O Acidente Vascular Encefálico (AVE) é a segunda causa de morte mundial, anualmente mais de 20 milhões de indivíduos são acometidos por esta patologia, 5 milhões destes vão a óbito. No Brasil, é a principal causa de morte. Pesquisas demonstram que é crescente o uso de inúmeros modelos animais validos em pesquisas que buscam terapias funcionais para os Acidentes Vasculares. Numerosas espécies são usadas, ratos, coelhos, caninos, suínos, ovelhas e espécies de primatas. Um grande número de estudos tem sido realizado com células-tronco de diferentes fontes em diferentes modelos animais de lesão medular, e tentativas terapêuticas até mesmo em humanos, apresentando resultados promissores. As células-tronco ideais para a realização de transplantes devem ser imunologicamente inertes, provenientes de fontes de fácil acesso, possuir rápida expansibilidade em cultivo, apresentar capacidade de sobrevivência em longo prazo e de integração no sítio hospedeiro além de serem propícias a transfecção e expressão de genes exógenos. Os objetivos desta pesquisa são o de estabelecer um modelo de AVE em coelhos (Oryctolagus cuniculus) para o uso da terapia com células-tronco e avaliar através de Fluroscopia, avaliação comportamental, parâmetros clínicos e exame histopatológico a lesão induzida. Desta forma realizamos o delineamento experimental, a indução do acidente vascular encefálico em coelhos, o cultivo das células-troco do epitélio olfatório de cães e de coelhos, a transdução com retrovírus, a análise da expressão dos genes exógenos, a preparação de células-tronco transduzidas para transplante nos animais, a Fluroscopia, a avaliação comportamental, a avaliação macroscópica e a histológica. Desta forma o modelo experimental foi validado e comprovada a ação celular no tecido lesado via implante das células no tecido, pós-lesado, comprovado clinicamente pelos nossos resultados. Ainda podemos ressaltar que a ausência de trabalhos utilizando marcadores para o rastreamento de células-tronco após o transplante em lesões vasculares encefálicas, aliado a possibilidade de utilização desta terapêutica celular em animais com lesão vascular encefálica proveniente de traumas e diversas patologias na clínica veterinária são fatos que justificam essa pesquisa, desta forma devemos ressaltar a importância de pesquisas com terapia celular sempre visando inserções diretas e indiretas desta biotecnologia à medicina veterinária e humana. / Stroke is the second cause of death worldwide, each year more than 20 million individuals are affected by this disease, 5 million of these die. In Brazil, this is the leading cause of death. Polls show the use of numerous animal models valid in research seeking treatments for stroke functional is increasing. Numerous species are used, rats, rabbits, dogs, pigs, sheep and species of primates. A large number of studies have been done with stem cells from different sources in different animal models of spinal cord injury, and even therapeutic trials in humans, showing promising results. The ideal stem cells for the performance of transplants should be immunologically inert, from sources of easy access, have rapid expansion in culture, ability to provide long-term survival and integration in the host site as well as being suitable for transfection and expression of exogenous genes. The objectives of this research is to establish a model of stroke in rabbits (Oryctolagus cuniculus) to the use of therapy with stem cells and measure the induced lesion and its consequences by fluoroscopic, behavioral assessment, clinical parameters and histological examination. We designed the experiment, the induction of stroke in rabbits, the cell culture of the olfactory epithelium of dogs and rabbits, transduction with retroviruses, the analysis of exogenous gene expression, the preparation of transducted stem cells for transplantation in animals, fluoroscopic, the behavioral assessment, macroscopic evaluation and histology. Thus, the experimental model was validated and the cell implantation in damaged tissue was confirmed. We emphasize that the lack of studies using markers for the tracking of stem cells after transplantation into brain vascular lesions, the possibility of combined use of cell therapy in animals with vascular brain injury from trauma and various diseases in veterinary clinics are facts that justify such a search. So we must reinforce the importance of research on cell therapy to direct and indirect insertions of this biotechnology in human and veterinary medicine.

Atualmente, ainda é incerto se a hidrólise de L-arginil-β-naftilamida (ArgNA) e do leucotrieno (LT) A4 pela LT-A4-hidrolase (LT-A4-H) (EC 3.3.2.6) e pela aminopeptidase básica (APB) (EC 3.4.11.6) tem influência no desenvolvimento da artrite induzida por colágeno (CIA). O objetivo deste estudo foi investigar a inter-relação entre LT-A4-H, APB e LT-B4 em ratos submetidos à CIA. Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), ensaio imunoenzimático (EIA), espectrofluorimetria e reação quantitativa em tempo real em cadeia da polimerase (qPCR) foram usados como metodologias. A existência dos genes para as proteínas EC 3.3.2.6 e EC 3.4.11.6 foi confirmada no tecido sinovial (TS) de ratos controles sadios. A hidrólise de ArgNA aumentou na fração solúvel (FS) dos animais submetidos à CIA que desenvolveram a doença (artríticos-CIA) em comparação com aqueles que não desenvolveram a doença (resistentes-CIA) e com os controles sadios. No líquido sinovial (SY) e no plasma sanguíneo houve menor hidrólise de ArgNA em resistentes em comparação aos artríticos e controles. Nas células mononucleares do sangue periférico (PBMCs), os níveis de hidrólise de ArgNA aumentaram na FS de controles e na fração de membrana (FM) dos resistentes em comparação aos artríticos. Em comparação com controles sadios, a hidrólise de LT-A4 aumentou no SY e na FS de PBMCs de artríticos e resistentes. A hidrólise de LT-A4 também aumentou na FM do TS de resistentes e diminuiu na FM de PBMCs em artríticos e resistentes. Em todos estes compartimentos a hidrólise de ArgNA permaneceu inalterada ou relacionou-se inversamente com a hidrólise de LT-A4, comparativamente aos controles sadios. A hidrólise de ArgNA diferiu entre os artríticos e resistentes em FM-TS, FS-TS, FM-PBMCs, SY e no plasma sanguíneo. Uma relação no mesmo sentido foi encontrada entre alterações na hidrólise de LT-A4 e nos níveis de LT-B4 apenas em SY e FM-PBMCs dos artríticos e resistentes e em FM-TS dos resistentes, comparativamente aos controles sadios. Em conclusão, a atividade APB é um novo marcador que distingue ratos artríticos e resistentes no modelo CIA. Os níveis de LT-B4 em ratos não são controlados somente pela LT-A4-H. Alterações na atividade LT-A4-H e nos níveis de LT-B4 são indistinguíveis entre artríticos e resistentes, mas tais alterações marcadamente distinguem essas duas condições da condição saudável. LT-A4-H e APB estão relacionadas de uma forma compartimento-dependente, atuando como enzimas independentes, com modulação diferencial das suas especificidades, eficiências e/ou afinidades catalíticas sobre os substratos epóxi e peptídico, ou como enzimas bifuncionais, cujas atividades são inversamente relacionadas devido à inibição concorrente de uma destas atividades / Whether L-arginyl-β-naphthylamide (ArgNA) and leukotriene (LT)-A4 hydrolyses by LT-A4 hydrolase (LT-A4-H) (EC 3.3.2.6) and basic aminopeptidase (APB) (EC 3.4.11.6) influence the development of collagen-induced arthritis (CIA) is presently uncertain. The objective of this study was to investigate the interrelationship among LT-A4-H, APB and LT-B4 in CIA rats. High-performance liquid chromatography (HPLC), enzyme immunoassay (EIA), spectrofluorometry and quantitative real time polymerase chain reaction (qPCR) were used as methodologies. The existence of genes for EC 3.3.2.6 and EC 3.4.11.6 proteins were confirmed in the synovial tissue (TS) of healthy control rats. ArgNA hydrolysis was higher in soluble fraction (FS) in rats submitted to CIA that developed the disease (CIA-arthritic) than in those that did not develop the disease (CIA-resistant) or healthy control. Synovial fluid (SY) and blood plasma had lower ArgNA hydrolysis in CIA-resistant than in CIA-arthritic or control. In the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) the levels of ArgNA hydrolysis increased in FS of control and in membrane-bound fraction (FM) of CIA-resistant in comparison with CIA-arthritic. Compared with healthy control, LT-A4 hydrolysis increased in SY and in FS from PBMCs of CIA-arthritic and CIA-resistant. LT-A4 hydrolysis also increased in FM from TS of CIA-resistant and decreased in PBMCs-FM of CIA-arthritic and CIA-resistant. In all these locations hydrolysis of ArgNA remained unchanged or it was inversely related with LT-A4 hydrolysis, comparatively to healthy control. ArgNA hydrolysis differed between CIA-arthritic and CIA-resistant in TS-FM, TS-FS, PBMCs-FM, SY and blood plasma. A same-sense relationship was found between changes on LT-A4 hydrolysis and LT-B4 levels only in SY and PBMCs-FM of CIA-arthritic and CIA-resistant and in TS-FM of CIA-resistant, comparatively to healthy control. In conclusion, the APB activity is a novel distinctive marker of CIA-arthritic and CIA-resistant statuses. The levels of LT-B4 in rats are not controlled only by LT-A4-H. Changes on LT-A4-H activity and LT-B4 levels are indistinguishable between CIA-resistant and CIA-arthritic, but such variations markedly distinguish these two statuses from healthy status. LT-A4-H and APB are related in a compartment-dependent manner acting as independent enzymes with differential modulation of their specificity, efficiency and/or catalytic affinity on the aminoacyl and epoxy substrates, or as bifunctional enzymes which activities are inversely related due to the concurrent inhibition of one of these

Major depressive disorder (MDD) is an independent cardiovascular risk factor that presents high morbimortality. Recent evidence suggests the involvement of nitric oxide (NO), a potent vasodilator and anti-aggregating effect, in the pathogenesis of cardiovascular and psychiatric diseases. Nitric oxide (NO) is synthesized through conversion of the amino acid L-arginine into L-citrulline and NO by the enzyme NO synthase (NOS). This thesis addresses the role of the L-arginine-NO pathway in platelets from patients with MDD and its association with platelet function and oxidative stress. For a behavioural analysis of depression in an animal model, we used the single maternal separation (SMS) model, where the offspring was separated from its mother for eight minutes. The animals were divided into four groups for the study: Sedentary Control Group (SCG), Exercise Control Group (ECG), SMS Sedentary Group (SSMS) and SMS Exercise Group (ESMS). Physical training (PT) of the animals took 8 weeks, with a duration of 30 minutes and a training speed established by the maximum test (ET) of 14m/min. For the human study, there were ten MDD patients with Hamilton score: 20 1 (mean age: 38 4 years) and 10 healthy subjects (mean age: 38 3 years). The human and animal studies were approved by the Ethics Committee: 1436 - CEP/HUPE and CEUA/047/2010 respectively. The following were measured in human and animal models: L-arginine transport, NOS and superoxide dismutase (SOD) activities, cGMP concentration and analysis of systemic cortisol. Experiments performed only in humans: NOS, arginase and guanylate cyclase expression evaluated by Western Blotting. Platelet aggregation was induced by collagen, and C-reactive protein, fibrinogen, and L-arginine were systemically analyzed. For statistical treatment, three statistical tests were used to evaluate the differences in survival curves: Kaplan-Meier, and the Tarone-Ware and Peto-Prentice tests. In humans, there was a reduction in L-arginine transport, NOS and SOD activities, cGMP concentration and plasma concentrations of L-arginine in MDD group compared with the control group. On the other hand, an increase in plasmatic levels of fibrinogen was observed in TD. These results show an impairment of L-arginine-NO-cGMP and the anti-oxidant enzyme SOD in patients with MDD without affecting platelet function. Regarding the PT, for the animal model were found initials changes on the running distance and duration of execution of ET between control groups and groups SMSs, the latter displaying lower values for the ET. After 8 weeks of PT, there was an enhancement of L-arginine transport in ESMS which was activated by exercise. The differences observed for time and distance in the initial ET between control groups and SMU groups was reversed after 8 weeks of PT, demonstrating the beneficial effect of exercise training on cardiorespiratory capacity in models of depression. / O transtorno depressivo (TD) é um fator de risco cardiovascular independente que apresenta elevada morbi-mortalidade. Recentes evidências sugerem a participação do óxido nítrico (NO), potente vasodilatador e anti-agregante plaquetário, na patogênese de doenças cardiovasculares e psiquiátricas. A síntese do NO ocorre através da conversão do aminoácido L-arginina em L-citrulina e NO, pela ação da enzima NO sintase (NOS). Esta tese aborda o papel da via L-arginina-NO em plaquetas de pacientes com TD e sua associação com a função plaquetária e estresse oxidativo. Para análise comportamental da depressão em modelo animal, foi utilizado o modelo de estresse pós-natal de separação única (SMU). Os animais foram divididos em quatro grupos para a realização do estudo: Grupo Controle Sedentário (GCS), Grupo Controle Exercício (GCE), Grupo SMU Sedentário (SMUS) e Grupo SMU Exercício (SMUE). O treinamento físico (TF) dos animais englobou 8 semanas, com duração de 30 minutos e uma velocidade de treinamento estabelecida pelo teste máximo (TE). Para o estudo em humanos, 10 pacientes com TD com score Hamilton: 201, (média de idade: 384anos), foram pareados com 10 indivíduos saudáveis (média de idade: 383anos). Os estudos em humanos e animais foram aprovados pelos Comitês de Ética: 1436 - CEP/HUPE e CEUA/047/2010, respectivamente. Foi mensurado em humanos e em animais: transporte de L-arginina, concentração GMPc, atividade das enzimas NOS e superóxido dismutase (SOD) em plaquetas e cortisol sistêmico. Experimentos realizados somente em humanos: expressão das enzimas NOS, arginase e guanilato ciclase através de Western Blotting. A agregação plaquetária foi induzida por colágeno e foi realizada análise sistêmica de proteína C-reativa, fibrinogênio e L-arginina. Para o tratamento estatístico utilizou-se três testes estatísticos para avaliar as diferenças das curvas de sobrevida: Kaplan-Meier, e os testes de Tarone-Ware e Peto-Prentice. Em humanos, houve uma redução do transporte de L-arginina, da atividade das enzimas NOS e SOD, e da concentração de GMPc em plaquetas, e nas concentrações plasmáticas de L-arginina no grupo com TD em relação ao grupo controle. Foi observado um aumento dos níveis plasmáticos de fibrinogênio no TD. Esses resultados demonstram uma inibição da via L-arginina-NO-GMPc e da enzima anti-oxidante SOD em pacientes com TD sem afetar a função plaquetária. Em relação ao TF, para o modelo animal, foram encontradas alterações iniciais quanto à distância percorrida e tempo de execução do TE entre os grupos controles e o grupos SMUs, apresentando estes últimos menores valores para o TE. Após 8 semanas de TF, verificou-se um maior influxo no transporte de L-arginina para o SMUE em comparação ao grupo SMUS. As diferenças observadas para o tempo e a distância percorrida no TE inicial entre os grupos controle e no modelo de estresse foram revertidas após as 8 semanas de TF, demonstrando o efeito benéfico do exercício físico na capacidade cardiorespiratória em modelos de depressão.

A psoríase é uma doença de pele inflamatória crônica, que afeta cerca de 2-4% da população mundial. Se desenvolve ao longo do tempo, principalmente no final da adolescência ou início da idade adulta e depende de uma complexa interação entre fatores genéticos e ambientais. Dados experimentais demostram que a dermatite induzida por imiquimode (IMQ) em camundongos assemelha-se estreitamente às lesões de psoríase humana, tanto nas características fenotípicas e histológicas como no desenvolvimento das lesões na epiderme. O estudo avaliou os efeitos anti-inflamatórios do óleo de semente de maracujá (Passiflora edulis) no tratamento da psoríase, utilizando a análise histológica e imunológica da epiderme. O experimento foi realizado com 36 camundongos Balb/c, os quais foram submetidos à indução da psoríase por imiquimode, por 10 dias consecutivos. O tratamento foi realizado com óleo de semente de maracujá in natura 100%, pomada LECIGEL® 2%, pomada associação de óleo de semente de maracujá 20% e LECIGEL® 2%, por 15 dias. Tanto o óleo da semente do maracujá quanto a associação do mesmo ao LECIGEL® diminuíram o quadro inflamatório induzido por imiquimode nas orelhas tratadas. Através das análises imuno-histoquímicas realizadas na epiderme (PCNA, IL-6, VEGF, CD34), observou-se um aumento na formação de corpos apoptóticos, diminuição a hiperplasia epitelial e redução do infiltrado inflamatório. Os resultados deste experimento demonstraram que o óleo da semente do maracujá desempenha um efeito anti-inflamatório no tratamento da psoríase induzida por imiquimode. / Psoriasis is a chronic inflammatory skin disease that affects about 2-4% of the world\'s population. It develops over time, especially in late adolescence or early adulthood and depends on a complex interaction between genetic and environmental factors. Experimental data show that imiquimode-induced dermatitis (IMQ) in mice closely resembles human psoriasis lesions, both in phenotypic and histological characteristics and in the development of lesions in the epidermis. The study evaluated the anti-inflammatory effects of passion fruit (Passiflora edulis) oil in the treatment of psoriasis, using the histological and immunological analysis of the epidermis. The experiment was performed with 36 Balb / c mice, which were submitted to psoriasis induction by imiquimode, for 10 consecutive days. The treatment was carried out with 100% fresh passion fruit seed oil, LECIGEL ® 2% ointment, 20% passion fruit seed oil ointment and LECIGEL ® 2% for 15 days. Both passionflower seed oil and its association with LECIGEL ® decreased the imiquimod-induced inflammation in the treated ears. Through the immunohistochemical analyzes performed on the epidermis (PCNA, IL-6, VEGF, CD34), an increase in the formation of apoptotic bodies, decrease in epithelial hyperplasia and reduction of inflammatory infiltrate was observed. The results of this experiment suggest that passion fruit seed oil has an anti-inflammatory effect in the treatment of imiquimode-induced psoriasis.

A terapia com bisfosfonatos tem sido frequentemente empregada no tratamento de doenças metabólicas do osso e neoplasias malignas. O objetivo deste estudo foi avaliar através de análise histológica e histomorfométrica em cortes não descalcificados, a influência dos bisfosfonatos nitrogenados endovenosos associados ou não a dexametasona sobre a osseointegração de implantes instalados em tíbias de 27 ratos Wistar. Ácido zoledrônico e dexametasona foram administrados por via subcutânea nos animais dos grupos experimentais. Os animais foram acompanhados por 7, 14 e 28 dias. Nossos resultados mostraram que não houve falha na osseointegração em nenhum animal avaliado e que não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os 3 grupos com relação à quantidade de contato entre osso e implante e presença de osso em áreas pré determinadas, nos tempos observados. No entanto nossas observações histológicas revelaram que nos animais tratados com bisfosfonatos associados ou não com dexametasona, aos 14 e 28 dias após a colocação do implante não ocorreu o fenômeno de remodelação da cortical óssea, ao contrário do grupo controle. Concluímos que a terapia com bisfosfonatos associada ou não com dexametasona não impediu a osseointegração do implante com o osso mas inibiu severamente a remodelação da cortical óssea pré existente. / Bisphosphonate therapy has been often employed in the treatment of metabolic bone diseases and malignancies. The aim of this study was to evaluate through histological and histomorphometric analysis the influence of intravenous nitrogen-containing bisphosphonates alone or combined with dexamethasone on the osseointegration of implants placed in the tibia of 27 male Wistar rats in non decalcified samples. Zoledronic acid and dexamethasone were administered through sub cutaneous injections. The animals were followed through 7, 14, and 28 days. Our results showed that there was no failure in osseointegration in any animal, and that there were no statistically significant differences among the 3 groups regarding the amount of bone-implant contact and peri-implant bone density in predetermined areas. However our histological observations revealed that animals treated with bisphosphonates, associated or not with dexamethasone, at 14 and 28 days after implant placement has not occurred the phenomenon of cortical bone remodeling, unlike control group. We conclude that bisphosphonate therapy associated or not with dexamethasone did not prevent osseointegration of the implants but severely inhibited the remodeling of pre-existing cortical bone.

O agente mutagênico N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) é amplamente utilizado para produzir novas mutações em camundongos, dando origem aos mutantes recessivos equilíbrio (eqlb), que possui uma mutação pontual no gene NADPH oxidase 3 (Nox3), cromossomo 17 e mergulhador (mlh), no gene Otopetrin 1 (Otop1), cromossomo 5; sendo que ambos apresentam alterações vestibulares. Devido à semelhança da função do aparelho vestibular humano e do camundongo, a análise comportamental desses modelos pode ser uma valiosa contribuição para identificar alterações no controle do equilíbrio e do movimento. Deste modo, com o objetivo caracterizar o comportamento dos mutantes eqlb e mlh foram realizados os seguintes testes: avaliação da atividade geral por observação direta no campo aberto, coordenação motora na trave elevada, labirinto em cruz elevada (LCE), para avaliar o comportamento do tipo ansioso, labirinto em T e reconhecimento de objetos para avaliar a memória, além do teste de suspensão pela cauda para verificar o comportamento do tipo depressivo. Os resultados mostraram que em comparação aos camundongos BALB/c, os mutantes eqlb e mlh apresentaram redução do reflexo auricular, reflexo de endireitamento, resposta ao toque, na locomoção e na frequência de levantar. A redução do reflexo auricular, da resposta ao toque e do redução do reflexo de endireitamento mostrou um possível prejuízo do sistema psicomotor. A redução da frequência de levantar provavelmente foi consequência da dificuldade motora dos camundongos mutantes. Os resultados do teste da trave elevada indicaram que os mutantes eqlb e mlh apresentaram um prejuízo motor principalmente relacionado à coordenação motora. O tempo de imobilidade aumentado no teste de suspensão pela cauda e a incapacidade de nadar em camundongos eqlb e mlh reforçaram o papel do sistema vestibular na manutenção da percepção de gravidade, movimento e equilíbrio. / The mutagenic agent N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) is widely used to produce new mutations in mice, giving origin to the equilíbrio (eqlb) which has a mutation in the NADPH oxidase 3 (Nox3) gene, chromosome 17 and mergulhador (mlh) in the gene Otopetrin 1 (Otop1), chromosome 5; both mutant strain showed vestibular impairment. Due to the similarity of the vestibular apparatus between human and mouse, the behavioral analysis of the mutant can be a valuable contribution to identify alterations involved in the control of balance and movement. This study aimed to characterize the behavior of eqlb and mlh mutant mice using the following behavioral tests: evaluation of the general activity by direct observation in the open field, motor coordination in the balance beam, elevated plus maze to evaluate the behavior of the anxious type, T-maze and recognition of objects to evaluate memory. In addition, tail suspension test was used to verify depressive like behavior. The results showed that in relation to the BALB/c mice, the mutants eqlb and mlh showed reduction of auricular reflex, surface-righting reflex, touch response, locomotion and rearing frequency. The reduction of the auricular reflex and the touch response pointed to the impairment of the psychomotor system, and the reduction of the surface-righting reflex showed a possible impairment of the psychomotor system. The reduction in the rearing frequency was, probably, a consequence of the motor impairment observed in the mutant strains. The results of the elevated plus maze test indicated that the mutants eqlb and mlh showed motor impairment mainly related to motor coordination. The increased immobility time in the tail suspension test and the inability to swim in eqlb and mlh mice reinforced the role of the vestibular system in maintaining the perception of gravity, movement, and balance.

O modelo de recaída cue-induced é comumente utilizado para o estudo da recaída ao uso de drogas causada pela exposição dos animais à estímulos ambientais previamente associados à droga. Quando o álcool é a droga a ser estudada, um estímulo contextual (S) e um reforçador condicionado (Sr) são os estímulo frequentemente associados ao seu consumo. Embora esse modelo seja consolidado na área, sua validade de constructo vem sendo criticada; entre essas críticas estão o fato de que apenas o Sr adquire controle sobre a resposta de procura pela droga, além de que pouco se sabe sobre os sistemas neurais envolvidos nessa recaída. Portanto, este trabalho teve como objetivo principal avaliar o papel dos processos operantes no procedimento do modelo de recaída ao uso de álcool cue-induced, além de avaliar a participação de sistemas neurais ligados ao estresse nessa recaída. Ainda, este trabalho teve como objetivo melhorar o procedimento desse modelo animal. Os experimentos apresentados no Capítulo 1 tiveram como objetivo melhorar o controle exercido por S sobre a recaída, aprimorando o modelo, além de avaliar processos de aprendizagem associativa que ocorrem nesse modelo. Dois experimentos foram realizados para atingir esses objetivos. No primeiro, dois grupos de ratos foram treinados no modelo cue-induced, porém um grupo foi treinado sob o esquema de razão fixa 1 (FR1) e o outro sob o esquema de razão variável 5 (VR5). No segundo experimento, os ratos foram treinados nesse modelo, porém os estímulos S e Sr foram apresentados separadamente na fase de treino. Os resultados desses experimentos indicaram que o treino separado foi eficaz em melhorar o controle de S sobre a recaída e que a troca de esquema de reforço não foi eficaz para aumentar esse controle. Os resultados também mostraram que quando os estímulo são treinados em conjunto o Sr sombreia o S e quando eles são treinados separadamente e testados como um composto ocorre somação. Os experimentos apresentados no Capítulo 2 tiveram o objetivo de avaliar se eixos neurais ligados à resposta ao estresse estariam envolvidos na recaída mimetizada pelo modelo cue-induced. Ratos Marchigian Sardinian Preferring (msP) e Wistars foram treinados no modelo cue-induced e, na fase de testes, Antalarmin, Metirapona e corticosterona (CORT) foram injetados i.p. nos animais. Os resultados mostraram que o Antalarmin (dose 20 mg/kg) bloqueou a recaída em ambas as cepas, que a Metirapona (doses 50 mg/kg e 100 mg/kg) bloqueou a recaída nos ratos msP e apenas a dose de 100 mg/kg bloqueou a recaída nos ratos Wistars e que a CORT não teve efeito na em nenhuma das cepas. Esses resultados mostraram o procedimento do modelo de recaída cue-induced pode ser aprimorado principalmente no que tange ao controle do S sobre a recaída. Os resultados também mostraram que respostas ao estresse influenciam a recaída observada nesse modelo / The cue-induced relapse model is a model commonly used to study relapse caused by environmental stimuli. In its procedure, the environmental stimuli are usually a contextual stimulus (S) and a conditioned reinforcer (Sr). Although this model is extensively used its construct validity has been criticized. Between these critics are the fact that only the Sr controls the drug seeking responses because this stimulus overshadows the S, in addition to the fact that little is known about the neural systems that are involved in cue-induced relapse. Therefore, this work had as main purpose to evaluate operant process in the alcohol cue-induced relapse and evaluate the role of stress neural systems in this relapse. In adition, this work had also the purpose to improve the animal model procedure. The experiments presented in Chapter 1 had the purpose to increase the control exercised by S over relapse and to evaluate associative learned in this model procedure. Two experiments were conducted to achieve this goal. In the first one two groups of rats were trained in the cue-induced relapse model but one group was trained under the fixed ratio 1 (FR1) and the other under the variable ratio 5 schedule (VR5). In the second experiment, rats were trained in the cue-induced procedure, but the stimuli S and Sr were presented separately during the training phase. The results showed that separate training was effective in increase the S control over relapse and that changing the schedule of reinforcement was not effective in increase this control. Also, results showed that summation occurred when the stimuli are trained separately and tested as a compound. The experiments presented in Chapter 2 had the purpose to evaluate if neural axis related to organic stress responses are involved in cue-induced alcohol relapse. Also, it was investigated if the HPA is involved in relapse. Marchigian Sardinian Preferring (msP) rats and Wistars rats were trained in the cue-induced model and during the test phase Antalarmin, Metyrapone and corticosterone (CORT) were injected i.p. in the animals. The results showed that Antalarmin (dose 20 mg/kg) blocked relapse produced by environmental cues in both rats strains, Metyrapone (doses 50 mg/kg and 100 mg/kg) blocked relapse in msP rats and only dose 100 mg/kg blocked relapse in Wistar rats and CORT had no effect on relapse in both strains. These results showed that the procedure used in the cue-induced model can be improved mainly in regard to the control from S over relapse. The results also showed that stress responses influence relapse in this model

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A osteoporose é um distúrbio esquelético caracterizado pela diminuição da força óssea, resultando em um risco aumentado de fratura. A perda óssea ocorre tanto em mulheres como em homens devido ao processo de envelhecimento natural [Drake et al.,2015]. De acordo com o diagnóstico e classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS), a osteoporose é definida pela densidade mineral óssea (DMO) na coluna lombar ou quadril inferior a -2,5 do desvio padrão abaixo da média da DMO para uma população de jovens adultos [Cosman et al., 2014]. Tem uma alta prevalência sendo mais freqüente do que a soma de casos de infarto do miocárdio, câncer de mama e acidente vascular cerebral. Essa doença deve ser considerada como um problema de saúde pública, pois afeta o indivíduo em sua função social, física e de trabalho e, portanto, causa impacto socioeconômico [Haddad et al.,2015]. Neste trabalho, desenvolvemos um novo modelo de osteoporose em ratos nude por ooforectomia visando o uso de células humanas para a Medicina Traslacional. Para tanto, foram estabelecidos dois passos e a osteoporose foi analisada por densitometria óssea aos 0, 21, 45 e 60 dias após a cirurgia e por análises histológicas de ossos femorais, i) padronização do modelo animal de osteoporose por ooforectomia, utilizando ratos Sprague-Dawley fêmeas de 12 semanas; ii) na segunda fase do projeto, a osteoporose foi induzida em ratos imunodeficientes nude Rowett fêmeas (NTacFCfiq: NIJ-Whn) de 12 semanas e os mesmos ensaios foram conduzidos para detectar a osteoporose. O soro foi coletado para a medida de estrogênio. As análises da DMO e histológicas mostraram modificação do contéudo mineral e ósseos e da estrutura óssea, respectivamente, aos 60 dias após a cirurgia em ambas as linhagens de ratos fêmeas. Com este trabalho, pretendemos contribuir para a compreensão da biologia da osteoporose utilizando um novo modelo animal, o que pode levar ao desenvolvimento de novos protocolos clínicos e terapêuticos no futuro. / Osteoporosis is a skeletal disorder characterized by decreased bone strength resulting in an increased risk of fracture. Bone loss occurs in both women and men due to the natural aging process [Drake et al.,2015]. According to the World Health Organization (WHO) diagnosis and classification, osteoporosis is defined by the bone mineral density (BMD) in the hip or lumbar spine being less than or equal to -2.5 of the standard deviation below the BMD average for a population of young adults [Cosman et al.,2014]. It has a high prevalence being more frequent than the sum of cases of myocardial infarction, breast cancer and stroke. This disease should be considered as a public health problem, since it affects the individual in his social, physical and work function and, therefore, causes socioeconomic impact [Haddad et al.,2015]. In this work, we developed a new rat model of osteoporosis by oophorectomy aiming the use of human cells for Traslational Medicine. To this end, two steps were established, i) standardization of the animal model of osteoporosis by oophorectomy, using female Sprague-Dawley rats at 12 weeks. The osteoporosis was analyzed by bone densitometry at 0, 21, 45 and 60 days after surgery and by histological analyzes of femoral bones. The serum was collected for measurement of estrogen markers; ii) at second stage of the project, osteoporosis was induced in immunodeficient female nude Rowett (NTacFCfiq: NIJ-Whn) at 12 weeks and the same assays were conducted to detect osteoporosis. Bone mineral density and bone histological analyzes showed changes in the of bone mineral content and bone structure, respectively, at 60 days after surgery in both rat lineages. With this work, we intend to contribute to the understanding of osteoporosis biology using a new animal model, which can lead to the development of new clinical and therapeutic protocols in the future.

Introducción: El Factor Inducible por Hipoxia 1alpha (HIF-1alpha) es un factor de transcripción cuya actividad permite la adaptación celular a los cambios en las presiones parciales de oxígeno. HIF-1alpha se encuentra sobre-expresado en varios tumores humanos y en algunos de ellos su sobre-expresión se ha asociado con un peor pronóstico, sin embargo, su papel en los carcinomas epidermoides de cabeza y cuello (CECC) es controvertido.Material y Método:Análisis retrospectivo de 116 pacientes con carcinomas epidermoides supraglóticos. Mediante inmunohistoquímica se analizó la expresión de HIF-1alpha, p53, caspasa 3 y CD34. Posteriormente se desarrolló un modelo murino de CECC y en él se analizaron las consecuencias de la sobre-expresión de HIF-1alpha en los tumores inducidos por una línea celular derivada de un carcinoma epidermoide glótico.Resultados:En los carcinomas epidermoides supraglóticos, HIF-1alpha se encuentra frecuentemente sobre-expresado, siendo su expresión independiente del grado de vascularización tumoral. Su expresión de forma aislada no guarda relación con el pronóstico, ni influye en las características anatomopatológicas de los tumores desarrollados por nuestra línea celular.Discusión/Conclusiones:Los carcinomas epidermoides supraglóticos pobremente vascularizados, con sobre-expresión de HIF-1alpha y de p53 y bajos índices apoptóticos, presentan un pronóstico significativamente peor que el resto. En el momento actual, el uso indiscriminado de inhibidores de HIF-1alpha en el tratamiento de los carcinomas epidermoides de cabeza y cuello no esta justificado. El modelo murino de CECC presentado en este trabajo reproduce en múltiples aspectos el comportamiento de estos tumores en humanos, siendo útil tanto para estudiar aspectos básicos de la biología molecular, como para ensayos terapéuticos.