SOUZA, Iêda Pereira. Alterações hematológicas e funcionais causadas por venenos de subespécies brasileiras de Crotalus durissus e suas frações isoladas. 2006. 157 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2006. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-06-11T14:03:15Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_ipsouza.pdf: 3598629 bytes, checksum: d2c825e9725328ccc51084a6e4a36355 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-06-11T15:30:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_ipsouza.pdf: 3598629 bytes, checksum: d2c825e9725328ccc51084a6e4a36355 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-11T15:30:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_tese_ipsouza.pdf: 3598629 bytes, checksum: d2c825e9725328ccc51084a6e4a36355 (MD5) Previous issue date: 2006 / Venomous snake accidents represent a serious public health problem in tropical countries, as much as for their frequency of occurrence and/or morbidity and mortality that they caused. In Brazil, the genus Crotalus comprise only one species, termed Crotalus durissus, which is divided into six subspecies. The aim of our study was to evaluate the effects promoted by venoms of Crotalus durissus cascavella, originated from the States of Ceará (Cdcc) and Maranhão (Cdcm); C. durissus collilineatus (Cdcol); C. durissus ruruima (Cdru) and its isolated components, such as crotoxin (CTXru) and phospholipase A2 (PLA2ru), in the biological processes of cellular spreading, phagocytosis, hematological alterations and antifungal activity. Male Swiss mice were inoculated intraperitoneally with the venom doses of 120, 50, 27, 20, 10 and 10 µg/Kg, respectively to the snakes described above. After two hours of inoculation blood samples and exudate were collected from orbital plex and peritoneum, respectively. Statistical evaluation was performed using Student-T test with significance level set at 95%. We compared the treated animals with a control group, where animals were inoculated with saline 0.9%. Cdcm and CTXru caused the most severe alterations in the erythrogram. We noticed that 37.5% of the erythrocytes showed macrocytic and microcytic morphology; 25.5% were hipocromic; 25% showed anisocytosis and the presence of polycromasia. We also found Howell Jolly bodies in 16.8% of the examined erythocytes. The total counting of leukocytes was reduced statistically after administration of Cdcc (82.9%), Cdcm (70.1%) and Cdru (83.8%). Cellularity was altered after the inoculation of Cdcc, Cdru and CTXru for all evaluated cells. We noticed a statistic increase of peritoneum total cells caused by Cdcc, Cdcol, Cdru and CTXru. In addition, macrophage was the most predominant cell after peritoneum differential cell counting. However, only Cdcol showed a statistic increase of macrophages (62.3%). We found significant reduction of cellular spreading after administration of all venoms ranging from 52.7 to 65.7%. Phagocytosis was statistically reduced by Cdcc in the periods of 30, 60, 90 and 120 minutes. However, Cdru reduced phagocytosis only at 30, 60 and 90 minutes, Cdcm decreased phagocytosis at 30 and 90 minutes and CTXru in the periods of 60 and 120 minutes. Cdcol and CTXru showed significant fungicide activity against C. albicans in the periods of 30, 60, 90 and 120 minutes, but Cdcc showed similar results at 60, 90 and 120 minutes. We conclude that distinct venoms interfered differently in the intensity of each functional and hematological response. In addition, we postulate that macrophages maybe partially responsible for these alterations. Further studies should be evaluated for the use of venoms as fungicides. / Os acidentes ofídicos de serpentes representam um sério problema de Saúde Pública nos países tropicais, tanto pela freqüência com que ocorrem e/ou pela morbi-mortalidade que ocasionam. As serpentes do gênero Crotalus estão representadas no Brasil pela espécie Crotalus durissus, a qual se divide em seis subespécies. Nosso trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos dos venenos das serpentes Crotalus durissus cascavella originadas do estado do Ceará (Cdcc) e Maranhão (Cdcm); Crotalus durissus collilineatus (Cdcol); Crotalus durissus ruruima (Cdru) e suas frações, Crotoxina (CTXru) e Fosfolipase A2 (PLA2ru), nos processos biológicos de espraiamento celular, fagocitose, atividade fungicida e alterações hematológicas. Camundongos Swiss, machos, foram inoculados por via intraperitonial com os venenos descritos acima, nas doses de 120, 50, 27, 20 (venenos) e 10µg/Kg (frações), respectivamente. Duas horas após inoculação foram coletadas amostras de sangue do plexo orbital e o exsudato peritonial. A análise estatística utilizada foi o teste t de Student com significância de 95%. Os animais tratados foram comparados com o grupo controle (inoculados com salina 0,9%). Cdcm e a CTXru causaram as maiores alterações no eritrograma. 37,5% dos eritrócitos apresentaram morfologia macrocítica e microcítica; 25,5% hipocrômia; 25% com anisocitose e presença de policromasia. Foram observados 16,8% de corpúsculos de Howell Jolly. A contagem global de leucócitos foi reduzida significantemente após administração do Cdcc (82,9%), Cdcm (70,1%) e Cdru (83,8%). A celularidade foi alterada depois da inoculação de Cdcc, Cdru e CTXru, em todos os tipos de células. A contagem global de células do peritônio aumentou após inoculação de Cdcc, Cdcol, Cdru e a CTXru. Em adição, o macrófago foi à célula predominante na contagem diferencial de células peritoniais, contudo, somente a Cdcol apresentou significância estatística para macrófago (62,3%). Foi encontrada redução significativa do espraiamento celular depois da administração de todos os venenos variando de 52,7 a 65,7%. A fagocitose foi estatisticamente reduzida pela Cdcc nos períodos de 30, 60, 90 e 120 minutos. Cdru reduziu a fagocitose apenas em 30, 60 e 120 minutos, Cdcm em 30 e 90 minutos e CTXru nos tempos de 60 e 120 minutos. A Cdcol, e a CTXru mostraram significância na atividade fungicida contra C. albicans nos períodos de 30, 60, 90 e 120 minutos, mas a Cdcc mostrou resultado similar em 60, 90 e 120 minutos. Conclui-se que o veneno interfere diferentemente na resposta hematológica e funcional. Em adição pode-se postular que os macrófagos foram responsáveis por estas alterações. Estudos futuros deverão ser realizados na perspectiva da identificação de provável ação fungicida de venenos ofídicos e suas frações.

Orientador: Fernando Ferreira Costa, Nicola Conran Zorzetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T23:23:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Canalli_AndreiaAverci_M.pdf: 2541856 bytes, checksum: 4a5f854727702c9e74f05f113fe6ac82 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A hemoglobina S (HbS) é decorrente de uma mutação de ponto que ocasiona a troca do ácido glutâmico pela valina na cadeia polipeptídica da globina beta. Em homozigose, esta alteração genética acarreta a anemia falciforme, que se caracteriza por anemia hemolítica não imune e fenômenos vaso-oclusivos, seguidos de lesões a órgãos alvos, responsáveis pela morbi-mortalidade associada a esta doença. O fenômeno vasooclusivo é associado ao processo inflamatório desencadeado pela polimerização da HbS desoxigenada, favorecendo a impactação das hemácias na microcirculação e subsequente obstrução da luz do endotélio. As integrinas, complexos glicoprotéicos localizadas nas superncies dos leucócitos e células endoteliais, modulam, em parte, as interações moleculares e intercelulares desencadeadas pela reação inflamatória, e são responsáveis pela adesão dos elementos figurados do sangue ao endotélio. Neste estudo nós investigamos o papel dos eosinófilos na anemia falciforme. Análises de amostras de sangue periférico de pacientes com anemia falciforme (AF) demonstraram que o valor absoluto do número de eosinófilos estava três vezes maior no sangue periférico destes pacientes comparados aos indivíduos normais. Adicionalmente, eosinófilos isolados do sangue periférico de pacientes com AF demonstrou significativamentemaior adesão (aproximadamente 70%) para fibronectina (FN) que os eosinófilos de indivíduos normais em ensaios "in vitro" de adesão estática. Co-incubacão de eosinófilos com anticorpos monoclonais específicos para bloqueio da adesão mostrou que as integrinas VLA-4, LFA-I e Mac-l estão envolvidas na adesão de eosinófilos normais e de pacientes falciformes pela fibronectina . A expressão destas integrinas, foi inalterada na supercífie dos eosinófilos dos pacientes falciformes, sugerindo que o aumento da adesão nos pacientes com AF é preferencialmente consequência de aumento da afinidade ou avidez das integrinas do que da expressão. A adesão pela fibronectina nos eosinófilos de pacientes com AF foi aumentada pela citocina GM-CSF, indicando que alguma alteração nos níveis de GM-CSF durante o processo de inflamação pode preferivelmente estimular a adesão dos eosinófilos nestes pacientes. Em contraste, o GMCSF não alterou a adesão dos eosinófilos normais à fibronectina. Em conclusão, nós apresentamos a primeira evidência experimental para demonstrar que os eosinófilos podem participar no processo de vaso-oclusão de pacientes com anemia falciforme. Estudos adicionais poderão ser necessários para determinar a extensa contribuição destas células neste fenômeno / Abstract: A role for leukocytes in vasoocclusion is becoming increasingly recognized. Here we investigate a possible role for the eosinophil in sicklecell anemia (SCA). Analysis of whole blood samples of 59 steady-state SCA patients demonstrated that absolute eosinophil numbers were significantly elevated in these individuaIs. Furthermore, eosinophils isolated from a random selection of these SCA patients demonstrated a significantlygreater adhesion (~70 % increased) to fibronectin (FN) than normal eosinophils in static adhesion assays. Co-incubation of eosinophils with integrin-blocking monoclonal antibodies in adhesion assays showed that an association of the VLA-4, LFA-I and Mac-I integrins mediate the adhesion of SCA eosinophils to FN. Flow cytometry demonstrated that the expression of these integrins, however, was unaltered on the surface of SCA eosinophils, suggesting that the increased SCA eosinophil adhesion is a consequence of increased integrin affinity or avidity. SCA eosinophil adhesion to FN was further increased by the cytokine, GM-CSF, indicating that inflammation processes may further stimulate eosinophil adhesion in these patients. In conc1usion,we report that eosinophil numbers may be significantly increased in SCA individuaIs and that these cells appear to exist in an activated state. Such alterations may indicate a role for the eosinophil in the vasooclusive process / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

O câncer de mama é a neoplasia mais comum entre as mulheres. Existem diversos fatores que estão associados ao desenvolvimento desta neoplasia, que tem etiologia multifatorial e pode se originar de uma combinação de fatores genéticos, hormonais e ambientais. Este estudo teve como objetivo investigar a relação entre níveis séricos de adipocinas e moléculas de adesão com fatores antropométricos e bioquímicos em mulheres com e sem câncer de mama. Participaram do estudo 47 mulheres com câncer de mama e 145 sem a neoplasia. As mulheres com câncer de mama tiveram menos filhos e amamentaram por menos tempo. Encontrou-se correlação inversa para índice de massa corporal (IMC) e circunferência da cintura (CC) com HDL-colesterol em todas as participantes. Adiponectina correlacionou-se inversamente com todas as medidas antropométricas apenas nas mulheres com câncer de mama. PAI-1 correlacionouse diretamente com CC e relação cintura-quadril nas mulheres com a neoplasia. VCAM-1 apresentou correlação inversa com IMC e CC nas mulheres sem câncer de mama, enquanto que a glicemia de jejum teve correlação direta com estas medidas. Para cada aumento de 1ng/ml de adiponectina, PAI-1 e ICAM-1 ocorre, respectivamente, aumento de 0,8%, 5,2% e 4,3% no risco de desenvolver câncer de mama. Assim, mulheres com câncer de mama apresentam níveis séricos elevados de adiponectina, PAI-1, VCAM-1 e ICAM-1, apesar de terem médias de IMC menores. / Breast cancer is the most common neoplasia among women. There are several factors that are associated with the development of this neoplasia, which has a multifactoral etiology and can arise from a combination of genetic, hormonal and environmental factors. This study aimed to investigate the relationship between serum levels of adipokines and adhesion molecules with anthropometric and biochemical factors in women with and without breast cancer. 47 women with breast cancer and 145 without neoplasia participated in the study. Women with breast cancer had fewer children and breastfed for less time. We found an inverse correlation for body mass index (BMI) and waist circumference (WC) with HDL cholesterol in all participants. Adiponectin was inversely correlated with all anthropometric measures only in women with breast cancer. PAI-1 was directly correlated with WC and WHR in women with neoplasia. VCAM-1 was inversely correlated with BMI and WC in women without breast cancer, while fasting glycemia had a direct correlation with these measures. For every 1ng/ml increase of adiponectin, PAI-1 and ICAM-1 there is, respectively, an increase of 0.8%, 5.2% and 4.3% in risk of developing breast cancer. Therefore, women with breast cancer have high serum levels of adiponectin, PAI-1, VCAM-1 and ICAM-1, despite having lower BMI mean.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2011. / Submitted by Juliane Alves (juliane_570@hotmail.com) on 2012-04-05T18:58:22Z No. of bitstreams: 1 2011_VitórioCamposdaSilva.pdf: 3279628 bytes, checksum: 49f1f7cd5a12944901cf37c8f07ae3a6 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2012-04-10T18:43:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_VitórioCamposdaSilva.pdf: 3279628 bytes, checksum: 49f1f7cd5a12944901cf37c8f07ae3a6 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-10T18:43:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_VitórioCamposdaSilva.pdf: 3279628 bytes, checksum: 49f1f7cd5a12944901cf37c8f07ae3a6 (MD5) / A estabilidade do titânio (Ti) e sua alta resistência à corrosão, fizeram do mesmo o elemento de escolha na implantodontia e estão relacionadas, dentre outros fatores, com a camada natural de óxido na sua superfície. Vários tratamentos tem sido utilizados para modificar sua topografia e energia de superfície, no intuito de promover melhor adesão, migração e proliferação celular, diminuindo o tempo necessário para a osteointegração. Diferentes superfícies provavelmente influenciam de maneira distinta a resposta inflamatória e eventos celulares como ativação de leucócitos, cicatrização e osteogênese. A adesão de plaquetas e geração de fibrina, bem como a ativação do sistema complemento, resultam na ativação e recrutamento de neutrófilos. Durante a colocação de um implante, a adsorção de pequenos íons e proteínas plasmáticas ocorre na superfície, sendo responsável por subseqüentes respostas celulares. Portanto, a compreensão do papel dos neutrófilos humanos nas interações que ocorrem nas superfícies implantares, e a influencia da composição elementar bem como, dos diversos tratamentos aplicados a essas superfícies é de grande importância. A otimização para uso clínico dos materiais utilizados na confecção de implantes requer modificações controladas de suas superfícies. No presente, as relações entre tais superfícies e sua reatividade com os tecidos, bem como sua integridade a longo prazo, são pouco conhecidos. O objetivo do presente estudo foi comparar a resposta de neutrófilos interagindo diretamente com duas distintas superfícies de Ti em diferentes tempos de incubação. Neutrófilos humanos foram separados e colocados em contato com discos de Ti, lisos e rugosos. Para a análise da adesão celular foram utilizadas a microscopia eletrônica de varredura (MEV) e a citometria de fluxo (Facs). A morfologia e o resultado do uso de marcadores de adesão revelaram sinais de ativação dos neutrófilos por ambas as superfícies. As características morfológicas nas duas superfícies mostraram progressivas alterações durante os primeiros 120 minutos da interação. Utilizou-se também a microscopia de fluorescência e marcadores como o Dapi, Faloidina e anti CD-62L para caracterizar, respectivamente, o núcleo celular, o citoesqueleto actínico e receptores de membrana. Não houve correlação entre a força de adesão, alterações morfológicas, complexidade do citoesqueleto e expressão dos marcadores CD-62L e CD-11b, considerados, após os tempos de interação das células com as superfícies. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The stability and high corrosion-resistance of the titanium (Ti) makes it, the element of choice in implantology and its related, among other factors, with the natural oxide layer that covers the Ti surface. Many treatments have been used to modify its topography and surface energy in order to promote better cell adhesion, migration and proliferation shortening the time necessary to the osseointegration. Different surfaces probably influence distinctly the inflammatory responses and cellular events as leukocyte activation, healing and osteogenesis. The platelet adhesion and fibrin generation as well as the complement activation results in the neutrophil recruitment and activation. At the time of an implant placement plasma proteins and ions adsorb to the surface and are responsible for subsequent cellular responses. So the comprehension of the human neutrophils role on the interactions network that occurs on the implant surfaces and the influence of the elemental composition as well as different surface treatments applied are of great importance. The optimization for clinical use of the materials used to construct implants need controlled modifications on its surfaces. At the present the relationship between these surfaces and its reactivity with tissues for a long period of time are little known. The aim of the present study was to compare the response of neutrophils interacting with two different Ti surfaces and different time contact. Isolated human neutrophils were placed into contact with Ti discs, which had been rendered as “smooth” or “rough” following different surface treatments. Scanning electron microscopy and flow cytometry were used to analize the cell adhesion to the surfaces and the exposure of membrane proteins such as CD-62L and CD-11b. Topographic roughness was demonstrated as higher for the SLA treated surfaces, measured by atomic force microscopy and elemental analysis was performed by energy dispersive X-ray, showing a similar composition for both surfaces. The cell morphology and adhesion marker results revealed signs of neutrophil activation by either surface, with different neutrophil morphological characteristics being observed between the 2 surface types and progressive morphologic changes during the first 120 min of interaction. Topoghrafic analyses were also performed by the use of atomic force microscopy. Fluorescence microscopy (AFM) and markers as Dapi, Faloidin and CD 62L were also utilized in order to characterize the cellular nucleous, actin cytoskeleton and membrane receptors. There is no correlation between adhesive forces, morphologycal changes, citoskeletal complexity and marker expression as anti CD-62L or CD-11b on the evaluated interaction time of the cells with the surfaces.

O câncer de mama é a neoplasia mais comum entre as mulheres. Existem diversos fatores que estão associados ao desenvolvimento desta neoplasia, que tem etiologia multifatorial e pode se originar de uma combinação de fatores genéticos, hormonais e ambientais. Este estudo teve como objetivo investigar a relação entre níveis séricos de adipocinas e moléculas de adesão com fatores antropométricos e bioquímicos em mulheres com e sem câncer de mama. Participaram do estudo 47 mulheres com câncer de mama e 145 sem a neoplasia. As mulheres com câncer de mama tiveram menos filhos e amamentaram por menos tempo. Encontrou-se correlação inversa para índice de massa corporal (IMC) e circunferência da cintura (CC) com HDL-colesterol em todas as participantes. Adiponectina correlacionou-se inversamente com todas as medidas antropométricas apenas nas mulheres com câncer de mama. PAI-1 correlacionouse diretamente com CC e relação cintura-quadril nas mulheres com a neoplasia. VCAM-1 apresentou correlação inversa com IMC e CC nas mulheres sem câncer de mama, enquanto que a glicemia de jejum teve correlação direta com estas medidas. Para cada aumento de 1ng/ml de adiponectina, PAI-1 e ICAM-1 ocorre, respectivamente, aumento de 0,8%, 5,2% e 4,3% no risco de desenvolver câncer de mama. Assim, mulheres com câncer de mama apresentam níveis séricos elevados de adiponectina, PAI-1, VCAM-1 e ICAM-1, apesar de terem médias de IMC menores. / Breast cancer is the most common neoplasia among women. There are several factors that are associated with the development of this neoplasia, which has a multifactoral etiology and can arise from a combination of genetic, hormonal and environmental factors. This study aimed to investigate the relationship between serum levels of adipokines and adhesion molecules with anthropometric and biochemical factors in women with and without breast cancer. 47 women with breast cancer and 145 without neoplasia participated in the study. Women with breast cancer had fewer children and breastfed for less time. We found an inverse correlation for body mass index (BMI) and waist circumference (WC) with HDL cholesterol in all participants. Adiponectin was inversely correlated with all anthropometric measures only in women with breast cancer. PAI-1 was directly correlated with WC and WHR in women with neoplasia. VCAM-1 was inversely correlated with BMI and WC in women without breast cancer, while fasting glycemia had a direct correlation with these measures. For every 1ng/ml increase of adiponectin, PAI-1 and ICAM-1 there is, respectively, an increase of 0.8%, 5.2% and 4.3% in risk of developing breast cancer. Therefore, women with breast cancer have high serum levels of adiponectin, PAI-1, VCAM-1 and ICAM-1, despite having lower BMI mean.

O câncer de mama é a neoplasia mais comum entre as mulheres. Existem diversos fatores que estão associados ao desenvolvimento desta neoplasia, que tem etiologia multifatorial e pode se originar de uma combinação de fatores genéticos, hormonais e ambientais. Este estudo teve como objetivo investigar a relação entre níveis séricos de adipocinas e moléculas de adesão com fatores antropométricos e bioquímicos em mulheres com e sem câncer de mama. Participaram do estudo 47 mulheres com câncer de mama e 145 sem a neoplasia. As mulheres com câncer de mama tiveram menos filhos e amamentaram por menos tempo. Encontrou-se correlação inversa para índice de massa corporal (IMC) e circunferência da cintura (CC) com HDL-colesterol em todas as participantes. Adiponectina correlacionou-se inversamente com todas as medidas antropométricas apenas nas mulheres com câncer de mama. PAI-1 correlacionouse diretamente com CC e relação cintura-quadril nas mulheres com a neoplasia. VCAM-1 apresentou correlação inversa com IMC e CC nas mulheres sem câncer de mama, enquanto que a glicemia de jejum teve correlação direta com estas medidas. Para cada aumento de 1ng/ml de adiponectina, PAI-1 e ICAM-1 ocorre, respectivamente, aumento de 0,8%, 5,2% e 4,3% no risco de desenvolver câncer de mama. Assim, mulheres com câncer de mama apresentam níveis séricos elevados de adiponectina, PAI-1, VCAM-1 e ICAM-1, apesar de terem médias de IMC menores. / Breast cancer is the most common neoplasia among women. There are several factors that are associated with the development of this neoplasia, which has a multifactoral etiology and can arise from a combination of genetic, hormonal and environmental factors. This study aimed to investigate the relationship between serum levels of adipokines and adhesion molecules with anthropometric and biochemical factors in women with and without breast cancer. 47 women with breast cancer and 145 without neoplasia participated in the study. Women with breast cancer had fewer children and breastfed for less time. We found an inverse correlation for body mass index (BMI) and waist circumference (WC) with HDL cholesterol in all participants. Adiponectin was inversely correlated with all anthropometric measures only in women with breast cancer. PAI-1 was directly correlated with WC and WHR in women with neoplasia. VCAM-1 was inversely correlated with BMI and WC in women without breast cancer, while fasting glycemia had a direct correlation with these measures. For every 1ng/ml increase of adiponectin, PAI-1 and ICAM-1 there is, respectively, an increase of 0.8%, 5.2% and 4.3% in risk of developing breast cancer. Therefore, women with breast cancer have high serum levels of adiponectin, PAI-1, VCAM-1 and ICAM-1, despite having lower BMI mean.

Orientadores: Fatima Aparecida Bottcher Luiz, Liliana Aparecida Lucci De Angelo Andrade / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_FrancesRoveri_M.pdf: 1209081 bytes, checksum: 21eb4d322e727b922989a2628412e24d (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Mudanças no padrão de expressão das moléculas de adesão são observadas no desenvolvimento tumoral em diferentes tipos de câncer, estando relacionadas com invasão e metástase. O objetivo deste estudo foi analisar e comparar os padrões de expressão de a- e b-cateninas, E- e N-caderinas em tumores malignos e benignos do epitélio ovariano de superfície, visando estabelecer possíveis correlações entre a expressão destas moléculas, o estádio tumoral e a manifestação de metástases, nas neoplasias malignas. Preparações de imunoistoquímica foram obtidas a partir de 88 biópsias (39 benignas e 49 malignas) incluídas em parafina, procedentes de mulheres submetidas à cirurgia para retirada dos ovários no período de 1993 a 2001, no hospital da Universidade Estadual de Campinas. Estas foram avaliadas segundo o número de células positivas, as estruturas celulares e a intensidade da reação para cada uma das moléculas analisadas. Os resultados mostraram que a maioria dos tumores malignos apresentou reações imunoistoquímicas de maior intensidade (p=0,01) para b-catenina, além de maior número de células positivas para a-catenina (p=0,04). Os carcinomas endometrióides apresentaram expressão aumentada de b-catenina, tanto em número de células positivas (p=0,04) como também na intensidade das reações (p=0,01). Os tumores malignos onde a marcação para E-caderina manteve-se preservada na membrana corresponderam aos casos que não evoluíram para metástases, enquanto os tumores malignos que apresentaram expressão nula ou restrita ao citoplasma, para esta proteína, evoluíram como recidivas da doença (p=0.04). Considerando estes dados, a E-caderina pode ser um bom marcador de prognóstico para câncer de ovário. Paralelamente, a expressão de b- e a-cateninas aparece estatisticamente aumentada nos tumores malignos, sugerindo a possível utilização destes como marcadores discriminantes de malignidade. Quanto à N-caderina, os dados mostraram que a expressão desta está relacionada mais precisamente ao tipo histológico dos tumores, do que com o estádio tumoral ou evolução dos casos / Abstract: Changes in the expression pattern of the adhesion molecules are observed in the malignant development of different types of cancer, being related with tumor cell invasion and metastasis. The aim of this study was to analyze and compare the expression patterns of a- and b-catenins, E- and N-cadherins in benign and malignant tumors of the ovarian surface epithelium, trying to establish possible correlations between the expression of these molecules, the tumor staging and the manifestation of metastasis in the malignant neoplasias. Immunohistochemical preparations, obtained from 88 paraffin-embedded biopsies (39 benign and 49 malignant) taken from women who underwent surgery for the resection of the ovaries from 1993 to 2001, in the hospital of the State University of Campinas. These samples were evaluated accordingly to the number of positive cells, stained cellular structures and reaction intensity for each one of the analyzed molecules. The results showed that most of the malignant tumors presented more intense b-catenin immunoreactions (p=0,01) and also a bigger number of a-catenin positive cells (p=0,04). Endometrioid carcinomas presented increased expression of b-catenin, in number of positive cells (p=0,04) and in the intensity of the immunoreactions (p=0,01). Malignant tumors where the E-cadherin staining was preserved in the membrane showed no metastasis, whereas E-cadherin negative cases or cases which presented E-cadherin expression just in the cytoplasm had metastasis in their evolution (p= 0,04). Considering these results, E-cadherin might be a marker of prognosis value in ovarian cancer. In addition, the increased expression of b- and a-catenin in malignant ovarian tumors suggests the use of these molecules as markers of malignancy. This data also showed that the N-cadherin expression was correlated with different histologic ovarian tumor types, but not with tumor staging or case evolution / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-11-27T18:25:19Z No. of bitstreams: 1 Djalma Gomes Ferrão Carvalhal Um ensaio de adesao... 2001.pdf: 31649822 bytes, checksum: cea5fde124b280c0b60a4b69bc0b6cb3 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-27T18:25:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Djalma Gomes Ferrão Carvalhal Um ensaio de adesao... 2001.pdf: 31649822 bytes, checksum: cea5fde124b280c0b60a4b69bc0b6cb3 (MD5) Previous issue date: 2001 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O objetivo deste trabalho é desenvolver um ensaio de adesão, baseado no ensaio de Stamper- Woodruff, para o estudo das interações entre macrófagos e matriz conjuntiva. Foram induzidos bolsões inflamatórios em camundongos da linhagem BALB/c para obtenção de secções de pele inflamada, e células macrofágicas da linhagem J774G.8 foram utilizadas na padronização do ensaio. Secções de 7 i^m de espessura foram colocadas em lâminas de vidro, fixadas com acetona e bloqueadas com BSA. Foi estabelecida a concentração de 10® células/100 fil como a mais apropriada para a realização do ensaio, através de diluições seriadas. Células J774G.8 sem tratamento prévio ou tratadas com: ácido tetraacético diamino etileno, Mn++, lipopolissacarídeo, forbol miristato acetato, zimosan, os peptídios CS-1 e RGD, os anticorpos anti-CD49d ou contra a cadeia (32 de integrinas, foram adicionadas ás secções e incubadas por 30 minutos á temperatura ambiente. Como resultado, as células macrofágicas aderem preferencialmente ás áreas de inflamação. A adesão das células é dependente de cátions divalentes e pode ser modulada por substâncias que promovam a ativação celular. Além disso, a adesão mediada por integrinas pode ser inibida por peptídios RGD e CS-1 ou com anticorpos contra integrinas da família (31 e (32. A adesão das células macrofágicas é inibida mais intensivamente pela infecção com Leishmania mas não com a infecção por Mycobacterium ou por fagocitose de partículas de látex. Desta forma, o ensaio desenvolvido foi capaz de demonstrar a especificidade da adesão de células macrofágicas pela matriz conjuntiva bem como de sugerir a existência de mecanismos específicos de regulação das interações entre macrófagos e a matriz conjuntiva durante a infecção por Leishmania. / The aim of this work was to develop an adhesion assay, based on the Stamper-Woodruff’s assay to study the interactions between macrophages and the connective matrix. Inflammatory pouches were produced in BALB/c mice to obtain inflammed skin sections, and J774G.8 macrophage cell line was applied to standardize the assay. Sections of 7|im thick were placed onto glass slides, fixed with acetone and blocked with bovine serum albumin. The cell concentration of 10®/100 |xl was proved to be most appropriate for the assay, through serial dilutions. J774G.8 cells, with or without ethylene diamine tetraacetic acid, Mn'"'", Lipopolysaccharide, phorbol myristate acetate, zymosan, CS- 1, RGD peptide, antibodies anti-CD49d or against (32 chain integrin treatment, were added onto the sections and incubated for 30 minutes at room temperature. Macrophage cells adhered preferentially to inflammed areas. The adhesion of cells was dependent on divalent ions and could be modulated by substances that promote cell activation. Moreover, the adhesion mediated by integrin can be inhibited either by RGD or CS-1 peptides or by antibodies against integrins of the |31 or |32 sub-family. Adhesion of macrophage cells was intensively inhibited by infection with Leishmania and was not affected by infection with Mycobacterium or by endocytosis of latex beads. Thus, the developed assay was able to show the specific adhesion of macrophages to connective matrix, as well to illustrate a specific downregulation of macrophage adhesion to inflammed skin in Leishmania infection.

Objetivo: As moléculas de adesão celular (MAC) são essenciais para a manutenção do fenótipo epitelial. Alguns estudos têm relatado associação entre as alterações de sua expressão e a carcinogênese, mas o seu papel no câncer de próstata não é claro. Nosso objetivo foi estudar o perfil de expressão de E-caderina, cateninas e integrinas em espécimes cirúrgicos de câncer de próstata e associar as suas expressões com a evolução do tumor. Avaliamos também o perfil de expressão em metástases ósseas e linfonodais, a fim de compreender a influência destes marcadores na progressão do câncer de próstata. Materiais e Métodos: Foram selecionados 111 pacientes com câncer de próstata localizado tratados com prostatectomia radical pelo mesmo cirurgião. Sessenta pacientes não apresentaram recidiva tumoral após acompanhamento médio de 123 meses. A expressão das MAC foi avaliada por imuno-histoquímica (IH) em microarranjo tecidual (TMA), contendo duas amostras de cada tumor. Empregamos análise semiquantitativa para avaliação da expressão e determinamos a associação entre a expressão de cada MAC com a recorrência do tumor após a cirurgia. Avaliamos também a expressão das MAC por IH em TMA contendo espécimes de 28 metástases ósseas e em outro TMA contendo 19 metástases linfonodais com seus 19 tumores primários correspondentes. Resultados: Nos tumores primários a análise multivariada mostrou que a expressão das integrinas 3 e 3 1 relaciona-se com recidiva da doença. Quando a expressão de 3 foi forte e a expressão de 3 1 foi positiva, as chances de recorrência foram de 3,0 e 2,5 vezes maior. Apenas 19% e 28% dos pacientes estavam livres de recidiva após seguimento médio de 123 meses, quando os tumores apresentavam forte imunoexpressão de 3 ou positiva para 3 1 respectivamente. Outras integrinas apresentaram expressão reduzida, exceto 6 que foi expressa pela maioria dos tumores primário e metástases. A E-Caderina e as cateninas não mostraram associação com o prognóstico no tumor de próstata localizado. No sítio metastático, houve perda global de expressão das MAC. Encontramos ganho de expressão com a progressão do câncer de próstata somente para a integrina 3 que mostrou forte expressão em metade das metástases ósseas e linfonodais. Encontramos forte expressão de e -catenina foi em 94% dos linfonodos e 45% Conclusões: Nossos experimentos demonstram que a expressão das integrinas 3 e 3 1 está independentemente associada à recidiva de câncer de próstata após prostatectomia radical, e que a perda das moléculas de adesão celular pode ser considerada uma característica da progressão desta neoplasia / Purpose: Cell adhesion molecules (CAM) are essential for the maintenance of epithelial phenotype. Some studies have reported correlations between abnormalities in their expression and carcinogenesis, but their role in prostate cancer is unclear. Our aim was to study the expression profile of E-cadherin, catenins and integrins in surgical specimens of prostate cancer and associate their expression with outcome. We also assessed these expressions in bone and lymph node metastases in order to understand their influence in the progression of prostate cancer. Materials and Methods: We selected 111 patients with localized prostate cancer who underwent radical prostatectomy performed by the same surgeon. Sixty patients had no tumor recurrence after a median follow-up of 123 months. The CAM expression was evaluated by immunohistochemistry in a tissue microarray (TMA) containing two samples of each tumor. A semiquantitative analysis was employed and we measured the association between the expression of CAM and tumor recurrence. We also evaluated CAM expression by immunohistochemistry in a TMA containing 28 bone metastases and in other TMA containing 19 lymph node metastases with their corresponding 19 primary tumors. Results: In primary tumors, multivariate analysis showed that expression of 3 and 31 integrins was related to worse outcome. When 3 expression was strong and 31 expression was positive,the odds of recurrence were 3.0 and 2.5 fold higher. Only 19% and 28% of patients were recurrence-free in a mean follow up period of 123 months, when tumors showed strong 3 or positive 31 immuno-expression respectively. Other integrins have shown reduced expression, except 6 , which was expressed in most primary and metastatic cases. E-cadherin and catenins expressions were not associated with primary tumor outcome. At the metastatic setting, there was a global loss of CAM expression. We observed reliable gain of expression with prostate cancer progression only for integrin 3 that showed strong expression in half of bone and lymph node metastases. Interestingly, strong expression of and -catenin was observed in 94% of lymph node and 45% of bone metastases. Conclusions: We have demonstrated that the expression of integrins 3 and 31 was independently associated with recurrence after radical prostatectomy. In addition, we have shown that the loss of cell adhesion molecules can be considered a characteristic of prostate cancer progression

Melanoma primário da mucosa oral (MPMO) é um tumor raro e agressivo. Estudos recentes demonstraram uma correlação entre o aumento da invasão tumoral e o fenótipo metastático com uma alteração no padrão de expressão das moléculas de adesão. Neste estudo analisamos a expressão de integrinas e imunoglobulinas nos melanomas primários da mucosa oral e relacionamos os resultados com os parâmetros clínicos. As análises imunoistoquímicas dos padrões de expressão destas moléculas foram realizadas em 35 casos de melanomas primários da mucosa oral, e os resultados foram correlacionados com características clínicas e histológicas. Observou-se que a subunidade beta-4 de integrina foi negativa em casos com invasão vascular. A presença de integrina beta-3 e de CD166 (ALCAM) estavam estatisticamente associadas à extensa invasão vascular (p < 0,05). A menor expressão de CD54 (ICAM) foi marginalmente relacionada a casos com necrose extensa, enquanto a maioria dos casos com doença metastática foi negativa para CD66 (CEACAM). Conclusão: padrões alterados de expressão de moléculas de adesão, principalmente integrinas e imunoglobulinas, podem participar da patogênese e do desenvolvimento dos melanomas primários da mucosa oral / Primary oral mucosal melanoma is a rare and an aggressive tumor. Recent studies have demonstrated the correlation among increased tumor invasion, the metastatic phenotype and altered adhesion molecule expression profiles. The present study analyzed the expression of integrins and immunoglobulin-like adhesion molecules in oral mucosal melanomas and correlated results with clinical parameters. Immunohistochemical analyses of their expression patterns were performed on thirty-five cases of primary oral mucosal melanomas. The results were correlated with clinical and histological features of the cohort. The beta-4 subunit of integrin was negative and this was related with vascular invasion. Positivity of integrin beta-3 and CD166 (ALCAM) was statistically associated with extensive vascular invasion (p < 0.05). Lower expression of CD54 (ICAM) was associated with cases with extensive necrosis. Most cases with metastatic disease were negative for CD66 (CEACAM). Conclusion: Altered patterns of adhesion molecule expression, mainly integrins and immunoglobulin-like proteins, may participate in the pathogenesis and outcome of primary oral mucosal melanomas