenas em córtex cerebral, ao passo que a atividade da CS foi aumentada no hipocampo destes animais em comparação ao grupo controle. Adicionalmente, a atividade da CK foi aumentada no córtex cerebral, mas se encontrou inibida em hipocampo e cerebelo. Estes resultados sugerem que a administração de AO induz disfunção mitocondrial em cérebro de ratos, o que poderia estar implicada na fisipatologia dos danos cerebrais encontrados em pacientes afetados pela MCADD.

A análise do mtDNA vem sendo empregada, recentemente, em Ciência Forense, para identificação de indivíduos e resolução de casos criminais. Também vem sendo utilizada em estudos de genética de populações contribuindo com processos relacionados com o grau de miscigenação dos povos e com a ocupação dos diferentes continentes por populações humanas. O DNA mitocondrial está presente em inúmeras cópias por célula, é de origem materna e não sofre processos de recombinação, o que faz com que essa molécula seja uma poderosa ferramenta nesta área. A análise por mtDNA só é recomendada quando não existe mais fonte de DNA nuclear, ou quando este se encontra altamente degradado, como em amostras forenses. Um dos problemas encontrados é a interferência de artefatos durante as etapas pré e pós sequenciamento, na qual pode se obter uma seqüência de má qualidade. O presente estudo comparou e otimizou dez métodos de purificação de DNA mitocondrial, para amostras de restos mortais e in vivo, nas etapas pré e pós sequenciamento. A metodologia empregada consistiu em extrair o DNA da amostra biológica, amplificar por PCR, seqüenciar as referidas regiões do mtDNA das amostras selecionadas e analisar após eletroforese capilar. A enzima colagenase foi testada com o objetivo de avaliar sua eficiência na etapa de extração do DNA. Interligado a esta etapa, outro objetivo foi avaliar o grau de polimorfismo das regiões HVS-I e HVS-II do mtDNA em amostras da população do estado do Rio de Janeiro como forma de entender o fluxo gênico associado à formação da nossa população. Como conclusão, os melhores métodos de purificação utilizados foram o Centricon, seguido da purificação dos produtos amplificados pela resina da Amershan e dos produtos da reação de sequenciamento pela resina Sephadex. Houve baixa eficiência da enzima colagenase, indicando a presença de possíveis inibidores. Em relação ao banco de dados, foram encontrados 95 polimorfismos distintos na região HVS-I e 52 na região HVS-II. O polimorfismo mais freqüente na região HVS-I foi 16223 (74,5%), enquanto que na região HVS-II foi o 263 (60%). Foram encontrados 92 diferentes haplótipos na região HVS-I e 42 na região HVS-II. Podemos dizer que a população do Estado do Rio de Janeiro, via herança materna, é constituída, em maior parte, pelos africanos (50%), seguidos dos ameríndios (30%) com uma pequena participação dos europeus (21%), demonstrando a grande miscigenação do nosso estado. / Analysis of mtDNA has been employed, recently, in Forensic Science, for identification of peoples and solves criminal cases. So has been used in genetic populations studies and had contributed for understand of process related with degree of mixture people and with occupation of different continents by populations humans. Mitochondrial DNA is present in many copies by cell. It is maternal inheritance and not suffer recombination. So, this cell is powerful tool in this area. Analysis of mitochondrial DNA is recommend when not exist more nuclear DNA or it be degraded as in forensic samples. One of problems find are the artifact encountered during the phases before and after sequencing where can obtained the bad quality sequence. The present study compared and optimized methods of mitochondrial DNA purification to samples human remains and in vivo in phases before and after sequencing. The methodology of analysis by mitochondrial DNA consist in extract it of biological sample, amplify the regions HVS-I and HVS-II of control region, sequence the products amplified and analysis after electroforesis capilar. The colagenase was tested with objective of value its efficiency in phase DNA extraction. In relation that fase, other objective was value the degree polymorphisms in regions HVS-I and HVS-II of mtDNA in samples of population of Rio de Janeiro to contribute for understand of flow genetics associated to formation of our population. As conclusion, the best methods of purification used was Centricon, follow by purification of amplifications products by Amershan and purification od products sequencing by Sephadex. It had fall efficiency of colagenase indicate the presence of probable inhibitors. In relation of data base, was encountered 95 polymorfisms distincts in region HVS-I and 52 in region HVS-II. The polimorfism more often in region HVS-I was 16223 (74,5%), while in region HVS-II was 263 (60%). It was encountered 92 differents haplotypes in region HVS-I and 42 in region HVS-II. It had lower rates of heteroplasmy. We can said that the population of Rio de Janeiro state, by maternal inheritance, was determined, in more portion, by Africans (50%), follow by Amerindians (30%) with small portion of Europeans (21%), showing the bigger miscegenation of our state.

Sítios arqueológicos, polimorfismos genéticos clássicos e marcadores moleculares (estes em menor quantidade) foram empregados nos últimos anos para o desenvolvimento de modelos de povoamento e investigação de rotas migratórias percorridas pelos primeiros habitantes do continente sul-americano. Apesar destes esforços, muitas incertezas relacionadas aos movimentos populacionais realizados pelos ancestrais dos índios contemporâneos na América do Sul ainda permanecem. Com o objetivo de estudar a estrutura populacional dos indígenas da Amazônia e contribuir para o melhor entendimento do povoamento deste continente, polimorfismos que definem os haplogrupos fundadores do DNA mitocondrial nativo-americano foram analisados em 308 indígenas pertencentes a 16 aldeias de 7 tribos da região central da Amazônia. A posição central ocupada por estas tribos no continente sul-americano faz com que sejam relevantes nas tentativas de reconstrução dos movimentos populacionais sul-americanos. Nesta região, existe particular interesse pela estrutura genética da tribo Tikúna, inicialmente tida como enigmática por se preservar como uma das únicas grandes tribos pouco miscigenadas da Amazônia central, e do grupo lingüístico Pano, que embora se distribua por grande extensão territorial, apresenta homogeneidades étnica, lingüística e cultural notáveis, razão pela qual as populações (tribos) deste grupo são consideradas como parte de uma mesma tribo. Oito aldeias Tikúna e seis aldeias de quatro tribos Pano (Katukina, Kaxináwa, Marúbo e Yaminawa) fazem parte deste estudo. Os resultados indicam que constituem populações realmente pouco miscigenadas, sendo a mistura inter-étnica feminina praticamente desprezível (0,32%). Foi encontrada heterogeneidade entre aldeias Tikúna, sendo observados dois grupos altamente homogêneos que diferem consideravelmente entre si. Em relação aos Pano, a homogeneidade lingüística e cultural deste grupo não se reflete em sua estrutura genética, visto que os níveis de heterogeneidade entre populações Pano são equivalentes ou até mesmo superiores aos observados entre populações de afiliação lingüística distintas. No geral, as mulheres indígenas da região central da Amazônia se apresentaram mais heterogêneas do que os homens, o que pode ser interpretado como maiores taxas migratórias femininas. Por meio de análises continentais foi observado que tanto a afiliação lingüística quanto a geografia exercem forte influência no padrão de variabilidade genética nas Américas. Quando apenas populações ameríndias são consideradas, a heterogeneidade é maior entre populações sul-americanas do que norte-americanas, o que estaria relacionado com maior atuação da deriva genética neste continente. Os dados corroboram a hipótese de que uma onda migratória principal seria responsável pelo povoamento das Américas. Ao longo deste movimento migratório, múltiplos efeitos do fundador teriam ocorrido até alcançar a América do Sul. Ao entrar na América do Sul, tal onda teria assumido rotas distintas direcionadas ao norte (acompanhando a costa Atlântica em direção ao leste do continente), ao sul (acompanhando a costa do Oceano Pacífico) e, possivelmente, em direção ao centro da Amazônia. Visto que as principais rotas migratórias foram necessariamente percorridas por membros de ambos os sexos, a análise de marcadores patrilineares seria pertinente para se testar esta rota em direção ao centro da Amazônia, bem como as duas rotas clássicas anteriormente propostas e aqui corroboradas. / Archeological sites, classical polymorphisms and molecular markers (in smaller amount) were employed during the last years to develop models regarding peopling and to investigate the routes followed by the first inhabitants of South America. In spite of these efforts, a great amount of uncertainties related to the populational movements performed by the ancestors of current Amerindians from South America still remains. Aiming to study the population structure of the indigenous people from Amazon and to contribute to a better understanding regarding South America peopling, polymorphisms defining the mitochondrial DNA founder haplogroups of Native-Americans were studied in 308 Amerindians pertaining to 16 villages of seven tribes from the central part of Amazon. The central position occupied by these tribes in South-American geography renders them special interest for attempts to reCOJ:\'lstruct the populational movements in this continent. In this central region, there is particular interest in the genetic structure of the Tikuna tribe, initially considered as an enigmatic tribe due to their preservation as one ofthe very few large and relatively pure tribes of Central Amazon. There is also interest in the Pano (linguistic) group that, in spite of being distributed through a really large area, still presents notable ethnic, Jinguistic and cultural homogeneities, which is the reason why the various populations (tribes) are considered as samples of a single tribe. Eight Tikuna villages along with six villages from four Pano tribes (Katukina, Kaxinawa, Marubo e Yaminawa) are part of this research. The results obtained indicate that the populations analyzed are actually weakly admixed, with an almost negligible female inter-ethnic admixture (0.32%). Heterogeneity was found among the Tikuna villages, identified in the form of two highly homogeneous groups that are remarkably different from each other. Regarding the Pano, the linguistic and cultural homogeneity is not reflected in this group\'s genetic structure, as can be seen by the high levels of heterogeneity found between the Pano populations, equal to or greater than the observed between other populations belonging to different languages. Overall, indigenous women from central Amazon are more structured than man, which can be interpreted as a higher female migration rate. Continental analysis revealed that both language and geography exert strong influence over the genetic diversity pattern found in America. When only Am~rindian populations are considered, it can be observed a higher level of heterogeneity in South America than in North America, which could be related to an increase in genetic drift in the former. Presented data corroborate the hypothesis of one major migration being responsible for America peopling. Multiple founder effects could have occurred along with this migratory movement until reaching South America. Following the entrance in this continent, such wave could have been split into different routes pointing to the north of part of South America (following the Atlantic Coast to the f\'astern part of the continent), to the south (along with the Pacific Coast) and possibly to the central part of Amazon. As long as the major migratory routes were essentially followed by members of both genders, the analysis of patrilinear markers would be pertinent to confirm or not such route pointing to the Central Amazon, as well as the two classical routes here corroborated.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Con el fin de conocer más sobre las relaciones filogenéticas dentro del género Cavia, analizamos las secuencias de la región control del DNA mitocondrial (263 pares de bases) de siete especimenes domésticos (Cavia porcellus Linnaeus, 1758; Rodentia, Caviidae), junto con cuatro muestras de las dos especies que se presumen como ancestro de la doméstica: C. tschudii y C. aperea. Todos los análisis de máxima parsimonia y máxima verosimilitud agruparon a C. porcellus con C. tschudii (distancia promedio de 14,4 cambios de nucleótidos); los mejores árboles tenían 62 pasos y un –Ln = 637,31508; con apoyos de remuestreo del 100%. Cuando el nodo de C. aperea fue forzado a unirse al de C. porcellus, este árbol fue consistentemente más largo, menos probable y robusto, y con menos caracteres definitorios que el óptimo. Todas las secuencias de C. porcellus se agruparon en un solo nodo, con apoyos de remuestreo de 92% como máximo y 61% como mínimo. Las distancias promedio entre C. tschudii y C. aperea fue de 31,5 cambios nucleotídicos, muy similar a la distancia entre C. porcellus con C. aperea (30,5 cambios). Estos resultados indican que C. tschudii es la especie más cercanamente relacionada con C. porcellus.

Apesar do crescente aporte de informações na sistemática das serpentes Neotropicais, impulsionado pelo desenvolvimento de técnicas moleculares, as relações evolutivas intra e intertribais da subfamília Xenodontinae ainda são incipientes, e o posicionamento de gêneros e espécies de várias de suas tribos é desconhecido. A tribo Tachymenini (Dipsadidae, Xenodontinae) abriga sete gêneros e 33 espécies válidas, amplamente distribuídas na América do Sul, e representadas por um complexo histórico taxonômico e uma diversidade subamostrada. O presente projeto visou estudar as relações evolutivas de Tachymenini, de modo a testar as hipóteses de relacionamento entre seus gêneros e espécies em um contexto integrativo, e assim validar mudanças taxonômicas. Todos os táxons válidos de Tachymenini foram examinados, sendo este o trabalho mais abrangente para a tribo. Foram realizadas análises filogenéticas de Máxima Parcimônia, Máxima Verossimilhança e Bayeasiana, a partir da codificação de 70 caracteres morfológicos e do sequenciamento de três genes mitocondriais e três nucleares. As análises filogenéticas recuperaram Tachymenini como monofilética e seus gêneros mais especiosos, Tachymenis, Thamnodynastes e Tomodon, polifiléticos. Dois novos gêneros e quatro novas espécies são propostas, três espécies são sinonimizadas e dois outros gêneros são revalidados, resultando em uma nova classificação com 10 gêneros e 35 espécies para a tribo. Ainda, três complexos de espécies crípticas foram recuperados, o que aumentaria a diversidade de Tachymenini em pelo menos quatro novas espécies. O uso de dados morfológicos e moleculares combinados foi fundamental para o melhor entendimento das relações entre os gêneros da tribo, e para o estabelecimento de seus caracteres diagnósticos. Outros tipos de abordagens, além de complementação de lacunas amostrais, tanto morfológicas quanto moleculares, são necessárias em estudos sistemáticos futuros de Tachymenini e outros grupos de xenodontíneos / In spite of the incoming flow of information regarding the systematics of Neotropical snakes, largely driven by the innovation of new techniques for molecular data, the evolutionary relations among members of the subfamily Xenodontinae are incipient, and the phylogenetic status of several genera and species are still unknown. The tribe Tachymenini (Dipsadidade, Xenodontinae) is composed by seven genera and 33 species widely distributed throughout South America, and characterized by a complex taxonomic history and a hidden diversity. This project aimed to study the phylogenetic relations of Tachymenini, testing the evolutionary hypotheses of relationships among its genera and species in an integrative approach, and to further validate taxonomic changes. All Tachymenini taxa were analyzed in the most comprehensive study of the tribe. Maximum Parsimony, Maximum Likelihood and Bayesian analysis were performed using 70 morphological characters, three mitochondrial and three nuclear genes. Phylogenetic analysis recovered Tachymenini as monophyletic, and its most specious genera, Tachymenis, Thamnodynastes and Tomodon, as polyphyletic. Two new genera and four new species are proposed, three species are synonymized, and two other genera are resurrected, resulting in a new composition of 10 genera and 35 species for the tribe. Nevertheless, three cryptic species complexes were recovered, which would increase the diversity for Tachymenini in at least four other species. The combined use of morphological and molecular data was fundamental for a better understanding of the genera relationships, and for the establishment of diagnostic characters for the taxa. Other approaches, along with the improvement of morphological and molecular data deficiencies, are necessary in future studies of Tachymenini and other Xenodontinae systematics

As mitocôndrias são os principais locais de geração de espécies reativas de oxigênio (ERO), que são produzidos como subprodutos da cadeia de transporte de elétrons. O ferro livre e as ERO podem se envolver em processos potencialmente nocivos, sendo que a desregulação do metabolismo do ferro nessa organela tem sido associada a várias doenças, como a Ataxia de Friedreich (FA). O transporte seletivo de quelantes de ferro a esta organela é proposto como um meio de melhorar sintomas de FA. A desferrioxamina (DFO) é um sideróforo bacteriano com grande afinidade ao ferro, mas baixa penetração celular. Já os peptídeos altamente catiônicos TAT49-57 (Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg), 1A (Fx-Arg-Fx-Lys-Fx-Arg-Fx -Lys), SS02 (Dmt-(D)-Arg-Phe-Lys) e SS20 (Phe-(D)-Arg-Phe-Lys) são conhecidos por permear as membranas citossólicas e mitocondriais. Nós preparamos conjugados de DFO com peptídeos que penetram as mitocôndrias e estudamos suas características de ligação ao ferro in vitro. Eles foram preparados e conjugados em fase sólida com DFO (produzindo quatro mtDFO), que em seguida foram purificados e caracterizados por meio de LC/MS e análise de aminoácidos. Os mtDFO de alta pureza exibiram capacidade de ligação de ferro idêntica à do quelante livre DFO. Os mtDFO também foram capazes de suprimir a oxidação catalisada pelo sistema ferro-ascorbato. A fim de avaliar a localização intracelular dos mtDFO, estes foram marcados com TAMRA (mtDFO-TAMRA). Frente a uma linhagem de carcinoma de ovario, os mtDFO foram em geral pouco tóxicos e altamente localizados nas mitocôndrias. Não foram observados níveis expressivos de danos a DNA, indução de apoptose, geração de ERO na mitocôndria, arraste de ciclo celular ou de apoptose. Resultados preliminares da aplicação dos mtDFO a cardiomiócitos murínicos com baixo nível de frataxina (modelo de FA) indicam um restabelecimento de aproximadamente 60% na morfologia mitocondrial, o que pode ser interpretado como uma melhora nas funções dessa organela. Estes resultados indicam que os mtDFO produzidos podem ser uma parte importante no arsenal terapêutico para FA. / Mitochondria are the main site for the generation of reactive oxygen species (ROS) as sub products of electron transport chain. Free iron and ROS may interact to generate potentially harmful species, and iron homeostasis in this organelle has been linked to several diseases, such as Friedreich Ataxia (FA). Selective targeting of iron chelators to mitochondria has been proposed as a means of alleviating FA symptoms. Desferrioxamine (DFO) is a bacterial siderophore with high affinity for iron, however low cell penetration. Highly charged peptides TAT49-57 Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg), 1A (Fx-Arg-Fx-Lys-Fx-Arg-Fx -Lys), SS02 (Dmt-(D)-Arg-Phe-Lys) and SS20 (Phe-(D)-Arg-Phe-Lys) are known as both cell- and mitochondria-permeant. We prepared conjugates of DFO with mitochondria-penetrating peptides and studied their iron binding characteristics in vitro. They were prepared in solid phase and conjugated to DFO (generating four mtDFO), which were then purified and characterized by LC/MS and Amino acid analysis. MtDFO exhibited iron binding ability identical to free DFO. The mtDFO of high purity were also able to quench the oxidation catalyzed by the iron-ascorbate system. Cell localization studies were performed by tagging mtDFO with TAMRA. In A2780 cells, mtDFO displayed in general low toxicity and high levels of mitochondrial location. No expressive levels of DNA damage, apoptosis, mitochondrial ERO generation or cell cycle arresting were observed. Preliminary results of the application of mtDFO on mouse cardiomiocytes with low levels of frataxin (animal model of FA) indicate a recovery of ca. 60% of mitochondrial morphology. This is interpreted as an improvement of the functions of the organelle. These results indicate that mtDFO may be important allies in the therapy of FA.