La présence d’hydrocarbures dans l’environnement que ce soit suite à un déversement accidentel de pétrole en mer ou suite à des apports chroniques, est une préoccupation majeure en raison de leur écotoxicité et de leur potentiel à être bioaccumulés, et ainsi, pénétrer la chaîne alimentaire. Par conséquent, ces molécules sont sous haute surveillance et il est nécessaire de disposer de méthodes analytiques permettant de les identifier et de les quantifier, et ceci, pour des concentrations allant du mg/L au ng/L. Cependant et dans la plupart des cas, les analyses en laboratoire des hydrocarbures, notamment aromatiques, se limitent à la quantification des 16 hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP) identifiés par l’Agence américaine de Protection Environnementale (US-EPA) comme étant dangereux pour l’environnement du fait de leur caractère cancérigène. Or, les hydrocarbures aromatiques polycycliques soufrés (HAPS) ainsi que leurs homologues substitués sont, sur le plan chimique, structurellement proches des HAP, et peuvent donc présenter des risques environnementaux similaires, à savoir être cancérigènes ou mutagènes. Le travail de recherche réalisé s’inscrit dans ce contexte avec pour objectif des développements méthodologiques permettant l’extraction et l’analyse d’une gamme plus large de HAP, des HAPS et leurs dérivés alkylés directement dans les produits pétroliers ou dissous en phase aqueuse. Des protocoles d’extraction par "stir bar sorptive extraction" (SBSE) et par microextraction sur phase solide (SPME), et des méthodes d’analyse par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse simple (GC-MS) et en tandem (GC-MS-MS) ont été développés. Les résultats obtenus plaident en faveur de ces méthodologies aussi bien en termes de linéarité de la réponse qu’en termes de sensibilité, méthodologies qui ont été appliquées avec succès pour la détermination des analytes d’intérêt dans des fractions solubles préparées au laboratoire (WAF et WSF). Pour la CG-MS-MS, si elle se révèle particulièrement adaptée car elle apporte un degré de certitude élevé, elle n’en reste pas moins une technique délicate à mettre en oeuvre, notamment dans le cas des composés alkylés pour lesquels des solutions étalons ne sont pas disponibles. Pour pallier cette difficulté, un produit de référence contenant l’ensemble des analytes d’intérêt a été caractérisé. Pour les composés alkylés non disponibles commercialement, des appro-ximations ont été effectuées par MS simple en se basant sur une analyse comparée des coefficients de réponse en mode MRM et SIM. La méthodologie ainsi mise au point a permis de caractériser le fioul de l’Erika avec une faible variabilité des résultats. Ce produit peut servir de référence pour l’analyse quantitative de l’ensemble des familles de composés identifiés dans cette étude. / The presence of hydrocarbons in the environment either as a result of oil spills at sea or due to chronic discharge is a major concern because of their ecotoxicity and their potential to bioaccumulate and thus enter the food chain. Therefore, these molecules are closely monitored and reliable analytical methods are required to identify and quantify them, for concentrations ranging from mg/L to ng/L. However, in most cases, laboratory analyses of hydrocarbons, especially aromatic hydrocarbons, are limited to the quantification of 16 polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) identified by the U.S. Environmental Protection Agency (U.S. EPA) as hazardous to the environment due to their carcinogenic nature. However, polycyclic aromatic sulphur heterocycles (PASHs) and their substituted homologs are, in chemical terms, structurally similar to PAHs, and therefore can pose similar environmental risks, i.e. they can be carcinogenic or mutagenic. In this context, the research work carried out aims to develop methodologies for the extraction and analysis of a wider range of PAHs, PASHs and their alkyl derivatives directly in oil or dissolved in the aqueous phase. Extraction protocols by stir bar sorptive extraction (SBSE) and solid phase microextraction (SPME), and methods of analysis by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC-MS) and with tandem mass spectrometry (GC-MS-MS) have been developed. The results argue in favor of these methodologies both in terms of linearity of the response and in terms of sensitivity. These methodologies that have been successfully applied for the determination of analytes of interest in the water accommodated fraction and water soluble fraction prepared in the laboratory (WAF and WSF). For GC-MS-MS, while it is particularly suitable because it provides an additional level of selectivity, it is a difficult technique to implement, in particular in the case of molecules for which no calibration solutions are available. To overcome this difficulty, a reference oil containing all the target molecules was characterized. For alkylated compounds that are not commercially available, approximations were made by simple MS, based on comparative analysis of response coefficients in MRM (Multiple Reaction Monitoring) and SIM (Single Ion Monitoring) modes. The finalized method was used to characterize the Erika fuel oil, with low variability in the results. This product can be used as a reference for the quantitative analysis of all the families of molecules identified in this study.

Les sulfonamides sont parmi les antibiotiques les plus couramment utilisés en élevage. Ils peuvent en effet, si leur utilisation n’est pas conduite de manière raisonnable, être une source de nombreux risques pour la santé publique. Au Liban, il n’existe pas à l’heure actuelle de règlementation fixant les limites de résidus des sulfonamides dans les tissus d'origine animale. En outre, aucune investigation sur la présence des résidus des sulfonamides sous leurs formes actives ou métabolisée dans les denrées animales n’a été menée. L'analyse d'une matrice complexe telle que la viande a nécessité la mise en œuvre d’une préparation d'échantillon rigoureuse afin obtenir une analyse reproductible, et suffisamment sensible pour atteindre les limites de détection requises. Cette thèse décrit le développement de deux méthodes analytiques pour la détermination de sulfonamides et de leurs métabolites à l’état de traces dans les tissus d’origine animale (bœuf, volaille, porc…). Elles sont basées sur une étape d'extraction utilisant la méthode QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe) suivie d'une analyse par HPLC couplée à un analyseur triple quadripôle MS/MS ou LTQ-Orbitrap Velos. Les performances analytiques de ces méthodes ont été évaluées et comparées. Les méthodes d’analyse ont été validées suivant les recommandations de la décision de l’UE (2002/657/EC) et lors d’une étude de validation inter-laboratoires organisée par FAPAS (Food Analysis Performance Assessment Scheme). Au vu des performances obtenues, une étude de contrôle a été réalisée sur les résidus des sulfonamides et de leurs métabolites dans plus de 300 échantillons de différents tissus d’origine animale dérivant de poulets de chair, bœufs, brebis et porcs collectés dans différentes régions d’élevage libanaises / Sulfonamides are amongst the most commonly used veterinary antibiotics. The uncontrolled exposure to sulfonamides upon consumption of meat products can be harmful to human health. In Lebanon, there are no current regulations that specify the safe levels of sulfonamides in animal products. In addition, no studies describing the presence of sulfonamides residues in their active or metabolized form in animal tissues exist. The analysis of residues at trace levels in complex matrices such as meat required the implementation of a rigorous sample preparation and analytical protocol that yields reproducible results at very low concentration levels. This thesis describes the development of two analytical methods for the determination of sulfonamides and their metabolites in animal tissues (e.g. poultry, sheep, pork) at trace levels. They are both based on an extraction step using QuEChERS extraction (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe) followed by HPLC. In terms of mass analysers the use of LTQ-Orbitrap Velos and triple quadrupole MS/MS was optimized and the figures of merit were compared. The analytical methods were validated according to the EU decision (2002/657 / EC) criteria and by the participation in an inter-laboratory validation study organized by FAPAS (Food Analysis Performance Assessment Scheme). The methods were applied to carry out a monitoring study to detect and quantify residues of sulfonamides and their metabolites in more than 300 different samples of animal tissues derived from poultry, beef, sheep and pork collected from different regions of Lebanon..

Les ions métalliques (Fe, Zn, Cu, Mn, Ni, Co, Mo…) jouent un rôle vital dans un grand nombre de processus biologiques. Leur carence et leur excès entraînent des défauts de croissance voire la mort. Pour survivre et croître, certaines bactéries ont développé des stratégies pour acquérir les métaux dans leur environnement basées sur la synthèse de ligands complexant les métaux. Les plantes, elles, stockent les métaux et les transportent entre les tissus sous des formes chimiques particulières et un rôle grandissant pour les petits complexes métalliques semble se révéler. La spéciation des métaux gouvernerait donc leur biodisponibilité pour les consommateurs en ce qui concerne les plantes comestibles. Cette thèse a pour but le développement de méthodes analytiques pour l’identification et la quantification des formes chimiques des métaux chez les bactéries et les plantes.Les techniques de séparation chromatographique, comme la chromatographie d’exclusion stérique (SEC) et la chromatographie d’interaction hydrophile (HILIC), furent couplées à la spectrométrie de masse (MS) avec une ionisation préalable par plasma induit (ICP MS) ou par électrospray pour une détection élémentaire et moléculaire respectivement. La méthodologie analytique développée ici, qui est basée sur l’utilisation de l’HILIC avec détection double par ICP MS et électrospray MS, s’est avérée cruciale pour la découverte et la caractérisation de deux nouveaux métallophores, la staphylopine chez Staphylococcus aureus et la pseudopaline chez Pseudomonas aeruginosa. Ces métallophores sont synthétisés et exportés par les bactéries et servent pour l’acquisition des métaux de transition divalents dans les milieux très pauvres en métaux grâce à leur pouvoir complexant.Des techniques dédiées de préparation d’échantillons, incluant le fractionnement des extraits solubles à l’eau, furent mises en place pour l’analyse du fer dans le maïs. Les approches instrumentales développées, notamment après le fractionnement du fer l’échantillon, permirent l’identification par spectrométrie de masse de complexes du fer avec le citrate, le muginéate et le phytate dans les grains de maïs. Il existe aussi une différence significative dans les concentrations de certaines polyamines entre certaines variétés de graines contenant du fer faiblement biodisponible et celles contenant du fer fortement biodisponible. La plus grande abondance de complexe fer-muginéate dans les extraits gastro-intestinaux des variétés à fer fortement biodisponible semblerait indiqué un rôle important pour ce complexe dans la biodisponibilité du fer. Finalement, des ratios molaires plus faibles entre le phytate extrait et le fer qui lui est associé sembleraient aussi être un des facteurs lié à une plus grande biodisponibilité du fer. / Metal (Fe, Zn, Cu, Mn, Ni, Co, Mo…) ions play a vital role in a large number of biological processes. Both their deficiency and excess will lead to severe growth impairment or death. In order to survive and to grow, bacteria developed strategies to acquire metals from the environment based on the synthesis of metal complexing ligands. Plants store metals and transport them between tissues in particular chemical forms and a rising role for small metal complexes seems to be revealed. Therefore their speciation governs the bioavailability of the metals to consumers in the case of edible plants. This thesis aims at the development of analytical methods for the identification and quantification of metal chemical forms in bacteria and in plants.Chromatographic separation techniques, such as size exclusion chromatography (SEC) and hydrophilic interaction chromatography (HILIC) were coupled to mass spectrometry (MS) using ionization in an inductively coupled plasma (ICP MS) or electrospray for elemental and molecular detection, respectively. The developed analytical methodology based on HILIC with dual ICP MS and electrospray MS detection turned out to be crucial for the discovery and characterization of two novels metallophores, staphylopine in Staphylococcus aureus and pseudopaline in Pseudomonas aeruginosa. These metallophores are synthesized and exported by the bacteria and serve for the uptake of divalent transition metal in metal scarce conditions by means of chelation. Dedicated samples preparation techniques, including fractionation of water soluble extracts, were developed for iron analyses in maize. The developed instrumental approaches following the iron fractionation methods allowed the identification by mass spectrometry of citrate, mugineate and phytate complexes with iron in maize kernels. There was also a significant difference in some polyamine concentrations observed between some kernels with low and high bioavailable iron. The higher abundance of the iron-mugineate complex in the gastrointestinal extract in high bioavailable maize variety possibly indicates that iron-mugineate would have an important role in iron biodisponibility. Finally, lower molar ratios between extracted phytate and iron associated to it would seem to be also a key aspect for higher iron bioavailability.

Tout au long du procédé d’élaboration d’un vin, des réactions d’oxydation peuvent se produire y compris au cours du vieillissement en bouteilles. Depuis quelques années, la profession viti-vinicole est confrontée au problème de l’oxydation prématurée des vins blancs.. A ce jour, peu d’études ont pu apporter des explications d’ordre chimique à ce phénomène, et les mécanismes réactionnels intervenant restent peu connus.L’objectif de ce travail de thèse est d’apporter, au travers d’une analyse moléculaire non ciblée en spectrométrie de masse à transformée de Fourier et à résonance cyclotronique des ions (FT-ICR-MS) couplée à une étude chimiométrique, des réponses originales aux questions posées par la problématique actuelle d’oxydation prématurée des vins blancs. Nous avons montré suite à l’étude d’une série de vins oxydés prématurément non seulement la grande diversité chimique des vins, mais aussi la présence d’un ensemble de masses typiques associées à ce phénomène. Pour une meilleure compréhension de l’origine de cette problématique, nous avons considéré deux autres types d’oxydation : une oxydation relative exclusivement à un apport contrôlé en oxygène et une autre relative à l'évolution naturelle de vins en bouteilles. Cette dernière consiste en le suivi de l'évolution des espaces chimiques de séries verticales de vins blancs et rouges en fonction du temps. Sur la série verticale des vins blancs allant de 1979 à 2006, une charnière à l’année 1990 a été observée avec des groupes de masses typiques de chacun des vins jeunes (1979-1990) et des vieux vins (1991-2006).La comparaison entre les espaces chimiques discriminants chacun de ces trois types d’oxydation ne révèle la présence que de trois masses en commun, ce qui appuie l'hypothèse de causes multiparamétriques à l’oxydation prématurée des vins blancs, qui ne serait donc pas un phénomène du exclusivement à une exposition non contrôlée à l'oxygène.Des essais d’élucidation structurale en FT-ICR-MS/MS des masses discriminantes des vins oxydés et de la série verticale ont été effectués et des schémas de fragmentation pour certaines masses sont proposés / During winemaking processes, many oxidation reactions may occur especially during the aging period. Recently, white wines are characterized by a problem of premature oxidation for which few studies have provided chemical explanation. To date, the involved mechanisms in this phenomenon remain poorly understood.The aim of this thesis project is to provide, through an untargeted molecular analysis using Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry (FT-ICR-MS) coupled to chemometric analysis, original clue to understand the premature oxidation of white wines. Based on the study of a series of premature oxidized white wines, we were able to elucidate the high complexity and the chemical diversity of wine, and got out typical masses characterizing the oxidation state. In order to better understand the origin of this phenomenon, we considered two alternative possibilities of oxidation: the first one induced by oxygen, and the second through a natural evolution of wines in bottles. The latter included the monitoring of the chemical evolution of white and red wines as a function of time. A very interesting result was obtained on the vertical series of white wines from 1979 to 2006, where two groups were separated at the 1990 vintage to provide a group of old wines (1979-1990) and a group of new wines (1991-2006). Typical discriminant masses were found for each group.A comparison between the chemical spaces discriminating each of the three types of oxidation (premature oxidation, oxidation with oxygen and natural evolution of wine in bottle) revealed very few common masses that may indicate that the phenomenon of premature oxidation is indeed influenced by multiple factors.Finally, a structural elucidation of the typical masses of the groups of oxidized and aged wines were established using FT-ICR-MS/MS. Possible fragmentations schemes of some of these masses were proposed

<p>Mass spectrometry has become the premium chemical identification method. The next advancement for mass spectrometry is the widespread use of mass spectrometers for on-site chemical/biological identification. Ion trap mass spectrometers have emerged as powerful on-site analytical platforms, in spite of limited mass resolution, due to their compatibility with ambient ionization methods and ready implementation of tandem mass spectrometry (MS/MS). However, conventionally operated ion traps are inefficient in accessing the entire tandem mass spectrometry dataspace. By operating the ion trap at a constant trapping voltage, more efficient tandem mass spectrometry scan modes are accessible. The most efficient is to acquire the entire tandem mass spectrometry data space and this work demonstrates three different methods of acquiring this data domain. These methods acquire the data in under a second and the best performing method was implemented in a miniature mass spectrometer without performance decrease. The impact of this device is most powerful when analysis requires the entire ionized sample be considered to determine the identity of the sample. This was shown to be useful for monitoring the lipid metabolism in a model microorganism. </p>

La population générale est exposée à un grand nombre de pesticides, principalement via son alimentation. Alors que ces matières actives ont reçu une autorisation de mise sur le marché individuelle, l’effet sur l’organisme humain d’un mélange de tels composés est en revanche très peu connu. Afin de contribuer à mieux appréhender cet « effet mélange », notre étude s’est attachée à étudier le métabolisme hépatique humain in vitro de deux mélanges de pesticides communément retrouvés dans l’alimentation française / General population is exposed to several pesticides, mainly via the diet. Whereas these active ingredients obtained their marketing authorization individually, the available data regarding their impact as a mixture on the human body are scarce. In order to help better understanding this “mixture effect”, we aimed at studying the human hepatic in vitro metabolism of two pesticides mixtures commonly found in the diet

Patients that have undergone organ transplantation are life-long treated with immunosuppressant drugs and these have to be monitored regularly to get the desired effect of suppressing the immune system. To monitor the drug concentration normally a venous blood sample is collected at a clinic but the use of dried blood spots (DBS) as a matrix for drug monitoring for immunosuppressant drugs will make home sampling possible for this patient group. The aim of this study was to develop and validate a bioanalytical method for quantifying cyclosporine A and tacrolimus in dried blood spots. The method consist of punching out a 5 mm disc from a blood spot , followed by extracting the spot in a 96-well hydrophobic filter plate with 150 µL extraction solution containing internal standard (ascomycin and cyclosporine A d12) in a methanol water solution (80:20v/v%). The extract is then centrifuged through the filter plate down in a 96-deep well plate and injected on the LC-MS/MS, with an analysis time of 2.5min. The method will be validated in accordance with the guidelines set by the European Medicines Agency with additions specific to DBS. The method is not fully validated but will be in due time. The validated parameters show a robust and fast analysing method that has the prospects of being used for analysing DBS samples for patients and in the future can possibly be used by patients in home environment.

Die Rückstandsanalytik tierischer Lebensmittel ist eine anspruchsvolle Aufgabe aufgrund des hohen Lipidanteils der Proben sowie des sich stetig vergrößernden Wirkstoffspektrums. Heutzutage werden für die Probenaufarbeitung die DFG S 19 Methode, mit der vorrangig unpolare Analyten nachgewiesen werden und zunehmend die QuEChERS Methode eingesetzt, die insbesondere auf die Erfassung polarer Pestizide abzielt. In dieser Arbeit wurde eine moderne Multirückstandsmethode für Hühnereier entwickelt, um sowohl gas- als auch flüssigkeitschromatographisch (GC, LC) erfassbare Wirkstoffe zu analysieren. Dazu gehören unpolare PCBs, Pyrethroide und Organochlorpestizide, aber auch polarere Organophosphate, Triazole und Carbamate. Das Verfahren basiert auf der Extraktion mittels Matrix Solid Phase Dispersion, der Reinigung auf Grundlage einer modifizierten Gelpermeationschromatographie (GPC) und zwei verschiedenen Festphasenextraktionen (SPEs) für GC- und LC-erfassbare Pestizide sowie der Quantifizierung mittels GC- und LC-MS/MS. Dünnschichtchromatographisch wurde die effektive Entfernung hochmolekularer Lipide durch die modifizierte GPC und niedrigmolekularer Fette durch die SPEs belegt. Laut der für Ei durchgeführten Validierung erfüllten 164 der 172 untersuchten Pestizide und alle sechs PCBs die Leistungskriterien für die amtliche Rückstandskontrolle - zumeist am niedrigsten validierten Level (5 µg/kg bzw. 0,5 µg/kg). Ausnahmen bildeten sehr polare LC-Pestizide (z.B. Aminopyralid, Clopyralid, MCPA, Quinmerac) und pH-Wert-abhängige GC-Analyten (Nicotin, Tolylfluanid, Dichlofluanid), die auch mit den etablierten Verfahren schwierig zu analysieren sind. Weiterhin verdeutlichte die erfolgreiche Untersuchung von verschiedenen Ringversuchsmaterialien, dass die ursprünglich für Eier entwickelte Methode auch für mageres Geflügelfleisch und Sahne genutzt werden kann. Gegenüber den etablierten Verfahren wies die neue Methode deutliche Vorzüge auf. So belegte die Dünnschichtchromatographie, dass mit der neuen Methode Cholesterin, aber auch freie Fettsäuren besser abgetrennt werden als mit den etablierten Verfahren. Die neue Methode verbrauchte im Vergleich zur DFG S 19 Methode 46 % weniger Lösungsmittel und ermöglichte eine Verdopplung des Probendurchsatzes innerhalb von 8 h. Zudem eignete sich das entwickelte Verfahren laut den Validierungsdaten für GC-Analyten deutlich besser als die QuEChERS Methode und etwas besser als die DFG S 19 Methode (v.a. für Pyrethroide). Hinsichtlich der LC-Analyten unterschieden sich die neue und die QuEChERS Methode nur bei wenigen Analyten. Mit dem neuen Verfahren konnten folglich im Gegensatz zu den etablierten Methoden sowohl unpolare GC- als auch polare LC-Analyten sicher erfasst werden.

Neste estudo determinou-se o nonilfenol - um composto xenobiótico utilizados na fabricação de antioxidantes, aditivos para óleos lubrificantes e produção de surfactantes etoxilados - e o bisfenol A - um composto químico utilizado na produção de diversos produtos, como, plásticos policarbonatos, resinas epóxi e retardantes de chama. Ambos exibem atividade estrogênica em concentrações abaixo de 1ng L-1 - em cinco pontos de coleta na cidade de Americana, SP. Devido à ampla utilização, esses compostos estão presentes em esgoto industrial em quantidades substanciais. A primeira etapa deste estudo foi a validação dos método analítico seguindo o Método 8270D da United States Environmental Protection Agency (USEPA) que descreve o procedimento de validação para os compostos semivoláteis analisados por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (GC/MS). Os limites de detecção e de quantificação do método para a determinação do nonilfenol foram, respectivamente, 1 e 5 &micro;g L-1. O coeficiente de determinação (R2) e a recuperação média para o nonilfenol foram, respectivamente, 0,99 e 99,04%. Os limites de detecção e de quantificação do método para o bisfenol A foram, respetivamente, 1 e 5 &micro;g L-1. O coeficiente de determinação (R2) e a recuperação média para o bisfenol A foram, respectivamente, 0,99 e 91,55%. Na segunda etapa desta pesquisa analisaram-se amostras de água coletadas na cidade de Americana para a determinação do nonilfenol e do bisfenol A. Como método de extração dos compostos, usou-se a extração em fase sólida (SPE) e como técnica analítica a cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (GC/MS). Os resultados indicaram a presença desses compostos em alguns pontos de amostragem sendo que a concentração do nonilfenol a variou de 5,028 a 10,524 &micro;g L-1 e para o bisfenol A a concentração variou de 5,645 a 295,255 &micro;g L-1. Foram feitos também testes ecotoxicólogicos utilizando como organismo teste o microcrustáceo Daphnia similis, porém o nonilfenol e o bisfenol A, na concentração testada que variou de 0,05 a 500 &micro;g L-1 não apresentaram toxicidade aguda. / In this study it was determined nonylphenol - a xenobiotic compound used in the manufacture of antioxidants, additives for lubricating oils and production of ethoxylated surfactant - and bisphenol A - a chemical compound used in production of various products, such as polycarbonate plastic, epoxy resins and flame retardants. Both exhibit estrogenic activity at concentrations lower than 1 ng L-1 - in five sampling points in the city of Americana, SP. Due to the widespread use of these compounds, they are present in substantial quantities in industrial sewage. The first step of this study was to validate the analytical method following the Method 8270D of the United States Environmental Protection Agency (USEPA) that describes the validation procedure for semi-volatile compounds analized by gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS). The limits of detection and quantification for determining the nonylphenol were, respectively, 1 and 5 &micro;g L-1. The coefficient ofdetermination (R2) and recovery for nonylphenol were respectively 0.99 and 99.04%. The limits of detection and quantification for the bisphenol A were, respectively, 1 and 5 &micro;g L-1. The coefficient of determination (R2) and recovery for bisphenol A were respectively 0.99 and 91.55%. In the second step of this study were analized in water samples of Americana city for the determination of nonylphenol and bisphenol A. As a method of extraction of the compounds it was used solid-phase extraction (SPE) and as analytical technique GC/MS. The results indicated the presence of such compounds in some sampling points and the concentration of nonylphenol ranged from 5.028 to 10.524 &micro;g L-1 and bisphenol A concentration ranged from 5.645 to 295.255 &micro;g L-1. Ecotoxicological tests were also performed using as test organism microcrustaceans Daphnia similis, but nonylphenol and bisphenol A, tested at concentration ranging from 0,05 to 500 &micro;g L-1 showed no acute toxicity.

Neste trabalho foi empregada uma metodologia rápida e eficiente para a identificação de metabólitos fitotóxicos produzidos por microrganismos. O isolamento do composto bioativo foi guiado através de bioensaio com Lemna minor. A espectrometria de massas, em especial o LC-MS, foi utilizada para acelerar o processo de identificação do composto ativo. As bactérias estudadas eram simbióticas do fungo fitopatogênico Sclerotium rolfsii. Seus respectivos extratos orgânicos obtidos de culturas em meio BD (batata dextrose) foram submetidos ao ensaio de fitotoxicidade com Lemna minor. Entre cinco bactérias foi selecionada a bactéria Burkholderia sp, a qual apresentou maior atividade no ensaio de fitotoxicidade. O fracionamento por cromatografia em coluna de sílica propiciou a identificação de uma fração ativa. A fitotoxina foi caracterizada como sendo um macropentólido de 20 membros. O composto pertence à classe dos polihidroxibutiratos (PHBs). Sua estrutura foi determinada por RMN 1H, RMN 13C, HMQC, HMBC, IV, ESI-MS/MS e também por comparação com dados da literatura. Esse composto nunca foi isolado de fontes naturais. Foi descrito na literatura uma rota sintética para sua obtenção, porém esta é a primeira vez que sua atividade fitotóxica é relatada. Este trabalho mostra uma nova perspectiva para o emprego de PHBs de baixo peso molecular e apresenta uma proposta de estrutura de composto fitotóxico que pode servir de modelo para a síntese de novos herbicidas. / In this work a quick and efficient methodology was employed for the identification of phytotoxic metabolites produced by microorganisms. The isolation of the bioactive compound was guided by Lemna minor bioassay. Mass spectrometry, especially LC-MS, was used to accelerate the process of identification of the phytotoxin. All bacteria were symbiotic to the phytopatogenic fungi Sclerotium rolfsii.. The bacterium Burkholderia sp was selected among the five bacteria analyzed, due to its greater phytotoxic activity in the bioassay. The phytotoxin was characterized as a 20 member macropentolide. This compound belongs to the polyhidroxybutirates (PHBs) chemical class. Its structure was determined by NMR1H, NMR 13C, HMQC, HMBC, IV, ESI-MS/MS and HRMS. It has never been isolated from natural sources before. Although a synthetic route has been proposed in the literature this is the first time that its phytotoxic activity is reported. This work leads to a new perspective for the application of low molecular weight PHBs and propose a phytotoxic structure that can be used as a model for the synthesis of new herbicide class.