Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-12Bitstream added on 2014-06-13T19:35:39Z : No. of bitstreams: 1 boldrin_pk_me_arafcf.pdf: 821120 bytes, checksum: 24da3e2629cace4da1696a044c5c3fdd (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A família Fabaceae tem ocorrência em toda faixa tropical e em regiões temperadas, sendo uma família que apresenta grande potencial econômico. Machaerium, um dos gêneros pertencente a esta família, tem sido utilizado para diversos fins, tais como a recomposição de áreas degradadas ou uso medicinal para o tratamento de diarréia, cólicas menstruais, tosse e aftas bucais. Já o gênero Crotalaria, tem sido empregado na agricultura como adubo verde no combate à erosão e também despertado interesse para a indústria farmacêutica, já que os componentes produzidos por plantas deste gênero podem atuar como antimicrobiano, antimalárico, anti-inflamatório, anti-hepatotóxico e até mesmo no tratamento contra o câncer. As plantas medicinais têm sido cada vez mais empregadas na recuperação da saúde, sendo nas últimas décadas, muitos estudos direcionados na identificação de produtos naturais com propriedades terapêuticas. Apesar da notável utilização das plantas no tratamento das mais diversas patologias, a pesquisa científica tem mostrado que alguns componentes presentes nestas plantas podem apresentar efeitos nocivos, como a mutagenicidade, o que pode restringir seu uso. Assim, é indispensável a realização de ensaios que possam garantir o uso seguro desses compostos. Diante disso, o teste de Ames foi empregado no presente trabalho para análise do potencial mutagênico de Machaerium hirtum e Crotalaria pallida, já que consiste num ensaio de triagem para avaliação da atividade mutagênica, identificando mutágenos entre substâncias puras, em misturas e em amostras ambientais. Tanto o extrato de folhas, quanto o de caule de M. hirtum não se mostraram mutagênicos em nenhuma das concentrações testadas, o que é interessante, visto a grande utilização popular e propriedades farmacológicas já descritas... / The Fabaceae family has occurred throughout the tropical and temperate regions, been a family that has great economic potential. Machaerium, one of the genera belonging to this Family, has been used for various purposes since the restoration of degraded areas, to treat diarrhea, menstrual cramps, coughing, and thrush. The genus Crotalaria has been used in agriculture as fertilizer to prevent erosion and also aroused interest in the pharmaceutical industry, since the components produced by these plants can act as antimicrobial, antimalarial, anti-inflammatory, anti-hepatotoxic and even in cancer treatment. Medicinal plants have been increasingly employed in health recovery, and in recent decades, many studies have focused on the identification of natural products with therapeutic properties. Despite the remarkable use of plants in the treatment of several pathologies, scientific research has shown that some components present in these plants may have adverse effects as mutagenicity, which may restrict their use. Thus, assays that ensure the use of these compounds are extremely important. Therefore, Ames test was employed in this study to analyze the mutagenic potential of Crotalaria pallida and Machaerium hirtum because this assay is a screening test for evaluation of mutagenic activity, identifying mutagens between pure substances and mixtures and in environmental samples. Both leave and stem extracts from M. hirtum were not mutagenic in any of the tested concentrations, which is interesting because the wide use and pharmacological properties from this plant. In the extracts of leaves and seeds from C. pallida, positive results were obtained in the Ames test, which make unsafe their use. Knowing that beyond the mutagenic activity, activation of the enzyme cyclooxygenase-2 (COX-2) is also involved... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-25Bitstream added on 2014-06-13T18:57:09Z : No. of bitstreams: 1 000736296.pdf: 4233456 bytes, checksum: d4f70261c2f3ef33e27f9d851acefc69 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Doenças neurodegenerativas são definidas como distúrbios que acarretam na perda progressiva de estrutura e/ou função, e até mesmo morte de células neuronais especificas, em diferentes distribuições anatômicas, e, consequentemente, dando origem a diferentes sintomas clínicos. Entre as varias doenças neurodegenerativas a doença de Alzheimer (DA) é a principal e a mais comum forma de demência. A DA é uma condição progressiva complexa que envolve interações sequenciais de cascatas patológicas, incluindo a interação dos peptídeos β-amiloides (βA) que se agregam levando ao desenvolvimento de placas senis, e a hiperfosforilação e agregação da proteína tau formando emaranhados neurofibrilares (ENF), juntamente a processos associados, como a inflamação e o estresse oxidativo. O fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) é uma das principais citocinas pró-inflamatórias cujos níveis elevados são observados em diversas doenças neurodegenerativas. O óxido nítrico (NO) é uma importante molécula de sinalização na modulação da plasticidade sináptica e está associada ao processo de aprendizagem e memória, assim como seus efeitos neuroprotetores quando presente em baixas concentrações. Assim, compostos derivados ftalimídicos, capazes de inibir TNF-α, poderiam reduzir o processo de neuroinflamação que é descrita na DA, retardando a progressão da doença, e derivados doadores de NO poderiam contribuir na plasticidade sináptica, cognição e memória dos pacientes acometidos pela DA. Foi objetivo deste trabalho a obtenção dos compostos Lapdesf FUR-FD I-VI, planejados por meio da estratégia de hibridação molecular entre a subunidade ftalimídica e o núcleo furoxânico. Os compostos obtidos foram avaliados para determinar o potencial efeito anti-inflamatório através do modelo de inflamação aguda (edema de pata), a determinação do Log P experimentalmente para avaliar sua capacidade de permear a barreira... / Neurodegenerative diseases are defined as disorders that result in progressive loss of structure and/or function, and even cell death in neuronal specific in different anatomical distributions, and hence giving rise to varying clinical symptoms. Among the various neurodegenerative diseases Alzheimer's disease (AD) is the main and most common form of dementia. AD is a progressive condition that involves complex interactions and sequential pathological cascades, including the interaction of β-amyloid peptide (βA) which clump together leading to the development of senile plaques, and hyperphosphorylation and aggregation of tau forming neurofibrillary tangles (ENF) along the associated processes, such as inflammation and oxidative stress. The tumor necrosis factor alpha (TNF-α) is a major proinflammatory cytokines whose high levels are observed in several neurodegenerative diseases. Nitric oxide (NO) is an important signaling molecule in the modulation of synaptic plasticity and its correlation with the process of learning and memory, as well as its neuroprotective effects when present in low concentrations. Thus phthalimidic derived compounds capable of inhibiting TNF-α , could reduce the neuroinflammation process that is described in AD, slowing the disease progression, and NO donors derived may contribute to synaptic plasticity, cognition and memory of patients affected by AD. This work aims to obtain the compounds (Lapdesf FUR-FD I-VI), designed by molecular hybridization strategy between the subunit and core phthalimidic and furoxan. The compounds obtained were evaluated for potential anti-inflammatory effect through the model of acute inflammation (paw edema), their ability to permeate the blood-brain barrier (BBB) using a tool of the partition coefficient (log P) obtained experimentally mutagenicity with the in vivo micronucleus test in reticulocytes obtained in peripheral blood, the ability of the compounds to inhibit the ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-31Bitstream added on 2014-06-13T18:09:01Z : No. of bitstreams: 1 hara_rv_me_rcla.pdf: 2347085 bytes, checksum: c2e58e99bc7ee5682042fcd168bec061 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os avanços tecnológicos trazem muitos benefícios, no entanto vêm acompanhados de um aumento dos efluentes provenientes de diferentes tipos de indústrias, os quais geram subprodutos indesejáveis que carregam consigo muitos contaminantes químicos que são lançados todo ano no solo, ar e água. Em especial, as indústrias de refino de petróleo produzem efluentes ricos em metais pesados, químicos inorgânicos e orgânicos. Dentre os contaminantes orgânicos mais importantes do petróleo, encontram-se os Hidrocarbonetos, em especial os Hidrocarbonetos Policíclicos Aromáticos (HPA). De maneira geral, tanto os HPA quanto seus derivados estão associados ao aumento da incidência de diversos tipos de cânceres no homem. Neste contexto, faz-se necessário o desenvolvimento e aplicação de ferramentas para avaliação de amostras ambientais possivelmente impactadas por dejetos químicos. Sendo assim, o presente trabalho tem por objetivo avaliar a genotoxicidade e a mutagenicidade das águas dos rios Jaquari-SP, Atibaia-SP e Piracicaba-SP, numa região influenciada pelos efluentes gerados pela refinaria de petróleo da cidade de Paulínia – SP. As avaliações foram feitas por meio de dois organismos-testes distintos: raízes de Allium cepa e cultura de Células de Ovário de Hamster Chinês (CHO-K1). Para os ensaios com A. cepa, foram aplicados os testes de aberrações cromossômicas (AC) e micronúcleos (MN) em células de meristemas de raízes e micronúcleos em células F1 deste mesmo órgão. Para os ensaios com células CHO-K1, foram a plicadas as técnicas do ensaio do cometa e do teste do Micronúcleo. Os resultados obtidos nessa pesquisa mostraram que as substâncias químicas geradas pelo processo de refino do petróleo apresentam características genotóxicas e/ou mutagênicas. Os resultados também permitiram o esclarecimento... / Technological advances bring many advances; however they are accompanied by an increase in the effluents derived from different types of industries, which generate undesirable by-products that carry several chemical contaminants that are discharged every year in the soil, air and water. Industries of petroleum refinery, in particular, produce effluents rich in heavy metals, inorganic and organic chemicals. Among the most important organic contaminants of the petroleum, we can highlight the Hydrocarbons, in special the Polycyclic Aromatic Hydrocarbons (PAHs). In general, both PAHs and their derivatives are associated with the increase in the incidence of several types of cancer in humans. In this context, it is necessary to develop and apply tools to assess environmental samples possibly impacted by chemical waste. Thus, this study aims to evaluate the genotoxicity and mutagenicity of waters of the Jaquari-SP, Atibaia-SP and Piracicaba-SP rivers, in a region influenced by effluents generated by a petroleum refinery of the city of Paulínia – SP. The evaluations were carried out with two distinct test organisms: roots of Allium cepa and culture of cells of Chinese Hamster Ovary (CHO-K1). For the assays with A. cepa, the tests of chromosome aberrations (CA) and micronuclei (MN) in meristematic cells of roots and micronuclei in F1 cells of the same organ were applied. For the assays with CHO-K1 cells, the techniques of comet assay and the micronucleus test were used. The results obtained in this study showed that the chemical substances generated by the petroleum refining process present genotoxic and/or mutagenic characteristics. The results also allowed the elucidation of the modes of action of these compounds on the genetic material of the organisms exposed. Particularly, it was observed, by the tests performed... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-30Bitstream added on 2014-06-13T18:09:01Z : No. of bitstreams: 1 mazzeo_dec_me_rcla.pdf: 466729 bytes, checksum: 3469c8aa04564a66b2f72475c7602465 (MD5) / Derivados de petróleo como benzeno, tolueno, etilbenzeno e xileno (BTEX) são hidrocarbonetos monoaromáticos muito utilizados como solventes e matéria-prima em diversos processos industriais, além de estarem presentes, em grandes quantidades, nos combustíveis fósseis. Pelo seu amplo uso e alta solubilidade em água, o BTEX vem caracterizando um poluente freqüente das águas, em especial, as subterrâneas. A aplicação do processo de biorremediação parece constituir uma metodologia promissora para o tratamento de águas contaminadas por essa mistura. Testes citogenéticos são adequados e eficientes para identificar e avaliar efeitos danosos de substâncias sobre os organismos, em suas diversas concentrações e tempos de exposição. Neste trabalho foi avaliado o efeito de cinco concentrações do BTEX, antes e após o processo de biodegradação por microrganismos selecionados de efluente bruto de refinaria de petróleo, sobre os sistemas testes de Allium cepa e cultura de células HTC. A comparação do total de aberrações cromossômicas e nucleares (alterações genotóxicas) realizada entre as concentrações de BTEX não biodegradadas e biodegradadas revelou uma diminuição significativa destas anormalidades para as concentrações BTEX 1, 2 e 4. As alterações mutagênicas, avaliadas pelo teste do micronúcleo (MN) em células meristemáticas, foram significativas para as concentrações BTEX 1, 2, 4 e 5 não biodegradadas. Ao se comparar as freqüências de MN entre a concentração preparada de BTEX com a sua respectiva concentração biodegradada, observouse uma redução significativa para as biodegradadas 1 e 4. Não houve indução significativa de MN para as células F1 para nenhuma das concentrações testadas. O BTEX não provocou nenhum efeito citotóxico significativo para este organismo. O teste do MN realizado com células HTC revelou que o BTEX foi mutagênico... / Oil products as benzene, toluene, ethylbenzene and xylene (BTEX) are monoaromatics hydrocarbons widely used as solvents and raw materials in several industrial processes, and are present in large quantities in fossil fuels. By its widespread use and high solubility in water, the BTEX is featuring a common pollutant of water, particularly groundwater. Implementation of the bioremediation seems to be a promising method for treatment of contaminated water with this mixture. Cytogenetic tests are appropriate and efficient to identify and assess the harmful effects of substances on the organisms in their several concentrations and time of exposure. This study evaluated the effect of five BTEX concentrations, before and after the biodegradation process by microorganisms selected from raw sewage from oil refinery using the test systems of Allium cepa and HTC cells. The comparison of total chromosomal and nuclear aberrations (genotoxic alterations) performed between BTEX concentrations bioremedied and not bioremedied showed a significant decrease of these abnormalities for BTEX concentrations 1, 2 and 4. Mutagenic alterations, evaluated by the micronucleus test (MN) in meristematic cells, were significant to the BTEX concentrations 1, 2, 4 and 5 not bioremedied. When comparing the frequencies of MN between the prepared concentration of BTEX with its concentration bioremedied, there was a significant reduction for the bioremedied 1 and 4. There was no significant induction of MN to cells F1 to any of the concentrations tested. The BTEX did not cause any significant cytotoxic effect to those organisms. The test performed with micronucleus of the HTC cells revealed that the BTEX was mutagenic, but only to the highest concentration, both before and after the biodegradation. Genotoxic damage as measured by the comet assay showed that BTEX was genotoxic for all concentrations not bioremedied, tested... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-06. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:52Z : No. of bitstreams: 1 000867494.pdf: 2824283 bytes, checksum: eca1ac740652972fac0629df5914e07d (MD5) / A bactéria Gram-negativa Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é o agente causal do cancro cítrico, doença ainda sem método curativo que gera grande impacto econômico na produção de laranja. Estudos moleculares envolvendo patossistemas, como o Xac-citros, vêm ganhando espaço no auxílio do entendimento sobre os processos fitopatogênicos. Diante disto, o objetivo do presente trabalho foi investigar a expressão dos genes exsF e exsG de Xac e o efeito dos seus nocautes na patogenicidade de Xac em limoeiro cravo (Citrus limonia Osbeck), bem como obter as proteínas por eles codificadas e utilizá-las em ensaios iniciais de cristalização. Na análise da expressão destes genes, foi utilizada a técnica de PCR em tempo real (qRT-PCR), onde foi avaliada a expressão dos mesmos em Xac inoculada em folhas de limoeiro cravo coletadas em três tempos após a inoculação (48, 72 e 120 h) comparada com a expressão em Xac inoculada em meio de cultura. Já para a produção do mutante duplo de Xac apresentando os genes exsF e exsG nocauteados, foi utilizada a técnica de mutação sítio-dirigida por PCR utilizando o vetor suicida pOK1 e a estratégia de troca alélica. Para a produção das proteínas ExsF e ExsG recombinantes foi utilizada a expressão heteróloga em E. coli através do uso do vetor de expressão pET SUMO e os ensaios iniciais de cristalização foram realizados utilizando-se kits comerciais e não comerciais. A análise da expressão dos genes exsF e exsG revelou que estes foram induzidos, cerca de 10 vezes mais, após 72 horas de infecção da Xac em folhas de limoeiro cravo, em comparação com a Xac multiplicada em meio de cultura. Os ensaios de patogenicidade utilizando o mutante duplo de Xac Δ3135/3136 revelaram que este foi avirulento em folhas de limoeiro cravo, em contraste com a linhagem 306 selvagem, que elicitou os sintomas de cancro cítrico. Além disso, a mutação reduziu a capacidade de multiplicação... / The Gram-negative bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) is the causal agent of citrus canker, disease that causes a significant economic impact on the orange production. Molecular studies involving pathosystems like Xac-citrus have been used to as an approach to understand the pathogenic processes. Therewith, the objective of this study was to investigate the expression of exsF and exsG Xac genes and the effect of its silencing in Xac pathogenicity in Rangpur lime (Citrus limonia Osbeck) leaves and also get the proteins coded by them and use it in initial tests of crystallization. The real-time PCR (qRT-PCR) technique was used in the analysis of gene expression.The in planta expression of exsF and exsG genes were evaluated in Xac isolated from Rangpur lime leaves collected at 48, 72 and 120 h after inoculation compared to Xac growing in NA culture. For the production of Xac double mutant having the ExsF and exsG genes silenced, the site-directed mutagenesis technique by PCR using the suicide vector pOK1 was used. For the production of ExsF and ExsG recombinant proteins, the E. coli heterologous expression in the pET SUMO expression vector was used. Finally, the initial crystallization trials were performed using commercial and non-commercial kits. The gene expression analysis showed that the exsF and exsG genes were induced about 10-fold more after 72 hours of Xac infection in Rangpur lime leaves, compared with the Xac grown in the culture medium. The functional assays performed with the Xac Δ3135/3136 double mutant showed that it was avirulent on Rangpur lime leaves, in contrast to the wild type strain Xac 306. Moreover, the mutation reduced the multiplication of the bacteria in planta. The mutation also affected the biofilm production, that was reduced in the mutated strain. Through the heterologous expression assays and protein purification it was possible to obtain only the ExsG protein, soluble and pure enough to be ...

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:39:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-20. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:06Z : No. of bitstreams: 1 000868528.pdf: 1329679 bytes, checksum: cfad7bfc51dbbb09d097d17b2827ff26 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O câncer de mama é a forma mais comum de câncer e a segundo causa mais comum de morte por uma doença neoplásica afetando mulheres. Há uma série de fatores de risco reconhecidos para o desenvolvimento do câncer de mama incluindo fatores hereditários, hormonais, reprodutivos e história menstrual, idade, falta de exercício, álcool, radiação, doença benigna da mama, e obesidade. Embora aproximadamente 10% a 30% dos casos de câncer de mama sejam atribuídos a fatores hereditários, apenas 5% a 10% dos casos são identificados com um componente hereditário forte, e apenas uma pequena fração desses (4% a 5%) são explicados por mutações em genes de alta penetrância em uma herança autossômica dominante. Grande parte dos casos de câncer de mama hereditário são atribuídos a mutações germinativas nos genes de alta penetrância BRCA1 e BRCA2, responsáveis pela Síndrome de Câncer de Mama o Ovário Hereditários. Vários estudos têm identificado outros genes de susceptibilidade para o câncer de mama com alta penetrância, mas alguns casos de forte indício para uma síndrome hereditária como causa dos tumores de mama o resultado é negativo para mutações nestes genes. Recentemente, outros genes e marcadores polimórficos comuns também foram associados com aumento pequeno ou moderado no risco para câncer de mama. O sequenciamento de nova geração (NGS) permite analisar múltiplos genes simultaneamente em testes no formato de painéis, a um custo reduzido em comparação com o sequenciamento pela metodologia de Sanger. No entanto, informações clínicas relevantes sobre as variantes encontradas nestes testes estendidos não mantiveram o mesmo ritmo da tecnologia de sequenciamento. Faltam informações importantes como a penetrância das variantes genéticas (em particular, de variantes missense) e o manejo clínico adequado dos portadores destas mutações. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrência de... / Breast cancer is the most common form of cancer and the second most common cause of death from a neoplastic disease affecting women. There are a number of recognized risk factors for the development of breast cancer including hereditary factors, hormonal, reproductive and menstrual history, age, lack of exercise, alcohol, radiation, benign breast disease, and obesity. Although approximately 10% to 30% of breast cancer cases are attributed to hereditary factors, only 5% to 10% of cases are identified with a strong genetic component, and only a small fraction of these (4% to 5%) are explained by mutations in high penetrance genes in an autosomal dominant inheritance. Most cases of hereditary breast cancer are attributed to germline mutations in high penetrance genes BRCA1 and BRCA2 that are responsible for Breast Cancer Ovary Syndrome the hereditary. Several studies have identified other susceptibility genes for breast cancer with high penetrance, but some cases of strong evidence for a hereditary syndrome as a cause of breast tumors the result is negative for mutations in these genes. Recently, other genes and common polymorphic markers were also associated with small or moderate increase in risk for breast cancer. The next generation sequencing (NGS) allows the analysis of multiple genes simultaneously in tests on panels format whit a reduced cost compared to sequencing by the Sanger methodology. However, relevant clinical information about variants found in these extended tests have not kept the same pace of sequencing technology. Important information such as penetrance genetic variants (in particular, missense variants) and the appropriate clinical management of carriers of these mutations are not availabe. The aim of this study was to evaluate the occurrence of genetic changes in 17 breast cancer predisposition genes in Brazilian risk patients, suitable for genetic testing. Genetic testing included analysis of the DNA of patients using...

Orientador: Silvia Regina Rogatto / Banca: Rafael Malagoli Rocha / Banca: Robson Francisco Carvalho / Resumo: Leiomiomas uterinos (LU) são tumores benignos de origem mesenquimal frequentes sendo considerados um problema de saúde pública. A desregulação de fatores de crescimento e microRNAs, encurtamento dos telomeros, produção excessiva e desorganizada de matriz extracelular, perda de heterozigose e alterações cromossômicas recorrentes (como deleção em 7q22 e rearranjo cromossômico em 12q15) contribuem para o crescimento dos LU. Uma parcela significativa destes tumores apresenta mutação no gene MEDI2. O presente estudo teve como objetivo avaliar: a presença da mutação no MEDI2; o nível de expressão do HMGA2 e seus miRNAs preditos (let-7a, miR-26a, miR-26b); o nível de expressão do, cluster de miRNAs mapeado em 7q22 (miR-25, miR-93 e miR- 106b) e a expressão dos genes BRCAI, FANCA e seus miRNAs preditos. Foram avaliados 85 LU e 34 amostras de miométrio adjacentes obtidos de 54 pacientes submetidos à histerectomia. A análise de expressão por RT-qPCR foi realizada para os miR-let7a, miR-25, miR-93, miR-106b, miR-21, miR-26a, miR-26b, miR-197 e miR- 143, utilizando RNU44 , RNU48 e U47 como endógenos. Foi também avaliada a expressão dos genes HMGA2, BRCAI e FANCA sendo utilizados como controles endógenos RPLPO e GUSB. A mutação no MED12 foi encontrada em 50% (42/85) das amostras. Foi observado um aumento significativo (p<0,001) dos níveis de expressão do HMGA2 nos LU comparados ao miométrio adjacente, inclusive nas amostras com presença da mutação em MEDI2. Estes dados sugerem que o aumento de expressão do HMGA2 e a mutação em MEDI2 podem coexistir nestes tumores. Os miRNAs preditos para regular o HMGA2 apresentaram diminuição dos níveis de expressão: let-7a (p<O,OOl), miR-26a (p<O,OOl), miR-26b (p<O,OOl). A forte correlação negativa entre HMGA2 e seus miRNAs preditos suporta a evidência de interação entre eles. Os miRNAs mapeados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Uterine Leiomyomas (UL) are common mesenchymal benign tumors that represent a significant public health problem. The deregulation of growth factors and microRNAs (miRNAs), shortening of telomeres, excessive production of disorganized extracellular matrix, loss of heterozygosity and recurrent chromosomal aberrations (including 7q22 deletion and chromosomal rearrangements in 12q 15) have been suggested to contribute to the growth of UL. A significant number of tumors presented mutations of MED I2The aims of this study were: to investigate MED12 mutation; to evaluate the expression levels of HMGA2 and their miRNAs predicted (let-7a, miR-26a, miR-26b); the expression of miRNAs mapped at 7q22 (miR-25, miR-93, and miR- 106b) and the expression levels of BRCAI, FANC,A and their predictive miRNAs. Eight-five fresh frozen UL and 34 adjacent normal myometrium (MM) were obtained from 54 patients who had undergone a hysterectomy procedure. Quantitative real time RT-PCR was applied to evaluate the expression levels of miRs (miR-let7a, miR-25, miR-93, miR- 106b, miR-21, miR-26a, miR-26b, miR-197 and miR-143) using RNU44, RNU48 and U47 as endogenous control and to evaluate the expression of HMGA2, BRCAI and FANCA using RPLPO and GUSB as endogenous control. We detected 50% (42/85) of samples with MEDI2 mutation. A significant overexpression (p<0,001) of HMGA2 was detected in UL compared with MM, including samples with the presence of MEDI2 mutation. These data indicated that overexpression of HMGA2 may coexist with MEDI2 mutation. The miRNAs predicted to regulate HMGA2 were found significantly downregulated: let-7a (p<0,001), miR-26a (p<0,001), miR-26b (p<0,001). The negative correlation verified between HMGA2 and their predicted miRNAs support the evidence of interaction between them. The miRNAs mapped at 7q22 (miR-25, miR-93, and miR- 106b) were found as downregulated... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Lusânia Maria Greggi Antunes / Banca: Denise Crispim Tavares / Resumo: A Arrabidaea brachypoda (DC.) Bureau, é um arbusto nativo do Cerrado pertencente a família Bignoniaceae, é conhecida como "cipó-una" ou "tintureiro" e popularmente utilizada no tratamento de artrite. Diversas atividades para esta espécie já foram reconhecidas, tais como antifúngica, antiviral, anti-inflamatória, efeito antinocicepitivo e anti-Tripanosoma cruzi, porém estudos que comprovem sua eficácia e segurança ainda são raros, sendo assim o objetivo desde trabalho foi avaliar a atividade mutagênica através do Teste de Ames e a atividade estrogênica através do ensaio de leveduras recombinantes (RYA) dos extratos, frações e substâncias isoladas de A. brachypoda. O Tesde de Ames foi realizado com as linhagens de Salmonella typhimurium TA100, TA98, TA97a e TA102, com e sem ativação metabólica pelo método de pré-incubação. O Teste RYA foi realizado com a linhagem de Saccharomyces cerevisiae BY4741 com os extratos das folhas, caules, raízes, suas respectivas frações e substâncias isoladas. Todos os extratos e também a fração aquosa das folhas de A. brachypoda mostraram atividade mutagênica e os extratos das folhas e das raízes também apresentaram atividade estrogênica. Os resultados contribuem para os conhecimentos sobre a segurança do uso desta espécie, portanto recomendamos cautela com seu uso devido os resultados positivos quanto à mutagenicidade e acreditamos que os riscos de efeitos adversos pela atuação como alteradores endócrinos sejam baixos. / Abstract: The Arrabidaea brachypoda (DC.) Bureau, is a native of Cerrado shrub belonging to Bignoniaceae family, is known as "vine-one" or "dyer" and popularly used to treat arthritis. Several activity for this species have been recognized as an antifungal, antiviral, anti-inflammatory, antinocicepitivo effect and anti-Trypanosoma cruzi, but studies proving its effectiveness and safety are still rare, thus the objective since work was to evaluate the mutagenic activity through the Ames test and the estrogenic activity by testing recombinant yeast (RYA) of the extracts, fractions and compounds of A. brachypoda. The Ames Test was performed with Salmonella typhimurium strains TA100, TA98, TA97 and TA102, with and without metabolic activation by preincubation method. The RYA test was performed with Saccharomyces cerevisiae BY4741 strain with the extracts of the leaves, stalks, roots, their respective fractions and compounds. All the extracts and also the aqueous fraction of the leaves of A. brachypoda showed mutagenic activity and the extracts of leaves and roots also showed estrogenic activity. The results contribute to the knowledge about the safety of using this species, so we recommend caution with its use because the positive results regarding the mutagenicity and we believe that the risk of adverse effects by acting as endocrine changers is low. / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Edson Luis Maistro / Banca: Carlos Renato Corso / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Bruna de Campos Ventura Camargo / Resumo: Segundo a Agência Internacional para Pesquisa do Câncer (IARC), estudos utilizando ensaios in vitro e in vivo (populações humanas expostas) demonstraram que algumas tinturas de cabelo e muitos produtos químicos utilizados no processo de tingimento capilar podem ser considerados mutagênicos e carcinogênicos. Estudos epidemiológicos em pessoas expostas ocupacionalmente a tinturas de cabelo indicaram uma associação com risco de câncer de bexiga e neoplasias linfoides. Da mesma forma, o uso pessoal de corantes capilares permanentes foi associado com câncer de bexiga. Cerca do 33% das mulheres, com mais de 18 anos de idade e 10% dos homens com mais de 40 anos, usam algum tipo de corante de cabelo. A tintura capilar preta é uma coloração semipermanente, que é composta por uma mistura de vários corantes, incluindo dois corantes puros (Basic red 51 e Basic brown 17), ambos azo corantes (- N=N-) e uma mistura, denominada Arianor Ebony, composta por cinco corantes, dentre eles azo corantes e antroquinonas (Basic blue 99, Basic brown 16, Acid violet 43, Basic red 76, and Basic yellow 57). Os azo corantes são considerados substâncias perigosas, pois a sua degradação gera produtos como aminas aromáticas que podem ser mais tóxicas que os compostos originais. Os corantes de antraquinona são amplamente utilizado para a coloração de plásticos e tintas industriais conhecidos por serem mutagênicos, carcinogênicos e tóxicos por via oral. Este projeto de pesquisa teve como objetivo geral avaliar a citotoxicidade (teste do Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide- MTT), genotoxicidade (ensaios de Cometa e Micronúcleos) de todos os corantes que compõem a tintura capilar preta, por meio de ensaios realizados com cultura de células de hepatoma humano (HepG2), assim como também avaliar a mutagênicidade da mistura (teste de Ames), pelo teste com Salmonella typhimurium nas linagens TA98 e TA100. Também foi avaliada a expressão de 7 diferentes... / Abstract: According to the International Agency for Research on Cancer (IARC), in vitro and in vivo assays (human populations exposed) have demonstrated that some dyes used in the coloring process can be considered as mutagenic and carcinogenic. Epidemiological studies in occupationally exposed people indicated an association with risk of bladder cancer and lymphoid malignancy. As well, the personal use of hair dyes has been associated to bladder cancer. Almost 33% of women, over 18 years and 10% of men, with more than 40 years, use some kind of hair dye. The black dye is a semipermanent colorant composed by mixture of several tinctures that include two pure colorants (Basic Red 51 and Basic Brown 17), both of these are azo-dyes (-N=N-), and a mixture known as Arianor Ebony, composed by other five dyes, among the are the azo-corants and anthraquinones (Basic blue 99, Basic brown 16, Acid violet 43, Basic red 76, and Basic yellow 57). The azo-corants are considered hazardous substances, due to production of aromatic amines on their degradation; these amines can be more toxic than the original compounds. The anthraquinones dyes are widely used for plastics staining and are known for their mutagenic, carcinogenic and toxic effects if ingested. The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide test-MTT), genotoxicity (Comet assay and Micronucleus) of all corants that compose the black capillary dye, through tests performed with cellular cultures of human hepatome (HepG2), as well as the evaluation of mutagenic properties of the mixture (Ames test), using Salmonella typhimurium. Also, was evaluated the expression of 7 different apoptose genes. The results obtained in this study has demonstrated that the Basic Red 51 (BR51), Basic Brown 17 (BB17), Arianor Ebony and the capillary mixture of dyes induced genotoxic effects on the exposed cells, including the DNA fragmentation and the formation of the MN. The ... / Doutor

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Silvia Tamie Matsumoto / Banca: Maria Izabel Souza Camargo / Banca: Grasiela de C. S. Aguiar / Banca: Mario Sergio Palma / Resumo: A exposição do homem às substâncias danosas, sejam estas substâncias de origem natural ou sintética, vem crescendo durante as últimas décadas. Esta exposição é capaz de induzir diversos efeitos deletérios nos organismos expostos, provocando diversas doenças e até mesmo a morte. Da mesma forma que aumenta a quantidade de substâncias promotoras de impactos ambientais, também crescem as pesquisas que buscam por novas substâncias que sejam capazes de proteger os organismos destes efeitos deletérios. Esse trabalho tem como objetivo avaliar a atividade citotóxica, genotóxica e antigenotóxica, mutagênica e antimutagênica de venenos de Hymenoptera (especificamente da abelha Apis mellifera e da vespa Polybia paulista), em diferentes concentrações, utilizando para essa avaliação o sistema teste de HepG2. Foi utilizado o ensaio do MTT para se avaliar a citotoxicidade tanto do veneno de A. mellifera como de P. paulista. As concentrações consideradas não citotóxicas (1, 5 e 10μg/mL de veneno de vespa e 0,1, 0,05 e 0,01 μg/mL do veneno de abelha) foram utilizadas para se avaliar o potencial genotóxico (ensaio do cometa) e mutagênico (teste do micronúcleo). Estas concentrações não citotóxicas mostraram-se genotóxicas e mutagênicas para o sistema teste utilizado. Foram utilizadas outras concentrações, mais baixas que as utilizadas nos testes de genotoxicidade e mutagenicidade (1ng/mL, 100pg/mL e 10pg/mL de veneno de vespa e 10pg/mL, 1pg/mL e 0,1pg/mL para o veneno de abelha), para a realização dos testes de antigenotoxicidade e antimutagenicidade com células HepG2. As concentrações utilizadas nesses ensaios mostraram que ambos os venenos, ao invés de inibirem e/ou diminuirem o efeito genotóxico e mutagênico da substância metilmetano sulfonato, aumentaram ainda mais os danos causados por esta substância... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Human exposure to harmful substances, natural or synthetic, is increasing in the last decades. This exposure is able to induce several deleterious effects on the exposed organisms, causing several diseases and even death. As the amount of substances that promote environmental impacts increases, researches seeking for new substances that are able to protect the organisms against these deleterious effects have also increased. This study aimed to evaluate the cytotoxic, genotoxic and antigenotoxic, mutagenic and antimutagenic of Hymenoptera venoms (specifically of the bee Apis mellifera and the wasp Polybia paulista), in different concentrations, using for this evaluation the HepG2 test system. The MTT assay was used to assess the cytotoxicity the venom of A. mellifera and P. paulista. The concentrations considered non cytotoxic (1, 5 and 10μg/mL of the wasp venom and 0.1, 0.05 and 0.01 μg/mL of the bee venom) were used to evaluate the genotoxic (comet assay) and mutagenic potential (micronucleus test). These non cytotoxic concentrations were genotoxic for the test system used. Other concentrations were used, lower than the ones used in the genotoxicity and mutagenicity tests (1ng/mL, 100pg/mL and 10pg/mL of the wasp venom and 10pg/mL, 1pg/mL and 0,1pg/mL for the bee venom), in order to perform the antigenotoxicity and antimutagenicity tests with HepG2 cells. The concentrations used in these assays showed that both venoms, instead of inhibiting and/or decreasing the gentoxic and mutagenic effects of the substance methylmethane sulfonate, increased even more the damages caused by this substance. In order to verify which would be the compound responsible for the effects registered for the venoms, it was also evaluated the effect of phospholipase A2 (PLA2 from A. mellifera)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor