Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-27Bitstream added on 2014-06-13T18:09:12Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_alm_me_botib.pdf: 590776 bytes, checksum: 8b55e04bfd5d2925a1cf2b9ac4822357 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Brassica oleracea é uma espécie botânica popularmente conhecida como “couve”. É utilizada na alimentação e também na medicina popular, devido às suas ações antiulcerogênica e quimiopreventiva do câncer, entre outras. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial genotóxico e antigenotóxico do extrato de folhas de Brassica oleracea em células somáticas e germinativas de camundongos in vivo, usando o Ensaio Cometa e o teste do micronúcleo. Os animais (camundongos Swiss albinos machos) foram divididos em oito grupos experimentais (n=6). O grupo controle negativo recebeu água destilada e o controle positivo 80 mg/kg de doxorrubicina (DXR). Três diferentes doses do extrato foram testadas (500, 1000 e 2000 mg/kg) para a avaliação do potencial genotóxico. As mesmas doses do extrato foram utilizadas simultaneamente com injeção intraperitoneal de DXR (uma hora após o tratamento com o extrato via gavage), para a avaliação dos potenciais antigenotóxico e anticlastogênico/antianeugênico. As células analisadas pelo Ensaio Cometa foram leucócitos de sangue periférico coletados 4 e 24 horas após os tratamentos, e células do fígado, cérebro, medula óssea e testículos, coletadas 24 horas após os tratamentos. Para o Teste do Micronúcleo, foram analisadas células de medula óssea, coletadas 24 horas após os tratamentos. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados utilizando-se ANOVA e teste de Tukey-Kramer. A ausência de genotoxicidade e aneugenicidade/clastogenicidade foi observada para as três doses do extrato. No entanto, as três doses testadas induziram um decréscimo significante de danos no DNA das células analisadas pelo Ensaio Cometa, assim como redução no número de eritrócitos policromáticos micronucleados analisados pelo Teste do Micronúcleo, em comparação ao grupo controle positivo... / Brassica oleraceae is a botanical specie popularly known as “kale”. Is used in the feeding and also in folk medicine due to its anti-ulcerogenic and cancer chemopreventive activities, among others. The main objective of the present study was to evaluate the genotoxic and antigenotoxic potential of the Brassica oleraceae extract in different cells of mice in vivo, using the comet assay and micronucleus test. The animals (male Swiss mice) were divided in eight experimental groups (n = 6). The negative control group received distilled water and the positive control 80mg/kg of doxorubicin (DXR). Three different doses of the extract were tested (500, 1000 and 2000 mg/kg) to evaluate the genotoxic potential. The same extract doses followed by DXR injection (one hour after the treatment) were used to evaluate the antigenotoxic and anticlastogenic/antianeugenic potentials. The cells analyzed by comet assay were leukocytes from peripheral blood collected 4 and 24 hours after the treatments, and liver, brain, bone marrow and testicles cells collected 24 h after the treatments. Bone marrow cells collected 24 hours after the treatments were analyzed by micronucleus test. The data were statistically analyzed using ANOVA and Tukey-Kramer test. The absence of genotoxic and aneugenic/clastogenic effects was observed with the three tested doses of the extract. On the other hand, the three tested doses of the extract induced a significant decrease in the DNA damage in all cells analyzed by comet assay, and a reduction in the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes, in comparison with DXR positive control group. Under the experimental conditions employed in the present experiment, the results obtained showed that Brassica oleraceae extract is not genotoxic and presents a clear chemoprotection against DNA damage induced by doxorubicin

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:00Z : No. of bitstreams: 1 000849826_20170730.pdf: 873601 bytes, checksum: aba6ada5ec0fbb61f3b3604c66aafb07 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-08-07T14:09:12Z: 000849826_20170730.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-08-07T14:10:16Z : No. of bitstreams: 1 000849826.pdf: 4209967 bytes, checksum: fe80c7e6b5372db8ddddd264003573c2 (MD5) / A clonagem de oxidoesqualeno ciclase das folhas de M. ilicifolia já foi estudada por nosso grupo, bem como os estudos de expressão em S. cerevisiae geneticamente modificada para melhor produção da friedelina. Para o desenvolvimento do trabalho, optou-se por realizar a expressão do gene de friedelina sintase de Kalanchoe daigremontiana obtido comercialmente, cuja sequência foi otimizada de acordo com o codon usage de S. cerevisiae. A partir das mutações sítio-dirigidas, duas mutações no gene sintético foram confirmadas. A primeira mutação do resíduo de leucina para valina na posição 483 do gene sintético levou à produção da friedelina e dos triterpenos -amirina e taraxerol enquanto a segunda mutação do resíduo de leucina para treonina na mesma posição deste gene produziu unicamente a -amirina. Após a padronização e análises das mutações no gene sintético, as mesmas mutações foram realizadas no gene da friedelina sintase de Maytenus ilicifolia. A mutação por valina levou à produção de -amirina e friedelina e, igualmente ao gene sintético, a mutação por treonina levou à formação apenas da -amirina. De acordo com a mutação gerada, os compostos produzidos pela levedura foram analisados por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas e observou-se que algumas mutações levavam a uma alteração da especificidade do produto formado pela enzima. Esses estudos sugerem que a relação da estrutura proteica-função da enzima produtora da friedelina possa estar associada ao ajuste da cavidade ativa da enzima e, quando um resíduo de aminoácido do sítio ativo é substituído por resíduos menores, a ampliação da cavidade proporciona a estabilização prévia do carbocátion em um triterpeno com menor número de rearranjos, como a -amirina. Desta forma, estes dados contribuem com o entendimento da especificidade desta enzima, são os primeiros a... / The cloning of oxidosqualene cyclase from Maytenus ilicifolia leaves and expression in Saccharomyces cerevisiae has been studied by our group to generate friedelin. The main objective of this project was to carry out the expression of friedelin synthase gene using commercially Kalanchoe daigremontiana, whose sequence has been optimized according to the codon usage of S. cerevisiae. In such studies, two mutations in the synthetic gene were confirmed. The first mutation of valine for leucine residue at position 483 synthetic gene led to the production of friedelin, β-amyrin and tararexol, while the second mutation of leucine to threonine residue, at the same position, produced exclusively β-amyrin. The same mutations were performed using the gene of friedelin synthase of Maytenus ilicifolia. The compound identities were confirmed by gas chromatography and mass spectrometry. The results suggested that the ratio of protein production-enzyme function, involved in the production of friedelin, may be associated with the active cavity of the enzyme setting, when an amino acid residue of the active site is replaced for smaller, expanding the cavity to provide the prior stabilization of the carbocation in the biosynthetic pathway of triterpenes to produce β-amyrin. Thus, these data contribute to understand the specificity of such enzyme. Furthemore, this studie was the first one to show the importance of each amino acid in the active site of the enzyme to produce a pentacyclic triterpene with the highest number of rearrangements and was the basis for future studies of enzyme engeenering to increase productivity of such compounds.

Orientador: Edson Luis Maistro / Resumo: Cerca de 11% dos medicamentos considerados essenciais pela OMS são derivados de plantas medicinais, daí a importância do desenvolvimento de testes científicos sobre essas plantas, avaliando, além do seu real potencial farmacológico, a genotoxicidade, mutagenicidade, antigenotoxicidade, citotoxicidade, dentre outros, para esclarecer se o uso de tais plantas por seres humanos é seguro. Crataegus oxyacantha é uma planta originalmente encontrada na Europa e, devido à suas potencialidades medicinais, já há muito tempo foi introduzida no continente sulamericano. Pertencente à família Rosaceae, a árvore forma, na primavera, cachos grandes de flores brancas ou rosas de fragrância agradável, que no outono se transformam em pequenos frutos vermelhos. A importância da C. oxyacantha se dá pela presença comprovada de flavonóides, que são conhecidos por sua ação antioxidante. Devido a inexistência na literatura de estudos investigando a toxicidade genética de C. oxyacantha para os seres humanos, o presente estudo foi elaborado visando avaliar se o extrato de frutos desta planta apresenta efeitos citotóxico, genotóxico e clastogênico/aneugênico em leucócitos humanos e células HepG2 em cultura, e mutagênico em cepas de Salmonella typhimurium (teste de Ames). Os resultados da análise de genotoxicidade mostraram que o extrato não apresentou efeitos genotóxicos nas concentrações de 2,5 e 5,0 µg/ml em ambos os tipos celulares analisados, no entanto, em concentrações acima de 10 µg/ml verificou-s... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: About 11% of medicines considered essential by WHO are derived from medicinal plants, being important to develop scientific tests on these plants, evaluating several aspects as its pharmacological potential, genotoxicity, mutagenicity, antigenotoxicity, cytotoxicity, among others, to clarify if the use of such plants is safe for humans. Crataegus oxyacantha is a plant originally found in Europe and due to its medicinal potential, was at long time introduced in the South American continent. Belonging to the Rosaceae family, the tree form in the spring, large bunches of white flowers and pleasant fragrance of roses, which in autumn turn into small red fruits. The importance of C. oxyacantha is attributed to the presence of flavonoids as constituents, which are known for their antioxidant activity. Considering the absence in the literature of studies investigating the genetic toxicity of C. oxyacantha to humans, this study was designed to evaluate if the fruits extract of this plant present a cytotoxic, genotoxic and clastogenic/aneugenic effects in cultured human HepG2 and leukocytes cells, and mutagenicity in Salmonella typhimurium strains (Ames test). The results of genotoxicity analysis evidenced that the extract showed no genotoxic effects at 2.5 and 5.0 ug/ml concentrations, in both cell types tested, however, at concentrations above of 10 ug/ml significant DNA damage was observed. The micronucleus test results showed that the concentrations above of 10 ug/ml also produced... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Regildo Márcio Gonçalves da Silva / Banca: Gisele Pigatto / Banca: Erika Cosendey Toledo de Mello Peixoto / Resumo: Alguns bioacumuladores são bioindicadores, pois determinam a presença de substâncias tóxicas. Estes são constituídos de organismos que podem sobreviver em um restrito espectro de condições naturais e as alterações ambientais podem causar modificações nas funções biológicas e no seu material genético. Os mutágenos são agentes que causam alterações na sequência do DNA correspondendo às mutações induzidas, sendo os metais pesados os mutágenos mais comuns em ambientes aquáticos. Baccharis trimera Less (carqueja) é uma planta arbustiva que se destaca pela sua capacidade de acumular metais pesados presentes na água. Equisetum hyemale L. (cavalinha) é uma planta vascular sem semente considerada como um depósito de minerais e vitaminas. O objetivo deste projeto foi avaliar o potencial mutagênico e bioacumulador de metais pesados de B. trimera Less e E. hyemale L. Os espécimes de carqueja e cavalinha foram cultivados e expostos à solução de metal e controles por 30 dias. As partes vegetativas coletadas foram trituradas e secas em estufa para a preparação dos extratos. Os extratos etanólico e aquoso foram preparados em diferentes concentrações com água ultra pura. Os metais pesados presentes nos extratos foram quantificados por meio da análise de absorção atômica. O Teste de Allium cepa foi realizado para analisar a atividade genotóxica dos extratos. Baccharis trimera e Equisetum hyemale são espécies bioacumuladoras de diferentes metais pesados. O extrato etanólico e infuso de B. trimera e E. hyemale interferem no índice mitótico e são capazes de promover atividade genotóxica em células meristemáticas de raiz de Allium cepa / Abstract: Some biomarkers are bio-accumulators, as they determine the presence of toxic substances. These are made up of organisms that can survive in a restricted range of natural conditions and environmental changes can cause changes in biological functions and their genetic material. The mutagens are agents that cause alterations in the DNA sequence corresponding to the induced change, the heavy metals being the most common mutagens in aquatic environments. Baccharis trimera Less (gorse) is a shrubby plant that stands out for its ability to accumulate heavy metals present in the water. Equisetum hyemale L. (horsetail) is a vascular seedless considered a deposit of minerals and vitamins plant. The objective of this project was to evaluate the mutagenic potential of heavy metals and bioaccumulative B. trimera Less and E. hyemale L. specimens of gorse and horsetail were cultured and exposed to the metal solution and controls for 30 days. The collected vegetative parts were ground and dried in an oven for the preparation of extracts. The ethanolic and aqueous extracts were prepared at different concentrations with ultrapure water. Heavy metals present in the extracts were quantified by atomic absorption analysis. The Allium cepa test was performed to analyze the genotoxic activity of the extracts. Baccharis trimera and Equisetum hyemale bioacumuladoras are different species of heavy metals. The ethanol extract and infusion of B.trimera and E. hyemale interfere with the mitotic index and are able to promote genotoxic activity in root meristematic cells of Allium cepa / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Dejanira de Franceschi de Angelis / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Resumo: Derivados de petróleo como benzeno, tolueno, etilbenzeno e xileno (BTEX) são hidrocarbonetos monoaromáticos muito utilizados como solventes e matéria-prima em diversos processos industriais, além de estarem presentes, em grandes quantidades, nos combustíveis fósseis. Pelo seu amplo uso e alta solubilidade em água, o BTEX vem caracterizando um poluente freqüente das águas, em especial, as subterrâneas. A aplicação do processo de biorremediação parece constituir uma metodologia promissora para o tratamento de águas contaminadas por essa mistura. Testes citogenéticos são adequados e eficientes para identificar e avaliar efeitos danosos de substâncias sobre os organismos, em suas diversas concentrações e tempos de exposição. Neste trabalho foi avaliado o efeito de cinco concentrações do BTEX, antes e após o processo de biodegradação por microrganismos selecionados de efluente bruto de refinaria de petróleo, sobre os sistemas testes de Allium cepa e cultura de células HTC. A comparação do total de aberrações cromossômicas e nucleares (alterações genotóxicas) realizada entre as concentrações de BTEX não biodegradadas e biodegradadas revelou uma diminuição significativa destas anormalidades para as concentrações BTEX 1, 2 e 4. As alterações mutagênicas, avaliadas pelo teste do micronúcleo (MN) em células meristemáticas, foram significativas para as concentrações BTEX 1, 2, 4 e 5 não biodegradadas. Ao se comparar as freqüências de MN entre a concentração preparada de BTEX com a sua respectiva concentração biodegradada, observouse uma redução significativa para as biodegradadas 1 e 4. Não houve indução significativa de MN para as células F1 para nenhuma das concentrações testadas. O BTEX não provocou nenhum efeito citotóxico significativo para este organismo. O teste do MN realizado com células HTC revelou que o BTEX foi mutagênico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Oil products as benzene, toluene, ethylbenzene and xylene (BTEX) are monoaromatics hydrocarbons widely used as solvents and raw materials in several industrial processes, and are present in large quantities in fossil fuels. By its widespread use and high solubility in water, the BTEX is featuring a common pollutant of water, particularly groundwater. Implementation of the bioremediation seems to be a promising method for treatment of contaminated water with this mixture. Cytogenetic tests are appropriate and efficient to identify and assess the harmful effects of substances on the organisms in their several concentrations and time of exposure. This study evaluated the effect of five BTEX concentrations, before and after the biodegradation process by microorganisms selected from raw sewage from oil refinery using the test systems of Allium cepa and HTC cells. The comparison of total chromosomal and nuclear aberrations (genotoxic alterations) performed between BTEX concentrations bioremedied and not bioremedied showed a significant decrease of these abnormalities for BTEX concentrations 1, 2 and 4. Mutagenic alterations, evaluated by the micronucleus test (MN) in meristematic cells, were significant to the BTEX concentrations 1, 2, 4 and 5 not bioremedied. When comparing the frequencies of MN between the prepared concentration of BTEX with its concentration bioremedied, there was a significant reduction for the bioremedied 1 and 4. There was no significant induction of MN to cells F1 to any of the concentrations tested. The BTEX did not cause any significant cytotoxic effect to those organisms. The test performed with micronucleus of the HTC cells revealed that the BTEX was mutagenic, but only to the highest concentration, both before and after the biodegradation. Genotoxic damage as measured by the comet assay showed that BTEX was genotoxic for all concentrations not bioremedied, tested... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Edson Luis Maistro / Banca: Mária Sérgio Mantovani / Banca: Wilma de Grava Kempinas / Resumo: Brassica oleracea é uma espécie botânica popularmente conhecida como "couve". É utilizada na alimentação e também na medicina popular, devido às suas ações antiulcerogênica e quimiopreventiva do câncer, entre outras. Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial genotóxico e antigenotóxico do extrato de folhas de Brassica oleracea em células somáticas e germinativas de camundongos in vivo, usando o Ensaio Cometa e o teste do micronúcleo. Os animais (camundongos Swiss albinos machos) foram divididos em oito grupos experimentais (n=6). O grupo controle negativo recebeu água destilada e o controle positivo 80 mg/kg de doxorrubicina (DXR). Três diferentes doses do extrato foram testadas (500, 1000 e 2000 mg/kg) para a avaliação do potencial genotóxico. As mesmas doses do extrato foram utilizadas simultaneamente com injeção intraperitoneal de DXR (uma hora após o tratamento com o extrato via gavage), para a avaliação dos potenciais antigenotóxico e anticlastogênico/antianeugênico. As células analisadas pelo Ensaio Cometa foram leucócitos de sangue periférico coletados 4 e 24 horas após os tratamentos, e células do fígado, cérebro, medula óssea e testículos, coletadas 24 horas após os tratamentos. Para o Teste do Micronúcleo, foram analisadas células de medula óssea, coletadas 24 horas após os tratamentos. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados utilizando-se ANOVA e teste de Tukey-Kramer. A ausência de genotoxicidade e aneugenicidade/clastogenicidade foi observada para as três doses do extrato. No entanto, as três doses testadas induziram um decréscimo significante de danos no DNA das células analisadas pelo Ensaio Cometa, assim como redução no número de eritrócitos policromáticos micronucleados analisados pelo Teste do Micronúcleo, em comparação ao grupo controle positivo ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Brassica oleraceae is a botanical specie popularly known as "kale". Is used in the feeding and also in folk medicine due to its anti-ulcerogenic and cancer chemopreventive activities, among others. The main objective of the present study was to evaluate the genotoxic and antigenotoxic potential of the Brassica oleraceae extract in different cells of mice in vivo, using the comet assay and micronucleus test. The animals (male Swiss mice) were divided in eight experimental groups (n = 6). The negative control group received distilled water and the positive control 80mg/kg of doxorubicin (DXR). Three different doses of the extract were tested (500, 1000 and 2000 mg/kg) to evaluate the genotoxic potential. The same extract doses followed by DXR injection (one hour after the treatment) were used to evaluate the antigenotoxic and anticlastogenic/antianeugenic potentials. The cells analyzed by comet assay were leukocytes from peripheral blood collected 4 and 24 hours after the treatments, and liver, brain, bone marrow and testicles cells collected 24 h after the treatments. Bone marrow cells collected 24 hours after the treatments were analyzed by micronucleus test. The data were statistically analyzed using ANOVA and Tukey-Kramer test. The absence of genotoxic and aneugenic/clastogenic effects was observed with the three tested doses of the extract. On the other hand, the three tested doses of the extract induced a significant decrease in the DNA damage in all cells analyzed by comet assay, and a reduction in the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes, in comparison with DXR positive control group. Under the experimental conditions employed in the present experiment, the results obtained showed that Brassica oleraceae extract is not genotoxic and presents a clear chemoprotection against DNA damage induced by doxorubicin / Mestre

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A radiação ultravioleta (UV) induz diversos efeitos nocivos nos organismos e a quantidade desta radiação que atinge a biosfera é afetada pela concentração de ozônio, latitude, altitude, clima e reflexão especular. As respostas de briófitas em relação aos efeitos da radiação UV e a presença de compostos que absorvem esta radiação têm sido estudadas. Sanionia uncinata, Holomitriopsis laevifolia e Leucobryum laevifolium são espécies de musgos encontrados em locais expostos a alta incidência de radiação UV e com habitats distintos. Considerando que as respostas de musgos contra os efeitos da radiação UV e seus mecanismos de proteção ainda são pouco caracterizados, o objetivo deste estudo foi investigar o potencial fotoprotetor e possíveis riscos toxicológicos associados aos extratos dos musgos S. uncinata, proveniente da Antártica e H. laevifolia e L. laevifolium, proveniente do Amazonas. Seus extratos metanólico (EM), aquoso (EA), hidroalcoólico (EH) e etanólico (EE) foram estudados com a caracterização química por absorção ao UV e visível e pela cromatografia líquida de alta eficiência; quantificação do índice total de compostos fenólicos; determinação da capacidade captadora do radical 2,2-difenil-1-picril-hidrazila a fim de avaliar as atividades antioxidantes; avaliação do potencial de fotoproteção cutânea pela determinação do fator de proteção solar; avaliações do potencial mutagênico e citototóxico, através do ensaio de Salmonella/microssoma, utilizando as cepas TA97, TA98, TA100, TA102 e TA104; do potencial fotomutagênico através do ensaio de fotomutagenicidade, usando as cepas TA102 e TA104; e investigação dos efeitos genotóxicos e fotogenotóxicos, pelo ensaio de micronúcleo e fotomicronúcleo, respectivamente, usando diferentes linhagens celulares estabelecidas. Foram encontradas atividades fotoprotetoras e antioxidantes e observou-se que os extratos se apresentaram singulares devido a sua composição química. Os resultados fotoprotetores, além dos mutagênicos/fotomutagênicos, genotóxicos/fotogenotóxicos e suas respectivas avaliações citotóxicas também permitiram selecionar extratos e suas concentrações, como promissores candidatos em fotoproteção Assim, os EA e EH de H. laevifolia e L. laevifolium apresentam, no geral, os resultados mais significativos, tornando-se potenciais para avaliações refinadas em fotoproteção e na separação de componentes que possam levar a futuras aplicações como antioxidantes e protetores solares ou como adjuvantes. / The ultraviolet radiation (UV) induces many harmful effects in all living organisms and the amount of this radiation that reaching the ground is affected by many factors including ozone concentration, latitude, altitude, climate and specular reflection. The responses of bryophytes against the effects of UV radiation and the presence of compounds that absorb the UV region have been studied. Mosses Sanionia uncinata, Holomitriopsis laevifolia and Leucobryum laevifolium are found in locations exposed to UV at high levels of radiation and in different habitats. Whereas that the responses of mosses against the effects of UV radiation and their protection systems are poorly characterized yet, the aim of this study was to investigate photoprotective potential and possible toxicological risks associated with extracts of mosses S. uncinata (from Antarctica) and H. laevifolia and L. laevifolium (from Amazônia). Methanol (ME), aqueous (AE), hydroalcoholic (HE) and ethanolic (EE) were studied by: chemical characterization by UV/visible spectrophotometry and by High performance liquid chromatography; phenolic content estimation; 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl scavenging activity; potential of skin photoprotection by in vitro determination of sun protection factor; the mutagenic potential, and cytotoxic by Salmonella/microsome assay, using the TA97, TA98, TA100, TA102 and TA104 strains; photomutagenic potential by photomutagenicity test, using TA102 and TA104 strains and; investigation of genotoxic and photogenotoxic effects by micronucleus test and photo-micronucleous assay, respectively, using different established cell lines. Photoprotective and antioxidant activities were found and it was observed that the extracts showed strong uniqueness due to its chemical composition. From the photoprotective, mutagenic/photomutagenic and genotoxic/photogenotoxic results and their cytotoxic evaluations it was possible to select extracts and their concentrations as promising candidates for photoprotection. Thus, the EA and EH of H. laevifolia and L. laevifolium demonstrated the most significant results, becoming potential for refined evaluations in photoprotection and separating components that can lead to future applications such as sunscreens and antioxidants or as adjuvants.

O mecanismo de reparação de DNA por excisão de nucleotídeos (NER) é o mais universal e conservado sistema de reparação encontrado em organismos procarióticos e eucarióticos. Em bactérias, a via NER é mediada pelos produtos dos genes uvrA, uvrB e uvrC, conhecido como complexo UvrABC. A atuação das proteínas Uvr pode ser dividida em quatro passos básicos: reconhecimento do dano e verificação da lesão; incisão; excisão do fragmento danificado; síntese de reparo e ligação. O mutante pso2-1 de Saccharomyces cerevisiae foi um dos primeiros mutantes isolados sensíveis especificamente aos tratamentos com agentes indutores de pontes intercadeias (ICLs), tais como 8-MOP+UVA e mustarda nitrogenada (HN2). O exato mecanismo de participação da proteína Pso2p no reparo de ICLs ainda permanece desconhecido e, portanto, a continuidade da sua caracterização é essencial para compreender melhor os mecanismos e produtos gênicos envolvidos na reparação de ICLs em S. cerevisiae. Além disso, alguns estudos recentes com os mutantes de Escherichia coli uvrA, uvrB e uvrC mostraram uma hipersensibilidade do mutante uvrB à 8-MOP + UVA, bem como a incapacidade de reconstituir DNA de alta massa molecular, característica esta semelhante ao fenótipo do mutante pso2-1 de S. cerevisiae. Neste trabalho, é apresentada a subclonagem e a expressão dos genes uvrB e uvrC de E. coli no mutante pso2-1 de Saccharomyces cerevisiae, com o objetivo de testar os fenótipos de sensibilidade e mutagênese deste mutante frente a alguns agentes genotóxicos. Os genes uvrB e uvrC foram amplificados por PCR a partir do DNA genômico de uma linhagem selvagem de E. coli, subclonados no vetor de expressão de levedura pVT103-U, sendo a transformação realizada por meio de choque térmico nas linhagens pso2-1 e selvagem de S. cerevisiae. A análise de complementação fenotípica e mutagênica foi realizada frente aos psoralenos fotoativados (8-MOP+UVA e 3-CPs+UVA) e radiação UVC. A análise da expressão dos genes uvrB e uvrC foi desenvolvida com o emprego da técnica de RT-PCR. Os dados mostram que, apesar da presença dos transcritos uvrB e uvrC no mutante pso2-1 de S. cerevisiae, não houve restauração dos fenótipos de resistência e mutagênese para ICLs, um possível indicativo de ausência de similaridade funcional entre as proteínas UvrB, UvrC e Pso2p. / Nucleotide excision repair (NER) is a universal and highly conserved DNA repair pathway found in prokaryotes and eukaryotes. In bacteria, NER is mediated by uvrA, uvrB and uvrC gene products, composing the UvrABC protein complex. The role of Uvr proteins can be divided in four basic steps: damage recognition, dual incision, repair synthesis and ligation. The mutant pso2-1 was primarily isolated by its specific sensitivity to agents that produce interstrand cross-links (ICLs), like 8-MOP + UVA and nitrogen mustard (HN2). The exact mechanism of how Pso2p participate in the ICL repair is unclear, and its characterization is essential to understand the mechanisms and the gene products related to ICL repair. Some recent studies with uvrA, uvrB and uvrC E. coli strains indicated that the uvrB strain is hypersensitive to 8-MOP + UVA and it is incapable to restore the high molecular weight DNA, like the pso2-1 yeast mutant. In this work we have arried out the subcloning and expression of E. coli uvrB and uvrC genes in the S. cerevisiae pso2-1 mutant with the purpose to test the sensitivity and mutagenesis of transformed yeast strains after treatment with genotoxic agents. The uvrB and uvrC genes were amplified by PCR from an E. coli wild-type (WT) strain, subcloned into the yeast expression vector pVT103-U and transformed in the WT and pso2-1 yeast strains by heat shock. The analysis of phenotypic complementation was performed with photoactivated psoralens (8-MOP+UVA and 3-CPs+UVA) and UVC. The expression analysis of uvrB and uvrC was carried out the RT-PCR technique. The results show that the E. coli uvrB and uvrC genes cannot complement the yeast pso2-1 mutant, despite the presence of uvrB and uvrC transcripts. These results indicate that the proteins UvrB, UvrC and Pso2p probably do not share a functional similarity.

O aumento do potencial produtivo da cultura de arroz via melhoramento genético está principalmente relacionado ao rendimento, a qualidade de grãos e a obtenção de plantas resistentes a doenças e pragas. Neste caso, deve ser explorada a variabilidade genética natural ou induzida através de agentes mutagênicos físicos, químicos ou biológicos. A vantagem do uso de mutagênicos biológicos, como os transposons e os retrotransposons, é que ao serem inseridos podem interrompem um gene causando uma mutação. Esta retrotransposição deixa uma marca que possibilita a identificação molecular do local de inserção. No presente trabalho, foi utilizada a estratégia de mutagênese insercional através de eventos de transposição do retrotransposon Tos17, induzido por cultura in vitro. A análise de diferentes genótipos de arroz é muito importante para avaliar se a transposição ocorre de forma similar em genótipos distintos. Foram avaliados calos embriogênicos de cultivares que têm um histórico de variabilidade genética em homozigose, linhagens obtidas através de cruzamentos com espécies silvestres e ecótipos de arroz vermelho, submetidos a 6 meses de cultura in vitro. O método escolhido para avaliar o número de cópias de Tos17 em calos embriogênicos foi a quantificação relativa por PCR em tempo real. A identificação dos genes mutados pela inserção do retrotransposon foi feita através do isolamento e amplificação das seqüências que flanqueiam os insertos de Tos17. O resultado deste experimento indica um aumento no número de cópias de Tos17 em 8 dos 21 genótipos avaliados. O seqüenciamento dos fragmentos de DNA que flanqueiam os insertos do retrotransposon Tos17, indicaram alta similaridade com seqüências genômicas não codificantes de arroz. / The increase of the rice crop potential through genetic improvement is related mainly to the yield, grain quality, and plant disease and insect resistance. In this case, natural genetic variability should be exploited or induced through physical, chemical, or biological mutagens. The advantage of using biological mutagens, like transposons and retrotransposons, is that their insertion interrupts a gene causing a mutation. This retrotransposition provides a tag that enables the molecular identification of the insertion site. In the present work, it was used the strategy of insertional mutations through events of transposition of the retrotransposon Tos17. The analysis of different genotypes of rice is very important to evaluate whether the transposition occurs in a similar fashion among them. Cultivars that have a history of genetic variability in homozygosity, breeding lines derived from crossings with wild species, and ecotypes of red rice were evaluated. Embriogenic callus of all those genotypes were submitted to 6 months of tissue culture. The method chosen to evaluate the number of copies of Tos17 from embryogenic callus was the relative quantification by real time PCR. The identification of the mutated genes by the insertion of retrotransposon was performed by the isolation and amplification of flanking sequences of Tos17 insertions The results of this experiment indicate an increase in the number of copies of Tos17 in 8 out of 21 genotypes. Sequencing DNA fragments flanking the retrotransposon Tos17 insertions indicates high similarity with genomic no coding sequences of rice.

O mecanismo de reparação de DNA por excisão de nucleotídeos (NER) é o mais universal e conservado sistema de reparação encontrado em organismos procarióticos e eucarióticos. Em bactérias, a via NER é mediada pelos produtos dos genes uvrA, uvrB e uvrC, conhecido como complexo UvrABC. A atuação das proteínas Uvr pode ser dividida em quatro passos básicos: reconhecimento do dano e verificação da lesão; incisão; excisão do fragmento danificado; síntese de reparo e ligação. O mutante pso2-1 de Saccharomyces cerevisiae foi um dos primeiros mutantes isolados sensíveis especificamente aos tratamentos com agentes indutores de pontes intercadeias (ICLs), tais como 8-MOP+UVA e mustarda nitrogenada (HN2). O exato mecanismo de participação da proteína Pso2p no reparo de ICLs ainda permanece desconhecido e, portanto, a continuidade da sua caracterização é essencial para compreender melhor os mecanismos e produtos gênicos envolvidos na reparação de ICLs em S. cerevisiae. Além disso, alguns estudos recentes com os mutantes de Escherichia coli uvrA, uvrB e uvrC mostraram uma hipersensibilidade do mutante uvrB à 8-MOP + UVA, bem como a incapacidade de reconstituir DNA de alta massa molecular, característica esta semelhante ao fenótipo do mutante pso2-1 de S. cerevisiae. Neste trabalho, é apresentada a subclonagem e a expressão dos genes uvrB e uvrC de E. coli no mutante pso2-1 de Saccharomyces cerevisiae, com o objetivo de testar os fenótipos de sensibilidade e mutagênese deste mutante frente a alguns agentes genotóxicos. Os genes uvrB e uvrC foram amplificados por PCR a partir do DNA genômico de uma linhagem selvagem de E. coli, subclonados no vetor de expressão de levedura pVT103-U, sendo a transformação realizada por meio de choque térmico nas linhagens pso2-1 e selvagem de S. cerevisiae. A análise de complementação fenotípica e mutagênica foi realizada frente aos psoralenos fotoativados (8-MOP+UVA e 3-CPs+UVA) e radiação UVC. A análise da expressão dos genes uvrB e uvrC foi desenvolvida com o emprego da técnica de RT-PCR. Os dados mostram que, apesar da presença dos transcritos uvrB e uvrC no mutante pso2-1 de S. cerevisiae, não houve restauração dos fenótipos de resistência e mutagênese para ICLs, um possível indicativo de ausência de similaridade funcional entre as proteínas UvrB, UvrC e Pso2p. / Nucleotide excision repair (NER) is a universal and highly conserved DNA repair pathway found in prokaryotes and eukaryotes. In bacteria, NER is mediated by uvrA, uvrB and uvrC gene products, composing the UvrABC protein complex. The role of Uvr proteins can be divided in four basic steps: damage recognition, dual incision, repair synthesis and ligation. The mutant pso2-1 was primarily isolated by its specific sensitivity to agents that produce interstrand cross-links (ICLs), like 8-MOP + UVA and nitrogen mustard (HN2). The exact mechanism of how Pso2p participate in the ICL repair is unclear, and its characterization is essential to understand the mechanisms and the gene products related to ICL repair. Some recent studies with uvrA, uvrB and uvrC E. coli strains indicated that the uvrB strain is hypersensitive to 8-MOP + UVA and it is incapable to restore the high molecular weight DNA, like the pso2-1 yeast mutant. In this work we have arried out the subcloning and expression of E. coli uvrB and uvrC genes in the S. cerevisiae pso2-1 mutant with the purpose to test the sensitivity and mutagenesis of transformed yeast strains after treatment with genotoxic agents. The uvrB and uvrC genes were amplified by PCR from an E. coli wild-type (WT) strain, subcloned into the yeast expression vector pVT103-U and transformed in the WT and pso2-1 yeast strains by heat shock. The analysis of phenotypic complementation was performed with photoactivated psoralens (8-MOP+UVA and 3-CPs+UVA) and UVC. The expression analysis of uvrB and uvrC was carried out the RT-PCR technique. The results show that the E. coli uvrB and uvrC genes cannot complement the yeast pso2-1 mutant, despite the presence of uvrB and uvrC transcripts. These results indicate that the proteins UvrB, UvrC and Pso2p probably do not share a functional similarity.